KR100186656B1

KR100186656B1 - 신규한 펩타이드, 및 전기 펩타이드를 이용하는 혈소판 응집저해제, 체외순환하는 혈액의 혈액응고 저해제, 세포점착저해제, 종양전이 저해제, 수혈용 혈소판 제제의 보호제, 수혈용 혈소판 제제 및 혈소판 제제 팩

Info

Publication number: KR100186656B1
Application number: KR1019960701666A
Authority: KR
Inventors: 요시미 사도; 요시오 하야시; 준 가타다
Original assignee: 하루히고 오쿠무라; 닛폰 스틸(주)
Priority date: 1993-09-30
Filing date: 1994-09-29
Publication date: 1999-04-01
Also published as: CA2168964C; DK0721468T3; DE69427363D1; EP0721468A1; CN1056619C; AU7707694A; US5721213A; EP0721468B1; AU673466B2; CN1132515A; WO1995009185A1; ES2159303T3; KR960704935A; DE69427363T2

Abstract

본 발명은 하기 일반식(I)로 표시되는 펩타이드 또는 그의 염을 제공한다：

Rro-Ser-A-B-Asp-C-D (I)

상기에서, A는 곁사슬(side chain)에 구아니디노(guanidino)기를 가지지 않는 하나의 아미노산이고, B는 하나의 아미노산이며, C는 곁사슬에 소수성기를 가지는 하나의 아미노산이고, D는 수산기 또는 아미노기이다.

본 발명의 펩타이드 또는 그의 염은 우수한 혈소판 응집 저해능 및 혈액응고 저해능을 나타내고, 성체에 매우 안전하기 때문에 유용하다.

아울러, 본 발명은 전기 펩타이드 또는 그의 염을 유효성분으로 함유하는 다음의 약물을 제공한다：혈소판 응집 저해제; 혈액응고 저해제; 종양전이 저해제; 및, 혈소판 제제의 보호제. 또한, 본 발명은 전기 펩타이드 또는 그의 염, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 제제; 약학적으로 허용되는 담체와 전기 펩타이드 또는 그의 염을 유효한 양으로 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 혈소판 응집을 억제하는 방법; 약학적으로 허용되는 담체와 함께 전기 펩타이드 또는 그의 염을 유효한 양으로 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 체외순환하는 혈액의 혈액응고를 억제하는 방법; 약학적으로 허용되는 담체와 함께 전기 펩타이드 또는 그의 염을 유효한 양으로 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 세포점착을 억제하는 방법; 약학적으로 허용되는 담체와 함께 전기 펩타이드 또는 그의 염을 유효한 양으로 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양전이를 억제하는 방법; 및, 혈소판 제제에 전기 펩타이드 또는 그의 염을 유효한 양으로 첨가하는 단계를 포함하는, 수혈용 혈소판 제제에 함유된 혈소판을 보호하는 방법.

Description

[발명의 명칭]

신규한 펩타이드, 및 전기 펩타이드를 이용하는 혈소판 응집저해제, 체외순환하는 혈액의 혈액응고 저해제, 세포점착 저해제, 종양전이 저해제, 수혈용 혈소판 제제의 보호제, 수혈용 혈소판 제제 및 혈소판 제제 팩

[발명의 상세한 설명]

[기술분야]

본 발명은 혈소판 응집 저해기능을 가지는 신규의 펩타이드 및 그를 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 저해제, 체외순환하는(extracorporeal circulation) 혈액의 혈액응고 저해제, 세포점착 저해제(cell adhesion-inhibiting agent), 종양전이 저해제(tumor metastasis-inhibiting agent), 수혈용 혈소판 제제(platelet preparation)의 보호제 뿐만 아니라, 전기 신규의 펩타이드를 포함하는 수혈용 혈소판 제제 및 팩에 수혈용 혈소판 제제와 전기 신규의 펩타이드를 포함하는 수혈용 혈소판 제제 팩(platelet preparation pack)에 관한 것이다.

[배경기술]

혈소판은 손상된 혈관의 표면에 부착함으로써 지혈(hemostasis)에 중요한 역할을 한다.

그러나, 혈소판 응집은 주로 혈전(thrombus)을 형성시켜 혈류의 흐름을 방해하는 것으로 알려져 있다. 이와 같은 혈류차단으로 인하여 산소 및 영양분이 조직과 기관에 적절히 공급되지 못하고, 결국에는 순환계 기관에 심근경색(myocardial infaretion) 및 뇌경색(cerebral infaretion)과 같은 허혈성(ischemic) 질환이 야기된다. 현재, 전기와 같은 허혈성 질환은 그의 치사율이 암 다음으로 높아 심각한 사회문제로 대두되고 있다.

인공 심장 및 폐를 사용하는 외과수술시, 신장질환 환자의 신장투석시와 같은 혈액의 체외순환을 수반하는 의료처치를 수행할 때, 혈소판의 활성화와 응집에 의해 혈액응고가 유발될 수 있으며, 이는 전기 처치에 악영향을 미칠 수 있다.

따라서, 혈전형성과 혈액응고를 예방하는 것이 허혈성 질환의 유발을 막고, 혈액의 체외순환을 안전하게 수행하는 데 있어 중요한 요인이 된다.

혈소판은 혈장에 존재하는 트롬빈, 손상에 의해 혈관에 노출되는 내 피하 조직에 존재하는 콜라겐과 같은 연결조직 단백질 및 기타물질이 혈소판 막 수용체에 결합함으로써 활성화된다. 또한, 혈소판은 방출된 ADP(adenosine diphosphate), 아드레날린(adrenaline), 세로토닌(serotonin), 트롬복산(thromboxane) A2 등이 혈소판 막 수용체에 자동분비(autosecretion)와 같은 양식으로 결합함으로써 활성화된다. 피브리노겐 수용체를 구성하는 2종류의 당단백질이 혈소판의 세포 표면에 존재하여 수용체의 복합체(gp II b III a)를 형성하는데, 이 복합체와 피브리노겐과의 결합(bridge)을 통하여 혈소판 응집이 유발된다.

선천적으로 gp II b 와 g III a가 결핍된 혈소판무력증(thrombasthenia)환자에게서는 혈소판 응집이 일어나지 않는다. 그러므로, gp II b III a 복합체가 피브리노겐에 반드시 결합하여야 혈소판 응집이 일어난다(참조：Rouslahti et al., Science, 238：491(1987)).

gp II b III a 복합체의 성질을 이용하여 혈소판 응집을 저해함으로써, 혈전형성을 방해하려는 시도가 수행되어 왔다.

예를 들면, 콜러(Coller) 등은 gp II b III a 복합체에 대한 단일클론항체의 F(ab')₂단편이 혈소판의 응집을 강력하게 억제하는 기능을 가지고 있는 것으로 보고하였고, 이와 같은 F(ab')₂단편을 혈소판 응집 저해제로 개발할 수 있음을 입증하였다.(참조：Coller et al., Blood, 68：783(1986)).

단일클론항체가 혈소판 응집억제를 위한 치료제로 사용될 수 있다고 할지라도, 단일클론항체 그 자체는 분자량이 큰 단백질이기 때문에, 반복투여시 단일클론항체에 대한 항체를 생산할 수 있다는 문제가 있었다.

따라서, gp II b III a 복합체에 대하여 길항물질로서 작용하면서 면역반응을 유발하지 않는 저분자의 화합물을 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 저해제를 개발하려는 노력이 있어 왔다.

gp II b III a 복합체에의 피브리노겐 결합에 관하여 집중적으로 연구되고 있다. 루오슬라티(Ruoslahti) 등은 일련의 실험을 통하여 아미노산 서열 Arg-Gly-Asp(RGD)이 세포점착 물질에 공통적으로 존재함을 밝혔다(참조：Rouslahti et al., Nature, 309：30-33(1984)). RGD 서열을 인지하는 수용체에 대한 연구를 통하여 gp II b III a 복합체는 RGD 서열을 인지하는 수용체로 규명되었고(참조：Phillips et al., Blood, 71：831-843(1988)), 전기 복합체는 특히 피브리노겐 분자에 존재하는 Arg-Gly-Asp-Phe(RGDF) 아미노산 서열 2개를 인지함으로써 피브리노겐과 결합하는 것으로 규명되었다(참조：Andrieux et al., J. Biol. Chem., 264：9258-9265(1989)).

아울러, gp II b III a 복합체는 피브리노겐 외에도 RGD 서열을 갖고 있는 본 윌레브랜드 팩터(von Willebrand factor), 피브로넥틴(fibronectin), 비트로넥틴(vitronectin) 및 트룸보스폰딘(thrombospondin)에 결합하는 것으로 알려져 있다(참조：Pytela et al., Science, 231：1559(1986) ; Cell, 42：439(1985)).

상기의 보고로 부터, RGD 서열을 포함하는 합성 펩타이드는 피브리노겐에 gp II b III a 복합체가 결합하는 것을 억제하여 혈소판 응집을 저해할 수 있으리라 예측된다. 사실, 400μM의 Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro(GRGDSP)합성 펩타이드는 ADP에 의해 활성화된 혈소판의 응집을 완전히 저해하였다는 보고가 있었다(참조：Plow et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 82：8057-8061(1985)). 또한, 46 내지 50μM의 Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS) 합성 펩타이드는 농도 의존적으로 80 내지 90%의 혈소판 응집 저해능을 나타내었다는 보고도 있었다(참조：Plow et al., Blood, 70：110-115(1987)). 더우기, RGDF 펩타이드는 RGDS보다 4 내지 5배 더 강력한 혈소판 응집 저해능을 나타내는 것으로 보고되었다(참조：Harfinest et al., 71：132-136(1988)).

일본국 특허공개(이하, KOKAI라 함) 평 1-190699 및 평 2-62892, EPO 422937 A1 및 미합중국 특허(이하, USP라 함) 4952562에는 RGD 서얼을 포함하는 4개의 아미노산으로 구성된 펩타이드 유도체를 개시하고 있다. KOKAI 소 63-215696에는 RGD 서열을 포함한 다른 펩타이드 유도체를 개시하고 있으며, KOKAI 평 3-118331 및 평 2-62892 및 WO 91/01331에는 고리형(cyclic) 구조의 RGD 펩타이드 유도체를 개시하고 있다.

