KR100797016B1 - 면역증강 활성을 나타내는 인삼다당체 고농축정제액과 그제조방법 - Google Patents

면역증강 활성을 나타내는 인삼다당체 고농축정제액과 그제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 면역증강 활성을 나타내는 인삼다당체 고농축정제액과 그 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 인삼다당체 고농축정제액은, 수삼 또는 건삼을 이용하여 인삼추출액을 제조하고, 인삼박을 분리.제거한 다음, 활성탄 여과장치를 통과시킨 후, 농축시키고, 이 농축액에 95 % 주정알코올을 넣고 교반하여 인삼다당체 조성물을 제조하고, 상온에 방치하여 침전된 인삼다당체 침전물을 회수한 후, 정제수에 용해시킨 후, 농축하여 인삼다당체 용액을 제조하고, 마이크로 여과장치(micro filtering system), 울트라 여과장치(ultra filtering system), 나노 여과장치(nano filtering system)를 순차적으로 통과시켜 인삼다당체를 3차에 걸져 정제한 다음, 50 ~ 60 브릭스로 농축시킨 후, 다시 숙성시키면서 65 ~ 70 브릭스로 고농축시켜 인삼다당체 고농축정제액을 제조하는 것으로 구성된다.
본 발명에 의해 면역증강 활성이 뛰어난 인삼다당체 고농축정제액과 그 제조방법이 제공되고, 인삼다당체 고농축정제액이 유효성분으로 포함된 면역관련 질환의 예방 및 개선용 조성물이 제공된다.
인삼다당체, 농축, 정제, 면역증강, 예방

Description

면역증강 활성을 나타내는 인삼다당체 고농축정제액과 그 제조방법 {PURIFIED SUBSTANCES OF PANAX GINSENG POLYSACCHARIDES HIGH-CONCENTRATE HAVING IMMUNOSTIMULATING ACTIVITY, AND THE MANUFACTURING METHOD}
도 1은 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 제조공정도
본 발명은 면역증강 활성을 나타내는 인삼다당체 고농축정제액과 그 제조방법에 관한 것이다.
인삼은 수 천년 전부터 항피로, 항스트레스, 면역기능 향상, 혈당강하의 목적으로 한방에서 애용되어 오던 한국을 대표하는 약용식물이다.
종래에 인삼이 인정받아 온 주요 성분은 사포닌이다.
따라서, 종래에는 인삼의 사포닌 성분 중 새롭고 효과도 더욱 향상되도록 가공된 인삼을 제조하기 위한 연구가 주를 이루었고, 이로 인해 홍삼 및 흑삼을 개발하여 일반 수삼 및 건삼에서 발견할 수 없는 종류의 사포닌 성분을 찾아내고, 더욱 효능을 향상시키기 위한 끊임없는 노력이 있어 왔다.
최근에는 인삼으로부터 사포닌 계열이 아닌 비사포닌 계열의 물질인 인삼다당체를 분리하여 그 우수한 효능을 알리고 인정받고 있다.
인삼다당체는 비사포닌 계열의 물질로서, 인삼에서 분자량의 크기와 이온 강도의 차이에 의한 분리를 통해 얻어지는 물질로서 고분자 다당류의 복합체이다.
상기와 같은 인삼다당체는 조혈 촉진작용, 골수 방어작용, 암세포 살해 면역세포 생성작용, 방사선 민감작용, 혈당 강하작용 등 다양한 효과가 알려져 있다.
한국등록특허공보 특0144130(면역증강 효과가 있는 인삼다당체 "진산")에는, 글루코스 및 갈락토스로 구성된 6탄당 40.0 ~ 50.0 %, 산성당인 갈락투론산 41.0 ~ 44.8 % 및 리진, 히스티딘, 아르기닌, 아사파르트산, 트레오닌, 세린, 글루탐산, 프롤린, 글리신, 알라닌, 발린, 메티오닌, 이소로이신, 로이신, 티로신, 히스테인 및 페닐알라닌으로 구성된 단백질 3.7 ~ 5.2 %를 함유하며, 분자량이 50,000 ~ 150,000 인 물질로서, 면역증강 효과를 나타내는 인삼다당체에 관한 것이 공개되어 있다.
또, 한국등록특허공보 10-0361187(조혈 촉진작용, 골수 방어작용, 암세포 살해 면역세포생성작용 및 방사선 민감작용이 우수한 인삼 다당체)에는, 인삼 뿌리 분말을 메탄올로 추출하여 메탄올 불용성 잔사를 음건한 후, 증류수로 추출하여 얻은 수 가용성 분획을 동결 건조시키고, 상기 수득물에 에탄올을 가해 에탄올 불용성 분획을 수득한 후, 이를 셀룰로오스 투석막으로 투석시켜 다당체를 획득한 후, 세파크릴 S-500 컬럼 크로마토그래피하여 6개의 분획을 얻고, 이들을 각각 DEAE-셀 룰로오스 컬럼 크로마토그래피하여 순수히 분리정제한 인삼 다당체로, 조혈 촉진작용, 골수 방어작용, 암세포 살해 면역세포 생성작용 및 방사선 민감작용을 갖는 인삼 다당체에 관한 것이 공개되어 있다.
또한, 한국공개특허공보 10-2006-0095599(감염 방어능력 및 패혈증 치료능력을 지닌 인삼추출 다당체)에는, 인삼 뿌리 분말 1 중량부에 대해 2~4 중량부의 메탄올로 추출한 후, 메탄올 불용성 잔사를 3~5 중량부의 증류수로 추출하고, 동결건조시킨 후, 에탄올을 가하여 40% 에탄올 불용성 분획을 수득한 후, 이를 셀룰로오스 투석막으로 투석시켜 내부 분획을 세파크릴 S-500 크로마토그래피, DEAE-셀룰로오스 컬럼 크로마토그래피하여 분리 정제한 다당체로 글루코피라노오스가 α(1->6)으로 결합한 주사슬에 글루코피라노오스가 α(1->4) 결합한 가지사슬을 가진 구조를 지닌 감염 방어능력 및 패혈증 치료능력을 지닌 인삼 다당체에 관한 것이 공개되어 있다.
그러나, 상기의 종래기술들은 인삼에서 분리된 다당체의 양이 극히 적으며, 대량생산을 하기 어려워 산업상 이용할 수 있는 범위가 작고, 그 정제효율 또한 높지 않아 그 효과가 떨어지는 문제가 있었다.
