JPWO2020061499A5

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Publication number: JPWO2020061499A5
Application number: JP2021515077A
Authority: JP
Publication date: 2022-09-27

Claims

反応性部分提示共有結合官能基化領域又は活性化部分提示共有結合官能基化領域である第１領域を有する表面を含むウェルプレートであって、前記反応性部分が、アジド部分、アルキニル部分、ビオチン部分、又はストレプトアビジン部分であり、前記活性化部分が、リンパ球活性化部分であり、
前記第１領域が、少なくとも０．５ｍｍ ^２から５０ｍｍ ^２の面積を有する、
ウェルプレート。 A well plate comprising a surface having a first region that is a reactive moiety-presenting covalently functionalized region or an activating moiety-presenting covalently functionalized region, wherein said reactive moiety is an azide moiety, an alkynyl moiety, biotin or a streptavidin moiety , wherein said activating moiety is a lymphocyte activating moiety ;
said first region has an area of at least 0.5 mm ² to 50 mm ² ;
well plate.

前記第１領域が、０．５ｍｍから４．０ｍｍの寸法を有する、請求項１に記載のウェルプレート。 2. The well plate of claim 1, wherein said first region has a dimension of 0.5 mm to 4.0 mm.

前記第１領域が、実質的に円形であり、且つ０．５ｍｍから４．０ｍｍの直径を有する、請求項１に記載のウェルプレート。 3. The well plate of claim 1, wherein said first region is substantially circular and has a diameter of 0.5 mm to 4.0 mm.

前記ウェルプレートの前記表面が、表面遮断リガンドを含む共有結合修飾領域である第２領域をさらに含み、前記第２領域が、前記第１領域を取り囲む、請求項１に記載のウェルプレート。 2. The well plate of claim 1, wherein said surface of said well plate further comprises a second region that is a covalently modified region comprising a surface blocking ligand, said second region surrounding said first region.

前記表面遮断リガンドのそれぞれが、親水性又は負荷電部分を含む、請求項４に記載のウェルプレート。 5. The wellplate of claim 4, wherein each of said surface blocking ligands comprises a hydrophilic or negatively charged moiety.

前記ウェルプレートの前記表面が、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリエチレン、シクロオレフィンコポリマー、又はメラミンを含む、請求項１から５のいずれか１項に記載のウェルプレート。 6. The wellplate of any one of claims 1-5, wherein the surface of the wellplate comprises glass , polystyrene , polypropylene, polycarbonate, polyethylene, cycloolefin copolymers, or melamine .

前記第１領域が、少なくとも５０／ｕｍ^２のそれぞれの反応性部分又は活性化部分の密度を有する、請求項１から６のいずれか１項に記載のウェルプレート。 7. The well plate of any one of claims 1 to 6, wherein the first region has a density of respective reactive moieties or activated moieties of at least 50/um< ² >.

前記第１領域が、炭素、ケイ素、窒素及び酸素から選択される５から２０個の骨格原子を有するリンカーを介して前記表面に共有結合されたそれぞれの反応性部分又は活性化部分を含む、請求項１から７のいずれか１項に記載のウェルプレート。 wherein said first region comprises a respective reactive moiety or activating moiety covalently attached to said surface via a linker having 5 to 20 backbone atoms selected from carbon, silicon, nitrogen and oxygen. Item 8. The well plate according to any one of Items 1 to 7 .

前記反応性部分がストレプトアビジンであり、前記ストレプトアビジンが、前記ウェルプレートの前記表面の前記第１領域に共有結合される、請求項１から８のいずれか１項に記載のウェルプレート。 9. The wellplate of any one of claims 1-8, wherein the reactive moiety is streptavidin, and wherein the streptavidin is covalently bound to the first region of the surface of the wellplate.

前記反応性部分がストレプトアビジンであり、前記ストレプトアビジンが、ビオチン部分に非共有結合され、前記ビオチン部分が、それ自体、前記ウェルプレートの前記表面の前記第１領域に共有結合される、請求項１から８のいずれか１項に記載のウェルプレート。 4. The method of claim 1, wherein said reactive moiety is streptavidin, said streptavidin is non-covalently bound to a biotin moiety, said biotin moiety is itself covalently bound to said first region of said surface of said well plate. 9. Well plate according to any one of 1 to 8 .

前記第１領域が、複数の特異的に結合された一次活性化分子リガンドと、複数の特異的に結合された共活性化分子リガンドとを含む活性化部分提示共有結合官能基化領域である、請求項１から１０のいずれか１項に記載のウェルプレート。 wherein said first region is an activating moiety-presenting covalently functionalized region comprising a plurality of specifically bound primary activating molecular ligands and a plurality of specifically bound co-activating molecular ligands; 11. A well plate according to any one of claims 1-10.

前記表面の前記第１領域上における前記一次活性化分子リガンドと前記共活性化分子リガンドとの比が、１：５から２：１である、請求項１１に記載のウェルプレート。 12. The well plate of claim 11 , wherein the ratio of said primary activator molecule ligand to said co-activator molecule ligand on said first region of said surface is from 1:5 to 2:1.

