JPWO2020043903A5 - - Google Patents
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Claims (21)
- キメラ抗原受容体(CAR)発現細胞の機能を評価するためのインビトロ方法であって:
(i)同じ細胞株から調製された標的抗原発現細胞及びCAR発現細胞を異なる標識で標識すること;
(ii)標識された標的細胞と標識されたCAR発現細胞を共培養すること、及び、
(iii)前記標的抗原発現細胞からの前記CAR発現細胞による膜獲得を評価するために細胞を分析することであって、前記膜獲得が、標的抗原への前記CAR発現細胞の結合及び/又は活性化能力の指標であり、それにより前記CAR発現細胞の機能を評価することを含み;且つ
前記細胞が免疫細胞である、方法。 - 前記共培養が、少なくとも1時間の間行われる、請求項1に記載の方法。
- 前記共培養が、1~5時間の間行われる、請求項1に記載の方法。
- 前記共培養が、1~3時間の間行われる、請求項1に記載の方法。
- 前記共培養が、1:0.5~1:10の標的抗原発現細胞対CAR発現細胞の比率で行われる、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞分析が、細胞選別分析によって行われる、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞選別分析が、フローサイトメトリー分析である、請求項6に記載の方法。
- 前記標識された標的抗原細胞と前記標識されたCAR発現細胞を共培養する前に、前記CARが由来する抗体と比較して同じ又は重複するエピトープを認識する抗体と共に前記標的抗原発現細胞を培養する工程をさらに含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が、前記CARが由来するモノクローナル抗体のCDRを含むモノクローナル抗体である、請求項9に記載の方法。
- 前記標的抗原を発現しない対照細胞を試験することをさらに含む、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的抗原を認識しない対照CAR発現細胞を試験することをさらに含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。
- 機能的なCAR発現細胞及び/又はCARコンストラクトの選択をさらに含む、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標識が、膜マーカーである、請求項1~13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記膜マーカーが、親油性トレーサー又は色素であり、さらにより好ましくは、MINI26、PKH26-PCL、PKH67、MINI67、PKH67-PCL、PKH26、PKH26-PCL、Vybrant CM-DiI、DiI、及びDiOからなる群から選択される、請求項14に記載の方法。
- 前記免疫細胞が、Tリンパ球、Bリンパ球、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーT細胞、単球、及び抗原提示細胞からなる群から選択される、請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。
- 養子細胞療法のために機能的CAR発現細胞を選択するためのインビトロ方法であって:
(i)免疫細胞の集団にCARをコードする核酸配列を形質導入すること、
(ii)CARを発現する前記単離された細胞の亜集団を選択すること、及び、
(iii)請求項1~11のいずれか一項に記載の方法によってそれらの機能を評価すること、
(iv)任意選択により、前記抗原発現細胞からの膜獲得を経験したCAR発現細胞から機能的CAR発現細胞及び/又はCAR核酸コンストラクトを選択することを含む、方法。 - 前記免疫細胞の集団が、処置される対象からの生物学的サンプルから単離された免疫細胞の集団である、請求項17に記載の方法。
- 前記標的抗原発現細胞が、CARが作製された抗原を発現する、請求項17に記載の方法。
- 前記抗原が、HLA-Gである、請求項1~19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記HLA-Gが、HLA-G1である、請求項20に記載の方法。
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