본 발명은 상기의 문제를 해결하기 위해, 인삼에서 인삼다당체를 효율적으로 분리하고, 이 인삼다당체를 고순도로 정제한 인삼다당체 고농축정제액을 제공하고, 그 인삼다당체 고농축정제액을 대량생산을 할 수 있는 제조방법을 제공하는데 목적 이 있다.
또한, 본 발명은 인삼다당체 고농축정제액이 유효성분으로 포함된 면역관련 질환의 예방 및 개선용 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.
또한, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 포함된 기능성 식품, 건강보조식품, 음료조성물, 식품첨가제, 차류, 과자류 등을 제공하여 인삼가공산업의 발전에 이바지하는데 목적이 있다.
본 발명은 면역증강 활성을 나타내는 인삼다당체 고농축정제액과 그 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 인삼다당체 고농축정제액은, 수삼 또는 건삼을 물에 세척한 다음, 20 ~ 24 시간 동안 90 % 의 고순도 주정알코올에 담가둔 후, 세정하여 준비하는 제1공정, 세정된 인삼을 분쇄하여 인삼절편으로 제조하는 제2공정, pH 5.5 ~ 6.5의 약산성용액에 제2공정에서 준비한 인삼절편을 넣고 추출하여 인삼추출물을 제조하는 제3공정, 이 인삼추출물을 원심탈수기나 필터프레스를 사용하여 인삼박을 분리.제거하는 제4공정, 제4공정을 거친 추출물을 초고속 원심분리장치(15,000 ~ 20,000 rpm)를 통과시켜 인삼추출액 내의 단백질, 탄수화물, 섬유질을 제거하는 제5공정, 제5공정을 거친 추출액을 활성탄 여과장치를 통과시켜 페놀성 화합물, 유기성물질, 중금속을 흡착, 제거하는 제6공정, 제6공정을 거친 추출액을 감압농축장치에서 60 ~ 80 ℃로 30 ~ 50 브릭스로 농축시키는 제7공정, 제7공정을 거친 농축액에 95 % 주정알코올을 넣고 교반하여 사포닌 및 유기성 화합물을 분리.제거하여 인삼다당체 조성물을 제조하는 제8공정, 제8공정을 거친 인삼다당체 조성물을 상온에 방치하여 알코올층을 제거하고, 침전된 인삼다당체 침전물을 회수하는 제9공정, 제9공정에서 회수된 인삼다당체 침전물을 정제수에 용해시킨 후, 농축하여 인삼다당체 용액을 제조하는 제10공정, 마이크로 여과장치(micro filtering system)를 이용하여 인삼다당체 1차정제액을 제조하는 제11공정, 울트라 여과장치(ultra filtering system)를 이용하여 인삼다당체 2차정제액을 제조하는 제12공정, 나노 여과장치(nano filtering system)를 이용하여 인삼다당체 3차정제액을 제조하는 제13공정, 제13공정의 3차정제액을 감압 농축장치를 이용하여 45 ~ 80 ℃ 범위 내에서 50 ~ 60 브릭스로 농축하여 인삼다당체 정제농축액을 제조하는 제14공정, 제14공정의 정제농축액을 농축 숙성장치를 이용하여 65 ~ 70 브릭스로 고농축하는 제15공정을 거쳐 인삼다당체 고농축정제액을 제조하는 것으로 구성된다.
상기와 같은 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액은 면역증강 활성이 뛰어나므로, 인삼다당체 고농축정제액이 유효성분으로 포함된 면역관련 질환의 예방 및 개선용 조성물을 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 포함된 기능성식품, 건강보조식품, 음료조성물, 식품첨가제, 차류, 과자류 등 다양한 인삼가공식품을 제조할 수 있다.
종래의 인삼다당체는, 인삼 뿌리 분말을 메탄올로 추출하여 메탄올 불용성 잔사를 음건한 후, 증류수로 추출하여 얻은 분획물을 동결 건조시키고, 여기에 에탄올을 가해 에탄올 불용성 분획을 수득한 후, 이를 셀룰로오스 투석막으로 투석시켜 다당체를 획득한 후, 세파크릴 S-500 컬럼 크로마토그래피하여 여러 개의 분획을 얻고, 이들을 각각 DEAE-셀룰로오스 컬럼 크로마토그래피하여 분리정제했다.
그러나, 상기와 같은 방법으로는 대량생산하기 어려운 문제가 있고, 그 수득률이 2.0 ~ 2.2 % 정도로 미비한 실정이고, 정제효율이 떨어져 효과가 떨어지는 문제가 있었다.
이에, 본 발명의 발명자들은 인삼에서 인삼다당체를 효율적으로 분리하여 수득률을 높이고, 정제율을 높여 그 생리활성도 높이며, 대량생산까지 가능하도록 하기 위해 다년간 수많은 시행착오를 겪으며 본 발명을 완성하였다.
본 발명에서 인삼다당체를 효율적으로 추출하여 분리정제하기 위해 가장 먼저 세정이 제대로 이루어져야 한다.
따라서, 수삼 또는 건삼을 물에 세척한 다음, 20 ~ 24 시간 동안 90 % 이상의 고순도 주정알코올에 담가둔 다음, 주정알코올에 담가두었던 인삼을 꺼내어 샤워식 환류장치를 이용하여 환류시켜 세정하면 1차적으로 잔류농약이나 불순물을 효율적으로 제거할 수 있었다.
이렇게 깨끗하게 세정한 인삼을 분쇄하여 2 ~ 5 ㎜의 절편을 만들어 이용하였다.
인삼 내에 함유된 유용성분들 중에서 다당류 성분은 산으로 가수분해하여 그 주요성분인 갈락투론산(galacturonic acid), 글루코스(glucose), 갈락토 스(galactose)를 추출하기 위해 약산성용액을 이용하여 인삼추출물을 제조하였다.
즉, 물에 구연산나트륨, 초산나트륨, 탄산마그네슘, 황산마그네슘 중 선택된 1종을 넣고 pH가 5.5 ~ 6.5가 되도록 약산성용액을 제조하고, 이 약산성용액을 60 ~ 100 ℃로 2 시간 동안 가열한 후, 준비한 인삼절편을 첨가하여 혼합한 다음, 6 시간 동안 교반하면서 추출하여 인삼추출물을 제조하면 효율적으로 인삼다당류 성분이 추출된다는 것을 알게 되었다.
이때 사용하는 약산성용액은 인삼절편의 중량대비 4 ~ 10 배의 양을 사용하는 것이 가장 적절하였다.
