KR100580333B1 - Dipeptide apoptosis inhibitors and the use thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 화학식(I)로 표시되는 신규한 디펩티드에 관한 것이다:The present invention relates to novel dipeptides represented by formula (I):

Figure 112000007057306-pct00037
I
Figure 112000007057306-pct00037
I

상기 식에서, R1-R3 및 AA는 본원에 정의되어 있다. Wherein R 1 -R 3 and AA are defined herein.

본 발명은 화학식(I)의 화합물이 고사 세포 사멸의 효과적인 억제제임을 발견한 것에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 억제제는 세포, 조직 또는 전체 기관의 손실이 발생하는 다양한 임상적 증상에서 세포 사멸을 늦추거나 막을 수 있다.The present invention relates to the discovery that compounds of formula (I) are effective inhibitors of apoptosis. Thus, the inhibitors of the present invention can slow or prevent cell death in various clinical conditions in which loss of cells, tissues or whole organs occurs.

디펩티드 고사 억제제Dipeptide apoptosis inhibitor

Description

디펩티드 고사 억제제 및 그의 용도 {DIPEPTIDE APOPTOSIS INHIBITORS AND THE USE THEREOF}Dipeptide apoptosis inhibitors and their use {DIPEPTIDE APOPTOSIS INHIBITORS AND THE USE THEREOF}

본 발명은 의약 화학 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 효과적인 고사 억제제인 디펩티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 고사에 의한 세포 사멸을 경감 또는 치료하기 위한 이러한 디펩티드의 용도에 관한 것이다.The present invention relates to the field of medicinal chemistry. In particular, the present invention relates to dipeptides which are effective killing inhibitors. The present invention also relates to the use of such dipeptides for reducing or treating cell death by apoptosis.

유기체는 조절된 세포 사멸, 계획된 세포 사멸 또는 고사와 같은 각종 알려진 과정으로 원하지 않는 세포를 제거한다. 이러한 세포 사멸은 동물 발육에 있어서 정상적인 측면으로서 뿐 아니라 조직 항상성 및 노화에서도 발생한다[Glucksmann, A., Biol. Rev. Cambridge Philos. Soc. 26:59-86(1951); Glucksmann, A., Archives de Biologie 76:419-437(1965); Ellis et al., Dev. 112:591-603(1991); Vaux et al., Cell 76:777-779(1994)]. 고사는 세포 수를 조절하고, 형태발생을 용이하게 하며, 유해하거나 또는 비정상적인 세포를 없애고, 이미 기능 수행을 완료한 세포를 제거한다. 또한, 고사는 각종 생리학적 스트레스, 예컨대 저산소증 또는 허혈에 대한 반응으로 발생한다(공개된 PCT 출원 WO 96/20721). The organism removes unwanted cells by various known processes, such as controlled cell death, planned cell death or apoptosis. This cell death occurs not only as a normal aspect of animal development but also in tissue homeostasis and aging [Glucksmann, A., Biol. Rev. Cambridge Philos. Soc. 26: 59-86 (1951); Glucksmann, A., Archives de Biologie 76: 419-437 (1965); Ellis et al., Dev. 112: 591-603 (1991); Vaux et al., Cell 76: 777-779 (1994). Apoptosis regulates cell number, facilitates morphogenesis, eliminates harmful or abnormal cells, and eliminates cells that have already completed functioning. Death also occurs in response to various physiological stresses such as hypoxia or ischemia (published PCT application WO 96/20721).

조절된 세포 사멸을 경험한 세포가 공유하는 다수의 형태발생학적 변화, 예 컨대 혈장 및 핵막 수포 형성, 세포 수축(핵질 및 세포질의 응축), 세포기관 재정위 및 압밀작용, 크로마틴 응축 및 고사체(세포내 물질을 함유하는 입자를 둘러싼 막)의 생성 등이 있다[Orrenius, S., J. Internal Medicine 237:529-536(1995)]. Numerous morphologic changes shared by cells experiencing controlled cell death, such as plasma and nuclear membrane blister formation, cell contraction (condensation of nucleus and cytoplasm), organelle rearrangement and compaction, chromatin condensation and apoptosis (Membrane surrounding particles containing intracellular substances), etc. [Orrenius, S., J. Internal Medicine 237: 529-536 (1995)].

고사는 세포 자살의 내인성 기작을 통해서 이루어진다[Wyllie, A.H., in Cell Death in Biology and Pathology, Bowen and Lockshin, eds., Chapman and Hall(1981), p9-34]. 세포는 내부 신호 또는 외부 신호의 결과로서 내부적으로 암호화된 자살 프로그램을 활성화시킨다. 자살 프로그램은 주의 깊게 조절된 유전자 프로그램의 활성화를 통하여 실행된다[Wylie et al., Int.Rev.Cyt. 68:251 (1980); Ellis et al., Ann. Rev. Cell Bio. 7:663(1991)]. 고사 세포 및 고사체는 일반적으로 세포의 용해 전에 인접 세포 또는 대식 세포가 인식하여 제거한다. 이러한 제거 기작 때문에, 다수 세포의 제거에도 불구하고 염증이 유발되지 않는다[Orrenius, S., J.Internal Medicine 237:529-536(1995)]. Death is achieved through endogenous mechanisms of cell suicide (Wyllie, AH, in Cell Death in Biology and Pathology , Bowen and Lockshin, eds., Chapman and Hall (1981), p9-34). The cell activates an internally encoded suicide program as a result of an internal or external signal. Suicide programs are implemented through the activation of carefully regulated gene programs [Wylie et al., Int. Rev. Cyt. 68: 251 (1980); Ellis et al., Ann. Rev. Cell Bio . 7: 663 (1991). Dead cells and dead bodies are generally recognized and removed by adjacent cells or macrophages before lysis. Because of this elimination mechanism, inflammation is not induced despite the removal of many cells [Orrenius, S., J. Internal Medicine 237: 529-536 (1995)].

포유류 인터루킨-1β(IL-1β)는 만성 및 급성 염증과 자가 면역 질병을 비롯하여 각종 병리학 과정에서 중요한 역할을 한다[Oppenheim, J.H. et al., Immunology Today, 7, 45-56(1986)]. IL-1β는 IL-1 수용체에 결합할 수 없고 생물학적으로 불활성인 세포에 회합된 전구체 폴리펩티드(프로-IL-1β)로서 합성된다[Mosley et al., J. Biol. Chem. 262:2941-2944(1987)]. 전구체 IL-1β가 성숙 IL-1β로 전환되는 것을 억제함으로써, 인터루킨-1의 활성을 억제할 수 있다. 인터루킨-1β전환 효소(ICE)는 인터루킨 1β(IL-1β)의 활성화를 담당하는 프로테아제이다[Thornberry, N.A., et al., Nature 356:768(1992); Yuan, J., et al., Cell 75:641(1993)]. ICE는 불활성 프로인터루킨-1을 절단하여 성숙 IL-1을 생성하는 기질 특이적 시스테인 프로테아제이다. ICE 및 CPP32를 암호화하는 유전자는 포유류 ICE/Ced-3 계열의 유전자의 구성원인데, 현재 이 계열에는 12개 이상의 구성원, 즉 ICE, CPP32/Yama/Apopain, mICE2, ICE4, ICH1, TX/ICH-2, MCH2, MCH3, MCH4, FLICE/MACH/MCH5, ICE-LAP6 및 ICEre1III이 있다. 상기 계열의 시스테인 프로테아제(이의 활성 부위 시스테인 잔기는 ICE 매개된 고사에 필수적임)의 단백질 분해 활성은 세포 사멸을 매개하는데 중요한 것으로 보인다[Miura et al., Cell 75:653-660(1993)]. 상기 계열의 유전자는 최근에 카스파제로 불리워지고 있다[Alnernri. E.S. et al. Cell, 87:171(1996)].Mammalian interleukin-1β (IL-1β) plays an important role in various pathological processes, including chronic and acute inflammation and autoimmune diseases (Oppenheim, JH et al., Immunology Today, 7, 45-56 (1986)). IL-1β is synthesized as a precursor polypeptide (pro-IL-1β) that is unable to bind IL-1 receptor and is associated with biologically inactive cells [Mosley et al., J. Biol. Chem. 262: 2941-2944 (1987). By inhibiting the conversion of precursor IL-1β to mature IL-1β, the activity of interleukin-1 can be inhibited. Interleukin-1β converting enzyme (ICE) is a protease responsible for the activation of interleukin 1β (IL-1β) [Thornberry, NA, et al., Nature 356: 768 (1992); Yuan, J., et al., Cell 75: 641 (1993). ICE is a substrate specific cysteine protease that cleaves inactive prointerleukin-1 to produce mature IL-1. The genes encoding ICE and CPP32 are members of the mammalian ICE / Ced-3 family of genes, which currently have more than 12 members, ICE, CPP32 / Yama / Apopain, mICE2, ICE4, ICH1, TX / ICH-2 , MCH2, MCH3, MCH4, FLICE / MACH / MCH5, ICE-LAP6 and ICE re1 III. The proteolytic activity of this family of cysteine proteases, whose active site cysteine residues are essential for ICE mediated apoptosis, appears to be important for mediating cell death (Miura et al., Cell 75: 653-660 (1993)). This family of genes has recently been called caspase [Alnernri. ES et al. Cell, 87: 171 (1996).

IL-1은 또한 염증, 폐혈증성 쇼크, 상처 치료, 조혈 및 일정 백혈병의 발달을 포함하는 광범위한 생물학적 반응의 조절과 관련된 사이토킨(cytokine)이다 [Dinarello, C.A., Blood 77:1627-1652(1991); diGiovine et al., Immunology Today 11:13(1990)].IL-1 is also a cytokine involved in the regulation of a wide range of biological responses, including inflammation, pulmonary shock, wound healing, hematopoiesis, and development of certain leukemias [Dinarello, C.A., Blood 77: 1627-1652 (1991); diGiovine et al., Immunology Today 11:13 (1990).

많은 유효한 카스파제 억제제는 카스파제의 펩티드 기질 구조에 기초하여 제조되어 왔다. 그러나, 그들의 시험관 내에서의 효력과 달리, 고사의 완전-세포 모델에서 우수한 효능(IC50＜1 μM)을 갖는 억제제는 보고된 바 없다[Thornberry, N.A. Chem. Biol. 5:R97-103(1998)]. 따라서, 고사의 완전-세포 모델에서 효능(IC50＜1 μM)을 나타내고, 고사의 동물 모델에서 활성을 나타내는 세포 사멸 억제제의 필요가 존재한다. 그래서, 이들 억제제는 IL-1의 사이토킨 활성 및 조절 된 세포 사멸이 역할을 하는 질병 상태를 치료하기 위한 치료제로서 사용할 수 있다.Many effective caspase inhibitors have been prepared based on the peptide substrate structure of caspase. However, contrary to their in vitro potency, no inhibitors have been reported with good efficacy (IC 50 <1 μM) in a dead cell full-cell model [Thornberry, NA Chem. Biol. 5: R97-103 (1998). Thus, there is a need for apoptosis inhibitors that exhibit potency (IC 50 <1 μM) in a dead cell model and exhibit activity in a dead animal model. Thus, these inhibitors can be used as therapeutic agents for treating disease states in which cytokine activity and regulated cell death of IL-1 play a role.

WO 93/05071 은 하기 화학식을 갖는 펩티드 ICE 억제제를 공개하였다:WO 93/05071 discloses peptide ICE inhibitors having the formula:

Z-Q2-Asp-Q1 ZQ 2 -Asp-Q 1

상기 식에서, Z는 N-말단 보호기이고; Q2는 서열 Q2-Asp가 서열 Ala-Tyr-Val-His-Asp의 적어도 한 부분에 상응하는 것과 같은 0 내지 4개의 아미노산이며; Q1은 전기 음성 이탈기를 포함한다. 전형적인 디펩티드는 Boc-His-Asp-CH2F, Boc-Tyr-Asp-CH2F, Boc-Phe-Asp-CH2F, Ac-His-Asp-CH2F, Ac-Tyr-Asp-CH2F, Ac-Phe-Asp-CH2F, Cbz-His-Asp-CH2F, Cbz-Tyr-Asp-CH2F 및 Cbz-Phe-Asp-CH2F이다.Wherein Z is an N-terminal protecting group; Q 2 is 0-4 amino acids such that the sequence Q 2 -Asp corresponds to at least a portion of the sequence Ala-Tyr-Val-His-Asp; Q 1 includes an electronegative leaving group. Typical dipeptides include Boc-His-Asp-CH 2 F, Boc-Tyr-Asp-CH 2 F, Boc-Phe-Asp-CH 2 F, Ac-His-Asp-CH 2 F, Ac-Tyr-Asp- CH 2 F, Ac-Phe-Asp-CH 2 F, Cbz-His-Asp-CH 2 F, Cbz-Tyr-Asp-CH 2 F and Cbz-Phe-Asp-CH 2 F.

WO 96/03982는 하기 화학식을 갖는 ICE 억제제로서의 아스파르트산 유사체를 공개하였다:WO 96/03982 discloses aspartic acid analogs as ICE inhibitors having the formula:

Figure 112000007057306-pct00001
Figure 112000007057306-pct00001

상기 식에서, R2는 H 또는 알킬이고; R3는 할로겐과 같은 이탈기이며; R1은 헤테로아릴-CO 또는 아미노산 잔기이다.In which R 2 is H or alkyl; R 3 is a leaving group such as halogen; R 1 is heteroaryl-CO or an amino acid residue.

미국 특허 제5,585,357호는 하기 화학식을 갖는 ICE 억제제로서의 펩티드성 케톤을 공개하였다: U.S. Patent 5,585,357 discloses peptidic ketones as ICE inhibitors having the formula:

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상기 식에서, n은 0-2이고; 각각의 AA는 독립적으로 L-발린 또는 L-알라닌이며; R1은 N-벤질옥시카보닐 및 다른 기들로 구성된 군으로부터 선택되고; R8, R9, R10은 각각 독립적으로 수소, 저급 알킬 및 다른 기들이다.Wherein n is 0-2; Each AA is independently L-valine or L-alanine; R 1 is selected from the group consisting of N-benzyloxycarbonyl and other groups; R 8 , R 9 , R 10 are each independently hydrogen, lower alkyl and other groups.

레베즈(Revesz) 등(Tetrahedron Lett. 35, 9693-9696, 1994)은 유효한 ICE 억제제인 상응하는 산의 프로드러그로서의 에틸 에스테르 트리펩티드의 제조법을 보고하였다:Revesz et al. ( Tetrahedron Lett . 35, 9693-9696, 1994) reported the preparation of ethyl ester tripeptide as a prodrug of the corresponding acid, which is an effective ICE inhibitor:

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발명의 요약Summary of the Invention

본 발명은 화학식 I의 디펩티드에 관한 것이다:The present invention relates to dipeptides of formula (I):

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I
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I

상기 식에서, R1은 N-말단 보호기이고; AA는 임의의 천연 α-아미노산 또는 β-아미노산의 잔기이며; R2는 H 또는 CH2R4(여기에서, R4는 전기 음성 이탈기임)이고; R3는 알킬 또는 H이며; 단, AA는 His, Tyr, Pro 또는 Phe가 아니다.Wherein R 1 is an N-terminal protecting group; AA is a residue of any natural α-amino acid or β-amino acid; R 2 is H or CH 2 R 4 , wherein R 4 is an electronegative leaving group; R 3 is alkyl or H; Provided that AA is not His, Tyr, Pro or Phe.

본 발명은 화학식 I로 표시되는 디펩티드-계 카스파제 억제제가, 효소 분석에서 트리- 및 테트라펩티드 억제제보다 효소에 대해 덜 효과적임에도 불구하고, 놀랍게도 세포 계 시스템에서 효과적인 고사 억제제임을 밝혀낸 것에 관한 것이다. 이들 화합물은 생체내에서 전신적 활성이 있고, 마우스 간 고사 모델에서 항 Fas-유발 치사의 유효한 억제제이며, 허혈 발작의 랫트 모델에서 강한 신경 보호 효과를 갖는다.The present invention relates to the discovery that dipeptide-based caspase inhibitors represented by Formula I are surprisingly effective killing inhibitors in cell-based systems, despite being less effective on enzymes than tri- and tetrapeptide inhibitors in enzyme assays. These compounds have systemic activity in vivo, are effective inhibitors of anti-Fas-induced lethality in mouse hepatic apoptosis models, and have a strong neuroprotective effect in rat models of ischemic attacks.

본 발명은 또한 고사 세포 사멸이 원인 인자 또는 결과인 질병을 경감, 예방 또는 치료하기 위한 본 발명의 디펩티드의 용도에 관한 것이다. 본 발명 용도의 예로는 병소 허혈 및 전신적 허혈 후의 신경 시스템 보호; 알츠하이머 질병, 헌팅톤 질병, 프리온 질병, 파킨슨 질병, 다발 경화증, 근위축성 외측 경화증, 운동 실조증, 모세혈관 확장증 및 척수연수 위축증 등의 퇴행성 신경 장애의 치료; 심근 경색, 충혈성 심부전 및 심근증을 비롯한 심장 질병의 치료; 망막 질병의 치료; 루푸스 홍반증, 류마티스성 관절염, 타입 I 당뇨병, 쇼그렌 증후군 및 사구체신염 등의 자가면역 장애의 치료; 다낭성 신장 질병 및 빈혈증/적혈구조혈의 치료; AIDS 및 SCIDS를 비롯한 면역 시스템 장애의 치료; 이식중의 세포, 조직 및 기관 손상의 경감 또는 예방; 산업적 생물공학에서 세포주 사멸의 경감 또는 예방; 탈모증(모발 손실)의 경감 또는 예방; 및 피부 세포의 조로 사멸 경감 등을 포함한다.The invention also relates to the use of the dipeptides of the invention for alleviating, preventing or treating diseases in which apoptosis is the causative agent or outcome. Examples of use of the invention include the protection of the nervous system after focal ischemia and systemic ischemia; Treatment of degenerative neurological disorders such as Alzheimer's disease, Huntington's disease, Prion's disease, Parkinson's disease, multiple sclerosis, amyotrophic lateral sclerosis, ataxia, capillary dilatation and spinal cord atrophy; Treatment of heart diseases including myocardial infarction, congestive heart failure and cardiomyopathy; Treatment of retinal disease; Treatment of autoimmune disorders such as lupus erythematosis, rheumatoid arthritis, type I diabetes, Sjogren's syndrome and glomerulonephritis; Treatment of polycystic kidney disease and anemia / erythroblastemia; Treatment of immune system disorders, including AIDS and SCIDS; Reducing or preventing damage to cells, tissues and organs during transplantation; Reducing or preventing cell line death in industrial biotechnology; Reduction or prevention of alopecia (hair loss); And amelioration of death of the skin cells in the bath and the like.

본 발명은 동물에서 고사 세포 사멸을 경감시키기 위한 유효량의 화학식 I 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition comprising an effective amount of a compound of formula I for alleviating apoptosis in animals.

본 발명은 또한 포유 동물의 기관 또는 조직을 위한 보존 또는 저장 용액, 또는 포유 동물 또는 효모 세포를 위한 성장 배지를 제공한다. 여기에서, 상기 용액 또는 배지에는 상기 기관, 조직 또는 세포의 고사 세포 사멸을 경감시키기 위한 화학식 I 화합물의 유효량이 포함된다.The invention also provides preservation or stock solutions for organs or tissues of mammals, or growth media for mammalian or yeast cells. Wherein the solution or medium contains an effective amount of a compound of formula (I) to mitigate apoptosis of the organ, tissue or cell.

