KR100576340B1

KR100576340B1 - 피리다진-4-온 유도체, 그 제조방법 및 약제학적 조성물

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Publication number: KR100576340B1
Application number: KR1020030085789A
Authority: KR
Inventors: 박상욱; 김택로; 이성학; 김종훈; 박현정; 박지은; 노지영; 고동현; 유형철; 김영지; 김영훈; 연규정; 김덕열; 채명윤; 조일환; 민인기; 노현정; 김성우
Original assignee: 씨제이 주식회사
Priority date: 2003-11-28
Filing date: 2003-11-28
Publication date: 2006-05-03
Also published as: KR20050052619A

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 제공한다:

상기 화학식 1에서,

R¹은 C₃-C₆ 시클로알킬; C₃-C₆ 시클로알케닐; 페닐; C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 할로알킬, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 할로알콕시, 아세톡시, 할로겐, 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 니트로, 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택된 기로 하나 이상 치환된 페닐; 스틸레닐; C₁-C₆ 알콕시 스틸레닐; 또는 피리딜이고,

R²는 메틸 또는 아미노이다.

Description

피리다진-4-온 유도체, 그 제조방법 및 약제학적 조성물{Pyridazine-4-one derivatives, processes for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing the same}

본 발명은 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염, 이들의 제조방법, 및 이들을 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

비스테로이드성 항염증제의 대부분은 사이클로옥시게나제 (cyclooxoygenase) 또는 프로스타글란딘 G/H 신타제라 불리는 효소의 저해를 통해 그들의 항염증, 진통, 해열 작용을 나타내며, 또한 호르몬에 의해 일어나는 자궁 수축을 저해하고 몇몇 종류의 암의 성장을 저해한다. 처음에는 소에서 발견된 구성적 효소인 사이클로옥시게나제-1 (COX-1)만이 알려져 있었는데, 최근에 유발성 형태의 사이클로옥시게나제-2 (COX-2)가 밝혀졌다. 사이클로옥시게나제-2는 사이클로옥시게나제-1과는 확실히 다르며, 마이토젠, 내독소, 호르몬, 성장인자 및 싸이토카인 등에 의해 쉽게 유발된다.

프로스타글란딘은 병리학적 및 생리학적 역할을 하는데, 구성적 효소인 사이클로옥시게나제-1은 기본적인 내인성 프로스타글란딘의 분비에 관여하고 위장의 상 태 유지 및 신장의 혈액 순환 등 생리학적인 측면에서 중요한 역할을 한다. 반면에, 사이클로옥시게나제-2는 염증인자, 호르몬, 성장인자 및 싸이토카인 등에 의해 유발되며, 따라서 프로스타글란딘의 병리학적인 효과에 주된 역할을 한다. 그러므로 사이클로옥시게나제-2에 선택적인 저해제는 기존의 비스테로이드성 항염증제에 비해 작용기전에 의한 부작용이 없을 것으로 예상되고, 소염, 진통, 해열 작용을 나타낼 것이 예상되며, 또한 호르몬에 의해 일어나는 자궁 수축의 저해와 몇몇 종류의 암 성장을 저해할 것으로 예상된다. 특히 위장 독성, 신장 독성 등의 부작용이 적을 것으로 예상된다. 또한 수축성 프로스타노이드의 합성을 방지하여 프로스타노이드에 의해 유발되는 평활근의 수축을 저해할 수 있을 것이며, 따라서 조산, 월경 불순, 천식 및 호산구에 연관된 질병에 유용할 것으로 예상된다. 그 외에도 골다공증, 녹내장, 대장암, 전립선암 및 치매의 치료에도 유용할 것이 예상되는데, 사이클로옥시게나제-2에 선택적인 저해제의 유용성에 대해서는 문헌(참조: John Vane, "Towards a better aspirin" in Nature, 367권, 215-216쪽, 1994; Bruno Battistini, Regina Botting and Y.S. Bakhle, "COX-1 and COX-2: Toward the Development of More Selective NSAIDs" in Drug News and Perspectives, 7권, 501-512쪽, 1994; David B. Reitz and Karen Seibert, "Selective Cyclooxygenase Inhibitors" in Annual Reports in Medicinal Chemistry, James A. Bristol, Editor, 30권, 179-188쪽, 1995)에 잘 기술되어 있다.

사이클로옥시게나제-2에 선택적으로 작용하는 저해제로서 공지된 기존의 약물들은 그 구조에 있어서 매우 다양한 형태를 취하고 있다. 그 중 가장 일반적으로 연구되고 따라서 가장 많은 후보물질이 설계된 구조는 디아릴 헤테로사이클의 구조, 즉 트리사이클릭 시스템으로서 이 구조는 특징적으로 하나의 페닐에 술폰아미드 혹은 메탄술폰기가 필수적으로 존재한다.

미국특허번호 5,466,823에 따르면 하기 화학식 21의 화합물(셀레콕시브)을 개시하고 있다. 하기 셀레콕시브는 치환된 피라졸 벤젠 술폰아미드 유도체이다.

