KR100420451B1 - 셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법 - Google Patents

셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR100420451B1
KR100420451B1 KR10-2001-0074202A KR20010074202A KR100420451B1 KR 100420451 B1 KR100420451 B1 KR 100420451B1 KR 20010074202 A KR20010074202 A KR 20010074202A KR 100420451 B1 KR100420451 B1 KR 100420451B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ginseng
ginsenoside compound
diol
reaction
lactase
Prior art date
Application number
KR10-2001-0074202A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20030043168A (ko
Inventor
고성룡
스즈끼유키오
최강주
조병구
양재원
박종대
김영회
박은경
Original Assignee
주식회사 케이티앤지
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 케이티앤지 filed Critical 주식회사 케이티앤지
Priority to KR10-2001-0074202A priority Critical patent/KR100420451B1/ko
Publication of KR20030043168A publication Critical patent/KR20030043168A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100420451B1 publication Critical patent/KR100420451B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00—Preparation of steroids
    • C12P33/20—Preparation of steroids containing heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01108—Lactase (3.2.1.108)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 아스퍼질러스 나이저에서 유래한 셀룰라제, 또는 락타제 조성물 Y-AO를 이용한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법은, 인삼에 다량 함유되어 있고 분리하기가 용이한 다이올계 사포닌을 용매에 용해시키고, 아스퍼질러스 나이저에서 분리한 셀룰라제 또는 락타제 조성물 Y-AO와 반응시켜 진세노사이드 컴파운드 케이를 생성하고, 이온교환수지 또는 수포화 부탄올로 용출 후 농축한 다음, 컬럼크로마토그래피로 분리하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 제조하는 방법이다.
본 발명에 의해, 인삼 사포닌의 장내 대사산물인 진세노사이드 컴파운드 케이를 단시간에 고수율로 제조하는 방법이 제공된다.

