KR100243933B1 - 과량의 음전하를 지니는 리포솜 - Google Patents

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독토로하인리히쿤
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Abstract

본원은 과량의 음전하를 지니는 리포솜과 그를 사용해 얻은 제약조성물에 관한다.

Description

과량의 음전하를 지니는 리포솜
본원은 과량의 음전하를 지니는 리포솜, 특히, 정세포와 시토킨을 투여하는 방법에 관한다.
리포솜은 수성내부공간을 지니는 1개 또는 수개의 지질 2중층으로 구성된 구형 구조이다(지질소포). 그같은 소포는 수성매질에 인지질(예컨데, 레시틴)을 기계적으로 매우 미세하게 분산시켜 얻는다.
Bangham 등 [J. Mol. Biol. 13 (1965), 238 - 252]은 인지질이 물에서 초구조(superstructure)를 형성함을 관찰하였다. 압력, 온도 및 이온농도와 같은 물리적 파라메터의 조건에 따라 미셀, 유니라멜라 또는 멀티라멜라 리포솜 또는 심지어 간단한 지질 2 중층이 형성된다 [cf. Liposomes : From physical structure to therapeutic application (1981), knight, C. G. (ed), Elsevier, North Holland Biomedical press, chapter 2 : H. Eibl, phopholip id synthesis, 19 - 50 ; chapter 3 : F. Szoka and D. Papahadjo poulos, Liposomes ; preparation and characterization, 51 - 104].
작은 유니라멜라 리포솜들은 20 내지 200nm의 직경을 지니는 구형구조이다 [cf. Barenholtz등, PEBB Let. 99 (1979) 210 - 214]. 그들의 내부볼륨은 외측이 지질 2중층과 접하는 수성매질로 구성된다. 활설물질은 친지성을 지니는가 또는 친수성을 지니는가에 따라 2 중층 또는 수성내부 볼륨 또는 리포솜중 어느 한곳에 포획되게 되고, 포획된후에는 체액에 의해 생물체내로 운반되어 배포되게 된다.
리포솜은 그들의 구조적 특성으로 인하여 생화학과 분자생물학 분야의 막모델로서 사용되었다. 또한, 수년간 리포솜의 특성 및 의약제제의 담체로서의 당해 리포솜의 사용에 관한 수많은 논문이 발표된바 있다 [cf. 예컨대, H. Schreinel and M. Raeder Schikorr, "Pharmazie in unserer zeit" 11 (1982), 97 - 108]. 이전에 발표된 동물에 관한 실험은 간과 비장이 다른기관에 비해 보다 더 많은 리포솜을 흡수한다는 사실을 보여주었다. 간에서는 1시간 뒤에 약 8%의 리포솜이, 그리고 24시간 뒤엔 약 15%의 리포솜이 발견되었다.
의료분야에서 리포솜은 주로 선택적 질병치료에 사용될 수 있을 것이다. 리포솜에 포획된 활설물질의 바람직한 효과는 증진시켜야 하지만 바람직하지 아니한 효과는 감소시켜야만 한다. 이같은 방법은 치료지수의 향상을 이루어내기 위함이다.
DE - OS 제 40 13 632 - 9 호에는 과량의 양전하를 지니는 화합물을 최소한 1 몰 % 함유하는 리포솜이 기재되어 있다.
하지만, 공지의 리포솜 투여방법은 간의 리포솜 흡수가 비교적 제한받고, 장기간 동안 리포솜이 혈액에서 순환케되는 단점을 보여준다. 이와같은 현상은 특히 레시틴 및 콜레스테롤과 같은 인지지질로 구성되는 리포솜에서 두드러진다. 당해 방법이 사용되면 체내에 배포된 리포솜에 함유된 활성물질에 의한 바람직스럽지 아니한 부작용이 증가케 된다. 따라서, 본원목적은 공지의 리포솜에 비해 증대된 간 흡수를 보여주는 새로운 리포솜을 제공함에 있다.
당해목적은 콜레스테롤, 인지질 및 1 내지 14 몰 % (당해 리포솜의 총지질 성분에 상대적인 양)의 1개 또는 수개의 하기 일반식(I)화합물 또는 그의 염을 함유함을 특징으로 하는 리포솜을 제공함으로서 이루어진다.
식중, R1과 R2는 같거나 다를 수 있고, 수소, 필요한 경우 분지되거나 또는/및 치환될 수 있는 포화 C8-C24아실그룹 또는 불포화 C8-C24아실그룹 또는 C1-C4알킬그룹이 됨(단, R1과 R2잔기중 최소한 1개가 정의된 바와같은 아실그룹일 것을 조건으로함).