발명의 상세한 설명Detailed description of the invention

본 발명의 고사 세포 사멸의 억제제는 화학식 I의 화합물, 또는 그의 약학적 허용 염 또는 프로드러그이다:Inhibitors of apoptosis of the invention are compounds of formula (I), or pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof:

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I
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상기 식에서,Where

R1은 t-부틸옥시카보닐, 아세틸 및 벤질옥시카보닐을 비롯한 N-말단 보호기이고; R 1 is an N-terminal protecting group including t-butyloxycarbonyl, acetyl and benzyloxycarbonyl;

AA는 임의의 천연 α-아미노산 또는 β-아미노산의 잔기, 예컨대, Gly, Thr, Glu, Lys, Arg, Ser, Asn, Gln, Val, Ala, Leu, Ile, Met, 및 β-Ala와 같은 β-아미노산의 잔기이며, 단, AA는 His, Tyr, Pro 또는 Phe가 아니고; AA is a residue of any natural α-amino acid or β-amino acid, such as Gly, Thr, Glu, Lys, Arg, Ser, Asn, Gln, Val, Ala, Leu, Ile, Met, and β-Ala -A residue of an amino acid, provided that AA is not His, Tyr, Pro or Phe;

R2는 H 또는 CH2R4이며, 여기에서, R4는 전기 음성 이탈기, 예를 들어, F, Cl, TsO-, MeO-, ArO-, ArCOO, ArN- 및 ArS-이고; R 2 is H or CH 2 R 4 , wherein R 4 is an electronegative leaving group such as F, Cl, TsO-, MeO-, ArO-, ArCOO, ArN- and ArS-;

R3는 알킬 또는 H이다.R 3 is alkyl or H.

R3에 관하여, 바람직한 알킬기는 C1-6알킬기, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, 펜틸 및 헥실기이다.With regard to R 3 , preferred alkyl groups are C 1-6 alkyl groups, for example methyl, ethyl, propyl, isopropyl, isobutyl, pentyl and hexyl groups.

본 발명은 화학식 I로 표시되는 디펩티드-계 카스파제 억제제가, 트리- 및 테트라펩티드 억제제보다 효소에 대해 덜 효과적임에도 불구하고, 놀랍게도 세포 계 시스템에서 효과적인 고사 억제제임을 밝혀낸 것에 관한 것이다. 이들 화합물은 생체내에서 전신적 활성이 있고, 마우스 간 고사 모델에서 항 Fas-유발 치사의 유효한 억제제이며, 허혈 발작의 랫트 모델에서 강한 신경 보호 효과를 갖는다. 이들 억제제는 세포, 조직 또는 전체 기관의 손실이 발생하는 다양한 임상적 증상 및 산업적 적용에 있어서 세포 사멸을 늦추거나 막을 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 고사가 역할을 하는 증상을 치료, 예방 또는 경감시키는 방법에 관한 것이다. 이들 조건은 하기에 보다 완전하게 기술한다.The present invention relates to the discovery that the dipeptide-based caspase inhibitors represented by Formula I are surprisingly effective killing inhibitors in cell-based systems, despite being less effective against enzymes than tri- and tetrapeptide inhibitors. These compounds have systemic activity in vivo, are effective inhibitors of anti-Fas-induced lethality in mouse hepatic apoptosis models, and have a strong neuroprotective effect in rat models of ischemic attacks. These inhibitors will slow or prevent cell death in various clinical symptoms and industrial applications where loss of cells, tissues or whole organs occurs. Thus, the present invention also relates to a method of treating, preventing or alleviating the condition in which death occurs. These conditions are described more fully below.

상기 방법은 그러한 치료를 필요로 하는 동물에게 본 발명의 억제제, 또는 그의 약학적 허용 염 또는 프로드러그를 고사 세포 사멸을 억제하는데 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함한다.The method comprises administering to the animal in need of such treatment an inhibitor of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, in an amount effective to inhibit apoptosis.

고사 억제제로서 사용될 수 있는 화합물의 바람직한 양태는 화학식 II로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학적 허용 염 또는 프로드러그이다:Preferred embodiments of compounds that can be used as anti-apoptotic inhibitors are those represented by Formula II, or pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof:

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II
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II

상기 식에서, AA, R1 및 R3는 화학식 I과 관련하여 상기에서 정의된 바와 같다.Wherein AA, R 1 and R 3 are as defined above in connection with formula (I).

바람직한 R1은 t-부틸옥시카보닐, 아세틸 및 벤질옥시카보닐이다. 바람직한 R3는 H, Me, Et 또는 t-Bu이다. 바람직한 AA는 Val, Ala, Leu, Ile, Met 및 β-Ala 와 같은 β-아미노산이다.Preferred R 1 is t-butyloxycarbonyl, acetyl and benzyloxycarbonyl. Preferred R 3 is H, Me, Et or t-Bu. Preferred AA are β-amino acids such as Val, Ala, Leu, Ile, Met and β-Ala.

화학식 I을 갖는 예시적인 바람직한 고사 억제제는 하기의 것을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다:Exemplary preferred killing inhibitors having Formula I include, but are not limited to:

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본 발명의 일정 화합물은 광학 이성체를 비롯한 입체 이성체로서 존재할 수 있다. 본 발명은 모든 입체 이성체, 및 그러한 입체 이성체의 라세미 혼합물 및 당업자에게 주지된 방법에 따라 분리될 수 있는 개개의 거울상 이성체를 포함한다.Certain compounds of the present invention may exist as stereoisomers, including optical isomers. The present invention includes all stereoisomers and racemic mixtures of such stereoisomers and individual enantiomers that can be separated according to methods well known to those skilled in the art.

약학적 허용 부가 염의 예는 무기 및 유기 산 부가 염, 예를 들어, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 포스페이트, 설페이트, 시트레이트, 락테이트, 타르트레이트, 말레에이트, 퓨마레이트, 만델레이트 및 옥살레이트를 포함한다.Examples of pharmaceutically acceptable addition salts include inorganic and organic acid addition salts such as hydrochloride, hydrobromide, phosphate, sulfate, citrate, lactate, tartrate, maleate, fumarate, mandelate and oxalate do.

프로드러그의 예는 화학식 I-II의 화합물을 포함하는데, 여기에서, R3는 알킬기 또는 치환된 알킬기, 예를 들어, CH2OCH3이다. 또한, AA가 카복실산기를 포함 하는 경우, R3가 H인 화학식 I-II의 프로드러그의 예는 둘중의 하나 또는 둘다의 카복실기가 에스테르화(예컨대, C1-6알콜을 사용하여)되거나, 상응하는 아미드(예컨대, C1-6아민을 사용하여) 형태인 화합물을 포함한다.Examples of prodrugs include compounds of formula I-II, wherein R 3 is an alkyl group or a substituted alkyl group, for example CH 2 OCH 3 . Further, when AA comprises a carboxylic acid group, examples of prodrugs of formula (I-II) in which R 3 is H include that one or both carboxyl groups are esterified (eg, using C 1-6 alcohols), or To amide (eg, using C 1-6 amines).

본 발명은 또한 고사 억제에 반응하는 장애로 고통받는 동물의 그러한 장애를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법에 사용하기 위하여 특히 바람직한 양태의 화합물은 전술한 화학식 II로 표시되는 화합물이다.The invention also relates to a method for treating such a disorder in an animal suffering from a disorder responsive to suppression of death. Compounds of a particularly preferred embodiment for use in the process of the invention are those represented by the above formula (II).

본 발명의 화합물은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 특히, 화학식 I-II의 화합물은 반응식 I의 예시적 반응에 의하여 설명한 바와 같이 제조할 수 있다. 중간체 1은 레베즈(Revesz) 등의 방법(Tetrahedron Lett. 35, 9693-9696, 1994)에 따라 제조하였다. 1을 Z-Val-OH와 같은 N-보호된 아미노산과 커플링시켜 아미드 2를 수득하고, 아미드 2를 레베즈(Revesz) 등의 방법(Tetrahedron Lett. 35, 9693-9696, 1994)에 따라 데스-마틴(Dess-Martin) 시약에 의하여 산화시켜 3을 수득하였다. 산이 에스테르 절단을 촉진시켜 유리산 4를 수득하고, 유리산 4를 에스테르 5로 전환시켰다.The compounds of the present invention can be prepared using methods known to those skilled in the art. In particular, compounds of formula (I-II) may be prepared as described by the exemplary reactions of scheme (I). Intermediate 1 was prepared according to the method of Revesz et al. ( Tetrahedron Lett . 35, 9693-9696, 1994). 1 was coupled with an N-protected amino acid such as Z-Val-OH to afford amide 2, and amide 2 was killed according to the method of Revesz et al. ( Tetrahedron Lett . 35, 9693-9696, 1994). Oxidation with Dess-Martin reagent yielded 3. The acid promoted ester cleavage to yield free acid 4, which converted free acid 4 to ester 5.

반응식 IScheme I

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본 발명의 중요한 양상은 화학식 I-II의 화합물이 효과적인 고사 억제제임을 발견한 것이다. 따라서, 이들 억제제는 세포, 조직 또는 전체 기관의 손실이 발생하는 다양한 임상적 증상에 있어서 세포 사멸을 늦추거나 막을 것으로 기대된다.An important aspect of the present invention is the discovery that compounds of formula (I-II) are effective killing inhibitors. Thus, these inhibitors are expected to slow or prevent cell death in various clinical conditions in which loss of cells, tissues or whole organs occurs.

본 발명의 세포 사멸 억제제는 발작으로 인한 병소 허혈 및 심박동정지로 인한 전신적 허혈을 포함(단, 이에 한정되는 것은 아님)하는 허혈 및 흥분신경독성(excitotoxicity)의 다양한 증상 하의 신경 시스템(두뇌, 척수 및 말초 신경 시스템)에서 세포 사멸을 경감 또는 예방하는데 사용할 수 있다. 하나의 특정 용법은 위험성이 높은 노동을 하면서 유아를 출산하는 중에 발생할 수 있는 산소 부족의 영향을 치료하는 것이다. 또한, 세포 사멸 억제제는 외상(예컨대, 두부 외상), 바이러스성 감염 또는 방사선-유발 신경 세포 사멸(예컨대, 암의 방사선 치료의 부작용으로서)에 기인하는 신경 시스템에서의 세포 사멸을 경감 또는 예방하는데 사용할 수 있다. 세포 사멸 억제제는 또한 알츠하이머 질병, 헌팅톤 질병, 파킨슨 질병, 다발 경화증, 근위축성 외측 경화증 및 척수연수 위축증을 포함(단, 이에 한정되는 것은 아님)하는 퇴행성 신경 장애의 영역에서 세포 사멸을 경감 또는 예방하는데 사용할 수 있다. 본 발명의 세포 사멸 억제제의 생체 내에서의 신경 보호 성질은 랫트 일시적 병소 허혈 모델로 시험할 수 있다[Xue et al., Stroke 21: 166(1990)].Inhibitors of apoptosis of the invention include the nervous system under the various symptoms of ischemia and excitatory toxicity, including but not limited to lesion ischemia due to seizures and systemic ischemia due to cardiac arrest. Peripheral nervous system) can be used to reduce or prevent cell death. One particular use is to treat the effects of oxygen deficiency that can occur during childbirth with high-risk labor. In addition, cell death inhibitors can be used to mitigate or prevent cell death in the nervous system due to trauma (eg, head trauma), viral infection, or radiation-induced neuronal cell death (eg, as a side effect of radiotherapy of cancer). Can be. Apoptosis inhibitors also reduce or prevent cell death in areas of degenerative neuropathy, including but not limited to Alzheimer's disease, Huntington's disease, Parkinson's disease, multiple sclerosis, amyotrophic lateral sclerosis and spinal cord atrophy. Can be used to The neuroprotective properties of the cell death inhibitors of the present invention in vivo can be tested in a rat transient focal ischemia model ( Xue et al., Stroke 21 : 166 (1990)).

본 발명의 세포 사멸 억제제는 잠재적으로 심근의 사멸로 귀결될 수 있는 임의의 증상에서 세포 사멸을 예방하는데 사용할 수 있다. 이는 심근 경색, 충혈성 심부전 및 심근증을 포함한다. 하나의 특정 적용은 심장의 일정 바이러스성 감염에서 발생하는 바와 같은 심근 세포 사멸을 경감 또는 예방하는 것이다.The cell death inhibitor of the present invention can be used to prevent cell death in any condition that can potentially result in death of the myocardium. This includes myocardial infarction, congestive heart failure and cardiomyopathy. One particular application is to mitigate or prevent myocardial cell death as occurs in certain viral infections of the heart.

본 발명의 세포 사멸 억제제의 생체 내 활성은 로드리게즈 등[Rodriguez et al., J.Exp. Med., 184:2067-2072(1996)]에 의하여 기술된 "마우스 간 고사" 모델을 사용하여 테스트할 수 있다. 상기 모델에 있어서, 마우스들은 간과 다른 기관내의 대규모 고사를 유발하는 항Fas 항체의 정맥 주사(IV) 처치로 인하여 일반적인 기관 부전 및 사망으로 유도된다. 상기 모델은 본 발명의 세포 사멸 억제제의 전신적 생체 이용성 및 생체내 항-고사 성질을 간접적으로 시험하는데 유용하다.In vivo activity of the cell death inhibitors of the present invention is described by Rodriguez et al., J. Exp. Med., 184: 2067-2072 (1996). In this model, mice are induced to general organ failure and death due to intravenous (IV) treatment of anti-Fas antibodies causing massive death in the liver and other organs. This model is useful for indirectly testing the systemic bioavailability and in vivo anti-apoptotic properties of the cell death inhibitors of the invention.

본 발명의 세포 사멸 억제제는 안압을 증가시키는 장애(예컨대, 녹내장) 또는 노화와 관련된 망막 장애(예컨대, 노화-관련 황반 변성)에서 발생할 수 있는 바와 같은 망막 뉴런의 세포 사멸을 예방하는데 사용할 수 있다. 이 억제제는 또한 색소 망막염과 같은 망막의 유전성 변성 장애를 치료하는데 사용할 수 있다.The cell death inhibitors of the present invention can be used to prevent cell death of retinal neurons as can occur in disorders that increase intraocular pressure (eg, glaucoma) or retinal disorders associated with aging (eg, age-related macular degeneration). This inhibitor can also be used to treat inherited degenerative disorders of the retina, such as pigmented retinitis.

본 발명의 세포 사멸 억제제는 또한 면역 시스템의 조로 세포 사멸을 경감 또는 예방하는데 사용할 수 있고, 면역 결핍 장애, 예를 들어, 후천성 면역 결핍증(AIDS), 중증 연합 면역 결핍증(SCIDS: severe combined immune deficiency syndrome) 및 관련 질병을 치료하는데 특히 유용하다. 또한, 세포 사멸 억제제는 방사선-유발 면역 억제를 치료하는데 사용할 수 있다.The apoptosis inhibitors of the present invention can also be used to reduce or prevent cell death as a premature of the immune system, and can be used for immunodeficiency disorders, such as AIDS, severe combined immune deficiency syndrome (SCIDS). ) And related diseases. In addition, cell death inhibitors can be used to treat radiation-induced immune suppression.

인간의 기관 및 조직의 이식은 기관 부전에 대한 일반적인 치료 방법이다. 그러나, 이식 과정 중에, 기관 또는 조직의 공여체는 세포 사멸의 위험이 있다. 왜냐하면, 호스트에게 이식하기 전에 그의 정상 혈액 공급이 박탈되기 때문이다. 이러한 허혈 상태는 세포 사멸 억제제를 공여체 기관 또는 조직 내로 주입하거나, 세포 사멸 억제제를 상기 기관/조직 저장 배지 내에 직접 첨가함에 의하여 치료할 수 있다. 세포 사멸 억제제는 또한 이식 후 공여체 기관/조직 내의 세포 사멸을 경감 또는 예방하여, 고사를 자극함에 의하여 그들의 목표물을 죽이는 호스트의 면역 세포의 효과로부터 공여체 기관/조직을 보호하는데 사용할 수 있다. 세포 사멸 억제제의 세포 보호 효과는 또한 시험관내 수정 과정에서 이용되는 인간 또는 동물의 정자 및 난자의 사멸을 예방하는데 사용할 수 있다. 이들 억제제는 수집 과정 중에 사용할 수 있고, 저장 배지 중에 포함시킬 수도 있다.Transplantation of human organs and tissues is a common treatment for organ failure. However, during the transplant process, donors of organs or tissues are at risk of cell death. This is because his normal blood supply is deprived before transplantation to the host. Such ischemic conditions can be treated by injecting apoptosis inhibitors into donor organs or tissues, or by adding apoptosis inhibitors directly into the organ / tissue storage medium. Apoptosis inhibitors can also be used to reduce or prevent cell death in donor organs / tissues after transplantation to protect donor organs / tissues from the effects of immune cells of the host killing their targets by stimulating apoptosis. The cytoprotective effects of apoptosis inhibitors can also be used to prevent the death of sperm and eggs in humans or animals used in the in vitro fertilization process. These inhibitors may be used during the collection process and may be included in the storage medium.

포유 동물 세포주 및 효모 세포는 산업적 또는 의약적 용도를 위하여 다량의 재조합 단백질(예를 들어, 항체, 효소 또는 호르몬)을 제조하기 위하여 통상적으로 사용된다. 이들 몇몇 세포주의 수명은 성장 조건, 발현되는 재조합 분자의 성질(어떤 것은 독성이 있음) 및 다른 미공지 인자에 의하여 제한된다. 산업상 세포주의 수명은 성장 배지 중에 상기 세포 사멸 억제제를 10-200mM의 농도 범위로 포함시킴에 의하여 연장시킬 수 있다.Mammalian cell lines and yeast cells are commonly used to produce large quantities of recombinant protein (eg, antibodies, enzymes or hormones) for industrial or medical use. The lifetime of some of these cell lines is limited by growth conditions, the nature of the recombinant molecule expressed (some are toxic) and other unknown factors. The lifespan of an industrial cell line can be extended by including the cell death inhibitor in a growth medium in a concentration range of 10-200 mM.

모발 성장 및 손실을 조절하는 인자는 대부분 미공지이다. 그러나, 모낭 퇴화[카타젠(catagen)으로 언급됨]가 적어도 부분적으로는 고사때문일 수 있다는 몇몇 증거가 있다. 따라서, 남성-패턴 대머리, 방사선-유발 또는 화학요법-유발 모발 손실 및 감정적 스트레스로 인한 모발 손실을 포함(단, 이에 제한되는 것은 아님)하는 다양한 증상에 기인하여 발생하는 모발 손실을 치료하는데, 본 발명의 세포 사멸 억제제를 사용할 수 있다고 생각된다. 또한, 고사가 모발의 탈색을 유발할 수 있다는 증거가 있다. 따라서, 본 발명의 세포 사멸 억제제를 모발의 조기 백발화의 치료 또는 예방에도 사용할 수 있다고 생각된다.Factors that regulate hair growth and loss are mostly unknown. However, there is some evidence that hair follicle degeneration (referred to as catagen) may be due, at least in part, to death. Thus, to treat hair loss caused by a variety of symptoms including, but not limited to, male-pattern baldness, radiation-induced or chemotherapy-induced hair loss, and hair loss due to emotional stress. It is contemplated that the cell death inhibitor of the invention can be used. There is also evidence that death can cause hair to discolor. Therefore, it is contemplated that the cell death inhibitor of the present invention can also be used for the treatment or prevention of premature gray hair of hair.