Description

셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법{THE MANUFACTURING METHOD FOR GINSENOSIDE COMPOUND K WITH CELLULASE OR LACTASE COMPOSITION Y-AO}
본 발명은 셀룰라제 또는 락타제 조성물 Y-AO를 이용한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법에 관한 것이다.
진세노사이드 컴파운드 케이는 인삼사포닌의 장내세균에 의한 대사산물이다.
진세노사이드 컴파운드 케이(20(S)-프로토파낙사다이올-20-0-베타-디-글루코피라노사이드)는 아래 화학식 1로 표기되는 화합물이며, 면역 증강작용, 종양 혈관신생 억제작용, 암세포 침윤 억제작용, 암세포증식 억제작용 등의 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
한편, 셀룰라제(Cellulase)는 셀룰로스를 가수분해하는 효소(EC 3.2.1.4)로서, 고등식물의 싹, 푸른곰팡이, 누룩곰팡이, 다양한 토양세균에서 얻을 수 있다.
또한, 셀룰라제는 무척추동물인 달팽이의 위액과 배좀벌레의 소화맹낭의 소화액 등에 들어있다.
락타제(Lactase)는 베타-갈락토시다제(β-galactosidase)라고도 하며, 젖당을 비롯한 β-D-갈락토시드의 글리코시드 결합을 가수분해하는 효소(EC 3.2.1.23)로서, 대장균의 락타제는 분자량 약 54 만의 4 량체로 되어있다.
종래, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법으로서, 진세노사이드 Rb2500 ㎎ 에 효소 나린지나제 200 ㎎ 을 가하고 반응시켜 진세노사이드 컴파운드 케이 42 ㎎ 을 제조한 바 있고(Chem. Pharm. Bull. 30(7), 2393, Koizumi 등, 1982년), 진세노사이드 Rb2300 ㎎ 을 쥐에 경구투여 후 쥐 대장에서 Rb2의 분해산물로 생성되는 진세노사이드 컴파운드 케이 15 ㎎ 을 분리한 바 있다(Chem. Pharm. Bull. 38,2859, Karikura 등, 1990년).
또한, 국내의 예로 다이올계 사포닌 분획 5 g 을 장내세균과 반응시킨 후 대사산물로부터 컴파운드 케이 320 ㎎ 을 분리한바 있다.(생약학회지 26, 360, 성종환 등, 1995년)
그러나, 이러한 방법들은, 생성수율이 극히 낮을 뿐만 아니라 여러가지 2차 대사산물이 생성되기 때문에 진세노 사이드 컴파운드 케이를 효율 좋게 고순도로 제조하는 방법으로서는 적합하지 않다.
한국특허출원 10-1991-016456(신물질 20(R)-진세노사이드 Rh2), 한국특허출원 10-1996-046168(20(에스)-진세노사이드 알에이치1 및 20(에스)-프로토파낙사트라이올의 제조방법)에서는, 종래 홍삼에만 함유되어 있는 미량 사포닌인 진세노사이드 Rh1이나 Rh2를 제조하는 방법으로서 산 가수분해법이 개발되어 있으나, 산 가수분해법은 진세노사이드의 아글리콘 C20위치의 배당체 결합을 분해하기 때문에 프로토파낙사다이올의 C20위치에 글루코스가 1분자 결합된 형태인 진세노사이드 컴파운드 케이를 제조하기는 어렵다.
한편, 본 발명의 출원인이 2000.07.26 선출원하고 현재 공개되지 않은, 한국특허출원 10-2000-0043170(효소적 방법에 의한 진세노사이드 컴파운드 K의 제조방법)은, 인삼의 다이올계 사포닌 분획을 페니실리움 속 미생물에서 분리한 효소 셀룰라제 또는 아스퍼질러스속에서 분리한 효소 베타-갈락토시다제와 반응시켜 진세노사이드 컴파운드 케이를 제조하는 방법이나, 수율이 75 %로 낮은 단점이 있다.
본 발명의 목적은 인삼에 다량 함유되어 있는 다이올계 사포닌인 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd 및 이들의 혼합물, 또는 다이올계 사포닌 함량이 높은 인삼 추출물을, 효소를 사용하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 단시간에 고수율로 제조하는 방법을 제공하는데 있다.
도 1은 본 발명의 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조과정도.
본 발명은 아스퍼질러스 나이저에서 유래한 셀룰라제, 또는 락타제 조성물 Y-AO를 이용한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법에 관한 것이다.
본 출원의 발명자들은 진세노사이드 컴파운드 케이는 화학식 1로 나타낸 바와 같이, 프로토파낙사다이올 사포게닌의 C20위치에 포도당 한 분자가 결합된 성분으로 진세노사이드 Rd 성분의 C20위치에 결합된 포도당 한 분자는 그대로 두고 C3위치에 결합된 포도당 두 분자를 절단할 경우 진세노사이드 컴파운드 케이로 전환된다는 점에 착안하여 연구 실험을 거듭하였다.
