KR100883909B1 - Compound for inhibiting tyrosine kinase activity of ddr2 protein - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 푸로피리미딘 화합물, 이들의 약학적으로 허용되는 염, 또는 이들을 포함하는 DDR2(Discoidin Domain Receptor 2) 티로신 키나아제 활성 저해제에 관한 것이다. 상기 푸로피리미딘 화합물은 화학식 1, 화학식 2, 화학식 3 또는 화학식 4로 정의되는 화합물, 이들의 전구체일 수 있으며, 유리 형태 또는 산 부가염 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 푸로피리미딘 화합물은 DDR2 티로신 키나아제의 활성을 억제하는 효과를 갖기 때문에, 간경화, 류마티스 관절염, 암 등과 같이, DDR2 티로신 키나아제 활성이 관여하여 발생하는 질환의 치료에 유용하다.The present invention relates to novel furypyrimidine compounds, their pharmaceutically acceptable salts, or DDR2 (Discoidin Domain Receptor 2) tyrosine kinase activity inhibitors comprising them. The puropyrimidine compound may be a compound defined by Formula 1, Formula 2, Formula 3, or Formula 4, precursors thereof, and may exist in free form or in acid addition salt form. Since the puropyrimidine compound of the present invention has an effect of inhibiting the activity of DDR2 tyrosine kinase, it is useful for the treatment of diseases caused by DDR2 tyrosine kinase activity, such as cirrhosis, rheumatoid arthritis, cancer and the like.

Description

DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성 저해 화합물{COMPOUND FOR INHIBITING TYROSINE KINASE ACTIVITY OF DDR2 PROTEIN} COMPOUND FOR INHIBITING TYROSINE KINASE ACTIVITY OF DDR2 PROTEIN}

본 발명은 신규한 푸로피리미딘 화합물, 이들의 약학적으로 허용되는 염, 또는 이들을 포함하는 DDR2(Discoidin Domain Receptor 2) 티로신 키나아제 활성 저해제에 관한 것으로, 본 발명의 푸로피리미딘 화합물은 DDR2 티로신 키나아제의 활성을 억제하는 효과를 갖기 때문에, 간경화, 류마티스 관절염, 암 등과 같이, DDR2 티로신 키나아제 활성이 관여하는 질환의 치료에 유용하다.The present invention relates to novel furopyrimidine compounds, pharmaceutically acceptable salts thereof, or DDR2 (Discoidin Domain Receptor 2) tyrosine kinase activity inhibitors comprising the same, and the puropyrimidine compounds of the present invention are directed to DDR2 tyrosine kinase. Since it has an effect of inhibiting activity, it is useful for the treatment of diseases involving DDR2 tyrosine kinase activity, such as cirrhosis, rheumatoid arthritis, cancer and the like.

디스코이딘 도메인 수용체(DDR)는 콜라겐을 활성 리간드로 하는 수용체 티로신 키나아제에 속하는 단백질 패밀리로서, DDR1과 DDR2의 두 형태의 단백질이 여기에 속한다. 이들 단백질은 세포외 부위(N-말단), 막통과부위 및 세포질 부위(C-말단)으로 구성되며, 세포질에 노출된 C-말단 부위에 티로신 키나아제 활성을 나타내는 부위를 갖고 있다.Discidine domain receptor (DDR) is a family of proteins belonging to the receptor tyrosine kinase which contains collagen as an active ligand, and belongs to two types of proteins, DDR1 and DDR2. These proteins consist of an extracellular site (N-terminus), a transmembrane site and a cytoplasmic site (C-terminus), and have a site showing tyrosine kinase activity at the C-terminal site exposed to the cytoplasm.

DDR2 단백질은 섬유아세포, 간 조직의 간성상 세포, 류마티즘 환자에서 추출한 활액 섬유아세포(synovial fibroblast) 등의 성장, 이들 세포에 의한 콜라겐 합성, MMP-1 또는 MMP-2의 생성 등을 촉진하는 작용을 하는 것으로 밝혀졌으며, 이러한 작용에 있어서, DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성이 중요하다고 알려졌다. 또한, 전이성 암세포에서 DDR2 단백질의 발현이 증가하는 것이 보고 되었다. 이러한 사실은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성이 조직의 섬유화 병변, 류마티즘, 또는 암 질환의 새로운 치료제 개발의 신규 표적이 될 수 있음을 의미한다.DDR2 protein promotes the growth of fibroblasts, hepatic stellate cells of liver tissue, synovial fibroblasts extracted from patients with rheumatism, collagen synthesis by these cells, and production of MMP-1 or MMP-2. In this action, the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein is known to be important. In addition, increased expression of DDR2 protein in metastatic cancer cells has been reported. This fact suggests that tyrosine kinase activity of DDR2 protein may be a new target for the development of new therapeutics for tissue fibrotic lesions, rheumatism, or cancer diseases.

현재 키나아제 패밀리를 표적으로 하는 저분자 신약 개발은 대부분 표적 키나아제의 효소 활성 포켓을 표적으로 하여 키나아제 기질 중의 하나인 ATP의 활성 포켓 부착을 방해하는 작용을 하는 화합물의 개발이 주류를 이루고 있으며, 대표적인 예로서, 최근 개발된 신약인 EGFR 키나아제 저해 신약인 이레사 또는 abl 키나아제 저해제인 글리벡이 있다.Currently, the development of small molecule new drugs targeting the kinase family is mainly focused on the development of a compound that targets the enzyme active pocket of the target kinase and interferes with the adhesion of the active pocket of ATP, one of the kinase substrates. And EGFR kinase inhibitor, a new drug that has been recently developed, or irevac, an abl kinase inhibitor.

도면의 간단한 설명Brief description of the drawings

따라서, 간경화 등과 같은 조직 섬유화, 류머티즘 및 암 등으로 대표되는 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성으로 인하여 매개 되는 질환을 치료하기 위하여, 본 발명은 DDR2 티로신 키나아제 활성을 저해하는 신규한 저분자 화합물 또는 이를 포함하는 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성으로 인하여 매개되는 질환의 치료제를 제공하는 것을 목적으로 한다.Therefore, in order to treat diseases mediated by tyrosine kinase activity of DDR2 proteins such as tissue fibrosis, rheumatism and cancer, such as cirrhosis, the present invention provides a novel small molecule compound that inhibits DDR2 tyrosine kinase activity or DDR2 containing the same. It is an object to provide a therapeutic agent for a disease mediated by the tyrosine kinase activity of a protein.

도 2는 간 성상세포 HSC T6에서 제1형 콜라겐에 의하여 유도된 DDR2 단백질의 티로신 인산화에 대한 본 발명의 화합물의 저해 활성을 보여주는 전기영동 사진이다.Figure 2 is an electrophoresis picture showing the inhibitory activity of the compounds of the present invention on tyrosine phosphorylation of DDR2 protein induced by type 1 collagen in hepatic astrocytic HSC T6.

본 발명은 DDR2 (Discoidin Domain Receptor 2) 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는 신규한 푸로피리미딘 화합물, 이의 , 이들의 약학적으로 허용되는 염 또는 이들을 포함하는 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성과 관련된 질병의 치료제에 관한 것이다.The present invention relates to a novel furopyrimidine compound, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a tyrosine kinase activity of a DDR2 protein comprising them, which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of a DDR2 (Discoidin Domain Receptor 2) protein. It relates to the treatment of diseases.

도 4a는 본 발명의 화합물을 HSC T6 세포 배양액에 처리한 후, MMP-2 특이적 항체를 이용한 ELISA 통하여 배양액 중의 상대적인 MMP-2 양을 정량한 그래프이다.Figure 4a is a graph of the relative amount of MMP-2 in the culture medium by ELISA using MMP-2 specific antibody after treatment of the compound of the present invention in HSC T6 cell culture.

도 4b는 본 발명의 화합물을 HSC T6 세포에 처리한 후, 평활근 액틴 특이적 항체를 이용한 웨스턴 블로팅을 통하여 세포내 평활근 액틴량을 정량한 것이다.Figure 4b is to quantify the intracellular smooth muscle actin amount by treatment with HSC T6 cells of the present invention, and by Western blotting using a smooth muscle actin specific antibody.

우선, 본 발명은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 푸로피리미딘 링에 다양한 유도체를 도입한, 다음의 화학식 1로 정의되는 푸로피리미딘 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다: First, the present invention provides a furopyrimidine compound defined by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in which various derivatives are introduced into the furopyrimidine ring, which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein. do:

도 6은 담즙관 봉합을 시술한 쥐에 캐리어(DMSO) 또는 DMSO에 녹인 본 발명의 화합물을 10 mg/kg로 2주간 꼬리정맥에 주사 후 채취한 각각의 간 조직 및 대조실험으로 모조시술한 후 방치한 쥐에서 채취한 간 조직을 각각 동결시킨 후, 동결박막을 만들고, 마손 염색법으로 염색한 후, 400 배율의 현미경으로 관찰한 사진이다.FIG. 6 is a simulated procedure of each liver tissue and control experiments obtained after injection into the tail vein for 2 weeks at 10 mg / kg of the compound of the present invention dissolved in carrier or DMSO in bile duct sutures. Liver tissues collected from neglected rats were frozen and then frozen films were made, stained with horseshoe staining, and observed under a microscope at 400 magnification.

도 7은 본 발명의 화합물을 처리한 류마티즘 환자에서 추출한 활막섬유아세포의 생존률을 처리 화합물 농도에 따라 나타낸 그래프이다.Figure 7 is a graph showing the survival rate of synovial fibroblasts extracted from rheumatoid patients treated with the compound of the present invention according to the concentration of the treated compound.

도 8은 본 발명의 화합물을 처리한 경우와 처리하지 않은 경우의 활막섬유아세포 내의 MMP-1 mRNA양을 비교하여 보여주는 전기영동 사진이다.Figure 8 is an electrophoresis picture showing the comparison of the amount of MMP-1 mRNA in synovial fibroblasts treated with and without the compound of the present invention.

기술적 과제Technical challenge

상기한 바와 같이, 간경화 등과 같은 조직 섬유화, 류머티즘 및 암 등으로 대표되는 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성으로 인하여 매개되는 질환을 치료하기 위하여, 본 발명은 DDR2 티로신 키나아제 활성을 저해하는 신규한 저분자 화합물 및 이를 포함하는 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성으로 인하여 매개되는 질환의 치료제를 제공하는 것을 목적으로 한다.As described above, in order to treat diseases mediated by tyrosine kinase activity of DDR2 proteins such as tissue fibrosis, rheumatism and cancer, such as cirrhosis, the present invention provides a novel low molecular compound that inhibits DDR2 tyrosine kinase activity and An object of the present invention is to provide a therapeutic agent for a disease mediated by tyrosine kinase activity of a DDR2 protein.

R₁은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시 또는 아미노, 모르폴린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기 또는 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 acyloxy group, C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 Alkyl sulfonate groups, imidic acid C1-C4 alkyl esters, thiimidic acid C1-C4 alkyl esters, hydroxy or amino, morpholine, acetate, acetamide, methyl groups substituted with methanesulfonamide groups, and C1-C4 haloalkyl groups , C1-C4 alkoxy group or halogen is monosubstituted or substituted independently by substituted benzyloxy group,

R''은 수소, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시 또는 아미노, 모르폴린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 또는 할로겐이 치환된 페닐기에 의하여 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R '' is hydrogen, C1-C4 alkyl group, C1-C4 haloalkyl group, C1-C7 alkoxy group, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1 Substituted acylamino group of C4, acyloxy group of C1-C4, imidic acid C1-C4 alkyl ester, thiimidic acid C1-C4 alkyl ester, hydroxy or amino, morpholine, acetate, acetamide, methanesulfonamide group A case where a methyl group, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C4 alkoxy group, or a halogen is monosubstituted or independently substituted by a substituted phenyl group,

상기 A 링은 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모르폴린을 나타내고, The A ring represents benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine,

우선, 본 발명은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 푸로피리미딘 링에 다양한 유도체를 도입한, 다음의 화학식 1로 정의되는 푸로피리미딘 화합물, 이의 전구체 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.First, the present invention is a furopyrimidine compound defined by the following formula (1), a precursor thereof, and a pharmaceutically acceptable compound thereof, in which various derivatives are introduced into the furopyrimidine ring, which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein. To provide salt.

화학식 1Formula 1

또한, 본 발명은, DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 상기의 화학식 1의 치환기 R이 다음의 화학식 5의 화합물이고, R''가 수소인 다음의 화학식 2로 정의되는 푸로피리미딘 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:In addition, the present invention is a furopyrid defined by the following formula (2) wherein the substituent R of the formula (1), which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein, is the compound of the following formula (5), and R '' is hydrogen Provides a midine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof:

상기 식 중,In the above formula,

Z는 O, S 또는 NH이고,Z is O, S or NH,

n은 0에서 4 사이의 정수이고,n is an integer from 0 to 4,

R 은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 이실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시나 아미노, 모포린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1 -C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 isyloxy group, C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 Alkylsulfonate group, imidic acid C1-C4 alkyl ester, thioimidic acid C1-C4 alkyl ester, methyl group substituted with hydroxy or amino, morpholine, acetate, acetamide, methanesulfonamide group, haloalkyl group of C1-C4, The case where the C1-C4 alkoxy group is mono-substituted or independently substituted by a substituted benzyloxy group,

R"는 수소, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 이실옥시기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시나 아미노, 몰포린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 페닐기를 나타내며,R "is hydrogen, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, alkylamino group of C1-C4, alkylthio group of C1-C4, alkylamide group of C1-C4, C1- C4 acylamino group, C1-C4 isyloxy group, imidic acid C1-C4 alkyl ester, thiimidic acid C1-C4 alkyl ester, methyl group substituted with hydroxy or amino, morpholine, acetate, acetamide, methanesulfonamide group , A C1-C4 haloalkyl group, a C1-C4 alkoxy group, a halogen substituted phenyl group,

상기 A 링은 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모폴린을 나타내고,The A ring represents benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine,

R₂는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, C1-C5의 알킬기, C1-C5의 할로알킬기, 알킬에스테르, 페닐기, 할로겐이 치환된 페닐기, C1-C4의 알콕시기가 치환된 페닐기 또는 C1-C4의 할로알콕시기가 치환된 페닐기를 나타내며,R ₂ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , alkyl group of C1-C5, haloalkyl group of C1-C5, alkyl ester, phenyl group, halogen substituted phenyl group , A phenyl group substituted with an alkoxy group of C1-C4 or a phenyl group substituted with a haloalkoxy group of C1-C4,

R은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO2H, CONH2, CSNH2, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기 또는 C1-C4의 알킬술폰아미드기에 의해 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타낸다.R is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO2H, CONH2, CSNH2, amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, alkyl of C1-C4 Mono- or independently disubstituted by an amino group, an alkylthio group of C1-C4, an alkylamide group of C1-C4, an acylamino group of C1-C4, an acyloxy group of C1-C4 or an alkylsulfonamide group of C1-C4 Indicates.

또한, 본 발명은, DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 상기의 화학식 1의 치환기 R이 다음의 화학식 5의 화합물이고, R"가 수소인 다음의 화학식 2로 정의되는 푸로피리미딘 화합물, 이의 전구체 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:In addition, the present invention, furypyrimidine defined by the following formula (2) wherein the substituent R of the formula (1), which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein, is a compound of the following formula (5), and R "is hydrogen Provided are compounds, precursors thereof, and pharmaceutically acceptable salts thereof:

화학식 5Formula 5

R₁ 및 R₃는, 각각 독립적으로 서로 같거나 다른 것으로, 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시 또는 아미노, 모르폴린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환 되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ and R ₃ are each independently the same as or different from each other, hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, C1 -C4 haloalkyl group, C1-C7 alkoxy group, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 acyloxy group , C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 alkylsulfonate group, imidic acid C1-C4 alkylester, thiimidic acid C1-C4 alkylester, hydroxy or amino, morpholine, acetate, acetamide, methane Shows a case where the sulfonamide group is mono-substituted or disubstituted independently by a substituted methyl group, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C4 alkoxy group, and a halogen-substituted benzyloxy group,

상기 A 링은 각각 독립적으로 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모르폴린을 나타내고, The A rings are each independently benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine Indicates

B 링은 피롤, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 피페리딘, 피롤리딘, 피페라진, 모르폴린, 티오모르폴린, 이미다졸린, 피롤리돈, C3-C6 시클로알킬 또는 피페리돈을 나타내고, The B ring is pyrrole, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, piperidine, pyrrolidine, piperazine, morpholine, thiomorpholine, imida Represents sleepy, pyrrolidone, C3-C6 cycloalkyl or piperidone,

상기 식 중,In the above formula,

또한, 본 발명은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 다음의 화학식 3으로 정의되는 푸로피리미딘 화합물과 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:The present invention also provides a furopyrimidine compound defined by the following formula (3) and a pharmaceutically acceptable salt thereof, which act to inhibit the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein:

X는 O, S 또는 NH이고,X is O, S or NH,

Y는 C 또는 N이고,Y is C or N,

n은 0에서 4 사이의 정수이고,n is an integer from 0 to 4,

n'는 0에서 4 사이의 정수이고,n 'is an integer from 0 to 4,

R₁ 및 R₃는, 각각 독립적으로 서로 같거나 다른 것으로, 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 이실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시나 아미노, 모포린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환 되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ and R ₃ are each independently the same as or different from each other, hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, C1 -C4 haloalkyl group, C1-C7 alkoxy group, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 isyloxy group , C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 alkylsulfonate group, imidic acid C1-C4 alkyl ester, thiimidic acid C1-C4 alkyl ester, hydroxy or amino, morpholin, acetate, acetamide, methane Shows a case where the sulfonamide group is mono-substituted or disubstituted independently by a substituted methyl group, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C4 alkoxy group, and a halogen-substituted benzyloxy group,

R₁은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시 또는 아미노, 모르폴린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 acyloxy group, C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 Alkyl sulfonate groups, imidic acid C1-C4 alkyl esters, thiimidic acid C1-C4 alkyl esters, hydroxy or amino, morpholine, acetate, acetamide, methyl groups substituted with methanesulfonamide groups, and C1-C4 haloalkyl groups , C1-C4 alkoxy group, represents a case where the halogen is monosubstituted or independently substituted by a substituted benzyloxy group,

상기 A 링은 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모르폴린을 나타내고, The A ring represents benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine,

또한, 본 발명은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 다음의 화학식 3으로 정의되는 푸로피리미딘 화합물, 이의 전구체 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:The present invention also provides a furopyrimidine compound, a precursor thereof, and a pharmaceutically acceptable salt thereof, which are defined by the following formula (3), which act to inhibit the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein:

화학식 3Formula 3

또한, 본 발명은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 상기의 화학식 1의 치환기 R이 다음의 화학식 6의 화합물이고, R''가 수소인 다음의 화학식 4로 정의되는 푸로피리미딘 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:In addition, the present invention is a furypyrimidine defined by the following formula (4) wherein the substituent R of the formula (1) is a compound of formula (6), and R '' is hydrogen, which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of DDR2 protein Provided are compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof:

상기 식 중,In the above formula,

Z는 O, S 또는 NH이고,Z is O, S or NH,

n은 0에서 4 사이의 정수이고,n is an integer from 0 to 4,

R₁은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 이실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시나 아미노, 모포린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 isyloxy group, C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 Alkyl sulfonate groups, imidic acid C1-C4 alkyl esters, thiimidic acid C1-C4 alkyl esters, hydroxy or amino, morpholin, acetate, acetamide, methyl groups substituted with methanesulfonamide groups, and C1-C4 haloalkyl groups , C1-C4 alkoxy group, represents a case where the halogen is monosubstituted or independently substituted by a substituted benzyloxy group,

상기 A 링은 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모폴린을 나타내고,The A ring represents benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine,

R₂는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, C1-C5의 알킬기, C1-C5의 할로알킬기, 알킬에스테르, 페닐기, 할로겐이 치환된 페닐기, C1-C4의 알콕시기가 치환된 페닐기 또는 C1-C4의 할로알콕시기가 치환된 페닐기를 나타내며,R ₂ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , alkyl group of C1-C5, haloalkyl group of C1-C5, alkyl ester, phenyl group, halogen substituted phenyl group , A phenyl group substituted with an alkoxy group of C1-C4 or a phenyl group substituted with a haloalkoxy group of C1-C4,

R은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기 또는 C1-C4의 알킬술폰아미드기에 의해 일치환 되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타낸다.R is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1 Mono- or independently substituted by an alkylamino group of C4, an alkylthio group of C1-C4, an alkylamide group of C1-C4, an acylamino group of C1-C4, an acyloxy group of C1-C4, or an alkylsulfonamide group of C1-C4 It shows the case where it is disubstituted by.

