KR100351177B1 - Isolation of novel Lactobacillus fermentum YL-3 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 신규 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 균주에 관한 것으로, 본 발명의 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 균주는 pH2.5의 인공위액에서 12시간 후에도 사멸하지 않고 최초 접종 농도를 유지하고, 2.0% 의 Oxgall 첨가배지에서 24시간 후에도 사멸하지 않고 최초 접종 농도를 유지하는 특성을 가지고 있다. 또한 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 균주는 병원성 균주인 살모넬라균 (Salmonella enteritidis) 과 대장균 (Escherichia coli0157:H7) 과 혼합 배양하였을 경우, 15-16 시간 후에 이들 병원성 균주들을 모두 사멸시키는 특성을 가지고 있다. 이상의 특성을 가지는 젖산균 YL-3 균주는 다른 균주 및 동종인 젖산균의 다른 균주들과 확실히 구분되는 신규 균주이다.First the present invention relates to novel lactic acid bacteria YL-3 (Lactobacillus fermentum YL- 3) strain, the lactic acid bacteria YL-3 (Lactobacillus fermentum YL- 3) the strain of the present invention is not killed after 12 hours in artificial gastric juice of pH2.5 Maintaining the inoculation concentration and maintaining the initial inoculation concentration without killing after 24 hours in the 2.0% Oxgall medium added. In addition, Lactobacillus fermentum YL-3 strain killed all of these pathogenic strains after 15-16 hours when mixed with the pathogenic strains Salmonella enteritidis and Escherichia coli 0157: H7. Has characteristics. Lactic acid bacteria YL-3 strain having the above characteristics is a novel strain that is clearly distinguished from other strains and other strains of the same lactic acid bacteria.

Description

신규한 젖산균 ＹＬ-3 균주의 분리{Isolation of novel Lactobacillus fermentum YL-3}Isolation of novel Lactobacillus fermentum YL-3}

본 발명은 축산용 생균제로 사용하기 위한 신규한 젖산균 YL-3 균주를 분리하고, 기존의 젖산균과는 다른 YL-3 균주의 특성을 규명한 것이다.The present invention is to isolate a novel lactic acid bacteria YL-3 strain for use as a livestock probiotic, and to characterize the YL-3 strain different from the existing lactic acid bacteria.

오늘날, 동물들은 유산균을 포함한 생균제를 요구한다. 야생동물들은 어미와환경으로부터 장내 정상 균총을 빠르게 구성하지만, 인간에 의해서 오랫동안 길들여진 가축들은 어미와 접촉하는 것이 제한되고, 인공사료를 섭취하며, 인위적인 환경조건에 처해지는 경향이 있기 때문에 질병에 저항하는 정상적인 장내 균총을 구성하지 못하므로 면역 결핍 현상을 나타내고 심지어 사망에까지 이르게 된다. 그리그 성축의 장내 균총도 사료와 항생제, 스트레스등에 영향을 크게 받기 때문에 생균제인 유산균을 인위적으로 사료에 첨가하여 급여하는 경우가 크게 늘어나고 있다. 이에 대한 중요성을 인식하여 1947년 처음으로 동물에 대한 연구를 시작하였고, 자돈의 장내 유산균을 투여하여 건강 증진과 증체 효과를 확인하는 실례가 보고된 이후, 생균제는 1974년 ParKer와 Fuller에 의해 살아있는 미생물 첨가제의 개념으로 정립되었다. 그러나 오늘날, 가축 유산균 생균제 제조사의 대부분은 외국으로부터 유산균 원료를 수입하여 제품화하기 때문에 국내의 생산 기술은 발전을 하고 있지 못하고 있으며 국내 환경에 맞는 생균제의 부족으로 축산업에서는 경제적으로 큰 손실을 안고 있는 실정이다.Today, animals require probiotics, including lactic acid bacteria. Wild animals make up the normal intestinal flora from their mothers and the environment, but livestock that has been tamed for a long time by humans resists disease because they have limited contact with their mothers, consume artificial feeds, and are prone to artificial environmental conditions. Does not form a normal intestinal flora, resulting in immunodeficiency and even death. The intestinal flora of Grieg's livestock is also greatly affected by feed, antibiotics, and stress, so that probiotics, lactic acid bacteria, are added artificially to feed. Recognizing the importance of this, in 1947, the first study of animals was started, and after the report of confirming the health promotion and the increase effect by administering intestinal lactobacillus of piglets, probiotics were living microorganisms by ParKer and Fuller in 1974. Formulated with the concept of additives. However, today, most of livestock lactic acid bacteria probiotic manufacturers import and commercialize lactic acid bacteria raw materials from foreign countries, so domestic production technology is not developing and there is a great economic loss in livestock industry due to the lack of probiotic suitable for domestic environment. .

