KR100879831B1

KR100879831B1 - 아미노산 유도체

Info

Publication number: KR100879831B1
Application number: KR1020067018344A
Authority: KR
Inventors: 클라우스 힌터딩; 클레멘스 회게나우어
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2004-03-09
Filing date: 2005-03-08
Publication date: 2009-01-22
Also published as: KR20070019702A

Abstract

본 발명은 신규한 아미노산 유도체, 그의 제조 방법, 그의 용도, 특히 이식에의 용도, 및 이를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

아미노산 유도체, 이식거부, 자가면역질환, 이식편 대 숙주병

Description

아미노산 유도체{AMINO ACID DERIVATIVES}

본 발명은 아미노산 유도체, 그의 제조방법, 그의 용도 및 이를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

구체적으로, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물의 유리 형태 또는 염 형태를 제공한다.

상기 식에서,

R₁은 OH, C₁ _- ₂알콕시 또는 1 내지 6개의 불소 원자로 임의로 치환된 C₁ _- ₆알킬; C_2-6알케닐; 또는 C₂ _- ₆알키닐이고;

R₂는 하기 화학식 a, b 또는 c의 라디칼이며;

(상기 식에서,

R₆은 할로겐, 임의로 치환된 시클로알킬, 임의로 치환된 페닐, 임의로 치환된 헤테로아릴 또는 임의로 치환된 헤테로시클릭 잔기로 임의로 치환된 C_1-12알킬이고, 이때, C₁ _- ₁₂알킬은 하나 이상의 O 또는 C=O로 임의로 단속되며; 상기 페닐, 헤테로아릴, 시클로알킬 및(또는) 헤테로시클릭 잔기는 히드록시; 할로겐; C₁ _- ₄알킬; 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C₁ _- ₄알킬; C₁ _- ₄알콕시; 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C₁ _- ₄알콕시; 시아노; 페닐; 및 히드록시, 할로겐, C₁ _- ₄알킬, 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알콕시, 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C₁ _- ₄알콕시 및 시아노로부터 선택된 치환기 1 내지 5개로 치환된 페닐로부터 선택된 치환기 1 내지 5개로 치환될 수 있고;

R₇은 H, 임의로 치환된 페닐, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴 (여기서, 페닐 및(또는) 헤테로아릴은 독립적으로 히드록시; 할로겐; C₁ _- ₄알킬; 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C₁ _- ₄알킬; C₁ _- ₄알콕시; 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C₁ _- ₄알콕시 및 시아노로부터 선택된 치환기 1 내지 5개로 치환될 수 있음)이고;

X는 O, C=O, S 또는 결합이고;

Z는 N 또는 CH이다.)

R₃는 -A-B-COOH (여기서, A 및 B는 각각 독립적으로 결합, C=O 또는 CDE이고, 이때 D 및 E는 각각 독립적으로 H, 할로겐, C₁ _- ₃알킬, OH이며; 단, A 및 B 둘다 C=O인 것은 아님)이고;

R₄ 및 R₅는 각각 독립적으로 H이거나, 1개, 2개 또는 3개의 할로겐 원자로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬, 또는 아실이다.

알킬 또는 알킬 잔기는 직쇄 또는 분지쇄인, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필 또는 부틸일 수 있다. 알케닐은 예를 들어 비닐일 수 있다. 알키닐은 예를 들어 프로핀-2-일일 수 있다. 시클로알킬은 예를 들어 C₃ _- ₆시클로알킬일 수 있다.

아실은 W-CO 잔기 (여기서, W은 C₁ _- ₆알킬, C₃ _- ₆시클로알킬, 페닐 또는 페닐C₁ _-4알킬임)일 수 있다.

할로겐은 F, Cl 또는 Br, 바람직하게는 F 또는 Cl일 수 있다.

헤테로아릴은 N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 8원 방향족 고리, 예를 들어, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 푸릴, 옥 사졸릴, 이속사졸릴, 티오페닐, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 이미다졸릴 또는 피라졸릴일 수 있다.

헤테로시클릭 잔기는 예를 들어, 테트라히드로푸릴, 테트라히드로피라닐, 아지리디닐, 피페리디닐, 피롤리디닐 및 피페라지닐을 포함하는 3 내지 8원, 바람직하게는 5 내지 8원의 포화 또는 불포화 헤테로시클릭 고리를 의미한다.

화학식 I의 화합물은 유리 형태 또는 염 형태, 예를 들어 염산염, 브롬화수소산염 또는 황산염과 같은 무기산 부가염; 또는 아세테이트, 푸마레이트, 말레에이트, 벤조에이트, 시트레이트, 말레이트, 메탄술포네이트 또는 벤젠술포네이트과 같은 유기산 부가염으로 존재할 수 있고, 카르복실레이트기도 염 형태, 예를 들어 암모늄염 또는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 아연 또는 마그네슘과 같은 금속과의 염 또는 이들의 혼합물로 존재할 수 있다. 화학식 I의 화합물 및 그의 염, 수화물 또는 용매화물도 본 발명의 일부를 구성한다.