WO 95/00501에 따르면, 하기 화학식 22를 갖는 화합물(로페콕시브)을 개시하고 있다. 로페콕시브는 상기 셀레콕시브와 같이 디아릴 헤테로사이클 구조지만 헤테로고리로서 퓨란온 구조를 갖는다.

미국특허번호 5,633,272에서는 하기 화학식 23과 같은 화합물(발데콕시브)을 기재하고 있다. 발데콕시브는 셀레콕시브와 같이 페닐 술폰아미드구조를 갖지만 헤테로고리로서 이소옥사졸 구조를 갖는다.

상기 화학식 22 내지 24의 화합물은 모두 COX-2에 대한 선택적 억제제로서 기존의 비스테로이드성 항염증제에 비해 부작용이 없는 소염 진통 치료 효과를 갖는다.

본 발명은 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명의 목적은 상기 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염의 제조방법을 제공하는 것을 포함한다.

또한 본 발명의 목적은 상기 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 유효성분으로 포함하는 해열, 진통, 소염 효과를 갖는 약제학적 조성물을 제공하는 것을 포함한다.

[화학식 1]

상기 화학식 1에서,

R²는 메틸 또는 아미노이다.

상기 화학식 1에서, R¹은 페닐; C₁-C₃ 알킬, C₁-C₃ 알콕시, 또는 할로겐으로 치환된 페닐이고, R²는 메틸 또는 아미노인 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염이 바람직하다.

상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 무독성 염의 형태로 존재할 수 있다. 여기서 무독성 염이란 유기염과 무기염을 포함하는 약제학적으로 허용되는 비독성 염을 의미한다.

상기 화학식 1의 화합물과의 무기염에는 알루미늄, 암모늄, 칼슘, 구리, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 칼륨, 나트륨, 또는 아연과의 염이 있으나 이에 한정되지 않으며, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 칼륨, 또는 나트륨염이 바람직하다.

상기 화학식 1의 화합물과의 유기염에는 1급, 2급 또는 3급 아민, 자연에 존재하는 치환된 아민, 사이클릭아민, 또는 염기성 이온 교환 수지와의 염이 있이 있으나 이에 한정되지는 않는다. 염기성 이온 교환 수지 등으로부터 준비된 염들의 예에는 아르기닌, 베타인, 카페인, 콜린, N,N-디벤질에틸렌디아민, 디에틸아민, 2-디에틸아미노에탄올, 2-디메틸아미노에탄올, 에탄올아민, 에틸렌디아민, N-에틸모폴린, N-에틸피페리딘, N-메틸글루카민, 글루카민, 글루코사민, 히스티딘, 히드랍아민, N-(2-하이드록시에틸)피페리딘, N-(2-하이드록시에틸)피롤리딘, 이소프로필아민, 라이신, 메틸글루카민, 모폴린, 피페라진, 피페리딘, 폴리아민 수지, 프로카인, 퓨린, 테오브로민, 트리에틸아민, 트리메틸아민, 트리프로필아민, 트로메타민 등의 염이 있으나 이에 한정되지는 않는다.

상기 화학식 1의 화합물은 약제학적으로 허용되는 유기산 또는 무기산과의 염의 형태로 존재할 수 있다.

상기 화학식 1의 화합물의 유기산염 또는 무기산염에는 아세트산, 아디프산, 아스파르트산, 1,5-나프탈렌디술폰산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캠포술폰산, 시트르산, 1,2-에탄디술폰산, 에탄술폰산, 에틸렌디아민테트라아세트산, 푸마르산, 글루코헵톤산, 글루콘산, 글루탐산, 요오드화수소산, 브롬화수소산, 염산, 이세티온산, 락 트산, 말레산, 말산, 만데르산, 메탄술폰산, 뮤식산, 2-나프탈렌디술폰산, 니트르산, 옥살산, 파르노산, 펜토텐산, 인산, 피발릭산, 프로피온산, 살리실산, 스테아르산, 숙신산, 황산, 타타르산, p-톨루엔술폰산, 운데카노산, 또는 10-운데케노산과의 염이 있으나 이에 한정되지는 않으며, 숙신산, 브롬화수소산, 염산, 말레산, 메탄술폰산, 인산, 황산, 또는 타타르산과의 염이 바람직하다.

본 발명의 피리다진-4-온 유도체에는

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-페닐-1H-피리다진-4-온;

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-p-톨릴-1H-피리다진-4-온;

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-(4-메톡시페닐)-1H-피리다진-4-온;

6-(4-플루오로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온;

6-(4-클로로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온;

6-(4-브로모페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온; 및

4-(4-옥소-6-페닐-4H-피리다진-1-일)-벤젠설폰아미드로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나인 것이 바람직하다.

본 발명은 상기 화학식 1의 피리다진-4-온 유도체의 합성 중간체로서 하기 화학식 7의 피리다진 유도체를 제공한다.

한편, 본 발명에서 제공하는 화학식 1의 화합물은 하기 반응식 1과 같은 방법에 따라 제조될 수 있다.