피부 상피 세포의 사멸은 높은 수준의 방사선, 열 또는 화학 약품에 노출된 후에 발생할 수 있다. 본 발명의 세포 사멸 억제제는 상기 유형의 피부 손상을 치료, 경감 또는 예방하는데 사용할 수 있다고 생각된다. 하나의 특정 적용에 있어서, 세포 사멸 억제제는 연고제로서 적용되어 태양에 대한 급성 과-노출을 치료하고, 피부 물집 및 벗겨짐을 예방할 수 있다.Death of skin epithelial cells can occur after exposure to high levels of radiation, heat or chemicals. It is contemplated that the cell death inhibitor of the present invention can be used to treat, alleviate or prevent this type of skin damage. In one particular application, apoptosis inhibitors can be applied as ointments to treat acute over-exposure to the sun and to prevent skin blisters and flaking.

골드버그(Goldberg) 등[Nature Genetics 13:442-449(1996)]은 최근에 헌팅톤 질병(HD) 유전자의 단백질 생성물인 헌팅틴은 CPP32(ICE가 아님)에 의하여 절단될 수 있음을 보고하였다. 돌연변이 잠재성 HD는 HD 유전자의 5' 말단에서 CAG 트리뉴클레오티드의 연장이다. 36 반복을 초과하는 트리뉴클레오티드 연장은 HD의 임상적 표현과 관계된다. CAG 연장은 CPP32에 의한 헌팅틴의 절단을 촉진하여, HD에서 고사 세포 사멸에서의 CPP32의 역할과 연결된다. CPP32 억제 활성을 갖는 본 발명의 화합물은 CPP32 유발 고사 세포 사멸을 차단하고, 그래서, HD 및 트리뉴클레오티드 반복의 연장을 특징으로 하는 다른 장애, 예를 들어, 근긴장성 영양 장애, 취약성 X 정신 박약, 척수연수 근 위축증, 척수소뇌 무독성 타입 I 및 덴타토-루브로 팔리돌루이시안(Dentato-Rubro pallidoluysian) 위축증 등을 예방 및 치료하는데 유용할 것이다.Goldberg et al . ( Nature Genetics 13 : 442-449 (1996)) recently reported that huntingtin, the protein product of the Huntington's disease (HD) gene, can be cleaved by CPP32 (but not ICE). Mutant latent HD is an extension of the CAG trinucleotide at the 5 'end of the HD gene. Trinucleotide extension beyond 36 repeats is related to the clinical expression of HD. CAG extension promotes cleavage of huntingtin by CPP32, which is linked to the role of CPP32 in apoptosis in HD. Compounds of the present invention having CPP32 inhibitory activity block CPP32 induced apoptosis, and thus, other disorders characterized by prolongation of HD and trinucleotide repeats, such as myotonic dystrophy, fragility X mental retardation, spinal cord It may be useful for preventing and treating soft muscle atrophy, spinal cerebellar nontoxic type I, and Dentato-Rubro pallidoluysian atrophy.

본 발명의 범위 내의 조성물은 본 발명의 화합물이 그의 의도된 목적을 달성하기에 유효한 양으로 포함되는 모든 조성물을 포함한다. 개개의 필요가 다양하지만, 각 성분의 유효량의 최적 범위는 당업자가 결정한다. 전형적으로, 상기 화합물은 포유동물(예, 인간)에게 1일당 고사-매개 장애(예, 신경원 세포 사멸, 심장병, 망막 장애, 다낭성 신장 질병 및 면역 시스템 장애)를 치료할 포유동물의 체중당 0.0025 내지 50mg/kg의 용량으로 경구 투여하거나, 그의 약학적 허용 염을 등가량으로 투여할 수 있다. 바람직하게, 그러한 장애를 치료 또는 예방하기 위하여 약 0.01 내지 약 10mg/kg을 경구적으로 투여할 수 있다. 근육내 주사를 위한 용량은 일반적으로 경구 용량의 약 절반이다. 예를 들어, 신경원 세포 사멸의 치료 또는 예방을 위한 적당한 근육내 용량은 약 0.0025 내지 약 15 mg/kg, 가장 바람직하게 약 0.01 내지 약 10mg/kg일 것이다.Compositions within the scope of the present invention include all compositions in which the compounds of the present invention are included in an amount effective to achieve their intended purpose. Although individual needs vary, the optimal range of effective amounts of each component is determined by those skilled in the art. Typically, the compound is 0.0025 to 50 mg per body weight of mammal to treat mammalian (eg, human) death-mediated disorders (eg neuronal cell death, heart disease, retinal disorders, polycystic kidney disease and immune system disorders) per day It may be administered orally at a dose of / kg, or its pharmaceutically acceptable salt in an equivalent amount. Preferably, from about 0.01 to about 10 mg / kg can be administered orally to treat or prevent such disorders. The dose for intramuscular injection is generally about half of the oral dose. For example, a suitable intramuscular dose for the treatment or prevention of neuronal cell death will be about 0.0025 to about 15 mg / kg, most preferably about 0.01 to about 10 mg / kg.

단위 경구 용량은 약 0.01 내지 약 50mg, 바람직하게 약 0.1 내지 약 10mg의 화합물을 포함할 수 있다. 단위 용량은 각각 약 0.1 내지 약 10, 편리하게 약 0.25 내지 50mg의 화합물 또는 그의 용매화물을 함유하는 하나 이상의 정제로서 하루에 1회 이상 투여될 수 있다.The unit oral dose may comprise about 0.01 to about 50 mg, preferably about 0.1 to about 10 mg of the compound. The unit dose may be administered one or more times per day as one or more tablets each containing about 0.1 to about 10, conveniently about 0.25 to 50 mg of the compound or solvate thereof.

조 화학 약품으로서 상기 화합물을 투여하는데 더하여, 본 발명의 화합물은 화합물을 제제화하여 약학적으로 사용할 수 있는 제제로 만드는 것을 돕는 부형제 및 보조제를 포함하는 적당한 약학적 허용 담체를 함유하는 약학적 제제의 일부로서 투여할 수 있다. 바람직하게, 제제, 특히 경구적으로 투여될 수 있고, 정제, 당의정 및 캅셀과 같은 바람직한 투여 형태로 사용될 수 있는 제제, 또한 좌약과 같이 직장으로 투여될 수 있는 제제, 및 주사용 또는 경구 투여용의 적당한 용액은 약 0.01 내지 99%, 바람직하게 약 0.25 내지 75%의 활성 화합물을 부형제와 함께 포함한다.In addition to administering the compound as a crude chemical, the compound of the present invention is part of a pharmaceutical formulation containing a suitable pharmaceutically acceptable carrier comprising excipients and auxiliaries which aid in formulating the compound into a pharmaceutically acceptable formulation. It can be administered as. Preferably, formulations, in particular those which can be administered orally and which can be used in preferred dosage forms such as tablets, dragees and capsules, can also be administered rectally, such as suppositories, and for injection or oral administration. Suitable solutions include from about 0.01 to 99%, preferably from about 0.25 to 75% of the active compound with excipients.

본 발명의 범위 내에 또한 포함되는 것은 본 발명의 화합물의 무독성 약학적 허용 염이다. 산 부가 염은 본 발명의 특정 세포 사멸 억제제의 용액을 약학적 허용 무독성 산, 예를 들어, 염산, 퓨마르산, 말레산, 숙신산, 아세트산, 시트르산, 타르타르산, 탄산, 인산, 옥살산 등과 혼합함에 의하여 형성한다. 염기 염은 본 발명의 특정 세포 사멸 억제제의 용액을 약학적 허용 무독성 염기, 예를 들어, 소듐 하이드록사이드, 포타슘 하이드록사이드, 콜린 하이드록사이드, 소듐 카보네이트 등과 혼합함에 의하여 형성한다.Also included within the scope of the present invention are non-toxic pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention. Acid addition salts are formed by mixing a solution of certain cell death inhibitors of the invention with pharmaceutically acceptable nontoxic acids such as hydrochloric acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, acetic acid, citric acid, tartaric acid, carbonic acid, phosphoric acid, oxalic acid, and the like. do. Base salts are formed by mixing a solution of certain cell death inhibitors of the invention with pharmaceutically acceptable non-toxic bases such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, choline hydroxide, sodium carbonate and the like.

본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 화합물의 유익한 효과를 경험할 수 있는 임의의 동물에게 투여할 수 있다. 그러한 동물 중 주요한 것은 포유동물(예, 인간)이나, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.The pharmaceutical compositions of the invention can be administered to any animal that can experience the beneficial effects of the compounds of the invention. The main one of such animals is a mammal (eg, a human), but the present invention is not limited thereto.

본 발명의 약학 조성물은 그들의 의도된 목적을 달성하기 위한 임의의 수단에 의하여 투여할 수 있다. 예를 들어, 비경구적으로, 피하로, 정맥내로, 근육내로, 복강내로, 경피적으로, 구강으로, 초내로 또는 두개내로 투여할 수 있다. 대안적으로 또는 동시에, 경구적으로 투여할 수 있다. 투여량은 수령인의 연령, 건강 및 체중, 동시 치료의 종류, 경우에 따라, 치료의 빈도 및 원하는 효과의 성질에 따라 달라질 것이다.The pharmaceutical compositions of the present invention may be administered by any means for achieving their intended purpose. For example, it can be administered parenterally, subcutaneously, intravenously, intramuscularly, intraperitoneally, percutaneously, orally, intraorally or intracranially. Alternatively or concurrently, it may be administered orally. Dosages will vary depending on the age, health and weight of the recipient, the type of concurrent treatment, and if desired, the frequency of treatment and the nature of the desired effect.

본 발명의 약학 제제는 공지된 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 통상적인 혼합, 과립화, 당의정 제조, 용해 또는 동결 건조 방법의 수단에 의하여 제조할 수 있다. 그래서, 경구용 약학 제제는, 원하거나 필요하다면, 적당한 보조제를 첨가한 후, 활성 화합물을 고체 부형제와 배합하고, 생성된 혼합물을 임의로 분쇄하고, 과립 혼합물로 만들어서 정제 또는 당의정 핵정을 수득할 수 있다.The pharmaceutical preparations of the invention can be prepared by known methods. For example, it may be prepared by means of conventional mixing, granulation, dragee preparation, dissolution or lyophilization method. Thus, oral pharmaceutical preparations, if desired or necessary, may be added, after addition of suitable auxiliaries, the active compounds may be combined with solid excipients, the resulting mixture may optionally be ground, and granulated to obtain tablets or dragee core tablets. .

적당한 부형제는, 특히, 충진제, 예를 들어, 당류, 예컨대, 락토스 또는 슈크로스, 만니톨 또는 소르비톨, 셀룰로스 제제 및/또는 칼슘 포스페이트, 예컨대, 트리칼슘 포스페이트 또는 칼슘 하이드로젼 포스페이트 뿐만아니라, 결합제, 예를 들어, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등을 사용한 전분 페이스트, 젤라틴, 트래거캔스(tragacanth), 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐 피롤리돈 등이다. 경우에 따라, 붕해제, 예를 들어, 전술한 전분들 및 또한 카복시메틸-전분, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 우무, 또는 알긴산 또는 그의 염(예, 소듐 알기네이트) 등을 첨가할 수 있다. 보조제는 전술한 모두와, 흐름-조절제(flow-regulating agent), 활택제, 예를 들어, 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 그의 염(예, 마그네슘 스테아레이트 또는 칼슘 스테아레이트) 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 등이다. 경우에 따라, 당의정 핵정에 위액에 대해 내성인 적당한 코팅물을 피복한다. 이러한 목적을 위하여, 농축 당류 용액을 사용할 수 있는데, 이는 아라비아 고무, 탈크, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 티타늄 디옥사이드, 랙커 용액 및 적당한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 임의로 함유할 수 있다. 위액에 내성인 코팅물을 제조하기 위하여, 아세틸셀룰로스 프탈레이트 또는 하이드록시프로피메틸-셀룰로스 프탈레이트 등의 적당한 셀룰로스 제제의 용액을 사용한다. 예를 들어, 동일시를 위하여 또는 활성 화합물의 용량의 배합 특성을 나타내기 위하여, 염료 또는 안료를 정제 또는 당의정 코팅물에 첨가할 수 있다.  Suitable excipients are, in particular, fillers, for example, sugars such as lactose or sucrose, mannitol or sorbitol, cellulose preparations and / or calcium phosphates such as tricalcium phosphate or calcium hydrophosphate, as well as binders, for example For example, starch paste using corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch and the like, gelatin, tragacanth, methyl cellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and / or polyvinyl pyrrolidone, etc. to be. If desired, disintegrants can be added, for example, the starches described above and also carboxymethyl-starch, crosslinked polyvinyl pyrrolidone, radish, or alginic acid or salts thereof (e.g. sodium alginate) and the like. . Adjuvants include all of the foregoing, and flow-regulating agents, glidants, for example silica, talc, stearic acid or salts thereof (eg magnesium stearate or calcium stearate) and / or polyethylene glycols and the like. to be. Optionally, the dragee core tablet is coated with a suitable coating that is resistant to gastric juice. For this purpose, concentrated sugar solutions can be used, which may optionally contain gum arabic, talc, polyvinyl pyrrolidone, polyethylene glycol and / or titanium dioxide, racker solutions and suitable organic solvents or solvent mixtures. In order to prepare a coating resistant to gastric fluid, a solution of a suitable cellulose preparation such as acetylcellulose phthalate or hydroxypropymethyl-cellulose phthalate is used. For example, dyes or pigments may be added to the tablets or dragee coatings for identification or to characterize the formulation of the dose of the active compound.

경구적으로 사용할 수 있는 다른 약학 제제는 젤라틴으로 만들어진 푸쉬-핏(push-fit) 캅셀 뿐만아니라 젤라틴 및 글리세롤 또는 소르비톨과 같은 가소제로 만들어진 연질 밀봉 캅셀 등이 있다. 푸쉬-핏 캅셀은 락토스와 같은 충진제, 전분과 같은 결합제 및/또는 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 활택제 및 임의로 안정화제와 혼합될 수 있는 과립제 형태로 활성 화합물을 함유할 수 있다. 연질 캅셀에 있어서, 활성 화합물은 지방유 또는 액체 파라핀 등의 적당한 액체에 용해되거나 현탁되는 것이 바람직하다. 또한 안정화제를 첨가할 수 있다.Other pharmaceutical preparations that can be used orally include push-fit capsules made of gelatin, as well as soft sealed capsules made of gelatin and plasticizers such as glycerol or sorbitol. The push-fit capsules may contain the active compound in the form of granules which can be mixed with fillers such as lactose, binders such as starch and / or glidants such as talc or magnesium stearate and optionally stabilizers. In soft capsules, the active compound is preferably dissolved or suspended in a suitable liquid, such as fatty oil or liquid paraffin. Stabilizers can also be added.

직장으로 사용될 수 있는 가능한 약학 제제는 예를 들어 1종 이상의 활성 화합물과 좌약 기제의 배합물로 구성된 좌약을 포함한다. 적당한 좌약 기제는 예를 들어, 천연 또는 합성 트리글리세라이드 또는 파라핀 탄화수소이다. 또한, 활성 화합물과 기제의 배합물로 구성된 젤라틴 직장 캅셀을 사용할 수도 있다. 가능한 기제 물질은 예를 들어, 액체 트리글리세라이드, 폴리에틸렌 글리콜 또는 파라핀 탄화수소 등이 있다.Possible pharmaceutical formulations that can be used rectally include, for example, suppositories consisting of a combination of one or more active compounds and a suppository base. Suitable suppository bases are, for example, natural or synthetic triglycerides or paraffin hydrocarbons. It is also possible to use gelatin rectal capsules consisting of a combination of the active compound and the base. Possible base materials are, for example, liquid triglycerides, polyethylene glycols or paraffin hydrocarbons and the like.

비경구 투여를 위한 적당한 제제는 수용성 형태의 활성 화합물의 수용액, 예를 들어, 수용성 염 및 알칼리성 용액이 있다. 트리스(Tris)와 같은 완충액이 존재할 수 있다. 또한, 적당한 유성 주사 현탁액으로서 활성 화합물의 현탁액을 투여할 수 있다. 적당한 친유성 용매 또는 부형제(vehicle)는 지방유, 예를 들어, 참기름, 또는 합성 지방산 에스테르, 예를 들어, 에틸 올레에이트 또는 트리글리세라이드 또는 폴리에틸렌 글리콜-400(이들 화합물은 PEG-400에 용해된다) 등이 있다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예를 들어, 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 소르비톨 및/또는 덱스트란 등을 함유할 수 있다. 임의로, 현탁액은 또한 안정화제를 함유할 수 있다.Suitable formulations for parenteral administration include aqueous solutions of the active compounds in water-soluble form, such as water soluble salts and alkaline solutions. Buffers such as Tris may be present. In addition, suspensions of the active compounds can be administered as appropriate oily injection suspensions. Suitable lipophilic solvents or vehicles include fatty oils such as sesame oil, or synthetic fatty acid esters such as ethyl oleate or triglycerides or polyethylene glycol-400 (these compounds are dissolved in PEG-400) and the like. There is this. Aqueous injection suspensions may contain substances which increase the viscosity of the suspension, such as sodium carboxymethyl cellulose, sorbitol and / or dextran and the like. Optionally, the suspension may also contain stabilizers.

본 발명의 한 양상에 따르면, 본 발명의 화합물은 국부 및 비경구적 제제로 사용되고, 자외선 복사를 포함하는 높은 수준의 복사선, 열 또는 화학약품에의 노출에 의하여 야기되는 바와 같은 피부 손상의 치료를 위하여 사용된다.According to one aspect of the present invention, the compounds of the present invention are used in topical and parenteral preparations and for the treatment of skin damage as caused by exposure to high levels of radiation, heat or chemicals, including ultraviolet radiation. Used.

피부에 대한 치료 효과를 갖는 1종 이상의 추가적 물질을 또한 상기 조성물에 포함시킬 수 있다. 그래서, 상기 조성물은 피부에 고리형-AMP 레벨을 증가시킬 수 있는 1종 이상의 화함물을 또한 함유할 수 있다. 적당한 화합물은 조성물의 중량을 기준으로 약 0.1-1중량%의 아데노신 또는 핵산 가수분해물 및 조성물의 중량을 기준으로 약 0.5-5중량%의 파파베린이 있다. 또한, 조성물의 중량을 기준으로 약 0.1-2중량%의 이소프로테레놀 등의 β-아드레날린 작동약 또는 조성물의 중량을 기준으로 약 0.1-1중량%의 고리형-AMP가 적당하다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 다른 적당한 유형의 추가의 활성 성분은 피부에 유익한 효과를 갖는 공지된 임의의 화합물이 있다. 그러한 화합물은 조성물의 중량을 기준으로 약 0.003-0.3중량%의 비타민 A와 같은 레티노이드 및 조성물의 중량을 기준으로 약 0.1-10중량%의 비타민 E와 같은 크로마놀 또는 그의 유도체가 있다. 또한, 항-염증제 및 케라토플라스틱제(keratoplastic agent)를 화장품 조성물에 포함시킬 수 있다. 전형적인 항-염증제는 조성물의 중량을 기준으로 약 0.25-5중량%의 하이드로코르티손 또는 그의 아세테이트와 같은 코르티코스테로이드, 또는 조성물의 중량을 기준으로 약 0.025-0.5중량%의 덱사메타손과 같은 코르티코스테로이드이다. 전형적인 케라토플라스틱제는 조성물의 중량을 기준으로 약 0.1-20중량%의 코울 타르 또는 조성물의 중량을 기준으로 약 0.05-2중량%의 안트랄린이다.One or more additional substances having a therapeutic effect on the skin may also be included in the composition. Thus, the composition may also contain one or more compounds that can increase cyclic-AMP levels in the skin. Suitable compounds are about 0.1-1% by weight of adenosine or nucleic acid hydrolyzate and about 0.5-5% by weight of papaverine by weight of the composition. Also suitable are about 0.1-1% by weight of the β-adrenergic agonist such as isoproterenol or about 0.1-1% by weight of the cyclic-AMP based on the weight of the composition. Other suitable types of additional active ingredients that may be included in the compositions of the present invention are any known compounds that have a beneficial effect on the skin. Such compounds include retinoids, such as about 0.003-0.3% by weight of vitamin A, based on the weight of the composition, and chromanol, such as about 0.1-10% by weight of vitamin E, or derivatives thereof, based on the weight of the composition. In addition, anti-inflammatory and keratoplastic agents can be included in the cosmetic composition. Typical anti-inflammatory agents are about 0.25-5% by weight of corticosteroids, such as hydrocortisone or acetates thereof, or corticosteroids such as about 0.025-0.5% by weight of dexamethasone, by weight of the composition. Typical kerattoplastic agents are about 0.1-20% by weight of coarse tar or about 0.05-2% by weight of anthraline, based on the weight of the composition.

