KR100378904B1 - Extraction of growth hormone releasing factor from natural medicinal plants and water-soluble phlomidis radix extract - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 천연 생약재로부터 성장호르몬 분비자극인자를 효과적으로 추출하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for effectively extracting growth hormone secretion stimulating factor from natural herbal medicines.
보다 상세하게는, 본 발명은 성장호르몬 분비자극인자를 포함하는 속단 (라틴명 : Phlomidis Radix)을 물로 추출하여 저급 알코올로 불순 고용물을 제거하고 n-부탄올 또는 이소부탄올 등으로 다시 분획한 다음 에틸 에테르로 불순물을 제거하는 과정으로 얻은 수용성 속단 추출물에 관한 것으로서, 상기 방법으로 생산한 속단 추출물은 침전이 형성되지 않는 음료 첨가물 등으로 유용하게 사용될 수 있다.More specifically, the present invention extracts the rapids (Latin name: Phlomidis Radix) containing growth hormone secretion stimulating factor with water to remove the impurities in low alcohol and fractionated again with n-butanol or isobutanol and the like ethyl The present invention relates to a water-soluble fast extract obtained by removing impurities with ether, and the fast extract produced by the above method may be usefully used as a beverage additive in which no precipitate is formed.
성장호르몬은 동물의 뇌하수체에서 분비되는 단백질로서 191개의 아미노산으로 구성된 펩타이드 호르몬이다. 성장호르몬은 오래 전부터 동물체로부터 분리되어 주로 왜소증 (dwarfism, 난장이병) 환자들의 치료에 사용되어 왔는데, 과거에는 주로 성장호르몬이 사체의 뇌하수체로부터 추출되어 사용됨으로써 분리 과정에서 다른 질병의 원인균까지 환자에게 유입될 수 있는 위험성이 있어 그 사용이 매우 제한되었다. 그러나 최근 유전공학의 발달과 더불어 미생물을 이용한 성장호르몬의 대량 생산 및 공급이 가능해지고 다른 질환의 감염 위험성이 적어짐에 따라, 재조합 성장호르몬을 포함하는 단백질 제제가 왜소증 치료제 시장의 대부분을 차지하게 되었다. 재조합 성장호르몬은 주사기를 이용하여 자가 치료가 가능할 정도로 보편화되어 있는데, 주로 근육주사로 투여된다. 이와 같이 재조합 성장호르몬은 대량 생산될 수 있음에도 불구하고 일정한 치료 기간동안 요구되는 비용이 상당하고 주사를 이용하는 불편함으로 인하여 최근에는 경구 투여용 제제를 개발하려는 시도들이 활발히 진행되고 있다.Growth hormone is a protein secreted from the pituitary gland of animals and is a peptide hormone consisting of 191 amino acids. Growth hormone has long been isolated from animals and used mainly for the treatment of dwarfism (dwarfism) patients.In the past, growth hormone was extracted from the pituitary gland of carcasses and introduced to the causative organism of other diseases during the separation process. There is a risk of it being very limited in its use. However, with the recent development of genetic engineering, it is possible to mass produce and supply growth hormones using microorganisms and to reduce the risk of infection of other diseases, and protein preparations containing recombinant growth hormones occupy most of the market for dwarfism. Recombinant growth hormone is so popular that self-treatment using a syringe is usually administered by intramuscular injection. As such, although recombinant growth hormone can be mass produced, attempts have recently been made to develop oral formulations due to the considerable cost required for a certain treatment period and the inconvenience of using injections.
경구 투여용 성장호르몬 제제의 기본 요건은 체내에서 흡수율이 높아야 하는동시에, 선택적으로 성장호르몬 분비를 자극할 수 있는 생물학적 활성도를 지니고 있어야 하는 것이다. 경구 투여로 체내에서 높은 흡수율을 갖기 위해서는 분자량이 작을수록 유리하며, 체내에서 생리 활성 작용을 원활하게 수행하려면 구조적으로도 특별한 물리화학적 성질을 가져야 한다.The basic requirement of the growth hormone preparation for oral administration is that the absorption rate must be high in the body, and at the same time, it must have biological activity that can selectively stimulate the growth hormone secretion. In order to have a high absorption rate in the body by oral administration, the smaller the molecular weight is advantageous, and to perform the physiological activity in the body smoothly, it must have a special physical and chemical properties.
이와 같은 기본 요건을 갖춘 물질로서 최근에 연구되어 임상시험 단계까지 개발된 대표적인 것들로는 유기합성된 L-692,429 (Horm. Res., 40: 109-115, 1993) 및 L-163,191 (PNAS, 92: 7001-7005, 1995), 그리고 펩타이드성 화합물인 GHRP-2 (Endocrinology, 140: R9-R13, 1994), GHRP-1 (J.Neuroendocrinology, 6: 185, 1994) 및 헥사렐린 (Hexarelin; His-D-2-methyl-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2) 등이 있다. 상기 물질들은 공통적으로 1980년대 초에 알려진 펩타이드성 화합물인 GHRP-6 (His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2)의 기본 구조를 이용하여 새로이 연구 개발된 것이다.Representatives of these basic requirements that have been recently studied and developed up to clinical trials include organically synthesized L-692,429 ( Horm. Res. , 40: 109-115, 1993) and L-163,191 ( PNAS , 92). : 7001-7005, 1995), and the peptide compounds GHRP-2 ( Endocrinology , 140: R9-R13, 1994), GHRP-1 (J. Neuroendocrinology , 6: 185, 1994) and hexarelin (Hexarelin; His- D-2-methyl-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2). The materials are newly researched and developed using the basic structure of GHRP-6 (His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2), a peptide compound commonly known in the early 1980s.