최근에, 혈소판 응집 저해능과 생체내 안정성이 우수한 약물을 개발하기 위하여, 자연계에 존재하지 않는 구조를 지닌 RGD 펩타이드 유도체에 대한 집중적인 연구를 수행하였다(참조：Hartman et al., J. Med. Chem., 35：4640-4642(1992); Callahan et al., ibid, 35：3970-3972(1992)). 이러한 화합물은 단백질가수분해효소에 의해 쉽게 분해되므로 경구용 혈소판 응집 저해제로 유용하다.

그러나, 이들 화합물은 독성을 나타낼 것으로 예상되며(특성 문제는 자연계에 존재하지 않는 구조를 지닌 물질에서 종종 나타나고 있다), 약물이 대사되지 않고 체내에 축적되는 부작용을 나타낼 것으로 예상된다. 그러므로, 안전(safety)에 대한 문제가 중요한 과제로 남는다.

생체내 안정성이 증진된 화합물은 혈소판 응집 저해능과 혈액응고 저해능을 지속적으로 보유하므로, 생리적으로 중요한 혈소판의 내재적 기능을 장기간 억제하여 출혈을 유도할 것이다.

혈액의 체외순환시 혈액응고를 억제하기 위해 생물체에 투여된 헤파린도 적당한 기간 이상 그의 기능을 계속 유지하는 심각한 부작용을 나타내어 출혈을 유발하는 것으로 보고되었다(참조：Tadao Akizawa et al., NIHONRINSHO, 43：377-391(1985)).

상기 배경기술에서도 언급하였듯이, 본질적으로 RGD 펩타이드는 임상에서의 사용을 보장할 만큼 강력한 혈소판 응집 저해능을 가지지 않는다. 그러나, RGD 펩타이드는 생물체내에 존재하는 단백질가수분해효소에 의해 생물체에 안전하며 유용한 아미노산으로 분해된다는 우수한 장점을 가지고 있다.

본 발명자들은 이와 같은 장점을 지니면서도 혈소판 응집 저해능, 혈액응고 저해능, 혈소판 보호능 및 세포점착 억제능이 우수한 펩타이드 유도체를 제조한 다음, 이를 약학적 제제로 사용하고자 한다.

본 발명의 첫번째 목적은 생물체에 매우 안전하며, 혈소판 응집 저해능, 혈액응고 저해능, 혈소판 보호능 및 세포점착 억제능이 우수한 펩타이드 및 그의 염을 제공하는 것이다.

본 발명의 두번째 목적은 전기 펩타이드 혹은 그의 염을 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 저해제, 체외순환하는 혈액의 혈액응고 저해제, 세포점착 저해제, 종양전이 저해제, 수혈용 혈소판 제제의 보호제 뿐만 아니라, 전기 펩타이드 혹은 그의 염을 포함하는 수혈용 혈소판 제제 및 펙에 수혈용 혈소판 제제와 전기 펩타이드 혹은 그의 염을 포함하는 수혈용 혈소판 제제 팩을 제공하는 것이다.

본 발명의 세번째 목적은 혈소판 응집, 체외 혈액순환시의 혈액응고, 세포점착 및 종양전이를 억제하고, 수혈용 혈소판 제제에 함유된 혈소판을 보호하기 위한 목적으로 사용될 수 있는, 전기 펩타이드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 네번째 목적은 전기 펩타이드 혹은 그의 염을 사용하여, 혈소판 응집을 억제하는 방법, 체외 혈액순환시의 혈액응고를 억제하는 방법, 세포점착을 억제하는 방법, 종양전이를 억제하는 방법, 수혈용 혈소판 제제에 함유된 혈소판을 보호하는 방법을 제공하는 것이다.

[본 발명의 개시]

상기 문제점을 해결하기 위한 수많은 연구결과, 본 발명자들은 실용화될 수 있을 정도로 매우 안전하면서 우수한 혈소판 응집 저해능과 혈액응고 저해능을 가지는 펩타이드를 제조하였다. 놀랍게도 본 발명의 펩타이드는 혈소판 응집 억제를 위해 필수적인 것으로 알려진 RGD 서열을 포함하지 않더라도, 고활성의 혈소판 응집 저해능과 혈액응고 저해능을 나타내었다.

본 발명의 요지는 다음과 같다 :

(1) 하기 일반식(I)로 표시되는 화합물 또는 그의 염： Pro-Ser-A-B-Asp-C-D (I)

상기에서, A는 곁사슬(side chain)에 구아니디노(guanidino)기를 가지지 않는 하나의 아미노산이고, B는 하나의 아미노산이며, C는 곁사슬에 소수성기를 가지는 하나의 아미노산이고, D는 수산기 또는 아미노기이다;

(2) (1)의 화합물 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 저해제;

(3) (1)의 화합물 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는, 체외순환하는 혈액의 혈액응고 저해제;

(4) (1)의 화합물 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 세포점착 저해제;

(5) (1)의 화합물 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 종양전이 제해제;

(6) (1)의 화합물 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 수혈용 혈소판 보호제;

(7) (1)의 화합물 또는 그의 염을 포함하는 수혈용 혈소판 제제;

(8) 팩에 수혈용 혈소판 제제와 (1)의 화합물 또는 그의 염을 포함하는 수혈용 혈소판 제제 팩;

(9) (1)의 화합물 또는 그의 염 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 제제;

(10) 약학적으로 허용되는 담체와 함께 유효한 양의 화합물(1) 또는 그의 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 혈소판 응집을 억제하는 방법;

(11) 약학적으로 허용되는 담체와 함께 유효한 양의 화합물(1) 또는 그의 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 체외순환하는 혈액의 혈액응고를 억제하는 방법;

(12) 약학적으로 허용되는 담체와 함께 유효한 양의 화합물(1) 또는 그의 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 세포점착을 억제하는 방법;

(13) 약학적으로 허용되는 담체와 함께 유효한 양의 화합물(1) 또는 그의 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양전이를 억제하는 방법;

(14) 혈소판 제제에 유효한 양의 화합물(1) 또는 그의 염을 첨가하는 단계를 포함하는, 수혈용 혈소판 제제에 함유된 혈소판을 보호하는 방법.

[본 발명의 바람직한 실시예]

본 발명에서, 아미노산'은 아미노기 및 카복실기를 모두 갖는 분자를 의미한다.

상기 일반식(I)에서, N-말단의 Pro-Ser 구조는 N-말단에서 염기성 부분을 갖는 프로린과 곁사슬에 히드록시기를 갖는 세린과의 결합으로 이루어진다. C-말단의 Asp-C 구조는 곁사슬에 카복실기를 갖는 산성 아미노산인 아스파르트산과 곁사슬에 소수성기를 갖는 아미노산(이하, 소수성 아미노산이라 함)과의 결합으로 이루어진다.

본 발명의 펩타이드에서, 염기성 부분을 갖는 프로린과 산성 부분을 갖는 아스파르트산은 혈소판 응집 저해능 및 혈액응고 저해능에 필수적이다. 더우기, 전기 두 활성을 증진시키기 위하여는 염기성 부분과 산성 부분을 연결시켜 그의 입체효과(steric effect)를 고정시키는 구조 및 소수성 결합(hydrophobic bond)과 수소결합(hydrogen bond) 등을 통하여 gp II b III a 복합체와 상호작용하는 구조 둘다가 중요하다.

N-말단의 프로린에 있는 이미노기는 염기성 부분에 해당하고, 아스파르트산의 곁사슬에 있는 카복실기는 산성 부분에 해당한다. 일반식(I)의 펩타이드에 있는 세린 혹은 A, B로 표시된 아미노산 및 C로 표시된 소수성 아미노산은 혈소판 응집 저해능 및 혈액응고 저해능의 증진에 중요한 상기의 구조를 형성하는데 필요한 수소결합과 소수성 결합이 쉽게 이루어지도록 한다.

일반식(I)에서, A는 곁사슬에 구아니디노기를 갖지 않는 하나의 중성 아미노산이거나, 곁사슬의 아미노기가 탄소수 1 내지 10개의 알킬기로 치환된 아미노산 및 그의 유도체, 예를 들면 파라-아미노사이클로헥실 글리신, 파라-아미노사이클로헥실 알라닌, 파라-아미노페닐 글리신, 파라-아미노페닐 알라닌 등이다.

본 발명에서, 곁사슬은 하기와 같은 아미노산의 일반식에서 R부분을 의미한다.

본 발명에서, 중성 아미노산은 글리신, 프로린, 혹은 그들의 유도체와 같이 전기적으로 중성인 그룹을 곁사슬에 가지는 아미노산을 의미한다. 이와 같은 글리신 유도체는 탄소수 1 내지 10개의 알킬기를 가진 N-알킬 글리신을 포함한다. 프로린 유도체는 치환기를 가진 프로린, 불포화 결합(unsaturated bond)과 고리내에 이종원자를 가진 프로린 및 고리의 크기가 각기 다른 프로린을 포함한다. 전기적으로 중성인 그룹은 치환되거나 치환되지 않은 탄소수 1 내지 30개의 알킬기, 치환되거나 치환되지 않은 아릴기, 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴기, 치환되거나 치환되지 않은 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기 및 이들의 조합을 포함한다. 또한, 이들 그룹은 산소, 황 등의 이종원자를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들면, 히드록시기, 머캡토 그룹 및 탄소수 1 내지 10개의 알킬티오 그룹이 있다.

구체적으로, 곁사슬이 메틸기인 경우, 중성 아미노산은 알라닌이다.

곁사슬이 알킬기인 경우, 그를 포함하면서 물에 잘 용해되는 직선형 또는 분지형의 중성 아미노산이 바람직하고, 입체장애(steric hindrance)의 측면을 고려하면 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, n-펜틸, n-헥실, 헵틸 및 옥틸기와 같은 탄소수 1 내지 20개의 알킬기가 보다 바람직하다.