또한, 본 발명은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 상기의 화학식 1의 치환기 R이 다음의 화학식 6의 화합물이고, R"가 수소인 다음의 화학식 4로 정의되는 푸로피리미딘 화합물, 이의 전구체 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:In addition, the present invention is a furropyrimidine compound defined by the following formula (4) wherein the substituent R of the formula (1) is a compound of formula (6), and R "is hydrogen, which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of DDR2 protein , Precursors thereof and pharmaceutically acceptable salts thereof:

화학식 6Formula 6

R₁ 및 R₃'는, 각각 독립적으로 서로 같거나 다른 것으로, 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시 또는 아미노, 모르폴린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의해 일치환 되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ and R ₃ ′ each independently represent the same or different hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, C1-C4 alkyl group, C1-C4 haloalkyl group, C1-C7 alkoxy group, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 acyloxy C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 alkylsulfonate group, imidic acid C1-C4 alkylester, thiimidic acid C1-C4 alkylester, hydroxy or amino, morpholine, acetate, acetamide, Shows a case where the methanesulfonamide group is mono-substituted or disubstituted independently by a substituted methyl group, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C4 alkoxy group, a halogen substituted benzyloxy group,

상기 A 링은 각각 독립적으로 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모르폴린을 나타내고, The A rings are each independently benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine Indicates

B' 링은 피롤, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 피페리딘, 피롤리딘, 피페라진, 모르폴린, 티오모르폴린, 이미다졸린, 피롤리돈 또는 피페리돈을 나타내고, B 'ring represents pyrrole, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, piperidine, pyrrolidine, piperazine, morpholine, thiomorpholine, imidazoline, pyrrolidone or piperidone,

상기 식 중,In the above formula,

Z는 O, S 또는 NH이고,Z is O, S or NH,

또한, 본 발명은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 상기의 화학식 1 내지 4의 화합물의 중간 산물인, 다음의 화학식 XI과 화학식 XII로 정의되는 푸로피리미딘 화합물 또는 이의 약리적으로 허용되는 염을 제공한다. In addition, the present invention is an intermediate product of the above compound of Formulas 1 to 4, which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of DDR2 protein, the puropyrimidine compound defined by the following formula (XI) and formula (XII) or pharmacologically acceptable thereof To provide salts.

n은 0에서 4 사이의 정수이고,n is an integer from 0 to 4,

n'는 0에서 4 사이의 정수이고,n 'is an integer from 0 to 4,

R₁ 및R₃'는, 각각 독립적으로 서로 같거나 다른 것으로, 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 이실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시나 아미노, 모포린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의해 일치환 되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ and R ₃ ′ each independently represent the same or different hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, C1-C4 alkyl group, C 1 -C 4 haloalkyl group, C 1 -C 7 alkoxy group, C 1 -C 4 alkylamino group, C 1 -C 4 alkylthio group, C 1 -C 4 alkylamide group, C 1 -C 4 acylamino group, C 1 -C 4 dioxyl C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 alkylsulfonate group, imidic acid C1-C4 alkylester, thiimidic acid C1-C4 alkylester, hydroxy or amino, morpholin, acetate, acetamide, Shows a case where the methanesulfonamide group is mono-substituted or disubstituted independently by a substituted methyl group, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C4 alkoxy group, a halogen substituted benzyloxy group,

상기 A 링은 각각 독립적으로 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모폴린을 나타내고, B' 링은 피롤, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 피페리딘, 피롤리딘, 피퍼라진, 모폴린, 티오모폴린, 이미다졸린, 피롤리돈 및 피퍼리돈 을 나타내고,The A rings are each independently benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine B 'ring represents pyrrole, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, piperidine, pyrrolidine, piperazine, morpholine, thiomorpholine, imidazoline, pyrrolidone and piperidon

R₂는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, C1-C5의 알킬기, C1-C5의 할로알킬기, 알킬에스테르, 페닐기, 할로겐이 치환된 페닐기, C1-C4의 알콕시기가 치환된 페닐기 또는 C1-C4의 할로알콕시기가 치환된 페닐기를 나타낸다.R ₂ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , alkyl group of C1-C5, haloalkyl group of C1-C5, alkyl ester, phenyl group, halogen substituted phenyl group , A phenyl group substituted with a C1-C4 alkoxy group or a phenyl group substituted with a haloalkoxy group of C1-C4.

본 발명의 화학식 1, 화학식 2, 화학식 3 또는 화학식 4로 정의되는 화합물은 유리형태(free base) 또는 염산, 황산, 시트르산 또는 푸마르산 등의 산 부가염 형태로 존재 할 수 있다.Compounds defined by Formula 1, Formula 2, Formula 3 or Formula 4 of the present invention may be in free form or in acid addition salt forms such as hydrochloric acid, sulfuric acid, citric acid or fumaric acid.

또한, 본 발명은 본 발명은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 작용을 하는, 상기의 화학식 1 내지 4의 화합물의 중간산물인, 다음의 화학식 XI 또는 XII 로 정의되는 푸로피리미딘 화합물, 이의 전구체 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:In addition, the present invention is an intermediate of the compounds of Formula 1 to 4, which acts to inhibit the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein, puropyrimidine compounds defined by the following formula XI or XII, precursors thereof And pharmaceutically acceptable salts thereof:

화학식 XIFormula XI

화학식 XIIFormula XII

상기 식중 치환기의 정의는 상기한 바와 같다. 또한, 하기하는 반응식 및 표에서 상기 화학식 XI 또는 XII로 정의되는 화합물 중 R"가 수소인 경우를 각각 VI 및 VII로 나타내었다.The definition of the substituent in the above formula is as described above. In addition, in the following scheme and table, the case where R ″ in the compound defined by the above formula (XI) or XII is hydrogen is represented by VI and VII, respectively.

본 발명의 화합물은 모두 다음의 화학식 IV로 표현되는 화합물로부터 합성될 수 있다.All compounds of the present invention can be synthesized from compounds represented by the following formula (IV).

화학식 IVFormula IV

화학식 2의 화합물의 경우 화학식 IV의 치환기 R'는 화학식 5로 정의되는 치환기에 의하여 치환가능한 작용기를 생성할 수 있는 것이 하여야 하므로, 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO2H, CONH2, CSNH2, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기 또는 C1-C4의 알킬술폰아미드기인 것이 바람직하다.In the case of the compound of formula (2), the substituent R 'of formula (IV) should be capable of producing a substitutable functional group by the substituent defined by formula (5), so that hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO2H, CONH2 , CSNH2, amidine, C1-C4 alkyl group, C1-C4 haloalkyl group, C1-C7 alkoxy group, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1 It is preferable that they are an acylamino group of -C4, an acyloxy group of C1-C4, or an alkylsulfonamide group of C1-C4.

예컨대, 본 발명의 화학식 2와 화학식 4의 화합물은 R'가 -OCH3인 화학식 IV의 화합물 (IV')를 출발물질로 하여 다음의 반응식 1과 같이 제조할 수 있다:For example, the compounds of formulas (2) and (4) of the present invention may be prepared by using the compound of formula (IV '), wherein R' is -OCH3, as starting material, as shown in Scheme 1 below:

반응식 1Scheme 1

R_1, R₃ 및 R₃'는, 각각 독립적으로 서로 같거나 다른 것으로, 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시 또는 아미노, 모르폴린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R _1, R ₃ and R ₃ ′ are each independently the same as or different from each other, hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, C1-C4 Alkyl group, C1-C4 haloalkyl group, C1-C7 alkoxy group, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 Acyloxy group, C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 alkylsulfonate group, imidic acid C1-C4 alkylester, thiimidic acid C1-C4 alkylester, hydroxy or amino, morpholine, acetate, A case where the acetamide, the methane sulfonamide group is substituted by a methyl group substituted, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C4 alkoxy group, and a halogen is substituted or independently substituted by a substituted benzyloxy group,

상기 A 링은 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모르폴린을 나타내고, The A ring represents benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine,

Z는 O, S 또는 NH이고,Z is O, S or NH,

X는 O, S 또는 NH이고,X is O, S or NH,

Y는 C 또는 N이고,Y is C or N,

n'는 0에서 4 사이의 정수이고,n 'is an integer from 0 to 4,

m은 0에서 4 사이의 정수이고,m is an integer from 0 to 4,

R₁,R₃ 및 R₃'는, 각각 독립적으로 서로 같거나 다른 것으로, 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 이실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시나 아미노, 몰포린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ , R ₃ and R ₃ ′ are each independently the same as or different from each other, hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, C1-C4 Alkyl group, C1-C4 haloalkyl group, C1-C7 alkoxy group, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 Isyloxy group, C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 alkylsulfonate group, imidic acid C1-C4 alkyl ester, thiimidic acid C1-C4 alkyl ester, hydroxy or amino, morpholine, acetate, A case where the acetamide, the methane sulfonamide group is substituted by a methyl group substituted, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C4 alkoxy group, and a halogen is substituted or independently substituted by a substituted benzyloxy group,

상기 A 링은 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 몰포린을 나타내고,The A ring represents benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine,

R₂는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, C1-C5의 알킬기, C1-C5의 할로알킬기, 알킬에스테르, 페닐기, 할로겐이 치환된 페닐기, C1-C4의 알콕시기가 치환된 페닐기 또는 C1-C4의 할로알콕시기가 치환된 페닐기를 나타낸다.R ₂ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , alkyl group of C1-C5, haloalkyl group of C1-C5, alkyl ester, phenyl group, halogen substituted phenyl group , A phenyl group substituted with a C1-C4 alkoxy group or a phenyl group substituted with a haloalkoxy group of C1-C4.

상기 반응식 1은 화합물 2 및 화합물 4를 제조할 수 있는 하나의 예시일 뿐이며, 상기 반응식 1에 예시된 것과 다른 화합물 IV를 사용하여 제조하거나, 상기 식 중 화합물 VI'에 이소아밀니트라이트와 CCl₄를 첨가하여 -NH₂이 -Cl로 치환된 화합물 VII'를 제조하는 과정 없이 화합물 VI'의 -OCH₃를 디메틸레이션시켜서 반응을 진행시킬 수도 있다.Scheme 1 is only one example of preparing Compound 2 and Compound 4, and is prepared using Compound IV different from that illustrated in Scheme 1, or isoamylnitrite and CCl ₄ in Compound VI ' The reaction may be proceeded by dimethylating -OCH ₃ of compound VI 'without adding -NH ₂ to -Cl to prepare compound VII'.

또한, 상기 화학식 1 또는 3의 화합물은 출발물질인 화합물 VI의 R'가 최종 화합물까지 그대로 유지되어 있으므로 상기한 R과 동일한 R'을 갖는 화학식 IV의 화합물(IV")을 사용하여 제조할 수 있다.In addition, the compound of Formula 1 or 3 may be prepared using Compound IV of Formula IV having the same R 'as R as described above, since R' of Compound VI, which is a starting material, is maintained as it is. .

예컨대, 본 발명의 화학식 1의 화합물은 다음의 반응식 2에 의하여 제조할 수 있다:For example, the compound of Formula 1 of the present invention may be prepared by the following Scheme 2:

반응식 2Scheme 2

R₁은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기, C1-C4의 알킬술폰아미드기, C1-C4의 알킬술포네이트기, 이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 티오이미딕산 C1-C4 알킬에스테르, 히드록시 또는 아미노, 모르폴린, 아세테이트, 아세트아미드, 메탄술폰아미드기가 치환된 메틸기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C4의 알콕시기, 할로겐이 치환된 벤질옥시기에 의하여 일치환되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타내고,R ₁ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1-C4 alkylamino group, C1-C4 alkylthio group, C1-C4 alkylamide group, C1-C4 acylamino group, C1-C4 acyloxy group, C1-C4 alkylsulfonamide group, C1-C4 Alkyl sulfonate groups, imidic acid C1-C4 alkyl esters, thiimidic acid C1-C4 alkyl esters, hydroxy or amino, morpholine, acetate, acetamide, methyl groups substituted with methanesulfonamide groups, and C1-C4 haloalkyl groups , C1-C4 alkoxy group, represents a case where the halogen is monosubstituted or independently substituted by a substituted benzyloxy group,

상기 A 링은 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모르폴린을 나타내고, The A ring represents benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine,

또한, 본 발명의 화학식 3의 화합물은, 예컨대, 다음의 반응식 3에 의하여 제조할 수 있다:In addition, the compound of formula 3 of the present invention may be prepared, for example, by the following scheme 3:

반응식 3Scheme 3

상기 반응식 2 및 반응식 3에 있어서,In Reaction Scheme 2 and Scheme 3,

또한, 본 발명은 유효성분으로서 상기의 화학식 1, 화학식 2, 화학식 3, 화학식 4, 화학식 XI 또는 화학식 XII로 표현되는 DDR2 티로신 키나아제의 활성을 억제하는 효과를 갖는 신규한 푸로피리미딘 유도체 또는 그의 약리적으로 허용되는 염 중 한 가지 이상을 치료적 유효량으로 포함하는 DDR2 티로신 키나아제 활성 억제제를 제공한다. In addition, the present invention is a novel furypyrimidine derivative having the effect of inhibiting the activity of the DDR2 tyrosine kinase represented by the formula (1), (2), (3), (4), (XI) or (XII) as an active ingredient or pharmacological thereof To provide a DDR2 tyrosine kinase activity inhibitor comprising a therapeutically effective amount of at least one of the acceptable salts.

또한, 본 발명은 유효성분으로서 상기 화학식 1, 화학식 2, 화학식 3, 화학식 XI 또는 화학식 XII로 표현되는 신규한 푸로피리미딘 유도체 또는 그의 약리적으로 허용되는 염 중 한 가지 이상을 치료적 유효량으로 포함하는 간경화, 류마티스 등과 같이 DDR2 티로신 키나아제의 활성에 관계된 질병의 치료제를 제공한다. In addition, the present invention comprises a therapeutically effective amount of at least one of the novel furopyrimidine derivative represented by Formula 1, Formula 2, Formula 3, Formula XI or Formula XII or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient. It provides a therapeutic agent for diseases related to the activity of DDR2 tyrosine kinase, such as cirrhosis, rheumatism and the like.

상기 A 링은 벤젠, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘, 시클로헥실, 피페리딘 또는 모폴린을 나타내고,The A ring represents benzene, pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, triazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, cyclohexyl, piperidine or morpholine,

R₂는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, C1-C5의 알킬기, C1-C5의 할로알킬기, 알킬에스테르, 페닐기, 할로겐이 치환된 페닐기, C1-C4의 알콕시기가 치환된 페닐기 또는 C1-C4의 할로알콕시기가 치환된 페닐기를 나타내며,R ₂ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , alkyl group of C1-C5, haloalkyl group of C1-C5, alkyl ester, phenyl group, halogen substituted phenyl group , A phenyl group substituted with an alkoxy group of C1-C4 or a phenyl group substituted with a haloalkoxy group of C1-C4,

R은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, C1-C4의 알킬티오기, C1-C4의 알킬아미드기, C1-C4의 아실아미노기, C1-C4의 아실옥시기 또는 C1-C4의 알킬술폰아미드기에 의해 일치환 되거나 독립적으로 이치환된 경우를 나타낸다.R is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1 Mono- or independently substituted by an alkylamino group of C4, an alkylthio group of C1-C4, an alkylamide group of C1-C4, an acylamino group of C1-C4, an acyloxy group of C1-C4, or an alkylsulfonamide group of C1-C4 It shows the case where it is disubstituted by.

상기 반응식 2에 있어서, n은 0에서 4 사이의 정수를 의미한다.In Scheme 2, n means an integer between 0 and 4.

본 발명의 구체예에서 상기 화학식 1,2,3 및 4의 화합물은 하기의 표 6-1 내지 6-12에 나타낸 번호 5 내지 132의 화합물일 수 있다.In an embodiment of the present invention, the compounds of Formulas 1,2,3 and 4 may be compounds of Nos. 5 to 132 shown in Tables 6-1 to 6-12 below.

또한, 본 발명은 유효성분으로서 상기의 화학식 1, 화학식 2, 화학식 3과 화학식 4, 및 화학식 XI 및 화학식 XII로 표현되는 DDR2 티로신 키나아제의 활성을 억제하는 효과를 갖는 신규한 푸로피리미딘 유도체 및 그의 약리적으로 허용되는 염 중 한 가지 이상을 치료적 유효량으로 포함하는 DDR2 티로신 키나아제 활성 억제제를 제공한다. 또한, 본 발명은 유효성분으로서 상기 화학식 1, 화학식 2, 화학식 3, 화학식 XI 및 화학식 XII로 표현되는 신규한 푸로피리미딘 유도체 및 그의 약리적으로 허용되는 염 중 한 가지 이상을 치료적 유효량으로 포함하는 간경화, 류마티스 등과 같이 DDR2 티로신 키나아제의 활성에 관계된 질병의 치료제를 제공한다. 본 발명의 약학적 조성물은 약리적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 추가적으로 포함할 수 있다. 하기의 표 11로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 최종 생성물인 화학식 1 내지 4의 화합물 뿐 아니라, 중간체인 화학식 XI 및 XII(표 중에는 R"가 수소인 VI 및 VII으로 나타냄)의 화합물도 우수한 DDR2 티로신 키나아제 저해 활성을 갖는 것으로 확인되었다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 화학식 XI 및/또는 XII의 화합물을 유효성분으로 포함할 수 있다.In addition, the present invention is a novel furypyrimidine derivative having the effect of inhibiting the activity of the DDR2 tyrosine kinase represented by the formula (1), (2), (3) and (4), and (XI) and (XII) as an active ingredient Provided is a DDR2 tyrosine kinase activity inhibitor comprising a therapeutically effective amount of at least one of the pharmaceutically acceptable salts. In addition, the present invention comprises a therapeutically effective amount of at least one of the novel furopyrimidine derivatives represented by the formula (1), (2), (3), (XI) and (XII) and pharmacologically acceptable salts thereof as an active ingredient. It provides a therapeutic agent for diseases related to the activity of DDR2 tyrosine kinase, such as cirrhosis, rheumatism and the like. The pharmaceutical composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, and the like. As can be seen from Table 11 below, not only the compounds of Formulas 1 to 4, which are the final products of the present invention, but also the compounds of Formulas XI and XII, which are intermediates, represented by VI and VII in which R ″ is hydrogen It has been confirmed that it has DDR2 tyrosine kinase inhibitory activity, therefore, the pharmaceutical composition of the present invention may include a compound of formulas XI and / or XII as an active ingredient.

상기한 바와 같이, DDR2 단백질은 티로신 키나아제 활성을 갖는 수용체 단백질로서, C-말단에 티로신 키나아제 활성 부위를 포함한다. DNA 재조합 기술 및 바큐로 바이러스 발현 기술을 이용하여, 곤충세포에서 과잉 발현하며, 세포질 노출 부위인 C-말단 부위(아미노산 441-825)의 티로신 키나아제 활성을 갖는 단백질을 확보할 수 있다. 또한, 이러한 키나아제 활성 부위에 여러 방법으로 티로신 인산화를 유도하여 변형시킴으로써 그 키나아제 활성을 증진시킬 수 있다 (한국특허출원 제2002-0067233호 "변형된 DDR2 타이로신 카이네이즈 활성단백질" 및 한국특허출원 제2003-0076967호 "DDR2 티로신 키나아제활성의 변형 방법 및 이와 같은 방법으로 변형된 키나아제 활성을 갖는 DDR2 단백질" 참조).As described above, the DDR2 protein is a receptor protein having tyrosine kinase activity and includes a tyrosine kinase active site at the C-terminus. By using DNA recombination technology and baculovirus expression technology, it is possible to obtain a protein that is overexpressed in insect cells and has tyrosine kinase activity at the C-terminal site (amino acids 441-825), which is a cytoplasmic exposure site. It is also possible to enhance the kinase activity by inducing and modifying tyrosine phosphorylation in various ways to such kinase activity sites (Korean Patent Application No. 2002-0067233, “Modified DDR2 Tyrosine Kinase Active Protein” and Korean Patent Application No. 2003-2003). 0076967, "Methods for modifying DDR2 tyrosine kinase activity and DDR2 proteins with kinase activity modified in this way".

유리한 효과Favorable effect

이러한 티로신 키나아제 활성을 갖는 DDR2 단백질에 대한 본 발명의 화합물의 억제 활성을 측정하였다. DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성부위의 티로신 키나아제 활성 측정은 여러 가지 방법으로 가능하다. 예컨대, 펩타이드 기질로서 프로메가사가 제공하는 바이오틴이 부착된 poly(D4Y)n을 이용하거나, 히스톤 H2B 단백질을 이용하여 측정하거나, DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성 부위의 자가 인산화 정도를 측정할 수 있다. 키나아제 활성에 의한 기질인 ATP로부터 또 다른 기질인 펩타이드로의 인산기의 이동은, ATP의 감마위치 인산기를 ³²P 동위원소로 표식 후 사용함으로써, ³²P 방사성의 펩타이드 기질에서의 검출정도로 활성 정도를 측정할 수 있다.The inhibitory activity of the compounds of the present invention on DDR2 proteins having such tyrosine kinase activity was measured. Tyrosine kinase activity of the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein can be measured in several ways. For example, a biotin-attached poly (D4Y) n provided by Promega Corporation, a histone H2B protein, or a tyrosine kinase active site of a DDR2 protein may be measured as a peptide substrate. The transfer of phosphate groups from ATP, a substrate due to kinase activity, to a peptide, another substrate, was measured by using a gamma position phosphate group of ATP after labeling with ³² P isotopes to detect the activity on a ³² P radioactive peptide substrate. can do.

본 발명에서 합성된 화합물의 DDR2 티로신 키나아제 저해 활성을, DDR2 티로신 키나아제 활성을 50% 저해하는 각 화합물의 농도를 각 화합물의 IC 값으로 정의함으로써, 하기의 표 11에 나타내었다. 표 11에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 화학식 1, 2 및 3 뿐 아니라 화학식 VI 및 VII로 표현되는 화합물이 모두 500 uM 이하의 IC 값을 나타내며, 우수한 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 저해 능력이 있음을 알 수 있다.The DDR2 tyrosine kinase inhibitory activity of the compound synthesized in the present invention is shown in Table 11 below by defining the concentration of each compound that inhibits DDR2 tyrosine kinase activity by 50% as the IC value of each compound. As can be seen from Table 11, the compounds represented by the formulas (VI) and (VII) as well as the formulas (VI) and (VII) of the present invention all exhibit IC values of 500 uM or less, indicating that the excellent DDR2 protein has tyrosine kinase inhibitory ability. Able to know.