인삼 중에 함량이 높은 다이올계 사포닌을 이용 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조수율을 올리는 방법을 개발할 목적으로 다양한 미생물에서 분리한 효소를 사용하여 다각적인 시험을 실시한 결과, 아스퍼질러스 나이저에서 유래한 효소 셀룰라제, 또는 락타제 조성물 Y-AO를 진세노사이드 Rb1,Rb2, Rc, Rd 또는 이들의 혼합물과 반응시켰을 때, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조 수율이 80 % 이상으로 기존의 제조방법에 비하여 고수율로 생성하는 것을 발견하고, 수 차례의 실험을 거쳐 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명에 사용되는 락타제 조성물 Y-AO는, 아스퍼질러스 오리제에서 분리한 분말상의 락타제 18 ~ 22 중량 % 에, 덱스트린(Dextrin)분말 78 ~82 중량 % 를 혼합하여 제조한 것이다.
본 발명은, 아스퍼질러스 나이저에서 유래한 셀룰라제, 또는 락타제 조성물 Y-AO를 사용하여 컴파운드 케이를 생성한 다음, 생성물을 분리하는 3 개의 방법 중 어느 하나를 채택하고 있다.
본 발명의 방법 1의 구성은, 인삼에서 추출한 다이올계 사포닌 또는 다이올계 사포닌의 혼합물을, 수성용매 또는 수성용매와 유기용매의 혼합액에 용해시키고, 아스퍼질러스 나이저에서 유래한 셀룰라제, 또는 락타제 조성물 Y-AO를 첨가하여, 가온 상태의 수욕조 상에서 교반하면서 반응시키는 단계와, 반응액을 박층크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여 기질이 완전히 소실되면 열수 중에서 가열하여 반응을 종료시키는 단계와, 반응생성물은 수포화 부탄올과 혼합하여 진세노사이드 컴파운드 케이가 용출된 상층부 부탄올층을 수득한 후 농축시킨 것을 컬럼크로마토그래피로 분리하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 수득하는 단계로 구성된다.
본 발명의 방법 2의 구성은, 인삼에서 추출한 다이올계 사포닌 또는 다이올계 사포닌의 혼합물을, 수성용매 또는 수성용매와 유기용매의 혼합액에 용해시키고, 여기에 아스퍼질러스 나이저에서 유래한 셀룰라제 또는 락타제 조성물 Y-AO 를 첨가하여 가온상태의 수욕조 상에서 교반하면서 반응시키는 단계와, 반응액을 박층크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여 기질이 완전히 소실되면 열수 중에서 가열하여 반응을 종료시키는 단계와, 전기의 반응액을 이온교환수지를 충진한 컬럼에 흡착시킨 후 당류와 효소는 증류수로 세척하여 제거하는 단계와, 반응생성물은 에탄올로 용출 후 농축하고, 컬럼크로마토그래피하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 수득하는 단계로 구성된다.
본 발명의 방법 3의 구성은, 인삼에서 추출한 다이올계 사포닌 또는 다이올계 사포닌의 혼합물을 수성용매 또는 수성용매와 유기용매의 혼합액에 용해시키고, 아스퍼질러스 나이저에서 유래한 셀룰라제 또는 락타제 조성물 Y-AO 를 첨가하여 가온상태의 수욕조 상에서 교반하면서 반응시키는 단계와, 반응액을 박층크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여 기질이 완전히 소실되면 열수 중에서 가열하여 반응을 종료시키는 단계와, 반응생성물은 수포화 부탄올과 혼합하여 진세노사이드 컴파운드 케이가 용출된 상층부 부탄올층을 수득한 후 농축시킨 것을, 분말 상태가 될 때까지 재농축하여 진세노사이드 컴파운드 케이 고함유물을 수득하는 단계로 구성된다.
본 발명에 의한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법을 도 1을 참조하여 자세히 설명하면 다음과 같다.
< 방법 1의 공정 >
제 1 공정 다이올계 사포닌 용해
인삼의 다이올계 사포닌인 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd 및 이들의 혼합물을 또는 이들의 함유비율이 높은 인삼 추출물을 수성용매 또는 수성용매와 유기용매의 혼합액에 용해시킨다.
여기에 사용되는 인삼의 다이올계 사포닌은, 고려인삼, 삼칠인삼, 미국인삼, 죽절인삼, 히말리야인삼 또는 베트남인삼에서 추출 분리하여 얻은 것을 사용한다.