생리학적 조건하에서는 상기 화합물(I)이 부분 양성자 첨가된 음이온이 됨으로서 본원 리포솜은 과량의 음전하를 지니게 된다. 음전하를 지닌 일반식(I)의 캐리어 물질의 양은 리포솜의 총지질 성분에 상대적인 양으로서 1 내지 14몰%, 바람직하기로는 3 내지 10몰%가 되게 된다. 일반식(I)화합물의 양이 15%를 넘게되면 용해도에 문제가 생겨 침전하는 상태에 까지 이르게 된다. 따라서 상기 범위는 지켜지는 것이 바람직한 것으로 사료된다.
일반식(I)의 상기 화합물이 지니는 잔기는 양잔기모두가 C8-C24아실그룹이 되든가 또는 잔기 1개는 수소가 되고, 나머지 잔기 1개는 C8-C24아실그룹이 되는 것이 바람직하다.
상기 화합물은 R1이 C14-C24아실그룹이 되고, R2가 수소가 되는 것이 특히 바람직하다. 당해 그룹의 바람직예로는 1 - 스티어로일 - sn - 글로세로 - 3- 인산, 1 - 팔미토일 - sn - 글로세로 - 3- 인산, 1 - 미리스토일 - sn - 글로세로 - 3- 인산, 1 - 에루코일 - sn - 글로세로 - 3- 인산 및 이들의 염을 들 수 있다. 당해 포스파티드산들은 예컨대, 모노알칼리 금속염 형태, 특히, 모노소듐 염형태와 같은 염형태로 사용되는 것이 바람직하다.
특히 바람직한 상기 화합물의 종류는 R1과 R2가 C14-C24아실그룹인 화합물이다. 그같은 종류의 화합물의 바람직한 예로는 1, 2 - 디스티어로일 - sn - 글리세로 - 3 - 인산, 1, 2 - 디팔미토일 - sn - 글리세로 - 3 - 인산, 1, 2 - 디미리스토일 - sn - 글리세로 - 3 - 인산, 1, 2 - 디에루코일 - sn - 글리세로 - 3 - 인산 및 이들의 염을 들 수 있다. 당해 포스파티드산들 역시 예컨데, 모노알칼리 금속염 형태, 특히, 모노소듐염형태와 같은 염형태로 사용되는 것이 바람직하다.
놀랍게도 우리는 음전하를 지닌 일반식(I)의 캐리어 물질을 함유하는 리포솜이 일반식(I)의 화합물이 사용되지아니한 공지 리포솜에 비해 상당히 뛰어난 잇점을 지니고 있음을 발견하였다.
투여된 공지의 리포솜은 간에 제한적으로 흡수되고, 그에 따라 상당히 오랜동안 혈액에서 순환케되는데 반해, 본원 리포솜은 놀라울 정도로 간에 의해 잘 흡수되어 본원 리포솜에 의한 타기관의 부작용이 현저히 감소됨을 볼 수 있었다.
본원은 특히 안트라사이클린계 항생물질인 독소루비신(anthracyclin antibiotic doxorubicin)에 관해 조사하였다. 당해 물질은 이미 약 25년 동안 임상적으로 사용되어 온 물질이다. 하지만, 당해 물질은 심장독성이 강하여 충실성 종양인 백혈병과 임파종 치료시의 항암제로서의 사용 [Bonadonna 등, Cancer Res. 30 (1970), 2572 - 2582 ; Middleman 등, Cancer 28 (1971), 844 - 850 ; ian 등, Cancer 32 (1973), 9 - 17]이 극히 제한받았다 [Lefrak 등, Cancer 32 (1973), 302 - 314 ; Rinehart 등, Ann. Internal. Med. 81 (1974), 475 - 478 ; Von Hoff 등, Ann. Internal, Med. 91 (1979), 710 - 7170].
본원의 토대가된 마이스에 대한 실험을 통하여 활성물질로서 독소루비신을 함유한 본원 리포솜이 공지의 리포솜에 필적하는 혈장안정성을 지니면서도 공지의 리포솜과는 놀라울 정도로 전혀다른 약물동태학적면을 지닌다는 사실을 밝혀내었다. 본원 리포솜 사용시엔 매우 소량의 독소루비신만이 혈장, 폐, 신장 및 특히 심장에서 발견되었다. 반면에, 간 (본원 리포솜의 바람직한 타겟기관)에서는 유리독소루비신 또는 공지의 리포솜을 사용했을때 보다도 훨씬 높은 고농도의 독소루비신을 발견할 수 있었다.