최근 들어 새로운 물질을 개발하는 접근 방식으로 화학물질 라이브러리 (chemical library)를 이용하여 후보 물질들을 대량 검색하는 방법이 각광을 받고 있다. 이외에도 길이가 짧은 펩타이드들로 구성된 펩타이드 라이브러리 (peptide library)도 이용되고 있으며, 자연계에 존재하는 여러 물질들로 구성된 천연물질 라이브러리 (natural library)도 이러한 새로운 물질을 개발하기 위하여 활용될 수 있다. 이와 같이 다양하고 광범위한 라이브러리를 이용하여 신약을 개발하는 것은 개발에 소요되는 기간 및 비용면에서 기존의 접근 방식보다 상당히 효율적이므로 선진 제약기업에서는 이미 오래전부터 자사의 라이브러리를 이용한 신약 개발에 적극적으로 참여하여 왔다. 구체적으로 상기 L-163,191 및 헥사렐린도 이러한 접근 방식으로 개발된 물질이라 할 수 있다.Recently, as an approach for developing a new material, a method for mass screening of candidate materials using a chemical library has been in the spotlight. In addition, a peptide library composed of short peptides is also used, and a natural library composed of various substances in nature can also be used to develop such a new substance. Developing new drugs using these diverse and extensive libraries is considerably more efficient than traditional approaches in terms of the time and cost of development, so developed pharmaceutical companies have long been active in developing new drugs using their libraries. come. Specifically, L-163,191 and hexarelin may be referred to as substances developed by this approach.
원래 체내에는 동물마다 다르지만 사람의 경우 44개의 아미노산으로 구성된 성장호르몬 분비자극 호르몬 (growth hormone releasing hormone, GHRH)이 존재한다. GHRP-6 는 생물학적 활성도에 있어서 상기 GHRH 보다 효과는 저조하지만 분자량 크기 면에서는 상당히 압축되어 있어 유용한 합성 펩타이드이다 (대한내분비학회지, 10(1): 1-9, 1995). GHRP-6 의 자세한 작용 기전에 대해서 많은 연구가 진행되었지만 아직까지 확실한 결론은 내리지 못하고 있다. 그러나 최근에 GHRP 의 수용체가 존재하고 이들이 시상하부와 뇌하수체에서 발견되었다고 보고되었다 (Science, 273 (5277): 974, 1996). 또한, 이 물질의 작용 과정에는 부분적으로 프로테인 키나아제 C 가 관여하거나 신호전달 과정에서 칼슘 이온이 유입되어 성장호르몬 분비가 유도되는 것으로 알려져 있다.Originally it varies from animal to animal, but in humans there is a growth hormone releasing hormone (GHRH) consisting of 44 amino acids. GHRP-6 is a useful synthetic peptide that is less effective than GHRH in biological activity but highly compressed in terms of molecular weight size (Korean Journal of Endocrinology, 10 (1): 1-9, 1995). Although much research has been conducted on the detailed mechanism of action of GHRP-6, no clear conclusions have been made yet. Recently, however, it has been reported that receptors of GHRP are present and found in the hypothalamus and pituitary gland ( Science , 273 (5277): 974, 1996). In addition, it is known that protein kinase C is partially involved in the action of the substance or calcium ions are introduced during signaling to induce growth hormone secretion.
미국 머크 (Merck)사가 개발한 L-692,429 (Science, 260: 1640-1643, 1993)는 선택적으로 성장호르몬을 분비시키는 것으로 알려졌으며, 동물 실험 단계에서도 효과적인 체내 흡수율을 보여주었다. 그러나 인체 실험 결과는 동물의 그것과 다르게 나타났다. 따라서 이러한 문제를 개선한 L-163,191 가 개발되었고 이는 경구투여시 생리 활성이 높은 특징이 있으며 개를 이용한 동물 실험 결과를 바탕으로 현재 임상실험 중에 있다 (PNAS, 92: 7001-7005, 1995). 이들 물질에 관한 연구 결과는 뇌하수체를 자극하여 성장호르몬을 분비시키는 물질들이 성장호르몬 대체제로서 임상적으로 유용하게 사용될 수 있음을 시사하고 있는 반면, 새로운 성장호르몬 분비자극인자를 개발하는 것이 용이하지 않다는 것을 보여준다.L-692,429 ( Science , 260: 1640-1643, 1993), developed by Merck, USA, has been shown to selectively secrete growth hormone, and has shown effective body uptake even in animal testing. However, human test results were different from those of animals. Therefore, L-163,191 has been developed to improve this problem, which is characterized by high physiological activity during oral administration and is currently in clinical trials based on the results of animal experiments using dogs ( PNAS , 92: 7001-7005, 1995). Research on these substances suggests that substances that stimulate the pituitary gland to secrete growth hormone may be useful clinically as growth hormone replacements, while developing new growth hormone secretion factors is not easy. Shows.
이와 같은 사실을 고려하여 본 발명자는 자연계에 존재하면서 안전성이 확보된 천연물질을 대상으로 새로운 성장호르몬 분비자극인자를 개발하기 위한 연구를 진행하는 과정에서, 실험 재료로 사용했던 복합생약제제가 성장호르몬 분비자극작용이 있음을 확인하여 이를 대한민국 특허출원 제 96-7402호로서 이미 1996년 3월 19일자로 출원한 바 있다. 또한, 본 발명자는 후속연구를 진행하는 과정에서 감초로부터 생리활성물질을 분리하여 그의 구조 및 용도를 밝혀 대한민국 특허출원 제 97-12797로 1997년 4월 26일자로 출원한 바 있다.In light of these facts, the inventors of the present invention developed a new growth hormone secretion stimulating factor for natural substances that existed in the natural environment and ensured safety. It confirmed that there is an stimulating action and has already filed as March 19, 1996 as Republic of Korea Patent Application No. 96-7402. In addition, the present inventors have separated the bioactive material from licorice in the course of subsequent research to reveal its structure and use, filed April 26, 1997 with the Republic of Korea Patent Application No. 97-12797.
또한 본 발명자는 속단으로부터 성장호르몬 분비자극인자를 분리하여 그의 구조를 밝혔고 이의 용도에 관한 내용을 동일자로 출원한 바 있다. 그러나 이전의 발명은 물질의 분리 과정에서 고압 역상 크로마토그래피를 이용함으로 상기 인자를 분석하는데는 적당하나 대량 생산하는데는 많은 제약이 있었다.In addition, the present inventors have identified the structure of the growth hormone secretion stimulating factor from the inner ear and has applied for the same regarding the use thereof. However, the previous invention is suitable for analyzing the factor by using high pressure reverse phase chromatography in the separation of materials, but there are many limitations in mass production.