곁사슬에 알킬기를 가지는 중성 아미노산은 알라닌, 발린, 노르발린, 루이신, 노르루이신, t-루이신, 이소루이신, 알로이소루이신 등이 바람직하다. 이중에서도 곁사슬에 직선형의 알킬기인 n-프로필 또는 n-부틸기를 가지는 중성 아미노산이 특히 바람직하다. 예를 들면, 벌키한(bulky) 이소프로필기 또는 이소부틸기를 가진 발린 또는 루이신을 포함하는 펩타이드(실시예 3 및 6에서 제조된 화합물)와, 탄소수는 같으나 직선형인 n-프로필기 또는 n-부틸기를 가진 노르발린 또는 노르루이신을 포함하는 펩타이드(실시예 5 및 9에서 제조된 화합물)를 비교할 경우, 중성 아미노산으로 직선형의 알킬기를 가진 노르발린 또는 노르루이신을 포함하는 펩타이드가 더 높은 혈소판 응집 저해능과 혈액응고 저해능을 나타낸다.

곁사슬에 직선형의 알킬기를 가지는 다음과 같은 중성 아미노산을 포함하는 펩타이드가 바람직하다 :

보다 바람직한 펩타이드는 Pro-Ser-Nva-Gly-Asp-Trp-OH 및 Pro-Ser-Nle-Gly-Asp-Trp-OH, 가장 바람직한 펩타이드는 Pro-Ser-Nva-Gly-Asp-Trp-OH이다.

곁사슬에 분지형의 알킬기를 가지는 다음과 같은 중성 아미노산을 포함하는 펩타이트가 바람직하다 :

보다 바람직한 펩타이트는 Pro-Ser-Tle-Gly-Asp-Trp-OH Pro-Ser-Leu-Gly-Asp-Trp-OH, Pro-Ser-Ile-Gly-Asp-Trp-OH 및 Pro-Ser-(allo)Ile-Gly-Asp-Trp-OH이고, 가장 바람직한 펩타이드는 Pro-Ser-Tle-Gly-Asp-Trp-OH이다.

아미노산 A의 곁사슬이 아릴기이면, 그것은 페닐기 및 나프틸기 등을 포함한다. 아릴기는 전기적으로 중성인 상기에서 언급한 그룹, 예를 들면, 탄소수 1 내지 10개의 알킬기 ; 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기 또는 아릴기 ; Br, I 혹은 Cl 원자 등의 할로겐 원자 ; 시아노기 ; 니트로기 ; 탄소수 1 내지 10개의 알콕시기 ; 탄소수 2 내지 10개의 아실기 ; 또는, 케토그룹으로 치환될 수 있다.

곁사슬에 아릴기를 갖는 중성 아미노산은 페닐글리신, 나프틸 글리신 등을 포함한다. Peo-Ser-Phg-Gly-Asp-Trp-OH 등의 펩타이드가 바람직하다.

아미노산 A의 곁사슬이 헤테로아릴기이면, 그것은 푸릴(furyl). 테트라히드로푸릴, 피라닐(pyranyl), 티에닐기(thienyl) 등을 포함한다. 헤테로아릴기는 전기적으로 중성인 상기에서 언급한 그룹, 예를 들면, 탄소수 1 내지 10개의 알킬기 ; 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기 또는 아릴기 ; Br, I 혹은 Cl 원자 등의 할로겐 원자 ; 시아노기 ; 니트로기 ; 탄소수 1 내지 10개의 알콕시기 ; 탄소수 2 내지 10개의 아실기 ; 또는, 케토그룹으로 치환될 수 있다.

아미노산 A의 곁사슬이 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기이면, 그것은 탄소수 3 내지 7개의 알킬기를 가지는 사이클로알킬기, 예를 들면, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸기 등이 바람직하다. 사이클로알킬기는 전기적으로 중성인 상기에서 언급한 그룹, 예를 들면, 탄소수 1 내지 10개의 알킬기; 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기 또는 아릴기 ; Br, I 혹은 Cl 원자 등의 할로겐 원자 ; 시아노기 ; 니트로기 ; 탄소수 1 내지 10개의 알콕시기 ; 탄소수 2 내지 10개의 아실기 ; 케토그룹 ; 또는, 히드록시기로 치환될 수 있다.

곁사슬에 사이클로알킬기를 갖는 중성 아미노산은 사이클로헥실 글리신 등을 포함한다. Pro-Ser-Chg-Gly-Asp-Trp-OH의 펩타이드가 바람직하다.

탄소수 1 내지 10개의 알킬기, 아릴기 및 헤테로아릴기, 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기가 서로 조합된(combined) 그룹은 구체적으로 페닐 알킬기 등의 아르알킬기(aralkyl group) ; 사이클로헥실 알킬기와 같은 사이클로알킬-알킬기 ; 알킬-사이클로알킬기 등을 포함한다. 좀 더 구체적으로, 벤질, 페닐에틸, 사이클로헥실 메틸기 등을 포함한다. 이와 같이 조합된 그룹내의 고리부분은 전기적으로 중성인 상기에서 언급한 그룹, 예를 들면, 탄소수 1 내지 10개의 알킬기 ; 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기 또는 아릴기 ; Br, I 혹은 Cl 원자 등의 할로겐 원자 ; 시아노기 ; 니트로기 ; 탄소수 1 내지 10개의 알콕시기 ; 탄소수 2 내지 10개의 아실기 ; 케토그룹 ; 또는, 히드록시기로 치환될 수 있다.

상기에서 언급한 조합된 그룹을 가지는 중성 아미노산은 페닐 알라닌, 사이클로헥실 알라닌, 4-메틸페닐 알라닌, 4-브로모페닐 알라닌, 나프틸 알라닌, 호모페닐 알라닌 및 0-메틸 티로신을 포함한다. Pro-Ser-Cha-Gly-Asp-Trp-OH, Pro-Ser-Phe-Gly-Asp-Trp-OH 및 Pro-Ser-Hph-Gly-Asp-Trp-OH의 펩타이드가 바람직하며, Pro-Ser-Cha-Gly-Asp-Trp-OH 펩타이드가 보다 바람직하다.

아미노산 A의 곁사슬이 알킬기, 아릴기, 헤테로아릴기, 산소, 황 등의 이종원자를 포함하면서 전기적으로 중성인 그룹을 갖는 사이클로알킬기, 또는 전기 그룹들의 조합이면, 이들 그룹들은 구체적으로 히드록시기 또는 머캡토 그룹을 가지는 알킬기 및 사이클로알킬기, 혹은 탄소수 1 내지 10개의 알킬티오기(alkylthio group)를 포함한다. 이와 같은 그룹을 가지는 중성 아미노산은 세린, 트레오닌, 메티오닌, 시스테인, 호모시스테인 등이 바람직하다.

아미노산 A가 탄소수 1내지 10개의 알킬기를 가지는 N-알킬 글리신이면, 사코신(sarcosine)과 같은 탄소수가 3개 이하인 알킬기를 가지는 N-알킬 글리신이 바람직하다.

아미노산 A가 고리에 치환기가 붙은 프로린인 경우, 치환기는 전기적으로 중성인 상기에서 언급한 그룹, 예를 들면, 탄소수 1 내지 10개의 알킬기 ; 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기 또는 아릴기 ; Br, I 혹은 Cl 원자 등의 할로겐원자; 시아노기 ; 니트로기 ; 탄소수 1 내지 10개의 알콕시기 ; 탄소수 2 내지 10개의 아실기 ; 케토그룹 ; 또는, 히드록시기 등을 포함한다. 불포화 결합을 갖는 유도체는 디히드로프로린을 포함한다. 고리를 구성하는 탄소가 이종원자로 치환된 유도체는 티오프로틴 등을 포함한다. 고리의 크기가 다른 유도체는 아제티딘-카복실산(azetidine-carboxylicacid), 호모프로린 등의 3 내지 8개 원자로 구성된 고리(3-membered to 8-membered ring)를 가지는 유도체가 바람직하다. 프로린 유도체는 β, β-디메틸 티오프로린 등과 같은 전기 유도체들의 조합으로 구성될 수 있다.

펩타이드에 고용해성(high solubility) 및 고활성을 제공하는 중성 아미노산은 세린, 트레오닌, 프로린, 히드록시프로린, 디히드로프로린, 4-메틸 프로린 및 4-메톡시 프로린을 포함한다. 바람직한 펩타이드는 다음과 같다 :

보다 바람직한 펩타이드는 Pro-Ser-Pro-Gly-Asp-Trp-OH, Pro-Ser-Hyp-Gly-Asp-Trp-OH, Pro-Ser-△Pro-Gly-Asp-Trp-OH 및 Pro-Ser-Hyp(Bzl)-Gly-Asp-Trp-OH이고, 가장 바람직한 펩타이드는 Pro-Ser-△Pro-Gly-Asp-Trp-OH이다.

효소에 의한 분해를 방지하고 펩타이드가 고활성을 유지시키기 위하여 D-아미노산을 사용할 수 있다. D-아미노산은 상기에서 언급한 중성 아미노산의 D-이소머(isomer)가 바람직하고, Pro-Ser-DPro-Gly-Asp-Trp-OH 펩타이드가 바람직하다.

탄소수 1 내지 10개의 알킬기로 치환된 아미노기를 곁사슬에 가지고 있는 아미노산은 하기 일반식(X)로 표시한다：

상기에서 R¹및 R²는 동일하거나 다를 수 있으며, 수소원자 혹은 탄소수 1 내지 10개의 알킬기이고 ; 및, n은 4 내지 10의 정수이다.

하기 일반식(X')로 표시되는 아미노산이 바람직하다.

상기에서, R¹은 수소원자, 메틸 혹은 t-부틸기이다. 리신, ε-N-메틸리신 및 ε-N-t-부틸리신이 여기에 속하는데, 입체장애를 고려할 때 ε-N-t-부틸리신보다는 ε-N-메틸리신이, ε-N-메틸리신보다는 리신이 바람직하다. 아미노기가 치환되지 않은 리신이 바람직하다. 후술하는 실험 실시예 1에서 보듯이, 아미노산 A로서 리신을 포함하는 펩타이드(실시예 13에서 제조되는, 일반식(X)에서 n이 4인 화합물)는 아미노산 A로서 오르니틴을 포함하는 펩타이드(비교 실시예 1에서 제조되는 n=3인 화합물)보다 우수한 혈소판 응집저해능 및 혈액응고 저해능을 나타낸다. 일반식(X)에서 정수 n은 α-탄소 원자로 부터 곁사슬에 있는 아미노산까지의 거리를 나타내는데, n은 적어도 4인 것이 바람직하고 4 내지 6이 보다 바람직하다.