이렇게 추출한 인삼추출물에서 인삼박을 분리하기 위해 원심탈수기나 필터프레스를 사용하여 인삼박을 제거하였다.
그 다음, 인삼박이 제거된 인삼추출액에서 고분자 물질인 단백질, 탄수화물, 섬유질, 전분을 제거하기 위해 15,000 ~ 20,000 rpm의 초고속 원심분리장치를 통과시켜 상기의 고분자 물질들을 원심력에 의해 밖으로 토출되도록 원심분리하였다.
원심분리한 상기의 추출액에서 페놀성 화합물, 단백질, 아미노산, 탄수화물, 유기산, 중금속 등을 흡착, 제거시키도록 활성탄 여과장치를 이용하였다.
이때, 사용하는 활성탄은, 가성소다 또는 계면활성제를 0.4 %로 희석하여 준비한 알칼리용액에 준비한 활성탄을 넣고 2 ~ 4 시간 동안 50 ~ 60 ℃로 가열한 후, 2 ~ 5회 반복세척하여 알칼리 성분을 완전히 제거한 후, 건조시킨 다음, 초음파 세척기를 이용하여 음파 세척하여 여과 및 흡착능력을 향상시킨 활성탄을 사용한 활성탄 여과장치를 이용하는 것이 더욱 효과가 뛰어났다.
이 활성탄 여과장치를 통과한 추출액을 감압농축장치를 이용하여 60 ~ 80 ℃에서 수분을 증발시켜 30 ~ 50 브릭스로 농축시켰다.
이 농축액에서 인삼다당체 외의 물질인 사포닌과 유기성 화합물(탄수화물, 단백질, 아미노산, 폴리아세틸렌 성분, 알칼로이드 성분, 비타민)을 용해도 차이를 이용하여 분리하기 위해 순도 95 % 이상의 주정알코올을 이용하였다.
즉, 상기 농축액에 농축액 중량대비 4 ~ 8 배의 순도 95 % 이상의 주정알코올을 넣고 교반하여 인삼다당체 조성물과 그 외의 물질인 사포닌 및 유기성 화합물을 용해도 차이를 이용하여 분리시켰다.
상기에서 분리된 인삼다당체 조성물을 상온에 24 시간 동안 방치한 다음, 상층부의 알코올층을 제거하고 하층부에 침전된 인삼다당체 침전물을 회수하였다.
상기의 인삼다당체 침전물에 잔류하고 있는 알코올을 제거하기 위해, 상기에서 회수된 인삼다당체 침전물을 정제수에 용해시킨 후, 감압 농축장치에 넣고 40 ~ 65 ℃에서 농축하여 잔류하고 있는 알코올을 제거하였다.
잔류 알코올이 제거된 인삼다당체 용액에서 비활성 거대 고분자인 탄수화물과 세균을 제거하기 위해 시행착오를 겪으며 연구하던 중, 0.1 ~ 0.45 ㎛ 사이즈의 제균용 마이크로 여과장치(micro filtering system)를 이용하여 순환 통과시키면 효율적으로 비활성 거대 고분자를 제거할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.
따라서, 잔류 알코올이 제거된 인삼다당체 용액을 0.1 ~ 0.45 ㎛ 사이즈의 제균용 마이크로 여과장치(micro filtering system)를 이용하여 순환 통과시켜 인삼다당체 1차정제액을 제조하였다.
또한, 상기의 인삼다당체 1차정제액에서 인삼 사포닌 성분과 저분자 당류를 제거하기 위해 많은 시행착오를 겪으며 연구하던 중, 1~100 K-Dalton 크기의 울트라 여과장치(ultra filtering system)를 이용하여 순환 통과시키면 분자량 800 ~ 1,000의 인삼 사포닌 성분과 1,000 이하의 저분자 당류를 제거할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.
따라서, 인삼다당체 1차정제액를 1~100K-Dalton 크기의 울트라 여과장치(ultra filtering system)를 이용하여 순환 통과시켜 인삼다당체 2차정제액을 제조하였다.
또한, 상기의 2차정제액에서 잔류하는 중금속 및 농약성분을 제거하기 위해 많은 시행착오를 겪으며 연구하던 중, 0.5K-Dalton 크기의 나노 여과장치(nano filtering system)를 이용하여 순환 통과시키면 분자량이 100 ~ 500의 저분자 물질을 제거하여 잔류하는 중금속 및 농약성분을 제거할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.
따라서, 인삼다당체 2차정제액을 0.5K-Dalton 크기의 나노 여과장치(nano filtering system)를 이용하여 순환 통과시켜 인삼다당체 3차정제액을 제조하였다.
이렇게 제조한 인삼다당체 정제액을 고농축시키기 위해 감압농축장치를 이용하여 45 ~ 80 ℃로 50 ~ 60 브릭스로 농축하고, 다시 중탕식 농축 숙성장치를 이용하여 숙성시키면서 65 ~ 70 브릭스로 고농축하여 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액을 완성할 수 있었다.
이와 같이 제조된 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액은 수율이 3 ~ 7 % 이 며, 분자량(Mw)은 1,100 ~ 400,000인 복합다당체이다.
또한, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액에 대하여 생물학적 면역증강 활성을 실험하기 위해, 임파구 증식능, LAK 세포생성(종양세포 살해활성) 및 질소산화물 생성능을 실험하였다.
그 결과, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액에 대한 임파구 증식능은 43.1(500 ㎍/㎖), 47.2(500 ㎍/㎖)으로 나타나 종래의 인삼다당체에 비해 그 효과가 월등히 높다는 사실을 알 수 있었다.
또한, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액에 대한 LAK 세포생성(종양세포 살해활성)은 10.5 LU10(50 ㎍/㎖), 9.1 LU10(100 ㎍/㎖) 이었으며, 인삼다당체 고농축정제액에 대한 NO 생성능은 38.2 μmol(5 ㎎/㎖), 39.6 μmol(5 ㎎/㎖)으로 그 효과가 뛰어나다는 사실을 알 수 있었다.
이하, 본 발명의 면역증강 활성을 나타내는 인삼다당체 고농축정제액의 제조공정에 대하여 상세히 설명하면 다음과 같다.
<인삼다당체 고농축정제액의 제조공정>
1. 제1공정 : 인삼 세정
수삼 또는 건삼을 시중에서 구입하여 준비한다.
준비한 인삼을 물에 세척한 다음, 20 ~ 24 시간 동안 90 % 이상의 고순도 주정알코올에 담가둔다.
주정알코올에 담가두었던 인삼을 꺼내어 세정한다.