한편 성장호르몬 분비자극인자 등을 포함하는 천연 생약재를 이용하여 음료 또는 약품을 제조하는 경우, 생산성의 향상을 위하여 추출 공정을 철저히 분석하고 각 단계에서 용매의 종류에 따라 유효 성분이 분포하는 양상 및 그의 양을 고려하여 전체 추출 공정의 수율을 증가시키는 것이 필요하다. 또한 천연 생약재에서 얻은 수용성 추출물의 경우, 오랜 기간동안 방치하면 자발적으로 침전물이 형성되는 단점이 있다. 이러한 침전 형성은 시간에 따른 연속적인 현상으로 천연 생약재를 이용한 음료 또는 약품 등의 생산을 어렵게 한다.On the other hand, in the case of manufacturing beverages or drugs using natural herbal medicines including growth hormone secretion stimulating factor, etc., the extraction process is thoroughly analyzed to improve productivity, and the active ingredient is distributed according to the type of solvent at each step and its Considering the amount, it is necessary to increase the yield of the entire extraction process. In addition, in the case of water-soluble extracts obtained from natural herbal medicines, there is a disadvantage that spontaneous precipitate is formed when left for a long time. Such precipitation formation is a continuous phenomenon over time, making it difficult to produce beverages or drugs using natural herbal medicines.
이에 본 발명자들은 천연 생약재로부터 성장호르몬 분비자극인자를 효과적으로 대량 생산하기 위하여 연구를 계속하던 중, 속단을 증류수로 추출하고 메탄올 또는 에탄올로 침전을 제거한 다음 n-부탄올 또는 이소부탄올 등의 유기 용매로 분획하고 다시 증류수 및 에틸 에테르를 차례로 혼합하여 불순물을 제거하면 성장호르몬 분비자극인자 활성을 가지는 순도를 높은 수용성 형태의 속단 추출물을 간단하게 고수율로 얻을 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors are continuing research to efficiently produce a large amount of growth hormone secretion factors from natural herbal medicines, and extract the rapids with distilled water, remove the precipitate with methanol or ethanol, and then fractionate with an organic solvent such as n-butanol or isobutanol. When the impurities are removed by mixing distilled water and ethyl ether in turn, the present invention was completed by confirming that the fast-acting extract having a high water soluble secretion stimulating factor activity can be obtained in a simple and high yield.
본 발명은 천연 생약재로부터 성장호르몬 분비자극인자를 포함하는 분획을 효과적으로 분리하는 방법 및 성장호르몬 분비자극인자 활성을 가지는 수용성 속단 추출물을 제공함에 그 목적이 있다.It is an object of the present invention to provide a method for effectively separating a fraction comprising growth hormone secretion stimulating factor from natural herbal medicines and a water-soluble fast extract having growth hormone secretion stimulating factor activity.
도 1은 속단으로부터 용매 추출을 이용하여 성장호르몬 분비자극인자를 분리하는 최적의 방법을 도식적으로 나타낸 것이고, Figure 1 schematically shows an optimal method for separating growth hormone secretion stimulating factor using solvent extraction from the rapid
도 2a는 속단을 물로 추출하고 50 % 메탄올로 불순 고용물을 제거하여 얻은 상등액을 고압 역상 액체 크로마토그래피 (HPLC)로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 2a shows the result of analyzing the supernatant obtained by extracting the fast with water and removing the impurities solid solution with 50% methanol by high pressure reverse phase liquid chromatography (HPLC),
도 2b는 속단을 물로 추출하고 66 % 메탄올로 불순 고용물을 제거하여 얻은 상등액을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 2b shows the result of analyzing the supernatant obtained by extracting the fast with water and removing the impurities solid solution with 66% methanol,
도 2c는 속단을 물로 추출하고 75 % 메탄올로 불순 고용물을 제거하여 얻은 상등액을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 2c shows the results of HPLC analysis of the supernatant obtained by extracting the fast with water and removing impurities solids with 75% methanol,
도 3a는 속단을 물로 추출하고 50 % 에탄올로 불순 고용물을 제거하여 얻은 상등액을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 3a shows the result of analyzing the supernatant obtained by extracting the fast with water and removing the impurities solid solution with 50% ethanol,
도 3b는 속단을 물로 추출하고 66 % 에탄올로 불순 고용물을 제거하여 얻은 상등액을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 3b shows the result of analyzing the supernatant obtained by extracting the fast with water and removing impurities solid solution with 66% ethanol,
도 3c는 속단을 물로 추출하고 75 % 에탄올로 불순 고용물을 제거하여 얻은 상등액을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 3c shows the results of the analysis of the supernatant obtained by extracting the fastener with water and removing impurities solid solution with 75% ethanol,
도 4는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 n-부탄올로 분획하여 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 4 shows the result of analyzing the solvent layer by extracting the fast with water, removing impurities solids with a lower alcohol and then fractionated with n-butanol again,
도 5는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 2-부탄올로 분획하여 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 5 shows the result of extracting the fasting with water, removing the impure solids with a lower alcohol and then fractionated with 2-butanol again to analyze the solvent layer by HPLC,
도 6는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 3차 부탄올로 분획하여 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, 6 shows the result of analyzing the solvent layer by extracting fast-acting with water, removing impurity solid solution with lower alcohol, and then fractionating with tert-butanol again by HPLC,
도 7는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 테트라하이드로퓨란으로 분획하여 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 7 shows the result of extracting the fastener with water, removing impurities solids with lower alcohol and then fractionating with tetrahydrofuran to analyze the solvent layer by HPLC,
도 8는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 n-프로필 알코올로 분획하여 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 8 shows the result of analyzing the solvent layer by extracting the fasting with water, removing impurities solids with a lower alcohol and then fractionated with n-propyl alcohol again,
도 9는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 이소프로필 알코올로 분획하여 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 9 shows the results of the solvent layer was analyzed by extracting the fastener with water, removing impure solids with a lower alcohol and then fractionated with isopropyl alcohol again,
도 10는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 이소부탄올로 분획하여 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 10 shows the result of analyzing the solvent layer by extracting the fasting with water, removing impurities solids with a lower alcohol and then fractionated with isobutanol again,
도 11는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 n-부탄올로 분획하여 수용액 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, FIG. 11 shows the result of analyzing the aqueous layer by extracting fast-acting water with water, removing impurity solid solution with lower alcohol, and then fractionating with n-butanol again.
