KR100352269B1 - 저밀도 지질 단백질에 대해 항산화 활성을 갖는 리그난계 화합물 - Google Patents

저밀도 지질 단백질에 대해 항산화 활성을 갖는 리그난계 화합물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 저밀도 지질 단백질에 대해 항산화 활성을 갖는 리그난계 화합물, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 약학적 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 하기 화학식 1로 표시되는 리그난계 화합물, 삼백초로부터 이 화합물을 분리하여 얻는 방법 및 이 화합물을 유효성분으로 함유하는 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화제 및 저밀도 지질 단백질의 산화와 관련된 동맥경화를 포함하는 순환계 질환의 예방제 및 치료제용 약학적 조성물에 관한 것이다.
상기 식에서 R은 H , 알킬기 또는 벤질기를 나타낸다.

Description

저밀도 지질 단백질에 대해 항산화 활성을 갖는 리그난계 화합물{Lignan-type compound having antioxidant activity against a low density lipoprotein}
본 발명은 저밀도 지질 단백질에 대해 항산화 활성을 갖는 리그난계 화합물, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 약학적 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 하기 화학식 1로 표시되는 리그난계 화합물, 삼백초로부터 이 화합물을 분리하여 얻는 방법 및 이 화합물을 유효성분으로 함유하는 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화제 및 저밀도 지질 단백질의 산화와 관련된 동맥경화를 포함하는 순환계 질환의 예방제 및 치료제용 약학적 조성물에 관한 것이다.
화학식 1
상기 식에서 R은 H , 알킬기 또는 벤질기를 나타낸다.
동맥경화증는 동맥이 비후되고 경화되어 탄력을 잃고 약해진 것으로서, 노화와 더불어 발생하는 주요 질환 중의 하나이다. 동맥경화는 뇌동맥 또는 관상동맥에서 일어나기 쉬운데, 뇌동맥경화증의 경우에는 두통, 현기증, 정신장애를 나타내고 뇌연화증의 원인이 되며 관상동맥경화증의 경우에는 심장부에 동통과 부정맥을 일으켜 협심증, 심근경색 등의 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 또한 이로 인해 고혈압, 심장병, 뇌일혈 등이 유발되어, 동맥경화증으로 인한 질병이 현대 사회에 있어, 특히 50∼60대의 남성들에게 가장 큰 사망요인으로 부각되고 있다. 따라서 동맥경화의 발병 기작을 밝히고 그 예방제 및 치료제를 개발하기 위한 많은 연구가 진행되어 왔다.
동맥경화의 발병 요인으로는 여러 가지가 알려져 있으나, 그 중에서도 특히 저밀도 지질 단백질 (low density lipoprotein, LDL)이 산화되어 생성된 산화된 저밀도 지질 단백질 (Ox-LDL)이 가장 주요한 발병 요인으로 지적되고 있다 (Steinberg. D.et al.,N. Engl. J. Med.,320, 915-924 (1989)). 저밀도 지질 단백질은 혈중 콜레스테롤을 운반하는 단백질 중 하나로서, 이것이 산화되면 본래의 기능을 하지 못하고 혈관 내에서 대식세포 (macrophage)에 의해 작은 거품세포로 변환되는데, 이 거품세포는 혈관 내피세포로 침투되어 평활근을 비후시킨다. 또한 산화된 지질 단백질은 대식세포를 동맥벽에 머무르게 하므로 혈관 내피에 지방선이 형성되고, 이로 인해 동맥경화증이 유발된다.
한편, 삼백초 (三白草,Saururus chinensisBaill)는 삼백초과의 여러해살이 풀로서 중국에서는 예로부터 진통, 이뇨, 소염약으로 사용되어 왔다. 우리 나라에서는 약 10년 전에 삼백초가 제주도에서 자생하는 것이 처음으로 밝혀진 이래 민간에서 암치료 보조약, 또는 순환기계 질환, 신경계 질환, 당뇨병 등의 만성 성인병 치료에 사용되어 왔다.
