JPWO2020077257A5

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Publication number: JPWO2020077257A5
Application number: JP2021519705A
Authority: JP
Publication date: 2022-10-19
Anticipated expiration: 2039-10-11

Description

ＰＤ－１に特異的に結合するポリペプチド（以下、ＰＤ－１結合ポリペプチドとも呼ばれる）が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、提供される結合ポリペプチドは、ＰＤ－１に結合する少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＰＤ－１結合ポリペプチドは、各々がＰＤ－１に個々に結合する１、２、３、４、５、６、７、または８個のＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＰＤ－１結合ポリペプチドは、ＰＤ－１に結合する１、２、３、または４個のＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合ポリペプチドは、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合ポリペプチドは、多重特異性である。例えば、提供されるＰＤ－１結合ポリペプチドは、ＰＤ－１に結合する少なくとも１つのＶＨＨドメインと、ＰＤ－１以外の１つ以上の標的タンパク質に結合する１つ以上の追加のＶＨＨドメインなどの１つ以上の追加の結合ドメインとを含んでもよいポリペプチドを含む。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ＰＤ－１に特異的に結合する少なくとも１つの重鎖のみの可変ドメイン（ＰＤ－１ＶＨＨドメイン）を含む、ＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目２）
ＰＤ－１に特異的に結合する少なくとも１つの重鎖のみの可変ドメイン（ＰＤ－１ＶＨＨドメイン）と、ＰＤ－１以外の標的に結合する１つ以上の追加の結合ドメインと、を含む、ＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目３）
前記少なくとも１つのＶＨＨドメインが、配列番号２６８、２７２、２７３、および３１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号２７８または３１４に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号２８３または３１５に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、項目１に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目４）
配列番号２６８、２７２、２７３、および３１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号２７８または３１４に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号２８３または３１５に記載される選択されたアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、少なくとも１つの重鎖のみの可変ドメイン（ＰＤ－１ＶＨＨドメイン）を含む、ＰＤ－１結合構築物。
（項目５）
ＰＤ－１に特異的に結合する前記ＰＤ－１ＶＨＨドメインが、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断する、項目１、２、３、または４のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目６）
前記１つ以上の追加の結合ドメインが、共刺激分子に結合する、項目２に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目７）
前記１つ以上の追加の結合ドメインが、Ｔ細胞表面マーカーに結合する、項目２に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目８）
前記Ｔ細胞表面マーカーが、ＣＤ８である、項目７に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目９）
前記Ｔ細胞表面マーカーが、ＣＤ４である、項目７に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目１０）
前記１つ以上の追加の結合ドメインが、ＰＤ１以外の免疫チェックポイントに結合する、項目２に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目１１）
前記１つ以上の追加の結合ドメインが、免疫細胞上の活性化受容体に結合する、項目２に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目１２）
前記１つ以上の追加のドメインが、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する、項目２に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目１３）
前記１つ以上の追加の結合ドメインが、サイトカイン受容体に結合する、項目２に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目１４）
前記ポリペプチドが、免疫グロブリンＦｃ領域を含む、項目１、２、３、または４のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目１５）
前記少なくとも１つのＰＤ－１ＶＨＨドメインが、配列番号２５１～２６７、２８４、もしくは３１２のいずれかに記載される配列、または配列番号２５１～２６７、２８４、もしくは３１２のいずれかと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み、ＰＤ－１に結合する、項目１、２、３、または４のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目１６）
前記少なくとも１つのＰＤ－１ＶＨＨドメインが、それぞれ配列番号２６８、２７８、および２８３、それぞれ配列番号２７２、２７８、および２８３、またはそれぞれ配列番号２７３、２７８、および２８３に記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、項目１または２に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。
（項目１７）
配列番号２６８、２７２、２７３、および３１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号２７８または３１４に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号２８３または３１５に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、ＰＤ－１に結合する単離された単一ドメイン抗体。
（項目１８）
配列番号２５１～２６７もしくは２８４のいずれかに記載されるアミノ酸配列、または配列番号２５１～２６７、２８４、もしくは３１２のいずれかと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み、ＰＤ－１に結合する、項目１７に記載の単離された単一ドメイン抗体。
（項目１９）
前記ｓｄＡｂが、配列番号２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２８４、または３１２に記載されるアミノ酸の配列を含む、項目１８に記載の単離された単一ドメイン抗体。
（項目２０）
項目１～４のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド（複数可）。
（項目２１）
項目１７～１９のいずれかに記載の単一ドメイン抗体をコードする、ポリヌクレオチド（複数可）。
（項目２２）
項目２０または２１に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
（項目２３）
項目２０もしくは２１に記載のポリヌクレオチド（複数可）、または項目２２に記載のベクターを含む、細胞。
（項目２４）
ポリペプチドを産生する方法であって、細胞に、項目２０もしくは２１に記載のポリヌクレオチド（複数可）、または項目２２に記載のベクターを導入することと、前記ポリペプチド構築物を産生するための条件下で前記細胞を培養することと、を含む、方法。
（項目２５）
項目１～４のいずれかに記載の結合分子または項目１７～１９のいずれかに記載の単一ドメイン抗体を含む結合分子を含む、操作された免疫細胞であって、任意選択的に、前記結合分子が、前記細胞から分泌可能である、操作された免疫細胞。
（項目２６）
項目１～４のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチド、項目１７～１９のいずれかに記載の単一ドメイン抗体、または項目２５に記載の操作された免疫細胞を含む、医薬組成物。
（項目２７）
対象における免疫応答を刺激または誘発する方法であって、それを必要とする対象に、項目１～４のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチド、項目１７～１９のいずれかに記載の単一ドメイン抗体、または項目２５に記載の操作された免疫細胞、または項目２６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目２８）
対象における疾患または状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の項目１～４のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチド、項目１７～１９のいずれかに記載の単一ドメイン抗体、または項目２５に記載の操作された免疫細胞、または項目２６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。 Provided herein are polypeptides that specifically bind to PD-1 (hereinafter also referred to as PD-1 binding polypeptides). In some embodiments, provided binding polypeptides comprise at least one VHH domain that binds to PD-1. In some embodiments, the PD-1 binding polypeptides provided herein comprise 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8 molecules that each individually bind to PD-1. Contains VHH domains. In some embodiments, the PD-1 binding polypeptides provided herein comprise 1, 2, 3, or 4 VHH domains that bind PD-1. In some embodiments, the PD-1 binding polypeptide is monospecific. In some embodiments, the PD-1 binding polypeptides are multispecific. For example, provided PD-1 binding polypeptides can have at least one VHH domain that binds PD-1 and one or more additional VHH domains that bind one or more target proteins other than PD-1. It includes polypeptides that may include one or more additional binding domains.
In certain embodiments, for example, the following items are provided.
(Item 1)
A PD-1 binding polypeptide construct comprising at least one heavy chain only variable domain (PD-1 VHH domain) that specifically binds to PD-1.