도 12는 속단을 물로 추출하고 저급 알코올로 불순 고용물을 제거한 다음 다시 이소부탄올로 분획하여 수용액 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, 12 shows the result of analyzing the aqueous layer by extracting fast-acting water with water, removing impurity solid solution with lower alcohol, and then fractionating with isobutanol again,
도 13a는 속단을 상기 과정으로 n-부탄올로 분획하고 용매 층에 다시 물을가하여 분획시킨 다음 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, FIG. 13a shows the result of analyzing the solvent layer by fractionation of n-butanol by the above procedure, fractionation by adding water to the solvent layer again, and analyzing the solvent layer by HPLC.
도 13b는 속단을 n-부탄올로 분획하고 용매 층에 다시 물을 가하여 분획시킨 다음 수용액 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, FIG. 13B shows the result of fractionating the fast-acting layer with n-butanol, fractionating by adding water to the solvent layer, and analyzing the aqueous layer by HPLC.
도 14는 속단을 이소부탄올로 분획하고 용매 층에 다시 물을 가하여 분획시킨 다음 용매 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, FIG. 14 shows the result of fractionating fast-release with isobutanol, fractionating by adding water to the solvent layer, and analyzing the solvent layer by HPLC.
도 15는 속단을 n-부탄올로 분획하고 용매 층을 물을 3번 세척하여 분획한 다음 수용액 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, FIG. 15 shows the result of fractionating fast-acting layer with n-butanol, fractionating the solvent layer by washing the water three times, and analyzing the aqueous layer by HPLC.
도 16은 속단을 n-부탄올로 분획하고 용매 층을 다시 에틸 에테르와 혼합한 다음 하층액을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, FIG. 16 shows the result of fractionating fast-acting with n-butanol, mixing the solvent layer with ethyl ether again, and analyzing the lower layer by HPLC.
도 17a는 속단을 이소부탄올로 분획하고 용매 층을 다시 물로 3번 세척한 다음 수용액 층을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, Figure 17a shows the result of fractionating the fast-acting with isobutanol, washing the solvent layer again three times with water and then analyzing the aqueous layer by HPLC,
도 17b는 속단을 이소부탄올로 분획하고 용매 층을 다시 에틸 에테르와 혼합한 다음 혼합 층 (300 mL 상태)을 HPLC 로 분석한 결과를 나타낸 것이고, FIG. 17B shows the result of fractionating an Soc by an isobutanol, mixing the solvent layer again with ethyl ether, and then analyzing the mixed layer (300 mL state) by HPLC,
도 18은 상기 과정을 통하여 최종적으로 얻은 수용성 속단 추출물에서 성장호르몬 분비자극인자의 순도를 나타낸 것이다. Figure 18 shows the purity of growth hormone secretion stimulating factor in the water-soluble fast extract finally obtained through the above process.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 천연 생약재를 물로 추출하고 여과한 다음 저급 알코올을 가하여 불순 고용물의 침전을 제거하는 과정을 포함하는 성장호르몬 분비자극인자의 추출 방법을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a method for extracting growth hormone secretion stimulating factor comprising the step of extracting the natural herbal medicine with water, filtering and then adding a lower alcohol to remove the precipitate of impurities solid solution.
본 발명은 천연 생약재로 속단 등을 사용하여 성장호르몬 분비자극인자를 추출한다. 이 때 저급 알코올로 35 내지 75 % 인 메탄올 또는 에탄올을 사용하여 불순 고용물을 침전시키는 것이 바람직하고, 66 % 의 메탄올 또는 에탄올을 사용하는 것은 더욱 바람직하다.The present invention extracts growth hormone secretion stimulating factor using a fasting as a natural herbal medicine. At this time, it is preferable to precipitate an impure solid solution using 35 to 75% of methanol or ethanol as the lower alcohol, and more preferably to use 66% of methanol or ethanol.
또한, 본 발명은 상기 과정에 더하여 다시 유기 용매로 사용하여 분획함으로 성장호르몬 분비자극인자를 추출한다. 이 때 유기 용매로는 n-부탄올, 2차 부탄올, 3차 부탄올, 이소부탄올, 테트라하이드로퓨란, n-프로필 알코올, 이소프로필알코올 중 적어도 하나를 사용하는 것이 바람직하고, n-부탄올 또는 이소부탄올을 사용하는 것은 더욱 바람직하다.In addition, the present invention extracts growth hormone secretion stimulating factor by fractionation using the organic solvent in addition to the above process. In this case, it is preferable to use at least one of n-butanol, secondary butanol, tertiary butanol, isobutanol, tetrahydrofuran, n-propyl alcohol and isopropyl alcohol, and n-butanol or isobutanol It is more preferable to use.
또한, 본 발명의 방법은 상기 과정에 더하여 n-부탄올 또는 이소부탄올을 이용하여 추출한 분획을 다시 물을 이용하여 분획함으로 불순물을 제거하는 단계를 포함한다.In addition, the method of the present invention includes the step of removing impurities by fractionating the fraction extracted by using n-butanol or isobutanol in addition to the above process by using water again.
또한, 본 발명의 방법은 상기 과정에 더하여 n-부탄오 또는 이소부탄올로 추출되어 성장호르몬 분비자극인자를 포함하는 분획을 다시 에틸 에테르를 이용하여 분획함으로 불순물을 제거하는 단계를 포함한다.In addition, the method of the present invention includes the step of removing impurities by extracting with n-butano or isobutanol and fractions containing growth hormone secretion stimulating factor again using ethyl ether in addition to the above process.