생균제(Probiotic)란 단어는 고대 그리스의에서 유래된 것으로 '생명을 의하여'라는 뜻으로 시작으로 다양한 의미로 쓰이고 있었으나 1965년 Lilley와 Stilwall이 처음으로 사용한 이래 , 1974년 Parker에 의해 장관 내 균총간의 균형을 조절할 수 있는 세균이나 물질로 정의하였고, 1989년 Fuller에 의해 장내 미생물의 균형을 개선하므로써 숙주동물에게 유익한 작용을 유도할 수 있는 살아있는 생균제제로 개념이 확정되었다. 생균제는 다음과 같은 조건이 필요하다. 첫째, 제조 보관이 용이하며, 소화관내에서 생존성이 높아야한다. 즉, 살아있는 상태로 섭취되어 장관에 도달하여야 하기 때문에 제품제조 후 일정 시간 이상 그 활성을 유지하여야 하며, 다른 첨가제인 항생제, 방부제와 혼합 및 pellet등의 제조 후에도 그 활성이 유지되어야 한다. 둘째, 생균제 속에는 적정량의 생균이 존재해야 한다. 한 예로 젖산균(Lactobacillus)과 대장균(E. coli) 과의 혼합배양에서 젖산균 (Lactobacillus)이 1×108CFU/ml 경우 대장균(E. coli) 의 균수를 감소시킬 수 있지만 1×105CFU/ml 경우에는 증식을 억제시키지 못한다. 셋째, 안정성이 요구된다. 미생물은 증식 속도가 빠르고 변이주의 생성 가능성이 높기 때문에 균주의 분류학적 위치가 명확하고 안정성이 확립된 균주를 사용하여야 한다. 넷째, 섭취된 생균의 활성도가 빨라야 한다. 유해균의 일종인 대장균(E. coli) 등은 증식 속도가 아주 빠르기 때문에 활성 속도가 느리면 그 효과를 기대하기 어렵다. 다섯째, 생균제의 투여시 그 효과가 일정해야 한다. 여섯째, 유용균의 증식을 촉진시키며, 정상 균총의 분포를 유지시켜야 한다. 일곱째, 장 점막에 점착성이 강하여 분변과 함께 배출이 적어야 한다. 여덟째, 소화관내의 분변과 정맥의 혈중 암모니아 함량을 저하할 수 있어야 한다. 아홉째, 항생제나 기타 화학 요법제와 병용하여도 길항 작용이 없어야 한다. 또한 가축에 있어서는 증체율의 개선, 사료 효율의 증가와 가축의 건강개선을 유도 할 수 있어야 하며, 가축의 변비, 설사의 예방 및 치료, 투여방법의 용이성과 함께 가격이 저렴하여야 한다. 그리고 영양 흡수를 저해하는 요인들인 트립신효소 저해제 (trypsin inhibitor), 피틱산 (phytic acid), 글루코시놀산 (glucosinolate) 등을 소화시킬 수 있어야 한다.The word Probiotic is derived from ancient Greek and used in a variety of senses, beginning with the meaning of 'life', but since it was first used by Lilley and Stilwall in 1965, the balance between intestinal flora by Parker in 1974 The concept was defined as a bacterium or substance that can control the disease. In 1989, the concept was defined by Fuller as a living probiotic that can induce beneficial effects on host animals by improving the balance of intestinal microorganisms. Probiotics require the following conditions: First, it should be easy to manufacture and store and have high viability in the digestive tract. In other words, since the intake of the live state to reach the intestinal tract, the activity must be maintained for a certain time after manufacture of the product, and the activity must be maintained even after the preparation of other additives such as antibiotics, preservatives and pellets. Second, an appropriate amount of live bacteria must be present in the probiotics. For example, lactic acid bacteria (Lactobacillus) And E. coli (E. coliLactic acid bacteria in mixed culture withLactobacillus)this 1 × 108E. coli (CFU / ml)E. coli) Can be reduced, but 1 × 105CFU / ml does not inhibit proliferation. Third, stability is required. Since the microorganism has a rapid growth rate and a high possibility of generating mutant strains, strains having a clear taxonomic location and stability should be used. Fourth, the activity of ingested live bacteria should be fast. E. coli, a kind of harmful bacteriaE. coli) Is very fast growth rate, so if the activation rate is slow it is difficult to expect the effect. Fifth, the effect of administration of probiotics should be constant. Sixth, to promote the growth of useful bacteria, and maintain the distribution of normal flora. Seventh, strong adhesion to the intestinal mucosa should be less discharged with feces. Eighth, blood ammonia in feces and veins in the digestive tract should be reduced. Ninth, in combination with antibiotics or other chemotherapy agents, there should be no antagonism. In addition, the livestock should be able to improve the weight gain rate, increase the feed efficiency and improve the health of the livestock, and should be inexpensive with the ease of constipation, the prevention and treatment of diarrhea and the administration method. In addition, trypsin inhibitors, phytic acid and glucosinolate, which are factors that inhibit nutrient absorption, must be digested.

또한 유산균의 중요한 기능 중의 하나는 항균성 물질인 박테리오신 (bacteriocin)을 생성하여 유해 미생물을 억제하는 것이다. 이 박테리오신 (bacteriocin) 에 대한 연구는 1947년 Mattick와 Hirsch에 의해 스트렙토코코스 (Streptococcus diacetilacits) 로부터 폴리펩티드 구조를 갖는 니신 (Nisin)이라는 항균 물질을 분리하면서 지금까지도 계속해서 박테리오신에 대한 작용성과 특성이 밝히고 있으며, 아직도 명명되지 않은 박테리오신에 대한 연구가 진행 중에 있다. 생균제로 사용되고 있는 미생물은 젖산균 (Lactobacillus), 비피도박테리움 (Bifidobacterium), 엔테로코코스 (Enterococcus) 와 같은 유산균이 주류를 이루고 있으며, 페디오코코스 (Pediococcus), 프로피오니박테리움 (Propionibacterium), 바실러스 (Bacillus) 그리고 효모등은 주로 동물에게 사용되고 있다. 현재 가장 많이 사용되고 있는 균주는 젖산균 (Lactobacillus) 과 비피도박테리움 (Bifidobacterium) 이며, 발효유, 건강식품, 유산균 정장제, 동물 약품 등에 사용되고 있다. 이러한 유산균들이 생균제로서 각광을 받는 이유는 탄수화물을 다량 소비함으로써 유산을 많이 생성하므로 식품이나 사료에서 부패를 막고 맛을 개선하며, 사람과 가축의 장내에서 영양분의 흡수 촉진, 변비 개선, 항암 작용, 면역 기능 강화, 또한 다당류와 올리고당을 생성하기 때문에 식품제조의 Starter나 생균제로서 널리 이용되고 있다.In addition, one of the important functions of lactic acid bacteria is to produce harmful bacteriocin (bacterial bacteriocin) to suppress harmful microorganisms. The study of bacteriocin has continued to reveal the functionality and properties of bacteriocin to date, in 1947, by Mattick and Hirsch, separating the antimicrobial substance Nisin, which has a polypeptide structure, from Streptococcus diacetilacits . There is still research on unnamed bacteriocins. Microorganisms used as probiotics are lactic acid bacteria (Lactobacillus), Bifidobacterium (Bifidobacterium), enterovirus, and forms a lactic acid liquor, such as Cocos (Enterococcus), Peddie OKO Course (Pediococcus), propionic sludge tumefaciens (Propionibacterium), Bacillus ( Bacillus ) and yeast are mainly used in animals. Strains that are currently the most widely used such as lactic acid bacteria are used (Lactobacillus) and Bifidobacterium are (Bifidobacterium), fermented milk, healthy foods, lactic acid jeongjangje animal drugs. The reason why these lactic acid bacteria are spotlighted as probiotics is that they produce a lot of lactic acid by consuming large amounts of carbohydrates, thus preventing corruption and improving taste in food and feed, promoting the absorption of nutrients in the intestines of humans and livestock, improving constipation, anticancer action, immunity. It is widely used as a starter or probiotic in food manufacturing because it enhances function and produces polysaccharides and oligosaccharides.