본원 리포솜의 또다른 놀라운 잇점은 본원 리포솜에 함유된 활성물질의 대사가 리포솜 없이 투여된 활성물질의 대사와는 전혀 다르게 된다는데 있다. 시판되는 제품(리포솜 없는) 형태의 독소루비신을 투여한 경우 투여후 1시간후에는 간에 20%의 독소루비신이 남았고, 나머지는 그 이전에 벌써 대사되어 버렸음을 볼 수 있었음에 반해, 본원 리포솜내의 동일한 활성물질은 동일조건하에서 투여후 1시간 뒤에도 대사되지 않은채, 즉, 당해 활성물질의 97%가 그대로 잔존하였다 (단 3%만이 대사될 뿐임). 이에 반해 시판되는 제품 (리포솜 없는) 형태의 활성물질은 투여후 1시간이 채되기도전에 약 80%가 대사되어 버렸음을 볼 수 있었다.
본원 리포솜은 일반식(I)의 화합물외의 지질성분으로서 콜레스테롤과 인지질을 함유한다. 리포솜은 바람직하기로 30 내지 50 몰 %의 콜레스테롤과 49 내지 56 몰%의 인지질을 함유한다. 전하를 지니지 않은 인지질이 특히 바람직하다. "전하를 지니지 않은 인지질" (uncharged phophlipids) 이라는 용어는 외부적으로 전하를 지니지 않은 인지질 (즉, 당해용어는 본자간 쯔비터 이온인 인지질을 포함하는)을 가리키는 것으로 이해해야 한다. 본원 리포솜내의 인지질의 바람직한 종류로는 포스포글리세라이드 즉, 2개의 하이드록실 그룹이 지방산 그룹(바람직하기로 C8-C24아실그룹)과 에스테르화 되었고, 세번째 그룹이 인산화된 알콜과 에스테르화 되어있는 글리세롤 그룹을 함유하는 화합물을 들 수 있다. 특히 적합한 알콜의 예로는 에탄올아민 및 콜린과 같은 양전하를 나르는 것을 들 수 있다. 인지질은 하기 일반식(II)의 레시틴이 특히 바람직하다.
식중, R3와 R4는 같거나 다를 수 있고, 필요한 경우 분지되거나 또는/및 치환될 수 있는 포화 C8-C24아실그룹 또는 불포화 C8-C24아실그룹이 됨.
R3와 R4는 C8-C24아실그룹인 것이 바람직하며, 특히 스티아로일, 팔미토일, 미리스토일 또는 에루코일잔기인 것이 더욱 바람직하다.
본원 리포솜의 성분들은 구입해 사용하거나 또는 공지의 방법으로 제조해 사용 할 수 있다. 일반식(II)의 레시틴은 예컨대, Woolley와 Eibl의 방법 [woolley and Eibl, chem, phys. Lipids 47 (1988), 55 - 62 and Eibl and woolley, chem phys. Lipids 41 (1986), 53 - 63]으로 제조할 수 있다. 본원 인용문헌인 DE - OS 제 32 25 213.7 호에는 포스포글리세라이드의 또다른 생산방법이 기재되어 있다. 일반식(I)의 화합물들은 예컨데, 각 레시틴들의 콜린잔기를 포스포리파제 D로 절단시켜 얻을 수 있다[Eibl and woolley, Methods Enzymol. 72 (1981), 632 - 639]
본원 리포솜을 얻는 방법은 다음과 같다. 리포솜의 개개 지질성분들, 즉 일반식(I)의 화합물 1 내지 14 몰 %와 당해 일반식(I)화합물과의 합량이 100 몰%가 되는 다른 지질성분들을 적당한 용매에 녹여 바람직하기로는 가열하며 균일하게 혼합한다. 용매를 진공하에서 제거한후, 미세하게 분산된 지질필름을 수성완충용액(당해 수성완충용액은 생리학적으로 사용될 수 있는 용매이면 어느것이든 사용이 가능함)과 혼합한다. 다음에는, 당해 혼합물을 지질의 주전이온도 (예컨데, 50℃)보다 약 5℃가 높은온도에 약 1시간 동안 서서히 교반하며 안치시켜 둔다.
다음에는, 상기 예열시킨 지질현탁액을 공지방법의 적당한 수단(예컨데, 프렌치 프렌스의 압력셀내에서) (Aminco Company, silverspring, USA)을 이용하여 리포솜으로 전환 시킨다. 프렌치프레스(French press)는 수압 프레스와 강철제의 표준압력 셀로 구성되어 있다. 압력셀을 폐쇄시켜 압력을 증가시킨후, 결과의 리포솜 분산액이 작은 출구를 빠져나가면서 일정한 압력을 받아 압착되도록 한다. 당해 단계를 최소한 3회 반복한다. 리포솜 분산액을 원심분리법을 통해 상청액과 침전물로 분리, 상청액을 얻는다. 당해 상청액은 다양한 응용분야와 연구조사, 예컨데, 1개 또는 수개의 제약학적 활성물질을 함유하는 리포솜 생산에 사용될 수 있는 리포솜을 함유한다. 하지만 본원 리포솜은 또한 다른방법으로도 생산할 수 있다.