그러나, 하기 반응식 1에 따른 방법은 화학식 1의 피라진-4-온 유도체의 제조방법의 일 구현예에 해당하며, 예를 들어 반응용매, 염기, 반응물질의 사용량과 같은 반응 조건들이 하기에 설명된 것으로만 한정되는 것은 아니다. 또한, 하기 반응식 1의 방법 이외에도 당업계의 공지문헌에 개시된 여러 가지 합성방법을 임의로 조합함으로써 상기 화학식 1의 피리다진-4-온 유도체를 제조할 수 있다.

상기 반응식에서, R¹은 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.

상기 반응을 간략히 설명하면 다음과 같다.

상기 반응식 1에서 술파이드 중간체(4)를 술폰으로 산화시킴으로써 술폰 중간체(5)을 얻을 수 있으며, 이 과정에서 사용되는 산화제로는 주로 옥손, 과산화수소, 마그네슘 모노퍼옥시프탈레이트 헥사하이드레이트, 3-클로로퍼옥시벤조산 등이 있는데, 그 중 3-클로로퍼옥시벤조산이 가장 바람직하다.

그리하여 생성된 술폰 중간체 (5)을 탈염소화하여 화합물(6)을 생성시킬 수 있으며, 이 때 사용되는 환원제로는 Pd/C, 수소, 하이드라이드 등이 있으나, 그중 Pd/C 가 가장 바람직하다. 그런 다음, 화합물(6)에 Tf₂O를 가하여 트리플루오로메탄술폰화 하여, 중간체 트리플레이트 피리다진(7)을 생성시킬 수 있다.

그리하여 생성된 트리플레이트 피리다진(7)과 아릴 보론산(R¹B(OH)₂)과의 반응은 염기 존재 하에서 이루어지며, 이때 사용되는 용매로는 디클로로메탄, 클로로포름, 테트라하이드로퓨란, 디메틸포름아미드, 벤젠, 톨루엔, 디에틸에테르 등을 사용할 수 있으나, 그 중 톨루엔이 가장 바람직하다. 반응온도는 -10℃ 내지 110℃에서 수행하는 것이 바람직하며, 반응시간은 기질에 따라 10분 내지 48시간이 필요하다.

상기 반응이 완료되면 물과 에틸 아세테이트, 디클로로메탄, 테트라하이드로퓨란, 또는 에테르 등의 유기용매를 이용한 추출을 통해 염들을 제거한 후 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 획득하는 것이 바람직하다.

상기 반응에 사용되는 염기로는 유기염기 또는 무기염기가 있으며, 유기염기로는 트리에틸아민, 트리메틸아민, 트리프로필아민, 피리딘, 또는 이미다졸이 바람직하며, 무기염기로는 나트륨아세테이트, 수산화나트륨, 수소화나트륨, 수산화칼륨, 탄산나트륨, 또는 탄산칼륨이 바람직하고, 이중에서도 탄산칼륨이 가장 바람직하다.

그리하여 생성된 화합물(1a)를 아미드화하여 벤젠술폰아미드 유도체(1b)를 생성시킬 수 있다.

상기 모든 반응이 완결된 후의 생성물은 통상적인 후처리 방법, 예를 들면 크로마토그래피, 재결정화 등의 방법에 의해 분리 및 정제할 수 있다.

본 발명은 치료학적으로 유효한 양의 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 유효성분으로 함유하고 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 해열, 진통, 소염 효과를 갖는 약제학적 조성물을 제공한다.

이러한 약제학적 조성물은 상기의 사이클로옥시게나제-2에 대한 선택적인 억제활성을 갖는 상기 화학식 1의 화합물 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하고 있으므로 부작용을 최소화한 해열, 진통, 소염제로서 사용할 수 있다.

종래의 비스테로이드성 소염제는 병리학적 프로스타글란딘의 합성에 관여하는 시클로옥시게나제-2 뿐만 아니라 기본적인 내인성 프로스타글란딘의 분비에 관여하고 위장의 상태 유지 및 신장의 혈액순환 등 생리학적인 측면에서 중요한 역할을 하는 시클로옥시게나제-1까지 무차별적으로 억제하였기 때문에 여러가지 부작용 을 가지고 있었다.

이에 비하여, 상기 화학식 1의 화합물 및 그들의 약학적으로 허용 가능한 염은 사이클로옥시게나제-2에 선택적인 저해활성을 가지므로 시클로옥시게나제-1까지 무차별적으로 저해하는 종래의 비스테로이드성 해열, 진통, 소염제가 갖는 부작용을 최소화 할 수 있다.

그러므로 화학식 1의 화합물 및/또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염과 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물은 전형적인 비스테로이드성 항염증제의 대체약으로 쓰일 수 있으며, 특히 기존의 비스테로이드성 해열, 진통, 소염제의 부작용이 개선된 대체 약물로서 소화성 궤양, 위염, 부분적인 장염, 궤양성 대장염, 게실염, 위장내 출혈, 저프로트롬빈 혈증 등이 있는 환자들에게 유용하다.