화학식 I의 화합물이 분자 내에 비대칭 중심을 가질 경우, 다양한 광학 이성질체가 얻어진다. 본 발명은 또한 거울상이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 및 이들의 혼합물을 포괄한다. 예를 들어, R₁, R₃ 및 NR₄R₅와 결합된 중심 탄소 원자는 R 또는 S 배위일 수 있다. 일반적으로, 하기 3차원 구조를 가지는 화합물이 바람직하다.

또한, 화학식 I의 화합물이 기하학적 이성질체를 포함하는 경우, 본 발명은 cis-화합물, trans-화합물 및 이들의 혼합물을 포괄한다. 상기 언급된 바와 같은 비대칭 탄소 원자 또는 불포화 결합을 가지는 출발 물질, 예를 들어 하기 제시된 화학식 II, III 또는 IV의 화합물에도 이를 동일하게 적용할 수 있다.

화학식 I의 화합물에서, 하기의 특징들이 개별적으로 또는 임의의 하위조합으로 바람직하다.

1. R₁은 CH₃ 또는 CH₂-OH이다;

2. R₃은 CH₂-COOH이다;

3. R₄ 및 R₅ 각각은 수소이다;

4. R₇은 수소, 페닐 또는 티오페닐이다;

5. X는 O 또는 결합이다;

6. R₂가 화학식 a의 라디칼이라면, XR₆은 -(CH₂)₂-CR₁R₃(NR₄R₅)에 대하여 파라 위치이다.

본 발명은 또한 하기 화학식 II의 화합물에 존재하는 보호기를 제거하는 단계 및 필요하다면, 유리 형태로 수득된 화학식 I의 화합물을 원하는 염 형태로 전환하거나 또는 반대로 전환하는 단계를 포함하는, 화학식 I의 화합물의 제조방법을 포함한다.

상기 식에서, R₁, R₂ 및 R₅는 상기 정의된 바와 같고, R₃'은 -A-B-COOR₈ (여기서, A 및 B는 상기 정의된 바와 같고, R₈은 가수분해가능하거나 또는 가수소분해가능한 기이고 R₄'는 아미노 보호기임)이다.

보호기의 제거는 당업계에 알려진 방법에 따라 실시할 수 있다. 아미노 보호기의 제거는 당업계에 알려진 방법, 예를 들어 산성 매질, 예컨대 염산 중의 가수 분해에 의해 통상적으로 실시할 수 있다. 아미노기를 위한 보호기의 예는 예를 들어 문헌["Protective Groups in Organic Synthesis" T. W. Greene, J. Wiley & Sons NY, 2^nd ed., chapter 7, 1991]과 여기에 포함된 참고문헌에 개시된 것과 같이, 예를 들어 벤질, p-메톡시벤질, 메톡시메틸, 테트라히드로피라닐, 트리알킬실릴, 아실, tert-부톡시-카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 9-플루오레닐 메톡시 카르보닐, 트리플루오로아세틸 등이다.

본 발명은 또한, 원하는 잔기 R₆를 도입하기 위해 하기 화학식 III의 화합물을 알킬화하는 단계를 포함하는, X가 O인 화학식 II의 화합물의 제조 방법을 포함한다.

상기 식에서, R₁, R₃', R₄' 및 R₅는 상기 정의된 바와 같고, R₂'는 하기 화학식 a' 또는 b'의 라디칼이다.

[화학식 a']

[화학식 b']

화학식 III의 화합물의 알킬화는 당업계에 알려진 방법, 예를 들어 알킬화제인 R₆-X₃ (여기서, X₃은 메실레이트, 토실레이트, 트리플레이트, 노실레이트 또는 염소, 브롬 또는 요오드와 같은 할로겐임)와의 반응에 의한 친핵성 치환을 통해 실시될 수 있다. 알킬화는 또한 미츠노부 프로토콜 (예를 들어, 문헌[Hughes, Organic Preparations and Procedures International 28, 127-64, 1996 or D. L. Hughes, Org. React. 42, 335, 1992]에 기재된 바와 같음)에 따라 용액 중 또는 고체상 지지체 상 합성법에 따라, 예를 들어 화학식 III의 화합물을 수지에 부착하여 실시할 수 있다. 대안적으로, 예를 들어 폴리스티렌과 같은 수지에 결합된 트리페 닐포스핀 또는 디에틸 아조카르복실레이트가 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 하기 화학식 IV의 화합물에 존재하는 시아노기를 가수분해하는 단계 및 필요하다면, 유리 형태로 수득된 화학식 I의 화합물을 원하는 염 형태로 전환하거나 또는 반대로 전환하는 단계를 포함하는, 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 포함한다.