前記複数の特異的に結合された一次活性化分子リガンドの各リガンドが、Ｔ細胞のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に結合するように構成された主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子を含む、請求項１１又は１２に記載のウェルプレート。 each ligand of said plurality of specifically bound primary activation molecule ligands comprises a major histocompatibility complex (MHC) molecule configured to bind to a T cell receptor (TCR) of a T cell; A well plate according to claim 11 or 12 .

前記ＭＨＣ分子が、抗原ペプチドをさらに含む、請求項１３に記載のウェルプレート。 14. The well plate of claim 13 , wherein said MHC molecules further comprise antigenic peptides.

前記抗原ペプチドが、腫瘍関連抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原又は原生動物抗原である、請求項１４に記載のウェルプレート。 15. The well plate of claim 14 , wherein said antigenic peptide is a tumor-associated antigen, viral antigen, bacterial antigen, fungal antigen or protozoan antigen.

前記ＭＨＣ分子が、Ｃ末端結合を介して前記活性化部分提示共有結合官能基化領域に連結される、請求項１３から１５のいずれか１項に記載のウェルプレート。 16. The wellplate of any one of claims 13-15 , wherein said MHC molecule is linked to said activating moiety presenting covalently functionalized region via a C-terminal linkage.

前記複数の特異的に結合された共活性化分子リガンドの各リガンドが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）共活性化分子又は補助ＴＣＲ活性化分子を含む、請求項１１から１６のいずれか１項に記載のウェルプレート。 17. Any one of claims 11-16, wherein each ligand of said plurality of specifically bound coactivator molecule ligands comprises a T cell receptor (TCR) coactivator molecule or an auxiliary TCR activator molecule. Well plate as indicated.

前記複数の特異的に結合された共活性化分子リガンドの前記ＴＣＲ共活性化分子と前記補助ＴＣＲ活性化分子との比が、３：１から１：３である、請求項１７に記載のウェルプレート。 18. The well of claim 17 , wherein the ratio of said TCR co-activator molecule to said auxiliary TCR activator molecule of said plurality of specifically bound co-activator molecule ligands is from 3:1 to 1:3. plate.

前記ＴＣＲ共活性化分子が、ＣＤ２８結合タンパク質又はＣＤ２８に対する結合能力を保持するその断片、及び／又はＣＤ８０分子又はＣＤ２８に対する結合能力を保持するその断片を含む、請求項１７又は１８に記載のウェルプレート。 19. Well plate according to claim 17 or 18 , wherein said TCR co-activation molecule comprises a CD28 binding protein or a fragment thereof which retains the ability to bind to CD28 and/or a CD80 molecule or a fragment thereof which retains the ability to bind to CD28. .

前記ＴＣＲ共活性化分子が、抗ＣＤ２８抗体又はその断片を含み、前記断片が、ＣＤ２８に対する結合活性を保持する、請求項１７から１９のいずれか１項に記載のウェルプレート。 20. The well plate of any one of claims 17-19, wherein said TCR co-activation molecule comprises an anti-CD28 antibody or fragment thereof, said fragment retaining binding activity for CD28.

前記補助ＴＣＲ活性化分子が、ＣＤ２結合タンパク質又はＣＤ２に対する結合活性を保持するその断片、及び／又はＣＤ５８分子又はＣＤ２に対する結合活性を保持するその断片を含む、請求項１７から２０のいずれか１項に記載のウェルプレート。 21. Any one of claims 17 to 20, wherein said auxiliary TCR activating molecule comprises a CD2 binding protein or a fragment thereof retaining binding activity to CD2 and/or a CD58 molecule or a fragment thereof retaining binding activity to CD2. well plate as described in .

前記補助ＴＣＲ活性化分子が、抗ＣＤ２抗体又はその断片を含み、前記断片が、ＣＤ２との結合活性を保持する、請求項１７から２１のいずれか１項に記載のウェルプレート。 22. The well plate of any one of claims 17 to 21, wherein said auxiliary TCR activating molecule comprises an anti-CD2 antibody or fragment thereof, said fragment retaining CD2 binding activity.

前記複数の特異的に結合された一次活性化分子リガンドが、前記第１領域において、１平方ミクロン当たり少なくとも１×１０^２分子の密度を有する、及び／又は
前記複数の特異的に結合された共活性化分子リガンドが、前記第１領域において、１平方ミクロン当たり少なくとも１×１０ ^２分子の密度を有する、
請求項１１から２２のいずれか１項に記載のウェルプレート。 said plurality of specifically bound primary activation molecule ligands have a density of at least 1 x 102 molecules per ^square micron in said first region, and/or
said plurality of specifically bound co-activator molecule ligands have a density of at least 1 x 102 molecules per ^square micron in said first region;
23. A well plate according to any one of claims 11-22.