본 발명의 약제학적 조성물은 병리학적 프로스타글란딘 관련 염증질환 모두에 사용될 수 있으며, 특히 고용량의 투여를 요하는 골관절염, 류마티스 관절염에 유용하다.

상기 약제학적 조성물은 상기 활성성분인 화학식 1의 화합물 혹은 그들의 염을 기준으로 성인에게 1 mg/day 내지 1000 mg/day 투여할 수 있으며, 질병의 심각정도에 따라 증감할 수 있다.

본 발명은 또한 치료학적으로 유효한 양의 상기 화학식 1의 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 유효성분으로 함유하고 약제적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 암 치료용 약제적 조성물 및 치매 치료용 약제학적 조성물을 제공한 다.

최근에 비스테로이드성 항염증제들이 대장암(European Journal of Cancer, Vol 37, p2302, 2001), 전립선암(Urology, Vol 58, p127, 2001)이나 치매(Exp.Opin.Invest.Drugs, Vol 9, p671, 2000)등에도 효과가 있다는 것이 발표되었다. 이에 따라 비스테로이드성 항염증제인 상기 화학식 1의 화합물 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물은 대장암이나 치매 치료용 조성물로 사용할 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 상기 활성성분인 화학식 1의 화합물 혹은 그들의 염을 기준으로 성인에게 1mg/day 내지 1000mg/day 투여할 수 있으며, 질병의 심각 정도에 따라 증감할 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 정제, 발포성 정제, 캡슐제, 과립제, 산제, 서방성 정제, 서방성 캡슐제(단독 및 복합 단위 제제), 정맥 내 및 근육 내 주사제의 형태로 및 주입액, 현탁액, 좌제의 형태로 또는 기타 적합한 약제학적 형태로 투여할 수 있다.

서방성 약제학적 형태는 최초 투여 함유량을 갖거나 갖지 않는 완전하거나 부분적인 서방성 형태로 활성 화합물을 함유할 수 있다.

활성 화합물은 함께 존재하거나, 부분적으로 또는 완전히 서로 분리된 제형으로서 존재하여, 개별 투여 또는 시간 단위로 단계화된 투여가 또한 가능할 수 있다.

상기 완전히 분리된 제형이 존재하는 경우, 이들은 서로 협력하며, 이들이 배합된 혼합물내에서 존재할 수 있는 동일한 양 및 상응하는 중량비로 투여 단위내에 각각의 활성 화합물을 함유한다.

지시된 배합물이 함유된 경구 투여가능한 약제학적 조성물이 바람직하다.

상기 배합물을 함유하는 약제학적 제제를 제조하기 위해서, 활성 화합물은 생리학적으로 내성이 있는 부형제 및/또는 희석제 및/또는 보조제와 함께 바람직한 방식으로 지시된 양으로 제형화된다.

부형제 및 보조제의 예는 젤라틴, 자당 또는 락토오스 같은 천연 당, 레시틴, 펙틴, 전분(예를 들면, 옥수수 전분 또는아밀로오스), 사이클로덱스트린 및 사이클로덱스트린 유도체, 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 아세테이트, 아라비아 고무, 알긴산, 틸로오스, 활석, 인산수소칼슘, 셀룰로오스, 메톡시프로필셀룰로오스 같은 셀룰로오스 유도체, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 프탈레이트, 탄소원자수 12 내지 22개의 지방산, 에멀션화제, 오일 및 지방, 특히 또한 포화 지방산의 식물성 글리세롤 에스테르 및 폴리글리세롤 에스테르, 1가 또는 다가 알콜 및 폴리에틸렌 글리콜 같은 폴리글리콜, 탄소 원자 수 1 내지 20개의 1가 지방족 알콜, 또는 글리콜, 글리세롤, 디에틸렌 글리콜, 1,2-프로필렌 글리콜, 소르비톨 같은 다가 알콜을 갖는 탄소 원자 수 2 내지 22개의 지방족 포화 또는 불포화 지방산의 에스테르가 있다.

추가로 적합한 보조제는 또한 붕해를 야기하는 물질(소위 붕해제), 교차 결합된 폴리비닐피롤리돈, 카르복시메틸전분 나트륨, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨, 미세결정성 셀룰로오스가 있다. 공지된 피복 물질을 또한 사용할 수 있다. 아크릴산 및/또는 메타크릴산 및/또는 이의 에스테르의 중합체 및 공중합체, 제인(zein), 에틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스 석시네이트, 셸락 등이 있다.

피복 물질로서 적합한 가소제는 시트르산 에스테르 및 타르타르산 에스테르, 글리세롤 및 글리세롤 에스테르, 다양한 쇄길이의 폴리에틸렌 글리콜이 있을 수 있다. 물 또는 생리학적으로 허용되는 유기 용매, 예를 들면, 알콜 및 지방 알콜이용액 또는 현탁액의 제조에 적합하다.