본 발명의 화합물들은 DDR2 키나아제의 기질 중 하나인 ATP에 대하여 경쟁적으로 결합함으로써, 저해 효과를 나타낸다. 본 발명의 화합물의 대표 화합물 100(표6)이 ATP 경쟁적 기전에 의해 DDR2 키나아제 활성을 저해함을 확인하기 위하여, 상기 화합물을 0 uM, 0.2 uM 및 1.2 uM 농도로 처리하고 기질인 ATP 양을 변화시키며 반응속도를 구한 후 이를 리시프로칼 프로팅한 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 상기 리시프로칼 프로팅 결과는 Y 축상에서 한 점에서 만나고 X 축의 절편이 변하는 것으로 DDR2 키나아제 활성이 저해됨을 확인할 수 있다.Compounds of the present invention exhibit an inhibitory effect by competitively binding to ATP, one of the substrates of DDR2 kinase. In order to confirm that the representative compound 100 (Table 6) of the compound of the present invention inhibits DDR2 kinase activity by the ATP competitive mechanism, the compound was treated at 0 uM, 0.2 uM and 1.2 uM concentrations and the amount of ATP as a substrate was changed. After the reaction rate was obtained, the result of Rishiprocal proving is shown in FIG. 1. As can be seen in Figure 1, the lysical profiling results meet at one point on the Y-axis and the fragment of the X-axis can be confirmed that DDR2 kinase activity is inhibited.

따라서, 이와 같은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 저해 활성에 의하여, 본 발명의 화합물을, 예컨대, 간경화, 류머티즘 및 암과 같이, DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성과 관련된 각종 질병의 치료제로서 사용 가능하다.Therefore, by the tyrosine kinase inhibitory activity of the DDR2 protein, the compound of the present invention can be used as a therapeutic agent for various diseases related to the tyrosine kinase activity of the DDR2 protein, for example, cirrhosis, rheumatism and cancer.

또한, 간 성상세포에서 DDR2 수용체 단백질의 티로신 키나아제 활성 증가가 세포의 증식과 관련 있음이 알려졌다. 이러한 사실에 근거하여, 본 화합물들을 간 성상세포 배양 중에 처리할 때, 간 성상세포의 증식과 활성을 억제하는 효과를 검증하고자 여러 가지 실험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다.It has also been found that increased tyrosine kinase activity of DDR2 receptor proteins in hepatic stellate cells is associated with cell proliferation. Based on these facts, various experiments were performed to verify the effects of inhibiting the proliferation and activity of hepatic stellate cells when the compounds were treated in hepatic stellate cell culture.

도 2는 본 발명의 화합물이 활성화된 간 성상세포 모델인 HSC T6 세포에서 제1형 콜라겐에 의하여 유도된 DDR2 단백질의 티로신 인산화를 저해하는 것을 보여주는 것으로, 본 발명의 화합물(표 6의 번호 100)을 5 uM 내지 20 uM 농도로 24 시간동안 처리하고, 인산화된 티로신 특이적 항체를 이용한 웨스턴 브로팅에 의하여 하여 HSC T6 세포내의 DDR2 단백질의 티로신 인산화 정도를 측정한 결과를 나타낸 것이다. 도 2에서 보여지는 바와 같이, DDR2 수용체의 활성 리간드인 제1형 콜라겐에 의해서 유도된 DDR2 단백질의 티로신 인산화가 처리농도 의존적으로 감소함을 알 수 있다.Figure 2 shows that the compounds of the present invention inhibits tyrosine phosphorylation of DDR2 protein induced by collagen type 1 in HSC T6 cells, an activated hepatic stellate cell model, the compounds of the present invention (number 100 in Table 6) Was treated for 24 hours at a concentration of 5 uM to 20 uM, and the degree of tyrosine phosphorylation of DDR2 protein in HSC T6 cells was measured by Western blotting using phosphorylated tyrosine specific antibodies. As shown in FIG. 2, it can be seen that the tyrosine phosphorylation of DDR2 protein induced by collagen type 1, the active ligand of the DDR2 receptor, decreases depending on the treatment concentration.

도 3은 본 발명의 화합물이 선택적으로 HSC T6 세포의 성장을 저해함을 SRB 세포성장 저해 에세이법을 통하여 보여주는 것으로, 본 발명의 표 6의 대표 화합물(번호 100)을 48 시간 처리시, 활성화된 DDR2 티로신 키나아제를 발현하는 것으로 확인된 HSC T6 (-●-)의 세포 생존률(cell viability)이 대조세포들인 rat2 섬유아세포(-▼-) 또는 HT1080 세포(..○..)와 비교하여 현저하게 감소됨을 알 수 있다. 도 3에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 DDR2 키나아제 활성의 특이적 저해를 통하여 DDR2를 발현하는 세포에 대하여 선택적으로 작용함을 알 수 있다.Figure 3 shows that the compounds of the present invention selectively inhibit the growth of HSC T6 cells through the SRB cell growth inhibition assay, the representative compound of Table 6 of the present invention (number 100) was activated at 48 hours treatment The cell viability of HSC T6 (-●-), which was found to express DDR2 tyrosine kinase, was markedly compared to control cells, rat2 fibroblasts (-▼-) or HT1080 cells (.. ○ ..). It can be seen that the decrease. As shown in Figure 3, it can be seen that the compound of the present invention selectively acts on cells expressing DDR2 through specific inhibition of DDR2 kinase activity.

한편, 간 경변에 있어서 간 성상세포의 수가 증가하고, 동시에 활성화되어 있다는 것이 알려져 있다. 활성화된 간 성상 세포는 콜라겐과 더불어 MMP-2와 평활근 액틴 단백질 생성을 증가시킨다. 이러한 이유로, 간 경변에서 활성화된 간 성상 세포의 활성 억제 및 제거가 간 경화의 치료 효과를 달성하기 위한 주요 전략으로 생각된다.On the other hand, it is known that the number of hepatic stellate cells increases in liver cirrhosis and is activated at the same time. Activated hepatic stellate cells increase collagen production with MMP-2 and smooth muscle actin protein. For this reason, the inhibition and elimination of activated hepatic stellate cells in cirrhosis is thought to be a major strategy for achieving the therapeutic effect of liver cirrhosis.

본 발명의 화합물이 활성화된 간 성상 세포의 특징들인 MMP-2 및 평활근 액틴 단백질의 생성을 감소시키는지를 확인하기 위하여, 본 발명의 표 6의 대표 화합물(번호 100)을 활성화된 간 성상 세포의 모델인 HSC T6 세포에 24 시간 처리한 후 세포 배양액을 취하여 ELISA 에세이를 통하여 생성된 MMP-2양을 측정하여 그 결과를 도 4a에 나타내었다. 보다 상세하게, 세포 배양액을 20 배 농축시킨 후, 단백질을 96 웰 맥시솔브 프레이트에 부착시키고, 5 % 스킴 밀크 용액을 이용하여 마스킹 하고, 이어서 MMP-2 특이적 항체를 반응시킨 후, 세척하고, 퍼록시데이즈가 부착된 2차 항체를 이용하는 통상적인 퍼록시데이즈 발색 반응을 통하여 부착된 MMP-2 항체의 양을 정량하였다. 도 4a에 보여준 바와 같이, 본 발명의 화합물 처리 농도에 비례하여 MMP-2의 생성이 저해됨을 확인 할 수 있었다.To determine whether the compounds of the present invention reduce the production of MMP-2 and smooth muscle actin proteins that are characteristic of activated hepatic stellate cells, the representative compounds of Table 6 of the present invention (number 100) are models of activated hepatic stellate cells. Phosphorus HSC T6 cells were treated for 24 hours and cell cultures were taken to measure the amount of MMP-2 produced through ELISA assay. The results are shown in FIG. 4A. In more detail, after 20-fold concentration of the cell culture, the protein is attached to a 96 well maxisolve plate, masked with 5% skim milk solution, followed by reaction with the MMP-2 specific antibody, followed by washing, The amount of MMP-2 antibody attached was quantified via conventional Peroxidase coloring reaction using a secondary antibody with peroxidase. As shown in Figure 4a, it was confirmed that the production of MMP-2 is inhibited in proportion to the compound treatment concentration of the present invention.

또한, 본 발명의 화합물의 활성화된 간 성상 세포의 또 다른 특징인 평활근 액틴 단백질의 생성 감소 효과를 확인하기 위하여, 본 발명의 표 6의 대표 화합물(번호 100)을 활성화된 간 성상 세포의 모델인 HSC T6 세포에 24 시간 처리한 후, 세포를 수거하고, 1x램리 버퍼에 녹인 후, 이를 평활근 특이적 항체를 이용하여 웨스턴 브로팅하여, 화합물 처리에 따른 평활근 액틴 단백질의 양의 변화를 측정하여 도 4b에 나타내었다. 도 4b에 보여준 바와 같이 화합물 처리 농도에 비례하여 평활근 액틴 단백질의 생성이 감소하였다.In addition, in order to confirm the effect of reducing the production of smooth muscle actin protein, which is another feature of the activated hepatic stellate cells of the compounds of the present invention, the representative compound of Table 6 (number 100) of the present invention is a model of activated hepatic stellate cells After 24 hours of treatment with HSC T6 cells, the cells were harvested, dissolved in 1 × Remley buffer, and Western-broken using a smooth muscle-specific antibody to measure changes in the amount of smooth muscle actin protein following compound treatment. Shown in 4b. As shown in FIG. 4B, production of smooth muscle actin protein decreased in proportion to compound treatment concentration.

또한, 본 발명의 화합물이 활성화된 간 성상세포의 세포사멸(apoptosis)을 유도하는 활성이 있음을 확인하여, 간경화에 대하여 우수한 치료 효과를 가짐을 증명하였다. 본 발명의 화합물이 DDR2 키나아제 활성을 억제하여 실질적으로 간 성상세포의 세포사멸을 유도할 수 있는지 여부를 확인하기 위하여, 본 발명의 화합물 (표 6의 번호 100)을 간 성상세포인 HSC T6 세포에 24 시간 처리한 후, 전체 게놈 DNA의 절편화 현상을 관찰하고, 그 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 화합물을 처리 시 30 uM의 높은 농도에서 DNA 절편화 현상이 크게 관찰되었으며, 이는 본 발명의 화합물이 활성화된 간 성상세포를 효과적으로 제거하여 간경화에 대한 치료효과를 보일 수 있음을 보여주는 것이다.In addition, it was confirmed that the compound of the present invention has an activity of inducing apoptosis of activated hepatic stellate cells, and proved to have an excellent therapeutic effect on cirrhosis. In order to confirm whether the compound of the present invention can substantially induce apoptosis of hepatic stellate cells by inhibiting DDR2 kinase activity, the compound of the present invention (No. 100 in Table 6) was applied to HSC T6 cells, which are hepatic stellate cells. After 24 hours of treatment, fragmentation of the whole genomic DNA was observed, and the results are shown in FIG. 5. As can be seen in Figure 5, when the compound of the present invention was treated with DNA fragmentation phenomenon was observed at a high concentration of 30 uM, which is effective for the treatment of liver cirrhosis by effectively removing the hepatic stellate cells activated by the compound of the present invention It shows that it can work.

상기한 바와 같이, 본 발명의 화합물은 간 경변의 주된 원인으로 꼽히는 간 성상세포의 성장 및 활성을 억제하고, 활성화된 간 성상 세포의 특징인 MMP-2 및 평활근 액틴 단백질의 생성을 감소시키고, 세포사멸을 유도함으로써, 간 경변에 탁월한 치료 효과를 가질 것으로 기대된다.As described above, the compounds of the present invention inhibit the growth and activity of hepatic stellate cells, which are the leading cause of cirrhosis of the liver, reduce the production of MMP-2 and smooth muscle actin proteins, which are characteristic of activated hepatic stellate cells, By inducing death, it is expected to have an excellent therapeutic effect on cirrhosis of the liver.

또한, 본 발명의 화합물은 간경화의 주 원인으로 알려진 간 섬유화를 유발하는 간 조직 내 콜라겐의 축적을 억제함으로써, 간경화를 치료할 수 있다. 이와 같은 본 발명의 화합물의 간 조직 내 콜라겐 축적 억제 효과를 확인하기 위하여, 7 주령의 수컷 whistar rat을 이용하여 담즙관 봉합에 의한 간 경화 동물 모델을 만든 후, 이 동물에 본 발명의 화합물(표 6의 번호 100)을 꼬리 정맥 주사를 통하여 10 mg/kg의 용량으로 매일 1 회씩 2 주간 투여하였다. 담즙관 봉합시술 후 2 주동안 본 발명의 화합물을 투여한 군과 투여하지 않은 군(대조군)으로 나누어, 이들의 간 조직 내의 하이드록시 프롤린의 양을 측정하고, 담즙관 봉합시술을 받지 않은 군으로부터 측정한 값과 함께 하기의 표 12에 나타내었다.In addition, the compounds of the present invention can treat liver cirrhosis by inhibiting the accumulation of collagen in liver tissue that causes liver fibrosis, which is known to be a major cause of cirrhosis. In order to confirm the effect of inhibiting collagen accumulation in liver tissue of the compound of the present invention, a hepatic sclerosed animal model by bile duct closure was made using 7-week-old male whistar rat, and then the animal of the present invention (Table Number 100 of 6) was administered once daily for two weeks at a dose of 10 mg / kg via tail vein injection. After the bile duct suture procedure, divided into two groups which were administered the compound of the present invention and the group which was not administered (control), the amount of hydroxyproline in their liver tissue was measured, and It is shown in Table 12 below along with the measured values.

하이드록시 프롤린은 체내의 다른 단백질에는 거의 존재하지 아니하며 콜라겐을 구성하는 아미노산으로서, 본 발명에서는 간 조직내의 콜라겐 양을 직접적으로 나타내는 지표로서 간 조직의 하이드록시 프롤린 양을 측정하였다.Hydroxy proline is an amino acid constituting collagen, which is hardly present in other proteins in the body, and in the present invention, the amount of hydroxy proline in liver tissue was measured as an indicator indicating directly the amount of collagen in liver tissue.

표 12에서 알 수 있는 바와 같이, 담즙관 봉합 시술 후 본 발명의 화합물을 투여하지 아니한 군의 하이드록시 프롤린의 양은 담즙관 봉합 시술을 받지 아니한 군과 비교하여 약 2.5배 증가되는데, 이는 담즙관 봉합으로 인하여 간 조직 내의 콜라겐 축적이 상당량 진행되어 간 경화 병변이 진행되었음을 보여주는 것이다. 반면, 담즙관 봉합 시술 후 2 주간 방치한 군과 비교하여, 본 발명의 화합물이 투여된 군은 간 조직 내의 하이드록시 프로린 양의 증가가 현저히 완화되는 결과를 보여주었다.As can be seen in Table 12, the amount of hydroxyproline in the group not administered the compound of the present invention after the bile duct closure procedure is increased by about 2.5 times compared to the group not receiving the bile duct closure procedure, which is bile duct suture Due to the progress of a significant amount of collagen accumulation in liver tissue to show that the progression of cirrhosis of the liver. On the other hand, compared with the group left for 2 weeks after the bile duct closure procedure, the group to which the compound of the present invention was administered showed a result that the increase in the amount of hydroxyproline in the liver tissue was remarkably alleviated.

이러한 결과는 본 발명의 화합물이 간 성상세포의 증식 및 활성 억제 활성과 더불어 간 조직내 콜라겐의 축적을 억제함으로써 간경화 병변에 대해 항 섬유화 효과가 있음을 보여주는 것으로, 본 발명의 화합물의 우수한 간경화 치료 효과를 다시 한 번 증명하는 것이다.These results show that the compound of the present invention has an anti-fibrotic effect on liver cirrhosis lesions by inhibiting the accumulation of collagen in liver tissue as well as the proliferation and activity inhibitory activity of hepatic stellate cells. Will prove once again.

도 6은 상기와 같이 담즙관 봉합 시술 후 본 발명의 대표 화합물 100(표6)을 투여한 쥐의 간 조직과 캐리어만을 투여한 쥐의 간 조직, 및 대조군으로 담즙관 봉합을 하지 않은 쥐의 간 조직을 채취하여 각각 동결건조 섹션을 만든 후, 이를 마손 염색법을 통하여 콜라겐 침착정도를 염색하여 비교한 결과를 나타낸 것으로, 본 발명의 화합물에 의한 간 조직내 콜라겐 침착의 감소를 확인할 수 있다. 도 6에서 알 수 있는 바와 같이, 담즙관 봉합 시술 후 본 발명의 화합물을 투여한 쥐의 간 조직에서는 캐리어만을 투여한 쥐의 간 조직과 비교하여 파란색으로 염색되는 콜라겐이 현저히 감소하여 담즙관 봉합을 하지 않은 대조군 쥐의 간 조직과 같이 콜라겐 침착이 거의 관찰되지 않았다.Figure 6 shows the liver tissue of the rat administered the representative compound 100 (Table 6) of the present invention after administration of the bile duct suture as described above, the liver tissue of the rat administered only the carrier, and the liver of the rat not treated with bile duct closure as a control After taking the tissues and making the freeze-dried sections, respectively, this was shown by comparing the staining degree of collagen deposition through the horseshoe staining method, it can be confirmed that the reduction of collagen deposition in liver tissue by the compound of the present invention. As can be seen in Figure 6, in the liver tissue of the rat administered the compound of the present invention after the bile duct closure procedure, collagen staining in blue is significantly reduced compared to the liver tissue of the rat administered only the carrier to prevent bile duct closure. Almost no collagen deposition was observed, as did liver tissue in control rats.

또한, 본 발명의 화합물은 간경화 뿐 아니라, 류머티즘 등의 관절염 병변인자에 대해서도 우수한 억제 효과를 갖는다. 류머티즘 등의 관절염 병변의 한 특징은 활막의 활막세포의 활성화 및 과다증식이다. 활성화된 활막세포는 MMP-1 단백질을 과잉으로 분비하여 연골조직을 구성하는 콜라겐 단백질을 파괴함으로써 류머티즘 병변을 심화시킨다.In addition, the compounds of the present invention have an excellent inhibitory effect on arthritis lesion factors such as rheumatoid as well as cirrhosis. One feature of arthritis lesions such as rheumatism is the activation and hyperproliferation of synovial cells of the synovial membrane. Activated synovial cells exacerbate rheumatoid lesions by excessively secreting MMP-1 protein and destroying collagen proteins that make up cartilage tissue.

최근 류머티즘 병변시 활막세포에 DDR2 단백질의 발현이 증가함이 관찰되었다. 활막세포가 상기한 간 성상세포와 마찬가지로 섬유 세포(fibrotic cells)의 일종이라는 점에서 간 성상세포에서와 마찬가지로 활막세포에서도 DDR2의 발현이 병인 인자라고 유추할 수 있다.Recently, increased expression of DDR2 protein in synovial cells during rheumatoid lesions was observed. In the sense that the synovial cells are a kind of fibrotic cells like the liver astrocytes, it can be inferred that DDR2 expression is a pathogenesis factor in the synovial cells as in the liver astrocytes.

본 발명의 화합물이 활막세포의 성장을 억제함으로써 류머티즘에 대하여 치료 효과를 갖는다는 것을 증명하기 위하여, 류머티즘 환자에서 추출한 활막 섬유아세포에 본 발명의 화합물 (표 6의 화합물 번호 100)을 농도별로 48 시간 처리한 후의 살아있는 세포수와 화합물 처리 직전 세포수를 SRB 정량을 통하여 비교하여 % 세포 생존률을 구하여 도 7에 나타내었다. 도 7에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 화합물의 농도와 비례하여 활막 섬유아세포의 세포 생존률이 감소함을 알 수 있으며, 이는 DDR2 키나아제 활성의 특이적 저해 물질인 본 발명의 화합물이 류머티즘의 원인인 활막 섬유아세포의 성장 및 활성을 억제함으로써 류머티즘에 대하여 치료 효과를 갖는다는 것을 보여주는 것이다.In order to prove that the compound of the present invention has a therapeutic effect against rheumatism by inhibiting the growth of synovial cells, the compound of the present invention (compound number 100 in Table 6) was applied to synovial fibroblasts extracted from rheumatoid patients for 48 hours by concentration. The number of viable cells after treatment and the number of cells immediately before compound treatment were compared by SRB quantification to obtain% cell viability and are shown in FIG. 7. As shown in Figure 7, it can be seen that the cell viability of synovial fibroblasts decreases in proportion to the concentration of the compound of the present invention, which is a compound of the present invention which is a specific inhibitor of DDR2 kinase activity is the cause of rheumatism It is shown that it has a therapeutic effect against rheumatism by inhibiting the growth and activity of synovial fibroblasts.

또한, 본 발명의 화합물은 활막 섬유아세포에서의 MMP-1 (matrix metalloproteinase-1)의 발현 저해 활성을 가짐으로써, 관절염에 대하여 치료 활성을 갖는다. 도 8은 본 발명의 대표 화합물(표 6의 화합물 번호 100)로 처리된 활막 섬유아세포에 통상적인 노던 블로팅을 실시하여 MMP-1 m-RNA를 정량한 결과를 나타낸 것으로, 본 발명의 화합물에 의하여 활막 섬유아세포에서의 MMP-1 발현이 현저히 저해됨을 확인할 수 있다. 이와 같은 사실은 본 발명의 화합물이 DDR2의 키나아제 활성 저해 활성에 의하여 류머티즘 병변 치료제로의 유용함을 증명하고, 아울러 MMP-1의 활성이 여러 암의 전이에 중요하다고 알려진 사실로부터 MMP-1 발현의 억제를 통한 악성종양 치료제로서 또한 사용될 수 있음을 보여주는 것이다. 이러한 사실을 더욱 뒷받침해주는 선행연구결과로서 Vesna Evtimova 등의 연구자에 의해 Tumor Biology 2003년 24권 189쪽에서 198쪽에 실린 'Identification of genes cell lines associated with the invasive status of human mammary carcinoma cell lines by transcriptional profiling' 제목의 연구논문의 연구결과를 들 수 있다. 상기 연구논문에 의하면 전이가 되는 활성이 높은 암 세포주에서 DDR2 유전자 발현양이 서로 높은 연관성을 가지고 증가하는 것으로 확인되었다.In addition, the compound of the present invention has a therapeutic activity against arthritis by having an expression inhibitory activity of MMP-1 (matrix metalloproteinase-1) in synovial fibroblasts. 8 shows the results of quantifying MMP-1 m-RNA by conventional Northern blotting on synovial fibroblasts treated with the representative compounds of the present invention (Compound No. 100 in Table 6). It can be seen that MMP-1 expression in synovial fibroblasts is significantly inhibited. This fact demonstrates the usefulness of the compounds of the present invention as a therapeutic agent for rheumatic lesions by the kinase inhibitory activity of DDR2, and also the inhibition of MMP-1 expression from the fact that the activity of MMP-1 is important for metastasis of various cancers. It also shows that it can also be used as a therapeutic agent for malignancy. As a further supporting result, the author of 'Identification of genes cell lines associated with the invasive status of human mammary carcinoma cell lines by transcriptional profiling' published in Tumor Biology 2003, pp. 189--198, by Vesna Evtimova et al. The results of the research paper can be cited. According to the study paper, it was confirmed that the amount of DDR2 gene expression in cancer cell lines with high metastasis activity increased with high correlation with each other.