상기 식에서, R₁, R₂ 및 R₅는 상기 정의된 바와 같고, R₃'는 -A-B-CN이고, R₄'는 아미노 보호기이다.

상기 식들에서, 출발 물질의 제조에 관해서는 특별히 설명하지 않았지만, 상기 화합물들은 알려져 있거나 또는 당업계에 알려진 방법과 유사하게, 또는 하기 실시예에서 개시되는 바와 같이 제조될 수 있다.

하기 실시예들은 본 발명을 예시한다. 융점은 보정하지 않았다.

RT = 실온

DMF = 디메틸포름아미드

HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피

DMSO = 디메틸술폭시드

THF = 테트라히드로푸란

AcOEt = 에틸 아세테이트

실시예 1: (R)-3-아미노-5-(4-헵틸옥시-페닐)-3-메틸-펜탄산

전자파 반응기 중에서, 디옥산 (2 ml) 중 ([(R)-1-시아노메틸-3-(4-헵틸옥시-페닐)-1-메틸-프로필]카르밤산 tert-부틸 에스테르 (136 mg, 0.34 mMol)의 교반된 용액을 HCl (37% 수용액, 1 ml)으로 처리하였다. 혼합물을 160℃에서 1.3시간 동안 가열하였다. 그후 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 감압하에서 농축하였다. H₂0 중 5%, 그후 95% 아세토니트릴 용액 (0.1% 트리플루오로아세트산 포함)으로 용리하는 제조용 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 백색의 비정질 분말로 얻었다.

[(R)-1-시아노메틸-3-(4-헵틸옥시-페닐)-1-메틸-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르의 제조

DMF (5 ml) 중 (R)-4-[2-(4-헵틸옥시-페닐)-에틸]-4-메틸-2,2-디옥소-2λ^*6^*-[1,2,3]옥사티아졸리딘-3-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (174 mg, 0.40 mMol)의 교반된 용액에 시안화나트륨 (94 mg, 1.91 mMol)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 25시간 교반하였다. 추가의 시안화나트륨 (37 mg, 0.76 mMol)를 가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 교반하였다. 그후 반응 혼합물을 AcOEt 및 NaHCO₃ (포화 수용액)의 2상 혼합물 상에 부었다. 수상을 AcOEt로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 건조하고 (Na₂SO₄) 감압하에서 농축하였다. 톨루엔 중 5% AcOEt로 용리하는 칼럼 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 무색 오일로 얻었다.

(R)-4-[2-(4-헵틸옥시-페닐)-에틸]-4-메틸-2,2-디옥소-2λ^*6^*-[1,2,3]옥사티아졸리딘-3-카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조

아세토니트릴/H₂O (9/1, 10 ml) 중 (R)-4-[2-(4-헵틸옥시-페닐)-에틸]-4-메틸-2-옥소-[1,2,3]옥사티아졸리딘-3-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (275 mg, 0.63 mMol)의 교반된 용액에 소듐 퍼이오데이트 (401 mg, 1.88 mMol) 및 루테늄(III) 클 로라이드 (13 mg, 0.06 mMol)을 가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 교반하였다. 추가의 루테늄(III) 클로라이드 (65 mg, 0.30 mMol)를 가하고, 혼합물을 실온에서 65시간 가열하였다. 그후 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과액을 AcOEt 및 Na₂S₂O₃ (포화 수용액)의 2상 혼합물 상에 부었다. 수상을 AcOEt로 3회 추출하였다. 합한 유기층을 건조하고 (Na₂SO₄) 감압하에서 농축하였다. 헵탄 중 5%, 그후 15% AcOEt 용액으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 무색 오일로 얻었다.

(R)-4-[2-(4-헵틸옥시-페닐)-에틸]-4-메틸-2-옥소-[1,2,3]옥사티아졸리딘-3- 카르복실산 tert-부틸 에스테르의 제조

아세토니트릴 (10 ml) 중 티오닐 클로라이드 (0.14 ml, 1.91 mMol)의 교반된 용액을 -40℃로 냉각하였다. 이 온도에서, 아세토니트릴 (5 ml) 중 [(R)-3-(4-헵틸옥시-페닐)-1-히드록시메틸-1-메틸-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (300 mg, 0.76 mMol)의 용액과 피리딘 (0.31 ml, 3.81 mMol)을 차례로 가하였다. 혼합물을 2.5시간 동안 -10℃로 가온되도록 하였다. 그후 반응 혼합물을 AcOEt 및 HCl (1M 수용액)의 2상 혼합물 상에 부었다. 수상을 AcOEt로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 NaHCO₃ (포화 수용액)로 세척한 뒤 건조하고 (Na₂SO₄), 감압하에서 농축하였다. 헵탄 중 5%, 그후 15% AcOEt 용액으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 무색 오일로 얻었다 (2종의 부분입체이성질체, 비율 = 1:1).