또한, 본 발명은 속단을 물로 추출 여과하여 메탄올 또는 에탄올로 침전을 제거한 다음 n-부탄올 또는 이소부탄올로 다시 분획하고 이에 물 및 에틸 에테르를 차례로 가하여 불순물을 제거하는 과정으로 얻은 성장호르몬 분비자극인자 활성을 가지는 수용성 속단 추출물을 제공한다.In addition, the present invention is a growth hormone secretion stimulating factor obtained by extracting and filtering the fast with water to remove the precipitate with methanol or ethanol and then fractionated again with n-butanol or isobutanol and then added water and ethyl ether in order to remove impurities It provides a water-soluble rapid extract having.
이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 천연 생약재로부터 침전이 형성되지 않고 순도가 높은 성장호르몬 분비자극인자를 포함하는 조성물을 간단하게 분리하는 방법을 제공한다.The present invention provides a simple method of separating a composition comprising a growth hormone secretion stimulating factor of high purity without forming a precipitate from a natural herbal medicine.
우선, 본 발명은 천연 생약재를 물로 추출하고 여과한 다음 저급 알코올을 가하여 불순 고용물의 침전을 제거하는 과정으로 성장호르몬 분비자극인자를 추출한다. 본 발명은 천연 생약재료서 속단을 이용하는데, 구체적으로 속단을 물에 넣고 끊인 다음 여과하여 속단 물 추출액을 얻고 다시 저급 알코올을 가하여 침전을 제거한다. 이 때 침전 형성을 위하여 가한 용매를 감압 농축 과정으로 제거함으로수용성 속단 추출물을 얻는다.First, the present invention extracts the growth hormone secretion stimulus by extracting the natural herbal medicine with water, filtering and then removing the precipitate of impure solid solution by adding a lower alcohol. The present invention uses natural herbal ingredients as fast-drying, specifically, the fasting is put in water, cut off and filtered to obtain fast-acting water extract, and then lower alcohol is added to remove the precipitate. At this time, the solvent added to form the precipitate is removed by concentration under reduced pressure to obtain a water-soluble fast extract.
본 발명은 상기 과정에서 저급 알코올로 메탄올과 에탄올을 사용하고, 이때 침전을 제거하는 최적의 용매 조건을 다양한 조건을 시도하여 결정한다 (도 2및도 3참조). 구체적으로 메탄올 또는 에탄올은 35 내지 75 % 농도인 것을 사용하는 것이 바람직하고, 66 % 인 것을 사용하는 것은 더욱 바람직하다.The present invention uses methanol and ethanol as the lower alcohol in the above process, wherein the optimum solvent conditions for removing precipitation are determined by trying various conditions (see FIGS . 2 and 3 ). Specifically, methanol or ethanol is preferably used at a concentration of 35 to 75%, more preferably 66%.
또한, 본 발명은 상기 과정에 더하여 수용성 속단 추출물을 다양한 유기용매를 사용하여 다시 분획한다. 이 때 유기 용매로 n-부탄올, 2차 부탄올, 3차 부탄올, 이소부탄올, 테트라하이드로퓨란, n-프로필 알코올, 이소프로필 알코올 등을 사용하는 것이 바람직한데, 이는 상기 수용성 추출물 내에 존재하는 성장호르몬 분비자극인자의 유효성분을 용매 층으로 이동되게 한다.In addition to the above process, the present invention re-fractionates the water-soluble fast extract using various organic solvents. At this time, it is preferable to use n-butanol, secondary butanol, tertiary butanol, isobutanol, tetrahydrofuran, n-propyl alcohol, isopropyl alcohol, etc., which secrete growth hormone present in the aqueous extract. Allow the active ingredient of the stimulator to be transferred to the solvent layer.
본 발명은 상기 용매 층을 고압 역상 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 수행하여 그 추출 정도를 분석한다. 그 결과, 유기 용매로 n-부탄올 및 이소부탄올을 처리한 경우 용매 층으로 성장호르몬 분비자극인자가 대부분 추출되고 수용액 층에는 상기 인자가 매우 적게 존재함을 확인한다.In the present invention, the solvent layer is subjected to high pressure reverse phase liquid chromatography (HPLC) to analyze the degree of extraction thereof. As a result, when n-butanol and isobutanol were treated with an organic solvent, it was confirmed that most growth hormone secretion stimulating factors were extracted from the solvent layer, and very little of the above factors exist in the aqueous layer.
또한, 본 발명은 상기 과정에 더하여 성장호르몬 분비자극인자의 유효성분이 함유된 유기 용매 층을 회수한 다음 순수한 물을 가하여 반복적으로 분획함으로 수용액 층에 용해될 수 있는 수용성 물질을 제거한다. 이러한 과정을 반복하면 유기 용매 층에 존재하는 각종 자연염료 또는 불순물을 제거할 수 있고 용매 층에 존재하는 유효성분의 순도를 높일 수 있다.In addition, the present invention is to recover the organic solvent layer containing the active ingredient of growth hormone secretion stimulating factor in addition to the above process and then to remove the water-soluble substance that can be dissolved in the aqueous layer by repeatedly fractionating by adding pure water. By repeating this process, various natural dyes or impurities present in the organic solvent layer may be removed and the purity of the active ingredient present in the solvent layer may be increased.
또한 본 발명은 상기 과정에 더하여 성장호르몬 분비자극인자의 유효성분이함유된 유기 용매 층의 순도를 더욱 높이기 위하여, 상기 용매 층을 다시 에틸 에테르 (ethyl ether)를 이용하여 분획시킨다. 이 때 에틸 에테르는 1 : 3 이상의 부피 비로 희석시키는 것이 바람직하고 1 : 5 의 부피 비로 희석하는 것은 더욱 바람직하다.In addition, the present invention is further fractionated using ethyl ether to further increase the purity of the organic solvent layer containing the active ingredient of growth hormone secretion stimulating factor in addition to the above process. At this time, the ethyl ether is preferably diluted to a volume ratio of 1: 3 or more, and more preferably diluted to a volume ratio of 1: 5.