더구나, 상기에서 언급한 사실외에도, 후술하는 실험 실시예 1에서 보듯이, 아미노산 A로서 노르발린을 포함하면서 곁사슬에 동일길이의 알킬기를 가지나, 염기성의 아미노기를 가지지 않는 펩타이드(실시예 4에서 제조되는 화합물)는 아미노산 A로서 오르니틴을 포함한 펩타이드(비교 실시예 1에서 제조되는 화합물)보다 매우 증진된 혈소판 응집 저해능과 혈액응고 저해능을 나타낸다.

일반식(I)에서, B는 아미노산이다. 입체장애가 큰 아미노산과 산성 아미노산은 그를 포함하는 펩타이드의 혈소판 응집 저해능과 혈액응고 저해능을 감소시키는 경향이 있다. 따라서, 아미노산 B는 탄소수 10 이하의 상대적으로 작은 곁사슬을 가지는 중성 아미노산 및 그의 N-알킬유도체가 바람직하다. N-알킬 유도체에서 알킬기의 탄소수는 1 내지 5가 바람직하다. 구체적으로, 글리신, 알라닌, β-알라닌, 사코신, N-에틸 글리신, N-이소프로필 글리신, N-프로필 글리신 등이 바람직하다. 후술하는 실험 실시예 1에서 보듯이, 아미노산 B로서 사코신을 포함하는 본 발명의 펩타이드(실시예 1에서 제조되는 화합물)는 아미노산 B로서 글리신을 포함하는 펩타이드(실시예 2에서 제조되는 화합물)보다 2배 더 높은 혈소판 응집 저해능과 혈액응고 저해능을 나타낸다. 이와 같은 차이는 일반적으로 펩타이드의 주사술(main chain)은 트랜스(trans) 배열을 가지는데, 사코신이 펩타이드에 부가되면 시스(cis) 형태로 변화하여, 혈소판 응집 저해능과 혈액응고 저해능을 증진시키는 구조로 쉽게 변하기 때문인 것으로 추측된다.

일반식(I)에서, 소수성 결합을 통하여 수용체와 상호작용하는 소수성기를 곁사슬에 가지는 아미노산은 C로 표시되었다. 아미노산 C는 곁사슬에 알킬기, 페닐기, 페닐알킬기, 알콕시페닐, 사이클로알킬기, 피리딜기, 인돌릴기(indolyl group) 등의 소수성기를 가지는 아미노산이 바람직하다. 구체적으로, 페닐알라닌, 트립토판, O-알킬 티로신, 나프틸 알라닌, 피리딜 알라닌 등이 바람직하다. 그 중에서도 트립토판이 보다 바람직하다. 알킬기는 탄소수 10이하의 저급알킬기가 바람직하다.

일반식(I)에서, D는 히드록시기 또는 아미노기이다. D가 히드록시기인 경우의 펩타이드 활성은 아미노기인 경우보다 더 높다. 그러나, D가 아미노기인 경우의 펩타이드 활성이 더 오래 지속된다. 원하는 목적에 따라 히드록시기 혹은 아미노기를 선택할 수 있다.

본 발명에서 사용된 아미노산, 펩타이드, 보호기, 활성기 등의 약어는 IUPAC 및 IBU의 명명체계 혹은 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 기호에 따라 나타내었다. 유전자 조절과 직접 연관된 α-아미노산이 편광이성질(optical isomerism)을 갖는 경우, 보통은 L-이소머를 의미한다.

약어는 다음과 같이 표시한다.

Asp or D： 아스파르트산

Ala：알라닌

Arg or R：알지닌

Gly or G：글리신

Phg：페닐글리신

Sar：사코신

Ser or S：세린

Thr：트레오닌

Var：발린

Nva：노르발린

Ile：이소루이신

(allo)Ile：알로 이소루이신

Leu：루이신

Nle：노르루이신

Tle：삼차(tertiary) 루이신

Lys：리신

Chg：사이클로헥실 글리신

Cha：사이클로헥실 알라닌

Met：메티오닌

Trp：트립토판

Tyr：티로신

Tyr(CH₃)：O-메틸 티로신

Phe or F：페닐알라닌

Hph：호모페닐알라닌

Pro or P：프로린

DPro：D-프로린

Hyp：히드록시프로린

△Pro：디히드로프로린

4-CH₃Pro：4-메틸프로린

4-OCH₃Pro：4-메톡시프로린

Boc：t-부톡시카보닐

Bu^t：t-부틸

OBu^t：t-부틸에스테르

Mtr：4-메톡시-2,3,6-트리메틸 벤젠 술포닐

P_mc：2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-술포닐

F_moc：9-플루오로닐 메톡시카보닐

Orn：오르니틴

Cys：시스테인

Pen：페니실라민

Azt：아제티딘-카복실산

Thz：티오프로린

Dmt：디메틸 티오프로린

Dmp：디메틸 프로린

본 발명의 펩타이드는 상업적으로 입수가능한 아미노산을 이용하여 간단한 방법으로 쉽게 합성할 수 있다. 예를 들면, 펩타이드 화학에서 일반적으로 사용되는 액상(liquid phase) 혹은 고상(solid phase)을 이용한 방법으로 펩타이드를 제조할 수 있다(참조：Schroder and Luhke, The Peptides, vol. 1, Academic Press, New York, U.S.A(1966) ; Nobuo Izumiya et al., The Fundamentals and Experiments of Peptide Synthesis, Maruzen(1985)). 전기 제조방법은 컬럼법(column method) 혹은 뱃치법(batch method)을 이용할 수 있다.

펩티드 결합을 형성하기 위한 축합방법(condensation method)은 아자이드법, 산 염화물법, 산 무수물법, 카보디이미드법, 카보디이미드-첨가법, 활성 에스테르법, 카보닐 이미다졸법, 산화환원법, 효소법, 우드워드시약 K(Woodward's reagent K)을 이용한 방법 등을 사용한다. 고상법으로 축합반응을 수행할 때는 산 무수물법, 카보디이미드법 및 활성 에스테르법이 주로 사용된다.

고상법으로 펩타이드를 합성할 때는 사용되는 유기용매에 용해되지 않는 레진 등의 지지체에 아미노산의 C-말단이 커플링된다. 이때, 레진에 아미노산을 결합시키기 위한 작용기를 고입하거나, 레진과 작용기 사이에 스페이서(spacer)를 삽입하거나, 조건에 따라 여러 위치에서 절단될 수 있는 핸들(handle)이라 불리는 사슬을 도입함으로써, 목적에 따라 레진을 다양하게 변형시킬 수 있다. 레진은 클로로메틸 레진 등의 할로메틸레진, 옥시메틸레진, 4-(옥시메틸)-페닐아세타미드 메틸레진, 4-(옥시메틸)-페녹시메틸레진, C-말단의 아미드화를 위한 레진 등을 사용한다.

축합반응 전에, 축합반응에 관여하지 않는 카복실기 및 아미노기, 및 알지닌의 구아니디노기는 일반적인 방법으로 보호된다. 이와는 대조적으로, 축합반응에 직접 관여하는 카복실기 및 아미노기는 활성화된다.

보호기는 유기화학 분야에서 널리 사용되고 있는 것을 사용한다(참조：Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Willey Sons, Ins.(1981)).

카복실기의 보호기는 메틸 에스테르, 에틸 에스테르. 벤질 에스테르, p-니트로벤질 에스테르, t-부틸 에스테르, 사이클로헥실 에스테르 등과 같은 일반적으로 사용되고 있는 보호기를 사용한다.

아미노기의 보호기는 벤질 옥시카보닐기, t-부톡시카보닐기, 이소보르닐옥시카보닐기(isobornyloxycarbonyl) 및 9-플루오레닐 메톡시카보닐기 등을 사용한다.

세린과 같은 아미노산의 히드록시기 보호기는 t-부틸기, 벤질기 , 트리메틸실릴기(trimethylsilyl group) 및 테트라히드로피라닐기 등을 사용한다.

리신의 ε-아미노기의 보호기는 t-부톡시카보닐기, 9-플루오레닐메톡시카보닐기 등을 사용한다.

활성화된 카복실기를 가지는 아미노산은 카복실기에 해당하는 산 무수물 ; 아자이드 ; 펜타플로오로페놀, 2,4-디니트로페놀, 시아노메틸 알콜, p-니트로페놀, N-히드록시석시니미드, N-히드록시-5-노르보르넨(norbornene)-2,3-디카복시미드(dicarboximide), N-히드록시프탈리미트(N-hydroxyphthalimide) 및 1-히드록시벤조트리아졸(1-hydroxybenzotriazole)을 가진 활성 에스테르 등을 사용한다.

활성화된 아미노기를 가지는 아미노산은 아미노기에 해당하는 아미드 포스페이트를 사용한다.

펩타이드 합성을 위한 축합반응은 보통 용매에서 수행한다. 용매는 클로로포름, 디클로로메탄, 에틸 아세테이트, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸설폭사이드, 피리딘, 디옥산, 테트라히드로퓨란, N-메틸 피롤리돈, 물, 메탄올 및 그들의 혼합물을 사용한다. 일반적으로, 축합반응은 보통 -30 내지 50℃의 온도에서 수행한다.

펩타이드 제조시 보호기의 탈리반응은 보호기가 펩티드 결합에 영향을 미치지 않고 제거될 수 있다면 보호기의 종류에 따라 선택될 수 있다. 탈보호 반응은 HCl, HBr, 무수 HF, 메탄술폰산, 트리플로오로메탄술폰산, 트리플루오로 아세트산 또는 그들의 혼합물과 같은 산의 처리로써 ; NaOH, KOH, 히드라진, 디에틸라민, 피퍼리진 등의 알칼리 처리로써 ; 액상 암모니아에 용해된 나트륨의 처리로써 ; 탄소상에서 팔라듐으로 환원시킴으로써 ; 트리메틸실릴 트리플레이트, 트리메틸실릴 브로마이드 등의 처리로 실릴화(silylation)시킴으로써 수행한다. 산 또는 실릴화 시약으로 탈보호시키는 상기의 반응에서, 아니솔, 페놀, 크레졸, 티오아니솔 및 에탄디티올 등의 양이온포획시약(catiom-trapping agent)을 첨가하여 효과적인 탈보호 반응을 수행한다.