이에 본 발명자들은 새로운 동맥경화 치료제를 개발하기 위해 국내의 전통 약재 및 민간 약재를 탐색하던 중, 삼백초의 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성이 우수하다는 것을 알아내고 그 유효 성분으로서 삼백초에서 상기 화학식 1에서 R이 H인 리그난계 화합물을 분리해 냈으며, 이 화합물 및 그의 유도체가 저밀도 지질 단백질의 산화를 억제하는 효과가 매우 우수하다는 것을 알아내어 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화제 및 저밀도 지질 단백질의 산화와 관련된 동맥경화 등 순환계 질환의 질병 예방제 또는 치료제로서 이 화합물의 용도를 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 저밀도 지질 단백질에 대해 항산화 활성을 갖는 리그난계 화합물, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 저밀도 지질 단백질 (low density lipoprotein)에 대해 항산화 활성을 갖는 하기 화학식 1로 표시되는 리그난계 화합물 중 하나 이상을 유효성분으로 함유하는, 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화제용 약학적 조성물을 제공한다.
화학식 1
상기 식에서 R은 H, 알킬기 또는 벤질기를 나타낸다.
바람직하기로는 본 발명에서는 상기 화학식 1에서 R이 H , C1∼C6의 알킬기 또는 벤질기인 저밀도 지질 단백질에 대해 항산화 활성을 갖는 리그난계 화합물 중 하나 이상을 유효성분으로 함유하는, 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화제용 약학적 조성물을 제공한다.
더욱 바람직하기로는 상기 리그난계 화합물이 R이 H인 하기 화학식 2의 마칠린 D (machilin D)인 것을 특징으로 하는 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화제용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명에서는 상기 리그난계 화합물이 R이 메틸기인 하기 화학식 3의 비롤린 (virolin)인 것을 특징으로 하는 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화제용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 리그난계 화합물 중 R이 H인 화학식 2의 마칠린 D는 삼백초 (Saururus chinensisBaill)로부터 분리하여 얻을 수 있다.
구체적으로 본 발명은
1) 삼백초 뿌리 분말을 메탄올로 추출하는 단계 (단계 1);
2) 물,n-헥산 및 클로로포름을 사용하여 단계 1의 추출물을 추출하는 단계 (단계 2);
3) 단계 2의 클로로포름 분획을n-헥산과 에틸 아세테이트의 혼합용매를 이동상으로 사용하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리하는 단계 (단계 3);
4) 단계 3의 분획을 메탄올 수용액을 이동상으로 사용한 역상 실리카겔 칼럼크로마토그래피로 분리하는 단계 (단계 4);
5) 단계 4의 분획을 클로로포름과 메탄올의 혼합용매를 이동상으로 사용하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리, 정제하는 단계 (단계 5)
로 이루어지는 마칠린 D의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명에서는 상기 화학식 1에서 R이 알킬기인 경우, 알킬화 반응을 통해 마칠린 D의 4번 위치의 OH를 OR로 바꾸는 것을 특징으로 하는 화학식 1의 리그난계 화합물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 화학식 1의 화합물 중 하나 이상을 유효성분으로 함유하는, 저밀도 지질 단백질의 산화와 관련된 동맥경화를 포함하는 순환계 질환의 예방제 또는 치료제용 약학적 조성물을 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에서는 상기 화학식 2로 표시되는 마칠릴 D를 삼백초로부터 하기와 같은 방법에 의해 분리하여 얻는다.
건조된 삼백초 뿌리 분말을 메탄올로 추출하여 농축한 후, 물과n-헥산으로 추출하여 헥산층을 얻고 물층은 다시 클로로포름으로 추출하여 헥산층, 물층, 클로로포름층을 얻는다. 각각의 분획에 대하여 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성을 측정한 결과 클로로포름층이 가장 강한 항산화 활성을 나타낸다.
