JPWO2019189200A1 - 栄養組成物並びに該栄養組成物を用いた飲食品組成物及び調製粉乳 - Google Patents
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Abstract
Description
一般に、健康な乳児の腸内フローラ(腸内菌叢)はビフィズス菌が優勢であるが、加齢とともに徐々に減少し、大腸菌やクロストリジウム属細菌などの腐敗菌が増加することにより、宿主(人)の健康に悪影響を及ぼす。このため、長く健康状態を維持するためには、ビフィズス菌が優勢な腸内フローラを維持することが重要である。
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、ヒトミルクオリゴ糖と、を含有する栄養組成物を提供する。
本技術に係る栄養組成物において、前記ヒトミルクオリゴ糖としては、2’−フコシルラクトース及び/又はラクト−N−ネオテトラオースを用いることができる。
本技術に係る栄養組成物において、前記プロバイオティクスとしては、ビフィドバクテリウム属細菌(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く)及び/又は乳酸菌を用いることができる。
この場合、前記ビフィドバクテリウム属細菌(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く)としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムから選択される1以上の細菌を用いることができる。
また、乳酸菌としては、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリから選択される1以上の細菌を用いることができる。
本技術に係る栄養組成物において、前記ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌としては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムATCC29521、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−1252)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02648)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02433)、から選択される1以上の細菌を用いることができる。
本技術に係る栄養組成物は、(1)ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、(2)ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、(3)ヒトミルクオリゴ糖と、を少なくとも含有する。以下、各含有成分について、詳細に説明する。
本技術で用いることができるビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌としては、本技術の効果を損なわない限り、公知又は未知のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を1種又は2種以上、自由に選択して用いることができる。具体的に挙げるとすれば、例えば、ビフィドバクテリウム・ビフィダムATCC29521、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−1252)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02648)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02433)ビフィドバクテリウム・ビフィダム(FERM BP−791)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(FERM P−11788)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(FERM P−11791)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−31)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムG9−1、ビフィドバクテリウム・ビフィダムBF−1、ビフィドバクテリウム・ビフィダムRosell−71、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NCDO 1453)等を挙げることができる。
上記寄託株と実質的に同等の株は、例えば、当該寄託株を親株とする派生株であってよい。派生株としては、寄託株から育種された株や寄託株から自然に生じた株が挙げられる。
(1)RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA)法、PFGE(Pulsed-field gel electrophoresis)法により同一の菌株と判定される菌株(Probiotics in food/Health and nutritional properties and guidelines for evaluation 85 Page43に記載)
(2)当該寄託菌株由来の遺伝子のみ保有し、外来由来の遺伝子を持たず、DNAの同一性が95%以上である菌株
(3)当該菌株から育種された株(遺伝子工学的改変、突然変異、自然突然変異を含み、同一の形質を有する株
本技術で用いることができるヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスとしては、本技術の効果を損なわない限り、公知又は未知のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスから1種又は2種以上の菌体を、自由に選択して用いることができる。
例えば、ヒトミルクオリゴ糖の資化能は、細胞中に取り込まれるヒトミルクオリゴ糖の取り込み速度を指標に評価することが出来、培養開始時におけるヒトミルクオリゴ糖が経時的に減少しているかどうか測定することにより算出することが出来る。あるいは、ヒトミルクオリゴ糖のみを炭素源として含む培地で、微生物の濁度や比増殖速度を確認することにより確認出来る。