고상법으로 합성된 펩타이드는 일반적인 방법으로 고상의 레진으로 부터 절단될 수 있다. 펩타이드 절단방법은 상기에서 기술한 산 또는 실릴화 시약을 사용할 수 있다.

이렇게 제조된 펩타이드는 상기에서 언급한 일련의 반응 후에 일반적으로 알려진 방법으로 분리 및 정제할 수 있다. 예를 들면, 추출, 분배, 재침전, 재결정, 컬럼 크로마토그래피 등을 사용하여 순수한 펩타이드를 얻을 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 제조시의 반응조건에 따라 염(salt)의 형태로 제조될 수 있다. 염은 히드로클로라이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트 등의 무기산 염 : 포름메이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 글리콜레이트, 석시네이트, 말레이트, 타르트레이트, 시트레이트, 트리플루오로아세테이트 등의 유기산 염 ; 나트륨염 및 칼륨염 등의 알칼리금속염 ; 칼슘염 등의 알칼리토금속염; 암모늄, 에타놀라민, 트리에틸라민 및 디사이클로헥실라민 염 등의 유기아민 염을 포함한다.

이와 같이 제조된 본 발명의 펩타이드는 혈소판 응집 저해제, 세포 점착 저해제, 종양전이 저해제, 수혈용 혈소판 제제의 보호제(이하, '혈소판 응집 저해제 등'이라 함)의 유효성분으로 사용될 때, 펩타이드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염을 약학적으로 허용되는 고상 또는 액상의 담체 혹은 희석제, 즉, 부형제, 안정화제 등과 함께 제제화하여 약학적 제제를 제조한다. 약학적 제제에서, 담체에 대한 유효성분의 비는 1 내지 90중량%로 다양할 수 있다. 약학적 제제는 과립, 미세과립, 분할, 정제, 캡슐, 환제(pills), 액제(liquids), 용제(solutions) 등의 제형으로 경구투여될 수 있다. 아울러, 약학적 제제는 과량분말(bulk powder)의 제형으로 경구투여될 수 있고, 정맥주사, 근육주사, 피하주사로도 투여될 수 있다. 주사액은 본 발명의 펩타이드 혹은 약학적으로 허용되는 그의 염으로 부터 사용직전에 제조될 수 있다.

경구, 복강 혹은 복강외 투여에 적합한, 유기 또는 무기, 액상 또는 고상의 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제는 본 발명의 혈소판 응집 저해제 등을 제조하는 데 사용될 수 있다. 물, 젤라틴, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 탤크(talc), 동물성 지방 및 오일, 식물성 지방 및 오일, 벤질 알코올, 검(gums), 폴리알킬렌 글리콜, 페트로레움 레진, 코코넛 오일, 라놀린(lanolin), 의약용 기타 담체는 본 발명의 혈소판 응집 저해제 등의 담체 혹은 희석제로 사용될 수 있다. 안정화제, 흡습제, 유화제, 삼투압을 변화시키거나 적절한 pH를 유지시키기 위한 염은 애쥬번트로서 사용될 수 있다.

본 발명의 혈소판 응집 저해제 등은 경우에 따라서, 즉 여러가지 질환을 치료하기 위해 사용되는 경우 다른 종류의 혈소판 응집 저해 성분과 같은 다른 약학적 유효성분을 포함할 수 있다.

과립, 미세과립, 분말, 정제 혹은 캡슐의 제형에서, 유효성분의 함량은 5 내지 80중량%가 바람직하다. 액제 및 용제에서, 유효성분의 함량은 1 내지 30중량%가 바람직하다. 더구나, 주사제의 경우에는 유효성분의 함량이 1 내지 10중량%인 것이 바람직하다.

본 발명의 혈소판 응집 저해제 등을 경구투여할 때, 환자의 연령, 병의 증세 등에 따라 달라질 수 있으나 성인의 경우 유효성분의 투여량은 1일에 500 내지 1000mg이 바람직하다. 본 발명의 혈소판 응집 저해제 등은 상기에서 언급한 일일 투여량으로 하루에 한번 또는 적당한 간격으로 2 내지 3번 투여될 수 있다. 주사의 경우에는, 성인에게 매번주사시 일백 내지 이 삼백mg의 유효성분이 투여되도록 하는 것이 바람직하다. 또한, 본 발명의 혈소판 응집 저해제 등은 점적주입법(instillation) 등의 방법으로 한번 또는 두 세번 주입할 수 있다.

본 발명의 펩타이드 혹은 그의 염은 체외순환하는 혈액에 사용될 때, 주사형태 및 점적주입물(drip infusion) 형태로 제제화될 수 있다. 투여 위치 및 양은 체외순환시스템(extracorporeal circulation system)의 종류, 약효 지속시간 등에 따라 다르다. 예를 들면, 체외순환시스템으로 시간당 1 내지 100mg/kg의 펩타이드가 계속적으로 주사 또는 점적주입되도록 한다. 펩타이드가 단독 또는 다른 약물과의 혼합으로 사용되든지에 상관없이, 펩타이드는 분해효소가 다량 존재하는 생체내에서 사용될 때보다는 체외순환시스템에서 사용될 때, 적은 양으로도 효과적이다.

본 발명의 펩타이드가 혈액응고 저해제로 공지된 헤파린과 함께 사용된다면, 혈액응고의 두가지 중요한 경로 즉, 혈소판 응집 시스템과 응고시스템이 억제되어 혈액응고를 완전히 억제하리라 예측된다. 또한, 두가지 약물의 상승효과(synergism)가 예측되므로, 이미 기술한 부작용을 갖는 헤파린의 사용량을 감소시킬 수 있다. 더구나, 본 발명의 펩타이드와 시트르산, 푸탄(futhan) 등의 단백질분해효소 저해제, 조직형 플라스미노겐 활성화제 등의 피브린 용해제(fibrinolytic agent)와 혼합하여 사용하면, 효과적일 것으로 예측된다.

본 발명에서, 수혈용 혈소판 제제 팩의 형태는 수혈용 혈소판 보호제와 수혈용 혈소판 제제를 포함한다는 특징을 가지나, 특별히 한정되지는 않는다. 임상에서 널리 사용되고 있는 모든 형태의 수혈용 혈소판 제제 팩은 모두 사용될 수 있다. 예를 들면, 팩타잎의 백(bag) 및 병 등이 적당하다. 이들의 원료 또한 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 가능한 한 많이 유효성분의 흡착을 억제할 수 있는 폴리-비닐계, 즉 폴리비닐클로라이드 및 폴리올레핀 등은 백의 원료로 사용될 수 있고, 플라스틱 및 유리는 병의 원료로 사용될 수 있다. 본 발명의 수혈용 혈소판 제제의 보호제는 혈소판의 함량에 따라서 본 발명의 펩타이드 또는 그의 염이 0.1μM 내지 1mM, 바람직하게는 1μM 내지 50μM 의 최종농도로서 포함되도록 첨가할 수 있다. 물론, 수혈용 혈소판 제제 팩에 보통 첨가되는 기타 물질은 수혈용 혈소판을 보호하기 위한 본 발명의 약물가 함께 첨가할 수 있다.

아울러, 본 발명의 펩타이드는 그가 갖는 강력한 혈소판 응집 저해농과 저독성의 특성을 이용하여, 혈전용해 치료후의 혈전 재발 및 수술후의 혈전 형성을 예방하는데 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 펩타이드는 심근경색 및 기타 여러 동맥혈전에 대한 수술시 수행되는 경피경관혈관성형술(percutaneous transluminal coronary angioplasty：PTCA)후에 나타나는 혈액 재발협착증(blood restenosis)을 예방하고, 동맥 또는 정맥의 반이식(hemitransplant)과 같은 혈관성형수술 후 이식편 개방성(graft patency)을 유지하며, 인공혈관 등의 이식후 혈전형성을 방지하기 위하여 사용할 수 있다.

[도면의 간단한 설명]

제1도는 개(dog)를 이용한 혈액투석 모델에서의 투석과정을 나타내는 개략도이다.

제2도는 개를 이용한 혈액투석 모델에서 측정한 혈액응고 억제효과를 나타내는 그래프이다.

제3도는 보존기간에 따른 혈소판의 수 감소정도로서 측정한 본 발명 펩타이드의 보호효과를 나타내는 그래프이다.

제4도는 혈소판의 응집능 감소정도로서 측정한 본 발명 펩타이드의 보호효과를 나타내는 그래프이다.

[실시예]

본 발명은 하기의 실시예에 의해 보다 상세히 설명하고자 한다.

[화합물의 합성]

[실시예 1]

Pro-Ser-Ala-Sar-Asp-Trp-OH의 합성

HOCH₂-C₆H₄(1,4)-OCH₂-C₆H₄(1,4)-폴리머로 표시되는 P-알콕시벤질알코올-타잎 레진(사용된 Trp의 양：0.87meg/g ; BACHEM Co.)(0.275g ; 0.25mmol)을 반응기에 넣었다. 활성형 에스테르 형태의 F_moc-Trp 및 디메틸아미노피리미딘을 첨가하고, 표 1과 같이 흔들기과정과 여과과정을 반복한 다음, 다음의 일반식으로 표시되는 보호기가 붙은 펩타이드 레진을 얻었다.：

Pro-Ser(Bu^t)-Ala-Sar-Asp(OBu^t)-Trp-레진

상기에서 얻은 펩타이드 레진을 0℃에서 1시간 동안 TFA(trifluoroacetic acid)에 용해된 m-크레졸 및 티오아니솔의 존재하에서 에탄디티올과 반응시켰다. TFA를 증발기로 제거하고, 여과시켜 레진을 제거하였다. 여액을 냉각시키면서 디에틸에테르를 첨가하여, 레진으로 부터 절단된 펩타이드를 분말상으로 얻었다. 그 분말을 디에틸에테르로 세척하였다. 세척된 펩타이드를 세파덱스 G-10(Pharmacia Co.) 크로마토그래피하여 염을 제거하고, 동결건조시켜 조펩타이드(crude peptide)를 얻었다. 조펩타이드를 고속액체 크로마토그래피(HPLC, 컬럼：ODS 5C₁₈(μ bondasphere, ø 20×150mm), 이동상：(A) 0.1%TFA, (B) 100% CH3CN/0.1% TFA, 농도구배차：(A)：(B)=90：10 내지 (A)：(B)=70：30, 20분, 유속：17ml/분)하여 펩타이드를 정제하였다. 세파덱스 G-25 겔 여과하여 펩타이드 아세테이트 염을 얻은 다음, 동결건조하여 34mg의 원하는 펩타이드를 수득하였다.

