JPWO2020210480A5 - - Google Patents

Description

いくつかの態様において、プロモーターは、ニワトリベータアクチン（ＣＢ）プロモーターである。ニワトリベータアクチンプロモーターは、短いニワトリベータアクチンプロモーター（例として、配列番号１１に規定された配列を有する）または長いニワトリベータアクチンプロモーター（例として、配列番号１２に規定された配列を有する）であってもよい。いくつかの態様において、プロモーター（例として、ニワトリベータアクチンプロモーター）は、エンハンサー配列、例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー配列を含む。ＣＭＶエンハンサー配列は、短いＣＭＶエンハンサー配列（例として、配列番号９に規定された配列を有する）または長いＣＭＶエンハンサー配列（例として、配列番号１０に規定された配列を有する）であってもよい。いくつかの態様において、プロモーターは、長いＣＭＶエンハンサー配列および長いニワトリベータアクチンプロモーター（例として、配列番号１０および１２）を含む。いくつかの態様において、プロモーターは、短いＣＭＶエンハンサー配列および短いニワトリベータアクチンプロモーター（例として、配列番号９および１１）を含む。しかしながら、当業者は、短いＣＭＶエンハンサーが長いＣＢプロモーターとともに使用されてもよく、および、長いＣＭＶエンハンサーが短いＣＢプロモーターとともに使用されてもよい（および逆もまた同じである）ということを認識する。 In some embodiments, the promoter is the chicken beta actin (CB) promoter. The chicken beta actin promoter is a short chicken beta actin promoter (eg, having the sequence set forth in SEQ ID NO: 11 ) or a long chicken beta actin promoter (eg, having the sequence set forth in SEQ ID NO: 12 ) good too. In some embodiments, the promoter (eg, chicken beta actin promoter) comprises an enhancer sequence, such as the cytomegalovirus (CMV) enhancer sequence. The CMV enhancer sequence may be a short CMV enhancer sequence (eg having the sequence set forth in SEQ ID NO: 9 ) or a long CMV enhancer sequence (eg having the sequence set forth in SEQ ID NO: 10 ). In some embodiments, the promoter comprises a long CMV enhancer sequence and a long chicken beta actin promoter (eg, SEQ ID NOS: 10 and 12). In some embodiments, the promoter comprises a short CMV enhancer sequence and a short chicken beta actin promoter (eg, SEQ ID NOs :9 and 11 ). However, those skilled in the art will recognize that short CMV enhancers may be used with long CB promoters, and long CMV enhancers may be used with short CB promoters (and vice versa).

Claims (15)