클로로포름층을 농축하여 흑갈색의 유성 물질을 얻고, 이 농출액을n-헥산과에틸 아세테이트의 혼합용매를 이동상으로 사용하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리한다. 이 때, 이동상으로는n-헥산 : 에틸 아세테이트 = 90∼10 : 10∼90인 용매를 사용하는 것이 바람직하다.
이 활성분획을 다시 메탄올 수용액을 이동상으로 사용한 역상 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리한다. 이 때, 이동상으로는 10∼100 % 메탄올 수용액을 사용하는 것이 바람직하다.
이 활성분획은 다시 클로로포름과 메탄올의 혼합용매를 이동상으로 사용하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리한다. 이 때, 이동상으로는 클로로포름 : 메탄올 = 100∼70 : 0∼30인 용매를 사용하는 것이 바람직하다.
상기와 같은 방법에 의해 건조된 삼백초 뿌리 1 kg당 12 mg 이상의 마칠린 D를 얻을 수 있다.
또한 화학식 1에서 R이 알킬기인 경우에는 마칠린 D의 4번 위치의 OH를 알킬레이션 반응으로 OR로 바꾸어 제조할 수 있다. 이 때, 알킬화 시약은 제조하고자 하는 알킬기의 종류에 따라 달라질 수 있다. 구체적으로는 디아조메탄 (CH2N2), 탄산칼륨/에틸아이오다이드 (K2CO3/Et-I), 탄산칼륨/에틸브로마이드 (K2CO3/Et-Br), 탄산칼륨/프로필브로마이드 (K2CO3/Pr-Br), 탄산칼륨/벤질브로마이드 (K2CO3/Benzyl bromide)를 사용하는 것이 바람직하다. 또한 반응 용매로는 클로로포름, 디에틸에테르, 에탄올, 아세톤, 디메틸설폭사이드(DMSO) 등을 사용하는 것이 바람직하다.
한편, 상기 화학식 1의 화합물의 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성을 측정하기 위하여, 혈액에서 저밀도 지질 단백질을 추출하고 Cu2+를 첨가하여 산화를 유도한다. 그 결과, 마칠린 D 및 비롤린은 IC50이 각각 2.8 μM, 4.5 μM로서, 저밀도 지질 단백질에 대한 우수한 항산화 활성을 나타낸다. 마칠린 D 및 비롤린의 항산화 활성에 대해서는 아직까지 보고된 바 없으며, 본 발명에 의해 최초로 마칠린 D 및 비롤린의 항산화 활성이 밝혀진 것이다. 따라서 본 발명에 의한 화학식 1의 화합물들은 저밀도 지질 단백질이 산화되어 유발되는 것으로 알려진 동맥경화 등 순환계 질환을 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다.
또한 본 발명에 의한 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있으며, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물이 본 발명에 포함된다.
본 발명에 의한 화합물은 임상투여시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품제제의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 실제 임상투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화학식 1의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용 될 수 있다.
투약 단위는, 예를 들면 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투약량은 바람직하기로는 유효 화합물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다.
화학식 1의 화합물의 유효용량은 0.1∼100 mg/kg이고, 바람직하기로는 0.5∼10 mg/kg 이며, 하루 1∼3 회 투여될 수 있다.
또한 본 발명의 화합물을 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과,경구 독성시험에 의한 50 %치사량 (LD50)은 적어도 1000 mg/kg 이상인 것으로 나타났다.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다.
단, 하기 실시예들은 본 발명을 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 삼백초로부터 마칠린 D의 분리 및 정제
건조된 삼백초 (대한민국 경상남도 거창에서 구입) 뿌리 2 kg을 잘 씻어서 말리고 분쇄기를 사용하여 분쇄하여 분말로 만들었다. 삼백초 분말을 메탄올 6 ℓ에 넣어 상온에서 24시간 동안 방치하였으며, 이후 메탄올 용액을 교반시키고 여과지로 여과하여 액상을 분리하였다. 상기와 같은 메탄올 추출 과정을 모두 4번 반복하여 액상만을 모으고 감압하에서 농축하였다.