따라서, 본원은 일반식(I)의 화합물 1 내지 14 몰 % 와 당해 일반식(I) 화합물과의 합량이 100 몰 %가 되는 다른 지질성분들을 예열하는 단계, 예열시킨 당해지질 현탁액을 공지방법의 적당한 수단을 사용하여 리포솜으로 전환시키는 단계로 구성되는 리포솜 생산방법을 제공한다.
본원은 또한 본원 리포솜, 당해 본원 리포솜에 포획된 1개 또는 수개의 제약학적 활성물질 및 필요한 경우, 일반적인 희석제, 보조물질, 캐리어 물질 및 충전제를 함유하는 제약제제를 제공한다.
리포솜에 의해 혈장에 도입될 수 있는 활성물질이라면 어느것이든 불문하고 본원 활성물로서 사용될 수 있다. 바람직한 활성물질 그룹으로는 정세포제로서, 특히, 독소루비신, 에피루비신 또는 다우노마이신과 같은 안트라싸이클린게 항생물질을 들 수 있는데, 그중에서도 독소루비신이 특히 바람직하다. 또다른 바람직한 정세포제로는 카보플라틴 및 노반트론과 같은 시스 - 플라티넘, 5 - 플루오르우라실, 1 - 옥타데실 - 2 - 메틸 - 락 - 글리세로 - 3 - 포스포콜린, 헥사데실포스포콜린, 이다루비신을 들 수 있다.
또다른 바람직한 활성물질 그룹으로는 시토킨과 같은 면역조절 물질(이들 가운데 인터페론, 특히, α- 인터페론이 바람직함), 항진균성 활성물질(예컨데, 암포테리신 B) 및 원생동물 질병(말라리아, 트리파노소말성감염증, 레이쉬마니아성 감염증)에 대해 활성을 지니는 물질을 들 수 있다. 탁솔은 바람직한 활성물질이다.
본원은 또한 본원 리포솜을 항종양제제(특히, 바람직하기로, 활성물질이 독소루비신이 되는)생산에 사용하는 방법을 제공한다.
본원은 또한 본원 리포솜을 세포증식에 영향을 주는 제제(활성물질이 시토킨, 특히 바람직하기로 α- 인터페론이 되는) 생산에 사용하는 방법을 제공한다.
본원 리포솜에 포획된 1 개 또는 수개의 활성물질을 함유하는 본원 제약 조성물을 제조하는 방법은 다음과 같다.
수불용성 활성물질의 경우에는 수불용성 활성물질을 메틸렌 클로라이드 또는 클로로포름과 같은 적당한 용매내에서 지질과 함께 녹여 지질에 포획시킨뒤, 상술한 바와 같은 방법으로 본원 리포솜을 얻는다.
수용성 활성물질의 경우에는 수용성 활성물질을 함유한 상술한 용액을 지질필름과 혼합하여 당해 수용성 활성물질을 지질필름에 포획시킨뒤, 상기 후속단계를 밟는다. 원심분리후 얻어진 상청액은 충전된 리포솜외에도 포획되지 않은 수용성 활성물질을 함유한다. 이같은 활성물질의 유리된 부분은 예컨대 한외여과법(diafiltration)과 같은 방법을 사용하여 리포솜에 포획된 부분으로 부터 분리시킨다. 리포솜은 사용에 앞서 막여과기(Sartorius Company, 공극직경 0.2 ㎛)로 살균여과시키는 것이 바람직하다.
따라서, 본원은 상기 리포솜 제조방법과 함께 수불용성 활성물질의 포획을 위해, 당해 활성물질을 지질성분과 함께 녹이는 단계 및 수용성 활성물질의 포획을 위해, 지질필름을 당해 활성물질을 함유하는 수성용액과 혼합하는 단계가 사용되는 제약조성물 제조방법에 관한다.
하기실시예는 본원을 보다 더 상세히 명료하게 설명해줄 것이다.