[(R)-3-(4-헵틸옥시-페닐)-1-히드록시메틸-1-메틸-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르의 제조

에탄올 (100 ml) 중 [(R)-1-히드록시메틸-3-(4-히드록시-페닐)-1-메틸-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (2.06 g, 6.98 mMol)의 교반된 용액에 탄산 칼륨 (2.90g, 20.8 mMol) 및 메탄술폰산 헵틸 에스테르 (2.04 g, 10.5 mMol)를 가하였다. 혼합물을 환류 온도에서 가열하고, 그 온도에서 6시간 교반하였다. 그후 혼합물을 실온으로 냉각하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 그후 반응 혼합물을 AcOEt 및 HCl (1M 수용액)의 2상 혼합물 상에 부었다. 수상을 AcOEt로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 NaHCO₃ (포화 수용액)으로 세척하고, 건조하고 (Na₂SO₄) 감압하에서 농축하였다. 톨루엔 중 8% AcOEt 용액으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 무색 오일로 얻었다.

실시예 2: (R)-2-아미노-4-(4-헵틸옥시-페닐)-2-메틸-부탄산

CH₂Cl₂ (2 ml) 중 (R)-2-tert-부톡시카르보닐아미노-4-(4-헵틸옥시-페닐)-2-메틸-부티르산 (43 mg, 0.11 mMol)의 교반된 용액에 트리플루오로아세트산 (0.1 ml)을 가하였다. 혼합물을 실온에서 8시간 교반하였다. 교반 후, 반응 혼합물을 감압하에서 농축하였다. CH₂Cl₂ 중 5%, 그후 25% MeOH 용액으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 무색 오일로 얻었다.

(R)-2-tert-부톡시카르보닐아미노-4-(4-헵틸옥시-페닐)-2-메틸-부티르산의 제조

tert-부탄올 (1 ml) 및 10% KH₂PO₄ 수용액 (1 ml) 중 [(R)-1-포르밀-3-(4-헵틸옥시-페닐)-1-메틸-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (103 mg, 0.26 mMol)의 교반된 용액에 2-메틸-2-부텐 (0.66 ml, 5.27 mMol) 및 소듐 클로라이트 (59 mg, 0.52 mMol)을 가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 교반하였다. 그후 반응 혼합물을 AcOEt 및 HCl (1M 수용액)의 2상 혼합물 상에 부었다. 수상을 AcOEt로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 소량의 NaHCO₃ (포화 수용액)으로 세척하고, 건조한 뒤 (Na₂SO₄), 감압하에서 농축하였다. CH₂Cl₂ 중 5% MeOH 용액으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 무색 오일로 수득하였다.

[(R)-1-포르밀-3-(4-헵틸옥시-페닐)-1-메틸-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르의 제조

CH₂Cl₂ (20 ml) 중 [(R)-1-히드록시메틸-3-(4-히드록시-페닐)-1-메틸-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (1.98 g, 5.03 mMol)의 교반된 용액에 N-모르폴 린-N-옥시드 (884 mg, 7.54 mMol) 및 테트라-n-프로필암모늄 퍼루테네이트 (177 mg, 0.50 mMol)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 교반하였다. 그후 혼합물을 SiO₂의 쇼트 패트 상에서 디에틸 에테르로 용리하여 여과하였다. 여과액을 감압하에서 농축하여 표제 화합물을 얻었다. 조 생성물은 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하기에 충분할 정도의 순도를 가졌다.

실시예 3: (R)-4-아미노-6-(4-헵틸옥시-페닐)-4-메틸-헥산산

CH₂Cl₂ (2 ml) 중 (R)-4-tert-부톡시카르보닐아미노-6-(4-헵틸옥시-페닐)-4-메틸-헥산산 (24 mg, 0.06 mMol)의 교반된 용액에 트리플루오로아세트산 (0.1 ml)을 가하였다. 혼합물을 실온에서 6.5시간 교반하였다. 교반 후, 반응 혼합물을 감압하에서 농축하여 표제 화합물을 백색의 비정질 분말로 얻었다. 조 생성물은 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하기에 충분할 정도의 순도를 가졌다.

(R)-4-tert-부톡시카르보닐아미노-6-(4-헵틸옥시-페닐)-4-메틸-헥산산의 제조

AcOEt (10 ml) 중 (E)-(R)-4-tert-부톡시카르보닐아미노-6-(4-헵틸옥시-페닐)-4-메틸-헥스-2-엔산 (53 mg, 0.12 mMol)의 교반된 용액에 목탄 상의 팔라듐 (10 mg, 10%)을 가하였다. 반응물을 H₂ 대기하, 실온에서 17시간 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고, 여과액을 감압하에서 농축하여 표제 화합물을 무색 오일로 얻었다. 조 생성물은 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하기에 충분할 정도의 순도를 가졌다.