이때, 샤워식 환류장치를 이용하여 환류시켜 세정하는 것이 더욱 바람직하다.
2. 제2공정 : 분쇄
제1공정을 거쳐 세정된 인삼을 파쇄기에 넣고 길이 2 ~ 5 ㎜인 절편으로 분쇄한다.
3. 제3공정 : 인삼추출물 제조
pH 5.5 ~ 6.5의 약산성용액을 준비하여, 상기 제2공정의 인삼절편의 중량대비 4 ~ 10 배의 약산성용액을 60 ~ 100 ℃로 2 시간 동안 가열한 후, 준비한 인삼절편을 첨가하여 혼합한 다음, 6 시간 동안 교반하면서 추출하여 인삼추출물을 제조한다.
이때, 약산성용액은 물에 구연산나트륨, 초산나트륨, 탄산마그네슘, 황산마그네슘 중 선택된 1종을 넣고 pH가 5.5 ~ 6.5가 되도록 약산성용액을 제조하여, 인삼에 함유된 유용성분들 중에서 다당류성분을 산으로 분해하여 그 주요성분인 갈락투론산, 글루코스, 갈락토스를 추출한다.
4. 제4공정 : 인삼박 제거
상기 제3공정을 거친 인삼추출물을 원심탈수기나 필터프레스를 사용하여 추출액과 인삼박을 분리하여 인삼박을 제거한다.
5. 제5공정 : 초고속 원심분리
상기 제4공정을 거친 인삼박이 제거된 인삼추출액을 15,000 ~ 20,000 rpm의 초고속 원심분리장치를 통과시켜 인삼추출액 내의 고분자 물질인 단백질, 탄수화물, 섬유질, 전분을 원심력에 의해 밖으로 퇴출시켜 제거시킨다.
6. 제6공정 : 활성탄 여과
상기 제5공정의 원심분리장치를 거친 추출액을 활성탄 여과장치를 통과시켜 페놀성 화합물, 유기성물질, 중금속 등을 흡착, 제거시킨다.
이때, 사용하는 활성탄은 가성소다 또는 계면활성제를 이용하여 0.4 %로 희석한 알카리용액에 활성탄을 넣고 2 ~ 4 시간 동안 50 ~ 60 ℃로 가열한 후, 2 ~ 5회 반복세척하여 알칼리 성분을 완전히 제거한 후, 건조시킨 다음, 초음파 세척기를 이용하여 음파 세척하여 여과 및 흡착능력을 향상시킨 활성탄을 사용하는 것이 더욱 바람직하다는 것을 알 수 있었다.
7. 제7공정 : 감압농축
상기 제6공정의 활성탄 여과장치를 통과한 추출액을 감압농축장치에서 60 ~ 80 ℃로 30 ~ 50 브릭스로 농축시킨다.
8. 제8공정 : 인삼다당체 조성물 제조
상기 제7공정의 농축액에 농축액 중량대비 4 ~ 8 배의 순도 95 % 이상의 주정알코올을 넣고 교반하여 인삼다당체 조성물과 그 외의 물질인 사포닌, 유기성 화합물(탄수화물, 단백질, 아미노산, 폴리아세틸렌 성분, 알칼로이드 성분, 비타민)을 용해도 차이에 의해 분리시킨 후 제거하여 인삼다당체 조성물을 제조한다.
9. 제9공정 : 인삼다당체 침전물 회수
상기 제8공정에서 분리된 인삼다당체 조성물을 상온에서 24 시간 동안 방치 하여 알코올층을 제거하고 인삼다당체 침전물을 회수한다.
10. 제10공정 : 인삼다당체 용액제조
상기 제9공정에서 회수된 인삼다당체 침전물을 정제수에 용해시킨 후, 감압 농축장치에 넣고 40 ~ 65 ℃에서 농축하여 잔류하고 있는 알코올을 제거하여 인삼다당체 용액을 제조한다.
11. 제11공정 : 인삼다당체 1차 정제액 제조
상기 제10공정의 인삼다당체 용액을 마이크로 여과장치(micro filtering system)를 이용하여 순환 통과시켜 비활성 거대 고분자인 탄수화물과 세균 등을 제거하여 인삼다당체 1차정제액을 제조한다.
이때, 상기의 마이크로 여과장치는 0.1 ~ 0.45 ㎛ 사이즈의 제균용 마이크로 여과장치를 사용하는 것이 바람직하다.
12. 제12공정 : 인삼다당체 2차정제액 제조
상기 제11공정의 1차정제액을 울트라 여과장치(ultra filtering system)를 이용하여 순환 통과시켜 인삼 사포닌 성분과 저분자 당류를 제거한 인삼다당체 2차정제액을 제조한다.
이때, 상기의 울트라 여과장치는 1 ~ 100K-Dalton 크기의 울트라 여과장치를 사용하여 분자량 800 ~ 1,000의 인삼 사포닌 성분과 분자량 1,000 이하의 저분자 당류를 제거하도록 한다.
13. 제13공정 : 인삼다당체 3차정제액 제조
상기 제12공정의 2차정제액을 나노 여과장치(nano filtering system)를 이용 하여 잔류하는 중금속 및 농약성분을 제거하고, 저분자 물질을 제거시킨 인삼다당체 3차정제액을 제조한다.
이때, 상기의 나노 여과장치는 0.5K-Dalton 크기의 나노 여과장치를 이용하여 분자량 100 ~ 500의 저분자 물질을 제거하도록 한다.
14. 제14공정 : 인삼다당체 정제농축액
상기 제13공정의 3차정제액을 감압 농축장치를 이용하여 45 ~ 80 ℃ 범위 내에서 50 ~ 60 브릭스로 농축하여 인삼다당체 정제농축액을 제조한다.
15. 제15공정 : 인삼다당체 고농축정제액 제조
상기 제14공정의 정제농축액을 농축 숙성장치를 이용하여 65 ~ 70 브릭스로 고농축하여 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액을 제조한다.
상기 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액은 분자량이 1,100 ~ 400,000 이며, 수득률이 3 ~ 7 %이다.
상기의 공정으로 제조된 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액은 환, 캅셀, 과립, 분말, 액상조성물 등으로 다양하게 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 유효량 함유되어 있는 면역관련 질환의 예방 및 개선용 조성물을 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 유효량 첨가하여 건강보조식품, 기능성식품, 음료조성물, 식품첨가제, 차류, 과자, 캔디, 젤리, 스낵, 빵, 떡 등에 다양하게 이용될 수 있다.