[리포솜의 제조]
1, 2 - 디팔미토일 - sn - 글리세로 - 3 - 포스포콜린(DPPC)와 콜레스테롤(ch)은 Sygena LTD(Liestal, CH)와 Fluka(Buchs, CH)로 부터 각각 얻었다. 1, 2 - 디스티아로일 - sn - 글리세로 - 3 - 포스포콜린(DSPC)은 1, 2 - 디스티아로일 - sn - 글리세롤을 사용해 제조하였다 [Eibl and woolley, chem. phys. Lipids 42 (1986), 53 - 63]. 1, 2 - 디스티아로일 - sn - 글리세로 - 3 - 포스페이트(DSPA)는 1, 2 - 디스티아로일 - sn - 글리세로 - 3 - 포스포콜린을 포스포리파제 D로 가수분해시켜 제조하였다[Eibl and woolley, Mthods Enzymol. 72 (1981), 632 - 639]. 수소첨가된 간장 포스패티딜이노시톨(HPI)은 "sigma chemie GmbH (steinheim, Germany)"에서 구입한 간장 레시틴(P 5638)로 부터 얻었다. 간장 레시틴(soya lecithin)은 약 10%의 포스패티딜이노시톨을 함유하였다 [실리카겔 크로마토 그래피법으로 단리함(woolley and Eibl, chem. phys. Lipids 47 (1988), 55 - 62)]. 결과의 생성물을 CHCl3/CH3OH(1 : 1, v/v) 100 ml 내에서 10 % pd/c 촉매를 사용하여 수소첨가시켰다. DPPC/ch (6 : 4) ; DSPA/ch (5 : 1 : 4) ; DPPC/HPI/ch (5 : 1 : 4)와 같은 조성 (몰 기준)을 지니는 작은 유니라멜라 리포솜을 얻었다. 당해 리포솜 제조를 목적으로 가장높은 TM을 지니는 인지질의 상전이온도(TM)보다 5℃가 높은 온도를 지니는 회전증발기내의 시트르산 완충용액 (300 mmol/l, pH 4)에 지질 현탁액 5 밀리몰을 3시간 동안 현탁시켰다. 20,000 psi의 프렌치프레스를 이용하여 균질용액으로 부터 리포솜을 얻었다. 결과의 리포솜을 30분간 30,000g로 원심분리시킨후, 여기에 분상의 독소루비신을 부가하여 Mayer등의 로슁법으로 당해 독소루비신을 pH 8에서 포획시켰다 [Biochim, Biophys Acta 57 (1986), 123 - 126]. 리포솜에 포획되지 아니한 유리 독소루비신은 한외여과법으로 여과시켜 제거하였다 (Polysulfone Ultrasart Module, exclusion limit 20KD, Sartocon Mini SM 17521, Sartorius Germany). 모든 리포솜을 사용전에 여과법으로 살균시켰다.
[실시예 2]
독소루비신을 함유한 리포솜으로의 마이스처리.
독일 하노버소재 동물 교배소로 부터 여성 NMR - I 마우스들 (28 - 32 g, 6 - 8 주)을 얻었다. 각 마우스의 심근정맥에 동일 복용량(5.7 mg/kg)을 주사하였다. 각 처리구는 3마리로 구성하였다. 1시간, 24시간 및 72시간째에, 각 마우스를 CO2로 마취시켰다. 각 마우스의 심장을 뚫어 혈액을 수거한뒤, 당해 혈액을 헤파린처리한 Eppedorf관에 저장하였다. 각 마우스로 부터 얻은 조직샘플(간, 심장등)을 0.9 % Nacl로 세척하여 -70℃에 저장하였다.
혈장샘플은 Mross등의 방법으로 분석하였다 (J. chromatograph. 530 (1990), 192 - 199). 혈장분석을 위해 혈장 100 μl을 활성화시킨 Bond Elut C18 컬럼 (ICT, Frankfrut, Germany)에 로딩시키고 완충용액(0.02 mol/l Na 포스페이트, pH 3.9) 4 ml로 세척하였다. 당해 컬럼을 10 밀리바에서 10분 동안 건조시켰다. 4 메탄올클로로포름 (1 : 1, v/v)으로 독소루비신과 기의 대사살물을 용출시켰다. 용출물을 질소하에서 증발건조시켰다. 잔류물을 50μl (0.02 mol/l Na 포스페이트/아세토니트릴, pH 3.9 ; 7 : 3, v/v)에 취해넣은뒤 HPLC법(4.6 mm ×25 cm Merk Lichrocart c 18 RP 5㎛ 컬럼)으로 분석하였다. 유속은 1.5 ml/분이었다. 들뜸파장은 480 non였고, 방출파장은 580 nm였다.
각 기관내의 독소루비신과 그의 대사산물을 검촉키위해, 조직 샘플들(각, 약 200 mg)을 마이크로 해체기(Braun Melsungen AG, Germany)로 균질화시켰다. 독소루비신과 그의 대사신물을 pH 3의 추출용액(아세토니트릴/물내 16.5% v/v AgNO3; 6 : 4 v/v)으로 처리하여 DNA와 컴플렉스를 이룬 안트리 - 사이클린을 방출시키고, 단백질을 침전시켰다. 내부 스탠다드(에피루비신)를 부가한후 원심분리시킨 상청액을 HPLC 컬럼에 실었다.