(E)-(R)-4-tert-부톡시카르보닐아미노-6-(4-헵틸옥시-페닐)-4-메틸-헥스-2-엔산의 제조

메탄올 (0.5 ml), THF (0.5 ml) 및 물 (0.5 ml) 중 (E)-(R)-4-tert-부톡시카르보닐아미노-6-(4-헵틸옥시-페닐)-4-메틸-헥스-2-엔산 에틸 에스테르 (56 mg, 0.12 mMol)의 교반된 용액에 수산화리튬 (14 mg, 0.61 mMol)을 가하였다. 혼합물을 실온에서 3.5시간 교반하였다. 그후 반응 혼합물을 AcOEt 및 HCl (1M 수용액) 의 2상 혼합물 상에 부었다. 수상을 AcOEt로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 소량의 NaHCO₃ (포화 수용액)으로 세척하고 건조한 뒤 (Na₂SO₄), 감압하에서 농축하여 표제 화합물을 얻었다. 조 생성물은 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하기에 충분할 정도의 순도를 가졌다.

(E)-(R)-4-tert-부톡시카르보닐아미노-6-(4-헵틸옥시-페닐)-4-메틸-헥스-2-엔산 에틸 에스테르

-78℃에서, 건조 THF (7ml) 중 (디에톡시-포스포릴)-아세트산 에틸 에스테르 (429 mg, 1.92 mMol)의 교반된 용액에 n-부틸리튬 (0.66 ml, 헥산 중 2.5M 용액, 1.66 mMol)을 가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1시간 교반하였다. 교반 후, THF (4 ml) 중 [(R)-1-포르밀-3-(4-헵틸옥시-페닐)-1-메틸-프로필]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (500 mg, 1.28 mMol)의 용액을 가하고, -78℃에서 1.5시간 교반하였다. 혼합물이 실온으로 가온되도록 한 뒤, 실온에서 2시간 교반하였다. 그후 반응 혼합물을 AcOEt 및 NaHCO₃ (포화 수용액)의 2상 혼합물 상에 붓고, 수상을 AcOEt로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 건조하고 (Na₂SO₄) 감압하에서 농축하였다. 톨루엔 중 4% AcOEt로 용리하는 칼럼 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 무색 오일로 얻었다.

화학식 I의 화합물의 유리 형태 또는 제약적으로 허용가능한 염 형태는 가치있는 약리학적 특성, 예를 들어, 시험관내 및 생체내 시험에서 나타나는 바와 같이 림프구 재순환 조절 특성을 보이며, 따라서, 치료에 사용될 수 있다.

A. 시험관 내

화학식 I의 화합물은 하기 검정법에서 측정된 바와 같은 개별적인 인간 S1P 수용체에 대한 결합 친화성을 가진다.

스핑고신 -1- 포스페이트 ( S1P ) 수용체에 대한 양상

화합물의 아고니스트 활성을 인간 S1P 수용체인 EDG-1(S1P₁), EDG-3 (S1P₃), EDG-5 (S1P₂), EDG-6 (S1P₄) 및 EDG-8(S1P₅) 상에 시험하였다. 기능적 수용체 활성화를, 적합한 인간 S1P 수용체를 안정적으로 발현하는 형질감염된 CHO 또는 RH7777 세포로부터 제조된 막 단백질에 화합물-유도되어 결합된 GTP[γ-³⁵S]를 정량화하여 평가하였다. 사용된 검정법은 SPA (섬광 근접 측정법)이다. 간략하게, DMSO에 용해된 화합물을 계대 희석하여, 50 mM Hepes, 100 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 μM GDP, 0.1% 지방 불포함 BSA 및 0.2 nM GTP[γ-³⁵S] (1200 Ci/mmol)의 존재하에서 SPA-비드 (아머샴-파마시아)에 고정화된 S1P 수용체 발현 막 단백질 (10-20 ㎍/웰)에 가하였다. 96웰 마이크로티터평판, 실온에서 120분간 인큐베이션 후, 비결합 GTP[γ-³⁵S]를 원심 분리 단계로 제거하였다. 막에 결합한 GTP[γ-³⁵S]에 의해 유발되는 SPA 비드의 발광을 TPO 판 계수기 (팩커드)로 정량화하였다. 표준 곡선 맞춤 프로그램을 이용하여 EC₅₀를 계산하였다. 이 검정에서, 화학식 I의 화합물은 S1P₁ 수용체에 대해 50 nM 미만의 결합 친화성을 가졌다.

B. 생체 내: 혈중 림프구 고갈

화학식 I의 화합물 또는 비히클을 래트에게 위관으로 경구투여하였다. 제-1일에, 혈액 모니터링을 위해 꼬리에서 혈액을 수득하여, 개체별 기저값을 얻고, 적용 2, 6, 24, 48 및 72시간 후의 값을 얻었다. 이 검정법에서, 화학식 I의 화합물을 0.03 내지 3 mg/kg의 양으로 투여하였을 때, 말초 혈액 림프구를 고갈시켰다. 예를 들어, 말초 혈액 림프구의 50%가 넘게 고갈되는 결과를 수득하였다.