상기에서 유효성분은 대부분이 에테르-부탄올 또는 에테르-이소부탄올 등의 혼합 층으로 전이되고, 이 과정을 거치면 상기 수용성 속단 추출물은 약간의 노란색만을 지닐 정도로 거의 모든 불순물이 제거된다.Most of the active ingredient is transferred to a mixed layer such as ether-butanol or ether-isobutanol, and this process removes almost all impurities such that the aqueous fast extract has only a slight yellow color.
따라서, 상기 각 과정을 통하여 침전이 형성되지 않는 맑은 용액 형태의 수용성 속단 추출물을 얻을 수 있다. 이러한 속단 추출물은 침전 형성, 색소 침착 또는 냄새 등의 문제를 해결하여 음료 첨가물 및 화장품의 원료 등으로 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, through each of the above process it is possible to obtain a water-soluble fast extract in the form of a clear solution does not form a precipitate. Such fast extracts can be usefully used as raw materials for beverage additives and cosmetics by solving problems such as precipitation formation, pigmentation or odor.
또한, 상기 과정을 거친 추출물을 감압 건조시키면 최종적으로 성장호르몬 분비자극인자가 포함된 조성물을 간단히 얻을 수 있어, 이를 이용하면 상기 성장호르몬 분비자극인자를 속단으로부터 고순도로 용이하게 대량 생산할 수 있다.In addition, when the extract is subjected to the drying under reduced pressure, a composition containing a growth hormone secretion stimulating factor can be finally obtained simply, so that the growth hormone secretion stimulating factor can be easily mass-produced in high purity from the rapid release.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples.
단 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로, 하기 실시예에 의하여 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.However, the following examples illustrate the present invention, and the scope of the present invention is not limited by the following examples.
＜실시예 1＞ 용매를 이용하여 침전을 제거한 수용성 속단 추출물의 제조<Example 1> Preparation of the water-soluble fast extract extract from which precipitation was removed using a solvent
본 발명은 건조된 속단 31.5 g 을 400 mL의 물에 넣고 80-90℃ (생약 추출 온도)에서 약 2시간 동안 물 중탕하여 수용성 추출액을 얻었다. 이를 약 5분 동안방치하여 추출된 용액을 모은 다음 상기 약재에 다시 물 400 mL 을 다시 부어 동일한 방법으로 재추출 하였다.In the present invention, 31.5 g of the dried fastener was added to 400 mL of water, and water-soluble at 80-90 ° C. (medicinal extract temperature) for about 2 hours to obtain an aqueous extract. The mixture was left for about 5 minutes to collect the extracted solution, and again 400 mL of water was poured again into the medicine and re-extracted in the same manner.
이렇게 모은 수용성 추출액 800 mL 을 물 중탕으로 끊여 부피를 약 350mL 로 줄였다. 이 용액을 각각 1mL 씩 취하고 메탄올과 에탄올을 처리하여 최적의 용매 처리 효과를 나타내는 조건을 확립하는 다음의 실험을 실시하였다. 이 때 용매를 처리한 방법과 결과는 다음의 표 1 에 나타내었다.800 mL of the aqueous extracts thus collected were separated with a water bath to reduce the volume to about 350 mL. 1 mL of each of these solutions was taken, and the following experiment was conducted to establish conditions that showed an optimum solvent treatment effect by treating methanol and ethanol. The method and the result of treating the solvent at this time are shown in Table 1 below.
[표 1]TABLE 1
표 1 의 결과로부터 얻은 침전 무게를 분석하여 살펴보면 용매의 양이 증가되면서 침전되는 양이 비례적으로 증가하다가 어떤 임계점 (critical point) 이후로는 침전의 양이 감소하는 경향을 보인다. 상기 실험 결과는 약 66 % 상당의 용매 함량 부근에서 침전 양이 감소하는 양상을 나타내었다. 따라서 본 실험에서 보고자 한 침전 양의 최적점은 75 % 가 아닌 66 % 이며, 75 % 처리에서 침전의 양이66 % 처리 보다 감소하는 경향은 메탄올과 에탄올 모두에서 공통적으로 나타났다. 결론적으로 66 % 를 처리하여 얻어진 침전 중에는 용매의 함량이 증가하면서 침전되었다가 다시 증가된 용매 층에 용해되는 성분이 존재하며 이 물질은 친수성과 소수성의 성질을 동시에 지니는 것으로 추정된다.As a result of analyzing the weight of the precipitate obtained from the results of Table 1, as the amount of solvent increases, the amount of precipitation increases proportionally, but after a certain critical point, the amount of precipitation tends to decrease. The experimental results showed a decrease in precipitation amount near the solvent content of about 66%. Therefore, the optimum point of the precipitation amount reported in this experiment was 66% instead of 75%, and the tendency of decrease of precipitation amount in the 75% treatment than the 66% treatment was common in both methanol and ethanol. In conclusion, in the precipitation obtained by treating 66%, there is a component which precipitates with increasing solvent content and dissolves in the increased solvent layer, which has both hydrophilic and hydrophobic properties.