아미노산 분석(6N, HCl+페놀, 24시간, 110℃)

이와 같은 분석법에서는 산 가수분해시 분해되는 트립토판을 검출할 수 없다. 외부 표준물질로 사용되는 아미노산은 표준 아미노산이기 때문에, 표준(standard)이 없는 아미노산을 검출할 수 없다.

Asp 1.06(1)

Ser 1.00(1)

Sar -(1)

Trp -(1)

Ala 1.09(1)

Pro 1.10(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼(Nacalai tesque Co.)을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간(retention time) 18분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 646.3, 실험치 646

[실시예 2]

Pro-Ser-Ala-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

상기의 펩타이드는 실시예 1과 동일한 방법으로 합성하였다.

아미노산 분석(6N, HCL+페놀, 24hr, 110℃

Asp 0.82(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.08(1)

Trp -(1)

Ala 1.08(1)

Pro 1.19(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 19.2분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 632.3, 실험치 632

[실시예 3]

Pro-Ser-Val-Sar-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Sar -(1)

Trp -(1)

Val 1.13(1)

Pro 1.01(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 20.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 674.3, 실험치 674

[실시예 4]

Pro-Ser-Nva-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.03(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.12(1)

Trp -(1)

Nva 1.08(1)

Pro 1.21(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 26.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 660.3, 실험치 660

[실시예 5]

Pro-Ser-Nva-Sar-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N, HCl+페놀, 24hr, 110℃

Asp 0.97(1)

Ser 1.00(1)

Sar -(1)

Trp -(1)

Nva 1.12(1)

Pro 1.24(1)

[HPLC 분석]

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 28.5분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 674.3, 실험치 674

[실시예 6]

Pro-Ser-Leu-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCℓ+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.97(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.12(1)

Trp -(1)

Leu 1.16(1)

Pro 1.08(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 32.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 674.3, 실험치 674

[실시예 7]

Pro-Ser-Leu-Sar-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCℓ+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.01(1)

Ser 1.00(1)

Sar -(1)

Trp -(1)

Leu 1.07(1)

Pro 1.13(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 36.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 688.3, 실험치 688

[실시예 8]

Pro-Ser-Nle-Sar-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.97(1)

Ser 1.00(1)

Sar -(1)

Trp -(1)

Nle 1.22(1)

Pro 1.10(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 34.5분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 688.3, 실험치 688

[실시예 9]

Pro-Ser-Nle-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.94(1)

Ser 0.94(1)

Gly 1.04(1)

Trp -(1)

Nle 1.06(1)

Pro 1.00(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 34.6분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 674.3, 실험치 674

[실시예 10]

Pro-Ser-Ala-Sar-Asp-Phe-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.09(1)

Ser 0.93(1)

Sar -(1)

Phe 1.08(1)

Ala 1.00(1)

Pro 1.03(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 17.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-Ms：M+H 계산치 607.3, 실험치 607

[실시예 11]

Pro-Ser-Gly-Sar-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(^N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.07(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.14(1)

Trp -(1)

Sar -(1)

Pro 1.10(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 18.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 632.3, 실험치 632

[실시예 12]

Pro-Ser-Ile-Sar-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Sar -(1)

Trp -(1)

Ile 1.20(1)

Pro 1.18(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 34.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 688.3, 실험치 688

[실시예 13]

Pro-Ser-Lys-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.19(1)

Trp -(1)

Lys 1.15(1)

Pro 1.24(1)

HPLC 분석

FAB-MS：M+H 계산치 689.3, 실험치 689

[실시예 14]

Pro-Ser-Ile-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.98(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.08(1)

Trp -(1)

Ile 1.05(1)

Pro 1.12(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 34.2분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 674.3, 실험치 674

[실시예 15]

Pro-Ser-Ser-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.01(1)

Ser 2.00(1)

Gly 1.15(1)

Trp -(1)

Pro 1.10(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 19.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 648.3, 실험치 648

[실시예 16]

Pro-Ser-Nva-Gly-Asp-Phe-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.01(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.10(1)

Nva 1.12(1)

Phe 0.98(1)

Pro 1.05(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼(Nakalai tesque Co.)을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 30.2분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 621.3, 실험치 621

[실시예 17]

Pro-Ser-Nva-Gly-Asp-Hph-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.98(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.12(1)

Nva 1.09(1)

Hph 1.11(1)

Pro 1.06(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 31.5분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 635.3, 실험치 635

[실시예 18]

Pro-Ser-Nva-Gly-Asp-Tyr(CH)-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.08(1)

Nva 1.17(1)

Tyr(CH) 1.05(1)

Pro 1.12(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 27.6분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-Ms：M+H 계산치 651.3, 실험치 651

[실시예 19]

Pro-Ser-Pro-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.08(1)

Trp -(1)

Pro 2.13(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 21.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 658.3, 실험치 658

[실시예 20]

Pro-Ser-(allo)Ile-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.97(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.07(1)

(allo)Ile 1.08(1)

Trp -(1)

Pro 1.12(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HOLC를 수행한 결과, 보지시간 32.1분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 674.3, 실험치 674

[실시예 21]

Pro-Ser-Tle-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.05(1)

Tle 1.02(1)

Trp -(1)

Pro 1.10(1)

HPLC 분석

FAB-MS：M+H 계산치 674.3, 실험치 674

[실시예 22]

Pro-Ser-Chg-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.01(1)

Ser 1.00(1)

Gly 0.99(1)

Chg 1.08(1)

Trp -(1)

Pro 1.05(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 39.5분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 700.3, 실험치 700

[실시예 23]

Pro-Ser-Met-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.00(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.06(1)

Met 1.09(1)

Trp -(1)

Pro 1.02(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 29.0분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 692.4, 실험치 692

[실시예 24]

Pro-Ser-Nva-Gly-Asp-Cha-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.03(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.05(1)

Nva 1.10(1)

Cha 1.09(1)

Pro 1.04(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 38.1에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 627.3, 실험치 627

[실시예 25]

Pro-Ser-Phe-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.02(1)

Phe 1.01(1)

Trp -(1)

Pro 1.06(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 38.3분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 709.3, 실험치 709

[실시예 26]

Pro-Ser-Phg-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.03(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.09(1)

Phg 1.10(1)

Trp -(1)

Pro 1.08(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 36.1분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 695.3, 실험치 695

[실시예 27]

Pro-Ser-Hyp-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.96(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.10(1)

Hyp 1.04(1)

Trp -(1)

Pro 1.11(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 19.7분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 674.3, 실험치 674

[실시예 28]

Pro-Ser-DPro-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl +페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.13(1)

Trp -(1)

Pro 2.05(2)

HPLC 분석

FAB-MS：M+H 계산치 658.3, 실험치 658

[실시예 29]

Pro-Ser-Azt-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.10(1)

Ser 1.03(1)

Gly 1.15(1)

Trp -(1)

Pro 1.08(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 20.5분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 644.3, 실험치 644

[실시예 30]

Pro-Ser-Thz-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.98(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.06(1)

Trp -(1)

Pro 1.08(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HOLC를 수행한 결과, 보지시간 23.5분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행되었다.

FAB-MS：M+H 계산치 676.3, 실험치 676

[실시예 31]

Pro-Ser-Dmt-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.05(1)

Ser 1.02(1)

Gly 1.10(1)

Trp -(1)

Pro 1.07(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 30.1분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 704.3, 실험치 704

[실시예 32]

Pro-Ser-△Pro-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 0.99(1)

Ser 1.00(1)

Gly 1.00(1)

Trp -(1)

△Pro 1.10(1)

Pro 1.08(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 22.1분에서 하나의 피크가 나타났다. 이대, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 657.3, 실험치 657

[실시예 33]

Pro-Ser-Hyp(Bzl)-Gly-Asp-Trp-OH의 합성

아미노산 분석(6N HCl+페놀, 24hr, 110℃)

Asp 1.05(1)

Ser 1.02(1)

Gly 1.10(1)

Trp -(1)

Pro 1.10(1)

HPLC 분석

Cosmosil 5C18-AR(ø4.6×200mm) 컬럼을 사용하여 분석용 HPLC를 수행한 결과, 보지시간 38.2분에서 하나의 피크가 나타났다. 이때, HPLC에서의 용출은 유속 1.0ml/분에서 0.1% TFA에 용해된 10% 내지 40%의 아세토니트릴 농도구배(60분)로 수행하였다.

FAB-MS：M+H 계산치 764.3, 실험치 764

[실험 실시예 1] 본 발명 화합물의 혈소판 응집 저해능

합성 펩타이드의 활성측정

[실험실적 조건에서의 PRP를 이용한 인간 혈소판 응집의 측정]

적어도 2주 동안 어떠한 약물도 투여받지 않은 건강한 남자 지원자를 대상으로, 공복상태의 각 환자의 앞팔혈관으로 부터, 3.8% 시트르산 나트륨 용액이 1/10정도 채워져 있고 #19 바늘이 장착된 플라스틱 시린지(syringe)를 사용하여 채혈하였다. 채혈 후 즉시, 시트르산 나트륨 용액과 혈액을 혼합하기 위해 시린지를 천천히 흔들어 주었다. 혼합된 혈액을 상온에서 15분간 원심분리(1100rpm, 250g)하였고, 브레이크를 사용하지 않고서 회전이 중단되도록 하였다. 이어, Komagome형 피펫(pipette)을 사용하여, 혈소판이 풍부한 혈장(platelet-rich plasma：PRP)이 함유된 상층액을 모아서 상온에 보관하였다. 원심분리 후 남은 혈액을 상온에서 15분간 다시 원심분리(3500pm, 1500g)하였고, 브레이크를 사용하지 않고서 회전이 중단되도록 하였다. 그런 다음, 혈소판이 부족한 혈장(platelet-poor plasma：PPP)이 함유된 상층액을 모았다. 수득한 PRP의 혈소판 수를 산정하여, 2×10/ml 보다 많은 수의 혈소판을 함유한 시료를 다음의 실험에 이용하였다.