DPPC/ch 리포솜은 64 nm의 평균직경을, DPPC/HPI/ch 리포솜은 91 nm의 평균직경을 그리고 본원 DSPC/DSPA/ch 리포솜은 88 nm의 평균직경을 각기 지녔다.
독소루비신대 인지질의 평균비는 DPPC/ch 리포솜에 있어 170 ㎍/㎛ol (95% 포획), DSPC/DSPA/ch 리포솜은 78 ㎍/㎛ol (65% 포획) 그리고 DPPC/HPI/ch 리포솜은 65 ㎍/㎛ol (71% 포획) 이었다. 3개의 리포솜 타입들은 최소한 24시간동안 혈장에서 안정하였다. 심지어는 4℃에서 3개월의 저장기간이 경료한후에는 리포솜으로 부터는 여하한 독소루비신도 방출되지 아니하였다.
제제타입에 따른 독소루비신의 약물동태학은 다음결과와 같았다 : 유리독소루비신(리포솜 없는)을 부가했을때는 부가후 1시간뒤의 혈장값이 0.5 ㎍/ml 였고, 24시간 뒤에는 단재 미량의 독소루비신만이 존재함을 볼 수 있었다. DPPC/ch와 DPPC/HPI/ch 리포솜의 경우에는 1시간후의 혈장값이 매우 높았고 (각각, 59.3 ㎍/ml 와 42.96 ㎍/ml 였던), 24시간대의 혈장값 역시 비교적 높은 레벨(각각, 5.5 ㎍/ml와 4.9 ㎍/ml였던) 이었다. 이와는 반대로, 본원 DSPC/DSPA/ch 리포솜의 경우에는 1시간 후의 혈장 독소루비신 값이 7.7 ㎍/ml 이었으며, 24시간후에는 단지 미량의 독소루비신만이 존재함을 볼 수 있었다.
1시간뒤의 유리 독소루비신의 심장레벨은 13 ㎍/ml이었던데 반하여 본원 DSPC/DSPA/ch 리포솜의 심장레벨은 1.0 ㎍/g이었다. DPPC/ch와 DPPC/HPI/ch 리포솜들의 심장레벨은 심장조직 그램당 약 3.5 ㎍이었다. 활성물질인 독소루비신을 다른 투여형태로 투여했을때 보다도 DPPC/DSPA/ch 리포솜 형태로 투여했을때가 훨씬 낮았다.
투여형태에 따른 독소루비신 농도의 차이는 간에서도 또한 볼 수 있었다. 1ㅣ시간 후의 간 독소루비신 값은 유리독소루비신의 경우가 11.0 ㎍/g, 본원 DSPC/DSPA/ch 리포솜의 경우가 42.8 ㎍/g DPPC/HDI/ch 리포솜의 경우가 30 ㎍/g 그리고 DPPC/ch 리포솜의 경우가 12.2 ㎍/g이었다. 본원 리포솜은 또한 24시간후에 조차도 25.1 ㎍/g이라는 높은 간 독소루비신값을 보여주었다. 72시간후에 조차도 간 조직 독소루비신 농도는 여전히 매우 높았다.
간에서의 독수루비신 대사결과는 다음과 같았다 : 즉, 1시간후 간내 활성 독소루비신의 잔류 %는 유리 독소루비신의 경우가 23% [77%는 불활성 대사산물로 전환된(아글리콘)], 본원 DSPC/DSPA/ch의 경우가 97% (3%가 불활성 아글리콘으로 전환된), DPPC/ch 리포솜의 경우가 96% (4%가 불활성 상태로 전환된), DPPC/ch 리포솜의 경우가 90% (10%가 불활성 상태로 전환된)였다.
DPPC/DSPA/ch 리포솜을 사용했을때는 1시간뒤에 간에서와 같이 비장에서는 독소루비신의 흡수가 증대됨을 볼 수 있었다.
요약하면, 본원 리포솜을 이용한 독소루비신투여방법은 유리형태의 당해 활성물질 투여 방법이나 다른 리포솜을 이용한 당해 활성물질 투여방법에 비해 매우 우수한 면모를 보여주었는바, 이는 높은조직 특이성에 기인하는 것으로 사료된다.