발명의 실시를 위한 형태Embodiment for Invention

이하, 실시예를 통하여 본 발명의 화합물, 제조방법 및 그 생물학적 활성을 보다 상세히 설명할 것이나, 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 의하여 한정되는 것은 아니다. 또한, 다음의 실시예에서는 몇 몇 특징적인 화합물의 제조방법에 대하여 예시하였지만, 이들을 제외한 본 발명의 화합물들은 다음의 실시예에 기재된 방법을 기초로 하여 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 제조할 수 있는 것이다.Hereinafter, the compounds of the present invention, preparation methods and biological activities thereof will be described in more detail with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited to these Examples. In addition, the following examples illustrate some methods for preparing the compound, but the compounds of the present invention except for these are based on the method described in the following examples. It can be easily manufactured by itself.

I. 본 발명의 화합물의 제조I. Preparation of Compounds of the Invention

우선, 하기 반응식 4와 같은 제조 공정에 의하여 화합물 I, II, III 및 IV를 제조하였다:First, compounds I, II, III, and IV were prepared by the preparation process as in Scheme 4:

반응식 4Scheme 4

실시예 1: 4-메톡시페닐아세틸클로라이드(화합물 I)의 제조Example 1: Preparation of 4-methoxyphenylacetylchloride (Compound I)

4-메톡시페닐아세트산 16.62 g (0.1 mol)에 벤젠 10 ml을 가하여 용해시킨 후, 티오닐클로라이드(SOCl₂) 29 ml (0.2 mol)을 첨가하고, 가열 환류하여 1시간 동안 교반하였다. 반응액에 잔류하는 티오닐클로리드와 용매를 농축시켜 제거하여 정량적인 수율로 액상의 생성물 4-메톡시페닐아세틸클로라이드(화합물 I)를 얻어 정제 없이 사용하였다.After dissolving 10 ml of benzene in 16.62 g (0.1 mol) of 4-methoxyphenylacetic acid, 29 ml (0.2 mol) of thionyl chloride (SOCl ₂ ) was added, and the mixture was heated to reflux and stirred for 1 hour. Thionyl chloride and the solvent remaining in the reaction solution were concentrated to remove the product 4-methoxyphenylacetylchloride (Compound I) in a quantitative yield to give a liquid that was used without purification.

실시예 2: 1-페닐-2-(4-메톡시페닐)에타논(화합물 II)의 제조Example 2: Preparation of 1-phenyl-2- (4-methoxyphenyl) ethanone (Compound II)

알루미늄(III)클로라이드 40g (0.3 mol)에 디클로로메탄 200 ml를 가하여 교반하였다. 여기에 벤젠 29.5 ml (0.33 mol) 및 상기 실시예 1에서 얻어진 4-메톡시페닐아세틸클로라이드 18.5 g (0.1 mol)을 디클로로메탄(CH₂Cl₂) 100ml에 희석한 희석물을 약 30분 동안 천천히 첨가하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 얻어진 반응액을 1 M 염산 수용액 400 ml에 가하고 유기층을 추출하여 건조 및 농축시킨 후, 칼럼크로마토그래피로 정제하여 미색 고체의 생성물의 1-페닐-2-(4-메톡시페닐)에타논(화합물 II)을 얻었다. 동일한 방법으로 화합물 1-(4-토릴)-2-(4-메톡시페닐)에타논 내지 1-(4-토릴)-2-(4-시아노페닐)에타논, 1-(4-메톡시페닐)-2-페닐에타논, 1-(4-메톡시페닐)-2-(4-클로로페닐)에타논을 얻었다.To 40 g (0.3 mol) of aluminum (III) chloride, 200 ml of dichloromethane was added and stirred. Here, a dilution of 29.5 ml (0.33 mol) of benzene and 18.5 g (0.1 mol) of 4-methoxyphenylacetyl chloride obtained in Example 1 in 100 ml of dichloromethane (CH ₂ Cl ₂ ) was slowly added for about 30 minutes. Add and stir at room temperature for 2 hours. The obtained reaction solution was added to 400 ml of 1 M aqueous hydrochloric acid solution, the organic layer was extracted, dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give 1-phenyl-2- (4-methoxyphenyl) ethanone (compound) as an off-white solid product. II). In the same manner, compounds 1- (4-tolyl) -2- (4-methoxyphenyl) ethanone to 1- (4-tolyl) -2- (4-cyanophenyl) ethanone, 1- (4-meth Oxyphenyl) -2-phenylethanone and 1- (4-methoxyphenyl) -2- (4-chlorophenyl) ethanone were obtained.

실시예 3: 알파-브로모케톤계 화합물(화합물 III)의 제조Example 3: Preparation of Alpha-Bromoketone Compound (Compound III)

(1) 2-브로모-4'-클로로프로피오페논(화합물 IIId)(1) 2-bromo-4'-chloropropiophenone (Compound IIId)

4'-클로로프로피오페논 16.86 g (0.1 mol)에 아세트산 50 ml를 적가하고, 0℃로 냉각 시킨 후, 브롬 5.14 ml (0.1 mol)를 천천히 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 물 270 ml를 가하고 여과하여 충분한 물로 세척 및 건조하여 백색 고체의 생성물 2-브로모-4'-클로로프로피오페논(IIId) 24.13 g을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 1의 화합물 IIIf 내지 IIIi, 화합물 IIIk, 화합물 IIIIl, 화합물 IIIn, IIIu, 및 화합물 IIIx를 각각 얻었다.To 16.86 g (0.1 mol) of 4'-chloropropiophenone, 50 ml of acetic acid were added dropwise, cooled to 0 ° C, and 5.14 ml (0.1 mol) of bromine was slowly added dropwise. After stirring at room temperature for 2 hours, 270 ml of water were added, filtered and washed with sufficient water and dried to give 24.13 g of the product 2-bromo-4'-chloropropiophenone (IIId) as a white solid. In the same manner, Compounds IIIf to IIIi, Compound IIIk, Compound IIIIl, Compound IIIn, IIIu, and Compound IIIx of Table 1 below were obtained, respectively.

(2) 2-브로모-4'-메톡시프로피오페논(화합물IIIe)(2) 2-bromo-4'-methoxypropiophenone (Compound IIIe)

4'-메톡시프로피오페논 32.84 g (0.2mol)과 CuBr2 89.34 g (0.4mol)에 디옥산 450 ml를 적가한 후, 6 시간 동안 가열 환류하였다. 실온으로 냉각시켜 디옥산을 제거 한 후, 물을 가하고 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻은 유기층을 건조 및 농축하고, n-헥산으로 재결정하여, 미색 고체의 생성물 2-브로모-4'-메톡시프로피오페논(IIIe) 48.62 g을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 1의 화합물 IIIy 를 얻었다.To 32.84 g (0.2 mol) of 4'-methoxypropiophenone and 89.34 g (0.4 mol) of CuBr2 were added dropwise 450 ml of dioxane, followed by heating to reflux for 6 hours. After cooling to room temperature to remove dioxane, water was added and the organic layer obtained by extraction 2-3 times with ethyl acetate was dried and concentrated, and recrystallized with n-hexane to give the product 2-bromo-4'- as an off-white solid. 48.62 g of methoxypropiophenone (IIIe) were obtained. In the same manner, compound IIIy of Table 1 was obtained.

(3) 2-브로모-1-(4'-클로로페닐)-3-메틸-1-부타논(화합물IIIm)(3) 2-bromo-1- (4'-chlorophenyl) -3-methyl-1-butanone (compound IIIm)

클로로벤젠 1.02 ml (10 mmol)에 카본디설파이드 14 ml를 적가하고, 알루미늄(III)클로라이드 1.6 g (12 mmol)을 가하여 가열 환류하였다. 여기에 이소바레릴 클로라이드 1.46 ml(10 mmol)를 카본디설피드 2 ml에 녹인 용액을 약 30분 동안 천천히 첨가하고, 6 시간 동안 가열 한 후, 실온으로 냉각시켜 농축하였다. 얻어진 반응액에 1 M 염산 수용액을 가하고, 디에틸에테르로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 10% 수산화나트륨 수용액으로 세척, 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체의 생성물 1-(4'-클로로페닐)-3-메틸-1-부타논 1.85 g을 얻었다.14 ml of carbon disulfide was added dropwise to 1.02 ml (10 mmol) of chlorobenzene, and 1.6 g (12 mmol) of aluminum (III) chloride was added thereto, followed by heating to reflux. A solution of 1.46 ml (10 mmol) of isovaleryl chloride in 2 ml of carbon disulfide was slowly added thereto for about 30 minutes, heated for 6 hours, and then cooled to room temperature and concentrated. An aqueous 1 M hydrochloric acid solution was added to the obtained reaction solution, and the organic layer obtained by extracting 2-3 times with diethyl ether was washed with 10% aqueous sodium hydroxide solution, dried and concentrated, and purified by column chromatography to give the product 1 as a white solid. 1.85 g of-(4'-chlorophenyl) -3-methyl-1-butanone were obtained.

¹H NMR (400 MHz DMSO-d₆) δ 7.89 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.81 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.36~2.20 (m, 1H), 0.99 (d, J = 6.4 Hz, 6H) ¹ H NMR (400 MHz DMSO-d ₆ ) δ 7.89 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.81 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.36 ~ 2.20 (m, 1H), 0.99 (d, J = 6.4 Hz, 6H)

상기에서 얻은 1-(4'-클로로페닐)-3-메틸-1-부타논 1.85 g (9.4 mmol)과 CuBr2 2.1 g (9.4 mmol)에 에틸아세테이트 14 ml 및 클로로포름 14 ml를 적가한 후, 2시간 동안 가열 환류하였다. 실온으로 냉각하여 고체를 제거한 후, 여액을 건조 및 농축하여, 백색 고체의 생성물 2-브로모-1-(4'-클로로페닐)-3-메틸-1-부타논(IIIm)을 얻었다.To 1.85 g (9.4 mmol) of 1- (4'-chlorophenyl) -3-methyl-1-butanone and 2.1 g (9.4 mmol) of CuBr2, 14 ml of ethyl acetate and 14 ml of chloroform were added dropwise. Heated to reflux for hours. After cooling to room temperature to remove the solid, the filtrate was dried and concentrated to give the product 2-bromo-1- (4'-chlorophenyl) -3-methyl-1-butanone (IIIm) as a white solid.

(4) 2-브로모-4'-페녹시프로피오페논(화합물 IIIj)(4) 2-bromo-4'-phenoxypropiophenone (Compound IIIj)

페놀 13.2 ml (150 mmol), 탄산칼륨(K₂CO₃) 16.6 g (120 mmol) 및 4'-플루오로프로피오페논 19.4 ml (140 mmol)에 디메틸아닐린 100 ml를 적가하여, 4 시간 동안 가열 환류하였다. 실온으로 냉각하여 물을 가한 후, 디에틸에테르로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축하고, 칼럼크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체의 생성물 4'-페녹시프로피오페논 27.6 g 을 얻었다.100 ml of dimethylaniline was added dropwise to 13.2 ml (150 mmol) of phenol, 16.6 g (120 mmol) of potassium carbonate (K ₂ CO ₃ ) and 19.4 ml (140 mmol) of 4'-fluoropropiophenone, and heated for 4 hours. It was refluxed. After cooling to room temperature and adding water, the organic layer obtained by extraction 2-3 times with diethyl ether was dried and concentrated, purified by column chromatography to obtain 27.6 g of a product 4'-phenoxypropiophenone as a white solid. .

¹H NMR (400 MHz DMSO) δ 7.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.49∼7.43 (m, 2H), 7.28~7.22 (m, 1H), 7.15~7.10 (m, 2H), 7.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.00 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.07 (t, J = 6.8 Hz, 3H) ¹ H NMR (400 MHz DMSO) δ 7.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.49-7.43 (m, 2H), 7.28-7.22 (m, 1H), 7.15-7.10 (m, 2H), 7.04 ( d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.00 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.07 (t, J = 6.8 Hz, 3H)

디에틸에테르 20 ml에 상기와 같이 얻어진 4'-페녹시프로피오페논 11.3 g (50mmol)과 알루미늄(III)클로리드 50 mg (0.4 mmol)을 첨가하고, 0℃로 냉각시킨 후 브롬을 천천히 적가하였다. 동일 온도에서 3시간 동안 교반한 후, 물을 가하고 디에틸에테르로 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축하였다. n-헥산으로 재결정하여 2-브로모-4'-페녹시프로피오페논(IIIj)을 얻었다.11.3 g (50 mmol) of 4'-phenoxypropiophenone obtained above and 50 mg (0.4 mmol) of aluminum (III) chloride were added to 20 ml of diethyl ether, and the mixture was cooled to 0 ° C and slowly added dropwise bromine. It was. After stirring for 3 hours at the same temperature, water was added and the organic layer obtained by extraction with diethyl ether was dried and concentrated. Recrystallization with n-hexane afforded 2-bromo-4'-phenoxypropiophenone (IIIj).

상기 실시예 3에서 얻어진 알파-브로모케톤계 화합물 IIId 내지 IIIy의 분석결과를 다음의 표 1에 나타내었다.The analysis results of the alpha-bromoketone compounds IIId to IIIy obtained in Example 3 are shown in Table 1 below.

표 1Table 1

또한, 출발물질 IV를 다음의 반응식 5에 의하여 제조하였다:In addition, starting material IV was prepared by the following scheme 5:

반응식 5Scheme 5

실시예 4: 알파-히드록시케톤계(화합물 V) 화합물의 제조Example 4 Preparation of Alpha-Hydroxyketone (Compound V) Compound

(1) 4,4'-디클로로벤조인(Vv)의 제조(1) Preparation of 4,4'-dichlorobenzoin (Vv)

클로로벤즈알데히드 14 g (0.1 mol)에 에틸알콜 120 ml를 적가한 후, 여기에 물 10 ml에 녹인 시안화칼륨(KCN) 14.98 g (0.23 mol) 용액을 천천히 가하여 12 시간동안 가열 환류하였다. 실온으로 냉각하여 물을 가한 후, 여과 및 건조하고 재결정 또는 칼럼크로마토그래피로 정제하여, 연한 노란색 고체의 생성물 4,4'-디클로로벤조인(Vv)을 얻었다.120 ml of ethyl alcohol was added dropwise to 14 g (0.1 mol) of chlorobenzaldehyde, and then a solution of 14.98 g (0.23 mol) of potassium cyanide (KCN) dissolved in 10 ml of water was slowly added thereto, followed by heating to reflux for 12 hours. After cooling to room temperature, water was added, followed by filtration and drying and purification by recrystallization or column chromatography to give the product 4,4'-dichlorobenzoin (Vv) as a pale yellow solid.

(2) 2-히드록시-2-페닐-(4-메톡시)아세토페논(Vx)의 제조(2) Preparation of 2-hydroxy-2-phenyl- (4-methoxy) acetophenone (Vx)

벤조인 2.12 g (10 mmol)에 에틸알콜 50 ml 가하여 녹인 용액에 아니즈알데히드 1.36 g (2 mmol)와 포화 시안화칼륨(KCN) 수용액 30 ml를 첨가한 후, 가열 환류하여 3시간 동안 교반하였다. 상기 반응액에 물을 가하고 에틸아세테이트로 2 내지 3회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축시킨 후, 칼럼크로마토그래피로 정제하여 연한, 노란색 고체의 생성물 2-히드록시-2-페닐-(4-메톡시)아세토페논(Vx)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 2의 화합물 Vq 및 Vr을 각각 얻었다.50 ml of ethyl alcohol was added to 2.12 g (10 mmol) of benzoin, and 1.36 g (2 mmol) of anisealdehyde and 30 ml of saturated potassium cyanide (KCN) solution were added thereto, and the mixture was heated to reflux and stirred for 3 hours. Water was added to the reaction solution, and the organic layer obtained by extraction with ethyl acetate two to three times was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give the product as a pale, yellow solid 2-hydroxy-2-phenyl- (4-meth). Methoxy) acetophenone (Vx) was obtained. In the same manner, the compounds Vq and Vr in Table 2 were obtained, respectively.

상기 실시예 4에서 얻어진 알파-히드록시케톤계 화합물 Vv, Vx, Vq 및 Vr의 분석 결과를 다음의 표 2에 나타내었다.The analysis results of the alpha-hydroxy ketone compounds Vv, Vx, Vq and Vr obtained in Example 4 are shown in Table 2 below.

표 2TABLE 2

실시예 5: 2-아미노-3-푸로니트릴계 화합물(화합물 IV)의 제조Example 5: Preparation of 2-amino-3-furonitrile compound (Compound IV)

(1) 2-아미노-3-시아노-5-(4-클로로페닐)푸란(IVa)의 제조(1) Preparation of 2-amino-3-cyano-5- (4-chlorophenyl) furan (IVa)

상기 실시예 3에서 얻어진 2-브로모-4'-클로로아세토페논(IIIa) 11.67 g (50 mmol)과 말로노나이트릴(CH₂(CN)₂) 3.3 g (50 mmol)에 디메틸포름아미드(DMF) 20 ml를 적가한 후, 0℃로 냉각하고, 디에틸아민(Et₂NH) 15.5 ml (150 mmol)를 약 30 분간 천천히 가하였다. 이 때 반응액의 온도를 40℃를 넘지 않도록 하였다. 그리고 나서, 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 물 60 ml를 가하여 여과하고, 물과 n-헥산으로 충분히 세척한 후, 건조하였다. 에틸알콜로 재결정하여 황갈색 고체의 생성물 2-아미노-3-시아노-5-(4-클로로페닐)푸란 (IVa)을 얻었다. 동일한 방법으로 화합물 다음의 표 3의 화합물 IVb 내지 IVp 및 화합물 IVs 내지 IVu, IVx, IVy를 각각 얻었다.In 11.67 g (50 mmol) of 2-bromo-4'-chloroacetophenone (IIIa) and 3.3 g (50 mmol) of malononitrile (CH ₂ (CN) ₂ ) obtained in Example 3, dimethylformamide ( DMF) 20 ml was added dropwise, cooled to 0 ° C., and 15.5 ml (150 mmol) of diethylamine (Et ₂ NH) were added slowly for about 30 minutes. At this time, the temperature of the reaction solution was set not to exceed 40 degreeC. Then, after stirring at room temperature for 3 hours, 60 ml of water was added thereto, filtered, washed well with water and n-hexane, and dried. Recrystallization with ethyl alcohol gave the product 2-amino-3-cyano-5- (4-chlorophenyl) furan (IVa) as a tan solid. Compounds IVb to IVp and Compounds IVs to IVu, IVx, and IVy in Table 3 below were obtained in the same manner.

(2) 2-아미노-3-시아노-4,5-디(4-클로로페닐)푸란(IVv)의 제조(2) Preparation of 2-amino-3-cyano-4,5-di (4-chlorophenyl) furan (IVv)

상기 실시예 4에서 얻어진 4,4'-디클로로벤조인(Vv) 7g (25 mmole)과 말로노니트릴 1.98 g (30 mmol)에 디메틸포름아미드(DMF) 15 ml를 가한 후, 0℃로 냉각하여 디에틸아민 100 mmol을 약 30 분간 천천히 적가하였다. 이때 반응액의 온도가 40℃를 넘지 않도록 하였다. 실온에서 18 시간 동안 교반한 후, 물 100 ml를 가하여 여과하고, 물과 n-헥산으로 충분히 세척한 후, 건조하였다. 그리고 난 후, 디에틸에테르로 재결정하여, 황갈색 고체의 생성물 2-아미노-3-시아노-4,5-디(4-클로로페닐)푸란(IVv)을 얻었다. 동일한 방법으로 아래의 표 3의 화합물 IVq, IVr 및 IVw를 각각 얻었다.15 g of dimethylformamide (DMF) was added to 7 g (25 mmole) of 4,4'-dichlorobenzoin (Vv) and 1.98 g (30 mmol) of malononitrile obtained in Example 4, followed by cooling to 0 ° C. 100 mmol of diethylamine was slowly added dropwise for about 30 minutes. At this time, the temperature of the reaction solution did not exceed 40 degreeC. After stirring for 18 hours at room temperature, 100 ml of water was added thereto, filtered, washed well with water and n-hexane, and dried. Then, it recrystallized with diethyl ether, and the product 2-amino-3-cyano-4,5-di (4-chlorophenyl) furan (IVv) of a tan solid was obtained. In the same manner, compounds IVq, IVr, and IVw of Table 3 were obtained, respectively.

상기에서 얻은 2-아미노-3-푸로니트릴계 화합물 IVa 내지 IVy의 분석결과를 다음의 표 3에 나타내었다.The analysis results of the 2-amino-3-furonitrile-based compounds IVa to IVy obtained above are shown in Table 3 below.