혈소판 응집은 8-채널 혈소판 응집 측정기(Hematracer, Nikoh Bioscience, Tokyo, Japan)를 사용하여 PRP를 관통하는 빛의 투과도 변화로서 측정하였다. 우선, PPP와 PRP(각각 200μl)를 유리큐벳에 넣고 37℃에서 반응시킨 다음, 투과도를 측정하였다. PPP의 투과도는 100%로 하고, PRP의 투과도는 0%로 하였다. 염수 또는 시료함유 염수 10μl를 PRP에 첨가하고 1분 동안 37℃에서 반응시켰다. 응집을 유도하기 위하여 최종농도가 5㎍/ml 되도록 100㎍/ml 농도의 콜라겐 용액 10μl를 첨가하고, 7분에 걸쳐 투과도를 측정하였다. 콜라겐 및 ADP와의 응집이 첫단계에서 관찰되고, 콜라겐과의 최대응집율이 적어도 70%되는 시료를 사용하여 실험하였다.

시료를 2.2×10M 농도가 되도록 염수에 용해시키고, 2배 계대희석하여 실험에 사용하였다. 염수에 불용성인 시료는 10% 디메틸술폭사이드를 함유한 염수에 용해시켰다.

결과는 다음과 같이 계산하였다.

시료의 농도에 따른 응집 억제정도(%)를 그래프로 나타내었으며, 50% 응집 억제시의 시료 농도(IC₅₀)를 계산하였다. 각 시료의 IC₅₀을 표 2에 나타내었다. 표 2에서 보듯이, N-말단에 Pro-Ser 구조를 기본골격으로 가지며, 구아니디노기가 없는 아미노산을 가지는 본 발명의 펩타이드는 피브리노겐 분자에 존재하는 RGDS 아미노산 서열과 비교하여 매우 우수한 혈소판 응집 저해능을 나타냄을 알 수 있었다(표 2, 비교 실시예 2).

본 발명 펩타이드의 혈소판 응집 저해능은 피브리노겐 분자에 포함된 RGDS-OH 아미노산 서열(Peptide Laboratory에서 구입, Minoo-shi, Japan)의 혈소판 응집 저해능(표 2의 비교실시예 2)과 비교하여 볼 때, 훨씬 우수함을 확인하였다.

[실험 실시예 2] 급성독성시험

실시예 1에서 제조한 펩타이드를 100mg/kg의 양으로 마우스에게 정맥주사한 결과, 독성은 관찰되지 않았다.

[실험 실시예 3] 본 발명의 펩타이드를 체외순환하는 혈액의 혈액응고 저해제로 이용

본 발명의 펩타이드가 인공폐(artificial lung)의 혈액투석과 같은 체외순환시스템에서 혈액응고 저해능을 가지는지 알아보기 위하여, 약간의 변형을 가한 공지된 방법(참조：Hamano et al., Thromb, Res., 55：438-449(1989))에 따라 개(beagle)를 이용한 인공혈액투석 모델로 실험을 수행하였다. 개를 이용한 혈액투석 모델에서의 투석과정을 개략적으로 제1도에 나타내었다.

실험에서는 10 내지 12kg의 개(웅성 혹은 자성)를 사용하였다. 개를 펜토바르비탈(pentobarbital, 약 30mg/kg)로 마취시키고, 오른쪽 뒷다리를 절개하여 대퇴골의 동맥과 정맥이 노출되도록 하였다. 실리콘 튜브가 부착된 캐뉼라를 대퇴골의 동맥과 정맥에 삽입시키고, 이어 실리콘 튜브를 섬유로된 관상의 투석기(hollow-fiber dialyzer, RENAK-A, RA-04, 0.4㎡, Kawasumi Lab. Tokyo)에 연결시켰다. 시스템 작동동안에, 헤파린 등의 항응고제는 사용하지 않았다. 대퇴골 동맥과 투석기 사이에 혈액공급 펌프(blood perfusion pump)를 두고서, 실험동안에 체외순환시스템에서의 혈류속도가 25ml/분을 유지하도록 하였다. 투석물(dialysate)은 순환하지 않으며, 약 100cm H₂O의 수압(hydrostatic pressure)이 투석기의 외부공간에 걸리면, 투석물 순회(circuit)를 위한 입구와 출구를 밀봉하였다.

다음의 3가지 변수를 측정하였다 ; (1) 투석기 전단부(proximal portion)에서의 압력(혈액공급 압력), (2) 혈소판의 점착정도(혈소판의 기능 및 혈소판의 활성화 정도를 나타내는 변수), (3) 전혈(whole blood) 응고시간(혈액응고 시스템의 활성화 정도를 나타내는 변수). 혈액공급 압력은 제1도에서 보듯이 투석기의 전단부에 위치한 압력게이지로 측정하였다. 투석기의 위치에서 혈액은 종종 이물질과 접촉하게 되고, 좁은 공간으로 유입되므로, 혈액응고는 이 부분에서 일어나기가 쉽다. 혈액응고가 일어나면, 투석기는 막히고 전단부에서의 혈압이 증가한다. 이 부분에서의 혈액공급 압력의 변화가 곧 투석과정에서의 혈액응고 정도를 나타낸다. 일반적인 방법으로 측정가능한 변수(2) 및 (3)을 측정하기 위하여, 시간별로 투석부분의 입구 및 출구에서 혈액의 일부를 취하였다.

투석회로를 설치한 즉시, 혈액을 순환시켰으며, 본 발명 펩타이드를 포함한 염수용액을 동맥쪽에서 주입하기 시작하였다. 총주입량은 10mg/dog이었으며, 1시간에 걸쳐 조금씩 투여하였다(주입속도 ; 1ml/분), 염수만을 상기와 동일한 방법으로 계속적으로 주입한 실험결과를 대조구로 이용하였다. 60분 후에 약물주입을 중단하였고, 상기 변수들을 측정하기 위하여 그후 180분까지 혈액을 순환시켰다. 혈액공급 압력이 500mmHg을 초과할 때, 실험을 중단하였다.

제2도는 혈액공급 압력의 증가에 따라서 실시예 19의 화합물이 나타내는 억제효과를 측정한 실험결과를 나타낸다. 가로축은 약물주입시작후의 경과시간을, 세로축은 혈액공급 압력을 각각 나타낸다. 혈액 유동 시작후의 혈액공급 압력은 0 내지 30mmHg 이었으며, 혈액응고가 진행됨에 따라 증가하였다. 항응고제가 주입되지 않은 대조구에서는 혈액공급 압력이 10분 후에 급속히 증가하여 25분만에 500mmHg을 초과하였다(50mmHg 이상은 측정 불가능). 이 경우에서 보듯이, 항응고제가 없으면 투석회로에서 특히, 투석기 위치에서 혈액응고가 신속히 일어남을 알 수 있었다. 이와는 대조적으로, 실시예 19에서 제조된 본 발명의 펩타이드가 주입되면, 혈액응고는 뚜렷하게 억제된다.

혈소판 점착능 및 전혈 응고시간은 혈액공급 압력의 증가패턴과 거의 유사한 양상으로 변화하는 것으로 관찰되었다. 대조구에서는 시간이 경과함에 따라 혈소판 점착능이 증가하고, 전혈 응고시간이 감소하였다. 이러한 결과로 부터, 혈소판이 활성화되어 혈액응고 시스템이 활성화됨을 알 수 있었으며, 또한 실험에 사용된 개는 혈액응고가 일어나기 매우 쉬운 상태에 있음을 알 수 있었다. 이와는 대조적으로, 본 발명의 펩타이드가 주입된 그룹에서는 약물의 계속적 주입동안 혈액응고능이 거의 0%로 감소하였는데, 그 결과 실험에 사용된 개는 혈소판의 활성이 완전히 억제된 상태에 있음을 확인하였다. 아울러, 이 기간동안 전혈 응고시간은 유의할 정도로 연장되었다.

상기에서 보듯이, 본 발명의 펩타이드는 체외순환시스템에서 혈액응고를 완전히 억제하였다. 이러한 결과로 부터, 본 발명의 펩타이드는 현재 항응고제로 사용되고 있는 헤파린의 만족할 만한 대체물로 사용될 수 있음을 알 수 있었다. 상기에서 언급하였듯이, 헤파린이 체외순환시스템에서 혈액응고를 완전히 억제하더라도, 헤파린은 체내에서 아주 약간만 제거되므로 혈액투석 후에도 몇시간에 걸쳐 출혈을 촉진하면서 혈액응고를 억제시킨다는 단점을 지니고 있었다. 이와는 대조적으로, 본 발명의 펩타이드는 체내에서 매우 쉽게 분해된다(약 30분내에 제거됨). 따라서, 본 발명의 펩타이드는 약물투여를 중단하는 순간 곧 정상적인 혈액응고 활성을 회복시킬 수 있다는 점에서, 헤파린이나 이와 관련된 다른 약물보다 효과적임을 확인하였다. 더구나, 본 명의 펩타이드는 독성이 매우 낮으므로, 헤파린의 단점을 보완할 수 있는 새로운 혈액응고 저해제로 각광받을 것이다.

상기에서 보듯이, 본 발명의 펩타이드를 염수나 시트르산 나트륨 용액에 용해시키고, 체외순환시스템의 입구를 통하여 점적주입법 등으로 약 1 내지 3mg/시간/kg의 속도로 계속 주입하면, 만족할 만한 혈액응고 저해능을 관찰할 수 있다. 실제 사람에게 적용할 경우, 투여량은 더욱 감소될 수 있다.