본 발명의 국소용 조성물은 적당한 담체의 선택에 의하여 오일, 크림, 로션, 연고 등과 같이 바람직하게 제형화된다. 적당한 담체는 식물유, 광유, 백색 바셀린(백색 연질 파라핀), 측쇄 지방 또는 오일, 동물성 지방 및 고 분자량 알콜(C12 초과) 등이 있다. 바람직한 담체는 활성 성분이 용해되는 것이다. 유화제, 안정화제, 습윤제 및 항산화제가 또한, 경우에 따라, 착색제 또는 방향제와 함께 포함될 수 있다. 또한, 경피 흡수 증강제는 이들 국소 제제에 사용될 수 있다. 그러한 증강제의 예는 미국 특허 제3,989,816호 및 제4,444,762호에서 밝혀져 있다.Topical compositions of the invention are preferably formulated such as oils, creams, lotions, ointments and the like by the selection of a suitable carrier. Suitable carriers include vegetable oils, mineral oils, white petrolatum (white soft paraffin), side chain fats or oils, animal fats and high molecular weight alcohols (above C 12 ). Preferred carriers are those in which the active ingredient is dissolved. Emulsifiers, stabilizers, wetting agents and antioxidants may also be included, if desired, with colorants or fragrances. In addition, transdermal absorption enhancers can be used in these topical formulations. Examples of such enhancers are found in US Pat. Nos. 3,989,816 and 4,444,762.

크림은 아몬드유와 같은 오일 소량에 용해된 활성 성분이 혼합된 광유, 자기-유화 밀랍 및 물의 혼합물로부터 바람직하게 제형화된다. 그러한 크림의 전형적인 예는 약 40부의 물, 약 20부의 밀랍, 약 40부의 광유 및 약 1부의 아몬드유를 포함하는 것이다.The cream is preferably formulated from a mixture of mineral oil, self-emulsifying beeswax and water mixed with the active ingredient dissolved in a small amount of oil such as almond oil. Typical examples of such creams include about 40 parts water, about 20 parts beeswax, about 40 parts mineral oil and about 1 part almond oil.

연고는 아몬드유와 같은 식물유 중에서 활성 성분의 용액을 따뜻한 연질 파라핀과 혼합하고, 혼합물을 냉각시켜서 제제화할 수 있다. 그러한 연고의 전형적인 예는 약 30중량%의 아몬드유 및 약 70중량%의 백색 연질 파라핀을 포함하는 것이다.Ointments can be formulated by mixing a solution of the active ingredient with warm soft paraffin in a vegetable oil such as almond oil and by cooling the mixture. Typical examples of such ointments include about 30% by weight almond oil and about 70% by weight white soft paraffin.

로션은 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적당한 고분자량 알콜중에 활성 성분을 용해시킴에 의하여 편리하게 제조할 수 있다.Lotions can be conveniently prepared by dissolving the active ingredient in a suitable high molecular weight alcohol such as propylene glycol or polyethylene glycol.

또한, 이들 조성물은 당업자에게 공지되었거나 명백한 다른 의약제, 성장 인자, 상처 봉함제, 담체 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 햇볕에 탄 것과 같은 피부 손상으로 이미 고통받는 인간과 같은 항온 동물에게, 그 호스트가 치료받지 않은 것보다 빨리 치료되기에 충분한 양으로 투여한다. 이러한 용도를 위하여 유효한 양은 피부 손상의 심각도 및 치료받는 환자의 일반적인 건강 상태에 따라 달라질 것이다. 장기간에 걸친 지속 투여량은 필요에 따라 조정될 수 있다. 수의학적 용도를 위하여, 필요에 따라 높은 수준으로 투여될 수 있다.In addition, these compositions may include other pharmaceuticals, growth factors, wound closure agents, carriers, and the like, which are known or apparent to those skilled in the art. The compositions of the present invention are administered to a warm-blooded animal, such as a human, already suffering from skin damage, such as sunburn, in an amount sufficient to cure the host faster than untreated. Effective amounts for this use will depend on the severity of the skin damage and the general state of health of the patient being treated. Sustained dosages over long periods of time can be adjusted as needed. For veterinary use, it may be administered at high levels as necessary.

모발 성장의 감소로 고통받는 동물의 경우에 있어서, 본 발명의 조성물은 모발 성장 속도를 증가시키기에 충분한 양으로 투여한다. 이러한 용도를 위하여 유효한 양은 모발 성장의 감소 정도 및 치료받는 환자의 일반적인 건강 상태에 따라 달라질 것이다. 장기간에 걸친 지속 투여량은 필요에 따라 조정될 수 있다. 수의학적 용도를 위하여, 필요에 따라 높은 수준으로 투여될 수 있다.In animals suffering from a reduction in hair growth, the compositions of the present invention are administered in an amount sufficient to increase the hair growth rate. Effective amounts for this use will depend on the degree of reduction in hair growth and the general state of health of the patient being treated. Sustained dosages over long periods of time can be adjusted as needed. For veterinary use, it may be administered at high levels as necessary.

본 발명의 방법 및 조성물의 실시예가 하기에 설명되나, 이에 한정되는 것은 아니다. 당업자에게 자명한, 임상적인 치료법에서 통상적으로 마주하게 되는 파라미터 및 조건의 다양한 변형 및 다른 적당한 수정은 본 발명의 정신 및 범위내에 있다.Examples of the methods and compositions of the present invention are described below, but are not limited thereto. Various modifications and other suitable modifications of parameters and conditions commonly encountered in clinical therapies, as will be apparent to those skilled in the art, are within the spirit and scope of the present invention.

도 1a-1g는 하기의 것으로 공격(challenge)된 헬라(HeLa) 세포의 사진들이다: 사이클로헥스아미드(CHX) 및 DMSO(도 1a), 종양 괴사 인자-알파(TNF-α)/CHX 및 DMSO(도 1b); 50 μM BOC-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 1c); 50 μM Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 1d); 50 μM Cbz-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 1e); 50 μM Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 1f); 및 DMSO(도 1g).1A-1G are photographs of HeLa cells challenged with: cyclohexamide (CHX) and DMSO (FIG. 1A), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) / CHX and DMSO ( 1b); 50 μM BOC-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 1C); 50 μM Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 1D); 50 μΜ Cbz-Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 1E); 50 μΜ Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 1F); And DMSO (FIG. 1G).

도 2a-2g는 하기의 것으로 공격된 헬라(HeLa) 세포의 사진들이다: 사이클로헥스아미드(CHX) 및 DMSO(도 2a), TNF-α/CHX 및 DMSO(도 2b); 5 μM BOC-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 2c); 5 μM Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 2d); 5 μM Cbz-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 2e); 5 μM Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 2f); 및 DMSO(도 2g).2A-2G are photographs of HeLa cells challenged with the following: cyclohexamide (CHX) and DMSO (FIG. 2A), TNF-α / CHX and DMSO (FIG. 2B); 5 μM BOC-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 2C); 5 μΜ Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 2D); 5 μΜ Cbz-Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 2E); 5 μM Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 2F); And DMSO (FIG. 2G).

도 3a-3g는 하기의 것으로 공격된 헬라(HeLa) 세포의 사진들이다: 사이클로헥스아미드(CHX) 및 DMSO(도 3a), TNF-α/CHX 및 DMSO(도 3b); 0.5 μM BOC- Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 3c); 0.5 μM Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 3d); 0.5 μM Cbz-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 3e); 0.5 μM Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F, TNF-α/CHX(도 3f); 및 DMSO(도 3g).3A-3G are photographs of HeLa cells challenged with the following: cyclohexamide (CHX) and DMSO (FIG. 3A), TNF-α / CHX and DMSO (FIG. 3B); 0.5 μM BOC-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 3C); 0.5 μM Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 3D); 0.5 μM Cbz-Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 3E); 0.5 μM Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F, TNF-α / CHX (FIG. 3F); And DMSO (FIG. 3G).

도 4는 다양한 농도의 Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(b)와 비교한 다양한 농도의 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(a)를 사용한 TNF-α/CHX로부터 헬라 (HeLa) 세포의 보호를 나타내는 막대 그래프이다.4 with various concentrations of Cbz-Asp (OMe) -Glu ( OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (b) one of the various concentrations of Cbz-Val-Asp compared (OMe) -CH 2 F ( Bar graph showing protection of HeLa cells from TNF-α / CHX using a).

도 5는 다양한 농도의 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(a) 및 BOC-Asp(OMe)-CH2F(b)를 사용한 TNF-α/CHX로부터 헬라(HeLa) 세포의 보호를 나타내는 막대 그래프이다.Figure 5 Protection of HeLa cells from TNF-α / CHX using various concentrations of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (a) and BOC-Asp (OMe) -CH 2 F (b). Bar graph indicating.

도 6은 다양한 저용량의 Cbz-Val-Ala-Asp(OMe)-CH2F(b)와 비교한 다양한 저용량의 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(a)를 사용한 TNF-α/CHX로부터 헬라(HeLa) 세포의 보호를 나타내는 막대 그래프이다.FIG. 6 shows TNF-α / with various low doses of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (a) compared to various low doses of Cbz-Val-Ala-Asp (OMe) -CH 2 F (b). Bar graph showing protection of HeLa cells from CHX.

도 7a-7e는 저캣 세포(Jurkat cell)에서 PARP 절단 분석의 결과를 나타낸다. 화합물 1 = Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F. 화합물 2 = Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val- Asp(OMe)-CH2F. 화합물 3 = Cbz-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F. 화합물 4 = Cbz-Ile-Glu(OMe)-Thr-Asp(OMe)-CH2F. 화합물 5 = BOC-Asp(OMe)-CH2F. 화합물 6 = Cbz-Asp-α([2,6-디클로로벤조일옥시]메틸케톤). 화합물 7 = Cbz-Val-Ala- Asp(OMe)-CH2F.7A-7E show the results of PARP cleavage analysis in Jurkat cells. Compound 1 = Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F. Compound 2 = Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val- Asp (OMe) -CH 2 F. Compound 3 = Cbz-Glu (OMe ) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F. Compound 4 = Cbz-Ile-Glu (OMe) -Thr-Asp (OMe) -CH 2 F. Compound 5 = BOC-Asp (OMe) -CH 2 F. Compound 6 = Cbz-Asp-α ([2,6-dichlorobenzoyloxy] methylketone). Compound 7 = Cbz-Val-Ala-Asp (OMe) -CH 2 F.

도 8a 및 8b는 Z-VD-fmk 및 Z-VAD-fmk에 의한 항Fas 처리된 저캣 세포 (Jurkat cell)중의 PARP 절단의 억제를 나타내는 PARP 절단 사진들이다.8A and 8B are PARP cleavage pictures showing inhibition of PARP cleavage in anti-Fas treated Jurkat cells by Z-VD-fmk and Z-VAD-fmk.

도 9는 Z-VD-fmk에 의한 TNF-α-유발 세포 사멸의 억제를 나타내는 세포 생존 vs. Z-VD-fmk 농도의 그래프이다.Figure 9 shows cell survival vs. inhibition of TNF-α-induced cell death by Z-VD-fmk. It is a graph of Z-VD-fmk concentration.

도 10은 Z-VD-fmk에 의한 항Fas 처리된 저캣 세포(Jurkat cell) 중의 DNA 래더링(laddering)의 억제를 나타내는 DNA 래더링의 사진이다.10 is a photograph of DNA laddering showing inhibition of DNA laddering in anti-Fas treated Jurkat cells by Z-VD-fmk.

도 11a 및 11b는 랫트 일시적 병소 허혈 모델에서 전신적으로 투여된 Cbz-Val-Asp-CH2F의 신경보호 효과를 나타낸다. 피질 경색 용적을 2.25h의 일시적 병소 허혈 및 22h의 재관류 후 정량하였다.11A and 11B show the neuroprotective effect of Cbz-Val-Asp-CH 2 F administered systemically in the rat transient focal ischemia model. Cortical infarct volume was quantified after 2.25 h transient focal ischemia and 22 h reperfusion.

실시예 1Example 1

t-부틸-5-플루오로-4-하이드록시-3-니트로펜타노에이트t-butyl-5-fluoro-4-hydroxy-3-nitropentanoate

무수 CH2Cl2(100㎖) 중의 옥살산(1.9㎖, 21.8mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, 무수 CH2Cl2(10㎖) 중의 DMSO(3.0㎖, 42.3mmol)의 용액을 온도를 -50 내지 -60℃로 유지하는 속도로 교반하면서 첨가하였다. 5분 교반한 후, 무수 CH2Cl2(10㎖) 중의 2-플루오로에탄올(1.2㎖, 18.4mmol)의 용액을 첨가하고, 추가의 15분 동 안 교반을 계속한 후, 무수 Et3N(13.5㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 후, 실온으로 따뜻하게 하였다. 반응 혼합물에 CH2Cl2(20㎖) 중의 t-부틸 3-니트로프로피오네이트(2.87g, 16.38mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반한 후, 물(100㎖)에 부었다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 CH2Cl2(2 x 50㎖)로 추출하였다. CH2Cl2용액을 소금물로 세척하고, 건조시키고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔(헥산-EtOAc, 7:3)을 통해 두번 크로마토그래피함에 의하여 정제하여 무색의 점성 오일로서 표제 생성물 950mg(24.5%)을 수득하였다. A solution of oxalic acid (1.9 mL, 21.8 mmol) in anhydrous CH 2 Cl 2 (100 mL) was cooled to −78 ° C. and a solution of DMSO (3.0 mL, 42.3 mmol) in anhydrous CH 2 Cl 2 (10 mL) was cooled to temperature. Was added while stirring at a rate maintained at -50 to -60 ° C. After stirring for 5 minutes, a solution of 2-fluoroethanol (1.2 mL, 18.4 mmol) in anhydrous CH 2 Cl 2 (10 mL) was added and stirring continued for an additional 15 minutes, followed by anhydrous Et 3 N (13.5 mL) was added. The reaction mixture was stirred for 15 minutes and then warmed to room temperature. To the reaction mixture was added a solution of t-butyl 3-nitropropionate (2.87 g, 16.38 mmol) in CH 2 Cl 2 (20 mL). The reaction mixture was stirred for 3 hours at room temperature and then poured into water (100 mL). The organic layer was separated and the aqueous layer extracted with CH 2 Cl 2 (2 × 50 mL). The CH 2 Cl 2 solution was washed with brine, dried and evaporated. The residue was purified by chromatography twice over silica gel (hexane-EtOAc, 7: 3) to give 950 mg (24.5%) of the title product as a colorless viscous oil.

Figure 112000007057306-pct00010
Figure 112000007057306-pct00010

실시예 2Example 2

t-부틸 3-아미노-5-플루오로-4-하이드록시-펜타노에이트t-butyl 3-amino-5-fluoro-4-hydroxy-pentanoate

MeOH(20㎖) 중의 t-부틸 5-플루오로-4-하이드록시-3-니트로펜타노에이트 (950mg, 4.0mmol)의 용액에 레이니(Raney) Ni(약 200mg)을 첨가하고, 혼합물을 H2(30-35 psi)하의 실온에서 18시간 동안 진탕하였다. 그것을 여과하고, 촉매를 MeOH(2 x 10㎖)로 세척하였다. MeOH 용액을 증발시키고, 잔류물을 실리카겔 (EtOAc-MeOH, 10:1)을 통해 크로마토그래피함에 의하여 정제하여 황색 점성 오일로서 표제 화합물 840mg (96%)을 수득하였다.To a solution of t-butyl 5-fluoro-4-hydroxy-3-nitropentanoate (950 mg, 4.0 mmol) in MeOH (20 mL) was added Raney Ni (about 200 mg) and the mixture was H Shake for 18 hours at room temperature under 2 (30-35 psi). It was filtered and the catalyst was washed with MeOH (2 x 10 mL). The MeOH solution was evaporated and the residue was purified by chromatography over silica gel (EtOAc-MeOH, 10: 1) to give 840 mg (96%) of the title compound as a yellow viscous oil.

Figure 112000007057306-pct00011
Figure 112000007057306-pct00011

실시예 3Example 3

t-부틸-3-(Cbz-Val-아미도)-5-플루오로-4-하이드록시-펜타노에이트t-butyl-3- (Cbz-Val-amido) -5-fluoro-4-hydroxy-pentanoate

THF(20㎖) 중의 Cbz-발린(396mg, 1.58mmol)의 용액에 EDCl(300mg, 1.57mmol), HOBT(240mg, 1.57mmol) 및 DMAP(129mg, 1.06mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5분 동안 교반한 후, THF(10㎖)중의 t-부틸 3-아미노-5-플루오로-4-하이드록시-펜타노에이트(215mg, 1.04mmol)의 용액을 첨가하고, 그것을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, THF 용액을 증발시키고, 잔류물을 실리카겔(헥산-EtOAc, 3:2)을 통해 크로마토그래피함에 의하여 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 290mg (68%)을 수득하였다.To a solution of Cbz-valine (396 mg, 1.58 mmol) in THF (20 mL) was added EDCl (300 mg, 1.57 mmol), HOBT (240 mg, 1.57 mmol) and DMAP (129 mg, 1.06 mmol). The resulting mixture was stirred for 5 minutes, then a solution of t-butyl 3-amino-5-fluoro-4-hydroxy-pentanoate (215 mg, 1.04 mmol) in THF (10 mL) was added and it was Stir at room temperature for 18 hours. The mixture was filtered, the THF solution was evaporated and the residue was purified by chromatography over silica gel (hexane-EtOAc, 3: 2) to give 290 mg (68%) of the title compound as a white solid.

Figure 112000007057306-pct00012
Figure 112000007057306-pct00012

실시예 4Example 4

Z-Val-Asp-fmk t-부틸 에스테르Z-Val-Asp-fmk t-butyl ester

CH2Cl2(20㎖) 중의 퍼요오디난(periodinane; 485mg, 1.14mmol)의 임뮤션 (imussion)에 CH2Cl2(12㎖) 중의 t-부틸 3-(Cbz-Val-아미도)-5-플루오로-4-하이드록시-펜타노에이트(230mg, 0.52mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 백색 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반한 후, Na2S2O3 1.26g(8mmol)을 함유하는 수성 포화 NaHCO3 용액 25㎖에 부었다. 생성된 혼합물을 20분 동안 교반하고, 생성된 투명한 CH2Cl2용액을 분리하고, 수성 층을 CH2Cl2(2 x 25㎖)로 추출하였다. CH2Cl2 용액을 소금물로 세척하고, 증발시킨 후, 잔류물을 실리카겔(헥산-EtOAc, 3:2)을 통해 크로마토그래피함에 의하여 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 190mg (83%)을 수득하였다.Immunization of periodinane (485 mg, 1.14 mmol) in CH 2 Cl 2 (20 mL) t-butyl 3- (Cbz-Val-amido)-in CH 2 Cl 2 (12 mL)- A solution of 5-fluoro-4-hydroxy-pentanoate (230 mg, 0.52 mmol) was added and the resulting white mixture was stirred at room temperature for 40 minutes, followed by 1.26 g (8 mmol) Na 2 S 2 O 3 . Pour into 25 mL aqueous saturated NaHCO 3 solution containing. The resulting mixture was stirred for 20 minutes, the resulting clear CH 2 Cl 2 solution was separated and the aqueous layer was extracted with CH 2 Cl 2 (2 × 25 mL). The CH 2 Cl 2 solution was washed with brine, evaporated and the residue was purified by chromatography over silica gel (hexane-EtOAc, 3: 2) to give 190 mg (83%) of the title compound as a white solid.