상기에서 얻은 메탄올 추출물을 물 2 ℓ에 현탁시키고 여기에 다시n-헥산 2 ℓ를 가하였다. 분별깔대기를 이용하여 헥산층을 분리하였다. 물층은 클로로포름을 가하여 다시 추출하고 분별깔대기를 이용하여 물층과 클로로포름층을 분리하였다.
상기 과정에서 얻은 헥산층 (25 g), 클로로포름층 (20 g) 및 물층(150 g)에 대하여 각각 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성을 측정하였다. 각 분획에 대한 항산화 활성은 하기 실험예의 방법에 의해 측정하였다.
실험 결과 클로로포름층에서 가장 강한 항산화 활성이 나타났으므로, 클로로포름층을 감압하에서 농축, 건조시켜 흑갈색의 유성 (oily) 물질을 얻었다. 클로로포름 추출물은 다시 하기와 같은 방법에 의해 분리, 정제하였다.
n-헥산과 에틸 아세테이트의 비율을 변화시켜 가며 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (실리카겔 : Merck, Art 9385, 칼럼 크기 : Ø7.5 x 45 cm)를 실시하여 상기에서 얻은 클로로포름 추출물을 분리하였다. 그 결과n-헥산 : 에틸 아세테이트 = 60 : 40 인 용매를 사용한 경우 활성물질이 가장 효과적으로 분리되었으며, 이 때 활성물질 2 g을 얻었다.
이 활성분획을 다시 70% 메탄올 수용액을 이동상으로 사용한 C-18 (Merck, Lichroprep RP-18, Art 13900) 칼럼 크로마토그래피 (칼럼 크기 : Ø4.2 x 29 cm)로 분리하여 1 g의 활성분획을 얻었다.
이 활성분획에 대하여 다시 클로로포름과 메탄올의 비율을 변화시켜가며 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (칼럼 크기 : Ø2.6 x 25 cm)를 실시하였다. 클로로포름 : 메탄올 = 98 : 2인 용매를 사용한 경우 활성물질이 가장 효과적으로 분리되었으며, 이 때 순수 활성물질인 마칠린 D 24 mg를 얻을 수 있었다.
<실시예 2> 비롤린의 제조
마칠린 D 5 mg을 작은 유리병에 넣고 클로로포름 0.3 mg을 가해 녹인 후, 에테르성 디아조메탄 1 ㎖를 넣어 밀봉하여 12시간 실온에서 방치해 두었다. 12시간 후 감압하에서 용매를 제거하고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (사용용매 : 클로로포름 : 메탄올 = 98 : 2)로 정제하여 비롤린 4.5 mg (수율 : 90 %)을 얻었다.
<실시예 3> 마칠린 D 및 비롤린의 구조 분석
상기 실시예 1 및 실시예 2를 통하여 얻은 물질은 VG 고분해능 GC/MS 분광기 (VG high resolution GC/MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima, )를 사용하여 분자량 및 분자식을 결정하였으며, 선광도는 편광기 (Jasco DIP-181 digital polarimeter)를 사용하여 측정하였다. 또한 핵자기 공명 (NMR) 분석 (Bruker DMX 600, Bruker AMX 500)을 통하여1H NMR,13C NMR, 호모-코지 (HOMO-COSY), HMQC (1 H-Detected heteronuclearMultiple-QuantumCoherence), HMBC (Heteronuclear Multiple-Bond Coherence), DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization) 스펙트럼을 얻고, 분자구조를 결정하였다. 측정 결과는 하기와 같으며, 발표된 문헌의 것과 비교 분석한 결과, 화학식 2의 화합물은 마칠린 D (Shimomura, H., Sashida, Y. and Oohara, M.Phytochemistry 26: 1513-1515, 1987)로, 화학식 3의 화합물은 비롤린 (Zacchino, S. A.J. Nat. Prod. 57: 446-451, 1994)으로 동정하였다.