(Item 2)
PD comprising at least one heavy chain-only variable domain (PD-1 VHH domain) that specifically binds to PD-1 and one or more additional binding domains that bind targets other than PD-1 -1 binding polypeptide constructs.
(Item 3)
a complementarity determining region 1 (CDR1) wherein said at least one VHH domain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 268, 272, 273, and 313 and an amino acid sequence set forth in SEQ ID NOS: 278 or 314 and a complementarity determining region 3 (CDR3) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 283 or 315. .
(Item 4)
Complementarity Determining Region 1 (CDR1) comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 268, 272, 273, and 313; CDR2) and a complementarity determining region 3 (CDR3) comprising a selected amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 283 or 315, at least one heavy chain only variable domain (PD-1 VHH domain) A PD-1 binding construct comprising:
(Item 5)
PD-1 according to any of items 1, 2, 3 or 4, wherein said PD-1 VHH domain that specifically binds PD-1 blocks the interaction between PD-1 and PD-L1. Binding Polypeptide Constructs.
(Item 6)
3. The PD-1 binding polypeptide construct of item 2, wherein said one or more additional binding domains bind to a co-stimulatory molecule.
(Item 7)
3. The PD-1 binding polypeptide construct of item 2, wherein said one or more additional binding domains bind to a T cell surface marker.
(Item 8)
8. The PD-1 binding polypeptide construct of item 7, wherein said T cell surface marker is CD8.
(Item 9)
8. The PD-1 binding polypeptide construct of item 7, wherein said T cell surface marker is CD4.
(Item 10)
3. The PD-1 binding polypeptide construct of item 2, wherein said one or more additional binding domains bind to an immune checkpoint other than PD1.
(Item 11)
3. The PD-1 binding polypeptide construct of item 2, wherein said one or more additional binding domains bind to activated receptors on immune cells.
(Item 12)
3. The PD-1 binding polypeptide construct of item 2, wherein said one or more additional domains bind a tumor-associated antigen (TAA).
(Item 13)
3. The PD-1 binding polypeptide construct of item 2, wherein said one or more additional binding domains bind to a cytokine receptor.
(Item 14)
5. The PD-1 binding polypeptide construct of any of items 1, 2, 3, or 4, wherein said polypeptide comprises an immunoglobulin Fc region.
(Item 15)
said at least one PD-1 VHH domain is a sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 251-267, 284, or 312, or at least 85%, 86% with any of SEQ ID NOs: 251-267, 284, or 312 , 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity. 5. The PD-1 binding polypeptide construct of any of items 1, 2, 3, or 4, comprising and binding to PD-1.
(Item 16)
said at least one PD-1 VHH domain is CDR1, CDR2, and set forth in SEQ ID NOs: 268, 278, and 283, respectively; SEQ ID NOs: 272, 278, and 283, respectively; or SEQ ID NOs: 273, 278, and 283, respectively; PD-1-binding polypeptide construct according to items 1 or 2, comprising CDR3.
(Item 17)
Complementarity Determining Region 1 (CDR1) comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 268, 272, 273, and 313; CDR2) and a complementarity determining region 3 (CDR3) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:283 or 315. An isolated single domain antibody that binds to PD-1.
(Item 18)
an amino acid sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 251-267 or 284, or any of SEQ ID NOs: 251-267, 284, or 312 and at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%; 18. According to item 17, comprising a sequence of amino acids exhibiting 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity and which binds to PD-1 isolated single domain antibody of
(Item 19)
said sdAb is of amino acid set forth in 19. The isolated single domain antibody of item 18, comprising the sequence.
(Item 20)
Polynucleotide(s) encoding a PD-1 binding polypeptide according to any of items 1-4.
(Item 21)
Polynucleotide(s) encoding a single domain antibody according to any of items 17-19.
(Item 22)
A vector comprising the polynucleotide of item 20 or 21.
(Item 23)
A cell comprising the polynucleotide(s) according to item 20 or 21 or the vector according to item 22.
(Item 24)
A method of producing a polypeptide comprising introducing into a cell the polynucleotide(s) of item 20 or 21 or the vector of item 22 and conditions for producing said polypeptide construct. and culturing said cells under a.
(Item 25)
An engineered immune cell comprising a binding molecule according to any of items 1-4 or a binding molecule comprising a single domain antibody according to any of items 17-19, optionally said binding An engineered immune cell, wherein the molecule is secretable from said cell.
(Item 26)
A pharmaceutical composition comprising the PD-1 binding polypeptide of any of items 1-4, the single domain antibody of any of items 17-19, or the engineered immune cell of item 25.
(Item 27)
A method of stimulating or inducing an immune response in a subject, comprising administering to a subject in need thereof a PD-1 binding polypeptide according to any one of items 1-4, a single agent according to any one of items 17-19, A method comprising administering a single domain antibody, or an engineered immune cell according to item 25, or a pharmaceutical composition according to item 26.
(Item 28)
A method of treating a disease or condition in a subject comprising administering to the subject in need thereof a therapeutically effective amount of the PD-1 binding polypeptide of any of items 1-4, any of items 17-19 A method comprising administering a single domain antibody according to item 25, or an engineered immune cell according to item 25, or a pharmaceutical composition according to item 26.