본 발명의 펩타이드를 작용양상이 완전히 다른 시트르산 나트륨 용액, 헤파린, 푸탄, 피브린 용해제 등의 항응고제와 동시에 투여할 경우, 상승효과가 기대된다. 따라서, 두 약물의 투여량을 감소시킬 수 있어, 안전성이 더욱 보장된다.

[실험 실시예 4] 본 발명의 펩타이드를 수혈용 혈소판 제제의 보호제로 이용

하틀리 기니아픽(Hartley guinea pig, 웅성, 체중 350 내지 400g)을 본 실험에 이용하였다. 기니아픽을 에테르로 마취시킨 다음, 복막강을 열고 복막동맥으로부터, 멸균된 3.8% 시트르산 나트륨 용액이 1/10정도 채워져 있고 #24 바늘이 장착된 시린지를 사용하여 채혈하였다. 채혈 후 즉시, 시트르산 나트륨 용액과 혈액을 혼합하기 위해 시린지를 천천히 흔들어 주었다. 혼합된 혈액을 상온에서 15분간 원심분리(900rpm)하고, 회전을 중단시켰다. 이어, Komagome형 피펫으로 혈소판 분획인 상층액을 모아서, 보관하였다.

혈소판 분획을 혈소판 보존백(TERUMO CORP., Separation Bag S for Apheresis)에 옮긴 다음, 그 백을 20Hz의 진동주기 및 20cm의 진동폭으로 흔들면서 상온에서 보관하였다. 일정시간 보관 후, 혈소판 분획의 일부를 취하여 혈소판 수를 산정하였다. 보존 혈소판 분획의 pH를 시트르산 용액으로 6.5로 조정하고, 상온에서 원심분리하였다(2000rpm, 15분). 상층액을 제거하고, 아피레이즈(apyrase, Sigma Co., 최종농도 0.2V/ml)를 함유한 Ca-Tyrode 용액(pH 6.5)을 첨가하여 혈소판을 현탁시켰다. 상온에서 20분 방치 후, 원심분리(2000rpm, 15분)하고 상층액을 제거하였다. 침전물을 동일한 방법으로 다시 세척하고, 이미 보존되어 있는 기니아픽의 혈장(혈소판의 수：약 3×10⁸/ml)으로 혈소판을 재현탁하였다. 이와 같은 혈소판 현탁액을 이용하여, 실험 실시예 1과 동일한 방법으로 혈소판의 응집능을 측정하였다.

제3도는 보존시간에 따른 혈소판 수의 변화를 나타낸다. 생리적 염수만을 첨가한 대조구에서는 보존동안 혈소판 수가 크게 감소하였다. 이와는 대조적으로, 실시예 28에서 제조한 화합물을 첨가한 그룹에서는 대조구와 비교하여 혈소판 수의 감소가 유의하게 억제되었다. 이와 같은 보호효과는 첨가된 펩타이드의 농도에 의존적이었는데, 이는 본 발명 펩타이드자체가 혈소판에 대하여 보호능을 가짐을 의미한다.

제4도는 보존시간에 따른 혈소판 응집능의 변화를 나타낸다. 약물이 첨가되지 않은 대조구에서는 48시간 보존 후, 혈소판의 응집능이 40%이하로 감소하였다. 실시예 28에서 제조한 화합물을 첨가한 그룹에서는 48시간 보존 후에도 적어도 60%의 혈소판 응집능이 남아있었다. 이는 혈소판 응집능의 감소가 화합물의 첨가에 의해 유의할 정도로 억제됨을 나타낸다.

상기에서 보듯이, 본 발명의 펩타이드 첨가로서 보존기간 동안 혈소판 수, 혈소판 응집능 등의 감소를 억제하는 혈소판 보호효과를 유도하였다. 현재 사용되고 있는 RGDS, RGDF 등의 펩타이드 화합물을 혈소판 분획에 첨가하더라도, 그것들은 혈장에 존재하는 효소에 의해 분해되므로 혈소판의 장기간 보존을 위해서는 적합하지 않음을 확인하였다. 한편, 체내에서 매우 안정하고 쉽게 분해되지 않는 화합물은 수혈후 체내의 혈소판 기능 모두를 억제하여 수혈의 효율을 감소시킨다. 이와는 대조적으로, 본 발명의 펩타이드는 혈소판 분획에 대하여 안정성이 높고, 체내 분해성이 높으며, 독성이 낮다는 바람직한 특징을 갖고 있으므로, 우수한 혈소판 보호제로 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 펩타이드를 아세테이트 염 또는 포스페이트 염으로 투여하면, 이들은 완충능을 나타내어 혈소판 분획 보존시의 pH 변화에 대하여도 억제효과를 나타낼 것으로 예측된다. 더구나, 본 발명의 펩타이드를 단독이 아니라 아스피린이나, 다른 작용양상에 의해 혈소판 응집을 억제하는 약물과 함께 투여하면, 상승효과가 나타날 것으로 예측된다.

[제제화를 위한 실시예 1]

실시예 1 내지 31에서 제조한 펩타이드 각각(100mg)을 100ml의 염수에 용해시켰다. 멸균된 상태에서 전기용액을 2.5ml의 앰풀에 분주하고, 밀봉하여 주사용 제제로 사용하였다.

[제제화를 위한 실시예 2]

실시예 1 내지 31에서 제조한 펩타이드를 중의 하나(500mg), 결정화 셀룰로스(50mg) 및 락토스(450mg)로 구성된 혼합물에 에탄올과 물의 혼합용액(1ml)을 첨가하고 잘 혼합하였다. 이렇게 하여 얻은 혼합액을 일반적인 방법으로 과립화하였다.

산업상 이용가능성

상기에서 설명하였듯이, 본 발명의 펩타이드는 혈소판 응집 저해제로 사용된다. 즉, 본 발명의 펩타이드는 혈전용해 처치 도중과 후에 혈전, 혈전색전증(thromboembolism) 및 혈류차단 재발을 예방하기 위해 사용되며, 관상동맥과 기타동맥의 혈관성형 후와 관상동맥 바이패싱(bypassing) 후에 혈전, 혈전색전증 및 혈류차단 재발을 예방하기 위해 사용되고, 심근경색을 예방하기 위해 사용된다.

또한, 본 발명의 펩타이드는 체외순환시에 혈전이 형성되는 것을 억제하기 위하여, 체외순환하는 혈액의 혈액응고 저해제로 사용된다.

아울러, 본 발명의 펩타이드는 혈소판의 기능감소를 억제하는데 효과적이다. 즉, 혈소판의 보호에 효과적이다. 더구나, 본 발명의 펩타이드는 종양전이를 억제하는 세포점착 제해제로도 효과적이다.

Claims

하기 일반식(I)로 표시되는 펩타이드 또는 그의 염：

Pro-Ser-A-B-Asp-C-D (I)

상기에서, A는 결사슬(side chain)에 구아니디노(guanidino)기를 가지지 않는 하나의 아미노산이고, B는 글리신, 알라닌, β-알라닌 및 그들의 N-알킬 유도체로 구성된 그룹으로 부터 선택되는 1종의 아미노산이며, C는 곁사슬에 소수성기를 가지는 하나의 아미노산이고, D는 수산기 또는 아미노기이다.
제1항에 있어서, A는 중성 아미노산인 것을 특징으로 하는 펩타이드 또는 그의 염.
제2항에 있어서, 중성 아미노산은 글리신, 프로린 또는 그의 유도체인 것을 특징으로 하는 펩타이드 또는 그의 염.
제2항에 있어서, 중성 아미노산은 치환되거나 치환되지 않은 탄소수 1 내지 30개의 알킬기, 치환되거나 치환되지 않은 아릴기, 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴기 및 치환되거나 치환되지 않은 탄소수 3 내지 10개의 사이클로알킬기로 구성된 그룹으로 부터 선택되는 적어도 1종을 곁사슬에 가지는 아미노산인 것을 특징으로 하는 펩타이드 또는 그의 염.
제1항에 있어서, A는 탄소수 1 내지 10개의 알킬기로 치환된 아미노기를 결사슬에 가지는 아미노산인 것을 특징으로 하는 펩타이드 또는 그의 염.
제1항에 있어서, A는 하기 일반식(X)로 표시되는 아미노산인 것을 특징으로 하는 펩타이드 또는 그의 염：

상기식에서, R¹및 R²는 동일하거나 다를 수 있으며, 수소원자 혹은 탄소수 1 내지 10개의 알킬기이고; 및, n은 4 내지 10의 정수이다.
제1항 내지 제6항의 어느 한 항에 있어서, B는 글리신 또는 N-알킬 글리신인 것을 특징으로 하는 펩타이드 또는 그의 염.
제1항 내지 제7항의 어느 한 항에 있어서, C는 트립토판 또는 페닐알라닌인 것을 특징으로 하는 펩타이드 또는 그의 염.
제1항에 있어서, A는 중성 아미노산 또는 탄소수 1 내지 10개의 알킬기로 치환된 아미노기를 결사슬에 가지는 아미노산, B는 글리신 또는 N-알킬 글리신, C는 트립토판 또는 페날알라닌인 것을 특징으로 하는 펩타이드 또는 그의 염.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 저해제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 체외순환(etracorporeal circulation)하는 혈액의 혈액응고 저해제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 세포점착(cell adhesion) 저해제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 수혈용 혈소판 제제의 보호제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염을 포함하는 수혈용 혈소판 제제.
팩(pack)에 수혈용 혈소판 제제와 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염을 포함하는 수혈용 혈소판 제제 팩.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 혈소판 응집의 억제를 위한 약학적 제제.
혈소판 제제에 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염을 유효한 양으로 첨가하는 단계를 포함하는, 수혈용 혈소판 제제에 함유된 혈소판을 보호하는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 체외순환하는 혈액의 혈액응고를 억제하기 위한 약학적 제제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 세포점착의 억제를 위한 약학적 제제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 그의 염, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 수혈용 혈소판 제제에 함유된 혈소판의 보호를 위한 약학적 제제.