ウェルプレートであって、
一又は複数のウェルを有し、
当該ウェルプレートの前記１つ又は複数のウェルの各々が、請求項１から２３のいずれか１項に記載のウェルプレートの前記表面及びその前記第１領域を含む、
ウェルプレート。 a well plate,
having one or more wells,
wherein each of said one or more wells of said well plate comprises said surface of a well plate according to any one of claims 1 to 23 and said first region thereof;
well plate.

前記１つ又は複数のウェルの各々の前記第１領域が、前記対応するウェルの底部表面上に位置する、請求項２４に記載のウェルプレート。 25. The well plate of Claim 24 , wherein the first region of each of the one or more wells is located on the bottom surface of the corresponding well.

それぞれの第１領域の面積が、前記対応するウェルの底部表面の面積の約２５％未満である、請求項２４又は２５に記載のウェルプレート。 26. The well plate of claims 24 or 25 , wherein the area of each first region is less than about 25% of the area of the bottom surface of the corresponding well.

活性化部分提示共有結合官能基化領域を有する表面を含むウェルプレートを作製するキットであって、
反応性部分提示共有結合官能基化領域を含む表面を含むウェルプレートであって、反応性部分が、アジド部分、アルキニル部分、ビオチン部分、又はストレプトアビジン部分である、ウェルプレートと、
活性化試薬と、
を備え、
前記活性化部分提示共有結合官能基化領域が、少なくとも０．５ｍｍ ^２から５０ｍｍ ^２の面積を有する、
キット。 A kit for making a well plate comprising a surface having a covalently functionalized region presenting an activating moiety, comprising:
a well plate comprising a surface comprising reactive moiety-presenting covalently functionalized regions, wherein the reactive moiety is an azide, alkynyl, biotin , or streptavidin moiety ;
an activating reagent ;
with
said covalently functionalized region presenting an activating moiety has an area of at least 0.5 mm ² to 50 mm ² ;
kit.

表面官能基化試薬をさらに含み、前記表面官能基化試薬が、前記反応性部分と反応するように構成されたビオチン含有試薬又はストレプトアビジン含有試薬である、請求項２７に記載のキット。 28. The kit of claim 27 , further comprising a surface functionalizing reagent, said surface functionalizing reagent being a biotin- or streptavidin-containing reagent configured to react with said reactive moiety.

前記活性化試薬が、Ｔ細胞のＴ細胞受容体と結合するように構成され、且つストレプトアビジンの結合部位又は複数のＣＤ３結合分子に結合するように構成された複数の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子を含む一次活性化試薬を含む、請求項２７又は２８に記載のキット。 wherein said activating reagent is configured to bind to a T cell receptor on a T cell and a plurality of major histocompatibility complexes configured to bind to a binding site for streptavidin or a plurality of CD3 binding molecules ( 29. A kit according to claim 27 or 28 , comprising a primary activation reagent comprising a MHC) molecule.

ストレプトアビジンの結合部位に結合するようにそれぞれ構成された複数の共活性化分子を含む共活性化試薬をさらに含み、前記共活性化分子の各々が、ＣＤ２結合分子又はＣＤ２８結合分子を含む、請求項２９に記載のキット。 further comprising a co-activating reagent comprising a plurality of co-activating molecules each configured to bind to a binding site of streptavidin, each of said co-activating molecules comprising a CD2 binding molecule or a CD28 binding molecule; 30. The kit of Item 29 .

前記ウェルプレートの前記表面が、表面遮断領域をさらに備え、前記表面遮断領域が、前記反応性部分提示共有結合官能基化領域に結合する表面遮断リガンドを備え、前記反応性部分が、アジド部分、又はアルキニル部分である、請求項２７から３０のいずれか１項に記載のキット。 said surface of said well plate further comprising a surface blocking region, said surface blocking region comprising a surface blocking ligand bound to said reactive moiety-presenting covalently functionalized region, said reactive moiety comprising an azide moiety; or an alkynyl moiety.

反応性基に結合する表面遮断部分を含む表面遮断試薬をさらに含み、 further comprising a surface blocking reagent comprising a surface blocking moiety attached to the reactive group;
前記反応性基が、 The reactive group is
前記ウェルプレートの前記表面の酸化物部分と反応し、前記表面遮断部分を前記表面に結合させるよう構成されている、又は configured to react with oxide moieties of the surface of the well plate to bind the surface blocking moieties to the surface; or
前記ウェルプレートの前記表面のアジド部分又はアルキニル部分を含む前記反応性部分と反応し、前記表面遮断部分を前記反応性部分と結合させるように構成されている、 configured to react with the reactive moiety comprising an azide or alkynyl moiety on the surface of the well plate to bind the surface blocking moiety to the reactive moiety;
請求項２７から３０のいずれか１項に記載のキット。 31. The kit of any one of claims 27-30.

前記表面遮断部分が、親水性又は負荷電部分を含む、請求項３２に記載のキット。 33. The kit of claim 32, wherein said surface blocking moieties comprise hydrophilic or negatively charged moieties.