Claims

ＰＤ－１に特異的に結合する少なくとも１つの重鎖のみの可変ドメイン（ＰＤ－１ＶＨＨドメイン）を含む、ＰＤ－１結合ポリペプチド構築物であって、前記ＰＤ－１ＶＨＨドメインが、
ａ）配列番号２６８に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；
配列番号２７８に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）；および
配列番号２８３に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
ｂ）配列番号２７２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；
配列番号２７８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および
配列番号２８３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２７３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；
配列番号２７８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および
配列番号２８３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または
ｄ）配列番号３１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；
配列番号３１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および
配列番号３１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含む、ＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。 1. A PD-1-binding polypeptide construct comprising at least one heavy chain-only variable domain (PD-1 VHH domain) that specifically binds to PD-1 , wherein said PD-1 VHH domain comprises:
a) a complementarity determining region 1 (CDR1) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:268;
a complementarity determining region 2 (CDR2) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 278; and
complementarity determining region 3 (CDR3) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 283;
b) a CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:272;
a CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:278; and
a CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:283;
c) a CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:273;
a CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:278; and
a CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 283; or
d) a CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:313;
a CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:314; and
CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:315
A PD-1 binding polypeptide construct comprising:

ＰＤ－１以外の標的に結合する１つ以上の追加の結合ドメインを含む、請求項１に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。 2. The PD - 1 binding polypeptide construct of claim 1, comprising one or more additional binding domains that bind targets other than PD-1.