액체 제형에 있어서, 솔베이트 칼륨, 메틸 4-하이드록시벤조에이트 또는 프로필 4-하이드록시벤조에이트 같은 보존제, 아스코르브산 같은 항산화제 및 페퍼민트 오일 같은 방향 강화제를 사용할 필요가 있을 수 있다.

제제의 제조에 있어서, 폴리비닐피롤리돈 및 폴리솔베이트 80 같은 공지되고 통상적인 용해제, 또는 에멀션화제를 사용할수 있다.

적합한 부형제 및 보조제의 추가적인 예는 문헌을 참조할 수 있다(Dr. H.P. Fiedler "Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie,Kosmetik und angrenzende Gebiete" [Encyclopaedia of auxiliaries for pharmacy, cosmetics and related fields].

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되는 것은 아니다.

참고예 1

4-클로로-5-메톡시-2H-피리다진-3-온

4,5-디클로로-2H-피리다진-3-온 1.65 g을 5:1의 메탄올/물 혼합용매 15 ml에 녹이고, 여기에 탄산칼륨 5.52 g을 넣고, 24시간 동안 교반, 환류한 후, 상온으로 냉각하고 염산을 천천히 반응용액에 적가하여 pH 5로 조정하였다. 생성되는 흰색 고체를 감압여과하고, 0 ℃의 디에틸에테르로 세척한 다음 다시 노르말헥산으로 세척하고 건조시켜 4-클로로-5-메톡시-2H-피리다진-3-온 1.4 g을 얻었다(수율 : 87%).

¹H-NMR(400MHz, DMSO) δ 13.36(s, 1H), 8.23(s, 1H), 4.09(s, 3H)

참고예 2

4-클로로-5-메톡시-2-(4-메틸티오페닐)-2H-피리다진-3-온

상기 참고예 1에서 제조된 4-클로로-5-메톡시-2H-피리다진-3-온 1.6 g을 디클로로메탄 20 ml에 녹이고, 여기에 4-메틸티오 페닐보론산 3.36 g, 카파아세테이 트 2.72 g, 및 피리딘 1.6 ml를 넣었다. 여기에 분자체(molecular sieve)를 소량 가하고 드라잉 튜브를 설치한 후 반응액을 상온에서 48 시간동안 교반하였다. 반응이 종결되면 용매를 감압 증류로 제거한 후 프래시 컬럼 크로마토그래피(전개용매: 노르말헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 4-클로로-5-메톡시-2-(4-메틸티오페닐)-2H-피리다진-3-온 1.84 g을 얻었다(수율 : 65%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 7.96(s, 1H), 7.52(d, 2H, J=9.0Hz), 7.33(d, 2H, J=9.0Hz), 4.13(s, 3H), 2.52(s, 3H)

참고예 3

5-클로로-6-히드록시-1-(4-메틸티오페닐)-1H-피리다진-4-온

상기 참고예 2에서 제조된 4-클로로-5-메톡시-2-(4-메틸티오페닐)-2H-피리다진-3-온 2.83 g을 몰폴린 13 ml에 녹이고, 100℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응종결 후 감압 하에서 몰폴린을 제거하였다. 반응물을 1 N 수산화나트륨 수용액으로 pH= 13으로 맞추고, 디클로로메탄으로 세척하여 불순물를 제거하고, 물층을 1 N 염산으로 pH 3으로 조정하였다. 에틸아세테이트로 추출한 후 유기층을 무수 마그네슘 설페이트로 건조한 후 감압농축하여 5-클로로-6-히드록시-1-(4-메틸티오페 닐)-1H-피리다진-4-온 1.96 g을 얻었다(수율 : 73%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 7.89(s, 1H), 7.51(d, 2H, J=9.0Hz), 7.34(d, 2H, J=9.0Hz), 2.53(s, 3H)

참고예 4

5-클로로-6-히드록시-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온

상기 참고예 3에서 제조된 5-클로로-6-히드록시-1-(4-메틸티오페닐)-1H-피리다진-4-온 2.69 mg을 디클로로메탄 70 ml에 녹이고, 여기에 3-클로로퍼벤조산 6.90 g을 질소 대기 하에서 넣은 후 상온에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후 반응액을 1 N 수산화나트륨 수용액으로 3회 세척한 다음 무수 마그네슘설페이트로 수분을 완전히 제거한 후, 감압 하에서 용매를 제거하고, 프래시 컬럼크로마토그래피(전개용매: 디클로로메탄/메탄올=30/1)로 정제하여, 흰색 고체의 5-클로로-6-히드록시-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온 2.32 g을 얻었다(수율 : 77%).

¹H-NMR(300MHz, MeOD) δ 8.01(d, 2H, J=9.0Hz), 7.83(d, 2H, J=9.0Hz), 7.63(s, 1H), 3.15(s, 3H).