수성용매로는 물, 초산, 인산, 시트레이드, 시트레이트-인산의 완충용액 중에서 선택된 것으로, pH 3 ∼ 7, 특히 pH 4 ∼ 6 범위의 완충용액이 바람직하다.
전술한 수성용매는 단독으로 사용할 수도 있으나, 다른 수성용매 및 유기용매와 혼합하여 사용할 수도 있는데, 혼합하여 사용하는 유기용매는 물과 혼합되면서, 효소의 활성을 저하시키지 않는 것이어야 한다.
바람직한 유기용매로는 아세톤, 아세토니트릴, 디옥산, 디메틸 설폭사이드, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올 등이 있으며, 유기용매의 사용량은 사용한 기질을 기준으로 2 ∼ 30 % 농도가 되도록 한다.
제 2 공정 효소 반응
다이올계 사포닌 용해액에 미생물 아스퍼질러스 나이저에서 유래한 셀룰라제 또는 락타제 조성물 Y-AO 를 가하여, 20 ∼ 50 ℃ 수욕조 상에서 1 ∼ 72 시간 동안 교반하여, 효소 반응을 시킨다.
반응온도는 효소의 불활성화가 일어나지 않는 온도조건이어야 하며, 수성용매만을 사용하는 경우는 50 ℃ 이하가 바람직하고, 수성용매와 유기용매의 혼합액을 사용하는 경우는 40 ℃ 이하가 바람직하다.
반응시간 역시 효소의 활성이 유지되는 기간이라면 특별히 제한을 받지 않으나 1 ~ 72 시간, 바람직하게는 24 ∼ 48 시간이 적정하다.
제 3 공정 효소 반응 종료
박층크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여 기질이 완전히 소실되면, 비등 수욕조에서 10분간 가열하여 효소를 불활성화 시켜 진세노사이드 컴파운드 케이가 주로 함유된 반응액을 수득한다.
제 4 공정 수포화 부탄올과 혼합
제 3 공정에서 수득한 반응액을 수포화 부탄올과 혼합하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 용출시킨다.
제 5 공정 부탄올층 수득
상부의 부탄올층과 하부의 물층으로 나누어져 있는 용액에서, 당류와 효소가 있는 물층은 버리고, 진세노사이드 컴파운드 케이가 용출되어 있는 부탄올층을 수득한다.
제 6 공정 농축
부탄올층을 농축시켜 농축액을 얻는다.
제7 공정 컬럼크로마토그래피
농축액을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 수득한다.
< 방법 2의 공정 >
방법 1의 제 1 공정 내지 제 3 공정을 동일하게 수행한다.
제 4 공정 당류와 효소 제거
반응액을 이온교환수지를 충진한 컬럼에 흡착시킨 후, 당류와 효소는 증류수로 세척하여 제거한다.
제 5 공정 에탄올에 용출
당류와 효소를 제거한 반응액을 에탄올에 용출한다.
이하 방법 1의 제 6 공정 농축과 제 7 공정 컬럼크로마토그래피 공정을 수행하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 수득한다.
< 방법 3의 공정>
방법 1의 제 1 공정 내지 제 6 공정을 동일하게 수행한다.
제 7 공정 재농축
제 6 공정에서 수득한 농축액을 분말 상태가 될 때까지 재농축하여 진세노사이드 컴파운드 케이 고함유물을 수득한다.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 자세히 설명하나, 이들이 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
<실시예 1> 진세노사이드 Rc를 이용한 본 발명의 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조(방법1)
진세노사이드 Rc 1 g 을 인산완충용액(pH 5.0)에 용해시켜 전체를 50 ㎖ 로 정용한 다음, 여기에 아스퍼질러스 오리제에서 분리한 분말상의 락타제 18 중량 % 에, 덱스트린(Dextrin)분말 82 중량 % 를 혼합한 락타제 조성물 Y-AO 3 g 을 첨가하여 37 ℃ 수욕조 상에서 교반하면서 72 시간 반응시켰다.
반응액은 열수 중에서 10 분간 가열하여 반응을 종료시켰다.
반응액에 수포화 부탄올 50 ㎖를 혼합하여 추출하였다.
상층부의 부탄올층을 수득한 다음 농축하여 농축물을 710 ㎎ 을 얻었다.
농축물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피(클로로포름 : 메탄올 : 물 = 7 : 3 : 1)와 역상 C18컬럼 크로마토그래피(85 % 메탄올)로 분리 정제하여 진세노사이드 컴파운드 케이 440 ㎎ 을 수득하였다.
<실시예 2> 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd의 혼합물을 이용한 본 발명의 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조(방법1)