상기 용매 처리로 침전이 제거한 다음 원심분리하여 얻은 상등액에 존재하는 성장호르몬 분비자극인자의 함량 내지 분리 경향은 고압 역상 액체 크로마토그래피 (reverse-phase HPLC)로 분석되었다. 상등액에 함유된 성장호르몬 분비자극인자의 경향 차이를 확인하여 그 결과를도 2및도 3에 나타내었다. 성장호르몬 분비자극인자의 피크는 동일자로 출원되는 특허 (" 새로운 성장호르몬 분비촉진인자 ")에서 언급된 소수성 고압 액체 크로마토그래피에서와 동일한 분석 조건에서 얻어진 피크의 보유 시간 (retention time), 뇌하수체 세포의 생체외 (in vitro) 배양 및 그의 실험 결과를 기준으로 확인하였다. 이를 간단히 설명하면 각 용매층을 1 mL씩 주사하여 기본용액 대 용출용액의 비가 40분에 걸쳐 선형구배 방식이 되게 한 다음 7 mL/분의 유속으로 전개하였다. 특히 이 때 기본 완충용액으로는 0.01 % 트리플루오르아세트산 (trifluoroacetic acid, TFA)을 사용하고, 용출 완충 용액으로는 메탄올에 녹인 0.01 % TFA 를 사용하였다. 도면상에서 보면 화살표로 표시된 마지막 피크가 성장호르몬 분비자극인자의 피크로서, 모든 도면에 성장호르몬 분비자극인자를 화살표로 표시하였다.The content of the growth hormone secretion stimulating factor present in the supernatant obtained by removing the precipitate by the solvent treatment and then centrifugation to the separation tendency was analyzed by high pressure reverse-phase liquid chromatography (reverse-phase HPLC). The trend of growth hormone secretion stimulating factor contained in the supernatant was confirmed and the results are shown in FIGS . 2 and 3 . The peak of the growth hormone secretion stimulating factor is the retention time of the peak obtained under the same analytical conditions as in the hydrophobic high-pressure liquid chromatography mentioned in the patent filed as the same ("New growth hormone secretagogue"), It was confirmed based on the in vitro culture and the experimental results thereof. In brief, 1 mL of each solvent layer was injected so that the ratio of the basic solution to the elution solution was in a linear gradient over 40 minutes, and then developed at a flow rate of 7 mL / min. In this case, 0.01% trifluoroacetic acid (TFA) was used as the basic buffer solution, and 0.01% TFA dissolved in methanol was used as the elution buffer solution. In the drawings, the last peak indicated by the arrow is the peak of the growth hormone secretion stimulating factor, and the growth hormone secretion stimulating factor is indicated by the arrow in all the figures.
＜실시예 2＞ 성장호르몬 분비자극인자의 용매 추출 I<Example 2> Solvent extraction of growth hormone secretion stimulating factor I
상기 실시예 1 에서 얻은 350 mL 의 침전이 제거된 용액을 각각 2 mL씩 취하고 이에 각각의 용매를 처리하여 추출 과정에서 용매의 효과를 비교하였으며 처리한 과정을 정리하여 아래의표 2에 나타내었다. 이 때 얻은 상등액을 실시예 1의 고압 역상 액체 크로마토그래피를 수행하여 분석하고 그 추출 정도를 추정하였다. 각 용매 처리에 따라 분리된 용매 층의 유효성분 함량은 도면 (도 4 - 도 10참조)에 나타내었다.2 mL each of the 350 mL precipitated solution obtained in Example 1 was removed, and the respective solvents were treated to compare the effects of the solvents in the extraction process, and the treated processes are summarized in Table 2 below. The supernatant obtained at this time was analyzed by high pressure reversed phase liquid chromatography of Example 1 and the degree of extraction thereof was estimated. The active ingredient content of the solvent layer separated according to each solvent treatment is shown in the drawings (see FIGS. 4 to 10 ).
[표 2]TABLE 2
또한, 각각 n-부탄올 및 이소부탄올을 처리하여 얻은 용매 층을 제거하고 남은 수용액을 300μl씩 주사하여 그 순도를 확인한 결과,도 11및도 12에서 보는 바와 같이 수용액 층에는 성장호르몬 분비자극인자가 매우 적게 존재하며 대부분이상층의 용매 층으로 상기 인자가 추출되었음을 간접적으로 알 수 있었다.In addition, as a result of removing the solvent layer obtained by treating n-butanol and isobutanol, respectively, and checking the purity of the remaining aqueous solution by 300 μl, as shown in FIGS . 11 and 12 , growth hormone secretion stimulating factor was very high in the aqueous layer. It was found indirectly that the factor was extracted with little or less solvent layer in most of the layers.
＜실시예 3＞ 성장호르몬 분비자극인자의 용매 추출 II<Example 3> Solvent extraction of growth hormone secretion stimulating factor II
본 발명은 실시예 2 의 결과를 바탕으로 성장호르몬 분비자극인자의 분리에 바람직하다고 평가된 n-부탄올 및 이소부탄올을 이용하여 실험을 계속 진행하였다. 실시예 1 의 과정을 거쳐 얻은 속단 추출물 250 mL을 약 100 mL씩 나누어 2가지 용매에 처리하였다. 각 시료 100 mL에 150 mL 의 n-부탄올 및 이소부탄올을 각각 처리하고 잘 혼합한 다음 이를 상온에서 10분 동안 방치시켰다. 이 때 얻은 각각의 상등액 (용매 층)을 잘 분리하고 분리된 용매 층에 원래의 시료 부피인 100 mL의 증류수를 추가로 가하여 다시 추출하였다. 이 때 얻은 상등액을 이전과 동일한 조건에서 1 mL씩 주사하고 HPLC 를 수행하여 분석하였다. 그 결과는 다음의도 13 - 도 15에 나타내었다.Based on the results of Example 2, the experiment was continued using n-butanol and isobutanol, which were evaluated as suitable for the separation of growth hormone secretion stimulating factors. 250 mL of the fast extract obtained through the process of Example 1 were divided into about 100 mL and treated with two solvents. 100 mL of each sample was treated with 150 mL of n-butanol and isobutanol, and mixed well, and then left at room temperature for 10 minutes. Each supernatant (solvent layer) obtained at this time was well separated and extracted again by further adding 100 mL of distilled water, the original sample volume, to the separated solvent layer. The supernatant obtained at this time was injected by 1 mL under the same conditions as before and analyzed by HPLC. The results are shown in the following FIGS. 13-15 .