Figure 112000007057306-pct00013
Figure 112000007057306-pct00013

실시예 5Example 5

Z-Val-Asp-fmkZ-Val-Asp-fmk

무수 CH2Cl2(5㎖) 중의 Z-Val-Asp-fmk t-부틸 에스테르(180mg, 0.41mmol)의 용액에 F3CCO2H(1.0㎖)를 첨가하고, 그것을 실온에서 40분 동안 교반한 후, 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔(EtOAc-MeOH, 10:1)을 통해 크로마토그래피함에 의하여 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 120mg (76%)을 수득하였다.To a solution of Z-Val-Asp-fmk t-butyl ester (180 mg, 0.41 mmol) in anhydrous CH 2 Cl 2 (5 mL) was added F 3 CCO 2 H (1.0 mL) and stirred at room temperature for 40 minutes. Then evaporated. The residue was purified by chromatography over silica gel (EtOAc-MeOH, 10: 1) to afford 120 mg (76%) of the title compound as a white solid.

Figure 112000007057306-pct00014
Figure 112000007057306-pct00014

하기 화합물들을 실시예 3-5에서 기술한 바와 동일한 방법을 사용하여 수득하였다:The following compounds were obtained using the same method as described in Examples 3-5:

실시예 6Example 6

Z-Leu-Asp-fmkZ-Leu-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00015
Figure 112000007057306-pct00015

실시예 7Example 7

Z-Ile-Asp-fmkZ-Ile-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00016
Figure 112000007057306-pct00016

실시예 8Example 8

Z-Ala-Asp-fmkZ-Ala-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00017
Figure 112000007057306-pct00017

실시예 9Example 9

Ac-Val-Asp-fmkAc-Val-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00018
Figure 112000007057306-pct00018

실시예 10Example 10

Z-N-Me-Val-Asp-fmkZ-N-Me-Val-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00019
Figure 112000007057306-pct00019

실시예 11Example 11

Z-Ala-Asp-fmkZ-Ala-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00020
Figure 112000007057306-pct00020

실시예 12Example 12

Z-Gly-Asp-fmkZ-Gly-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00021
Figure 112000007057306-pct00021

실시예 13Example 13

Z-Phe-Asp-fmkZ-Phe-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00022
Figure 112000007057306-pct00022

실시예 14Example 14

Z-Glu-Asp-fmkZ-Glu-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00023
Figure 112000007057306-pct00023

실시예 15Example 15

Z-Pro-Asp-fmkZ-Pro-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00024
Figure 112000007057306-pct00024

실시예 16Example 16

Z-His-Asp-fmkZ-His-Asp-fmk

백색 고체.White solid.

Figure 112000007057306-pct00025
Figure 112000007057306-pct00025

실시예 17Example 17

Z-Tyr-Asp-fmkZ-Tyr-Asp-fmk

Z-Tyr(Bu-t)-Asp-fmk t-부틸 에스테르를 실시예 3 및 4에서 기술한 바와 같이 Z-Tyr(Bu-t)-OH 및 t-부틸 3-아미노-5-플루오로-4-하이드록시펜타노에이트로부터 제조하였다. 메틸렌 클로라이드(1㎖) 중의 Z-Tyr(Bu-t)-Asp-fmk t-부틸 에스테르(15mg, 0.027mmol)의 용액에 TFA(1㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반한 후, 4℃에서 2일 동안 교반하였다. 그것을 에틸 아세테이트(30㎖)로 희석하고, 물(4 x 20㎖) 및 소금물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 진공에서 농축하여 황색 고체로서 표제 화합물(10mg, 0.022mmol, 83%)을 수득하였다.Z-Tyr (Bu-t) -Asp-fmk t-butyl ester was prepared as described in Examples 3 and 4 by Z-Tyr (Bu-t) -OH and t-butyl 3-amino-5-fluoro- Prepared from 4-hydroxypentanoate. To a solution of Z-Tyr (Bu-t) -Asp-fmk t-butyl ester (15 mg, 0.027 mmol) in methylene chloride (1 mL) was added TFA (1 mL). The mixture was stirred at rt for 8 h and then at 4 ° C. for 2 days. It was diluted with ethyl acetate (30 mL), washed with water (4 x 20 mL) and brine, dried over Na 2 S0 4 and concentrated in vacuo to give the title compound (10 mg, 0.022 mmol, 83%) as a yellow solid. Obtained.

Figure 112000007057306-pct00026
Figure 112000007057306-pct00026

실시예 18Example 18

Z-Val-Asp-fmk 메틸 에스테르Z-Val-Asp-fmk methyl ester

빙욕에서 냉각된 MeOH(20㎖) 중의 Z-Val-Asp-fmk(110mg, 0.28mmol)의 용액에, 그 용액이 pH 페이퍼에 의하여 측정했을 때 강산으로 변할 때까지, HCl 기체의 스트림을 천천히 통과시켰다. 상기 용액을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔(헥산-EtOAc, 3:2)을 통해 크로마토그래피함에 의하여 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 63mg (55%)을 수득하였다.To a solution of Z-Val-Asp-fmk (110 mg, 0.28 mmol) in MeOH (20 mL) cooled in an ice bath, slowly pass through a stream of HCl gas until the solution turns into a strong acid as measured by pH paper. I was. The solution was stirred at rt for 4 h and then evaporated. The residue was purified by chromatography over silica gel (hexane-EtOAc, 3: 2) to give 63 mg (55%) of the title compound as a white solid.

Figure 112000007057306-pct00027
Figure 112000007057306-pct00027

하기 화합물들을 실시예 18에서 기술한 바와 동일한 방법을 사용하여 수득하였다:The following compounds were obtained using the same method as described in Example 18:

실시예 19Example 19

Z-Leu-Asp-fmk 메틸 에스테르Z-Leu-Asp-fmk methyl ester

무색 점성 오일.Colorless viscous oil.

Figure 112000007057306-pct00028
Figure 112000007057306-pct00028

실시예 20Example 20

Z-Ile-Asp-fmk 메틸 에스테르Z-Ile-Asp-fmk methyl ester

백색 고체White solid

Figure 112000007057306-pct00029
Figure 112000007057306-pct00029

실시예 21Example 21

헬라(HeLa) 세포를 사용한 세포 사멸 분석Apoptosis Assay with HeLa Cells

Cbz-Val-Asp(OMe)CH2F의 세포 보호 성질을 종양 괴사 인자-알파(TNF-α) 및 사이클로헥스이미드(CHX)로 공격된 헬라(HeLa) 세포를 사용하여 시험하였다. 상기는 항-고사제를 분석하기 위하여 통상적으로 사용하는 주지된 특성의 세포 배양물 고사 모델(Cell culture model of apoptosis)이다. 두 유형의 실험을 수행하였다: 상 대조 현미경법을 사용한 세포의 시각화에 의한 세포 고사의 정량 분석; 및 형광 염료 칼세인 AM을 사용한 세포 고사의 정량 분석.The cell protective properties of Cbz-Val-Asp (OMe) CH 2 F were tested using HeLa cells challenged with tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and cycloheximide (CHX). This is a cell culture model of apoptosis of well-known properties commonly used to analyze anti-diagnostic agents. Two types of experiments were performed: quantitative analysis of cell death by visualization of cells using phase contrast microscopy; And quantitative analysis of cell death using fluorescent dye calcein AM.

사진 현미경법을 위하여, 헬라(HeLa) 세포를 2mM의 글루타민 및 10%의 태아의 소 혈청을 함유하는 최소 필수 배지 중에서 웰(well) 당 100,000개의 세포 밀도로 12-웰 다중 접시 내에 뿌린다. 24시간 후, 상기 도말 배지를 제거하고, 다양한 농도의 세포 보호 시험 화합물을 함유하는 신선한 배지를 첨가한다. 세포를 CO2 배양기에서 37℃로 2시간 동안 시험 화합물로 예비-배양시킨 후, TNF-α및 CHX를 각각 25ng/㎖ 및 30㎍/㎖의 최종 농도로 첨가한다. 24시간의 배양 기간 후, 세포 형태 및 유착성의 정도에 기초하여 세포 사멸의 증거에 대하여 시각적으로 조사한다. 세포가 모아지고, 상이 빛나고, 기층으로부터 분리된다면, 그 세포는 고사된 것으로 간주된다. 세포가 그들의 정상 형태를 유지하고, 기층에 부착되어 유지된다면, 그 세포는 살아있는 것으로 간주된다.
정량 분석을 위하여, 시험 화합물 중에 존재하는 세포 생존의 정도를 지시약 염료 칼세인 AM을 사용하여 정량적으로 분석한다. 상기 염료를 살아있는 세포에 흡수시키고 형광 유도체로 전환시킨다; 그후, 각각의 웰(well) 중의 활성화된 염료의 양을 형광 플레이트 리더 중에서 분석할 수 있고, 형광의 정도는 생존 세포의 수를 측정하는데 사용된다. 이러한 분석을 위하여, 헬라(HeLa) 세포를 2mM의 글루타민 및 10%의 태아의 소 혈청을 함유하는 0.4㎖의 최소 필수 배지 중에서 웰(well) 당 25,000개의 세포 밀도로 48-웰 플레이트에 뿌린다. 24시간 후, 도말한 배지를 제거하고, 다양한 농도의 시험 화합물을 함유하는 0.5㎖의 신선한 배지를 첨가한다. 세포를 CO2 배양기에서 37℃로 2시간 동안 시험 화합물로 예비-배양시킨 후, TNF-α및 CHX를 각각 25ng/㎖ 및 30㎍/㎖의 최종 농도로 첨가한다. 24시간의 배양 기간 후, 배양물을 혈청이 없고, 페놀 레드-없는 함스(Ham's) F12로 두번 세척하여 사멸 세포를 제거하고, 8 μM 칼세인 AM을 함유하는 함스(Ham's) F12 125 μℓ를 첨가한다. 상기 배양물을 실온에서 1시간 동안 배양한 후, 형광 신호를 485nm(여기) 및 530nm(방출)의 필터 셋팅을 사용하여 바이오텍(BioTek) 플레이트 리더로 측정한다. 데이타는 "퍼센트 대조"로서 표현하는데, 이는 하기 방정식으로 계산한다:For photomicroscopy, HeLa cells are seeded in a 12-well multi-plate at a density of 100,000 cells per well in minimal essential medium containing 2 mM glutamine and 10% fetal bovine serum. After 24 hours, the smear medium is removed and fresh medium containing various concentrations of cytoprotective test compounds is added. Cells are pre-incubated with test compounds for 2 hours at 37 ° C. in a CO 2 incubator, then TNF-α and CHX are added at final concentrations of 25 ng / ml and 30 μg / ml, respectively. After a 24-hour incubation period, visual evidence is examined for evidence of cell death based on cell morphology and degree of adhesion. If cells collect, the phase shine, and separate from the substrate, the cells are considered dead. If cells maintain their normal morphology and remain attached to the substrate, they are considered living.
For quantitative analysis, the extent of cell survival present in the test compound is quantitatively analyzed using the indicator dye calcein AM. The dye is taken up in living cells and converted to fluorescent derivatives; The amount of activated dye in each well can then be analyzed in a fluorescent plate reader, and the degree of fluorescence is used to measure the number of viable cells. For this analysis, HeLa cells are seeded in 48-well plates at a density of 25,000 cells per well in 0.4 ml of minimal essential medium containing 2 mM glutamine and 10% fetal bovine serum. After 24 hours, the smeared medium is removed and 0.5 ml of fresh medium containing various concentrations of test compound are added. Cells are pre-incubated with test compounds for 2 hours at 37 ° C. in a CO 2 incubator, then TNF-α and CHX are added at final concentrations of 25 ng / ml and 30 μg / ml, respectively. After a 24-hour incubation period, the cultures were washed twice with no serum and without phenol red-free Ham's F12 to remove dead cells, and 125 μl of Ham's F12 containing 8 μM calcein AM was added. do. After incubating the culture for 1 hour at room temperature, the fluorescence signal is measured with a BioTek plate reader using filter settings of 485 nm (excitation) and 530 nm (emission). Data is expressed as "percent contrast", which is calculated by the equation:

퍼센트 대조 = 시험 화합물 + TNF-α및 CHX 중의 칼세인 AM 신호 Percent Control = Test Compound + Calcein AM Signal in TNF-α and CHX

CHX 만 존재하는 경우의 칼세인 AM 신호 Calcein AM signal when only CHX is present                 

미처리 대조군보다 대조군으로서 CHX-처리된 배양물을 사용하는 것이 CHX의 세포증식 억제 효과를 교정할 수 있도록 한다. 그러나, CHX 그 자신은 또한 헬라(HeLa) 세포의 고사의 온화한 유도자이기 때문에, 강한 항-고사 약물이 100% 보다 큰 퍼센트 대조 값으로 주어질 것이다. Using the CHX-treated culture as a control rather than an untreated control allows to correct the cytostatic effects of CHX. However, since CHX itself is also a mild inducer of death of HeLa cells, a strong anti-killing drug will be given with a percentage control value greater than 100%.

전형적인 정성 분석의 결과를 도 1a-1g, 2a-2g 및 3a-3g에 나타낸다. 이들 실험에서, Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F의 세포 보호 효과는 세개의 상이한 농도, 즉, 0.5, 5 및 50 μM에서 BOC-Asp(OMe)-CH2F, Cbz-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F 및 Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F의 세포 보호 효과와 비교한다. 이들 모든 화합물은 메틸 에스테르 유도체이다. 도 1a-1g는, 50 μM의 농도에서, Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(도 1d)가 TNF-α및 CHX의 고사 효과로부터 헬라(HeLa) 세포를 완전히 보호함을 나타낸다. 50 μM의 농도에서, 관련 펩티드 BOC-Asp(OMe)-CH2F (도 1c) 및 Cbz-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(도 1e)는 또한 보호적이다. CPP32 억제제, Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(도 1f)는 50 μM에서 세포 보호제로서 단지 난외로 유효하다. 도 2a-2g는 5 μM의 농도에서 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(도 2d)가 아직 놀랍도록 강한 세포 보호 작용을 나타내는 반면, 5 μM BOC-Asp(OMe)-CH2F (도 2c) 및 5 μM Cbz-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(도 2e)는 덜 효과적임을 나타낸다. CPP32 억제제, Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(도 2f)는 5 μM에서 세포 보호 성질을 갖지 않는다. 도 3a-3g는, 심지어 0.5 μM에서도 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(도 3d)는 아직 효과적인 세포 보호 작용을 나타내는 반면, 다른 화합물들(도 3c, 3e 및 3f)은 미약한 세포 보호 작용을 나타내거나, 세포 보호 작용을 나타내지 않음을 보인다. 이들 실험은 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F가 다른 추정적인 항-고사제보다 10 내지 100배 저 농도에서 TNF-α/CHX-유발 고사로부터 헬라(HeLa) 세포를 보호할 수 있음을 입증한다.The results of typical qualitative analysis are shown in FIGS. 1A-1G, 2A-2G and 3A-3G. In these experiments, the cytoprotective effect of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F was determined by BOC-Asp (OMe) -CH 2 F, Cbz-Glu () at three different concentrations, 0.5, 5 and 50 μM. Compare the cell protective effect of OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F and Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F. All these compounds are methyl ester derivatives. 1A-1G show that at concentrations of 50 μM, Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 1D) completely protects HeLa cells from the killing effects of TNF-α and CHX. At a concentration of 50 μM, the related peptides BOC-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 1C) and Cbz-Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 1E) are also protective. The CPP32 inhibitor, Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 1F), is only marginally effective as a cell protective agent at 50 μM. 2A-2G show a surprisingly strong cell protective action of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 2D) at a concentration of 5 μM, while 5 μM BOC-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 2C) and 5 μM Cbz-Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 2E) are less effective. The CPP32 inhibitor, Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 2F), does not have cell protective properties at 5 μM. 3A-3G show that even at 0.5 μM Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (FIG. 3D) still exhibits effective cell protective action, while other compounds (FIGS. 3C, 3E and 3F) are weak. It shows cell protective action or no cell protective action. These experiments show that Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F can protect HeLa cells from TNF-α / CHX-induced apoptosis at concentrations 10 to 100 times lower than other putative anti-diagnostic agents. Prove that.

전술한 바와 같은 칼세인 AM을 사용한 정량 실험은 현미경 실험에 의하여 얻어지는 결과를 확인시켜 준다. 도 4 및 5는, Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(a)의 세포 보호 성질이 세개의 농도(0.5, 5 및 50 μM)에서 BOC-Asp(OMe)-CH2F(b)(도 5) 및 Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(c)(도 4)와 비교된다는 그러한 두개의 실험 결과를 나타낸다. 도 4는 Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(b)가 사용된 가장 높은 농도(50 μM)에서 조차도 TNF-α/CHX로부터 헬라(HeLa) 세포를 보호하는데 최소한의 효과만을 나타냄을 설명한다. 도 5는 BOC-Asp(OMe)-CH2F(b)가 50 및 5 μM에서 효과적인 세포 보호제이나, 0.5 μM에서는 그의 작용이 매우 감소됨을 나타낸다. 반면에, Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(a)는 0.5 μM에서, Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(b)가 50 μM에서 나타낸 바와 같은 효과를 갖는 효과적인 세포 보호제이다(도 4). 또한, 0.5 μM Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(a)는 매우 활성 인 반면, 0.5 μM BOC-Asp(OMe)-CH2F (b)는 비활성이다(도 5).Quantitative experiments using calcein AM as described above confirm the results obtained by microscopic experiments. 4 and 5 show that the cell protective properties of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (a) are BOC-Asp (OMe) -CH 2 F (b) at three concentrations (0.5, 5 and 50 μM). (FIG. 5) and Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (c) (FIG. 4). 4 shows HeLa from TNF-α / CHX even at the highest concentration (50 μM) where Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (b) was used. Explain that they have minimal effect on protecting cells. 5 shows that BOC-Asp (OMe) -CH 2 F (b) is an effective cell protectant at 50 and 5 μM, but its action is greatly reduced at 0.5 μM. On the other hand, Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (a) is 0.5 μM, while Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (b) is 50 It is an effective cell protectant with the effect as shown in μM (FIG. 4). In addition, 0.5 μM Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (a) is very active, while 0.5 μM BOC-Asp (OMe) -CH 2 F (b) is inactive (FIG. 5).