진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd의 동량 혼합물 1 g 을 시트레이트-인산 완충용액(pH 5.0)에 용해시켜 전체를 50 ㎖ 로 정용한 다음, 아스퍼질러스 오리제에서 분리한 분말상의 락타제 18 중량 % 에, 덱스트린(Dextrin)분말 82 중량 % 를 혼합한 락타제 조성물 Y-AO 4 g 을 첨가하여 50 ℃ 수욕조 상에서 교반하면서 72 시간 반응시켰다.
반응액은 열수 중에서 10 분간 가열하여 반응을 종료시켰다.
반응액에 수포화 부탄올 50 ㎖를 혼합하여 추출하였다.
상층부의 부탄올층을 수득한 다음 농축하였다.
농축액은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름 : 메탄올 = 10 : 1)로 분리 후 역상 C18컬럼 크로마토그래피(85 % 메탄올)로 정제하여 진세노사이드 컴파운드 케이 463 mg 을 수득하였다.
<실시예 3> 다이올계 사포닌이 주로 함유된 인삼근을 이용한 본 발명의 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조(방법1)
다이올계 사포닌이 주로 함유된 인삼근에서 분리한 조사포닌 분획 1 g 을 초산 완충용액(pH 4.8)에 용해시켜 전체를 50 ㎖ 로 정용한 다음, 여기에 아스퍼질러스 나이저에서 분리한 효소 셀룰라제 4 g 을 첨가하여 37 ℃ 의 수욕조 상에서 교반하면서 48 시간 반응시켰다.
반응액은 열수 중에서 가열하여 반응을 종료시켰다.
반응액에 수포화 부탄올 50 ㎖를 혼합하여 추출하였다.
상층부의 부탄올층을 수득한 다음 농축하였다.
농축액은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름 : 메탄올 = 9 : 1)에 의해 진세노사이드 컴파운드 케이 335 mg 을 얻었다.
<실시예 4> 진세노사이드 Rb1을 이용한 본 발명의 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조(방법2)
진세노사이드 Rb11 g 을 0.1 M 초산완충용액(pH 4.5)에 용해시켜 전체를 50 ㎖ 로 정용하였다.
여기에 아스퍼질러스 나이저에서 분리한 효소 셀룰라제 3 g 을 첨가하여 37 ℃ 수욕조 상에서 교반하면서 48 시간 반응시켰다.
박층크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여 기질이 완전히 소실되면 열수중에서 10분간 가열하여 반응을 종료시켰다.
다이아이온 HP-20 수지를 충진한 컬럼에 흡착시킨 후 당류와 효소는 증류수로 세척하여 제거하고 반응생성물은 에탄올로 용출 후 농축하였다.
농축물은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름 : 메탄올 = 9 : 1)로 분리하여 진세노사이드 컴파운드 케이 428 ㎎ 을 수득하였다.
<실시예 5> 진세노사이드 Rd를 이용한 본 발명의 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조(방법2)
진세노사이드 Rd 1 g 을 시트레이트 완충용액(pH 4.5)에 용해시켜 전체를 50 ㎖ 로 정용한 다음, 아스퍼질러스 나이저에서 분리한 효소 셀룰라제 3 g 을 첨가하여 45 ℃ 수욕조 상에서 교반하면서 72 시간 반응시켰다.
반응액은 열수 중에서 10 분간 가열하여 반응을 종료시킨 다음 다이아이온HP-20 수지를 충진한 컬럼에 흡착시킨 후 증류수로 세척하고 에탄올로 용출 시켜 농축하였다.
농축액은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름 : 메탄올 = 85 : 15)에 의해 진세노사이드 컴파운드 케이 485 mg 을 수득하였다.
<실시예 6> 진세노아시드 Rb2를 이용한 본 발명의 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조(방법3)
진세노사이드 Rb21 g 을 초산완충용액(pH 5.0)에 용해시켜 전체를 50 ㎖ 로 정용한 다음, 아스퍼질러스 오리제에서 분리한 분말상의 락타제 18 중량 % 에, 덱스트린(Dextrin)분말 82 중량 % 를 혼합한 락타제 조성물 Y-AO 3 g 을 첨가하여 45 ℃ 수욕조 상에서 교반하면서 72시간 반응시켰다.
반응액은 열수 중에서 10분간 가열하여 반응을 종료시킨 다음 수포화 부탄올로 추출하고, 농축하여 진세노사이드 컴파운드 케이가 90 % 이상 함유된 반응생성물 650 ㎎ 을 얻었다.
본 발명에 의해, 진세노사이드 컴파운드 케이를 80 % 이상의 고수율로 제조하는 방법이 제공된다.
본 발명에 의해 제조된 진세노사이드 컴파운드 케이는, 면역증강, 암세포 침윤 및 증식 억제, 종양 혈관신생 억제작용 등의 용도로 사용된다.