참고예 5

6-히드록시-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온

상기 참고예 4에서 제조된 5-클로로-6-히드록시-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온 3.01 g을 에탄올 30 ml에 녹인 후 10% Pd/C 0.53 g과 TEA 2.8 ml를 넣고 상온에서 18 시간 동안 고압(10psig) 수소화 반응을 진행하였다. 반응 종료 후 반응액을 셀라이트 여과하여 Pd/C를 제거하고, 감압 증류하여 용매를 제거하였다. 1 N 염산을 과량 넣고 이를 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트로 건조 후 감압 증류하여 6-히드록시-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온 2.31 g을 얻었다(수율 : 87%).

¹H-NMR(300MHz, MeOD) δ 8.06(d, 2H, J=9.0Hz), 7.88-7.85(m, 3H), 7.48(s, 1H), 6.17(s, 1H), 3.16(s, 3H).

참고예 6

트리플루오로메탄술폰산 5-옥소-2-(4-메탄술포닐페닐)-2,5-디히드로-피리다진-3-일 에테르

상기 참고예 5에서 제조된 6-히드록시-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온 2.66 g을 질소 대기 하에서 디클로로메탄 30 ml에 녹이고 0 ℃로 냉각시켰다. 질소 대기 하에서 4-디메틸아미노피리딘 1.83 g과 트리플릭안하이드라이드 3.52 g을 천천히 적가한 후, 상온으로 반응온도를 올려 1시간동안 교반하였다. 유기층을 1 N 수산화나트륨 수용액과 1 N 염산으로 세척하고, 유기층을 무수 마그네슘 설페이트로 건조하여 감압농축한 후 트리플루오로메탄술폰산 5-옥소-2-(4-메탄술포닐페닐)-2,5-디히드로-피리다진-3-일 에테르 3.58 g을 얻었다(수득률 : 90%).

MS (EI, M⁺) 398

실시예 1

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-페닐-1H-피리다진-4-온

상기 참고예 6에서 제조된 트리플루오로메탄술폰산 5-옥소-2-(4-메탄술포닐페닐)-2,5-디하이드로-피리다진-3-일 에테르 400 mg을 질소 대기 하에서 톨루엔 5 ml에 녹이고, 페닐 보론산 183 mg, 테트라키스 트리페닐포스핀 팔라듐 35 mg과 탄산칼륨 207 mg을 넣고, 2시간 동안 교반, 환류하였다. 반응종결 후 반응용액을 에틸아세테이트로 희석하고 포화 중조, 10% 시트르산 수용액, 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트로 건조한 후 감압농축 하고, 프래시 컬럼크로마토그래피 (전개용매: 노르말헥산/에틸아세테이트=1/1)로 정제하여 1-(4-메탄술포닐페닐)-6-페닐-1H-피리다진-4-온 179 mg을 얻었다(수율 : 55%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 8.33(s, 1H), 8.13(d, 2H, J=9.0Hz), 8.05(d, 2H, J=9.0Hz), 7.10-7.12(m, 2H), 7.61-7.62(m, 3H), 7.26(s, 1H), 3.15(s, 3H)

실시예 2

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-p-톨릴-1H-피리다진-4-온

상기 실시예 1에서 페닐보론산 대신에 p-톨릴보론산 136 mg을 사용하는 점을 제외하고는 실시예 1에서와 동일한 방법으로 반응시켜 고체상의 표제화합물 1-(4-메탄술포닐페닐)-6-p-톨릴-1H-피리다진-4-온 180 mg을 수득하였다(수율 : 53%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 8.31(s, 1H), 8.13(d, 2H, J=9.0Hz), 8.05(d, 2H, J=9.0Hz), 7.61(d, 2H, J=9.0Hz), 7.46(d, 2H, J=9.0Hz), 7.23(s, 1H), 3.15(s, 3H), 2.50(s, 3H)

실시예 3

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-(4-메톡시페닐)-1H-피리다진-4-온

상기 실시예 1에서 페닐보론산 대신에 4-메톡시페닐보론산 152 mg을 사용하는 점을 제외하고는 실시예 1에서와 동일한 방법으로 반응시켜 고체상의 표제화합물 1-(4-메탄술포닐페닐)-6-(4-메톡시페닐)-1H-피리다진-4-온 160 mg을 수득하였다(수율 : 45%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 8.31(s, 1H), 8.11(d, 2H, J=9.0Hz), 8.06(d, 2H, J=9.0Hz), 7.68(d, 2H, J=9.0Hz), 7.44(d, 2H, J=9.0Hz), 7.12(s,1H), 3.95(s,3H), 3.15(s,3H)

실시예 4

6-(4-플루오로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온

상기 실시예 1에서 페닐보론산 대신에 4-플루오로페닐보론산 140 mg을 사용하는 점을 제외하고는 실시예 1에서와 동일한 방법으로 반응시켜 고체상의 표제화합물 6-(4-플루오로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온 172 mg을 수득하였다(수율 : 50%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 8.28(s, 1H), 8.13(d, 2H, J=9.0Hz), 8.05(d, 2H, J=9.0Hz), 7.60-7.62(m, 2H), 7.30-7.32(m, 2H), 7.12(s,1H), 3.15(s,3H)