마칠린 D
1) 물성 : 담갈색 무정형 분말
2) 선광도 : [α]D 25-88(c=4, CHCl3)
3) 분자량: 344
4) 분자식: C20H24O5
5)1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) :표 1참조
6)13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) :표 1참조
마칠린 D의 NMR 결과
위치 1H (적분값) multiplicity (J) 13C
1 132.6
1' 134.1
2 6.84(1H) d(1.8) 110.2
2' 6.85(1H) d(2.0) 109.9
3-OCH3 3.78(3H) s 56.6
3 147.4
3' 151.4
4-OCH3 3.82(3H) s 56.8
4 146.2
4-OH 5.66(1H) s
4' 147.3
5 6.86(1H) d(8.2) 114.8
5' 6.80(1H) d(8.2) 119.6
6 6.78(1H) dd(1.8, 8.2) 121.4
6' 6.79(1H) dd(2.0, 8.2) 119.4
7 4.53(1H) d(8.3) 79.1
7-OH 4.12(1H) bs
7' 6.27(1H) d(1.5, 15.7) 131.3
8 4.02(1H) dq(6.3, 8.3) 84.8
8' 6.06(1H) dq(6.6, 15.7) 125.5
9 1.07(3H) d(6.3) 17.7
9' 1.79(3H) d(1.5, 6.6) 19.0
비롤린
1) 물성 : 담갈색 무정형 분말
2) 선광도 : [α]D 25-32(c=1, CHCl3)
3) 분자량: 356
4) 분자식: C21H26O5
5)1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) :표 2참조
6)13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) :표 2참조
비롤린의 NMR 결과
Atom 1H (적분값) multiplicity (J) 13C
1 132.5
1' 146.7
2 6.86(1H) 110.0
2' 150.8
2'-OCH3 3.85(3H) s 55.7
3 149.0
3' 6.85(1H) 109.2
3-OCH3 3.82(3H) s 56.9
4 148.8
4' 133.5
4-OCH3 3.81(3H) s 56.9
5 6.76(1H) d(8.2) 110.8
5' 6.79(1H) dd(1.8, 8.2) 118.8
6 6.84(1H) dd(1.9, 8.2) 120.0
6' 6.87(1H) d(8.2) 119.0
7 4.56(1H) d(8.4) 78.4
7' 6.28(1H) d(1.4, 15.8) 130.4
7-OH bs
8 4.02(1H) dq(6.3, 8.3) 84.2
8' 6.08(1H) dq(6.6, 15.8) 124.9
9 1.09(3H) d(6.2) 17.0
9' 1.80(3H) d(1.4, 6.6) 18.3
<실험예> 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성
하기와 같은 실험을 통하여, 삼백초에서 분리한 상기 화학식 1의 화합물의 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성을 조사하였다.
Cu2+은 저밀도 지질 단백질의 산화를 유도 (Cu2+mediated LDL-oxidation)하는 것으로 알려져 있다. 따라서 본 발명에서는 이 때 생성된 불포화 지방산의 산화산물인 디알데하이드 (dialdehyde)를 TBA (thiobarbituric acid)법으로 측정하여, 화학식 1의 화합물의 항산화 활성을 조사하였다 (Packer, L. Ed. (1994)Methods in EnzymologyVol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego).
사람의 혈장 300 ㎖를 초원심분리기로 100,000 ×g에서 24 시간 동안 원심분리하여 상층에 부유된 고밀도 지질 단백질 (VLDL) / 킬로마이크론 (Chylomicron) 층을 제거하고 나머지 용액의 비중을 1.063 g/㎖로 맞춘 후, 100,000 ×g에서 24 시간 동안 원심분리하여 다시 상층에 부유된 저밀도 지질 단백질 35 ㎖ (1.5∼2.5 mg protein/㎖)를 분리하였다. 이렇게 분리한 저밀도 지질 단백질 50 ㎕ (단백질 50∼100 ㎍)을 10 mM 인산 완충 용액 (phosphate-buffered saline, PBS) 180 ㎕와 혼합하고, 여러 농도로 준비된 리그난계 화합물 용액을 각각 10 ㎕씩 첨가하였다. 마칠린 D 및 비롤린은 각각 DMSO (dimethylsulfoxide)에 녹여 사용하였으며, 실험에 사용하기 전에 여러 농도로 희석하였다. 대조군으로는 용매만을 첨가한 것을사용하였다.