Claims (8)

  1. 인삼에서 추출한 다이올계 사포닌 또는 다이올계 사포닌의 혼합물을,
    수성용매 또는 수성용매와 유기용매의 혼합액에 용해시키고, 여기에 아스퍼질러스 나이저에서 분리한 셀룰라제, 또는 아스퍼질러스 오리제에서 분리한 분말상의 락타제 18 ~ 22 중량 % 에, 덱스트린(Dextrin)분말 78 ~ 82 중량 % 를 혼합한 락타제 조성물 Y-AO 중에서 선택된 하나를 첨가하고, 가온 상태의 수욕조 상에서 교반하면서 효소반응 시키는 단계와,
    반응액을 박층 크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여 기질이 완전히 소실되면 열수 중에서 가열하여 반응을 종료시키는 단계와,
    반응액과 수포화 부탄올을 혼합하고, 진세노사이드 컴파운드 케이가 용출된 상층부의 부탄올층을 수득하는 단계와,
    수득물을 농축시키는 단계와,
    농축액을 컬럼크로마토그래피하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 수득하는 단계로 이루어진, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 인삼은 고려인삼, 삼칠인삼, 미국인삼, 죽절인삼, 히말리야인삼, 베트남인삼 중에서 선택된 하나인 것이 특징인, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법.
  3. 제 1항에 있어서, 다이올계 사포닌은 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd 또는 다이올계 사포닌 혼합물 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법.
  4. 제 1 항 있어서, 효소반응시 온도는 20 ∼ 50 ℃ 임을 특징으로 하는, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 수성용매는 물, 초산, 인산, 시트레이트, 시트레이트-인산의 완충용액 중에서 선택된 하나인 것을 특징으로 하는, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법.
  6. 제 1 항에 있어서, 유기용매는 아세톤, 아세토니트릴, 디옥산, 디메틸 설폭사이드, 저급 알콜 중에서 선택된 하나인 것을 특징으로 하는, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법.
  7. 인삼에서 추출한 다이올계 사포닌 또는 다이올계 사포닌의 혼합물을,
    수성용매 또는 수성용매와 유기용매의 혼합액에 용해시키고, 여기에 아스퍼질러스 나이저에서 분리한 셀룰라제 또는 아스퍼질러스 오리제에서 분리한 분말상의 락타제 18 ~ 22 중량 % 에, 덱스트린(Dextrin)분말 78 ~ 82 중량 % 를 혼합한 락타제 조성물 Y-AO 중에서 선택된 하나를 첨가하고, 가온 상태의 수욕조 상에서 교반하면서 효소반응 시키는 단계와,
    반응액을 박층 크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여 기질이 완전히 소실되면 열수 중에서 가열하여 반응을 종료시키는 단계와,
    반응액을 이온교환수지를 충진한 컬럼에 흡착시킨 다음, 당류와 효소는 증류수로 세척하여 제거하고, 반응 생성물은 에탄올로 용출하는 단계와,
    용출물을 농축시키는 단계와,
    농축액을 컬럼크로마토그래피하여 진세노사이드 컴파운드 케이를 수득하는 단계로 이루어진, 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법.
  8. 인삼에서 추출한 다이올계 사포닌 또는 다이올계 사포닌의 혼합물을,
    수성용매 또는 수성용매와 유기용매의 혼합액에 용해시키고, 여기에 아스퍼질러스 나이저에서 분리한 셀룰라제 또는 아스퍼질러스 오리제에서 분리한 분말상의 락타제 18 ~ 22 중량 % 에, 덱스트린(Dextrin)분말 78 ~ 82 중량 % 를 혼합한 락타제 조성물 Y-AO 중에서 선택된 하나를 첨가하고, 가온 상태의 수욕조 상에서 교반하면서 효소반응 시키는 단계와,
    반응액을 박층 크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여 기질이 완전히 소실되면 열수 중에서 가열하여 반응을 종료시키는 단계와,
    반응액과 수포화 부탄올을 혼합하고, 진세노사이드 컴파운드 케이가 용출된 상층부의 부탄올층을 수득하는 단계와,
    수득물을 농축시키는 단계와,
    농축액을 재농축하여 분말상의 진세노사이드 컴파운드 케이고함유물을 수득하는 단계로 이루어진, 진세노사이드 컴파운드 케이 고함유물의 제조방법.
KR10-2001-0074202A 2001-11-27 2001-11-27 셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법 KR100420451B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2001-0074202A KR100420451B1 (ko) 2001-11-27 2001-11-27 셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2001-0074202A KR100420451B1 (ko) 2001-11-27 2001-11-27 셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20030043168A KR20030043168A (ko) 2003-06-02
KR100420451B1 true KR100420451B1 (ko) 2004-03-02