저 용량에서 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F의 효과를 측정하기 위하여, 헬라(HeLa) 세포를 0.05 μM 내지 1 μM의 농도 범위로 처리하였다. 도 6에 나타낸 바와 같이, Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F(a)는 0.25 μM의 낮은 농도에서도 상당한 보호 작용을 나타낸다. 반면에, 세포 사멸 연구에서 광범위하게 사용되는 항-고사제인 Cbz-Val-Ala-Asp(OMe)-CH2F(b)는 이러한 농도 범위에서 세포 보호 작용을 나타내지 못한다. To measure the effect of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F at low doses, HeLa cells were treated in concentration ranges from 0.05 μM to 1 μM. As shown in FIG. 6, Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (a) shows significant protective action even at low concentrations of 0.25 μM. On the other hand, Cbz-Val-Ala-Asp (OMe) -CH 2 F (b), an anti-diagnostic agent widely used in cell death studies, does not exhibit cell protective action in this concentration range.

종합하면, 도 1a 내지 6에 의하여 설명된 실험들은 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F가 원 상태의 세포에서 놀랍도록 효과적인 항-고사제이고, 공지된 임의의 다른 카스파제 억제제보다 훨씬 효과적임을 나타낸다.Taken together, the experiments described by FIGS. 1A-6 show that Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F is a surprisingly effective anti-diagnostic agent in intact cells, much better than any other known caspase inhibitor. Indicates effective.

실시예 22Example 22

저캣 세포(Jurkat cell)에서 PARP 절단의 억제Inhibition of PARP Cleavage in Jurkat Cells

효소 폴리(ADP)리보스 폴리머라제(PARP)의 절단은 카스파제 단백질 분해의 캐스캐이드가 활성인 모든 세포에서 발생하는 것으로 보인다. 이러한 이유 때문에, PARP 절단은 카스파제-매개 고사에 대한 생화학적 마커(marker)로서 광범위하게 사용된다. PARP 절단을 차단하는 세포 보호 약물의 능력은 카스파제 단백질 분해의 캐스캐이드, 및 특히 CPP32 (카스파제-3), 메인 PARP 프로테아제를 억제하는 약물의 능력을 나타내는 것이라고 간주된다. PARP 절단을 억제하는 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F의 능력은 저캣 세포(Jurkat cell), 인간 T-세포주의 Fas-매개 고사 중에 조사하였다. 상기 세포 배양물 고사 모델은 주지되어 있으며, 적어도 두개의 카스파제, 카스파제-3(CPP32) 및 카스파제-8(FLICE/MACH)의 활성을 포함하는 것으로 공지되어 있다.Cleavage of the enzyme poly (ADP) ribose polymerase (PARP) appears to occur in all cells in which the cascade of caspase proteolysis is active. For this reason, PARP cleavage is widely used as a biochemical marker for caspase-mediated killing. The ability of a cytoprotective drug to block PARP cleavage is considered to be indicative of the cascade of caspase proteolysis, and in particular the ability to inhibit CPP32 (caspase-3), the main PARP protease. The ability of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F to inhibit PARP cleavage was investigated during Fas-mediated killing of Jurkat cells, human T-cell lines. Such cell culture apoptosis models are well known and are known to include the activity of at least two caspases, caspase-3 (CPP32) and caspase-8 (FLICE / MACH).

PARP 절단 분석을 위하여, 저캣 세포(Jurkat cell)를, 10% FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지 중의 6-웰(well) 다중 접시에 웰(well) 당 500,000의 세포 밀도로 뿌렸다. 상기 세포를 CO2 배양기에서 37℃로 2시간 동안 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F 또는 시험 화합물로 예비-배양시킨 후, Fas에 대한 모노클로날 항체를 500ng/㎖의 최종 농도로 첨가하였다. 배양은 CO2 배양기에서 37℃에서 추가로 4시간 동안 계속하였다. 배양 기간의 말기에, 세포를 원심 분리에 의하여 수집하고, 50mM 트리스-HCl, pH 7.4, 150mM NaCl, 1% NP-40, 0.25% 소듐 데옥시콜레이트, 1mM EDTA 및 프로테아제 억제제의 칵테일을 함유하는 완충액에 용해시켰다. 단백질 10 내지 20㎍에 상응하는 양의 세포 용해물(lysate)을 7.5% SDS 폴리아크릴아미드 겔에 적하하고, 25mA에서 2 내지 2.5시간 동안 전기 영동하였다. 그 후, 단백질을 PVDF 막으로 이동시키고, PARP 에 대한 토끼 폴리클로날 항체로 조사하고, 켐일루미네슨스 (chemiluminescence)를 사용하여 시각화하였다. For PARP cleavage analysis, Jurkat cells were sprinkled at a cell density of 500,000 per well in 6-well multi-plates in RPMI 1640 medium containing 10% FBS. The cells were pre-incubated with Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F or test compound for 2 hours at 37 ° C. in a CO 2 incubator, after which the monoclonal antibody against Fas was brought to a final concentration of 500 ng / ml. Added. Incubation was continued for an additional 4 hours at 37 ° C. in a CO 2 incubator. At the end of the incubation period, cells are collected by centrifugation and buffered with a cocktail of 50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.25% sodium deoxycholate, 1 mM EDTA and protease inhibitors. Dissolved in. Cell lysates in amounts corresponding to 10-20 μg of protein were added dropwise to 7.5% SDS polyacrylamide gel and electrophoresed at 25 mA for 2 to 2.5 hours. Proteins were then transferred to PVDF membranes, irradiated with rabbit polyclonal antibodies against PARP, and visualized using chemiluminescence.

도 7a-7e는 그러한 세개의 실험 결과를 나타낸다. 저캣 세포(Jurkat cell)는 0.5, 5 또는 50 μM의 하기 화합물로 예비-배양되었다: Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F ( 화합물 1); BOC-Asp(OMe)-CH2F(화합물 5); Cbz-Asp-α-([2,6-디클로로벤조일옥시]-메틸 케톤)(화합물 6), Cbz-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(화합물 3), Cbz-Asp(OMe)- Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(화합물 2), Cbz-Ile-Glu(OMe)-Thr-Asp(OMe)-CH2F(화합물 4) 또는 Cbz-Val-Ala-Asp(OMe)-CH2F(화합물 7). 그 후, 상기 세포를 항Fas로 처리하고, 웨스턴 블랏팅(Western Blotting)을 위한 공정에 두었다. Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F (화합물 1)은 50 및 5 μM에서 PARP 절단을 완전히 억제하였고, 심지어 0.5 μM에서도 절단을 상당히 억제하였다(도 7a). 반면에, Cbz-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-CH2F(화합물 2)(도 7a) 및 Cbz-Ile-Glu(OMe)-Thr-Asp(OMe)-CH2F(화합물 4)(도 7c) 및 Cbz-Asp-DCB(화합물 6)(도 7d)는 50 μM에서 PARP 절단을 완전히 억제하였으나, 5 μM 및 0.5 μM에서는 단지 난외로 유효한 억제제였다. BOC-Asp(OMe)-CH2F(화합물 5) (도 7d) 및 Cbz-Val-Ala-Asp(OMe)-CH2F(화합물 7)(도 7e) 및 Cbz-Glu(OMe)-Val- Asp(OMe)-CH2F(화합물 3)(도 7b)는 50 및 5 μM의 농도에서 효과적인 PARP 절단의 억제제였으나, Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F (화합물 1)는 여전히 상당한 억제 효과(도 7a)를 나타내는 농도인 0.5 μM에서는 단지 난외로 유효하였다. 이들 실험은 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F가 다른 공지된 카스파제 억제제보다 적어도 10-배 낮은 농도에서 원 상태 세포의 카스파제 단백질 분해 캐스캐이드를 차단할 수 있음을 입증한다. 7A-7E show the results of these three experiments. Jurkat cells were pre-cultured with 0.5, 5 or 50 μM of the following compounds: Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 1); BOC-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 5); Cbz-Asp-α-([2,6-dichlorobenzoyloxy] -methyl ketone) (Compound 6), Cbz-Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 3), Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 2), Cbz-Ile-Glu (OMe) -Thr-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 4) or Cbz- Val-Ala-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 7). The cells were then treated with anti-Fas and placed in a process for Western Blotting. Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 1) completely inhibited PARP cleavage at 50 and 5 μM and significantly inhibited cleavage even at 0.5 μM (FIG. 7A). On the other hand, Cbz-Asp (OMe) -Glu (OMe) -Val-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 2) (FIG. 7A) and Cbz-Ile-Glu (OMe) -Thr-Asp (OMe)- CH 2 F (Compound 4) (FIG. 7C) and Cbz-Asp-DCB (Compound 6) (FIG. 7D) completely inhibited PARP cleavage at 50 μM, but were only marginally effective inhibitors at 5 μM and 0.5 μM. BOC-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 5) (FIG. 7D) and Cbz-Val-Ala-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 7) (FIG. 7E) and Cbz-Glu (OMe) -Val Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 3) (FIG. 7B) was an inhibitor of effective PARP cleavage at concentrations of 50 and 5 μM, while Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F (Compound 1) was still Only 0.5 μM, which is a concentration showing a significant inhibitory effect (FIG. 7A), was effective outside the egg shell. These experiments demonstrate that Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F can block the caspase proteolytic cascade of native cells at a concentration at least 10-fold lower than other known caspase inhibitors.

실시예 23Example 23

효소 활성Enzyme activity

CPP32, ICE 및 카텝신 B의 억제제로서 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F 및 Cbz-Val-Asp-CH2F(산 없음)의 활성은 형광계 효소 분석법으로 측정하였다. 재조합 CPP32 단백질 및 ICE 단백질은 벡터로서 바쿨로바이러스를 사용하여 곤충 호스트 세포(sf9 세포)중에서 상기 효소를 암호화하는 DNA 클론을 발현시킴에 의하여 제조하였다[참조: Webb, N.R. et al., "Expression of proteins using recombinant Baculovirus", Techniques 2:173-188(1990)]. 음성 카텝신의 제조는 통상적인 출처로부터 입수하였다. 효소 활성은 형광 발생 이탈기에 부착된 합성 펩티드 기질을 사용하여 측정하였다. 효소에 의한 합성 기질의 절단은 분광형광계 (spectrofluorometer) 또는 형광 마이크로타이터 플레이트 리더(fluorometric microtiter plate reader)에서 읽히는 형광 신호로 나타난다.The activity of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F and Cbz-Val-Asp-CH 2 F (no acid) as inhibitors of CPP32, ICE and cathepsin B was determined by fluorescence enzyme assay. Recombinant CPP32 protein and ICE protein were prepared by expressing a DNA clone encoding the enzyme in insect host cells (sf9 cells) using baculovirus as a vector. Webb, NR et al., "Expression of proteins using recombinant Baculovirus ", Techniques 2: 173-188 (1990). Preparation of negative cathepsins was obtained from conventional sources. Enzyme activity was measured using synthetic peptide substrates attached to fluorescence generating leaving groups. Cleavage of the synthetic substrate by enzymes results in a fluorescence signal that is read on a spectrofluorometer or fluorometric microtiter plate reader.

CPP32 활성은 하기 완충액 조건을 사용하여 측정하였다: 10% 슈크로스, 1% CHAPS를 갖는 100mM HEPES pH 7.5, 5mM 글루타치온 및 5 μM 펩티드 기질. 상기 펩티드 기질은 C-말단에 결합된 형광 발생 화합물 아미노메틸쿠마린과 함께 서열 Asp-Glu-Val-Asp를 갖는 올리고머로 구성되었다. 효소 활성에 대한 분석은 전형적으로 37℃에서 30분 동안 수행하였다.CPP32 activity was measured using the following buffer conditions: 100 mM HEPES pH 7.5, 5 mM glutathione and 5 μΜ peptide substrate with 10% sucrose, 1% CHAPS. The peptide substrate consisted of an oligomer having the sequence Asp-Glu-Val-Asp with the fluorescence generating compound aminomethylcoumarin bound at the C-terminus. Assays for enzyme activity were typically performed at 37 ° C. for 30 minutes.

표 I은 CPP32 및 다른 프로테아제에 대한 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F 및 Cbz-Val-Asp-CH2F(산 없음)의 IC50을 나타낸다. Table I shows the IC 50 of Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F and Cbz-Val-Asp-CH 2 F (no acid) for CPP32 and other proteases.

표 I: CPP32 및 다른 프로테아제의 억제제로서의 Cbz-Val-Asp(OMe)-CHTable I: Cbz-Val-Asp (OMe) -CH as inhibitor of CPP32 and other proteases 22 F 및 Cbz-Val-Asp-CHF and Cbz-Val-Asp-CH 22 F(산 없음)의 효능Efficacy of F (no acid)

Figure 112003020145942-pct00073
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표 I에 나타낸 결과는 본 발명의 화합물이 CPP32 및 ICE의 억제제로서 적당한 효능을 지님을 나타낸다. 그것은 또한 Cbz-Val-Asp-CH2F가 CPP32 및 ICE에 대한 억제제로서 효력이 있으며, 선택적임을 나타낸다.The results shown in Table I show that the compounds of the present invention have moderate efficacy as inhibitors of CPP32 and ICE. It also indicates that Cbz-Val-Asp-CH 2 F is potent and selective as inhibitor to CPP32 and ICE.

파밍톤(PharMington)[CA의 산디에고에 소재하는 벡톤 디비젼 컴퍼니(Becton division company)]으로부터 구매한 재조합 카스파제 3, 6, 7 및 8에서 Cbz-Val-Asp-CH2F의 억제 활성을 Ac-DEVD-AMC를 사용하여 측정하였다. 분석물 당 각 효소의 양은 다음과 같다: 1ng 카스파제 3, 15ng 카스파제 6, 2ng 카스파제 7 및 60ng 카스파제 8. 효소 반응은 카스파제 완충액(20mM PIPES, 100mM NaCl, 10mM DTT, 1mM EDTA, 0.1% CHAPS 및 10% 슈크로스, pH 7.2)을 사용하여 96-웰(well) 플레이트 (plate)에서 수행하였고, 반응은 10 μM Ac-DEVD-AMC [MA의 홉킨톤에 소재하는 퀄리티 콘트롤드 바이오케미칼스, 아이엔씨.(Quality Controlled Biochemicals, Inc.)로부터 구매함]를 첨가하여 개시하였다. 30pM 내지 10 μM 범위의 12개 농도의 Cbz-Val-Asp-CH2F는 37℃에서 30분 동안 재조합 카스파제로 상기 화합물을 배양 후, 시험하였다. 플레이트는 355nm에서 여기 필터/460nm에서 방출 필터를 사용하는 형광 플레이트 리더(EG&G WALLAG, 모델-1420-002)를 이용하여 읽었다. 데이타를 그래프프리즘(GraphPrism) 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 데이타를 표 II에 요약한다.The inhibitory activity of Cbz-Val-Asp-CH 2 F on recombinant caspase 3, 6, 7 and 8 purchased from PharMington (Becton division company, San Diego, CA) Measured using -DEVD-AMC. The amount of each enzyme per analyte is as follows: 1 ng caspase 3, 15 ng caspase 6, 2 ng caspase 7 and 60 ng caspase 8. 0.1% CHAPS and 10% sucrose, pH 7.2) was used to run in 96-well plates, and the reactions were 10 μM Ac-DEVD-AMC [Quality Control Bio of Hopkinton, MA. Chemicals, purchased from Quality Controlled Biochemicals, Inc.]. Twelve concentrations of Cbz-Val-Asp-CH 2 F ranging from 30 pM to 10 μM were tested after incubating the compound with recombinant caspase at 37 ° C. for 30 minutes. Plates were read using a fluorescence plate reader (EG & G WALLAG, Model-1420-002) using an excitation filter at 355 nm / emission filter at 460 nm. Data was analyzed using GraphPrism software. The data is summarized in Table II.

표 II: 카스파제 억제제로서의 Cbz-Val-Asp-CHTable II: Cbz-Val-Asp-CH as Caspase Inhibitor 22 F의 효능Efficacy of F

카스파제-3Caspase-3 카스파제-6Caspase-6 카스파제-7Caspase-7 카스파제-8Caspase-8 IC50(nM)IC 50 (nM) 19.819.8 18.418.4 6.86.8 7.27.2

표 II에 나타낸 결과는 Cbz-Val-Asp-CH2F가 시험된 모든 카스파제의 효과적인 억제제임을 나타낸다.The results shown in Table II indicate that Cbz-Val-Asp-CH 2 F is an effective inhibitor of all caspases tested.

표 III은 다양한 디펩티드 억제제의 카스파제-3 활성을 나타낸다. 그 결과는 Z-Val-Asp-CH2F가 시험된 화합물 중에서 가장 효과적인 카스파제-3 억제제임을 나타낸다. Table III shows the caspase-3 activity of various dipeptide inhibitors. The results indicate that Z-Val-Asp-CH 2 F is the most effective caspase-3 inhibitor among the compounds tested.

표 III. 디펩티드 억제제의 카스파제-3 활성Table III. Caspase-3 Activity of Dipeptide Inhibitors

Figure 112006011956530-pct00074
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Figure 112000007057306-pct00032
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실시예 24Example 24

PARP 절단에 대한 Z-VD-fmk의 효과Effect of Z-VD-fmk on PARP Cleavage

폴리(ADP)리보스 폴리머라제(PARP)는 확인된 제1 카스파제-3 기질의 하나이고, PARP의 절단은 아직까지 카스파제-3 활성화 및 카스파제-매개 고사에 대한 가장 보편적인 마커(marker)로 간주된다. 따라서, PARP 절단을 차단하는 항-고사 화합물의 능력은 고사를 억제하는 그의 능력의 유용한 지시제이다. PARP 절단 분석에서 Z-VD-fmk의 효능은 항Fas-처리된 저캣 세포(Jurkat cell)를 사용하여 시험하였다. 2 x 106 저캣 세포(Jurkat cell)를 6-웰(well) 접시의 각 웰(well)에 뿌리고, 30분 동안 시험 화합물로 예비-배양하였다. 그 후, 이들 세포는 작동성 항Fas 항체 또는 PBS 500ng/㎖로 4시간 동안 공격되었다. 그 후, 이들 세포를 수집하고, 서서히 펠릿화하고, PBS로 두번 세척하고, RIPA 완충액에 용해시켰다. 분취량의 세포 용해물을 SDS-PAGE에 의하여 분석하였고, 단백질은 웨스턴 블랏팅(Western Blotting)을 위한 PVDF막에 옮겼다. 제1 항체는 전장 PARP 및 카스파제-3-생성된 절단 생성물 양자와 교차 반응하는 폴리클로날 항PARP 혈청이었다.Poly (ADP) ribose polymerase (PARP) is one of the first caspase-3 substrates identified, and cleavage of PARP is yet the most common marker for caspase-3 activation and caspase-mediated killing Is considered. Thus, the ability of anti-killing compounds to block PARP cleavage is a useful indicator of their ability to inhibit killing. The efficacy of Z-VD-fmk in PARP cleavage assays was tested using anti-Fas-treated Jurkat cells. 2 x 10 6 Jurkat cells were seeded in each well of a 6-well dish and pre-incubated with test compound for 30 minutes. Thereafter, these cells were challenged for 4 hours with an effective anti-Fas antibody or 500 ng / ml PBS. These cells were then collected, pelleted slowly, washed twice with PBS and lysed in RIPA buffer. Aliquots of cell lysates were analyzed by SDS-PAGE, and proteins were transferred to PVDF membranes for Western blotting. The first antibody was polyclonal anti-PARP serum that cross reacted with both full length PARP and caspase-3-generated cleavage products.