Claims (14)

  1. 일반식(I) 화합물 1 내지 14 몰 %와 당해 일반식(I) 화합물과의 합량이 100 몰 %가 되는 당해 리포솜의 다른 지질성분들을 적당한 용매에 녹인뒤, 용매를 진공하에서 제거하고, 용매제거후 남은 미세하게 분산된 지질필름을 수성완충용액과 지질 현탁액을 만들어 예열시키며 (당해 지질현탁액제조시 수불용성 활성물질은 지질성분과 함께 녹여포획시키고, 수용성 활성물질은 당해 수용성 활성물질의 용액을 지질 필름과 혼합하여 포획시킴), 예열시킨 당해 현탁액을 압력을 증가시킨 압력셀에서 압착시켜 리포솜 현탁액으로 전환시킨, 당해 리포솜 현탁액을 여과살균시켜 얻은, 리포솜의 총지질 성분을 기준으로 30 내지 50 몰 %의 콜레스테롤, 49 내지 56 몰%의 인지질 및 1 내지 14 몰 %의 1개 또는 수개의 하기일반식(I)화합물을 함유하는 제약학적 활성물질 함유 리포솜.
    식중, R1과 R2는 같거나 다를 수 있고, 수소, 포화 C8-C24아실그룹 또는 불포화 C8-C24아실그룹 또는 C1-C4알킬그룹이 됨(단, R1과 R2잔기중 최소한 1개가 정의된 바와같은 아실그룹일 것을 조건으로 함).
  2. 제1항에 있어서, 3 내지 10 몰 %의 일반식(I) 화합물 또는 그의 염을 함유하는 리포솜.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R1이 C14-C24아실그룹 이고, R2가 수소인 리포솜.
  4. 제3항에 있어서, 일반식(I) 화합물의 1 - 스티아로일 - Sn - 글리세로 - 3 - 인산, 1 - 팔미토일 - Sn - 글리세로 - 3 - 인산, 1 - 미리스토일 - Sn - 글리세로 - 3 - 인산, 1 - 에루코일 - Sn - 글리세로 - 3 - 인산 및 그들의 염으로 구성된 그룹에서 선택되는 리포솜.
  5. 제4항에 있어서, 화합물이 상기 포스패티딕산의 모노소듐염인 리포솜.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, R1과 R2가 C14-C24아실그룹인 리포솜.
  7. 제6항에 있어서, 일반식(I) 화합물이 1, 2 - 디스티아로일 - Sn - 글리세로 - 3 - 인산, 1, 2 - 디팔미토일 - Sn - 글리세로 - 3 - 인산, 1, 2 - 디미리스토일 - Sn - 3 - 인산, 1, 2 - 디에루코일 - Sn - 글리세로 - 3 - 인산 및 그들의 염으로 구성된 그룹에서 선택되는 리포솜.
  8. 제7항에 있어서, 화합물이 상기 포스패티딕산의 모노소듐염인 리포솜.
  9. 제1항에 있어서, 지질성분외에 30 내지 50 몰 %의 콜레스테롤과 49 내지 56 몰%의 인지질을 추가로 함유하는 리포솜.
  10. 제1항에 있어서, 인지질이 포스포 글리세라이드인 리포솜.
  11. 제1항에 있어서, 인지질로서 하기일반식(Ⅱ)의 레시틴을 함유하는 리포솜.
    식중, R3와 R4같거나 다를 수 있고, 포화 C8-C24아실그룹 또는 불포화 C8-C24아실그룹이 됨.
  12. 제11항에 있어서, R3와 R4가 C14-C24아실그룹인 리포솜.
  13. 제1항에 있어서, 일반식(I) 화합물이 디스테아로일 포스패티딕산 이고, 인지질이 디스테아로일 포스포콜린인 리포솜.
  14. 제1항에 있어서, 활성물질이 독소루비신, 안트라싸이클린 계 항생제, 이다루비신, 카보플라틴, 탁솔 및 시토킨으로된 그룹으로부터 선택되는 리포솜.
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5439686A (en) * 1993-02-22 1995-08-08 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods for in vivo delivery of substantially water insoluble pharmacologically active agents and compositions useful therefor
DE69431236T2 (de) * 1993-10-06 2003-01-02 Amgen Inc Stabile protein-phospholipid zusammensetzungen und verfahren
US5851510A (en) * 1994-05-16 1998-12-22 The Board Of Regents Of The University Of Michigan Hepatocyte-selective oil-in-water emulsion
US8853260B2 (en) * 1997-06-27 2014-10-07 Abraxis Bioscience, Llc Formulations of pharmacological agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
WO1999027940A1 (en) * 1997-12-01 1999-06-10 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Formulations for topical treatment of skin infections
US6726925B1 (en) * 1998-06-18 2004-04-27 Duke University Temperature-sensitive liposomal formulation
MXPA05007730A (es) 2003-02-04 2006-01-31 Bracco Int Bv Agentes de contraste para ultrasonido y proceso para la preparacion de los mismos.