Family

ID=29571579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2001-0074202A KR100420451B1 (ko) 2001-11-27 2001-11-27 셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100420451B1 (ko)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100921257B1 (ko) 2007-08-31 2009-10-13 주식회사 케이티앤지 화합물 ｋ가 함유된 진세노사이드의 제조방법
KR100950108B1 (ko) 2007-11-16 2010-03-30 주식회사 케이티앤지 프로토파낙사트리올계 사포닌을 고농도로 함유하는홍삼엑기스의 제조방법
CN103966105A (zh) * 2013-11-28 2014-08-06 河南科技学院 一种转化人参皂苷Rg3生产Rh2的米曲霉、生产方法及应用
KR20150030012A (ko) 2013-09-11 2015-03-19 주식회사 동원에프앤비 진세노사이드 유효성분의 추출방법 및 이를 포함하는 제품
KR20170112637A (ko) * 2016-04-01 2017-10-12 전북대학교산학협력단 장수버섯 균사체를 이용한 희귀 인삼 사포닌의 제조방법

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101842106A (zh) * 2007-11-15 2010-09-22 涌永制药株式会社 加工药用人参的新用途
WO2013109062A1 (ko) * 2012-01-20 2013-07-25 씨제이제일제당(주) 효소전환 및 분획기술을 이용한 사포닌 전환체 화합물 케이-강화된 분획물 및 그 제조방법
CN111297928B (zh) * 2020-04-22 2021-10-22 一力制药(罗定)有限公司 一种三七总皂苷的提取方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS56127098A (en) * 1980-05-08 1981-10-05 Tsunematsu Takemoto Preparation of saponin by enzymatic hydrolysis
JPS6312300A (ja) * 1985-07-22 1988-01-19 Takeda Chem Ind Ltd ジンセノサイド−Ｒｄの製造法
JPS6399094A (ja) * 1987-09-11 1988-04-30 Rooto Seiyaku Kk ダンマラン系化合物
KR19990084454A (ko) * 1998-05-07 1999-12-06 박명규 효소적 방법에 의한 진세노사이드 알디의 제조방법
KR20020009756A (ko) * 2000-07-26 2002-02-02 박명규 효소적 방법에 의한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법
KR20030037005A (ko) * 2001-11-01 2003-05-12 주식회사 태평양 인삼 사포닌으로부터 화합물 ｋ 및 진세노사이드 ｆ1을제조하는 방법

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS56127098A (en) * 1980-05-08 1981-10-05 Tsunematsu Takemoto Preparation of saponin by enzymatic hydrolysis
JPS6312300A (ja) * 1985-07-22 1988-01-19 Takeda Chem Ind Ltd ジンセノサイド−Ｒｄの製造法
JPS6399094A (ja) * 1987-09-11 1988-04-30 Rooto Seiyaku Kk ダンマラン系化合物
KR19990084454A (ko) * 1998-05-07 1999-12-06 박명규 효소적 방법에 의한 진세노사이드 알디의 제조방법
KR20020009756A (ko) * 2000-07-26 2002-02-02 박명규 효소적 방법에 의한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법
KR20030037005A (ko) * 2001-11-01 2003-05-12 주식회사 태평양 인삼 사포닌으로부터 화합물 ｋ 및 진세노사이드 ｆ1을제조하는 방법