생균제로서 사용되는 유산균이 갖추어야 할 조건으로는 내산성, 내담즙성, 장내 병원성에 대한 길항 작용 및 장내 정착성등이 있다. 그 중에서 위액은 염산의 낮은 pH에 의해 외부 미생물이 생존 상태로 위를 통과하지 못하도록 작용을 하므로산에 대한 내성에 따라 생존율이 좌우될 것으로 본다. 그리하여 낮은 pH에 견딜 수 있고, 0.3%담즙산에도 견디며 유해균인 살모넬라균 (Salmonella enteritidis), 대장균 (E. coli)등을 억제시킬 수 있는 YL-3 균주를 닭의 맹장에서 1차적으로 선발하였고, 균을 동정한 결과 젖산균 (Lactobacillus fementum) 으로 동정하였고 YL-3 으로 명명하였다.The conditions for lactic acid bacteria used as probiotics include acid resistance, bile resistance, antagonism against intestinal pathogenicity and intestinal fixation. Among them, the gastric juice acts to prevent external microorganisms from passing through the stomach due to the low pH of hydrochloric acid, so the survival rate depends on the resistance to acid. Thus, YL-3 strains, which can withstand low pH, withstand 0.3% bile acids and inhibit harmful bacteria such as Salmonella enteritidis and E. coli , were selected primarily from the caecum of chickens. Lactobacillus fementum was identified as YL-3.

본 발명의 주된 목적은 신규 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 균주에 관한 것으로, 본 발명의 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 균주는 pH2.5의 인공위액에서 12시간 후에도 사멸하지 않고 최초 접종 농도를 유지하고, 2.0%의 Oxgall 첨가배지에서 24시간 후에도 사멸하지 않고 최초 접종 농도를 유지하는 특성을 가지고 있다. 또한 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 균주는 병원성 균주인 살모넬라균 (Salmonella enteritidis) 과 대장균 (Escherichia coli 0157:H7) 과 혼합 배양하였을 경우, 15-16 시간 후에 이들 병원성 균주들을 모두 사멸시키는 특성을 가지고 있다. 이상의 특성을 가지는 젖산균 YL-3 균주를 분리하였다.The main object of the present invention relates to novel lactic acid bacteria YL-3 (Lactobacillus fermentum YL- 3) relates to a strain of lactic acid bacteria YL-3 (Lactobacillus fermentum YL- 3) the strain of the present invention killed after 12 hours in artificial gastric juice of pH2.5 It maintains the initial inoculation concentration without maintaining the initial inoculation concentration after 24 hours in the 2.0% Oxgall medium added. In addition, Lactobacillus fermentum YL-3 strain killed all of these pathogenic strains after 15-16 hours when mixed with the pathogenic strain Salmonella enteritidis and Escherichia coli 0157: H7. Has characteristics. Lactic acid bacteria YL-3 strain having the above characteristics was isolated.

이하, 본 발명의 구성 및 작용을 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the configuration and operation of the present invention will be described in detail.

제 1도는 젖산균 YL-3 의 pH 변화에 대한 내산성 실험을 실시한 결과이다.1 is a result of the acid resistance test for the pH change of lactic acid bacteria YL-3.

제 2도는 젖산균 YL-3 의 0.3% Oxgall 조건하에서 내담즙성 실험을 실시한 결과이다.FIG. 2 shows the results of bile resistance test under 0.3% Oxgall condition of lactic acid bacterium YL-3.

제 3도는 젖산균 YL-3 의 여러 농도의 Oxgall 조건하에서 내담즙성 실험을 실시한 결과이다.FIG. 3 shows the results of bile resistance test under various conditions of Oxgall of lactic acid bacterium YL-3.

제 4도는 젖산균 YL-3 의 내열성 실험을 실시한 결과이다.4 is a result of the heat resistance test of lactic acid bacteria YL-3.

제 5도는 젖산균 YL-3 의 병원성균 생장억제 실험을 실시한 결과이다.5 is a result of the experiment to inhibit the growth of pathogenic bacteria of lactic acid bacteria YL-3.

제 6도는 젖산균 YL-3 의 병원성균 생장억제 실험 중 pH 의 변화를 나타낸 결과이다.FIG. 6 shows the results of pH change during experiments on growth inhibition of pathogenic bacteria of lactic acid bacteria YL-3.

본 발명은 젖산균 분리단계; 내산성 특성조사단계; 내담즙성 특성조사단계: 내열성 특성조사단계; 및 병원성균 생장억제 특성조사단계로 이루어진다.The present invention is lactic acid bacteria separation step; Acid resistance investigation step; Bile resistance characterization step: heat resistance characterization step; And the pathogenic bacteria growth inhibition characteristics investigation step.