실시예 1: 3.2 mg/kg 경구투여, 6시간 후

따라서, 화학식 I의 화합물은 림프구 상호작용에 의해 매개되는 질병 또는 장애, 예를 들어, 이식, 예컨대 세포, 조직 또는 장기 동종 또는 이종이식편의 급성 또는 만성 거부 또는 지연된 이식편 작용, 이식편 대 숙주병, 자가면역질환, 예를 들어, 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 하시모토 갑상선염, 다발경화증, 중 증근육무력증, I 또는 II형 당뇨병 및 이에 연관된 장애, 혈관염, 악성 빈혈, 쇼그렌 증후군, 포도막염, 건선, 그레이브스 안병증, 원형탈모증 등, 알레르기 질환, 예를 들어, 알레르기성 천식, 아토피 피부염, 알레르기성 비염/결막염, 알레르기성 접촉 피부염, 임의로 선행 이상반응을 동반하는 염증성 질환, 예를 들어, 염증성 장질환, 크론병 또는 궤양대장염, 내인천식, 염증성 폐 손상, 염증성 간 손상, 염증성 사구체 손상, 죽상동맥경화증, 골관절염, 자극 접촉 피부염 및 추가의 습진 피부염, 지루 피부염, 면역 매개 장애의 피부 증상, 염증성 안질환, 각막결막염, 심근염 또는 간염, 허혈/재관류 손상, 예를 들어, 심근경색증, 뇌졸중, 장 허혈, 신부전 또는 출혈성 쇼크, 외상성 쇼크, 혈관신생, 알츠하이머병, 암, 예를 들어, 유방암, T 세포 림프종 또는 T 세포 백혈병, 감염성 질환, 예를 들어, 독성 쇼크 (예를 들어, 초항원에 의한 유도), 패혈 쇼크, 성인성 호흡곤란 증후군 또는 바이러스 감염, 예를 들어, AIDS, 바이러스성 간염, 만성 박테리아 감염, 또는 노인성 치매의 치료 및(또는) 예방에 유용하다. 세포, 조직 또는 기관 전체 이식의 예로는 예를 들어, 이자섬, 줄기세포, 골수, 각막 조직, 신경 조직, 심장, 폐, 심장-폐 조합, 신장, 간, 장, 이자, 기관 또는 식도를 포함한다. 상기에서와 같은 사용을 위해, 필요한 투여량은 물론 투여 방식, 치료할 특정 증상 및 원하는 효과에 따라 달라질 것이다.

일반적으로, 체중 kg 당 약 0.03 내지 2.5 mg의 일일 투여량으로 전신에 만족할만한 결과가 얻어지는 것으로 나타났다. 보다 큰 포유류, 예를 들어 인간에게서 제시된 일일 투여량은 약 0.5 mg 내지 약 100 mg의 범위이고, 편리하게는, 예를 들어, 1일 4회까지 소분한 투여량으로 또는 서방형으로 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 적절한 단위 투여형은 약 0.1 내지 50 mg의 활성 성분을 포함한다.

화학식 I의 화합물은 임의의 통상적인 경로, 특히, 장관적으로, 예를 들어 정제 또는 캡슐 형태로 경구적으로, 또는 예를 들어 주사가능한 용액 또는 현탁액 형태로 비경구적으로, 예를 들어, 로션, 젤, 연고 또는 크림 형태로 국소적으로, 비내 또는 좌약 형태로 투여될 수 있다. 화학식 I의 화합물의 유리 형태 또는 제약적으로 허용가능한 염 형태와 함께 제약적으로 허용가능한 담체 또는 희석제 1종 이상을 포함하는 제약 조성물은 통상의 방법으로 제약적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 혼합하여 제조할 수 있다.

화학식 I의 화합물은 유리 형태 또는 제약적으로 허용가능한 염 형태, 예를 들어 상기 제시된 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 이러한 염은 종래의 방법으로 제조될 수 있고, 자유 화합물과 동일한 크기의 활성을 나타낸다.

전술한 바에 따라, 본 발명은 추가로 다음을 제공한다.

1.1 상기 제시한 바와 같은 림프구에 의해 매개되는 장애 또는 질환의 치료를 필요로 하는 대상에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애 또는 질환의 예방 또는 치료 방법.

1.2 상기 제시한 바와 같은 급성 또는 만성 이식거부 또는 T 세포 매개 염증성 질환 또는 자가면역질환의 치료를 필요로 하는 대상에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질 환의 예방 또는 치료 방법.

2. 상기 1.1 또는 1.2에 제시한 바와 같은 방법에서 약제로 사용되는 화학식 I의 화합물의 유리 형태 또는 제약적으로 허용가능한 염.