도 8a는 Z-VD-fmk가 500 및 250nM의 농도에서 PARP 절단을 완전히 억제함을 나타낸다(85kDa 밴드의 부재에 주목하라). Z-VD-fmk는 50nM 의 낮은 농도에서 조차 여전히 뛰어난 그의 억제 활성을 유지한다(도 8a). 반면에, Z-VAD-fmk는 5 μM에서 PARP 절단의 효과적인 억제제임(데이타를 나타내지 않았음)에도 불구하고, 500nM에서 훨씬 덜 효과적이다(도 8b). 이들 실험은 Z-VD-fmk가 원 상태 세포의 PARP 절단 억제제로서 Z-VAD-fmk 보다 적어도 10-배 더 효과적이고, Z-VD-fmk는 상기 완전-세포 고사 모델(model of whole-cell apoptosis)에서 50nM 미만의 IC50값을 갖는다.8A shows that Z-VD-fmk completely inhibits PARP cleavage at concentrations of 500 and 250 nM (note the absence of the 85 kDa band). Z-VD-fmk still retains its inhibitory activity even at low concentrations of 50 nM (FIG. 8A). In contrast, Z-VAD-fmk is much less effective at 500 nM, despite being an effective inhibitor of PARP cleavage at 5 μM (data not shown) (FIG. 8B). These experiments show that Z-VD-fmk is at least 10-fold more effective than Z-VAD-fmk as an inhibitor of PARP cleavage of native cells, and Z-VD-fmk is the model of whole-cell apoptosis. ) Has an IC 50 value of less than 50 nM.

실시예 25Example 25

TNF-α-유발 세포 고사에 대한 Z-VD-fmk의 효과Effect of Z-VD-fmk on TNF-α-induced Cell Death

종양 괴사 인자 알파(TNF-α)는 카스파제 캐스케이드를 개시함에 의하여 많은 세포 유형들에서 고사를 일으킬 수 있고, 그의 고사 유발 활성은 펩티드-계 카스파제 억제제에 의하여 억제될 수 있다. 그러나, 억제제의 높은 농도(50μM 이상)는 우수한 항-고사 효과를 가질 것이 요구된다. TNF-α세포 사멸 연구에서 사용되는 통상적인 세포주인 헬라(HeLa) 세포를 Z-VD-fmk의 항-고사 효능을 측정하기 위하여 사용하였다.Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) can cause death in many cell types by initiating a caspase cascade, and its apoptosis-inducing activity can be inhibited by peptide-based caspase inhibitors. However, high concentrations of inhibitors (50 μM or more) are required to have good anti-killing effects. HeLa cells, a common cell line used in TNF-α cell killing studies, were used to measure the anti-killing efficacy of Z-VD-fmk.

헬라(HeLa) 세포를 처리 24시간 전에 웰(well) 당 50,000 세포 밀도로 48-웰(well) 다중 접시에 뿌렸다. 그 후, 그들을 다양한 농도의 Z-VD-fmk 로 2시간 동안 예비-배양시키고, TNF-α(25ng/㎖) 및 사이클로헥스이미드(CHX; 30㎍/㎖)로 공격하였다. 배양물을 추가의 24시간 동안 배양하고, 사멸 세포를 PBS를 사용하여 두번 세척함에 의하여 제거하였다. 그 후, 생존 세포의 밀도는 전형광 염료(profluorescent dye)인 칼세인 AM(이는 생존 세포에 의하여 흡수되어 형광 생성물로 전환됨)을 사용하여 45분 동안 각 배양 세포를 배양함에 의하여 측정하였다. 결과의 데이타를 % 대조 값으로서 나타내었다(대조 값은 TNF-α없이 사이클로헥스이미드로 배양된 세포였다).HeLa cells were seeded in 48-well multiple dishes at a density of 50,000 cells per well 24 hours prior to treatment. Then they were pre-incubated with various concentrations of Z-VD-fmk for 2 hours and attacked with TNF-α (25 ng / ml) and cycloheximide (CHX; 30 μg / ml). Cultures were incubated for an additional 24 hours and dead cells were removed by washing twice with PBS. The density of viable cells was then measured by incubating each culture cell for 45 minutes using calcein AM, a profluorescent dye, which is absorbed by the viable cells and converted to fluorescent products. The resulting data are shown as% control (control values were cells incubated with cycloheximide without TNF-α).

도 9는 0 내지 500nM 범위의 시험 농도를 사용한 Z-VD-fmk의 결과를 나타낸다. Z-VD-fmk는 약 100 nM의 농도에서 우수한 세포 보호를 제공하였다. 반면에, Z-VAD-fmk 는 1 μM(나타내지 않음) 미만에서 그의 대부분의 세포 보호 성질을 잃었다. Z-DEVD-fmk 및 Ac-DEVD-CHO와 같은 테트라펩티드 억제제는 50 μM(나타내지 않음) 미만에서 매우 무용하다. 따라서, Z-VD-fmk는 마이크로몰 이하의 농도에서 PARP 절단을 억제(실시예 24 참조)할 뿐만아니라, 마이크로몰 이하의 농도에서 세포 사멸을 억제하며, 공지된 트리펩티드 및 테트라펩티드 억제제보다 훨씬 더 효과적이다.9 shows the results of Z-VD-fmk using test concentrations ranging from 0 to 500 nM. Z-VD-fmk provided good cell protection at a concentration of about 100 nM. Z-VAD-fmk, on the other hand, lost most of its cellular protective properties below 1 μM (not shown). Tetrapeptide inhibitors such as Z-DEVD-fmk and Ac-DEVD-CHO are very useless below 50 μM (not shown). Thus, Z-VD-fmk not only inhibits PARP cleavage at concentrations below micromolar (see Example 24), but also inhibits cell death at concentrations below micromolar and is much more than known tripeptide and tetrapeptide inhibitors. More effective.

실시예 26Example 26

DNA 래더링(laddering)에 대한 Z-VD-fmk의 효과Effect of Z-VD-fmk on DNA Laddering

고사의 최후 단계에 있어서, 세포는 세포질의 조각이 (기포 형성을 통하여) 사멸됨에 따라 사실상 산산 조각나기 시작하고, 세포핵은 해체된다. 세포핵 해체의 홀마크(hallmark)의 하나는 게놈 DNA 의 뉴클레오솜-크기 단편으로의 절단["DNA 래더링(laddering)"이라함]이다. 다른 후반 단계 고사와 같이 DNA 래더링 (laddering)은 비가역적인 것으로 생각되며, 따라서, 항-고사 약물이 그의 발생을 막을 수 있는 지를 측정하는 것은 중요하다.In the final stages of apoptosis, cells actually begin to shatter as the cytoplasmic fragments die (through bubble formation), and the cell nucleus disintegrates. One hallmark of nuclear disassembly is the cleavage of genomic DNA into nucleosome-sized fragments (called "DNA laddering"). Like other late stage tests, DNA laddering is thought to be irreversible, and therefore it is important to measure whether anti-diagnostic drugs can prevent their development.

Z-VD-fmk의 DNA 래더링을 차단하는 능력은 항Fas-처리된 저캣 세포(Jurkat cell)를 사용하여 시험하였다. 저캣 세포(Jurkat cell)를 5 x 106 세포 밀도로 60mm 접시에 도말하고, 다양한 농도의 Z-VD-fmk를 사용하여 예비-배양하였다. 그 후, 그들을 100ng/㎖의 항Fas로 4시간 동안 공격하고, 수집하고, 펠릿화하고, PBS 로 두번 세척하였다. 게놈 DNA는 엘다다흐(Eldadah) 등의 방법(1996)을 사용하여 분리하였다. 간단히, 세포는 7M 구아니딘 HCL 2㎖ 중에 용해시키고, 위자드 미니프렙(Wizard miniprep) DNA 정제 수지[프로메가(Promega)] 1㎖와 혼합하였다. 수지/DNA 복합체를 완충액으로 두번 세척하고, DNA 를 TE 중에서 용출하였다. 이들 DNA 샘플 1 내지 2㎍을 1% 아가로스/TBE 겔 상에서 전기 영동시키고, 겔을 에티듐 브로마이드로 염색하였다.The ability to block DNA laddering of Z-VD-fmk was tested using anti-Fas-treated Jurkat cells. Jurkat cells were plated in 60 mm dishes at 5 x 10 6 cell density and pre-cultured using various concentrations of Z-VD-fmk. Then they were attacked with 100ng / ml of AntiFas for 4 hours, collected, pelletized and washed twice with PBS. Genomic DNA was isolated using the method of Eldadah et al. (1996). Briefly, cells were lysed in 2 ml of 7M guanidine HCL and mixed with 1 ml of Wizard miniprep DNA Purification Resin [Promega]. The resin / DNA complex was washed twice with buffer and DNA was eluted in TE. 1-2 μg of these DNA samples were electrophoresed on a 1% agarose / TBE gel and the gel was stained with ethidium bromide.

도 10은 세포가 Z-VD-fmk 또는 약물 부형제(DMSO)로 예비-배양된 DNA 래더링 분석의 결과를 나타낸다. 항Fas로 공격된 부형제 처리된 세포는 약 300bp에 이르기 까지 연장된 DNA 패턴을 래더링하는 특성을 나타낸다. 반면에, Z-VD-fmk는 50nM 정도의 낮은 용량에서 래더링 형성을 억제한다.10 shows the results of DNA laddering assays in which cells were pre-cultured with Z-VD-fmk or drug excipient (DMSO). Excipient treated cells challenged with anti-Fas exhibited a characteristic of laddering DNA patterns extended up to about 300 bp. On the other hand, Z-VD-fmk inhibits laddering formation at low doses as low as 50 nM.

이러한 결과는 Z-VD-fmk가 세포 사멸 및 PARP 절단을 차단하는 농도에 비교할 만한 마이크로몰 이하의 농도에서 임계적 최후-단계 고사(DNA 래더링)를 차단할 수 있음을 나타낸다. 이러한 실험 및 실시예 24 및 25에서 기술된 데이타에 기초하여, Z-VAD-fmk는 고사의 완전-세포 모델에서 매우 효과적인 마이크로몰 이하 고사 억제제라고 결론내려진다.These results indicate that Z-VD-fmk can block critical end-stage killing (DNA laddering) at concentrations below micromolar comparable to concentrations that block cell death and PARP cleavage. Based on these experiments and the data described in Examples 24 and 25, it is concluded that Z-VAD-fmk is a submicromolar apoptosis inhibitor that is very effective in a full-cell model of apoptosis.

실시예 27Example 27

마우스 간 고사 모델에서 Cbz-Val-Asp-CHCbz-Val-Asp-CH in Mouse Liver Death Model 22 F의 항-고사 활성Anti-Test Activity of F

3 내지 4주된 암컷 마우스를 본 연구에 사용하였다. 간 변성은 80㎕의 포스페이트 완충된 생리학상 염수에 희석된 마우스 Fas 항원에 대한 2-6㎍의 정제된 햄스터 항-마우스 Fas 모노클로날 항체[클론 Jo2, 파밍겐(Pharmingen)]로 정맥 주사함에 의하여 유발하였다(Rodriguez, et al., 1996). 사망률을 간 변성을 평가하기 위한 엔드 포인트로서 사용하였다. Cbz-Val-Asp-CH2F는 정맥 주사를 위한 트리스 완충액에서 제형화하였고, 정맥 후부를 경유하여 IV로 주어진 1-10mg/kg의 용량으로 시험하였다. 10분 후, 동물에 Fas 항체를 주사하였다. 사망률을 30분, 1, 3 및 24시에서 계수하였다. 각각의 화합물에 대하여, Fas 항체 만을 수용하는 대조군 동물이 있었다. 높은 용량을 수용하는 것들을 급성 행동 효과[예: 진정 작용, 움직이는 작용, 걸음걸이 변화, 경련, 스트로브 테일(straub tail), 떨림]에 대하여 관찰한 후, 밤새 재우고, 다음날 독성/사망률에 대하여 체크하였다.Female mice three to four weeks old were used in this study. Liver degeneration was intravenously injected with 2-6 μg purified hamster anti-mouse Fas monoclonal antibody (clone Jo2, Pharmingen) against mouse Fas antigen diluted in 80 μl of phosphate buffered physiological saline. Caused by (Rodriguez, et al., 1996). Mortality was used as an endpoint to assess liver degeneration. Cbz-Val-Asp-CH 2 F was formulated in Tris buffer for intravenous injection and tested at a dose of 1-10 mg / kg given IV via the posterior vein. After 10 minutes, the animals were injected with Fas antibody. Mortality was counted at 30 minutes, 1, 3 and 24 hours. For each compound, there was a control animal that received only Fas antibody. Those receiving high doses were observed for acute behavioral effects (eg sedation, movement, gait change, convulsions, strobe tail, tremor), then slept overnight and checked for toxicity / mortality the following day. .

이들 실험에 있어서, Cbz-Val-Asp-CH2F는 항Fas-유발 치사에 대한 놀라운 효력의 억제제였다. 단일 1mg/kg IV 용량은 항체 투여 후, 1 시간 까지 항Fas로부터 마우스를 완전하게 보호하였고, 0.25mg/kg 만큼 낮은 용량에서 까지 거의 100% 보호를 나타냄이 관찰되었다. 반면에, 부형제 대조군에서는 이러한 시간-지점에서 모든 마우스가 죽었다. Cbz-Val-Asp-CH2F는 또한 24시간 까지 실질적인 보호(28% 생존)를 나타내었다. 분리 연구는 치사에 대한 보호가 간 효소 SPGT 및 SGOT의 유발에서 예언된 약독화와 관련되었음을 나타내었다.In these experiments, Cbz-Val-Asp-CH 2 F was an inhibitor of surprising effect on anti-Fas-induced lethality. A single 1 mg / kg IV dose completely protected mice from anti-Fas for up to 1 hour after antibody administration and was observed to exhibit nearly 100% protection up to doses as low as 0.25 mg / kg. On the other hand, all mice died at this time-point in the excipient control group. Cbz-Val-Asp-CH 2 F also showed substantial protection (28% survival) up to 24 hours. Isolation studies showed that protection against lethality was associated with predicted attenuation in the induction of liver enzymes SPGT and SGOT.

이들 데이타는 Cbz-Val-Asp-CH2F가 마우스 간 고사 모델에서 전신적 투여 후에 생체 내에서 높은 활성을 가짐을 입증한다.These data demonstrate that Cbz-Val-Asp-CH 2 F has high activity in vivo after systemic administration in mouse hepatic apoptosis model.

실시예 28Example 28

병소 허혈의 랫트 모델에서 Cbz-Val-Asp-CHCbz-Val-Asp-CH in Rat Model of Lesion Ischemia 22 F의 신경 보호F, nerve protection

(ⅰ) 예비 수술: 200-240g의 무게를 갖는 수컷 피쳐(Fischer)-344 랫트[하란 스파그 다우리(Harlan Sprague Dawley), CA]를 사용하였다. 동물을 30% 산소 및 70% 공기의 혼합물중의 3% 할로탄으로 초기에 마취시켰다. 할로탄 레벨을 수술 중의 마취 유지를 위하여 1.5%로 감소시켰다. 예비 수술은 하기 단계를 포함한다: (a) 정맥내 카테터 주입: 좌측 대퇴부 정맥은 노출시키고, 부형제로 충진된 텔레플렉스 카테터는 연이은 약물 투여를 위하여 하위 대정맥까지 삽입하였다. (b) 동맥 카테터 주입; 대퇴부 동맥은 혈압의 모니터링, 및 허혈, 초기 약물 투여 및 동맥 재관류 시간 중의 pO2, pCO2, pH, 글루코스, 헤마토크라이트을 포함하는 다른 생리학적 조건의 모니터링을 위하여 카테터 주입된다. 동맥 및 정맥 카테터는 동물의 등을 통하여 몸밖으로 나와 자유로운 운동이 허용된다. (c) 피지오텔 트랜스미터 (PhysioTel Transmitter) [데이타 사이언스 인터내셔날(Data Sciences International), MI]을 복막강 내에 이식하여 22 시간 동안 동물의 체온을 원격적으로 모니터링하였다.(Iv) Preoperative Surgery: A Fischer-344 rat (Harlan Sprague Dawley, CA) weighing 200-240 g was used. Animals were initially anesthetized with 3% halotane in a mixture of 30% oxygen and 70% air. Halotan levels were reduced to 1.5% to maintain anesthesia during surgery. Preliminary surgery included the following steps: (a) Intravenous catheter injection: The left femoral vein was exposed and the excipient filled teleplex catheter was inserted into the lower vena cava for subsequent drug administration. (b) arterial catheter injection; The femoral artery is catheterized for monitoring blood pressure and other physiological conditions including pO 2 , pCO 2 , pH, glucose, hematocrite during ischemia, initial drug administration and arterial reperfusion time. Arterial and venous catheters come out of the body through the back of the animal and are allowed to exercise freely. (c) PhysioTel Transmitter [Data Sciences International, MI] was implanted into the peritoneal cavity to remotely monitor the animal's body temperature for 22 hours.

(ⅱ) 생리적 파라미터: 코어 바디 온도는 YSI 온도 조절 유닛(오하이오에 소재하는 YSI Co. Inc.로부터 구매한 모델 73A) 및 전기 가열 패드(MS의 핫티스버그에 소재하는 썬빈-오스터 Co. Inc.로부터 구매한 모델 756)에 연결된 YSI 재사용가능 온도 탐침(OH의 옐로우 스프링에 소재하는 YSI Co. Inc.로부터 구매)을 사용하여 수술 중에 37.5℃로 유지시켰다. 허혈 후, 피지오텔 트랜스미터 (PhysioTel Transmitter)는 활성화되고, 코어 바디 온도는 매 5분 마다 기록되었다. 전신 혈압은 정맥내 약물 주입(환약: bolus)을 하면서 수술하는 동안에 허혈의 발병 후 1, 2, 3 및 4시간 후에 모니터링하였다. pO2, pCO2, pH, 글루코스 및 헤마토크라이트를 포함하는 다른 생리적 조건들을 동맥 폐색 및 재관류의 시간에 조사하였다.(Ii) Physiological parameters: The core body temperature was determined by the YSI temperature control unit (Model 73A, purchased from YSI Co. Inc., Ohio) and an electric heating pad (Sunbin-Oster Co. Inc., Hattisburg, MS). A YSI reusable temperature probe (purchased from YSI Co. Inc., Yellow Springs, OH) connected to Model 756 purchased from USA was maintained at 37.5 ° C. during surgery. After ischemia, the PhysioTel Transmitter was activated and the core body temperature was recorded every 5 minutes. Systemic blood pressure was monitored 1, 2, 3 and 4 hours after onset of ischemia during surgery with intravenous drug infusion (pills). Other physiological conditions including pO 2 , pCO 2 , pH, glucose and hematocrite were investigated at time of arterial occlusion and reperfusion.