이때, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액을 음료조성물, 과자류, 차류 등의 식품에 첨가하는 경우, 인삼다당체 고농축정제액을 전체중량대비 0.1 ~ 0.5 중량%를 첨가하는 것이 바람직하다.
이하, 본 발명의 면역증강 활성을 나타내는 인삼다당체 고농축정제액에 대하여 실시예 및 실험예를 통하여 상세히 설명하나, 이들이 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
<실시예 1> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 제조1
수삼 1 ㎏을 시중에서 구입하여 준비하였다.
준비한 인삼을 물에 세척한 다음, 20 시간 동안 90 % 주정알코올에 담가둔 다음, 꺼내어 물로 세정하였다.
상기의 세정된 인삼을 파쇄기에 넣고 길이 2 ㎜인 절편으로 분쇄하여 준비하였다.
물 4 ㎏에 구연산나트륨을 pH가 5.5가 될 때까지 넣어 약산성용액을 제조하였다.
상기의 약산성용액을 60 ℃로 2 시간 동안 가열한 후, 준비한 인삼절편을 첨가하여 혼합한 다음, 6 시간 동안 교반하면서 인삼추출물을 제조하였다.
상기의 인삼추출물을 원심탈수기를 사용하여 추출액과 인삼박을 분리한 다음, 인삼박을 제거하였다.
이 인삼박이 제거된 인삼추출액을 15,000 rpm의 초고속 원심분리장치를 통과 시켜 인삼추출액 내의 고분자 물질인 단백질, 탄수화물, 섬유질, 전분을 원심력에 의해 밖으로 퇴출시켜 제거시켰다.
활성탄을 시중에서 구입하여 준비하였다.
가성소다를 0.4 %로 희석한 알칼리용액에 준비한 활성탄을 넣고 2 시간 동안 50 ℃로 가열한 후, 2회 반복 세척하여 알칼리 성분을 제거한 후, 건조시킨 다음 초음파세척기를 이용하여 음파 세척하였다.
상기의 활성탄을 사용한 활성탄 여과장치(1 ㎛ 사이즈의 필터)를 통화시켜 페놀성 화합물, 단백질, 아미노산, 탄수화물, 유기산, 중금속을 흡착, 제거시켰다.
상기의 활성탄 여과장치를 통과한 추출액을 감압농축장치에서 60 ℃에서 30 브릭스로 농축시켰다.
상기의 농축액에 농축액 중량대비 4 배의 순도 95 %의 주정알코올을 넣고 교반하여 인삼다당체 조성물과 그 외의 물질인 사포닌 및 유기성 화합물(탄수화물, 단백질, 아미노산, 폴리아세틸렌 성분, 비타민)을 분리시켰다.
상기에서 분리된 인삼다당체 조성물을 상온에서 24 시간 동안 방치하여 상층부의 알코올층을 제거하고 침전된 인삼다당체 침전물을 회수하였다.
상기에서 회수된 인삼다당체 침전물을 정제수에 용해시킨 후, 감압 농축장치에 넣고 40 ℃로 농축하여 잔류하고 있는 알코올을 제거하여 인삼다당체 용액을 제조하였다.
상기의 인삼다당체 용액을 0.1 ㎛ 사이즈의 제균용 마이크로 여과장치(micro filtering system ; SARTORIUS사, 독일)를 이용하여 순환 통과시켜 비활성 거대 고 분자인 탄수화물과 세균을 제거하여 인삼다당체 1차정제액을 제조하였다.
상기의 1차정제액을 1K-Dalton 크기의 울트라 여과장치(ultra filtering system ; SARTORIUS사, 독일)를 이용하여 순환 통과시켜 인삼 사포닌 성분과 저분자 당류를 제거한 인삼다당체 2차정제액을 제조하였다.
상기의 2차정제액을 0.5K-Dalton 크기의 나노 여과장치(nano filtering system ; SARTORIUS사, 독일)를 이용하여 잔류하는 중금속 및 농약성분을 제거하고, 저분자 물질을 제거시킨 인삼다당체 3차정제액을 제조하였다.
상기의 3차정제액을 감압 농축장치를 이용하여 45 ℃에서 50 브릭스로 농축하여 인삼다당체 정제농축액을 제조하였다.
상기의 정제농축액을 중탕식 농축 숙성장치를 이용하여 65 브릭스로 고농축하여 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액 70.2 g을 제조하였다.
<실시예 2> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 제조2
건삼 1 ㎏을 시중에서 구입하여 준비하였다.
준비한 인삼을 물에 세척한 다음, 24 시간 동안 90 % 주정알코올에 담가둔다음, 인삼을 꺼내어 샤워식 환류장치를 이용하여 환류시켜 세정하였다.
상기의 세정된 인삼을 파쇄기에 넣고 분쇄하여 길이가 5 mm인 절편으로 준비하였다.
물 8 ㎏에 초산나트륨을 pH가 6.5 가 될때까지 넣어 약산성용액을 제조하였다.
상기의 약산성용액을 100 ℃로 2 시간 동안 가열한 후, 준비한 인삼절편을 넣고 혼합한 다음, 6 시간 동안 교반하면서 인삼추출물을 제조하였다.
상기의 인삼추출물을 필터프레스를 사용하여 추출액과 인삼박을 분리한 다음, 인삼박을 제거하였다.
상기의 인삼박이 제거된 인삼추출액을 20,000 rpm의 초고속 원심분리장치를 통과시켜 인삼추출액 내의 고분자 물질인 단백질, 탄수화물, 섬유질, 전분을 원심력에 의해 밖으로 퇴출시켜 제거시켰다.
활성탄을 시중에서 구입하여 준비하였다.
계면활성제를 0.4 %로 희석한 알칼리용액에 준비한 활성탄을 넣고 4 시간 동안 60 ℃로 가열한 후, 5회 반복 세척하여 알칼리 성분을 제거한 후, 건조시킨 다음 초음파세척기를 이용하여 음파 세척하였다.
상기의 활성탄을 사용한 활성탄 여과장치(1 ㎛ 사이즈의 필터)를 통화시켜 페놀성 화합물, 단백질, 아미노산, 탄수화물, 유기산, 중금속을 흡착, 제거시켰다.
상기의 활성탄 여과장치를 통과한 추출액을 감압농축장치에서 80 ℃에서 50 브릭스로 농축시켰다.