먼저 내산성을 가진 균주를 분리하기 위하여 우선적으로 원액의 농염산으로pH3.5로 조정한 혐기 희석액에 닭으로부터 절단한 맹장을 넣고 2시간 동안 진탕하여 139종의 균주를 분리하였다. 분리된 균주를 0.3x oxgall powder(Sigma)을 첨가한 MRS배지, BL배지, BHI배지에 도말하여 호기, 혐기배양을 실시하여 생존 여부를 확인한 후 생존한 111종의 균주를 분리하였다. 이 중 pH2.5에서의 저항성, 0.3x 담즙에 대한 저항성과 산 생성을 나타내고 Gram(+)을 나타내는 34균주를 최종적으로 선발한 후 이 분리 균주를 미생물 신속동정기를 사용하여 동정하였다. 최종 선발된 5그룹의 균주들 중에 GRAS(Generally Recommend As Safe) 미생물이면서 생균제로서 널리 이용되고 있는 젖산균 (Lactobacillussp.) 을 중심으로 실험을 실시하였다. 젖산균 중에서 균주를 선택하기 위하여 우선적으로 pH 2.0에서 3hr 동안 진탕함으로써 생존여부를 비교하고 다른 병원성균의 빠른 성장속도에 경쟁할 수 있도록 빠른 성장을 보이는 균주를 중심으로 실험을 한 결과 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 을 최종적으로 선발하였다.First, in order to isolate the strain having acid resistance, the cecum cut from the chicken was put into an anaerobic dilution adjusted to pH 3.5 with concentrated hydrochloric acid of the stock solution, and shaken for 2 hours to isolate 139 strains. The isolated strain was smeared onto MRS medium, BL medium and BHI medium to which 0.3x oxgall powder (Sigma) was added to perform aerobic and anaerobic culture. Of these, the strains at pH2.5, resistance to 0.3x bile and acid formation, and finally showing 34 strains showing Gram (+) were finally selected, and the isolates were identified using a microorganism rapid identifier. Among the 5 selected strains, experiments were carried out mainly on lactic acid bacteria ( Lactobacillus sp.), Which are widely used as probiotics and GRAS (Generally Recommend As Safe) microorganisms. In order to select the strain among the lactic acid bacteria, it was first shaken at pH 2.0 for 3hr to compare the survival and the experiment was conducted on the strains showing the rapid growth so that they could compete with the rapid growth rate of other pathogenic bacteria. Lactobacillus fermentum YL-3) was finally selected.

최종 선발된 균주인 젖산균 YL-3의 내산성을 실험하기 위하여 대조구로 pH 6.5±0.2 인 MRS 액체배지와 농염산으로 MRS 액체배지의 pH를 pH 3.0, pH 2.5, pH2.0으로 맞춘 후 시간별로 생존 균수의 변화를 측정하였다. 그 결과 선발된 젖산균 YL-3은 pH2.0에서 12시간 후에도 107CFU/ml을 유지하고 있고 미생물 사멸 작용이 급격히 일어난다는 pH 2.5에서도 12시간이 지난 후에 오히려 균수가 다시 증가하는 경향이 있었다.To test the acid resistance of lactic acid bacterium YL-3, the selected strain, the pH of MRS liquid medium with pH 6.5 ± 0.2 and MRS liquid medium with concentrated hydrochloric acid were adjusted to pH 3.0, pH 2.5, and pH 2.0. The change in the number of bacteria was measured. As a result, the selected lactic acid bacteria YL-3 maintained 10 7 CFU / ml even after 12 hours at pH2.0, and the bacterial count tended to increase again after 12 hours even at pH 2.5, where the microbial killing effect occurred rapidly.

최종 선발 균주인 젖산균 YL-3의 내담즙성을 실험하기 위하여 0.3% oxgall 농도에서의 생존성 및 시간별 생존 균수의 변화를 확인, 측정하였다. 그 결과 0.3%oxgall이 첨가된 MRS 액체배지에서 느린 성장속도를 나타내고 있다. 하지만 첨가된 담즙에 의해 균이 저해되거나 사멸되지 않고 대조구에 비해 느린 성장을 나타내나 계속적인 성장을 나타낸다. 따라서, 닭의 맹장에서 분리한 젖산균 YL-3 은 0.3% oxgall이 첨가된 MRS 액체배지에서도 성장할 수 있는 균주이다. 또한 담즙의 농도를 달리하여 농도에 따른 담즙에 대한 내성을 실험한 결과, 담즙이 0.5, 1.0, 2.0%가 첨가된 액체배지에서도 0.3%을 첨가했을 때와 거의 같은 결과를 나타내었고, 이 결과로 담즙에 강한 내성을 갖는 균주 임을 확인할 수 있다.In order to test the bile resistance of lactic acid bacteria YL-3, the final selection strain, the viability at 0.3% oxgall concentration and the change of viable bacterial counts over time were measured and measured. As a result, it showed a slow growth rate in MRS liquid medium added with 0.3% oxgall. However, the added bile did not inhibit or kill the bacteria and showed slower growth compared to the control but continued growth. Therefore, lactic acid bacteria YL-3 isolated from the caecum of chicken is a strain that can grow in MRS liquid medium added with 0.3% oxgall. In addition, as a result of testing the resistance to bile according to the concentration of bile, the result was almost the same as when 0.3% was added even in the liquid medium containing 0.5, 1.0, 2.0% of bile. It can be confirmed that the strain has a strong resistance to bile.

최종 선발된 균주인 젖산균 YL-3의 내열성 실험을 실시한 결과, 45℃에서는 50%의 균수 감소를 나타내고 있지만 120분 동안에 그 균수를 유지한다. 그러나 50℃이상의 온도에서는 급속히 감소함을 나타내었다.As a result of the heat resistance test of the lactic acid bacterium YL-3, which is the final selected strain, the bacterial cell count was reduced by 50% at 45 ° C., but the bacterial count was maintained for 120 minutes. However, it showed a rapid decrease at the temperature above 50 ℃.