표 3TABLE 3

상기 실시예 5에서 얻어진 화합물 IV를 출발물질로 하여 다음의 반응식 6과 같이 4-아미노 푸로피리미딘계 화합물 VI 및 4-클로로 푸로피리미딘계 화합물 VII를 제조하였다:Using Compound IV obtained in Example 5 as a starting material, 4-amino furypyrimidine-based compound VI and 4-chloro-pyropyrimidine-based compound VII were prepared as in Scheme 6 below:

반응식 6Scheme 6

실시예 6: 4-아미노 푸로피리미딘계 화합물 4-아미노-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIa)의 제조Example 6 Preparation of 4-Amino Furopyrimidine Compound 4-Amino-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIa)

상기 실시예 5에서 얻어진 2-아미노-3-시아노-5-(4-클로로페닐)푸란(IVa) 4.37 g (20 mmol)에 포름아미드 20 ml를 적가하여 12 시간 동안 가열 환류한 후, 실온으로 냉각하였다. 여기에 물 100 ml를 가하고, 생성된 고체를 여과하여, 물과 n-헥산으로 충분히 세척한 후 건조하였다. 그리고 나서, 아세톤과 에틸알콜로 재결정하여 갈색 고체의 생성물 4-아미노-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIa)을 얻었다. 동일한 방법으로 다음의 표 4의 화합물 VIb 내지 VIy를 각각 얻었다.To 4.37 g (20 mmol) of 2-amino-3-cyano-5- (4-chlorophenyl) furan (IVa) obtained in Example 5, 20 ml of formamide was added dropwise and heated to reflux for 12 hours. Cooled to. 100 ml of water was added thereto, and the resulting solid was filtered, washed well with water and n-hexane, and dried. Then recrystallized with acetone and ethyl alcohol to give the product 4-amino-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIa) as a brown solid. In the same manner, the following compounds VIb to VIy of Table 4 were obtained, respectively.

상기 실시예 5에서 얻어진 2-아미노-3-시아노-5-(4-클로로페닐)푸란(IVa) 4.37g (20 mmol)에 포름아미드 20 ml를 적가하여 12 시간 동안 가열 환류한 후, 실온으로 냉각하였다. 여기에 물 100 ml를 가하고, 생성된 고체를 여과하여, 물과 n-헥산으로 충분히 세척한 후 건조하였다. 그리고 나서, 아세톤과 에틸알콜로 재결정하여 갈색 고체의 생성물 4-아미노-6-(4-클로로페닐)vn로[2,3,d]피리미딘(VIa)을 얻었다. 동일한 방법으로 다음의 표 4의 화합물 VIb 내지 VIy를 각각 얻었다.20 ml of formamide was added dropwise to 4.37 g (20 mmol) of 2-amino-3-cyano-5- (4-chlorophenyl) furan (IVa) obtained in Example 5, followed by heating to reflux for 12 hours. Cooled to. 100 ml of water was added thereto, and the resulting solid was filtered, washed well with water and n-hexane, and dried. Then, recrystallization with acetone and ethyl alcohol to give the product as a brown solid 4-amino-6- (4-chlorophenyl) vn [2,3, d] pyrimidine (VIa). In the same manner, the following compounds VIb to VIy of Table 4 were obtained, respectively.

상기와 같이 얻어진 4-아미노 푸로피리미딘계 화합물 VIa 내지 VIy의 분석결과를 다음의 표 4에 나타내었다:The analysis results of 4-amino furypyrimidine-based compounds VIa to VIy obtained as described above are shown in Table 4 below:

표 4Table 4

실시예 7: 4-클로로 푸로피리미딘계 화합물 4-클로로-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIIa)의 제조Example 7 Preparation of 4-Chloro-pyropyrimidine Compound 4-Chloro-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIIa)

상기 실시예 6에서 얻어진 4-아미노-6-(4-클로로페닐)-푸로[2,3,d]피리미딘(VIa) 7.37g (30 mmol)에 클로로포름 50 ml를 적가하고, 이소아밀니트라이트 8.6 ml (65.1 mmol)을 첨가하여, 14 시간 동안 가열 환류하였다. 그리고 나서, 실온으로 냉각하여 클로로포름을 감압 하에서 제거하고, 칼럼크로마토그래피로 정제하여 노란색 고체의 생성물 4-클로로-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIIa)을 얻었다. 동일한 방법으로 아래의 표 5의 화합물 VIIb 내지 VIIy를 각각 얻었다.50 ml of chloroform was added dropwise to 7.37 g (30 mmol) of 4-amino-6- (4-chlorophenyl) -furo [2,3, d] pyrimidine (VIa) obtained in Example 6, and isoamylnitrite 8.6 ml (65.1 mmol) were added and heated to reflux for 14 hours. Then, cooled to room temperature, chloroform was removed under reduced pressure and purified by column chromatography to give the product 4-chloro-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIIa) as a yellow solid. Got it. In the same manner, the compounds VIIb to VIIy of Table 5 below were obtained, respectively.

상기와 같이 얻어진 4-클로로 푸로피리미딘계 화합물 VIIa 내지 VIIy의 분석결과를 다음의 표 5에 나타내었다.The analysis results of the 4-chlorofuropyrimidine-based compounds VIIa to VIIy obtained as described above are shown in Table 5 below.

표 5Table 5

실시예 8: 4,5,6-치환 푸로피리미딘계 화합물의 제조Example 8: Preparation of 4,5,6-substituted furopyrimidine-based compound

상기 실시예 6 또는 7에서 얻어진 화합물 VI 또는 VII을 출발물질로 사용하여 본 발명의 화합물 푸로피리미딘계 화합물을 제조하였다.Compound Puropyrimidine-based compound of the present invention was prepared using compound VI or VII obtained in Example 6 or 7 as a starting material.

반응식 7Scheme 7

(1) 4-아닐리노-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(5)의 제조(1) Preparation of 4-anilino-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (5)

4-클로로-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIIa) 79.5 mg (0.3 mmol)과 아닐린 55.9 mg (0.6 mmol)에 n-부틸알콜(또는 에틸알콜 또는 이소프로필알콜) 2 ml를 적가하고, 4 시간 동안 가열 환류한 후, 용매를 제거하였다.79.5 mg (0.3 mmol) of 4-chloro-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIIa) and 55.9 mg (0.6 mmol) of aniline are n-butyl alcohol (or ethyl alcohol or iso Propyl alcohol) 2 ml was added dropwise, heated to reflux for 4 hours, and then the solvent was removed.

디메틸술폭사이드 1 ml에 녹인 후 물 15 ml에 가하여 여과한 후 물, n-헥산으로 충분히 세척, 건조하여 미색 고체 생성물 4-아닐리노-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(5)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 6의 화합물 6 내지 64, 85, 89, 91 내지 93 및 107 내지 111, 118 내지 122, 127, 132를 각각 얻었다.Dissolved in 1 ml of dimethyl sulfoxide, added to 15 ml of water, filtered, washed thoroughly with water and n-hexane and dried to give an off-white solid product 4-anilino-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d ] Pyrimidine (5) was obtained. In the same manner, the compounds 6 to 64, 85, 89, 91 to 93 and 107 to 111, 118 to 122, 127 and 132 of Table 6 below were obtained, respectively.

(2) 4-(4-메톡시벤조일아미노)-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(66)의 제조(2) Preparation of 4- (4-methoxybenzoylamino) -6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (66)

실시예 6에서 제조한 4-아미노-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIa) 245.66 mg (1 mmol)에 피리딘 1 ml 및 4-메톡시벤조일 클로라이드 511.8 mg (3 mmol)을 가하여 2 시간 동안 가열 환류한 후, 감압 하에서 피리딘을 제거하였다. 1N 수산화나트륨 수용액을 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 소금물로 세척, 건조 및 농축시킨 후, 칼럼크로마토그래피로 정제하여, 갈색 고체 생성물 4-(4-메톡시벤조일아미노)-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(66)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 6의 화합물 65, 및 67 내지 73을 각각 얻었다.To 245.66 mg (1 mmol) of 4-amino-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIa) prepared in Example 6, 1 ml of pyridine and 511.8 mg of 4-methoxybenzoyl chloride (3 mmol) was added thereto, heated to reflux for 2 hours, and then pyridine was removed under reduced pressure. 1N aqueous sodium hydroxide solution was added, the organic layer obtained by extraction with ethyl acetate two to three times was washed with brine, dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give a brown solid product 4- (4-methoxybenzoylamino)- 6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (66) was obtained. In the same manner, the compounds 65 in Table 6 and 67 to 73 were obtained, respectively.

(3) 4-(3-메톡시페녹시)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(74)의 제조(3) Preparation of 4- (3-methoxyphenoxy) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (74)

3-메톡시페놀 37.2 mg (0.3 mmol)에 테트라히드로푸란(THF) 2 ml를 적가하고 소듐하이드리드(60％ NaH) 24 mg (0.6 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 약 10분 동안 교반하였다. 반응용액에 실시예 7에서 제조한 4-클로로-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIId) 0.3 mmol을 가하고, 실온에서 2 시간동안 교반한 후, 냉각하여 물 10 ml를 천천히 적가하였다. 생성된 고체를 여과하고 충분한 물과 n-헥산으로 세척 및 건조하여, 갈색 고체 생성물 4-(3-메톡시페녹시)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(74)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 6의 화합물 75 내지 78, 126을 각각 얻었다.2 ml of tetrahydrofuran (THF) was added dropwise to 37.2 mg (0.3 mmol) of 3-methoxyphenol and 24 mg (0.6 mmol) of sodium hydride (60% NaH) were added, followed by stirring at room temperature for about 10 minutes. . 0.3 mmol of 4-chloro-5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIId) prepared in Example 7 was added to the reaction solution, which was then stirred at room temperature for 2 hours. After cooling, 10 ml of water was slowly added dropwise. The resulting solid was filtered, washed and dried with sufficient water and n-hexane to give the brown solid product 4- (3-methoxyphenoxy) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (74) was obtained. In the same manner, the compounds 75 to 78 and 126 of Table 6 were obtained, respectively.

(4) 4-(3-히드록시아닐리노)-5,6-디(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(90)의 제조(4) Preparation of 4- (3-hydroxyanilino) -5,6-di (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (90)

상기에서 제조된 4-(3-히드록시아닐리노)-5,6-디(4-메톡시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(89) 150 mg (0.31 mmol)과 피리딘 염화물 752 mg (6.51 mmol)의 혼합물을 210℃에서 3 시간 동안 가열 환류하였다. 상기 반응물에 물을 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피로 정제하여, 갈색 고체 생성물 4-(3-히드록시아닐리노)-5,6-디(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(90) 15 mg을 얻었다.150 mg (0.31 mmol) of 4- (3-hydroxyanilino) -5,6-di (4-methoxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (89) prepared above and pyridine chloride 752 A mixture of mg (6.51 mmol) was heated to reflux at 210 ° C. for 3 hours. Water was added to the reaction product, the organic layer obtained by extraction with ethyl acetate two to three times was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give a brown solid product 4- (3-hydroxyanilino) -5,6- 15 mg of di (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (90) were obtained.

(5) 4-(2-피리딜아미노)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(96)의 제조(5) Preparation of 4- (2-pyridylamino) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (96)

상기 실시예 7에서 제조된 4-클로로-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIId) 265.1 mg (1 mmol)과 2-아미노피리딘 141.17 mg (1.5 mmol)을 디메틸포름아미드 3 ml에 녹인 혼합물을 0℃로 냉각하여 소듐하이드리드(60％ NaH) 80 mg (2 mmol)를 첨가한 후, 실온에서 3 내지 8 시간동안 교반하였다. 상기 반응액에 포화 염화암모늄(NH4Cl) 수용액을 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻은 유기층을 건조 및 농축시킨 후, 칼럼크로마토그래피로 정제하여, 갈색 고체 생성물 4-(2-피리딜아미노)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(96)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 6의 화합물 94, 95, 및 97 내지 106, 116 내지 117, 123, 125, 129 내지 131을 각각 얻었다.265.1 mg (1 mmol) of 4-chloro-5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIId) prepared in Example 7 and 141.17 mg of 2-aminopyridine ( 1.5 mmol) was dissolved in 3 ml of dimethylformamide. The mixture was cooled to 0 ° C., and 80 mg (2 mmol) of sodium hydride (60% NaH) was added thereto, followed by stirring at room temperature for 3 to 8 hours. Aqueous solution of saturated ammonium chloride (NH 4 Cl) was added to the reaction solution, and the organic layer obtained by extracting with ethyl acetate two to three times was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give a brown solid product 4- (2-pyridylamino. ) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (96) was obtained. In the same manner, the compounds 94, 95, and 97 to 106, 116 to 117, 123, 125, and 129 to 131 of Table 6 were obtained, respectively.

(6) 4-(트란스-4-히드록시시클로헥실아미노)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(113)의 제조(6) Preparation of 4- (trans-4-hydroxycyclohexylamino) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (113)

상기 실시예 7에서 제조된 4-클로로-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIId) 265.1 mg (1 mmol)과 트란스-4-아미노시클로헥산올 염화물 303.3 mg (2 mmol)을 n-부틸알콜 3 ml에 녹인 혼합물에 트리에틸아민(Et₃NH) 2.2 mmol을 첨가한 후, 가열 환류하여, 3 내지 12 시간동안 교반하였다. 상기 반응액에 포화 염화암모늄(NH4Cl) 수용액을 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻은 유기층을 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피로 정제하여, 4-(트란스-4-히드록시시클로헥실아미노)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(113)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 6의 화합물 112, 114 및 115를 각각 얻었다.265.1 mg (1 mmol) of 4-chloro-5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIId) prepared in Example 7 and trans-4-aminocyclohexane To a mixture of 303.3 mg (2 mmol) of all chloride in 3 ml of n-butyl alcohol was added 2.2 mmol of triethylamine (Et ₃ NH), followed by heating to reflux and stirring for 3 to 12 hours. Aqueous solution of saturated ammonium chloride (NH 4 Cl) was added to the reaction solution, the organic layer obtained by extracting with ethyl acetate two to three times was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to obtain 4- (trans-4-hydroxycyclohexyl. Amino) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (113) was obtained. In the same manner, the compounds 112, 114, and 115 in Table 6 were obtained, respectively.

(7) 4-(3-히드록시페녹시)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(79)의 제조(7) Preparation of 4- (3-hydroxyphenoxy) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (79)

상기에서 제조된 4-(3-메톡시페녹시)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(74) 366.86 mg (1 mmol)에 디클로로메탄(CH₂Cl₂) 5 ml를 가한 후, -78℃로 냉각시키고, BBr 0.25 ml(1M in 디클로로메탄)를 천천히 적가하였다. 실온에서 12 시간 교반한 후, 포화탄산수소나트륨(Na2HCO3) 수용액에 천천히 가하여, 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻은 유기층을 소금물로 세척하고 건조 및 농축시킨 후, 칼럼크로마토그래피로 정제하여, 4-(3-히드록시페녹시)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(79)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 6의 화합물 19, 69, 27, 25, 22, 59, 62, 123 및 127을 사용하여 화합물 80 내지 84, 86, 87, 124, 128을 각각 얻었다.In 366.86 mg (1 mmol) of 4- (3-methoxyphenoxy) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (74) prepared above, dichloromethane ( 5 ml of CH ₂ Cl ₂ ) were added, cooled to −78 ° C., and 0.25 ml of BBr (1M in dichloromethane) was slowly added dropwise. After stirring for 12 hours at room temperature, slowly added to saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (Na2HCO3) solution, the organic layer obtained by extraction 2-3 times with ethyl acetate was washed with brine, dried and concentrated, and purified by column chromatography, 4 -(3-hydroxyphenoxy) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (79) was obtained. In the same manner, compounds 80 to 84, 86, 87, 124, and 128 were obtained using the compounds 19, 69, 27, 25, 22, 59, 62, 123, and 127 in Table 6 below.

상기에서 얻은 4,5,6-치환 푸로피리미딘계 화합물의 분석결과를 아래의 표 6-1 내지 6-12에 나타내었다.The analysis results of the 4,5,6-substituted furopyrimidine-based compound obtained above are shown in Tables 6-1 to 6-12 below.

표 6-1Table 6-1

표 6-2Table 6-2

표 6-3Table 6-3

표 6-4Table 6-4

표 6-5Table 6-5

표 6-6Table 6-6

표 6-7Table 6-7

표 6-8Table 6-8

표 6-9Table 6-9

표 6-10Table 6-10

표 6-11Table 6-11

표 6-12Table 6-12

실시예 9Example 9

상기와 같이 얻어진 화합물 VII를 이용하여, 예컨대, 다음과 같은 반응식 8에 의하여, 본 발명의 화합물의 전구체인 화합물 A를 제조할 수 있다.Using Compound VII obtained as described above, Compound A, which is a precursor of the compound of the present invention, can be prepared, for example, by Scheme 8 below.

반응식 8Scheme 8

실시예 9-1: 4-클로로-5-메틸-6-(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIII-2)의 제조Example 9-1 Preparation of 4-chloro-5-methyl-6- (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIII-2)

상기 실시예 7에서 얻어진 4-클로로-5-메틸-6-(4-메톡시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIIe) 1.268 g (4.6 mmol)에 디클로로메탄 10 ml를 가한 후, -78℃로 냉각시키고, BBr 13.85 ml (1M in 디클로로메탄)를 천천히 적가하였다. 그리고 나서, 실온에서 12 시간동안 교반한 후, 포화 탄산수소나트륨(NaHCO3) 수용액을 천천히 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 소금물로 세척하고, 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하여, 노란색 고체 생성물 4-클로로-5-메틸-6-(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIII-2: 상기 반응식 8의 화합물 VIII 중 R2=메틸인 경우에 해당)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 7의 화합물 VIII-1, VIII-3 내지 VIII-5를 각각 얻었다.10 ml of dichloromethane was added to 1.268 g (4.6 mmol) of 4-chloro-5-methyl-6- (4-methoxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIIe) obtained in Example 7. Cooled to −78 ° C. and 13.85 ml (1M in dichloromethane) BBr was slowly added dropwise. Then, after stirring for 12 hours at room temperature, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (NaHCO3) solution was slowly added, and the organic layer obtained by extraction with ethyl acetate two or three times was washed with brine, dried and concentrated, and then column chromatography. Purified by, yellow solid product 4-chloro-5-methyl-6- (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIII-2: R 2 = methyl in compound VIII of Scheme 8 above) Corresponding to). In the same manner, the compounds VIII-1, VIII-3 to VIII-5 shown in Table 7 below were obtained.

실시예 9-2: 4-클로로-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(IX')의 제조Example 9-2 Preparation of 4-chloro-5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (IX ')

(a) 상기 실시예 9-1에서 얻은 4-클로로-5-메틸-6-(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIII-2) 859 mg (3.3 mmol), 세슘카보네이트(Cs2CO3) 2.37 g (7.26 mmol) 및 디메틸포름아미드 5 ml 혼합물에 2-클로로에틸 파라-톨루엔술포네이트 1.32 ml (7.26 mmol)를 첨가한 후, 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 상기 반응액에 물 20 ml를 가하고 여과한 후, 에틸아세테아트로 세척하였다. 여액을 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하여 흰색 고체 생성물 4-클로로-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(상기 반응식 8의 화합물 IX': 반응식 1의 화합물 IX 중 n'=2인 경우에 해당) 205 mg을 얻었다. (수율: 19%)(a) 859 mg (3.3 mmol) of 4-chloro-5-methyl-6- (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIII-2) obtained in Example 9-1, To the mixture of 2.37 g (7.26 mmol) cesium carbonate (Cs 2 CO 3) and 5 ml of dimethylformamide were added 1.32 ml (7.26 mmol) of 2-chloroethyl para-toluenesulfonate, followed by stirring at room temperature for 2 hours. 20 ml of water was added to the reaction solution, which was filtered and washed with ethyl acetate. The organic layer obtained by extracting the filtrate two to three times with ethyl acetate was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give a white solid product 4-chloro-5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) 205 mg of phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (compound IX 'of Scheme 8 in the case of n' = 2 in compound IX of Scheme 1) was obtained. (Yield 19%)

(b) 상기 실시예 9-1에서 얻은 4-클로로-5-메틸-6-(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIII-2) 130.34 mg (0.5 mmol), 트리페닐포스핀(PPh₃) 262.29mg (1 mmol) 및 벤젠(C₆H₆)/테트라히드로푸란(THF) 1/3 ml 혼합물에 2-클로로에틸알콜 0.067 ml (1 mmol)를 첨가한 후 0℃로 냉각시킨 후 약 10분동안 교반하였다. 상기 반응액에 디이소프로필 아조디카르복실레이트(DIAD) 0.097 ml (1 mmol)를 가하여 실온에서 12시간 동안 교반한다. 상기 반응액에 포화소금물(NaCl) 20 ml를 가하고 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하여 흰색 고체 생성물 4-클로로-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘[상기 반응식 8의 화합물 IX'(IX-2): 반응식 1의 화합물 IX 중 n'=2, R2=메틸인 경우에 해당] 148 mg을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 표 7의 화합물 IX-1, IX-3 내지 IX-5를 각각 얻었다.(b) 130.34 mg (0.5 mmol) of 4-chloro-5-methyl-6- (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIII-2) obtained in Example 9-1, To 262.29 mg (1 mmol) of triphenylphosphine (PPh ₃ ) and 1/3 ml of benzene (C ₆ H ₆ ) / tetrahydrofuran (THF) was added 0.067 ml (1 mmol) of 2-chloroethyl alcohol. After cooling to 0 ° C., it was stirred for about 10 minutes. To the reaction solution was added 0.097 ml (1 mmol) of diisopropyl azodicarboxylate (DIAD) and stirred at room temperature for 12 hours. 20 ml of saturated brine (NaCl) was added to the reaction solution, and the organic layer obtained by extraction with ethyl acetate two to three times was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to obtain a white solid product 4-chloro-5-methyl-6. -[4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine [Compound IX '(IX-2) of Scheme 8 above: n' = 2, R2 = in compound IX of Scheme 1: Corresponding to methyl] 148 mg. Compounds IX-1 and IX-3 to IX-5 shown in Table 7 below were obtained in the same manner.