Kozak配列（配列番号１９）に作動可能に連結された配列番号３に規定されたアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を有するＨ因子タンパク質バリアントをコードする核酸配列を含む導入遺伝子を含む、任意に、Ｈ因子タンパク質バリアントは、配列番号３に規定されたアミノ酸配列からなる、単離された核酸。 having an amino acid sequence that is at least 70% , at least 80%, at least 90%, at least 99%, or 100% identical to the amino acid sequence defined in SEQ ID NO: 3 operably linked to a Kozak sequence (SEQ ID NO: 19) An isolated nucleic acid comprising a transgene comprising a nucleic acid sequence encoding a Factor H protein variant, optionally wherein the Factor H protein variant consists of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:3 . Ｈ因子タンパク質バリアントをコードする核酸配列が、配列番号４に規定された配列と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．９％同一である、請求項１に記載の単離された核酸。 the nucleic acid sequence encoding the Factor H protein variant is at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 95%, at least 99%, or at least 99.9% the sequence set forth in SEQ ID NO:4 2. The isolated nucleic acid of claim 1 , which is identical. 導入遺伝子が、核酸配列および／またはKozak配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、任意に、プロモーターは、配列番号１１または１２に規定された配列を含む、請求項１または２に記載の単離された核酸。 3. A unit according to claim 1 or 2 , wherein the transgene comprises a promoter operably linked to a nucleic acid sequence and/or a Kozak sequence , optionally the promoter comprises the sequence set forth in SEQ ID NO: 11 or 12. Separated Nucleic Acids. プロモーターが、エンハンサー配列をさらに含む、任意に、エンハンサー配列は、配列番号９または１０に規定された配列を含む；かつ、任意に、プロモーターは、配列番号９に規定された配列および配列番号１１に規定された配列を含むか、またはプロモーターは、配列番号１０に規定された配列および配列番号１２に規定された配列を含む、請求項３に記載の単離された核酸。 The promoter further comprises an enhancer sequence, optionally the enhancer sequence comprises the sequence set forth in SEQ ID NO:9 or 10; 4. The isolated nucleic acid of claim 3 , comprising the defined sequences or wherein the promoter comprises the sequence defined in SEQ ID NO:10 and the sequence defined in SEQ ID NO:12. 導入遺伝子が、１以上のイントロンを含む、任意に、少なくとも１のイントロンが、プロモーターとＨ因子タンパク質バリアントをコードする核酸配列との間に位置する、および／または、少なくとも１のイントロンが、配列番号１３～１５のいずれか１つに規定された配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された核酸。 The transgene comprises one or more introns, optionally at least one intron is located between the promoter and the nucleic acid sequence encoding the Factor H protein variant, and/or at least one intron is SEQ ID NO: 5. The isolated nucleic acid of any one of claims 1-4 , comprising the sequence defined in any one of 13-15 . 導入遺伝子が、３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む、任意に、３’ＵＴＲが、配列番号１７または１８に規定された配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された核酸。 6. A transgene according to any one of claims 1 to 5 , wherein the transgene comprises a 3' untranslated region (3'UTR) , optionally the 3'UTR comprises the sequence set forth in SEQ ID NO: 17 or 18. of isolated nucleic acids. 導入遺伝子が、導入遺伝子の３’ＵＴＲ中に位置する１以上のｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された核酸。 7. The isolated nucleic acid of any one of claims 1-6 , wherein the transgene further comprises one or more miRNA binding sites located in the 3'UTR of the transgene . 少なくとも１のｍｉＲＮＡ結合部位が、ｍｉＲ－１２２結合部位であるか、または、少なくとも１のｍｉＲＮＡ結合部位が、免疫関連ｍｉＲＮＡ結合部位である、請求項７に記載の単離された核酸。 8. The isolated nucleic acid of claim 7 , wherein at least one miRNA binding site is a miR-122 binding site or at least one miRNA binding site is an immune-related miRNA binding site . 免疫関連ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ－１４２である、任意に、１以上の結合部位が、配列番号１６に規定された配列を含む、請求項８に記載の単離された核酸。 9. The isolated nucleic acid of claim 8 , wherein the immune-associated miRNA is miR-142, and optionally the one or more binding sites comprises the sequence set forth in SEQ ID NO:16. 導入遺伝子が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端リピート（ＩＴＲ）に隣接する、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離された核酸。 10. The isolated nucleic acid of any one of claims 1-9 , wherein the transgene is flanked by adeno-associated virus (AAV) inverted terminal repeats (ITRs). 配列番号５～８のいずれか１つに規定された配列を含む、単離された核酸。 An isolated nucleic acid comprising a sequence set forth in any one of SEQ ID NOS:5-8. 請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された核酸を含む、ベクターまたはプラスミドであって、任意に、ベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクターである、前記ベクターまたはプラスミド。 A vector or plasmid comprising the isolated nucleic acid of any one of claims 1-11 , optionally the vector is an adenoviral vector, an adeno-associated viral vector, a lentiviral vector, a retroviral vector , or a baculovirus vector . 請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された核酸または請求項１２に記載のベクターを含む、組成物。 A composition comprising the isolated nucleic acid of any one of claims 1-11 or the vector of claim 12 . 請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された核酸または請求項１２に記載のベクターを含む、宿主細胞。 A host cell comprising the isolated nucleic acid of any one of claims 1-11 or the vector of claim 12 . （ｉ）請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された核酸；および
（ｉｉ）アデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質
を含む、組み換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）であって、
任意に、カプシドタンパク質は、筋組織または筋組織への指向性を有する、および／または、カプシドタンパク質は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、および上記のいずれかのバリアントから選択される血清型のものである、前記組み換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）。 (i) the isolated nucleic acid of any one of claims 1-11 ; and (ii) a recombinant adeno-associated virus (rAAV) comprising an adeno-associated virus (rAAV) capsid protein ,
Optionally, the capsid protein has muscle tissue or muscle tissue tropism and/or the capsid protein is AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, and any of the above said recombinant adeno-associated virus (rAAV), which is of a serotype selected from variants of .