최종 선발된 젖산균 YL-3의 병원성균에 대한 생장억제 실험을 실시한 결과, 혼합배양 후 8시간 이후로 두 개의 병원성균은 급격이 감소하기 시작하였으며 살모넬라균(Salmonella enteritidis) 는 혼합 배양 후 15시간에는 균이 나타나지 않았으며, 대장균 (E. coli0157:H7) 은 16시간이후 균이 보이지 않았다. 또한 단독 배양과 혼합배양시의 pH를 측정하여 제 6도에 나타내었다. 8시간 이후 pH는 4.2 이하로 떨어졌고, 그 이후는 pH4.1 정도을 유지하였다. 따라서 젖산균 YL-3 는 병원성균의 성장을 억제하는 탁월한 능력을 가지고 있는 것으로 판명되었다.As a result of growth inhibition experiment on the pathogenic bacteria of lactic acid bacterium YL-3, the two pathogenic bacteria began to decrease rapidly after 8 hours after mixed culture, and Salmonella enteritidis at 15 hours after mixed culture. E. coli 0157: H7 did not show any bacteria after 16 hours. In addition, the pH of the single culture and the mixed culture was measured and shown in FIG. After 8 hours, the pH dropped to 4.2 or less, and after that, the pH was maintained at about 4.1. Therefore, lactic acid bacteria YL-3 was found to have an excellent ability to inhibit the growth of pathogenic bacteria.

이하, 본 발명은 실시예를 통하여 보다 상세히 설명하나 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지는 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited by these Examples.

실시예 1 : 젖산균 YL-3 의 분리Example 1 Isolation of Lactic Acid Bacteria YL-3

1차적으로 내산성을 가진 균주를 분리하기 위하여 우선적으로 원액의 농염산으로 pH3.5로 조정한 혐기 희석액 100ml에 닭으로부터 절단한 맹장을 넣고 교반기에서 2시간 동안 진탕하였다. 여기서 생존한 균주를 분리하기 위하여 선택배지 (LBSTM), 비선택배지(MRS, BL, BHI)을 사용하였다. pH 3.5에서 2시간 동안 진탕시킨맹장을 멸균한 혐기 희석액 A을 사용하여 10배 단계 희석 후 도말하였다. 37℃, 24∼48시간 동안 호기 배양과 Anaerobic jar(anaerobic system, Difco)을 사용한 혐기 배양을 실시한 후 단일 집락을 분리하여 BL배지에 계대 배양하였다. 이 결과 139종의 균주를 분리하였다.In order to isolate the strains having acid resistance primarily, caecum cut from chickens was added to 100 ml of an anaerobic dilution adjusted to pH 3.5 with concentrated hydrochloric acid of the stock solution and shaken for 2 hours in a stirrer. Selection medium (LBS TM ) and non-selection medium (MRS, BL, BHI) were used to isolate the surviving strain. The plaques shaken for 2 hours at pH 3.5 were plated after 10-fold dilution using sterile anaerobic dilution A. After aerobic culture and anaerobic culture using Anaerobic jar (anaerobic system, Difco) at 37 ℃, 24 to 48 hours, a single colony was separated and passaged in BL medium. As a result, 139 strains were isolated.

2차적으로 분리된 균주를 각각 MRS 액체배지와 BHI 액체배지에 옮겨 24∼48hr 배양하여 사용하였다. 혐기 희석액 A을 농염산으로 pH 2.5로 조정하여 멸균하였다. 이 혐기 희석액 100ml에 각각 분리한 균주를 1% 접종 후 2시간 동안 37℃에서 정치한 후 0.3% oxgall powder(Sigma)을 첨가한 MRS배지, BL배지, BHI배지에 도말하여 호기, 혐기배양을 실시하여 생존 여부를 확인한 후 생존한 균주만을 분리하였다. 이 결과 111종의 균주를 분리하였다.Secondly isolated strains were transferred to MRS liquid medium and BHI liquid medium, respectively, and used for 24 to 48hr culture. Anaerobic dilution A was sterilized by adjusting to pH 2.5 with concentrated hydrochloric acid. Each strain isolated in 100 ml of the anaerobic dilution solution was incubated at 37 ° C for 2 hours after 1% inoculation, and then plated on MRS medium, BL medium and BHI medium containing 0.3% oxgall powder (Sigma) to perform aerobic and anaerobic culture. After confirming the survival by only separating the surviving strain. As a result, 111 strains were isolated.

3차적으로 pH2.5에서의 저항성, 0.3% 담즙에 대한 저항성과 산 생성을 나타내고 Gram(+)을 나타내는 34균주를 최종적으로 선발한 후 이 분리 균주를 미생물 신속동정기 (MIDI SherlocK MIS system, HP 6890 Series GC System, USA) 를 사용하여 동정하였다. 최종 선발된 5그룹의 균주들 중에 CRAS(Generally Recommend As Safe) 미생물이면서 생균제로서 널리 이용되고 있는 젖산균 (Lactobacillussp.) 을 중심으로 실험을 실시하였다. 젖산균 중에서 균주를 선택하기 위하여 우선적으로 pH 2.0에서 3hr 동안 진탕함으로써 생존여부를 비교하고 다른 병원성균의 빠른 성장속도에 경쟁할 수 있도록 빠른 성장을 보이는 균주를 중심으로 실험을 한 결과 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 을 최종적으로 선발하였다.Thirdly, strain 34, which exhibits resistance at pH2.5, resistance to 0.3% bile and acid production, and shows Gram (+), was finally selected and then isolated from the strain (MDI SherlocK MIS system, HP). 6890 Series GC System, USA). Among the five selected strains, experiments were carried out mainly on lactic acid bacteria ( Lactobacillus sp.), Which are CRAS (Generally Recommend As Safe) microorganisms and are widely used as probiotics. In order to select the strain among the lactic acid bacteria, it was first shaken at pH 2.0 for 3hr to compare the survival and the experiment was conducted on the strains showing the rapid growth so that they could compete with the rapid growth rate of other pathogenic bacteria. Lactobacillus fermentum YL-3) was finally selected.