상기 용액에 0.25 mM CuSO410 ㎕를 첨가하여 37℃에서 2시간 동안 반응시키고, 20% 트리클로로아세트산 (trichloroacetic acid, TCA) 용액 1 ㎖를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 0.05 N NaOH 용액에 녹인 0.67% TBA 용액 1 ㎖를 첨가하고 10초간 교반시킨 후 95℃에서 5분 동안 가열하여 발색 반응이 일어나도록 하고 얼음물로 용액을 냉각하였다. 이 용액을 3000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 분리하였으며, 자외선-가시광선 분광기로 540 nm에서의 흡광도를 측정하여 상기 발색 반응으로 생성된 말론디알데하이드 (malondialdehyde, MDA)의 양을 구하였다.
한편, 테트라메톡시프로판(말론알데하이드 비스(디메틸아세탈)) (tetramethoxypropane(malonaldehyde bis(dimethylacetal))의 저장용액을 이용하여 0∼5 nmol 말론디알데하이드를 포함하는 PBS 표준용액을 250 ㎕씩 만들었다. 이 표준용액을 상기와 같은 방법으로 발색시켜 540 nm에서의 흡광도를 측정하고, 말론디알데하이드의 표준곡선을 구하였다. 화학식 1의 화합물을 사용한 상기 실험에서 말론알데하이드의 양은 이 표준곡선을 이용하여 정량하였다.
화학식 1의 화합물의 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성을 하기표 3에 나타내었다.
화학식 1의 화합물의 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성
화합물 IC50(μM)
마칠린 D 2.8
비롤린 4.5
상기표 3에서 볼 수 있듯이, 본 발명에 의한 리그난계 화합물인 마칠린 D 및 비롤린은 IC50이 각각 2.8 μM, 4.5 μM로서 매우 낮게 나타나 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화 활성이 우수함을 알 수 있었다. 따라서 본 발명에 의한 화학식 1의 화합물은 저밀도 지질 단백질이 산화되어 유발되는 것으로 알려진 동맥경화 등 순환계 질환의 예방제 또는 치료제로서 유용히 사용될 수 있다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 리그난계 화합물인 화학식 1의 화합물, 특히 마칠린 D 및 비롤린은 저밀도 지질 단백질의 산화를 방지하는 효과가 우수하므로 저밀도 지질 단백질에 대한 항산화제를 비롯하여 저밀도 지질 단백질이 산화되어 유발되는 것으로 알려진 동맥경화 등 순환계 질환의 예방 또는 치료를 목적으로 유용히 사용될 수 있다.

Claims (5)

  1. 저밀도 지질 단백질 (low density lipoprotein)에 대해 항산화 활성을 갖는 하기 화학식 1로 표시되는 리그난계 화합물 중 하나 이상을 유효성분으로 함유하는, 저밀도 지질 단백질의 산화와 관련된 동맥경화의 예방 및 치료에 유용한 약학적 조성물.
    화학식 1
    상기 식에서 R은 수소 또는 메틸기를 나타낸다.
  2. 제 1 항에 있어서, 리그난계 화합물은 R이 H인 하기 화학식 2의 마칠린 D (machilin D)인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    화학식 2
  3. 제 1 항에 있어서, 리그난계 화합물은 R이 메틸기인 하기 화학식 3의 비롤린 (virolin)인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    화학식 3
  4. 제 2 항에 있어서, R이 H인 화학식 2의 마칠린 D는 삼백초 (Saururus chinensisBaill)로부터 분리하여 얻는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  5. 삭제
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