도 15을 살펴보면 새로이 증류수를 처리하여 추출하는 경우 성장호르몬 분비자극인자를 제외한 모든 피크가 상대적으로 많이 제거되었고, 실험 과정에서 많은 천연염료 (갈색)가 물 층으로 이전되고 있음을 확인할 수 있었다. 이와 같이 용매 추출 과정에서 증류수를 반복적으로 처리하여 주면 천연염료를 제거하는 동시에 성장호르몬 분비자극인자의 상대적인 순도를 향상시킬 수 있다. 이는 10분 - 25분대의 피크가 수용액 층에 상대적으로 많이 분포하고 있는 현상과 일치한다. n-부탄올 처리 및 이소부탄올 처리 결과를 비교하여 보면 재차 증류수를 처리한 경우 수용액 층으로 이동하는 색의 강도가 매우 달랐다. 즉, n-부탄올의 수용액 층은 짙은 갈색의 염료가 제거되었고 이소부탄올의 수용액 층은 약한 노란 색의 상태를 보여주었다. 이소부탄올을 처리하여 얻은 용매 층의 경향을 분석하여 도 14 에 나타내었다.Referring to FIG. 15 , all the peaks except the growth hormone secretion stimulating factor were relatively removed in the case of newly extracted distilled water, and many natural dyes (brown) were transferred to the water layer during the experiment. In this way, by repeatedly treating the distilled water in the solvent extraction process, it is possible to remove the natural dye and to improve the relative purity of the growth hormone secretion stimulating factor. This is consistent with a phenomenon in which peaks of 10 minutes to 25 minutes are relatively distributed in the aqueous solution layer. Comparing the results of n-butanol treatment and isobutanol treatment, when distilled water was treated again, the intensity of the color shifting to the aqueous solution layer was very different. That is, the aqueous layer of n-butanol had a dark brown dye removed and the aqueous layer of isobutanol showed a weak yellow color. The trend of the solvent layer obtained by treating isobutanol is shown in FIG. 14.
이상과 같이, 각각의 용매 층에 물을 100 mL/회당 가하여 수용액 층을 분리하는 과정을 3회 수행하여 수용액 층으로 여러 가지 불순 물질들을 이동시켰다. 또한, 이를 3회 수행하여 얻은 각각의 용매 층을 다시 에틸 에테르 (ethyl ether) 에 1 : 3 이상의 비로 희석시킨 다음 가만히 방치하였다. 구체적으로, n-부탄올 / 이소부탄올의 경우 100 mL 의 부탄올에 에틸 에테르를 가하여 최종 500 mL 이 되게 하였고 이 때 형성된 아래 갈색 층을 따로 모아 (약 5 mL) 분석한 다음 그 결과를도 16에 나타내었다. 에테르와 부탄올 또는 이소부탄올의 혼합 층은 따로 분리하여 용매 층을 후드 내에서 자연 건조시켰다. 최종적으로 얻어진 에테르-부탄올 층과 에테르-이소부탄올 층에 용해된 물질을 분석하기 위하여 상기와 동일한 방법을 수행하였다. 이 결과는도 17에 나타내었다.As described above, 100 mL / time of water was added to each solvent layer to separate the aqueous layer three times, and various impurities were transferred to the aqueous layer. In addition, each of the solvent layers obtained by performing this three times was diluted with ethyl ether in a ratio of at least 1: 3 and then left to stand still. Specifically, in the case of n-butanol / isobutanol, ethyl ether was added to 100 mL of butanol to a final 500 mL, and the bottom brown layers formed at this time were collected separately (about 5 mL) and analyzed, and the results are shown in FIG. 16 . It was. The mixed layers of ether and butanol or isobutanol were separated separately and the solvent layer was naturally dried in the hood. The same method as described above was performed to analyze the material dissolved in the finally obtained ether-butanol layer and ether-isobutanol layer. The results are shown in Fig.
이상에서 보는 바와 같이, 속단 유래의 성장호르몬 분비자극인자는 분리 과정 중 제거되는 다른 물질과 함께 일부가 물 층으로 용해되는 경향이 있으나 대부분이 여전히 용매인 n-부탄올 층에 존재하며 이는 특히 에테르를 처리하는 단계에서는 에테르-부탄올 층으로 전이되므로 분리가 용이하다. 또한 이 단계에서 성상은 약간의 노란 색만을 지닐 정도로 맑고 초기의 갈색은 완벽하게 제거되었다. 따라서 분리된 에테르 층을 감압 건조시키면 최종적으로 성장호르몬 분비자극인자가 포함된 조성물을 간단히 얻을 수 있다.도 18은 본 발명의 과정으로 최종적으로 분리한 성장호르몬 분비자극인자의 순도를 나타낸 것이다.As can be seen from the above, growth hormone secretion stimulating factors derived from the fast-acting agent, along with other substances removed during the separation process, tend to dissolve in the water layer, but most are still present in the n-butanol layer, which is still a solvent. The treatment step is easy to separate as it is transferred to the ether-butanol layer. Also at this stage the appearance is clear enough to have a slight yellow color and the initial brown is completely removed. Therefore, by drying the separated ether layer under reduced pressure, it is possible to simply obtain a composition containing the growth hormone secretion stimulating factor finally. Figure 18 shows the purity of the growth hormone secretion stimulating factor finally separated by the process of the present invention.
상기에서 살펴 본 바와 같이, 본 발명은 천연 생약재로부터 성장호르몬 분비자극인자를 간단하게 고순도로 대량 추출할 수 있는 방법으로, 이 방법을 이용하여 얻은 수용성 속단 추출물은 불순물이 없고 유효성분의 함량이 높아서 성장호르몬 분비자극 기능과 관련된 다양한 분야에 이용될 수 있다.As described above, the present invention is a method that can easily extract a large amount of growth hormone secretion stimulating factor from a natural herbal medicine with high purity, water-soluble fast extract obtained by using this method is free of impurities and high content of active ingredients It can be used in various fields related to growth hormone secretion stimulating function.
구체적으로, 상기 성장호르몬 분비자극인자가 함유된 조성물은 색소 또는 냄새 문제가 없어 화장품의 원료 등으로, 또한 초기에 침전 현상의 원인을 충분히 제거함으로 음료 첨가물 등으로 유용하게 사용될 수 있어 속단을 포함한 천연 생약재로부터 성장호르몬 분비자극인자를 분리하는 최적의 경제적인 방법이다.Specifically, the composition containing the growth hormone secretion stimulating factor does not have a pigment or odor problem can be useful as a raw material of cosmetics, and also as a beverage additives by sufficiently removing the cause of the precipitation phenomenon in the early stage, including natural fast It is the best economical way to separate growth hormone secretion factors from herbal medicines.
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