실시예 2 : 젖산균 YL-3 의 내산성 특성조사Example 2 Investigation of Acid Resistance Characteristics of Lactic Acid Bacteria YL-3

최종 선발된 균주인 젖산균 YL-3의 내산성을 실험하기 위하여 대조구로 pH 6.5±0.2 인 MRS 액체배지와 농염산으로 MRS 액체배지의 pH를 pH 3.0, pH 2.5, pH2.0으로 맞춘 후 시간별로 생존 균수의 변화를 측정하였다. 37℃, 24시간을 호기 배양시킨 YL-3을 pH를 맞춘 각각의 MRS 액체배지 50m1에 108CFU/ml 을 접종하였다. 접종 후 shaking 배양기에 12시간동안 진탕하면서 3시간 간격으로 0.85% 생리 식염수로 10배 단계 희석 후 MRS배지에 도말하였고 37℃, 24시간을 호기 배양하였다. 배양 후 검출된 집락를 계수하여 생존균수의 변화를 조사하였다. 각 pH별로 12시간 동안 3시간 간격으로 생존 균수을 확인한 결과는 제 1도에 나타내었다. pH 3.0에서 3시간 경과후의 생균수는 접종 균수(1.1×108CFU/ml)의 60% (6.4×107CFUlml)정도 생존하였고, pH 2.5에서는 접종 균수의 50% (5.0×107CFU/ml)가, pH2.0에서는 40% (4.3×107CFU/ml)가 생존하였다. 그러나 시간이 경과될수록 pH 3.0과 pH 2.5에서는 생존 균수가 오히려 증가하는 경향을 나타내었고, pH 2.0에서는 6시간 이후에 급격히 감소하는 것을 볼 수 있었다. 하지만 12시간 경과 후에도 사멸되지 않고 107CFU/ml정도의 생균수를 유지하고 있었다. 그러므로 선발된L. fermentumYL-3은 pH2.0에서 12시간 후에도 107CFU/ml을 유지하고 있고 미생물 사멸 작용이 급격히 일어난다는 pH 2.5에서도 12시간이 지난후에 오히려 균수가 다시 증가하는 경향이 있었다.To test the acid resistance of lactic acid bacterium YL-3, the selected strain, the pH of MRS liquid medium with pH 6.5 ± 0.2 and MRS liquid medium with concentrated hydrochloric acid were adjusted to pH 3.0, pH 2.5, and pH 2.0. The change in the number of bacteria was measured. YL-3, which was incubated at 37 ° C. for 24 hours, was inoculated with 10 8 CFU / ml in 50 ml of each MRS liquid medium adjusted to pH. After inoculation, shaking for 10 hours in a shaking incubator and diluting 10 times step with 0.85% physiological saline every 3 hours, smeared on MRS medium and incubated for 24 hours at 37 ℃. The colonies detected after incubation were counted to investigate the change in viable bacterial count. The results of confirming the viable cell counts at 3 hour intervals for 12 hours for each pH are shown in FIG. The viable cell count after 3 hours at pH 3.0 survived about 60% (6.4 × 10 7 CFUlml) of the inoculated cell number (1.1 × 10 8 CFU / ml), and at pH 2.5, 50% (5.0 × 10 7 CFU / ml) survived 40% (4.3 × 10 7 CFU / ml) at pH 2.0. However, as time passed, the number of viable cells was rather increased at pH 3.0 and pH 2.5, and sharply decreased after 6 hours at pH 2.0. After 12 hours, however, the cells were not killed and maintained about 10 7 CFU / ml. Therefore, the selected L. fermentum YL-3 maintained 10 7 CFU / ml even after 12 hours at pH 2.0, and the bacterial count tended to increase again after 12 hours even at pH 2.5. .

실시예 3 : 젖산균 YL-3 의 내담즙성 특성조사Example 3 Examination of Bile Resistance of Lactic Acid Bacteria YL-3

최종 선발 균주인 젖산균 YL-3의 내담즙성을 실험하기 위하여 0.3% oxgall 농도에서의 생존성 및 시간별 생존 균수의 변화를 확인, 측정하였다. 37℃, 24시간을 호기 배양시킨 YL-3을 0.3% oxgall이 첨가된 MRS 액체배지에 107CFU /ml정도을 접종하여 배양기에 넣고 12시간 동안 진탕시키면서 2시간 간격으로 0.85% 생리식염수로 10배 단계 희석한 후 MRS배지에 도말하여 37℃, 24시간을 호기 배양하여 생존한 집락을 계수하였다. 0.3% 담즙에 대한 생존성 및 생존 균수의 변화를 확인하였다.In order to test the bile resistance of lactic acid bacteria YL-3, the final selection strain, the viability at 0.3% oxgall concentration and the change of viable bacterial counts over time were measured and measured. YL-3, which was incubated for 24 hours at 37 ° C, was inoculated with 10 7 CFU / ml in MRS liquid medium to which 0.3% oxgall was added and placed in the incubator for 10 hours with 0.85% physiological saline at 2 hours intervals. After dilution, the plate was plated in MRS medium and cultured with aerobic incubation at 37 ° C. for 24 hours to count the colonies that survived. Changes in viability and viable count for 0.3% bile were confirmed.

최종 선발 균주인 젖산균 YL-3의 0.3% oxgall이 첨가된 MRS 액체배지에서의 생존성 및 시간별 생존 균수의 변화를 측정한 결과는 제 2도에 나타내었다. 대조구에 비해 0.3% oxgall이 첨가된 MRS 액체배지에서 느린 성장속도를 나타내고 있다. 하지만 첨가된 담즙에 의해 균이 저해되거나 사멸되지 않고 대조구에 비해 느린 성장을 나타내나 계속적인 성장을 나타낸다. 장내에서 유래하지 않는 젖산균의 경우 oxgall이 0.15%함유된 LBS배지에서 성장하지 못함을 보고하였으며, 장내 유래세균이 아닌 경우는 아주 적은 농도의 담즙에 대해서도 민감하다. 따라서, 닭의 맹장에서 분리한 젖산균 YL-3은 0.3% oxgall이 첨가된 MRS 액체배지에서 성장할 수 있는균주이다.The results of measuring the viability and the change of viable cell counts in MRS liquid medium supplemented with 0.3% oxgall of lactic acid bacterium YL-3, the final selection strain, are shown in FIG. The growth rate was slower in MRS liquid medium containing 0.3% oxgall than the control. However, the added bile did not inhibit or kill the bacteria and showed slower growth compared to the control but continued growth. It was reported that lactic acid bacteria which are not derived from the intestine do not grow in LBS medium containing oxgall 0.15%, and non-intestinal bacteria are sensitive to very small concentrations of bile. Therefore, lactic acid bacteria YL-3 isolated from the caecum of chicken is a strain that can grow in MRS liquid medium added with 0.3% oxgall.