US9750821B2 (en) * 2003-12-22 2017-09-05 Bracco Suisse S.A. Gas-filled microvesicle assembly for contrast imaging
WO2006018433A1 (en) 2004-08-18 2006-02-23 Bracco Research Sa Gas-filled microvesicles composition for contrast imaging
US20100129430A1 (en) * 2008-11-24 2010-05-27 Stavroula Sofou Liposome drug carriers with ph-sensitivity
TWI438009B (zh) * 2010-02-19 2014-05-21 Teikoku Pharma Usa Inc 紫杉烷前－乳劑調配物及其製造與使用之方法
MX341082B (es) 2010-05-03 2016-08-08 Teikoku Pharma Usa Inc Formulaciones de pro-emulsion de taxano no acuosas y metodos para hacer y usar las mismas.
JO3685B1 (ar) 2012-10-01 2020-08-27 Teikoku Pharma Usa Inc صيغ التشتيت الجسيمي للتاكسين غير المائي وطرق استخدامها

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102324C (ko) *
US4186183A (en) * 1978-03-29 1980-01-29 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Liposome carriers in chemotherapy of leishmaniasis
US4917897A (en) * 1982-01-22 1990-04-17 Fisons Plc Pharmaceutical compositions
DE3239817A1 (de) * 1982-07-06 1984-01-12 Max Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen Neue glycerinderivate zur synthese von phospholipiden
EP0102324A3 (de) * 1982-07-29 1984-11-07 Ciba-Geigy Ag Lipide und Tenside in wässriger Phase
EP0113508A1 (en) * 1982-11-04 1984-07-18 Inco Research & Development Center, Inc. Hydrophobic platinum compounds and their preparation
US5387410A (en) * 1983-03-18 1995-02-07 Mallinckrodt, Inc. Method for enhancing magnetic resonance with compositions containing paramagnetic elements carried by liposomes
US5169637A (en) * 1983-03-24 1992-12-08 The Liposome Company, Inc. Stable plurilamellar vesicles
DE3328667A1 (de) * 1983-08-09 1985-02-21 Bomoro Bocklenberg & Motte Gmbh & Co Kg, 5600 Wuppertal Kraftfahrzeug-tuerschloss, -haubenschloss od. dgl. mit motorischer schliesshilfe
US5204112A (en) * 1986-06-16 1993-04-20 The Liposome Company, Inc. Induction of asymmetry in vesicles
US5049391A (en) * 1987-02-27 1991-09-17 Terumo Kabushiki Kaisha Liposome encapsulated hemoglobin
US4828837A (en) * 1987-03-30 1989-05-09 Liposome Technology, Inc. Non-crystalline minoxidil composition, its production and application
US4938965A (en) * 1987-07-22 1990-07-03 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence Of Her Majesty's Canadian Government Ocular delivery of prophylactic agents
WO1989008499A1 (en) * 1988-03-17 1989-09-21 Nippon Fine Chemical Co., Ltd. Liposome
DE3825374A1 (de) * 1988-07-26 1990-02-01 Schwendener Reto Dipl Apotheke Komplex aus mindestens einer lipophilen saeure und mitoxantron und/oder bisantren
IL91664A (en) * 1988-09-28 1993-05-13 Yissum Res Dev Co Ammonium transmembrane gradient system for efficient loading of liposomes with amphipathic drugs and their controlled release
US5043165A (en) * 1988-12-14 1991-08-27 Liposome Technology, Inc. Novel liposome composition for sustained release of steroidal drugs
US5049392A (en) * 1989-01-18 1991-09-17 The Liposome Company, Inc. Osmotically dependent vesicles
DE4013632A1 (de) * 1990-04-27 1991-10-31 Max Planck Gesellschaft Liposomen mit positiver ueberschussladung

Also Published As

Publication number Publication date
EP0630231A1 (de) 1994-12-28
AU672600B2 (en) 1996-10-10
DE59301805D1 (de) 1996-04-11
CA2132347C (en) 1999-02-02
NZ249852A (en) 1995-11-27
ATE134872T1 (de) 1996-03-15
BR9306117A (pt) 1998-01-13
AU3748793A (en) 1993-10-21
ES2085793T3 (es) 1996-06-01
CA2132347A1 (en) 1994-09-17
DK0630231T3 (da) 1996-07-22
US5626867A (en) 1997-05-06
JPH07507542A (ja) 1995-08-24
EP0630231B1 (de) 1996-03-06
WO1993018749A1 (de) 1993-09-30
DE4208527A1 (de) 1993-09-23
GR3019546T3 (en) 1996-07-31

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