3. 화학식 I의 화합물의 유리 형태 또는 그의 제약적으로 허용가능한 염 및 제약적으로 허용가능한 희석제 또는 이를 위한 담체를 포함하고, 상기 1.1 또는 1.2와 같은 방법에서 사용되는 제약 조성물.

4. 상기 1.1 또는 1.2과 같은 방법에서 사용되는 제약 조성물의 제조에 사용되는 화학식 I의 화합물의 유리 형태 또는 그의 제약적으로 허용가능한 염.

화학식 I의 화합물은 활성 성분 단독으로 또는 예를 들어 보조약으로서 다른 약제, 예를 들어, 급성 또는 만성 동종 또는 이종이식 거부 또는 염증성 또는 자가면역질환을 위해 예컨대 면역억제제 또는 면역조절제 또는 기타 항염증제와 함께, 또는 화학요법제, 예를 들어 악성 세포 항증식제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 화학식 I의 화합물은 칼시뉴린 억제제, 예를 들어, 시클로스포린 A, FK 506 또는 ISA_TX247; mTOR 억제제, 예를 들어, 라파미신, 40-O-(2-히드록시에틸)-라파미신, CCI779, ABT578, AP23573, AP23464, AP23675, AP23841, TAFA93, 바이오리무스 7 또는 바이오리무스 9; 면역억제 특성을 가지는 아스코미신, 예를 들어, ABT281, ASM981 등; 코르티코스테로이드; 시클로포스파미드; 아자티오프렌; 메토트렉세이트; 레플루노미드; 미조리빈; 미코페놀산; 미코페놀레이트 모페틸; 15-데옥시스페르구알린 또는 면역억제성 상동체, 유사체 또는 그의 유도체; 면역억제성 모노클로 날 항체, 예를 들어 백혈구 수용체에 대한 모노클로날 항체, 예를 들어, MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD58, CD80, CD86 또는 이들의 리간드; 다른 면역조절 화합물, 예를 들어 CTLA4의 세포외 도메인의 적어도 일부를 가지는 재조합 결합 분자 또는 그의 돌연변이체, 예를 들어, 비-CTLA4 단백질 서열에 결합된, CTLA4의 적어도 세포외 부분을 가지는 재조합 결합 분자 또는 그의 돌연변이체, 예를 들어, CTLA4lg (예를 들어, ATCC 68629로 명명) 또는 그의 돌연변이체, 예를 들어, LEA29Y; 부착 분자 억제제, 예를 들어, LFA-1 길항제, ICAM-1 또는 -3 길항제, VCAM-4 길항제 또는 VLA-4 길항제; 또는 화학요법제, 예를 들어, 파클리탁셀, 겜시타빈, 시스플라티눔, 독소루비신 또는 5-플루오로우라실; 또는 항감염제와 조합하여 사용될 수 있다.

화학식 I의 화합물이 다른 면역억제제/면역조절제, 항염증제, 화학요법제 또는 항감염제와 함께 투여되는 경우, 함께 투여되는 면역억제/면역조절, 항염증, 화학요법 또는 항감염성 화합물은 물론 사용되는 병용 투여하는 약물의 종류, 예컨대 스테로이드 또는 칼시뉴린 억제제인지 여부, 사용하는 특정 약제, 치료할 증상 등에 따라 변할 수 있다. 전술한 바에 따라, 본 발명은 추가의 국면에서 다음을 제공한다.

5. 예를 들어, 동시에 또는 순차적으로 화학식 I의 화합물의 치료적으로 유효하고 비독성인 양 및 1종 이상의 제2 약제, 예를 들어, 상기 제시된 바와 같은 면역억제제, 면역조절제, 항염증제 또는 화학요법제를 함께 투여하는 것을 포함하는 상기 정의된 바와 같은 방법.

6. a) 본원에 개시된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 유리 형태 또는 제약적으로 허용가능한 염 형태; 및

b) 1종 이상의 병용투여제제, 예를 들어, 면역억제제, 면역조절제, 항염증제, 화학요법제 또는 항감염제

를 포함하는 제약 조합물, 예를 들어 키트. 키트는 그 투여를 위한 지침서를 포함할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "함께 투여" 또는 "조합 투여" 등은 선택한 치료제를 단일 환자에게 투여하는 것을 포괄하며, 상기 제제가 반드시 동일 경로에 의한 투여 또는 동시적인 투여일 필요는 없는 치료 계획을 포함하도록 의도되는 것이다.

본원에서 사용된 용어 "제약 조합물"은 1종 이상의 활성 성분을 혼합 또는 조합하여 제조된 생성물을 의미하고, 활성 성분의 결합 조합물 또는 비결합 조합물 모두를 포함한다. 용어 "결합 조합물"이란 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물과 병용치료제가 단일의 독립체 또는 투여형으로 둘다 동시에 환자에게 투여되는 것을 의미한다. 용어 "비결합 조합물"이란 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물과 병용치료제가 분리된 독립체로서 동시에, 또는 특정의 시간 제한 없이 순차적으로 환자에게 투여되는 것을 의미하고, 여기서 이러한 투여는 환자 체내에 치료적으로 유효한 수준의 두 화합물을 제공하는 것이다. 비결합 조합물은 또한 3종 이상의 활성 성분의 투여와 같은 칵테일 치료법에도 적용된다.