또한 담즙의 농도를 달리하여 농도에 따른 담즙에 대한 내성을 실험하였다. 0, 0.3, 0.5, 1.0, 2.0%의 oxgall이 첨가된 MRS 액체배지에 첨가하여 107CFU/ml정도를 접종하여 배양기에 넣고 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 0.85% 생리식염수로 10배 단계 희석한 후 MRS배지에 도말하여 37℃, 24시간을 호기 배양하여 생존한 집락을 계수하여 농도별로 생균수를 비교하였다. 제 3도는 담즙의 농도를 달리하여 배양한 결과이다. 담즙이 0.5, 1.0, 2.0%가 첨가된 액체배지에서도 0.3%을 첨가했을 때와 거의 같은 결과를 나타내었고, 이 결과로 담즙에 강한 내성을 갖는 균주 임을 확인할 수 있다.In addition, the resistance to bile according to the concentration was tested by varying the concentration of bile. 0, 0.3, 0.5, 1.0, 2.0% of the oxgall was added to the MRS liquid medium was added to inoculate about 10 7 CFU / ml incubator was incubated for 24 hours. After incubation, the cells were diluted 10-fold with 0.85% physiological saline, plated on MRS medium, and aerobic culture was performed at 37 ° C. for 24 hours to count viable colonies. 3 is the result of culturing with different concentrations of bile. In the liquid medium to which bile was added 0.5, 1.0 and 2.0%, the result was almost the same as when 0.3% was added, and as a result, it was confirmed that the bile was resistant to bile.

실시예 4 : 젖산균 YL-3 의 내열성 특성조사Example 4 Investigation of Heat Resistance of Lactic Acid Bacteria YL-3

최종 선발된 균주인 젖산균 YL-3의 내열성 실험을 다음과 같이 측정하였다. YL-3을 MRS 액체배지에 접종하여 37℃, 48시간 배양 후 이 배양액을 멸균한 시험관에 분주하고 45℃, 50℃, 60℃, 70℃로 조절된 항온수조에 정치시키고 이를 0분, 30분, 60분, 90분 및 120분에 시료를 취하여 0.85% 생리 식염수로 10배 단계 희석을 한 후 MRS배지에 도말 하여 37℃, 24시간을 호기 배양하였다. 배양 후 생존한 균수를 계수하여 생균수를 측정하였다. 젖산균 YL-3 의 내열성에 대한 실험 결과는 제 4도에 나타내었다. 45℃에서는 50%의 균수 감소를 나타내고 있지만 120분 동안에 그 균수를 유지한다. 그러나 50℃이상의 온도에서는 급속히 감소함을 나타내었다.The heat resistance test of the lactic acid bacterium YL-3, the final selected strain, was measured as follows. YL-3 was inoculated in MRS liquid medium and incubated for 48 hours at 37 ° C., and the culture solution was dispensed into sterile test tubes and placed in a constant temperature water bath adjusted to 45 ° C., 50 ° C., 60 ° C., and 70 ° C., and then 0 min. Samples were taken at minutes, 60 minutes, 90 minutes and 120 minutes, diluted 10-fold with 0.85% physiological saline, and plated on MRS medium to incubate at 37 ° C. for 24 hours. The viable cells were counted by counting the number of viable cells after the culture. Experimental results for the heat resistance of lactic acid bacteria YL-3 are shown in FIG. At 45 [deg.] C., a 50% bacterial count is shown, but the bacterial count is maintained for 120 minutes. However, it showed a rapid decrease at the temperature above 50 ℃.

실시예 5 : 젖산균 YL-3 의 병원성균 생장억제 특성조사Example 5 Growth Inhibition Characteristics of Pathogenic Bacteria of Lactic Acid Bacteria YL-3

최종 선발된 젖산균 YL-3의 병원성균에 대한 억제 능력이 있는지를 확인하기 위하여 다음과 같이 측정하였다. YL-3을 MRS 액체배지에서, 병원성 균인 살모넬라균(Salmonella enteritidis) 과 대장균 (E. coli0157:H7) 을 BHI 액체배지에서 각각 37℃, 24시간 배양한 후, 50ml MRS 액체배지에 젖산균 YL-3와 병원성 균을 각각 107CFU/ml을 혼합 접종하고 대조구로 YL-3, 살모넬라균 (Salmonella enteritidis) 과 대장균 (E. coli0157:H7) 을 각각 MRS 액체배지에 단독 접종하여 37℃, 24시간 호기 배양하였다. 24시간 동안 배양하면서 2시간 간격으로 혼합 배양액과 단독 배양액에서 시료를 취하여 pH를 측정하였고, 0.85% 생리 식염수로 10배 단계 희석한 후 각각의 배양액을 선택 배지를 이용하여 도말 하였다. 37℃, 24시간 배양을 한 후, 각각의 생균수를 측정하여 혼합 배양한 것과 단독 배양한 것을 비교함으로써 병원성 균의 생육억제 정도를 조사하였다. 살모넬라균 (Salmonella enteritidis) 의 선택배지로는 SS배지를, 대장균 (E. coli0157:H7) 의 선택배지는 EMB배지를 사용하였고, 젖산균 YL-3의 선택배지로는 0.02% NaN3(Sigma)이 첨가된 MRS배지를 사용하였다.In order to determine whether the lactic acid bacterium YL-3, which was finally selected, had an inhibitory ability against pathogenic bacteria, was measured as follows. After incubating YL-3 in MRS liquid medium, Salmonella enteritidis and Escherichia coli ( E. coli 0157: H7) were incubated for 24 hours at 37 ° C in BHI liquid medium, respectively, and then lactic acid bacteria YL- in 50ml MRS liquid medium. 3 and pathogenic bacteria were inoculated with 10 7 CFU / ml respectively, and YL-3, Salmonella enteritidis and Escherichia coli ( E. coli 0157: H7) were separately inoculated into MRS liquid medium, respectively. Time expiratory culture. Samples were taken from the mixed cultures and the single cultures at 2 hour intervals while incubating for 24 hours to measure pH. After diluting 10 times with 0.85% saline, each culture was plated using a selective medium. After incubation at 37 ° C. for 24 hours, the growth inhibition of pathogenic bacteria was examined by measuring the number of viable cells and comparing the mixed culture with that of single culture. The selection medium of Salmonella enteritidis was SS medium and the selection medium of E. coli 0157: H7 was EMB medium and 0.02% NaN 3 (Sigma) as the selection medium of lactic acid bacteria YL-3. This added MRS medium was used.