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100921257B1 (ko) 2007-08-31 2009-10-13 주식회사 케이티앤지 화합물 ｋ가 함유된 진세노사이드의 제조방법
KR100950108B1 (ko) 2007-11-16 2010-03-30 주식회사 케이티앤지 프로토파낙사트리올계 사포닌을 고농도로 함유하는홍삼엑기스의 제조방법
KR20150030012A (ko) 2013-09-11 2015-03-19 주식회사 동원에프앤비 진세노사이드 유효성분의 추출방법 및 이를 포함하는 제품
CN103966105A (zh) * 2013-11-28 2014-08-06 河南科技学院 一种转化人参皂苷Rg3生产Rh2的米曲霉、生产方法及应用
KR20170112637A (ko) * 2016-04-01 2017-10-12 전북대학교산학협력단 장수버섯 균사체를 이용한 희귀 인삼 사포닌의 제조방법
KR101959848B1 (ko) * 2016-04-01 2019-03-19 전북대학교산학협력단 장수버섯 균사체를 이용한 희귀 인삼 사포닌의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
KR20030043168A (ko) 2003-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100377546B1 (ko) 효소적 방법에 의한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법
Wang et al. Bioconversion of ginsenosides Rb1, Rb2, Rc and Rd by novel β-glucosidase hydrolyzing outer 3-O glycoside from Sphingomonas sp. 2F2: cloning, expression, and enzyme characterization
KR100329259B1 (ko) 효소(酵素)로 인삼 사포닌 당기(糖基)를 변화시켜서 희소한 인삼사포닌을 제조하는 방법
CN104894204B (zh) 微生物酶转化人参茎叶皂苷制备人参稀有皂苷的方法
CN107338280B (zh) 一种低糖基人参次苷群及其苷元的制备方法
CN104232723B (zh) 一组糖基转移酶及其应用
KR100418604B1 (ko) 인삼 사포닌으로부터 화합물 ｋ 및 진세노사이드 ｆ1을제조하는 방법
KR101566589B1 (ko) 진세노사이드 f2의 함량이 증가된 발효 홍삼의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 발효 홍삼 추출물
KR100420451B1 (ko) 셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법
KR100877489B1 (ko) 진세노사이드의 효소전환
KR100293968B1 (ko) 20(에스)-진세노사이드알에이취투의제조방법
TWI737638B (zh) 藉由酶法從人蔘的皂苷選擇性地製備人蔘皂苷Rd的方法
An et al. Gram-scale production of ginsenoside F1 using a recombinant bacterial β-glucosidase
CN100453550C (zh) 人参皂苷Rb2的制备工艺
KR100403570B1 (ko) 효소적 방법에 의한 진세노사이드 ｆ₂의 제조방법
KR20080028266A (ko) 펙티네스 또는 비스코자임을 이용하여 인삼 사포닌으로부터장내 진세노사이드 대사물질인 화합물 케이, 화합물와이, 진세노사이드 에프 1 및 화합물 피지-2를 제조하는방법
KR100424438B1 (ko) 효소적 방법에 의한 진세노사이드 알디의 제조방법
KR101959848B1 (ko) 장수버섯 균사체를 이용한 희귀 인삼 사포닌의 제조방법
KR100218553B1 (ko) 진세노사이드 rg3의 제조방법
KR100444370B1 (ko) 나린지나제 효소를 이용한 진세노사이드 에프원의 제조방법
KR101802979B1 (ko) 생물전환에 의한 진세노사이드 f1의 생산방법
KR101777673B1 (ko) 효소를 이용한 진세노사이드 Rd의 제조방법
CN108138212A (zh) 利用酶法从人参的皂甙中选择性地制备k化合物和y化合物的方法
CN112375752A (zh) 一种反式糖苷水解酶及其在糖苷结构改造及修饰中的应用
KR100689745B1 (ko) 알파-갈락토시다제를 이용하는 진세노사이드 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
N231 Notification of change of applicant
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130115

Year of fee payment: 10

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140128

Year of fee payment: 11

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150120

Year of fee payment: 12

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160202

Year of fee payment: 13

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180125

Year of fee payment: 15

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190201

Year of fee payment: 16

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20191220

Year of fee payment: 17