ＰＤ－１に特異的に結合する前記ＰＤ－１ＶＨＨドメインが、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断する、請求項１または２のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。 3. The PD-1 binding poly of claim 1 or 2 , wherein said PD-1 VHH domain that specifically binds PD-1 blocks the interaction between PD-1 and PD-L1. peptide constructs.

前記ポリペプチドが、免疫グロブリンＦｃ領域を含む、請求項３に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。 4. The PD-1 binding polypeptide construct of claim 3, wherein said polypeptide comprises an immunoglobulin Fc region.

前記１つ以上の追加の結合ドメインが、共刺激分子、Ｔ細胞表面マーカー、ＰＤ１以外の免疫チェックポイント、免疫細胞上の活性化受容体、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、またはサイトカイン受容体に結合する、請求項２に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。 said one or more additional binding domains bind to costimulatory molecules , T-cell surface markers, immune checkpoints other than PD1, activating receptors on immune cells, tumor-associated antigens (TAAs), or cytokine receptors , the PD-1 binding polypeptide construct of claim 2.

前記１つ以上の追加の結合ドメインが、Ｔ細胞表面マーカーに結合し、前記Ｔ細胞表面マーカーが、ＣＤ８、またはＣＤ４である、請求項５に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。 6. The PD-1 binding polypeptide construct of claim 5 , wherein said one or more additional binding domains bind to a T cell surface marker, said T cell surface marker being CD8 or CD4 .

前記ポリペプチドが、免疫グロブリンＦｃ領域を含む、請求項５または６に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。 7. The PD-1 binding polypeptide construct of claim 5 or 6 , wherein said polypeptide comprises an immunoglobulin Fc region.

前記少なくとも１つのＰＤ－１ＶＨＨドメインが、配列番号２５１～２６７、２８４、もしくは３１２のいずれかに記載される配列、または配列番号２５１～２６７、２８４、もしくは３１２のいずれかと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み、ＰＤ－１に結合する、請求項１～７のいずれかに記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物。 said at least one PD-1 VHH domain is a sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 251-267, 284, or 312, or at least 85%, 86% with any of SEQ ID NOs: 251-267, 284, or 312 , 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity. PD-1-binding polypeptide construct of any of claims 1-7 , comprising and binding to PD-1.

ａ）配列番号２６８に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；
配列番号２７８に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）；および
配列番号２８３に記載されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）；
ｂ）配列番号２７２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；
配列番号２７８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および
配列番号２８３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２７３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；
配列番号２７８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および
配列番号２８３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または
ｄ）配列番号３１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；
配列番号３１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および
配列番号３１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含む、ＰＤ－１に結合する単離された単一ドメイン抗体。 a) a complementarity determining region 1 (CDR1) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:268;
a complementarity determining region 2 (CDR2) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 278; and
complementarity determining region 3 (CDR3) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 283;
b) a CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:272;
a CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:278; and
a CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:283;
c) a CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:273;
a CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:278; and
a CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 283; or
d) a CDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:313;
a CDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:314; and
CDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:315
An isolated single domain antibody that binds to PD-1, comprising:

配列番号２５１～２６７、２８４もしくは３１２のいずれかに記載されるアミノ酸配列、または配列番号２５１～２６７、２８４、もしくは３１２のいずれかと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み、ＰＤ－１に結合する、請求項９に記載の単離された単一ドメイン抗体。 an amino acid sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 251-267 , 284 or 312 , or at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90 with any of SEQ ID NOs: 251-267, 284, or 312 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity and binds to PD-1. 9. The isolated single domain antibody of 9.

請求項１～８のいずれか一項に記載のＰＤ－１結合ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド（複数可）。 Polynucleotide(s) encoding a PD-1 binding polypeptide according to any one of claims 1-8 .

請求項９または１０に記載の単一ドメイン抗体をコードする、ポリヌクレオチド（複数可）。 11. Polynucleotide(s) encoding the single domain antibody of claim 9 or 10 .