실시예 5

6-(4-클로로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온

상기 실시예 1에서 페닐보론산 대신에 4-클로로페닐보론산 156 mg을 사용하는 점을 제외하고는 실시예 1에서와 동일한 방법으로 반응시켜 고체상의 표제화합물 6-(4-클로로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온 173 mg을 수득하였다(수율 : 48%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 8.25(s, 1H), 8.06(d, 2H, J=9.0Hz), 7.96(d, 2H, J=9.0Hz), 7.61(d, 2H, J=9.0Hz), 7.52(d, 2H, J=9.0Hz), 7.18(s, 1H), 3.10(s, 3H)

실시예 6

6-(4-브로모페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온

상기 실시예 1에서 페닐보론산 대신에 4-브로모페닐보론산 201 mg을 사용하는 점을 제외하고는 실시예 1에서와 동일한 방법으로 반응시켜 고체상의 표제화합물 6-(4-브로모페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온 186 mg을 수득하였다(수율 : 46%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 8.11(s, 1H), 8.07(d, 2H, J=9.0Hz), 8.05(d, 2H, J=9.0Hz), 7.60(d, 2H, J=9.0Hz), 7.52(d, 2H, J=9.0Hz), 7.19(s, 1H), 3.10(s, 3H)

실시예 7

4-(4-옥소-6-페닐-4H-피리다진-1-일)-벤젠술폰아미드

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-페닐-1H-피리다진-4-온 326 mg(1.0 mmol)을 질소대기 하에서 테트라하이드로퓨란 15 ml에 녹이고 반응액을 -78℃로 냉각시켰다. 2.0 M의 리튬 디이소프로필아민 테트라하이드로퓨란 용액 1.5 ml를 천천히 적가한 후 반응온도를 0℃로 올리고 요오드화메틸 트리메틸실란 0.22 ml를 가했다. 반응온도를 천천히 상온으로 올려 24시간 동안 교반하였다. 반응액을 에틸아세테이트로 희석시킨 후 1 노르말 염산으로 세척하였다. 무수 마그네슘 설페이트로 건조하고 감압 농축한 다음 프래시 컬럼크로마토그래피(전개용매: 노르말헥산/에틸아세테이트= 1/1)로 정제하고 진공건조 하였다. 얻어진 중간체를 테트라하이드로퓨란 15 ml에 녹이고 테트라부틸암모늄플루오라이드 1.0 몰 테트라하이드로퓨란 용액을 3 ml 적가한 후 1 시간 동안 가열환류 하였다. 반응온도를 상온으로 내리고 아세트산나트륨 410 mg을 물 3 ml에 녹인 용액과 히드록시아민-O-술폰산 555 mg을 넣은 다음 1 시간동안 교반하였다. 그 반응액에 물을 넣고 에틸아세테이트로 추출한 후 유기층을 중조, 물, 포화 소금물로 차례로 세척하였다. 무수 마그네슘 설페이트로 건조한 후 감압농축한 다음 프래시 컬럼크로마토그래피(전개용매: 에틸아세테이트/메탄 올=1/1)으로 정제하여 흰색 고체의 4-(4-옥소-6-페닐-4H-피리다진-1-일)-벤젠술폰아미드 134 mg을 얻었다(수율 : 41%).

¹H-NMR(300MHz, CDCl₃) δ 8.33(s, 1H), 8.13(d, 2H, J=9.0Hz), 8.05(d, 2H, J=9.0Hz), 7.10-7.12(m, 2H), 7.61-7.62(m, 3H), 7.26(s, 1H), 7.24(s, 2H, br)

실험예

사이클로옥시게나제-2에 대한 선택적 저해활성 측정

1) 실험 방법

본 발명에 따른 화합물의 사이클로옥시게나제-2 효소에 대한 선택적 저해활성을 약리학적으로 검증하기 위하여, 사이클로옥시게나제-1 및 사이클로옥시게나제-2에 대한 효소 저해작용을 각각 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

가. U-937을 이용한 사이클로옥시게나제-1의 억제 효과 검색

배양된 U-937(Human lymphoma cell)(입수처 : 한국세포주은행, 기탁번호 : 21593)을 원심분리하여 모은 후 1xHBSS(Hanks balanced salt solution)를 이용하여 1x10⁶ cells/ml 농도로 희석하여 12-웰 플레이트의 각 웰 당 1 ml씩 분주하였다. 여기에 DMSO에 녹여 1μM로 희석한 검색시료 용액과 DMSO를 5μl씩 넣고 섞은 후, CO₂ 배양기에서 37℃로 15분간 배양하였다. 기질로 사용되는 아라키돈산를 10 mM 농도로 에탄올에 녹여서 만든 스탁용액을 1xHBSS로 10배 희석하여 1 mM 용액을 준비하 였다. 물질을 처리한 각 웰에 1 mM 아라키돈산 용액을 10μl씩 가하여 섞은 후 CO₂ 배양기에서 37℃로 30분간 배양하였다. 각 웰의 세포용액을 원심분리 시험관에 모은 후 4℃, 10,000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 원심분리로 모아진 세포와 분리된 상층액 중에 존재하는 PGE2의 농도를 모노클로날 키트(Cayman Chemicals사)를 이용하여 정량하고, 실험물질 처리군의 농도를 DMSO 군의 농도와 비교하여 각 물질의 PGE2 생성 억제율을 구함으로서 사이클로옥시게나제-1 효소에 대한 물질의 억제효과를 구하였다.