(ⅲ) 일시적 병소 허혈 모델: 예비 수술 후, 복부 중심 경부 절개는 양쪽 CCA를 노출시켰다. 오른쪽 CCA는 영구적으로 4-o 실크 봉합한 반면, 왼쪽 CCA는 비외상성 동맥류 클립으로 죄었다. 오른쪽 눈의 외측 안각 및 바깥 귀구멍 사이가 1-cm 절개 수직선으로 양분되었다. 보조 해부용 현미경[일본의 올림푸스(Olympus)에서 구매한 모델 SZ-STB1]을 사용한 직접적인 시각화 하에서 일시적으로 근육 밑을 절제하여 함몰시켰고, 중앙 대뇌 동맥(MCA)은 2-3mm 부리의 2mm 버 홀(burr hole) 드릴을 통하여 광대뼈 아치(zygomatic arch)와 두정골 (squamosal bone)의 융합체에 노출시켰다. 드릴링은 생리 염수의 연속적인 관개하에서 수행하였다. 경막을 절단하고, 함몰시켜 비강의 열구내의 MCA를 노출시켰다. 코드만 마이크로-동맥류 클립(No. 1)을 사용하여 비강의 열구를 가로지를 때 MCA를 일시적으로 폐색시켰다. 흐름 차단은 해부용 현미경을 사용하여 검정되었다. 절단부를 수술용 클립을 사용하여 덮고, 마취를 중지하고, 동물을 (수분 내에) 깨운 후, 그들의 우리로 돌려보냈다. 일시적인 허혈에 대한 랫트 피검체는 MCA 폐색 후, 2.5 시간 후, 재마취시켰다. MCA 폐색의 확인 후, MCA 및 왼쪽 CCA에 대한 클립을 제거하고, MCA 중의 혈류의 복원을 시각적으로 확인하였다. 절개 부를 봉합하고, 랫트를 그의 우리로 돌려보냈다. 단기 회복을 요하는 동물은 24시간 동안 살아남도록 하였다. 모든 동물은 희생 전에 깊게 마취시켰다. 뇌를 제거하고, 2mm 두정부를 얇게 썰어내어 TTC에 놓았다. 경색된 조직은 창백하였고, 인접 생존가능 조직과 구별할 수 있었다. 피질 및 피질하의 경색 부는 이미징 프로세싱 소프트웨어를 사용하여 무작위로 측정하였고, 경색의 부피는 공지된 두께를 갖는 개개의 측정기를 사용하여 계산하였다.(Iv) Transient focal ischemia model: After preoperative surgery, an abdominal central cervical incision exposed both CCAs. The right CCA was permanently sutured with 4-o silk, whereas the left CCA was clamped with a non-traumatic aneurysm clip. Between the lateral angle of the right eye and the outer ear hole was bisected by a 1-cm incision vertical line. Under direct visualization using an assisted dissecting microscope (Model SZ-STB1 purchased from Olympus, Japan), the submuscular section was temporarily excised and recessed. A burr hole drill was used to expose the fusion of the zygomatic arch and the squamosal bone. Drilling was performed under continuous irrigation of physiological saline. The dura was cut and recessed to expose the MCA in the nasal sulcus. MCA was temporarily occluded when the cord only crosses the nasal sulcus using a micro-aneurysm clip (No. 1). Flow blocking was assayed using an anatomical microscope. The cuts were covered using a surgical clip, the anesthesia was stopped, the animals were woken up (in minutes) and returned to their cages. Rat subjects for transient ischemia were re-anesthetized 2.5 hours after MCA occlusion. After confirmation of MCA occlusion, the clips to MCA and left CCA were removed and visually confirmed the restoration of blood flow in MCA. The incision was closed and the rat returned to his cage. Animals requiring short-term recovery were allowed to survive for 24 hours. All animals were deeply anesthetized before sacrifice. The brain was removed, and the 2mm headpiece was sliced and placed on TTC. Infarcted tissue was pale and could be distinguished from adjacent viable tissue. Cortical and subcortical infarct portions were measured randomly using imaging processing software, and the volume of infarcts was calculated using individual meters having a known thickness.

(ⅳ) 통계적 분석: 모든 생리적 파라미터, 온도 레코딩 및 피질 경색의 용적은 각각의 동물의 서브-셋트(sub-set)에 대한 실험군 및 대조군 사이에서 통계적으로 비교하였다. 통계적 분석은 시그마스테이트 소프트웨어(Sigmastat software) [CA의 산 라파엘(San Rafael)에 소재하는 잰덜 사이언티픽 소프트웨어(Jandel Scientific Software)에서 구매]를 사용하여 수행하였다. 스튜던트 테스트 (student's test)는 비연상 데이타(unpaired data) 및 다중 비교를 위한 ANOVA를 위하여 사용되었다. 0.05 미만의 p값은 중요하게 간주되었다. 그래프를 시그마플롯(SigmaPlot) v 2.01 소프트웨어[잰덜 사이언티픽(Jandel Scientific)] 상에 만들었다.(Iii) Statistical Analysis: All physiological parameters, temperature recordings and volume of cortical infarction were statistically compared between experimental and control groups for each animal's sub-set. Statistical analysis was performed using Sigmastat software (purchased from Jand Scientific Software, San Rafael, CA). Student's test was used for ANOVA for unpaired data and multiple comparisons. P values less than 0.05 were considered significant. Graphs were created on SigmaPlot v 2.01 software (Jandel Scientific).

Cbz-Val-Asp-CH2F의 생체 내 신경 보호 성질은 랫트[피쳐(Fischer)-344] 일시적 병소 허혈 모델의 두번의 발작 연구에서 시험하였다. Cbz-Val-Asp-CH2F는 허혈의 발작 10분 후, 20mg/kg IV 환약(bolus)로서 주어졌고, 그 후, 5mg/kg/hr의 연속적인 IV 주입을 하였다. 실험 1에서, 정맥 주사를 6시간 동안 계속하였다. 실험 2에서, 정맥 주사를 12시간으로 연장하였다. In vivo neuroprotective properties of Cbz-Val-Asp-CH 2 F were tested in two seizure studies of the rat [Fischer-344] transient focal ischemia model. Cbz-Val-Asp-CH 2 F was given as a 20 mg / kg IV bolus 10 minutes after the seizure of ischemia, followed by a continuous IV infusion of 5 mg / kg / hr. In Experiment 1, intravenous injection was continued for 6 hours. In Experiment 2, intravenous injection was extended to 12 hours.

Cbz-Val-Asp-CH2F는 이들 양 연구에 있어서 피질 경색을 상당히 감소시키는 것으로 밝혀졌다: 실험 1에서 46%(p＜0.05) 및 실험 2에서 57%(p＜0.05)(도 11a 및 11b). 혈압, 혈액 가스 또는 약물 투여 후의 온도는 변화가 없었다. 이들 결과는 Cbz-Val-Asp-CH2F는 급속 IV 투여 후 우수한 내성을 보이며, 일시적 병소 대뇌 허혈의 랫트 모델에서 효과적인 신경 보호제임을 입증하였다.Cbz-Val-Asp-CH 2 F was found to significantly reduce cortical infarction in both studies: 46% (p <0.05) in Experiment 1 and 57% (p <0.05) in Experiment 2 (FIG. 11A and 11b). There was no change in blood pressure, blood gas or temperature after drug administration. These results demonstrate that Cbz-Val-Asp-CH 2 F shows good resistance after rapid IV administration and is an effective neuroprotective agent in the rat model of transient focal cerebral ischemia.

이제 본 발명을 완전히 기술하였고, 당업자는 본 발명의 범위 또는 그의 어떤 실시 양태에서 벗어남 없이 광범위하고 동등한 조건, 공식화 및 다른 파라미터의 범위 내에서 본 발명을 수행할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 본원에서 인용한 모든 특허 및 공개는 그들 전부가 본원에 참고 문헌으로서 완전히 포함된다.Having now described the present invention in full, it will be understood by those skilled in the art that the present invention can be carried out within the scope of the broad and equivalent conditions, formulations and other parameters without departing from the scope of the invention or any embodiment thereof. All patents and publications cited herein are fully incorporated by reference in their entirety.

Claims (38)

화학식 I의 화합물, 또는 그의 약학적 허용 염:Compound of Formula (I), or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure 112006011956530-pct00075
Figure 112006011956530-pct00075
 상기 식에서,Where R1은 t-부톡시카보닐(Boc). 아세틸(Ac). 및 벤질옥시카보닐(Cbz)로 구성되는 군으로부터 선택되는 N-말단 보호기; R 1 is t-butoxycarbonyl (Boc). Acetyl (Ac). N-terminal protecting group selected from the group consisting of benzyloxycarbonyl (Cbz); R3는 C1-6 알킬 또는 H; 및R 3 is C 1-6 alkyl or H; And AA는 발린(Val), 이소루신(Ile), 및 루신(Leu)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기AA is an amino acid residue selected from the group consisting of valine, isoleucine (Ile), and leucine (Leu) 제 1항에 있어서, R3는 메틸 또는 H인 화합물.The compound of claim 1, wherein R 3 is methyl or H. 3 . 제 2항에 있어서, 화합물이 Cbz-Val-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.The compound of claim 2, wherein the compound is Cbz-Val-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Cbz-Leu-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.The compound of claim 2, wherein the compound is Cbz-Leu-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Cbz-Ile-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.The compound of claim 2, wherein the compound is Cbz-Ile-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Ac-Val-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.The compound of claim 2, wherein the compound is Ac-Val-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Ac-Leu-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물The compound of claim 2, wherein the compound is Ac-Leu-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Ac-Ile-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물The compound of claim 2, wherein the compound is Ac-Ile-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Boc-Val-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.The compound of claim 2, wherein the compound is Boc-Val-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Boc-Leu-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물The compound of claim 2, wherein the compound is Boc-Leu-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Boc-Ile-Asp-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물The compound of claim 2, wherein the compound is Boc-Ile-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.The compound of claim 2, wherein the compound is Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Cbz-Leu-Asp(OMe)-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.The compound of claim 2, wherein the compound is Cbz-Leu-Asp (OMe) -CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2항에 있어서, 화합물이 Cbz-Ile-Asp(OMe)-CH2F 또는 약학적으로 허용되는 이의 염인 화합물.The compound of claim 2, wherein the compound is Cbz-Ile-Asp (OMe) -CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항의 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 세포사멸의 치료, 경감 및 억제용 약학조성물.A pharmaceutical composition for the treatment, alleviation and inhibition of apoptosis, comprising the compound of any one of claims 1 to 3 and a pharmaceutically acceptable carrier. 제 15항에 있어서, 세포사멸은 이식된 도우너 기관 또는 조직에서 숙주 면역세포의 영향으로 인한 것인 약학조성물The pharmaceutical composition of claim 15, wherein the apoptosis is due to the effect of host immune cells in the transplanted donor organ or tissue. 제 15항에 있어서, R3는 메틸 또는 H인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein R 3 is methyl or H. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Cbz-Val-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Cbz-Val-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Cbz-Leu-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Cbz-Leu-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Cbz-Ile-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Cbz-Ile-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Ac-Val-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Ac-Val-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Ac-Leu-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Ac-Leu-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Ac-Ile-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Ac-Ile-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Boc-Val-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Boc-Val-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Boc-Leu-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Boc-Leu-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Boc-Ile-Asp-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Boc-Ile-Asp-CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Cbz-Val-Asp(OMe)-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Cbz-Val-Asp (OMe) -CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Cbz-Leu-Asp(OMe)-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Cbz-Leu-Asp (OMe) -CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 상기 화합물은 Cbz-Ile-Asp(OMe)-CH2F 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the compound is Cbz-Ile-Asp (OMe) -CH 2 F or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 15항에 있어서, 세포사멸은 비인간동물의 중추 및 말초 신경 시스템, 망막 신경, 심근 또는 면역 시스템 세포에서 발생하는 것인 약학조성물The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the apoptosis occurs in the central and peripheral nervous system, retinal nerve, myocardial or immune system cells of a non-human animal. 제 30항에 있어서, 상기 세포사멸은 중추 또는 말초신경계에 있으며, 하기 원인 중 하나에 기인되어지는 것인 약학조성물31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein the apoptosis is in the central or peripheral nervous system and is caused by one of the following causes. (a) 발작으로 인한 병소 허혈 및 심박동정지로 인한 전신적 허혈로 구성된 군으로부터 선택되는 허혈 및 흥분신경독성(excitotoxicity) 증상;(a) ischemia and excitotoxicity symptoms selected from the group consisting of focal ischemia due to seizures and systemic ischemia due to cardiac arrest; (b) 외상;(b) trauma; (c) 바이러스 감염;(c) viral infections; (d) 방사선-유발 신경 세포 사멸; 또는(d) radiation-induced neuronal cell death; or (e) 알츠하이머 질병, 파킨슨 질병, 프리온 질병, 다발 경화증, 근위축성 외측 경화증 및 척수연수 위축증으로 구성된 군으로부터 선택되는 퇴행성 신경 장애. 또는(e) Degenerative neuropathy selected from the group consisting of Alzheimer's disease, Parkinson's disease, prion disease, multiple sclerosis, amyotrophic lateral sclerosis and spinal cord atrophy. or (f) 척수손상(f) spinal cord injury 제 30항에 있어서, 세포사멸이 중추 또는 말초 신경 시스템에서 일어나고, 특정 유전자의 트리뉴클레오티드 반복의 연장으로 인하여 발생하는 것인 약학조성물.31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein the apoptosis occurs in the central or peripheral nervous system and occurs due to the extension of the trinucleotide repeat of a particular gene. 제 30항에 있어서, 세포 사멸이 헌팅톤 질병으로 인하여 발생하는 것인 약학조성물.31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein the cell death occurs due to Huntington's disease. 제 30항에 있어서, 세포 사멸이 심근 조직에서 일어나고, 심근 경색, 충혈성 심부전, 심근증 또는 심장의 바이러스 감염으로 인하여 발생하는 것인 약학조성물.31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein the cell death occurs in myocardial tissue and occurs due to myocardial infarction, congestive heart failure, cardiomyopathy or viral infection of the heart. 제 30항에 있어서, 세포 사멸이 망막 신경에서 일어나고, 증가된 안압, 노화-관련 황반 변성 또는 색소 망막염으로 인하여 발생하는 것인 약학조성물.31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein the cell death occurs in the retinal nerve and occurs due to increased intraocular pressure, age-related macular degeneration or pigment retinitis. 제 30항에 있어서, 세포 사멸이 면역 시스템에서 일어나고, 후천성 면역 결핍증, 중증 연합 면역 결핍증(severe combined immune deficiency syndrome) 및 방사선-유발 면역 억압으로 구성된 군으로부터 선택되는 면역 결핍 장애로 인하여 발생하는 것인 약학조성물.31. The method of claim 30, wherein cell death occurs in the immune system and results from an immunodeficiency disorder selected from the group consisting of acquired immunodeficiency syndrome, severe combined immune deficiency syndrome, and radiation-induced immune suppression. Pharmaceutic composition. 제 30항에 있어서, 세포 사멸이 루푸스 홍반증, 류마티스성 관절염 및 타입 I 당뇨병으로 구성된 군으로부터 선택되는 자가면역 장애로 인하여 발생하는 것인 약학조성물.31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein the cell death occurs due to an autoimmune disorder selected from the group consisting of lupus erythematosis, rheumatoid arthritis and type I diabetes. 제 37항에 있어서, 세포 사멸이 타입 I 당뇨병으로 인하여 발생하는 것인 약학조성물38. The pharmaceutical composition according to claim 37, wherein the cell death occurs due to type I diabetes.
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Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6184210B1 (en) 1997-10-10 2001-02-06 Cytovia, Inc. Dipeptide apoptosis inhibitors and the use thereof
CN1297354A (en) * 1998-03-16 2001-05-30 西托维亚公司 Dipeptide caspase inhibitors and use thereof
EP1082967B1 (en) * 1998-05-29 2006-07-19 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Prevention and treatment of autoimmune demyelinating diseases by Fas-antagonists
EP1124961B9 (en) 1998-10-23 2010-07-21 Kirin-Amgen Inc. Thrombopoietic compounds
US7488590B2 (en) 1998-10-23 2009-02-10 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
AU2746000A (en) 1999-02-01 2000-08-18 Cytovia, Inc. Gambogic acid, analogs and derivatives as activators of caspases and inducers ofapoptosis
DE60030097T2 (en) 1999-03-16 2007-03-08 Cytovia, Inc., San Diego SUBSTITUTED 2-AMINOBENZAMINE CASPASE INHIBITORS AND THEIR USE
KR20020005665A (en) * 1999-04-09 2002-01-17 추후보정 Caspase inhibitors and the use thereof
MXPA02002038A (en) 1999-08-27 2002-10-31 Cytovia Inc SUBSTITUTED agr;HYDROXY ACID CASPASE INHIBITORS AND THE USE THEREOF.
US6566338B1 (en) * 1999-10-12 2003-05-20 Cytovia, Inc. Caspase inhibitors for the treatment and prevention of chemotherapy and radiation therapy induced cell death
US6303374B1 (en) 2000-01-18 2001-10-16 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of caspase 3 expression
DE10006889A1 (en) * 2000-02-16 2001-09-06 Procorde Gmbh Use of inhibitors of caspase-3 or the caspase-activated deoxyribonuclease (CAD) for the treatment of heart diseases
ATE384695T1 (en) 2000-03-29 2008-02-15 Vertex Pharma CARBAMAT CASPASE INHIBITORS AND THEIR USE
EP1923386A3 (en) 2000-03-29 2008-05-28 Vertex Pharmceuticals Incorporated Carbamate caspase inhibitors and uses thereof
PL357713A1 (en) * 2000-05-23 2004-07-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
US20020052323A1 (en) * 2000-08-30 2002-05-02 Jinhai Wang Quinoline-(C=O)-(multiple amino acids)-leaving group compounds for pharmaceutical compositions and reagents
US6800619B2 (en) 2000-09-13 2004-10-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
US6660731B2 (en) 2000-09-15 2003-12-09 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
CA2422367C (en) 2000-09-15 2010-05-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
KR100947185B1 (en) 2000-12-21 2010-03-15 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors and compositions comprising said compounds
WO2002085899A1 (en) 2001-04-19 2002-10-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Heterocyclyldicarbamides as caspase inhibitors
MY141867A (en) 2002-06-20 2010-07-16 Vertex Pharma Substituted pyrimidines useful as protein kinase inhibitors
PL374967A1 (en) 2002-08-02 2005-11-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compositions useful as inhibitors of gsk-3
WO2004032750A1 (en) * 2002-10-10 2004-04-22 Becton Dickinson And Company Sample collection system with caspase inhibitor
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
WO2007056221A2 (en) 2005-11-03 2007-05-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Aminopyrimidines useful as kinase inhibitors
MX2009011810A (en) 2007-05-02 2010-01-14 Vertex Pharma Thiazoles and pyrazoles useful as kinase inhibitors.
CN101790532B (en) 2007-07-31 2013-11-20 沃泰克斯药物股份有限公司 Process for preparing 5-fluoro-1h-pyrazolo [3, 4-b] pyridin-3-amine and derivatives thereof
FR2923160B1 (en) * 2007-11-02 2013-07-26 Pasteur Institut COMPOUNDS FOR PREVENTING OR TREATING VIRAL INFECTION.
CN102215816A (en) 2008-09-03 2011-10-12 沃泰克斯药物股份有限公司 Co-crystals and pharmaceutical formulations comprising the same
CN106317161B (en) * 2015-06-29 2020-05-15 深圳翰宇药业股份有限公司 Preparation method of fluoromethyl ketone peptide series compounds
CN117045634A (en) * 2022-05-06 2023-11-14 北京康蒂尼药业股份有限公司 Dipeptide derivative composition and preparation method and application thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5434248A (en) * 1991-06-21 1995-07-18 Merck & Co., Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1β converting enzyme

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991015577A1 (en) * 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE
JP2759895B2 (en) * 1991-08-30 1998-05-28 サノフィ DNA sequence isolate encoding interleukin 1β protease
US5462939A (en) * 1993-05-07 1995-10-31 Sterling Winthrop Inc. Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors
JPH0789951A (en) * 1993-06-03 1995-04-04 Sterling Winthrop Inc Interleukin-1 beta transfer enzyme inhibitor
US5565430A (en) * 1994-08-02 1996-10-15 Sterling Winthrop Inc. Azaaspartic acid analogs as interleukin-1β converting enzyme inhibitors
IL125190A (en) * 1996-09-12 2003-01-12 Idun Pharmaceuticals Inc Tricyclic compounds for the inhibition of the ice/ced-3 protease family of enzymes and pharmaceutical compositions containing the same

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5434248A (en) * 1991-06-21 1995-07-18 Merck & Co., Inc. Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1β converting enzyme

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