상기의 농축액에 농축액 중량대비 8 배의 순도 99 %의 주정알코올을 넣고 교반하여 인삼다당체 조성물과 그 외의 물질인 사포닌 및 유기성 화합물(탄수화물, 단백질, 아미노산, 폴리아세틸렌 성분, 알칼로이드 성분, 비타민)을 분리시켰다.
상기에서 분리된 인삼다당체 조성물을 상온에서 24 시간 동안 방치하여 상층부의 알코올층을 제거하고, 침전된 인삼다당체 침전물을 회수하였다.
상기에서 회수된 인삼다당체 침전물을 정제수에 용해시킨 후, 감압 농축장치에 넣고 65 ℃에서 농축하여 잔류하고 있는 알코올을 제거하여 인삼다당체 용액을 제조하였다.
상기의 인삼다당체 용액을 0.45 ㎛ 사이즈의 제균용 마이크로 여과장치(micro filtering system ; SARTORIUS사, 독일)를 이용하여 순환 통과시켜 비활성 거대 고분자인 탄수화물과 세균을 제거하여 인삼다당체 1차정제액을 제조하였다.
상기의 1차정제액을 100K-Dalton 크기의 울트라 여과장치(ultra filtering system ; SARTORIUS사, 독일)를 이용하여 순환 통과시켜 인삼 사포닌 성분과 저분자 당류를 제거한 인삼다당체 2차정제액을 제조하였다.
상기의 2차정제액을 0.5K-Dalton 크기의 나노 여과장치(nano filtering system ; SARTORIUS사, 독일)를 이용하여 잔류하는 중금속 및 농약성분을 제거하고, 저분자 물질을 제거시킨 인삼다당체 3차정제액을 제조하였다.
상기의 3차정제액을 감압 농축장치를 이용하여 80 ℃에서 60 브릭스로 농축하여 인삼다당체 정제농축액을 제조하였다.
상기의 정제농축액을 중탕식 농축 숙성장치를 이용하여 70 브릭스로 고농축하여 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액 51.7 g을 제조하였다.
<실시예 3> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 함유된 캅셀 제조
본 발명의 실시예 1의 방법에 의해 제조된 인삼다당체 고농축정제액을 준비 하였다.
준비한 인삼다당체 고농축정제액 150 ㎎에 해조칼슘 75 ㎎, 유청분말 48 ㎎, 초유분말 15 ㎎, 락토페린 0.3 ㎎, 비타민B1 염산염 2.7 ㎎, 비타민C 3 ㎎, 자당지방산에스테르 3 ㎎, 스테아린산마그네슘 3 ㎎을 첨가한 다음 드럼 혼합기에 넣고 30 분 동안 30 rpm으로 혼합하였다.
상기의 혼합물을 캅셀충진기를 이용하여 1 캅셀당 300 ㎎이 되도록 충진하고 포장하여 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 함유된 캅셀을 제조하였다.
<실시예 4> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 함유된 음료조성물 제조
본 발명의 실시예 1의 방법에 의해 제조된 인삼다당체 고농축정제액을 준비하였다.
조제탱크에 정제수 95 ℓ를 넣고 70 ℃로 가열한 다음, 여기에 타우린 3 g, 구연산 40 g, 구연산나트륨 8 g, 효소처리스테비아 0.06 g, 안식향산나트륨 0.08 g, β-시클로덱스트린 0.2 g을 투입한 다음 30 분간 교반하여 용해시켰다.
이 조제탱크에 준비한 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액 50 g, 액상과당 40 g, 농글리세린 8 g, D-소르비톨 4 g, 허벌향 0.2 g을 투입한 후 전체 부피가 200 ℓ가 될 때까지 정제수를 넣은 후 10 분 동안 교반하였다.
상기의 교반액을 10 ㎛ 필터를 사용하여 여과한 다음, 바이알 트레이에 충전된 바이알을 20 ㎖ 씩 적재하고, 고압스팀멸균기에서 110 ℃에서 30분 동안 살균처리 하여 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 함유된 음료조성물을 제조하였다.
<실시예 5> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 함유된 캔디 제조
본 발명의 실시예 2의 방법에 의해 제조된 인삼다당체 고농축정제액을 준비하였다.
통상의 방법으로 캔디를 제조하되, 젤리 조성물의 전체 중량대비 0.5 중량%의 인삼다당체 고농축정제액을 첨가하여 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 함유된 캔디를 제조하였다.
<실시예 6> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 함유된 스낵 제조
본 발명의 실시예 2의 방법에 의해 제조된 인삼다당체 고농축정제액을 준비하였다.
통상의 방법으로 스낵을 제조하되, 스낵 조성물의 전체 중량대비 0.1 중량%의 인삼다당체 고농축정제액을 첨가하여 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 함유된 스낵을 제조하였다.
<실험예 1> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 분석실험
본 발명의 실시예 1 및 2의 방법으로 제조된 인삼다당체 고농축정제액을 준비하였다.
준비한 인삼다당체 고농축정제액에 대하여 분자량 분석을 위해, 2006년 11월 17일자에 한국화학연구원에 의뢰하여 분석하였다.
분자량은 GPC 분석 조건 및 결과는 다음과 같았다.
1. GPC분석기기 및 분석조건
1) 사용기기
HP 1100(Hewlett Packard 1100) 액체 크로마토그래피,
컬럼 : Waters사의 울트라하이드로겔 120(Ultrahydrogel 120), 울트라하이드로겔 250(Ultrahydrogel 250), 울트라하이드로겔 리니어(Ultrahydrogel Linear)
탐지 : ELSD(SEDEX-55), 50 ℃
2) 분석조건
컬럼온도 : 40 ℃,
이동상 : 증류수,
유동률 : 1.0 ㎖/min,
표준샘플 : Mn : 342(수트로스), Mn : 5,800~1,660,000(플루란)
2. 분석결과
<표 1> 실시예 1의 인삼다당체 고농축정제액에 대한 분석결과
구 분 머무름시간(min) Mn(수평균분자량) Mw(중량평균분자량)
실시예 1 19.633 43,112 44,506
22.666 6,487 8,276
24.516 2,136 2,262
26.133 1,170 1,181
상기의 표 1의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1의 인삼다당체 고농축정제액은 약 19.6 분대에 분자량이 44,506 이었으며, 약 26.1 분대에 분자량이 1,181 이었음을 확인하였다.