請求項１１または１２に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。 A vector comprising the polynucleotide of claim 11 or 12 .

請求項１１に記載のポリヌクレオチドを含む、細胞。 12. A cell comprising the polynucleotide of claim 11.

ポリペプチドを産生する方法であって、細胞に、請求項１１に記載のポリヌクレオチドを導入することと、前記ポリペプチドを産生するための条件下で前記細胞を培養することと、を含む、方法。 A method of producing a polypeptide, comprising introducing into a cell the polynucleotide of claim 11 and culturing said cell under conditions for producing said polypeptide. ,Method.

請求項１～３のいずれか一項に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物結合分子を含む結合分子を含む、操作された免疫細胞。 An engineered immune cell comprising a binding molecule comprising the PD-1 binding polypeptide construct binding molecule of any one of claims 1-3 .

前記ＰＤ－１結合ポリペプチド構築物結合分子が、前記細胞から分泌可能である、請求項１６に記載の操作された免疫細胞。 17. The engineered immune cell of claim 16, wherein said PD-1 binding polypeptide construct binding molecule is secretable from said cell.

請求項１～８のいずれか一項に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物を含む、医薬組成物。 A pharmaceutical composition comprising a PD-1 binding polypeptide construct according to any one of claims 1-8 .

対象における免疫応答を刺激または誘発する方法において使用するための、請求項１～８のいずれか一項に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物を含む組成物であって、前記方法が、それを必要とする対象に、前記ＰＤ－１結合ポリペプチドを投与することを含む、組成物。 9. A composition comprising the PD-1-binding polypeptide construct of any one of claims 1-8 for use in a method of stimulating or inducing an immune response in a subject, said method comprising A composition comprising administering said PD-1 binding polypeptide to a subject in need thereof.

対象における疾患または状態を治療する方法において使用するための、請求項１～８のいずれか一項に記載のＰＤ－１結合ポリペプチド構築物を含む組成物であって、前記方法が、それを必要とする対象に、治療有効量の前記ＰＤ－１結合ポリペプチドを投与することを含む、組成物。 9. A composition comprising a PD-1-binding polypeptide construct according to any one of claims 1-8 for use in a method of treating a disease or condition in a subject, said method comprising administering to a subject a therapeutically effective amount of said PD -1 binding polypeptide .

請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含む、細胞。 A cell comprising the polynucleotide of claim 12 .

単一ドメイン抗体を産生する方法であって、細胞に、請求項１２に記載のポリヌクレオチドを導入することと、前記単一ドメイン抗体を産生するための条件下で前記細胞を培養することと、を含む、方法。 13. A method of producing a single domain antibody, comprising introducing into a cell the polynucleotide of claim 12, culturing said cell under conditions for producing said single domain antibody, A method, including

請求項９または１０に記載の単一ドメイン抗体結合分子を含む結合分子を含む、操作された免疫細胞。 11. An engineered immune cell comprising a binding molecule comprising the single domain antibody binding molecule of claim 9 or 10.

前記単一ドメイン抗体結合分子が、前記細胞から分泌可能である、請求項２３に記載の操作された免疫細胞。 24. The engineered immune cell of Claim 23, wherein said single domain antibody binding molecule is secretable from said cell.

請求項９または１０に記載の単一ドメイン抗体を含む、医薬組成物。 A pharmaceutical composition comprising a single domain antibody according to claim 9 or 10.

対象における免疫応答を刺激または誘発する方法において使用するための、請求項９または１０に記載の単離された単一ドメイン抗体を含む組成物であって、前記方法が、それを必要とする対象に、前記単離された単一ドメイン抗体を投与することを含む、組成物。 11. A composition comprising the isolated single domain antibody of claim 9 or 10 for use in a method of stimulating or eliciting an immune response in a subject, said method comprising administering said isolated single domain antibody to.

対象における疾患または状態を治療する方法において使用するための、請求項９または１０に記載の単離された単一ドメイン抗体を含む組成物であって、前記方法が、それを必要とする対象に、治療有効量の前記単離された単一ドメイン抗体を投与することを含む、組成物。 11. A composition comprising the isolated single domain antibody of claim 9 or 10 for use in a method of treating a disease or condition in a subject, said method comprising treating a subject in need thereof , administering a therapeutically effective amount of said isolated single domain antibody.