병원성균인 살모넬라균 (Salmonella enteritidis) 과 대장균 (E. coli0157:H7)에 대한 젖산균 YL-3의 성장 억제 능력을 측정한 결과를 제 5도에 나타내었다. 혼합배양 후 8시간 이후로 두 개의 병원성균은 급격이 감소하기 시작하였으며 살모넬라균(Salmonella enteritidis) 는 혼합 배양 후 15시간에는 균이 나타나지 않았으며, 대장균 (E. coli0157:H7) 은 16시간이후 균이 보이지 않았다. 또한단독 배양과 혼합배양시의 pH를 측정하여 제 6도에 나타내었다. 8시간 이후 pH는 4.2 이하로 떨어졌고, 그 이후는 pH4.1 정도을 유지하였다. 따라서 젖산균 YL-3 는 병원성균의 성장을 억제하는 탁월한 능력을 가지고 있는 것으로 판명되었다.The growth inhibition ability of lactic acid bacteria YL-3 against the pathogenic bacteria Salmonella enteritidis and Escherichia coli ( E. coli 0157: H7) is shown in FIG. After 8 hours of mixed culture, the two pathogenic bacteria started to decrease rapidly. Salmonella enteritidis did not appear at 15 hours after mixed culture, and E. coli 0157: H7 did not appear after 16 hours. No bacteria were seen. In addition, the pH of the single culture and the mixed culture was measured and shown in FIG. After 8 hours, the pH dropped to 4.2 or less, and after that, the pH was maintained at about 4.1. Therefore, lactic acid bacteria YL-3 was found to have an excellent ability to inhibit the growth of pathogenic bacteria.

국내 환경조건에 맞는 균주를 선발하기 위하여 건강한 닭의 맹장에서 여러 균주를 선발하였으며 생균제로서의 기능을 할 수 있는 균주로 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 를 최종 선별하였다. 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3)는 다른 분리 균주에 비해 인공 위액의 낮은 pH에 내성을 갖고 있으며 0.3%의 담즙산에도 증식을 하고, 병원성균인 살모넬라 (Salmonella) 대장균 (E.coli) 등의 생장을 억제시킬 수 있는 균주로 충분히 사료에 첨가 급여시 생균제로서의 기능을 하리라고 생각된다. 그리하여 본 발명을 통하여 분리한 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentumYL-3) 은 산과 담즙에 대한 내성을 배양조건으로 위액에 견딜 수 있는 튼튼한 균체를 배양하여 장내에 정착시킬 수 있을 것으로 예상하며 수입에 의존한 보호막에 대한 비용도 절감할 수 있을 것으로 기대된다.In order to select strains suitable for domestic environmental conditions, several strains were selected from the cecum of healthy chickens, and Lactobacillus fermentum YL-3 ( Lactobacillus fermentum YL-3) was finally selected as a strain capable of functioning as a probiotic. Lactic acid bacteria, such as YL-3 (Lactobacillus fermentum YL- 3) is compared to another strain which has a resistance to the low pH of the simulated gastric fluid and the growth in 0.3% bile acid, hospital seonggyunin Salmonella (Salmonella) Escherichia coli (E.coli) As a strain capable of inhibiting growth, it is thought that it will function as a probiotic when it is sufficiently added to feed. Thus, Lactobacillus fermentum YL-3 ( Lactobacillus fermentum YL-3) isolated through the present invention is expected to be able to cultivate a strong bacterium that can withstand gastric juice under the culture conditions of acid and bile, and to be able to settle in the intestine and rely on imports. It is also expected to reduce the cost of a shield.

Claims (2)

pH2.5의 인공위액에서 12시간 후 최초 접종 농도로 생존하는 특성을 지니고, 2.0% Oxgall 첨가배지에서 24시간 후 최초 접종 농도로 생존하는 특성을 지니며, 병원성 균인 살모넬라균 (Salmonella enteritidis), 대장균 (E.coli 0157:H7) 과 혼합 배양하였을 경우, 15-16 시간 후에 이들 균주를 모두 사멸시키는 특성을 지닌 젖산균 YL-3(Lactobacillus fermentum YL-3) 의 신규 균주It has a characteristic of surviving at the initial inoculation concentration after 12 hours in the gastric juice of pH2.5, and surviving at the initial inoculation concentration after 24 hours in a media containing 2.0% Oxgall, Salmonella enteritidis, Escherichia coli When cultured with (E. coli 0157: H7), a novel strain of Lactobacillus fermentum YL-3, which kills all of these strains after 15-16 hours 제 1항의 젖산균 YL-3 (Lactobacillus fermentum YL-3) 의 신규 균주를 포함하는 생균제Probiotic comprising a novel strain of Lactobacillus fermentum YL-3 of claim 1
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030064030A (en) * 2002-01-25 2003-07-31 주식회사 푸코 Novel probiotic strain isolated from Korean feces having gastric juice-resistance, bile acid-resistance and its use

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