Claims

유리 형태의 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염.

<화학식 I>

상기 식에서,

R₁은 OH, C_1-2알콕시 또는 1 내지 6개의 불소 원자로 치환 또는 비치환된 C_1-6알킬; C_2-6알케닐; 또는 C_2-6알키닐이고;

R₂는 하기 화학식 a, b 또는 c의 라디칼이며;

<화학식 a>

<화학식 b>

<화학식 c>

(상기 식에서,

R₆은 할로겐, 또는 치환 또는 비치환된 C_3-6시클로알킬로 치환 또는 비치환된 C_1-12알킬이고, 이때, C_1-12알킬은 하나 이상의 O 또는 C=O로 단속될 수 있으며; 상기 C_3-6시클로알킬은 히드록시; 할로겐; C_1-4알킬; 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C_1-4알킬; C_1-4알콕시; 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C_1-4알콕시; 및 시아노로부터 선택된 치환기 1 내지 5개로 치환될 수 있고;

R₇은 H, 또는 히드록시; 할로겐; C_1-4알킬; 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C_1-4알킬; C_1-4알콕시; 1 내지 5개의 불소 원자로 치환된 C_1-4알콕시 및 시아노로부터 선택된 치환기 1 내지 5개로 치환 또는 비치환된 페닐이고;

X는 O, C=O, S 또는 결합이고;

Z는 N 또는 O이다.)

R₃는 -A-B-COOH (여기서, A 및 B는 각각 독립적으로 결합, C=O 또는 CDE이고, 이때 D 및 E는 각각 독립적으로 H, 할로겐, C_1-3알킬, OH이며; 단, A 및 B 둘다 C=O인 것은 아님)이고;

R₄ 및 R₅는 각각 독립적으로 H이거나, 1개, 2개 또는 3개의 할로겐 원자로 치환 또는 비치환된 C_1-4알킬, 또는 아실 (여기서, 아실은 C_1-6알킬-CO 잔기임)이며;

단, R₄가 H이고, R₅가 H이고, R₃이 COOH이고, R₂가 화학식 a의 라디칼이며, R₇이 H일때,

i) R₁이 CH₂OH이고, XR₆가 비치환된 C_1-12알킬 라디칼이면, XR₆은 (CH₂)₂-CR₁R₃(NR₄R₅)에 파라 위치가 아니거나;

ii) R₁이 CH₃이고, XR₆가 비치환된 OC_2-12알킬 라디칼이면, XR₆은 (CH₂)₂-CR₁R₃(NR₄R₅)에 메타 위치가 아니다.
하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 염.

<화학식 II>

상기 식에서, R₁ 내지 R₃ 및 R₅는 제1항에 정의된 바와 같고, R₄'는 벤질, p-메톡시벤질, 메톡시메틸, 테트라히드로피라닐, 트리알킬실릴, 아실 (여기서, 아실은 C_1-6알킬-CO 잔기임), tert-부톡시-카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 9-플루오레닐 메톡시 카르보닐, 및 트리플루오로아세틸로부터 선택되는 보호기이다.
제1항에 있어서, (R)-3-아미노-5-(4-헵틸옥시-페닐)-3-메틸-펜탄산, (R)-4-아미노-6-(4-헵틸옥시-페닐)-4-메틸-헥산산 및 (R)-2-아미노-4-(4-헵틸옥시-페닐)-2-메틸-부탄산으로부터 선택되는 화합물.
제3항에 따른 화합물의 유리 형태 또는 제약적으로 허용가능한 염 형태 및 제약적으로 허용가능한 희석제 또는 담체 1종 이상을 함께 포함하는, 동종이식 거부의 치료 또는 예방용 제약 조성물.
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화학식 II의 화합물에 존재하는 보호기를 제거하는 단계 및 필요하다면, 유리 형태로 수득된 화학식 I의 화합물을 원하는 염 형태로 전환하거나 또는 염 형태로 수득된 화학식 I의 화합물을 유리 형태로 전환하는 단계를 포함하는, 제1항에 따른 화합물의 제조 방법.

<화학식 II>

상기 식에서, R₁, R₂ 및 R₅는 제1항에 정의된 바와 같고, R₃'는 -A-B-COOR₈ (여기서, A 및 B는 제1항에 정의된 바와 같고, R₈은 가수분해가능하거나 또는 가수소분해가능한 기임)이고, R₄'는 제2항에 정의된 바와 같은 아미노 보호기이다.
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