표 7TABLE 7

실시예 9-3: 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(X')의 제조Example 9-3: of 4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (X ') Produce

상기 실시예 9-2에서 얻어진 4-클로로-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(IX-2) 79 mg (0.25 mmol)과 3-아미노페놀 53.5 mg (0.5 mmol)에 n-부틸알콜 2 ml를 가하여 4시간 동안 가열 환류하였다. 용매를 제거한 후, 물을 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축하였다. 그리고 나서, 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하여, 갈색 고체 생성물 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘[상기 반응식 8의 화합물 X'(X-2): 반응식 1의 화합물 X 중 n'=2, R2=메틸인 경우에 해당] 80 mg을 얻었다 (수율: 83%). 동일한 방법으로 하기의 표 8-1의 화합물 X-1, X-3 내지 X-7 각각 얻었다.79 mg (0.25 mmol) of 4-chloro-5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (IX-2) obtained in Example 9-2. 2 ml of n-butyl alcohol was added to 53.5 mg (0.5 mmol) of 3-aminophenol and heated to reflux for 4 hours. After the solvent was removed, water was added, and the organic layer obtained by extraction with ethyl acetate two to three times was dried and concentrated. Then, the residue was purified by column chromatography to give the brown solid product 4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d ] 80 mg of pyrimidine [Compound X '(X-2) in Scheme 8 when n' = 2 and R2 = methyl in Scheme 1] was obtained (yield: 83%). Compounds X-1 and X-3 to X-7 of Table 8-1 below were obtained in the same manner.

실시예 9-4: 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-{4-[2-(4-몰포리닐)에톡시]페닐}푸로[2,3,d]피리미딘(A-1)의 제조Example 9-4: 4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- {4- [2- (4-morpholinyl) ethoxy] phenyl} furo [2,3, d] pyri Preparation of Midine (A-1)

상기 실시예 9-3에서 얻어진 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(X-2) 19 mg (0.048 mmol)과 요오드화나트륨(NaI) 7 mg (0.046 mmol)에 과량의 몰포린 0.07 ml (0.8 mmol)를 첨가하고 90℃에서 24 시간동안 교반하였다. 상기 반응물에 포화탄산수소나트륨(Na2HCO3) 수용액을 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하여, 황색 고체 생성물 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-{4-[2-(4-몰포리닐)예톡시]페닐}푸로[2,3,d]피리미딘(A-2) 15 mg을 얻었다 (수율: 71 %). 동일한 방법으로 화합물 A-1, A-3 내지 A-17 각각 얻었다. 상기에서 얻은 화합물의 분석결과를 아래의 표 8-1 내지 8-3에 나타내었다.4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (X-) obtained in Example 9-3. 2) An excess of morpholine 0.07 ml (0.8 mmol) was added to 19 mg (0.048 mmol) and 7 mg (0.046 mmol) of sodium iodide (NaI), followed by stirring at 90 ° C. for 24 hours. Aqueous solution of saturated sodium hydrogen carbonate (Na2HCO3) was added to the reaction mixture, the organic layer obtained by extraction with ethyl acetate two to three times was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give a yellow solid product 4- (3-hydroxy). 15 mg of anilino) -5-methyl-6- {4- [2- (4-morpholinyl) ethoxy] phenyl} furo [2,3, d] pyrimidine (A-2) were obtained (yield: 71%). Compounds A-1 and A-3 to A-17 were obtained in the same manner. The analysis results of the compound obtained above are shown in Tables 8-1 to 8-3 below.

표 8-1Table 8-1

표 8-2Table 8-2

상기 실시예 9-3에서 얻어진 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(X-2) 19 mg (0.048 mmol)과 요오드화나트륨(NaI) 7 mg (0.046 mmol)에 과량의 모르포린 0.07 ml (0.8 mmol)를 첨가하고 90 ℃에서 24 시간동안 교반하였다. 상기 반응물에 포화 탄산수소나트륨(Na₂HCO₃) 수용액을 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하여, 황색 고체 생성물 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-4-[2-(4-몰포리닐)에톡시]페닐푸로[2,3,d]피리미딘(A-1) 15 mg을 얻었다. (수율 : 71 %) 동일한 방법으로 화합물 A-1, A-3 내지 A-17 각각 얻었다. 상기에서 얻은 화합물의 분석결과를 아래의 표 8-1 내지 8-3에 나타내었다.4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (X-) obtained in Example 9-3. 2) An excess of morpholine 0.07 ml (0.8 mmol) was added to 19 mg (0.048 mmol) and 7 mg (0.046 mmol) of sodium iodide (NaI), followed by stirring at 90 ° C. for 24 hours. Saturated sodium hydrogen carbonate (Na ₂ HCO ₃ ) to the reaction An aqueous solution was added, the organic layer obtained by extraction 2-3 times with ethyl acetate was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give a yellow solid product 4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- 15 mg of 4- [2- (4-morpholinyl) ethoxy] phenylfuro [2,3, d] pyrimidine (A-1) were obtained. (Yield: 71%) Compounds A-1 and A-3 to A-17 were obtained in the same manner. The analysis results of the compound obtained above are shown in Tables 8-1 to 8-3 below.

표 8-3Table 8-3

실시예 10Example 10

상기와 같이 얻어진 화합물 VIII을 이용하여, 예컨대, 다음과 같은 반응식 9에 의하여, 본 발명의 화합물의 전구체인 화합물 B를 제조할 수 있다.Using compound VIII obtained as described above, for example, Compound B, which is a precursor of the compound of the present invention, can be prepared by the following Scheme 9.

반응식 9Scheme 9

실시예 10-1: 4-클로로-5-메틸-6-[4-(메틸 2-아세톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(XV'-1)의 제조Example 10-1 Preparation of 4-chloro-5-methyl-6- [4- (methyl 2-acetoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (XV'-1)

상기 실시예 9-1에서 얻은 4-클로로-5-메틸-6-(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIII-2) 260.68 mg (1 mmol),세슘카보네이트(Cs₂CO₃) 716.8 g (2.2 mmol) 및 디메틸포름아미드 5 ml 혼합물에 메틸2-브로모아세토페논 336.5 mg (2.2 mmol)를 첨가한 후, 60℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 상기 반응액에 물 20 ml를 가하고 여과한 후, 에틸아세테아트로 세척하였다. 여액을 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축한 후, 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하여 흰색 고체 생성물 4-클로로-5-메틸-6-[4-(메틸 2-아세톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(상기 반응식 9의 화합물 XV': 반응식 1의 화합물 XV 중 m=1, R₂=메틸, R₆=메틸인 경우에 해당) 296 mg을 얻었다. (수율: 89 %) 동일한 방법으로 화합물 XV'-2(상기 반응식 9의 화합물 XV': 반응식 1의 화합물 XV 중 m=1, R₂=(4-클로로페닐), R₆=메틸인 경우에 해당)를 얻었다.260.68 mg (1 mmol) of 4-chloro-5-methyl-6- (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIII-2) obtained in Example 9-1, cesium carbonate ( To the mixture of 716.8 g (2.2 mmol) of Cs ₂ CO ₃ ) and 5 ml of dimethylformamide, 336.5 mg (2.2 mmol) of methyl2-bromoacetophenone was added, followed by stirring at 60 ° C. for 2 hours. 20 ml of water was added to the reaction solution, which was filtered and washed with ethyl acetate. The organic layer obtained by extracting the filtrate two to three times with ethyl acetate was dried and concentrated, and then purified by column chromatography to give a white solid product 4-chloro-5-methyl-6- [4- (methyl 2-acetoxy) 296 mg of phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (compound XV 'of Scheme 9 above) corresponds to the case of m = 1, R ₂ = methyl, R ₆ = methyl in compound XV of Scheme 1: (Yield: 89%) In the same manner, when the compound XV'-2 (compound XV 'of Scheme 9: m = 1, R ₂ = (4-chlorophenyl), R ₆ = methyl in compound XV of Scheme 1) Corresponding).

¹H NMR (400 MHz CDCl₃) δ (ppm) 8.68 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.72 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 2.61 (s, 3H) ¹ H NMR (400 MHz CDCl ₃ ) δ (ppm) 8.68 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.72 (s, 2H) , 3.84 (s, 3H), 2.61 (s, 3H)

화합물 XV'-2: ¹H NMR (400 MHz CDCl₃) δ (ppm) 8.66 (s, 1H), 7.51∼7.41 (m, 4H), 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.79 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.60 (s, 2H), 3.75 (s, 3H)Compound XV'-2: ¹ H NMR (400 MHz CDCl ₃ ) δ (ppm) 8.66 (s, 1H), 7.51-7.41 (m, 4H), 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.79 (d , J = 8.8 Hz, 2H), 4.60 (s, 2H), 3.75 (s, 3H)

실시예 10-2: 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-[4-(메틸 2-아세톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(XVI'-1)의 제조Example 10-2 4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- [4- (methyl 2-acetoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (XVI'-1 Manufacturing

상기 실시예 10-1에서 얻어진 4-클로로-5-메틸-6-[4-(메틸2-아세톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(XV'-1) 83.18 mg (0.25 mmol)과 3-아미노페놀 53.5 mg (0.5 mmol)에 n-부틸알콜 2 ml를 가하여 4시간 동안 가열 환류하였다. 용매를 제거한 후, 물을 가하고, 에틸아세테이트로 2 내지 3 회 추출하여 얻어진 유기층을 건조 및 농축하였다. 그리고 나서, 칼럼크로마토그래피에 의하여 정제하여, 갈색 고체 생성물 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-[4-(메틸2-아세톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(상기 반응식 9의 화합물 XVI': 반응식 1의 화합물 XVI 중 m=1, R₂=메틸, R₆=메틸인 경우에 해당) 73 mg을 얻었다. (수율 72%) 동일한 방법으로 화합물 XVI'-2(상기 반응식 9의 화합물 XVI': 반응식 1의 화합물 XVI 중 m=1, R₂=(4-클로로페닐), R₆=메틸인 경우에 해당)를 얻었다.83.18 mg (0.25) of 4-chloro-5-methyl-6- [4- (methyl2-acetoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (XV'-1) obtained in Example 10-1 2 ml of n-butyl alcohol was added to 53.5 mg (0.5 mmol) of 3-aminophenol and heated to reflux for 4 hours. After the solvent was removed, water was added, and the organic layer obtained by extraction with ethyl acetate two to three times was dried and concentrated. Then, the residue was purified by column chromatography to give the brown solid product 4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- [4- (methyl2-acetoxy) phenyl] furo [2,3, d ] 73 mg of pyrimidine (compound XVI 'of Scheme 9 above) corresponds to the case of m = 1, R ₂ = methyl, R ₆ = methyl in compound XVI of Scheme 1. (Yield 72%) Compound XVI'-2 (Compound XVI 'of Scheme 9: m = 1, R ₂ = (4-chlorophenyl), and R ₆ = methyl in Scheme 1 in the same manner) )

¹H NMR (400 MHz DMSO-d₆) δ (ppm) 9.43 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.26~7.00 (m, 5H), 6.52 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.90 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 2.60 (s, 3H) ¹ H NMR (400 MHz DMSO-d ₆ ) δ (ppm) 9.43 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.26 ~ 7.00 (m, 5H), 6.52 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.90 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 2.60 (s, 3H)

화합물 XVI'-2: ¹H NMR (400 MHz DMSO-d ₆) δ (ppm) 9.48 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.71~7.65 (m, 4H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.02∼6.97 (m, 3H), 6.90 (s, 1H), 6.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.84 (s, 2H), 3.70 (s, 3H)Compound XVI'-2: ¹ H NMR (400 MHz DMSO- d ₆ ) δ (ppm) 9.48 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.71-7.75 (m, 4H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.02-6.97 (m, 3H), 6.90 (s, 1H), 6.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.84 (s, 2H), 3.70 (s, 3H)

실시예 10-3: 4-(3-히드록시아닐리노)-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(카르복실릭메톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(XVI'-2)의 제조Example 10-3: 4- (3-hydroxyanilino) -5- (4-chlorophenyl) -6- [4- (carboxylic methoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine ( Preparation of XVI'-2)

상기 실시예 10-2에서 얻어진4-(3-히드록시아닐리노)-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(메틸 2-아세톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(XVI'-2) 24mg (0.047 mmol)에 테트라히드로푸란(THF) 0.5 ml를 적가하고 0℃에서 0.1N-LiOH 0.056 ml (0.056 mmol)를 천천히 적가한 후 실온에서 1시간 동안 교반한다. 상기 반응액에 물(1 ml)를 첨가하고 에틸아세테이트(1ml)로 2 내지 3회 세척 한 후 1N-염산수용액 0.061 ml (0.061 mmol)로 중화시켜 에틸아세테이트로 2 내지 3회 추출한다. 얻어진 용액을 건조, 농축하여 화합물 4-(3-히드록시아닐리노)-5-(4-클로로페닐)-6-[4-(카르복실릭메톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(XVII'-2) 21 mg(수율 99%)을 얻었다.(상기 반응식 9의 화합물 XVII': 반응식 1의 화합물 XVII 중 m=1, R2=(4-클로로페닐), R6=메틸인 경우에 해당) 동일한 방법으로 화합물 XVII'-1을 얻었다.4- (3-hydroxyanilino) -5- (4-chlorophenyl) -6- [4- (methyl 2-acetoxy) phenyl] furo [2,3, d] obtained in Example 10-2. 0.5 ml of tetrahydrofuran (THF) was added dropwise to 24 mg (0.047 mmol) of pyrimidine (XVI'-2), and 0.056 ml (0.056 mmol) of 0.1N-LiOH was slowly added dropwise at 0 ° C, followed by stirring at room temperature for 1 hour. . Water (1 ml) was added to the reaction solution, washed 2-3 times with ethyl acetate (1 ml), neutralized with 0.061 ml (0.061 mmol) of 1N hydrochloric acid solution, and extracted 2-3 times with ethyl acetate. The obtained solution was dried and concentrated to give compound 4- (3-hydroxyanilino) -5- (4-chlorophenyl) -6- [4- (carboxylic methoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyridine 21 mg (yield 99%) of midine (XVII'-2) were obtained. (Compound XVII 'of Scheme 9: when m = 1, R2 = (4-chlorophenyl), R6 = methyl in compound XVII of Scheme 1: Corresponding) Compound XVII'-1 was obtained by the same method.

¹H NMR (400 MHz DMSO-d ₆) δ (ppm) 9.50 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.70~7.64 (m, 4H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.01 (s. 1H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.44 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H) ¹ H NMR (400 MHz DMSO- d ₆ ) δ (ppm) 9.50 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.70-7.74 (m, 4H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.01 (s. 1H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.44 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H)

실시예 11Example 11

상기와 같이 얻어진 화합물 VII을 이용하여, 예컨대, 다음과 같은 반응식 10에 의하여, 본 발명의 화합물의 전구체인 화합물 XXIII을 제조할 수 있다.Using Compound VII obtained as described above, Compound XXIII, which is a precursor of the compound of the present invention, can be prepared, for example, by Scheme 10 below.

반응식 10Scheme 10

실시예 11-1: 4-클로로-5-브로모-6-(4-메톡시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(XVIII)의 제조Example 11-1 Preparation of 4-chloro-5-bromo-6- (4-methoxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (XVIII)

상기 실시예 7에서 얻어진 4-클로로-6-(4-메톡시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIIb) 380 mg (1.46 mmol)과 N-브로모숙신이미드 359.23 mg (1.53 mmol), α,α'-아조비스(이소브티로니트릴) 47.5 mg (0.146 mmol)에 카본테트라클로라이드 25 ml를 첨가한 후 12시간 동안 교반 환류한다. 실온으로 냉각시킨 후 농축하여 칼럼크로마토그래피 정제에 의해 4-클로로-5-브로모-6-(4-메톡시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(XVIII) 230 mg을 얻었다.(수율: 55 %)380 mg (1.46 mmol) of 4-chloro-6- (4-methoxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIIb) obtained in Example 7 and 359.23 mg (1.53) of N-bromosuccinimide mmol) and 25 ml of carbon tetrachloride were added to 47.5 mg (0.146 mmol) of α, α'-azobis (isobutyronitrile), followed by stirring under reflux for 12 hours. After cooling to room temperature, it was concentrated to give 230 mg of 4-chloro-5-bromo-6- (4-methoxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (XVIII) by column chromatography purification. Yield: 55%)

¹H NMR (400 MHz CDCl₃) δ (ppm) 8.73 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H) ¹ H NMR (400 MHz CDCl ₃ ) δ (ppm) 8.73 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H)

실시예 11-2: 4-클로로-5-브로모-6-(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIII-3)의 제조Example 11-2 Preparation of 4-chloro-5-bromo-6- (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIII-3)

상기 실시예 9-1과 동일하게 진행하여 4-클로로-5-브로모-6-(4-히드록시페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(VIII-3)을 얻었다.In the same manner as in Example 9-1, 4-chloro-5-bromo-6- (4-hydroxyphenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (VIII-3) was obtained.

상기에서 얻은 화합물의 분석결과를 상기 표 7에 나타내었다.The analysis results of the compound obtained above are shown in Table 7 above.

실시예 11-3: 4-(3-히드록시아닐리노)-5-브로모-6-{4-[2-(3-메틸피퍼리디닐)에톡시]페닐}푸로[2,3,d]피리미딘(A-12)의 제조Example 11-3 4- (3-hydroxyanilino) -5-bromo-6- {4- [2- (3-methylpiperidinyl) ethoxy] phenyl} furo [2,3, d ] Preparation of Pyrimidine (A-12)

상기 실시예 9-2, 실시예 9-3, 실시예 9-4를 순차적으로 진행하여 4-(3-히드록시아닐리노)-5-브로모-6-{4-[2-(3-메틸피퍼리디닐)예톡시]페닐}푸로[2,3,d]피리미딘(A-12)을 얻었다.Example 9-2, Example 9-3, and Example 9-4 were sequentially performed to form 4- (3-hydroxyanilino) -5-bromo-6- {4- [2- (3- Methylpiperidinyl) ethoxy] phenyl} furo [2,3, d] pyrimidine (A-12) was obtained.

상기에서 얻은 화합물의 분석결과를 상기 표 8-1 내지 표 8-2에 나타내었다.The analysis results of the compound obtained above are shown in Tables 8-1 to 8-2.

반응식 11Scheme 11

실시예 12Example 12

실시예 12-1: 4-클로로-5-브로모메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(IX-6)의 제조Example 12-1 Preparation of 4-chloro-5-bromomethyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (IX-6)

상기 실시예 9-1에서 얻어진 4-클로로-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(IX-2)를 사용하여 실시예 11-1과 동일하게 진행하였다.Example using 4-chloro-5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (IX-2) obtained in Example 9-1 Proceed as in 11-1.

¹H NMR (400 MHz CDCl₃) δ (ppm) 8.71 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.89 (s, 2H), 4.34 (t, J =6.0, 2H), 3.88 (t, J = 6.0, 2H) ¹ H NMR (400 MHz CDCl ₃ ) δ (ppm) 8.71 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.89 (s, 2H) , 4.34 (t, J = 6.0, 2H), 3.88 (t, J = 6.0, 2H)

실시예 12-2: 4-클로로-5-메톡시메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(IX-7)의 제조Example 12-2 Preparation of 4-chloro-5-methoxymethyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (IX-7)

상기 실시예 9-1에서 얻어진4-클로로-5-메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(IX-6) 160mg (0.04 mmol)에 메틸알콜 15 ml를 첨가한 후 6시간 동안 교반 환류한다. 상기 용액을 농축하여 칼럼크로마토그래피 정제에 의해 흰색 고체 4-클로로-5-메톡시메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(IX-7) 73mg (수율: 52 %)과 부 생성물로 4-메톡시-5-메톡시메틸-6-[4-(2-클로로에톡시)페닐]푸로[2,3,d]피리미딘(IX-7-1) 60 mg (수율: 43 %)을 각각 얻었다.160 mg (0.04 mmol) of 4-chloro-5-methyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (IX-6) obtained in Example 9-1. 15 ml of methyl alcohol was added thereto, followed by stirring under reflux for 6 hours. The solution was concentrated to give white solid 4-chloro-5-methoxymethyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (IX- by column chromatography purification. 7) 73 mg (Yield 52%) and 4-methoxy-5-methoxymethyl-6- [4- (2-chloroethoxy) phenyl] furo [2,3, d] pyrimidine (IX as side product -7-1) 60 mg (yield 43%) were obtained respectively.

화합물 IX-7: ¹H NMR (400 MHz CDCl₃) δ (ppm) 8.67 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.75 (s, 2H), 4.32 (t, J = 6.0, 2H), 3.87 (t, J = 6.0, 2H), 3.58 (s, 3H)Compound IX-7: ¹ H NMR (400 MHz CDCl ₃ ) δ (ppm) 8.67 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.75 (s, 2H), 4.32 (t, J = 6.0, 2H), 3.87 (t, J = 6.0, 2H), 3.58 (s, 3H)

화합물 IX-7-1: ¹H NMR (400 MHz CDCl₃) δ (ppm) 8.52 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.30 (t, J = 6.0, 2H), 4.17 (s, 3H), 3.86 (t, J = 6.0, 2H), 3.50 (s, 3H)Compound IX-7-1: ¹ H NMR (400 MHz CDCl ₃ ) δ (ppm) 8.52 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 4.70 (s, 2H), 4.30 (t, J = 6.0, 2H), 4.17 (s, 3H), 3.86 (t, J = 6.0, 2H), 3.50 (s, 3H)

실시예 12-3: 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메톡시메틸-6-{4-[2-(3-메틸피퍼리디닐)에톡시]페닐}푸로[2,3,d]피리미딘(A-13)의 제조Example 12-3: 4- (3-hydroxyanilino) -5-methoxymethyl-6- {4- [2- (3-methylpiperidinyl) ethoxy] phenyl} furo [2,3, d] Preparation of pyrimidine (A-13)

상기 실시예 9-3, 실시예 9-4를 순차적으로 진행하여 4-(3-히드록시아닐리노)-5-메톡시메틸-6-{4-[2-(3-메틸피퍼리디닐)에톡시]페닐}푸로[2,3,d]피리미딘(A-13)을 얻었다.Example 9-3 and Example 9-4 were sequentially carried out to form 4- (3-hydroxyanilino) -5-methoxymethyl-6- {4- [2- (3-methylpiperidinyl) Ethoxy] phenyl} furo [2,3, d] pyrimidine (A-13) was obtained.