나. Raw 264.7 세포주를 이용한 사이클로옥시게나제-2 억제 효과 검색

Raw 264.7 세포(입수처 : 한국세포주은행, 기탁번호 : 40071)를 12 웰 플레이트의 각 웰 당 2x10⁶ 개씩 접종한 후 아스피린 250μM을 처치하여, 37℃에서 2시간 배양하였다. 새로운 배지로 갈아준 후, 각각의 검색시료(10nM 농도)를 처리하고 30분 배양하였다. 여기에 각 웰 당 인터페론 γ(100 유닛/ml)와 리포폴리사카라이드(LPS, 100ng/ml)를 처치한 후 18 시간 배양하였다. 그 다음 배지를 다른 시험관에 옮겨 담은 후, EIA 키트(Cayman Chemicals)를 이용하여 PGE2 정량을 하였다.

2) 실험 결과

실험결과를 하기 표 1에 나타내었다.

%억제 = (시험물질 비처리군의 PGE2 농도 - 시험물질 처리군의 PGE2 농도) / (시험물질 비처리군의 PGE2 농도) X 100%

사이클로옥시게나제(COX) 저해 효과(단위: % inhibition)

화합물	COX-1(1μM)	COX-2(10 nM)
기준물질(Valdecoxib)	28.8	5.47
실시예 1	29.6	18.6
실시예 2	32.3	21.3
실시예 3	27.8	7.63
실시예 4	29.6	13.7
실시예 5	18.2	26.3
실시예 6	24.3	5.43
실시예 7	16.3	24.7

3) 평가

상기 사이클로옥시게나제-1 및 사이클로옥시게나제-2의 저해에 관한 in vitro 실험결과를 고찰해보면 다음과 같다.

실시예 1 내지 7의 사이클로옥시게나제-1의 억제%에 대한 사이클로옥시게나제-2의 억제%의 비율이 기준물질(valdecoxib) 보다 거의 동일하거나 현저히 우수한 것으로 나타났다. 이는 사이클로옥시게나제-1에 대한 사이클로옥시게나제-2의 선택적 억제효과가 기준물질과 거의 동일하거나 현저히 우수함을 나타낸다. 특히 실시예 5의 6-(4-클로로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온 경우에 있어서 사이클로옥시게나제-2의 억제효과가 기준물질(valdecoxib)보다 월등하게 우수한 동시에 사이클로옥시게나제-1의 억제효과는 현저히 떨어져서 선택성이 뛰어난 것으로 입증되었다.

또한, 사이클로옥시게나제-2에 대하여 실시예 6을 제외하고는 모두 기준물질보다 현저히 더 높은 저해 효과를 나타내었다. 이러한 결과는 선택성의 향상으로 인해 기준물질보다 부작용이 개선되었을 뿐만 아니라 해열진통소염 효과 면에서도 더 우수하다는 것을 나타낸다.

본 발명에 따르면 종래의 비스테로이드성 소염제의 부작용이 개선되어 특히 소화성 궤양, 위염, 부분적인 장염, 궤양성 대장염, 게실염, 위장내 출혈 또는 저트롬빈혈증 등이 있는 환자들에게 유용하게 사용할 수 있으며 해열,진통,소염 효과를 갖는 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염, 이들의 제조방법 그리고 이들을 유효성분으로 함유하는 약제학적 조성물을 제공할 수 있다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염:

[화학식1]

상기 화학식 1에서,

R¹은 페닐; C₁-C₃ 알킬, C₁-C₃ 알콕시, 또는 할로겐으로 치환된 페닐이고,

R²는 메틸 또는 아미노이다.
삭제
제 1 항에 있어서,

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-페닐-1H-피리다진-4-온;

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-p-톨릴-1H-피리다진-4-온;

1-(4-메탄술포닐페닐)-6-(4-메톡시페닐)-1H-피리다진-4-온;

6-(4-플루오로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온;

6-(4-클로로페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온;

6-(4-브로모페닐)-1-(4-메탄술포닐페닐)-1H-피리다진-4-온; 및

4-(4-옥소-6-페닐-4H-피리다진-1-일)-벤젠설폰아미드로 구성된 군으로부터 선택된 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염.
하기 화학식 7로 표시되는 피리다진 유도체.

[화학식 7]
치료학적으로 유효한 양의 제1항에 따른 피리다진-4-온 유도체 또는 그의 무독성 염을 유효성분으로 함유하고 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 해열, 진통, 소염 효과를 갖는 약제학적 조성물.
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