<표 2> 실시예 2의 인삼다당체 고농축정제액에 대한 분석결과
구 분 머무름시간(min) Mn(수평균분자량) Mw(중량평균분자량)
실시예 2 19.600 85,050 392,754
20.266 26,057 26,844
23.483 2,961 4,831
상기의 표 2의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 실시예 2의 인삼다당체 고농축정제액은 약 19.6 분대에 분자량이 392,754이었으며, 약 23.5 분대에 분자량이 4,831 이었음을 확인하였다.
<실험예 2> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 임파구 증식능 실험
본 발명의 실시예 1 및 2의 방법으로 제조된 인삼다당체 고농축정제액을 준비하였다.
종래의 방법(한국등록특허공보 10-0361187호)으로 인삼다당체를 비교제조하여 준비하였다.
상기의 인삼다당체 고농축정제액을 원자력연구원에 의뢰하여 다음과 같이 임파구 증식능을 측정하였다.
6 ~ 8 주령의 BALB/c 마우스의 비장세포를 적출하여 검체가 용량별로 함유된 96 well flat-bottom microplate well 당 1.5 X 105 개의 세포가 들어가도록 분주한 후 37℃, 5% incubator 에서 72시간 배양하였다.
³H-Thymidine 을 2 μCi/well로 처리한 후 4시간 더 배양한 다음 세포를 수확하여 scintillation cocktail을 가해 β-counter로 cpm 을 측정하여 stimulation index (SI)를 구했다.
표준물질로는 concanavalin A (Con A)를 사용하였다.
자극지수는 아래의 계산식에 의해 계산되었다.
자극지수 = 샘플로 배양된 비장세포의 ³H-Thymidine 인코포레이션(cpm)
/대조군 배지로 배양된 비장세포의 ³H-Thymidine 인코포레이션(cpm)
그 결과는 아래의 표 3에 나타내었다.
<표 3> 임파구 증식능 측정실험 결과
구 분 임파구 증식능(SI)
대조군 PBS : 1.0
양성대조군 Con A : 41.8 (2.5 ㎍/㎖)
실시예 1 43.1 (500 ㎍/㎖)
실시예 2 47.2 (500 ㎍/㎖)
종래의 인삼다당체 19.5 (500 ㎍/㎖)
상기의 표 3에서 보는 바와 같이, 종래의 인삼다당체에 대한 임파구 증식능은 19.5(500 ㎍/㎖) 이었으나, 본 발명의 실시예 1은 43.1(500 ㎍/㎖), 실시예 2는 47.2(500 ㎍/㎖)이었다.
따라서, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 임파구 증식능이 종래의 인삼다당체에 비해 그 효과가 월등히 뛰어나다는 것을 알 수 있었다.
<실험예 3> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 LAK 세포생성능 실험
본 발명의 실시예 1 및 2의 방법으로 제조된 인삼다당체 고농축정제액을 준비하였다.
상기의 인삼다당체 고농축정제액을 원자력연구원에 의뢰하여 다음과 같이 LAK(Lymphokine-Activated killer)세포 생성능을 실험하였다.
LAK 세포 생성능은 4시간 51Cr 유리법을 이용하였다.
작동 세포는 비장 세포를 24-well plate(Corning, New York, USA)에 3.0 X 10 cell/㎖ 이 되도록 RPMI640-5% FBS 배지로 희석한 후 30 U/㎖의 IL-2 혹은 검체를 넣고 총 2 ㎖씩 37 ℃, 5 % CO₂배양기에서 5 일 동안 배양하였다.
5일 후 배양액 2㎖ 을 15㎖ tube 에 옮겨 담고 원심 분리하여 세포를 침전 시킨 후 HBSS로 2회 세척하였다.
세포의 농도는 5 X 10 cells/㎖ 로 고정시켰다.
이미 준비해 놓은 작동세포와 표적세포의 비율이 100:1, 30:1 또는 10:1이 되도록 조정하여 96-well U-bottomed microplate(Corning, New York, USA)에 넣고 37 ℃, 5 % CO₂배양기에서 4 시간 동안 배양하였다.
4 시간 후 2,200 rpm에서 5 분간 원심분리하고 상층액을 0.1㎖씩 취해 γ-counter로 상층액에 유리된 Cr에 의한 γ선의 강도를 측정하여 세포 독성 (Cytotoxicity)을 산출하였다.
다음의 식에 의해 세포독성 (Cytotoxicity)을 산출한 후 LU 을 구했다.
표준물질로는 interleukin-2 (IL-2)를 사용하였다.
세포독성(Cytotoxicity, %) = ER-SR/MR- SR X 100
* ER: 실험적 억제수치(Experimental release count)
* SR: 자발적 억제수치(Spontaneous release count)
* MR: 최대 결합수치(Maximum incorporation count)
* LD10 : 100만개 세포당 10% target 세포를 lysis 시킬 수 있는 effector 세포 수를 의미함(수치가 높을수록 effector 세포 (LAK cell)의 생성이 많음을 의미함)
그 결과는 아래의 표 4에 나타내었다.
<표 4> LAK 세포생성능 측정실험 결과
구 분 LAK 세포생성능(Lytic units, LU10)
대조군 PBS : 0
양성대조군 IL-2 : 57.8 (30 units)
실시예 1 10.5 (50 ㎍/㎖)
실시예 2 9.1 (100 ㎍/㎖)
상기의 표 4에서 보는 바와 같이, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 LAK 세포생성능은 실시예 1은 10.5 LU10(50 ㎍/㎖), 실시예 2는 9.1 LU10(100 ㎍/㎖)임을 확인하여, 그 효과가 뛰어나다는 것을 알 수 있었다.
<실험예 4> 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 NO 생성능 실험
본 발명의 실시예 1 및 2의 방법으로 제조된 인삼다당체 고농축정제액을 준비하였다.
종래의 방법으로 인삼다당체를 비교제조하여 준비하였다.
상기의 인삼다당체 고농축정제액을 원자력연구원에 의뢰하여 다음과 같이 NO 생성능 실험을 실시하였다.
96 well-flat bottomed plate 에 검체를 serial dilution 한 다음 대식세포 세포주인 RAW 264.7 세포를 5 X cells/well 로 분주하고 48 시간 동안 37 ℃, 5 % incubator에서 배양하였다.
세포내에서 생성된 NO는 세포 밖으로 방출되면서 nitrite(-)로 변환이 되므로 - 를 측정하는 Griess reagent 방법을 이용하였다.
배양한 상층액 100 ㎕와 대조군으로 PBS 100 ㎕을 각각 취하여 96 well-flat bottomed plate 에 넣고 Greiss reagent (1 % sulfanilamide, 0.1 % naphthylenthylenediamine dihydrochloride, 2.5 % phosphoric acid) 100 ㎕ 을 가하여 5 분간 실온에서 반응시킨 다음 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
아질산나트륨(NaNO₂)을 사용하여 용량곡선을 작성하고 NO 생성량을 환산하였다.