상기에서 얻은 화합물의 분석결과를 상기 표 8-1 내지 표 8-2에 나타내었다.The analysis results of the compound obtained above are shown in Tables 8-1 to 8-2.

반응식 12Scheme 12

실시예 13: 2,4,5,6-치환 푸로피리미딘계 화합물의 제조Example 13: Preparation of 2,4,5,6-substituted furypyrimidine-based compound

실시예 13-1: 2-클로로메틸-4-클로로-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(XII-A)Example 13-1: 2-Chloromethyl-4-chloro-5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (XII-A)

상기 실시예 5에서 얻어진 2-아미노-3-시아노-5-(4-클로로페닐)푸란(IVd) 2.32g (10 mmol)을 디옥산 30 ml에 희석한 후 클로로아세토니트릴 0.69 ml(11 mmol)을 적가한다. 실온에서 염산 기체를 반응 용액에 6시간 동안 지속적으로 발생시키면서 교반한 후 12시간동안 방치한다. 반응용액을 물 100 ml에 가하여 생성된 고체를 여과하여 물, n-헥산으로 충분히 세척하여 건조하여 흰색 고체 2-클로로메틸-4-아미노-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(XI-A)을 544 mg 얻었다.(수율: 17%) 여액에 10% 암모니아수용액을 15 ml가하고 에틸아세테이트로 2~3회 추출하여 건조, 농축한 후 칼럼크로마토그래피로 정제하여 옅은 노란색 고체 2-클로로메틸-4-클로로-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(XII-A)을 2.09 g 얻었다. 동일한 방법으로 다음의 표 9의 화합물 XI-B, XI-C 및 XII-B 내지 XII-L을 각각 얻었다. 또한 R"가 수소인 경우는 상기 실시예 6 및 7을 순차적으로 진행하여 화합물 VI, 화합물 VII을 얻었다.2.32 g (10 mmol) of 2-amino-3-cyano-5- (4-chlorophenyl) furan (IVd) obtained in Example 5 was diluted in 30 ml of dioxane, followed by 0.69 ml (11 mmol) of chloroacetonitrile. Add). At room temperature, hydrochloric acid gas is continuously stirred for 6 hours in the reaction solution and then left for 12 hours. The reaction solution was added to 100 ml of water, and the resulting solid was filtered, washed sufficiently with water and n-hexane and dried to give a white solid 2-chloromethyl-4-amino-5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [ 544 mg of 2,3, d] pyrimidine (XI-A) was obtained. (Yield: 17%) To the filtrate, 15 ml of 10% aqueous ammonia solution was added, extracted with ethyl acetate two to three times, dried and concentrated, followed by column chromatography. Purification by chromatography gave 2.09 g of a pale yellow solid 2-chloromethyl-4-chloro-5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (XII-A). In the same manner, the following compounds XI-B, XI-C and XII-B to XII-L of Table 9 were obtained, respectively. In the case where R ″ is hydrogen, Examples 6 and 7 were sequentially performed to obtain Compound VI and Compound VII.

상기에서 얻은 화합물의 분석결과를 아래의 표 9에 나타내었다.The analysis results of the compound obtained above are shown in Table 9 below.

표 9Table 9

실시예 13-2: 2-클로로메틸-4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(141)Example 13-2: 2-Chloromethyl-4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (141)

실시예 13-1에서 얻어진 2-클로로메틸-4-클로로-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(XII-A) 163.8 mg (0.5 mmol)과 3-아미노페놀 109.13 mg (1 mmol)에 n-부틸알콜 3 ml를 적가하고, 4 시간 동안 가열 환류한 후, 용매를 제거하였다. 디메틸술폭사이드 1 ml에 녹인 후 물 20 ml에 가하여 여과한 후 물, n-헥산으로 충분히 세척, 건조하여 미색 고체 생성물 2-클로로메틸-4-(3-히드록시아닐리노)-5-메틸-6-(4-클로로페닐)푸로[2,3,d]피리미딘(141)을 얻었다. 동일한 방법으로 하기의 화합물 142 내지 155를 각각 얻었다.163.8 mg (0.5 mmol) of 2-chloromethyl-4-chloro-5-methyl-6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (XII-A) obtained in Example 13-1; 3 ml of n-butyl alcohol were added dropwise to 109.13 mg (1 mmol) of 3-aminophenol, heated to reflux for 4 hours, and then the solvent was removed. Dissolved in 1 ml of dimethyl sulfoxide, added to 20 ml of water, filtered, washed thoroughly with water and n-hexane and dried to give an off-white solid product 2-chloromethyl-4- (3-hydroxyanilino) -5-methyl- 6- (4-chlorophenyl) furo [2,3, d] pyrimidine (141) was obtained. In the same manner, the following compounds 142 to 155 were obtained.

상기에서 얻은 2,4,5,6-치환 푸로피리미딘계 화합물의 분석결과를 아래의 표 10에 나타내었다.The analysis results of the 2,4,5,6-substituted furopyrimidine-based compound obtained above are shown in Table 10 below.

표 10Table 10

Ⅱ. 본 발명의 화합물의 생물학적 활성 평가II. Assessment of Biological Activity of Compounds of the Invention

이하, 상기에서 얻어진 화합물에 대한 DDR2의 생물학적 활성 평가 실험을 상세히 기술하고자 한다.Hereinafter, the experiments to evaluate the biological activity of DDR2 for the compound obtained above will be described in detail.

실시예 14: 본 발명의 화합물의 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성에 대한 저해 활성 측정Example 14 Determination of Inhibitory Activity on the Tyrosine Kinase Activity of the DDR2 Protein of the Compound of the Present Invention

Tris-HCl(pH 7.5), MgCl₂ 5 mM, 활성화된 DDR2 키나아제 효소 단백질 100ng(한국특허출원 제2002-0067233호 및 한국특허출원 제2003-0076967호에 기재된 방법으로 제조됨), ATP 10 uM 및 P32-감마-ATP 0.2 uCi의 혼합 용액 20ul에서 펩타이드 기질로서 바이오틴이 부착된 폴리(D4Y)n(Promega, USA) 또는 히스톤 H2B 단백질 2 ug을 사용하여 10 내지 30 분간 반응시킨 후, 1/2 부피의 30% 인산 용액을 가하여 반응을 종결하였다.Tris-HCl (pH 7.5), MgCl ₂ 5 mM, 100 ng of activated DDR2 kinase enzyme protein (prepared by the method described in Korean Patent Application No. 2002-0067233 and Korean Patent Application No. 2003-0076967), ATP 10 uM and In a mixed solution of 0.2 uCi of P32-gamma-ATP 0.2 uCi, 2 ug of biotin-attached poly (D4Y) n (Promega, USA) or histone H2B protein as a peptide substrate was reacted for 10 to 30 minutes, followed by 1/2 volume. 30% phosphoric acid solution was added to terminate the reaction.

이 반응액을, 바이오틴이 부착된 폴리(D4Y)n을 펩타이드 기질로 사용하는 경우에는 아비딘으로 코팅된 멤브레인(Promega, USA)에 스포팅하고, 히스톤을 기질로 사용하는 경우에는 p81 셀룰로오스 종이에 스포팅을 하였다. 두 경우 효소 반응 활성 측정에서 같은 결과를 보여 주었다. 이를 10 mM Tris-HCl(pH 8.0) 및 100 mM NaCl 용액으로 5 번 씻어낸 후, 멤브레인에 부착된 인산화된 펩타이드에서 발생하는 방사능을 BAS 방사능 이매징 측정기(Kodak)로 측정하여 효소 반응 정도를 정량하여, DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 측정하였다.The reaction solution was spotted on avidin-coated membranes (Promega, USA) when biotin-attached poly (D4Y) n was used as the peptide substrate, and on p81 cellulose paper when histone was used as the substrate. It was. In both cases, the same results were obtained from enzyme activity measurement. After washing 5 times with 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) and 100 mM NaCl solution, the activity generated from the phosphorylated peptide attached to the membrane was measured by BAS radiographic imaging (Kodak) to quantify the degree of enzyme reaction. The tyrosine kinase activity of DDR2 protein was measured.

DDR2 키나아제 활성부위의 자가 인산화 활성 측정을 위해서는 상기의 조건에서 펩타이드 기질을 제외한 반응액에서 반응시킨 후 반응물을 10% PAGE겔에서 전기영동 후 쿠마지 염색하여, DDR2 키나아제 활성 부위 단백질의 존재를 확인 한 후, 이 겔을 건조하고 X-ray 필름을 이용한 오토라디오그라피를 하여, DDR2 단백질 부위의 자가 인산화 정도를 측정하였다.To measure the autophosphorylation activity of the DDR2 kinase active site, the reaction was carried out in the reaction solution except for the peptide substrate under the above conditions, and the reaction was electrophoresed on a 10% PAGE gel, followed by staining with Kumaji to confirm the presence of the DDR2 kinase active site protein. Thereafter, the gel was dried and subjected to autoradiography using an X-ray film to measure the degree of autophosphorylation of the DDR2 protein site.

화합물의 저해 활성 측정을 위하여, 효소반응 용액에 DMSO에 녹아 있는 화합물을 여러 농도로 미리 첨가한 후, DDR2 키나아제 효소를 첨가하여 효소반응을 진행하여 각 화합물의 특정 농도에서 효소 활성의 저해정도를 측정하고, 50 % 효소활성을 저해하는 각 화합물의 농도를 그 화합물의 IC₅₀(50% 활성 저해를 주는 농도값)으로 구하여 아래의 표 11에 나타내었다.In order to measure the inhibitory activity of the compound, the compound dissolved in DMSO was previously added to the enzyme reaction solution at various concentrations, and then the enzyme reaction was carried out by adding the DDR2 kinase enzyme to measure the degree of inhibition of the enzyme activity at the specific concentration of each compound. Then, the concentration of each compound that inhibits 50% enzymatic activity was determined as IC ₅₀ (concentration value that inhibited 50% activity) of the compound, and is shown in Table 11 below.

표 11Table 11

상기 표 11에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성을 효과적으로 억제하는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 화합물은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성에 의하여 야기되는 간경화, 류머티즘 및 암의 전이에 대하여 치료 효과를 나타낼 것으로 기대될 수 있다.As can be seen in Table 11, the compounds of the present invention was shown to effectively inhibit the tyrosine kinase activity of DDR2 protein. Thus, the compounds of the present invention can be expected to have a therapeutic effect against the metastasis of cirrhosis, rheumatism and cancer caused by the tyrosine kinase activity of DDR2 protein.

이하의 실험에서는 본 발명의 화합물의 대표 화합물로서 상기 표 6의 번호 100 화합물을 사용하였으나, 상기 표 11에서 확인할 수 있는 바와 같이, 상기 대표 화합물에 대한 효과는 그 외의 본 발명의 다른 화합물에도 적용된다고 예측할 수 있다.In the following experiments, although the number 100 compound of Table 6 was used as the representative compound of the compound of the present invention, as shown in Table 11, the effect on the representative compound is also applied to other compounds of the present invention. You can predict it.

본 발명의 화합물의 DDR2 티로신 키나아제 저해 기전을 확인하는 실험으로 대표 화합물 100(표6)의 0 uM, 0.2 uM, 1.2 uM의 각 농도에서 기질인 ATP 양을 변화시키며 상기한 효소 활성 측정법에 따라 반응속도를 구한 후 이를 통상적으로 알려진 리시프로칼 프로팅(Lubert Stryer, 생화학 제 4 개정판, 서울외국서적, pp. 202-205)을 했을 때 화합물의 농도에 따른 y 절편과 x 절편의 변화를 조사하였다. 도 1에서 보여 준 바와 같이 화합물의 농도에 따른 y 절편의 변화가 없는 것은 최대 반응 속도 Vmax는 변화가 없고 Km값을 나타내는 x 절편이 변화하는 것은 본 발명의 DDR2 키나아제 활성 저해 화합물이 ATP 경쟁적 기전에 의해 DDR2 키나아제 활성을 저해함을 증명한다.Experiment to confirm the DDR2 tyrosine kinase inhibition mechanism of the compound of the present invention by varying the amount of ATP as a substrate at each concentration of 0 uM, 0.2 uM, 1.2 uM of the representative compound 100 (Table 6) and reacted according to the enzyme activity assay described above After determining the velocity, the changes of y- and x-sections were investigated according to the concentrations of the compounds when commonly used lysical proteolysis (Lubert Stryer, 4th edition of Biochemistry, Seoul, Korea, pp. 202-205). . As shown in FIG. 1, there is no change in the y segment according to the concentration of the compound, the maximum reaction rate Vmax does not change, and the change in the x segment representing the Km value indicates that the DDR2 kinase activity inhibiting compound of the present invention is in an ATP competitive mechanism. By inhibiting DDR2 kinase activity.

실시예 15: 본 발명의 화합물의 HSC T6 세포내의 DDR2 단백질의 티로신 인산화 억제 활성 측정Example 15 Determination of Tyrosine Phosphorylation Inhibitory Activity of DDR2 Protein in HSC T6 Cells of Compounds of the Invention

HSC T6 세포(프리드만 교수, 마운트 사이나이 의과대학, 뉴욕, 미국) 20만개를 6웰 배양디쉬의 각 웰에 프레이팅한 후 24시간 배양하고 콜라겐 10ug/ml 농도로 24 시간 처리하거나, 콜라겐 10 ug/ml 농도와 함께 DMSO에 녹인 본 발명의 화합물 (표 6의 번호 100)을 농도별(0, 5, 10 및 20 uM)로 각각 24 시간 처리한 후, 1x 램리(lameli) 용액으로 세포를 회수하여 파쇄하고, 이 세포 파쇄액을 7 % PAGE 겔에서 전기영동 하였다. 겔의 전개된 단백질을 나이트로 셀룰로오스 종이에 이동시킨 후, 인간 DDR2를 특이적으로 인식하는 항체로 웨스턴 브로팅을 하여 130,000 달톤 분자량 위치에 DDR2 단백질의 양이 크게 차이가 없음과 그 위치를 확인하고, 이 멤브레인을 스트리핑한 후, 다시 인산화된 티로신을 특이적으로 인식하는 항체를 이용하여 웨스턴 브로팅하여, DDR2가 위치한 부위의 티로신 인산화 정도가 대표 화합물 100의 처리 농도에 따라 감소함 확인하고, 이를 도 2에 나타내었다.200,000 HSC T6 cells (Professor Friedman, Mount Sinai Medical School, New York, USA) are plated in each well of a 6-well culture dish and incubated for 24 hours and treated with collagen 10 ug / ml for 24 hours or collagen 10 ug. Compounds of the present invention (number 100 in Table 6) dissolved in DMSO with / ml concentration were treated for 24 hours at different concentrations (0, 5, 10 and 20 uM), and then cells were recovered with 1x lameli solution. The cell lysate was electrophoresed on a 7% PAGE gel. The developed protein of the gel was transferred to nitro cellulose paper, followed by western blotting with an antibody that specifically recognizes human DDR2. After stripping the membrane, Western broth using an antibody that specifically recognizes phosphorylated tyrosine was again used to confirm that the degree of tyrosine phosphorylation at the site where the DDR2 is located decreases with the treatment concentration of the representative compound 100. 2 is shown.

도 2에 나타난 바와 같이, 이미 타 연구자들에 의해 보고된 결과와 일치하게 콜라겐 처리에 의해 HSC T6 세포내의 DDR2의 티로신 인산화가 유도됨을 확인할 수 있었고, 이러한 DDR2의 티로신 인산화는 DDR2 키나아제의 활성화를 의미하는 것이다. 그러나, 도 2에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에서 본 발명의 대표 화합물 100의 처리에 의하여 콜라겐에 의한 DDR2 단백질의 티로신 인산화가 감소하는 것을 또한 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 화합물은 콜라겐에 의한 DDR2 단백질의 활성화를 억제하는 활성을 갖는다는 것을 확인할 수 있다.As shown in FIG. 2, it was confirmed that the tyrosine phosphorylation of DDR2 in HSC T6 cells was induced by collagen in accordance with the results reported by other researchers, and this tyrosine phosphorylation of DDR2 means activation of DDR2 kinase. It is. However, as can be seen in Figure 2, it was also confirmed that the tyrosine phosphorylation of DDR2 protein by collagen was reduced by the treatment of the representative compound 100 of the present invention in the present invention. Therefore, it can be confirmed that the compound of the present invention has an activity of inhibiting the activation of DDR2 protein by collagen.

실시예 16: 본 발명의 화합물의 세포 증식 억제 활성 측정Example 16: Determination of Cell Proliferation Inhibitory Activity of Compounds of the Invention

본 발명의 화합물의 세포성장 억제능을 측정하기 위하여 간 성상세포 HSC-T6, HT 1080 및 Rat2 세포에 대한 활성을 각각 측정하여 비교하였다, 상기 세포들을 96웰 배양접시에 각 웰 당 1000 개의 세포씩 접종하였다. 접종 24 시간 후, day 0의 세포수를 정량하기 위하여 3개의 웰을 포르말린으로 픽싱하고 나머지 웰은 DMSO에 녹인 본 발명의 화합물(표 6의 번호 100)을 농도를 달리하여 처리하고, 48 시간 후(day 2)에 포르말린 용액으로 픽싱하였다. 여기에, 설퍼로다마인 B를 처리하여 염색한 후, 염색된 다이를 0.1 M Tris-HCl (pH 8.0)으로 추출하여, 이를 A520에서 흡광도를 측정하여 세포 수를 정량하였다. 흡광도는 웰에 존재하는 살아있는 세포수를 상대적으로 나타낸다. day 0의 웰의 흡광도를 0%으로 하고, 화합물을 처리하지 않고 이틀간 방치한 웰의 흡광도를 100%로, 그리고 웰에 살아있는 세포가 전혀 없어서 흡광도가 0이 나오는 상태를 -100%로 하여 각 화합물의 농도에서의 흡광도를 비례식으로 환산하여 화합물이 처리된 각 웰의 % 세포 생존도로 나타내었다. 각 실험은 n=3로 행해졌으며 측정값은 평균값을 구하여 나타내었다. 상기 세포는 5% 이산화탄소및 37℃하에서, HSC-T6 세포는 DMEM +10% FBS에서, 나머지 세포는 RPM116 40+10% FBS에서 배양하였다.In order to measure the cell growth inhibitory ability of the compounds of the present invention, the activity of HSC-T6, HT 1080 and Rat2 cells in liver stellate cells was measured and compared, respectively. The cells were inoculated with 1000 cells in each well in a 96-well culture dish. It was. 24 hours after inoculation, three wells were fixed with formalin to quantify day 0 cell numbers, and the other wells were treated with different concentrations of the compounds of the present invention (number 100 in Table 6) dissolved in DMSO, and 48 hours later. Fixed with formalin solution on (day 2). Here, after treating and staining Sulfurodamine B, the stained die was extracted with 0.1 M Tris-HCl (pH 8.0), and the absorbance was measured at A520 to quantify the cell number. Absorbance is relative to the number of living cells present in the wells. Each compound was treated with 0% absorbance of the well at day 0, 100% absorbance of the wells left untreated for 2 days, and -100% absorbance at 0 due to no living cells in the wells. The absorbance at the concentration of was proportionally expressed as% cell viability of each well treated with the compound. Each experiment was performed with n = 3 and the measured values were shown by taking the average value. The cells were cultured at 5% carbon dioxide and 37 ° C., HSC-T6 cells in DMEM + 10% FBS and the remaining cells in RPM116 40 + 10% FBS.

상기 시험 결과를 도 3에 나타내었다. 도 2에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 다른 세포와 비교하여 간 성상세포 HSC-T6 (-●-)에 대하여 상대적으로 높은 증식 억제활성을 보이는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 화합물은 간 성상세포에 대하여 선택적 성장 억제활성을 갖는다는 것을 확인 할 수 있다.The test results are shown in FIG. 3. As can be seen in Figure 2, the compound of the present invention was shown to show a relatively high proliferation inhibitory activity against hepatic astrocytic HSC-T6 (-●-) compared to other cells. Therefore, it can be confirmed that the compound of the present invention has selective growth inhibitory activity against hepatic stellate cells.

실시예 17: 본 발명의 화합물의 간 성상세포의 세포사멸 (apoptosis) 유도 확인Example 17 Confirmation of Induction of Apoptosis of Hepatic Astrocytes of the Compound of the Present Invention

HSC T6 세포에 DMSO에 녹인 본 발명의 화합물(표 6의 번호 100)을 농도 별로 처리하고, 24 시간 후에 전체 게놈 DNA를 통상적인 방법으로 추출하였다.Compounds of the present invention (No. 100 in Table 6) dissolved in DMSO in HSC T6 cells were treated by concentration, and after 24 hours, the whole genomic DNA was extracted by a conventional method.

세포사멸은 DNA의 절편화를 측정함으로써 확인하였다. 상기 추출한 DNA를 1.2% 아가로오스 젤에서 전개시킨 후, EtBr로 염색하여 UV 하에서 절편이 일어난 DNA를 관찰하고, 그 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 화합물의 높은 처리 농도에서 절편이 일어난 DNA가 많이 관찰되는 것을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 HSC T6 세포의 세포사멸을 유도한다는 것을 확인할 수 있다.Apoptosis was confirmed by measuring DNA fragmentation. The extracted DNA was developed on a 1.2% agarose gel, stained with EtBr, and DNA fragments were observed under UV, and the results are shown in FIG. 5. As shown in Figure 5, it can be seen that a large number of fragmented DNA is observed at a high treatment concentration of the compound of the present invention. Thus, it can be seen that the compounds of the present invention induce apoptosis of HSC T6 cells.

day 0의 웰의 흡광도를 0%으로 하고, 화합물을 처리하지 않고 이틀간 방치한 웰의 흡광도를 100%로, 그리고 웰에 살아있는 세포가 전혀 없어서 흡광도가 0이 나오는 상태를 -100%로 하여 각 화합물의 농도에서의 흡광도를 비례식으로 환산하여 화합물이 처리된 각 웰의 % 세포 생존도로 나타내었다. 각 실험은 n=3로 행해졌으며 측정값은 평균값을 구하여 나타내었다. 상기 세포는 5% 이산화탄소 및 37 ℃하에서, HSC-T6 세포는 DMEM +10% FBS에서, 나머지 세포는 RPMI1640+10% FBS에서 배양하였다. Each compound was treated with 0% absorbance of the well at day 0, 100% absorbance of the wells left untreated for 2 days, and -100% absorbance at 0 due to no living cells in the wells. The absorbance at the concentration of was proportionally expressed as% cell viability of each well treated with the compound. Each experiment was performed with n = 3 and the measured values were shown by taking the average value. The cells were cultured at 5% carbon dioxide and 37 ° C., HSC-T6 cells in DMEM + 10% FBS, and the remaining cells in RPMI1640 + 10% FBS.

7주령의 whistar rat의 담즙관을 봉합하여 간경화를 유도하였다. 여기에 DMSO에 녹인 본 발명의 화합물(표 6의 번호 100)을 10mg/kg의 농도로 매일 2주간 꼬리정맥에 주사 하였다. 대조군으로 담즙관 봉합 후 DMSO만(캐리어)을 주사한 것을 사용하였고 정상 대조군으로는 담즙관 봉합없이 모조 수술을 한 쥐를 사용하였다. 간 조직의 콜라겐 정량은 간 조직 내의 하이드록시 프로린 양을 통상적인 방법으로 정량하여 그 결과를 하기의 표 12에 나타내었다.Ciliary ducts of 7-week-old whistar rats were sutured to induce cirrhosis. The compound of the present invention (number 100 in Table 6) dissolved in DMSO was injected into the tail vein at a concentration of 10 mg / kg for 2 weeks every day. As a control, DMSO-only (carrier) injection was used after bile duct closure. As a normal control, rats with sham surgery without bile duct closure were used. Collagen quantification of liver tissue was quantified in a conventional manner the amount of hydroxyproline in liver tissue and the results are shown in Table 12 below.

표 12Table 12

상기 표 12에서 알 수 있는 바와 같이, 답즙관 봉합 시술을 한 경우가 하지 않은 경우 보다 하이드록시 프롤린 수치가 증가하는 것에 의하여 담즙관 봉합 시술에 의하여 간 경화가 유발되었음을 확인할 수 있으며, 이와 같이 간경화가 유발된 경우에 있어서, 본 발명의 화합물이 처리된 경우가 처리되지 않은 경우보다 하이드록시 프롤린 수치의 증가가 완화되는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 간 경화에 대하여 항 섬유화 활성을 갖는다고 할 수 있다.As can be seen in Table 12, it can be confirmed that cirrhosis was induced by bile duct suture by increasing the level of hydroxyproline than when the biliary tract suture was not performed. In the induced case, it can be seen that the increase in hydroxy proline levels is lessened than when the compound of the present invention was treated. Therefore, it can be said that the compound of the present invention has antifibrotic activity against liver hardening.

실지로 담즙관 봉합에 의해 간 경화를 유발한 쥐의 간 조직에 본 발명의 화합물이 처리된 경우 콜라겐 침착이 감소함을 확인한 또 다른 방법으로 간 조직을 동결한 후 얇은 절편을 만들고 이 절편을 일반적으로 조직 내의 콜라겐 침착을 염색하는 방법인 마손 염색법을 이용하여 염색하여 400배 배율의 광학현미경으로 관찰하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다. 푸른색으로 염색된 부분이 침착된 콜라겐이 염색된 것이고 붉은색으로 염색된 부분은 간 조직내의 세포들이다.Indeed, another method that has been found to reduce collagen deposition in the liver tissues of rats that have caused liver hardening by biliary tract sutures has been to reduce collagen deposition and to freeze liver tissue to make thin sections and generally Staining using collagen deposition, which is a method of staining collagen deposition in tissues, was observed with an optical microscope at 400x magnification. The results are shown in FIG. The blue stained part was stained with the collagen deposited, and the red stained part was the cells in the liver tissue.

실시예 19: 본 발명의 화합물의 활막 섬유아세포 증식 억제 활성 측정Example 19 Measurement of Synovial Fibroblast Proliferation Inhibitory Activity of Compounds of the Invention

5 % 이산화탄소를 공급하면서 10 % FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 37℃의 동물세포 배양기에서 배양한 류머티즘 환자에게서 추출한 활막 섬유아세포를 24 웰 배양접시에 한 웰당 5000개씩 접종한 후 하루를 더 배양하였다. 3개의 웰은 배지와같은 부피의 포르말린을 첨가하여 30 분간 픽싱하고 물로 씻은 후 건조시키고, 나머지 웰은 본 발명의 화합물 (표 6의 번호 100)을 농도별로 n=3으로 48 시간 처리하여 배양하거나, 또는 화합물을 처리하지 않고 48 시간을 연속적으로 배양한 후, 각 웰에 배지와 같은 부피의 포르말린을 첨가하여 30 분간 픽싱하고 물로 씻은 후 건조하였다. 포르말린 픽싱된 세포를 설퍼로다마인B 용액으로 통상적인 방법으로 염색한 후 이를 0.1 M Tris-HCl (pH 8.0) 용액으로 세포에 흡착된 설퍼로다마인을 우려낸 후 520 nM 파장에서 흡광도를 측정하여 각 웰에 있는 상대적인 세포수를 정량하였다. 화합물을 처리하기 직전의 웰에 있는 세포수 (즉, 흡광도)를 기준점(0%)으로 하고 화합물을 처리하지 않고 48시간 연속적으로 배양한 웰의 세포수 (즉, 흡광도)를 100%로 하고 웰의 세포가 완전히 사멸하여 없을 때(즉, 흡광도 0)를 -100%로 하여, 48 시간 동안 본 발명의 화합물을 각 농도별로 처리했을 때의 세포수(즉, 흡광도)를 비례식으로 계산하여 각 화합물 농도에서의 % 세포 생존률을 구하여 도 7에 나타내었다.Synovial fibroblasts extracted from rheumatoid patients cultured in an animal cell incubator at 37 ° C. in DMEM medium containing 10% FBS while supplying 5% carbon dioxide were inoculated with 5000 cells per well in a 24-well culture dish, followed by further culture. Three wells were fixed by adding a volume of formalin in the same volume as the medium, fixed for 30 minutes, washed with water and dried, and the remaining wells were incubated by treating the compound of the present invention (number 100 in Table 6) with n = 3 by concentration for 48 hours. After 48 hours of continuous incubation without treatment with the compound, each well was added with the same volume of formalin as the medium, fixed for 30 minutes, washed with water and dried. Formalin-fixed cells were stained in a conventional manner with a solution of sulfodadrome B, and then stained with sulfuric acid adsorbed on the cells with 0.1 M Tris-HCl (pH 8.0) solution, and then absorbed at 520 nM. Relative cell numbers in the wells were quantified. The cell number (i.e., absorbance) in the wells immediately before the compound was treated as the reference point (0%), and the cell number (i.e., absorbance) of the wells cultured continuously for 48 hours without treatment of the compound was 100%. When the cells of the cells were completely dead and absent (i.e., absorbance 0) was -100%, the number of cells (i.e., absorbance) when the compound of the present invention was treated for each concentration for 48 hours was calculated in proportion to each compound. The% cell viability at the concentration was determined and shown in FIG. 7.

도 7에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 활막 섬유아세포의 증식에 대하여 억제 활성을 가지며, 이러한 증식 억제 활성은 처리된 화합물의 농도에 비례하여 증가하는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 화합물은 활막 섬유아세포의 이상 증식에 의하여 유발되는 류머티즘에 대하여 치료효과를 갖는다고 할 수 있다.As can be seen in Figure 7, the compound of the present invention has an inhibitory activity against the proliferation of synovial fibroblasts, this proliferation inhibitory activity was shown to increase in proportion to the concentration of the treated compound. Therefore, the compound of the present invention can be said to have a therapeutic effect against rheumatism caused by abnormal proliferation of synovial fibroblasts.

실시예 20: 본 발명의 화합물의 MMP-1 mRNA에 대한 효과 측정Example 20 Determination of Effect of Compounds of the Invention on MMP-1 mRNA

류머티즘 환자로부터 추출된 활막 섬유아세포를 지름 10 cm의 배양접시에서 10 % FBS를 포함하는 DMEM 배지와 5 % CO₂ 조건에서 배양한 후 배양접시의 세포밀도가 50% 정도 되어 세포가 활발히 자라고 있을 때 DMSO에 녹인 본 발명의 화합물을 10 uM의 농도로 24 시간 처리하거나 대조군으로 화합물을 처리하지 않고 24 시간 방치한 후 배양접시 내의 세포에 있는 전체 RNA를 정제하였다. 정제는 GIBCO BRL사에서 구입한 Triazol Reagent(카탈로그 번호: 15596-026)를 이용하였고, 그 정제방법은 GIBCO BRL사가 Triazol Reagent를 판매시 함께 제공하는 "Instruction for RNA Isolation" 방법에 따라 분리하였다. 정제된 전체 RNA 10 ug을 포름알데히드-아가로오스 겔에서 전기영동 후, 나이트란 멤브레인에 mRNA를 이동시켰다. MMP-1 c-DNA 절편을 이용하여 베린저 인겔하임에서 구매한 키트를 이용하여 32P 방사성 동위원소로 표식된 MMP-1 프로브를 제작하였다. 이와 같이 제작된 프로브를 이용하여 통상적인 노던 브로팅을 하여 MMP-1의 mRNA 양을 정량하였다.When synovial fibroblasts extracted from rheumatism patients were cultured in a 10 cm diameter DMEM medium containing 10% FBS and 5% CO ₂ , the cell density of the culture dish was about 50% and the cells were actively growing. The compound of the present invention dissolved in DMSO was treated for 24 hours at a concentration of 10 uM or left untreated for 24 hours without treatment with a control compound, and then the total RNA in the cells in the culture dish was purified. Purification was carried out using Triazol Reagent (Catalog No .: 15596-026) purchased from GIBCO BRL, and the purification method was isolated according to the "Instruction for RNA Isolation" method that GIBCO BRL provided Triazol Reagent with the sales. 10 ug of purified total RNA was electrophoresed on formaldehyde-agarose gel, followed by transfer of mRNA to the nitran membrane. MMP-1 probes were labeled with 32P radioisotopes using kits purchased from Boehringer Ingelheim using MMP-1 c-DNA fragments. The mRNA amount of MMP-1 was quantified by conventional Northern blotting using the probe thus prepared.

상기 결과를 도 8에 나타내었다. 도 8에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 화합물을 처리한 경우(10 uM)와 처리하지 않은 경우(0 uM)를 비교하여 볼 때, 본 발명의 화합물이 MMP-1의 mRNA 양을 감소시키는 효과를 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 MMP-1 양의 증가에 의하여 유발되는 류머티즘에 대하여 치료 활성을 갖는다고 할 수 있다.The results are shown in FIG. 8. As shown in Figure 8, when comparing the compound of the present invention treated (10 uM) and untreated (0 uM), the effect of the compound of the present invention to reduce the amount of mRNA of MMP-1 It can be seen that it has. Thus, the compounds of the present invention can be said to have therapeutic activity against rheumatism caused by an increase in the amount of MMP-1.

본 발명의 신규한 푸로피리미딘 화합물들은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성에 대하여 뛰어난 억제활성을 가지며, 이러한 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 억제 활성에 의하여, DDR2의 티로신 키나아제 활성에 의하여 유발되는 각종 질병의 치료제로서 적용가능하고, 특히 간경화, 류머티즘 또는 암의 치료제로서 유용하다.The novel furopyrimidine compounds of the present invention have an excellent inhibitory activity against tyrosine kinase activity of DDR2 protein and are applied as a therapeutic agent for various diseases caused by tyrosine kinase activity of DDR2 by the tyrosine kinase inhibitory activity of such DDR2 protein. It is possible and particularly useful as a therapeutic agent for cirrhosis, rheumatism or cancer.

본 발명의 신규한 푸로피리미딘 화합물들은 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성에 대하여 뛰어난 억제활성을 가지며, 이러한 DDR2 단백질의 티로신 키나아제 억제 활성에 의하여, DDR2의 티로신 키나아제 활성에 의하여 유발되는 각종 질병의 치료제로서 적용 가능하고, 특히 간경화 또는 류머티즘의 치료제로서 유용하다.The novel furopyrimidine compounds of the present invention have an excellent inhibitory activity against tyrosine kinase activity of DDR2 protein and are applied as a therapeutic agent for various diseases caused by tyrosine kinase activity of DDR2 by the tyrosine kinase inhibitory activity of such DDR2 protein. It is possible and particularly useful as a therapeutic agent for cirrhosis or rheumatism.

Claims (10)

다음의 화학식 1로 정의되는 푸로피리미딘 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염: Furopyrimidine compounds defined by Formula 1 or pharmaceutically acceptable salts thereof: [화학식 1][Formula 1]

상기 식 중,In the above formula, Z는 O 또는 NH이고,Z is O or NH, n은 0에서 4 사이의 정수이고,n is an integer from 0 to 4, R₁은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, 또는 C1-C4의 알킬티오기이고,R ₁ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1-C4 alkylamino group or C1-C4 alkylthio group, R''은 수소, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4 알킬에스테르, 모르폴린, 또는 C1-C4의 알콕시기 또는 할로겐이 치환된 페닐기이고,R '' is hydrogen, an alkyl group of C1-C4, a haloalkyl group of C1-C4, an alkoxy group of C1-C7, a C1-C4 alkylester, a morpholine, or an alkoxy group of C1-C4 or a phenyl group substituted with halogen, 상기 A 링은 벤젠, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피리미딘, 피페리딘, 벤조일, 또는 모르폴린이고, The A ring is benzene, triazole, pyrazole, pyridine, pyrimidine, piperidine, benzoyl, or morpholine, R₂는 할로겐, C1-C5의 알킬기, 또는 C1-C7의 알콕시기이고,R ₂ is halogen, C 1 -C 5 alkyl group, or C 1 -C 7 alkoxy group, R은 수소, 할로겐, 니트로, 히드록시, C1-C7의 알콕시기, 또는 C1-C4의 알킬티오기이다.R is hydrogen, halogen, nitro, hydroxy, alkoxy group of C1-C7, or alkylthio group of C1-C4. 다음의 화학식 2로 정의되는 푸로피리미딘 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:Furopyrimidine compounds defined by Formula 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof: [화학식 2][Formula 2]

상기 식 중,In the above formula, R₃는, 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 또는 C1-C4의 알킬기이고, R ₃ is hydrogen, halogen, hydroxy, amino or a C1-C4 alkyl group, B 링은 피리미딘, 피롤리딘, 피페라진, 모르포린, 티오모르포린이고, Ring B is pyrimidine, pyrrolidine, piperazine, morpholine, thiomorpholine, R₂는 할로겐, C1-C5의 알킬기이다.R ₂ is halogen or C 1 -C 5 alkyl. 삭제delete 삭제delete 다음의 화학식 XI 또는 XII로 정의되는 푸로피리미딘 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:Furopyrimidine compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof, as defined by the following Formulas XI or XII: [화학식 XI]Formula XI

[화학식 XII][Formula XII]

R₂는 할로겐, C1-C5의 알킬기, 또는 C1-C7의 알콕시기이고,R ₂ is halogen, C 1 -C 5 alkyl group, or C 1 -C 7 alkoxy group, R는 수소, 할로겐, 니트로, 히드록시, C1-C4의 알킬기, C1-C7의 알콕시기, 또는 C1-C4의 알킬티오기이고,R is hydrogen, halogen, nitro, hydroxy, an alkyl group of C1-C4, an alkoxy group of C1-C7, or an alkylthio group of C1-C4, R''는 수소, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4 알킬에스테르, 모르포린, C1-C4의 알콕시기 또는 할로겐이 치환된 페닐기이다.R '' is hydrogen, a C1-C4 alkyl group, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C7 alkoxy group, a C1-C4 alkylester, a morpholine, a C1-C4 alkoxy group or a halogen-substituted phenyl group. 유효성분으로서 다음의 화학식 1, 화학식 2, 화학식 XI 또는 화학식 XII로 정의되는 신규한 푸로피리미딘 유도체 및 그의 약리적으로 허용되는 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 한 가지 이상을 치료적 유효량으로 포함하는, 간경화 또는 류머티즘의 치료를 위한 DDR2 단백질의 티로신 키나아제의 활성 억제제.Cirrhosis or cirrhosis comprising a therapeutically effective amount of at least one selected from the group consisting of novel furopyrimidine derivatives defined by the following Formula 1, Formula 2, Formula XI or Formula XII and pharmacologically acceptable salts thereof as an active ingredient Inhibitor of activity of tyrosine kinase of DDR2 protein for the treatment of rheumatism. [화학식 1][Formula 1]

[화학식 2][Formula 2]

[화학식 XI]Formula XI

[화학식 XII][Formula XII]

상기 식 중,In the above formula, Z는 O 또는 NH이고,Z is O or NH, n은 0에서 4 사이의 정수이고,n is an integer from 0 to 4, R₁은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, 또는 C1-C4의 알킬티오기이고,R ₁ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1-C4 alkylamino group or C1-C4 alkylthio group, 상기 A 링은 벤젠, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피리미딘, 피페리딘, 벤조일, 또는 모르폴린이고, The A ring is benzene, triazole, pyrazole, pyridine, pyrimidine, piperidine, benzoyl, or morpholine, 상기 B 링은 피리미딘, 피롤리딘, 피페라진, 모르포린, 티오모르포린이고, The B ring is pyrimidine, pyrrolidine, piperazine, morpholine, thiomorpholine, R₂는 할로겐, C1-C5의 알킬기, 또는 C1-C7의 알콕시기이고,R ₂ is halogen, C 1 -C 5 alkyl group, or C 1 -C 7 alkoxy group, R은 수소, 할로겐, 니트로, 히드록시, C1-C7의 알콕시기, 또는 C1-C4의 알킬티오기이고, R is hydrogen, halogen, nitro, hydroxy, alkoxy group of C1-C7, or alkylthio group of C1-C4, R₃는, 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 또는 C1-C4의 알킬기이고, R ₃ is hydrogen, halogen, hydroxy, amino or a C1-C4 alkyl group, R''는 수소, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4 알킬에스테르, 모르포린, C1-C4의 알콕시기 또는 할로겐이 치환된 페닐기이다.R '' is hydrogen, a C1-C4 alkyl group, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C7 alkoxy group, a C1-C4 alkylester, a morpholine, a C1-C4 alkoxy group or a halogen-substituted phenyl group. 제6항에 있어서, 약리적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 더 포함하는 것인 DDR2 단백질의 티로신 키나아제의 활성 억제제.7. The activity inhibitor of tyrosine kinase of DDR2 protein according to claim 6, further comprising a pharmacologically acceptable carrier or excipient. 유효성분으로서 다음의 화학식 1, 화학식 2, 화학식 VII 또는 화학식 XI로 정의되는 신규한 푸로피리미딘 유도체 및 그의 약리적으로 허용되는 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 한 가지 이상을 치료적 유효량으로 포함하는, DDR2 단백질의 티로신 키나아제 활성으로 인하여 유발되는 간경화 또는 류머티즘의 치료를 위한 약학적 조성물:DDR2 protein comprising a therapeutically effective amount of at least one selected from the group consisting of novel furopyrimidine derivatives defined by the following Chemical Formula 1, Chemical Formula 2, Chemical Formula VII or Chemical Formula XI and pharmacologically acceptable salts thereof as an active ingredient Pharmaceutical compositions for the treatment of cirrhosis of the liver or rheumatism caused by tyrosine kinase activity of: [화학식 1][Formula 1]

[화학식 2][Formula 2]

[화학식 XI]Formula XI

[화학식 XII][Formula XII]

상기 식 중,In the above formula, Z는 O 또는 NH이고,Z is O or NH, n은 0에서 4 사이의 정수이고,n is an integer from 0 to 4, R₁은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시, 아미노, CO₂H, CONH₂, CSNH₂, 아미딘, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4의 알킬아미노기, 또는 C1-C4의 알킬티오기이고,R ₁ is hydrogen, halogen, cyano, nitro, hydroxy, amino, CO ₂ H, CONH ₂ , CSNH ₂ , amidine, alkyl group of C1-C4, haloalkyl group of C1-C4, alkoxy group of C1-C7, C1-C4 alkylamino group or C1-C4 alkylthio group, 상기 A 링은 벤젠, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피리미딘, 피페리딘, 또는 모르폴린이고, The A ring is benzene, triazole, pyrazole, pyridine, pyrimidine, piperidine, or morpholine, 상기 B 링은 피리미딘, 피롤리딘, 피페라진, 모르포린, 티오모르포린이고, The B ring is pyrimidine, pyrrolidine, piperazine, morpholine, thiomorpholine, R₂는 할로겐, C1-C5의 알킬기, 또는 C1-C7의 알콕시기이고,R ₂ is halogen, C 1 -C 5 alkyl group, or C 1 -C 7 alkoxy group, R은 수소, 할로겐, 니트로, 히드록시, C1-C7의 알콕시기, 또는 C1-C4의 알킬티오기이고, R is hydrogen, halogen, nitro, hydroxy, alkoxy group of C1-C7, or alkylthio group of C1-C4, R₃는, 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 또는 C1-C4의 알킬기이고, R ₃ is hydrogen, halogen, hydroxy, amino or a C1-C4 alkyl group, R''는 수소, C1-C4의 알킬기, C1-C4의 할로알킬기, C1-C7의 알콕시기, C1-C4 알킬에스테르, 모르포린, C1-C4의 알콕시기 또는 할로겐이 치환된 페닐기이다.R '' is hydrogen, a C1-C4 alkyl group, a C1-C4 haloalkyl group, a C1-C7 alkoxy group, a C1-C4 alkylester, a morpholine, a C1-C4 alkoxy group or a halogen-substituted phenyl group. 삭제delete 제8항에 있어서, 약리적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 추가적으로 포함하는 약학적 조성물. The pharmaceutical composition of claim 8, further comprising a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.

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