표준물질로는 interferon-γ(IFN-γ)를 사용하였다.
그 결과는 아래의 표 5에 나타내었다.
<표 5> NO 생성능 측정실험 결과
구 분 NO 생성(μmol)
대조군 PBS : 4.1
양성대조군 IFN-γ : 35.3 (50 units)
실시예 1 38.2 (5 ㎎/㎖)
실시예 2 39.6 (5 ㎎/㎖)
상기의 표 5에서 보는 바와 같이, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액의 NO생성능은 실시예 1이 38.2 μmol(5 ㎎/㎖), 실시예 2가 39.6 μmol(5 ㎎/㎖)로 뛰어나다는 것을 알 수 있었다.
본 발명에 의해 인삼에서 인삼다당체를 효율적으로 분리하고, 이 인삼다당체 를 고순도로 정제한 인삼다당체 고농축정제액이 제공되고, 그 인삼다당체 고농축정제액을 대량생산을 할 수 있는 제조방법이 제공된다.
또한, 본 발명에 의해 인삼다당체 고농축정제액이 유효성분으로 포함된 면역관련 질환의 예방 및 개선용 조성물이 제공된다.
또한, 본 발명의 인삼다당체 고농축정제액이 포함된 기능성 식품, 건강보조식품, 음료조성물, 식품첨가제, 차류, 과자류 등 다양한 인삼가공식품으로 제조되어, 인삼가공산업의 발전에 이바지할 수 있다.

Claims (9)

  1. 인삼다당체의 제조방법에 있어서,
    수삼 또는 건삼을 물에 세척한 다음, 20 ~ 24 시간 동안 90 % 주정알코올에 담가둔 후, 세정하여 준비하는 제1공정,
    세정된 인삼을 분쇄하여 인삼절편으로 제조하는 제2공정,
    pH 5.5 ~ 6.5의 약산성용액 60 ~ 100 ℃로 2 시간 동안 가열한 후, 제2공정에서 준비한 인삼절편을 넣고 혼합하여 6 시간 동안 교반하고 추출하여 인삼추출물을 제조하는 제3공정,
    제3공정의 인삼추출물을 원심탈수기나 필터프레스를 사용하여 추출액과 인삼박을 분리하여, 인삼박을 제거하는 제4공정,
    제4공정을 거친 인삼박이 제거된 인삼추출액을 15,000 ~ 20,000 rpm의 초고속 원심분리장치를 통과시켜 인삼추출액 내의 단백질, 탄수화물, 섬유질을 제거하는 제5공정,
    제5공정을 거친 추출액을 활성탄 여과장치를 통과시켜 페놀성 화합물, 유기성물질, 중금속을 흡착, 제거하는 제6공정,
    제6공정을 거친 추출액을 감압농축장치에서 60 ~ 80 ℃로 30 ~ 50 브릭스로 농축시키는 제7공정,
    제7공정을 거친 농축액에 농축액의 중량대비 4 ~ 8 배의 95 % 주정알코올을 넣고 교반하여 사포닌 및 유기성 화합물을 분리.제거한 인삼다당체 조성물을 제조 하는 제8공정,
    제8공정을 거친 인삼다당체 조성물을 상온에 방치하여 알코올층을 제거하고, 침전된 인삼다당체 침전물을 회수하는 제9공정,
    제9공정에서 회수된 인삼다당체 침전물을 정제수에 용해시킨 후, 농축하여 인삼다당체 용액을 제조하는 제10공정,
    제10공정의 인삼다당체 용액을 마이크로 여과장치(micro filtering system)를 이용하여 인삼다당체 1차정제액을 제조하는 제11공정,
    제11공정의 인삼다당체 1차정제액을 울트라 여과장치(ultra filtering system)를 이용하여 인삼다당체 2차정제액을 제조하는 제12공정,
    제12공정의 인삼다당체 2차정제액을 나노 여과장치(nano filtering system)를 이용하여 인삼다당체 3차정제액을 제조하는 제13공정,
    제13공정의 3차정제액을 감압 농축장치를 이용하여 45 ~ 80 ℃ 범위 내에서 50 ~ 60 브릭스로 농축하여 인삼다당체 정제농축액을 제조하는 제14공정,
    제14공정의 정제농축액을 농축 숙성장치를 이용하여 65 ~ 70 브릭스로 고농축하는 제15공정으로 구성된,
    인삼다당체 고농축정제액의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    제3공정의 약산성용액은, 구연산나트륨, 초산나트륨, 탄산마그네슘, 황산마 그네슘 중 선택된 1종을 물에 넣고 pH가 5.5 ~ 6.5가 되도록 제조된 것이 특징인,
    인삼다당체 고농축정제액의 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    제6공정의 활성탄 여과장치는, 가성소다 또는 계면활성제를 0.4 %로 희석하여 준비한 알카리용액에 통상적인 활성탄을 넣고 2 ~ 4 시간 동안 50 ~ 60 ℃로 가열한 후, 2 ~ 5회 반복세척하여 알칼리 성분을 완전히 제거한 후, 건조시킨 다음, 초음파 세척기를 이용하여 음파 세척하여 여과 및 흡착능력을 향상시킨 활성탄을 사용하는 것이 특징인,
    인삼다당체 고농축정제액의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    제11공정의 마이크로 여과장치(micro filtering system)는, 0.1 ~ 0.45 ㎛ 크기의 제균용 마이크로 여과장치를 사용하여 비활성 거대 고분자인 탄수화물과 세균을 제거시키는 것이 특징인,
    인삼다당체 고농축정제액의 제조방법.
  5. 제1항에 있어서,
    제12공정의 울트라 여과장치(ultra filtering system)는, 1 ~ 100 K-Dalton 크기의 울트라 여과장치를 사용하여 분자량 800 ~ 1,000의 인삼 사포닌 성분과 분자량 1,000 이하의 저분자 당류를 제거하는 것이 특징인,
    인삼다당체 고농축정제액의 제조방법.
  6. 제1항에 있어서,
    제13공정의 나노 여과장치(nano filtering system)는, 0.5 K-Dalton 크기의 나노 여과장치를 이용하여 분자량 100 ~ 500의 저분자 물질을 제거하는 것이 특징인,
    인삼다당체 고농축정제액의 제조방법.
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