HMOsとは、人乳に少量含まれている乳糖を除く三糖以上のオリゴ糖の総称である。哺乳動物の乳は、ラクト−N−テトラオース(LNT)、ラクト−N−ネオテトラオース(LNnT)、ラクト−N−ヘキサオース(LNH)、ラクト−N−ネオヘキサオース(LNnH)などの12系列のコア骨格をもつ。これらの骨格にルイスa,b,xやα2−3/2−6N−アセチルノイラミン酸が付加されることにより、糖鎖には100種類ものバリエーションが存在する。
なかでも、2’−フコシルラクトース(以下、「2’−FL」ともいう)、ラクト−N−フコペンタオースI(以下、「LNFPI」ともいう)、ラクト−N−ジフコヘキサオースI(以下、「LNDFP I」ともいう)およびラクト−N−ネオテトラオース(以下、「LNnT」ともいう)が利用できる。
本発明の栄養組成物を投与することにより、善玉菌に作用するプロバイオティクスの増殖促進効果が期待できる。即ちプロバイオティクスが腸内で増殖することにより、腸内細菌叢が改善される。腸内細菌叢が改善されることにより、腸内細菌叢に起因する疾患が改善または予防され、治療が可能になる。
腸内細菌叢に起因する疾患としては、炎症性大腸炎 潰瘍性大腸炎、過敏性大腸炎、大腸がん、糖尿病、動脈硬化等が挙げられる。
さらに、本発明の栄養組成物を投与することにより、免疫機能が増進される。免疫機能が増進することにより、花粉症、喘息、アトピー性皮膚炎等のアレルギーの予防または改善、治療が可能になる。
本技術に係る栄養組成物は、飲食品、医薬品、医薬部外品、飼料等に好適に用いることができる。
「非治療目的」とは、医療行為、すなわち、治療による人体への処置行為を含まない概念である。例えば、健康増進、美容行為等が挙げられる。
「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転;疾患、症状又は状態の悪化防止、遅延;疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
「予防」とは、適用対象における疾患若しくは症状の発症の防止や遅延、又は適用対象の疾患若しくは症状の危険性の低下をいう。
乳幼児とは、乳児及び幼児を含み、さらに詳細には、乳児、幼児及び新生児を含み、さらに詳細には、乳児、幼児、新生児、未熟児、早産児及び低出生体重児を含む。本発明において、乳幼児の種には、特に断りがない限り、ヒトが含まれる。乳児とは、乳児期にある子供を指し、乳児期とは母乳などの乳を主な栄養源としている時期を意味し、ヒトの場合、通常では1歳未満が乳児期にあたる。幼児とは、一般には就学前までの時期にある子供を指す。新生児とは、新生児期にある子供を指し、新生児期とは出生後の間もない時期を意味し、ヒトの場合、通常では出生後から4週間以内が新生児期にあたる。
プレバイオティクスは、本細菌又はその培養物とともに摂取させたときに本発明の効果をより発揮し得るものであれば特に制限されないが、例えば、ラクチュロース、ラフィノース、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、乳果オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルオリゴ糖、コーヒー豆マンノオリゴ糖、グルコン酸、ポリデキストロース、イヌリン等が好ましく、その中でも、ラクチュロース、ラフィノース、ガラクトオリゴ糖等がより好ましく、ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖がさらに好ましい。
本技術に係る栄養組成物は、公知の飲食品に添加して調製することもできるし、飲食品の原料中に混合して新たな飲食品を製造することもできる。
前記即席食品類としては、例えば、即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等が挙げられる。
前記農産加工品としては、例えば、農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル(穀物加工品)等が挙げられる。
前記水産加工品としては、例えば、水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等が挙げられる。
前記畜産加工品としては、例えば、畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等が挙げられる。
前記乳・乳製品としては、例えば、発酵乳、加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等が挙げられる。
前記油脂類としては、例えば、バター、マーガリン類、植物油等が挙げられる。
前記基礎調味料としては、例えば、しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等が挙げられ、前記複合調味料・食品類として、調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等が挙げられる。
前記冷凍食品としては、例えば、素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等が挙げられる。
前記菓子類としては、例えば、キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、その他の菓子等が挙げられる。
前記飲料としては、例えば、炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等が挙げられる。
上記以外の市販食品としては、例えば、ベビーフード、ふりかけ、お茶潰けのり等が挙げられる。
また、本技術で定義される飲食品等は、特定の用途(特に保健の用途)や機能が表示された飲食品として提供・販売されることも可能である。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本技術の「表示」行為に該当する。
本技術に係る栄養組成物は、飲食品の中でも特に、調製粉乳に好適に用いることができる。調製粉乳としては、乳児用調製粉乳、フォローアップ用調製粉乳、低出生体重児用調製粉乳、小児用調製粉乳、成人用調製粉乳、高齢者用調製粉乳、アレルギー用調製粉乳、乳糖不耐症用調製粉乳、先天代謝異常用調製粉乳等が挙げられる。特に乳児用調製粉乳、フォローアップ用調製粉乳、低出生体重児用調製粉乳、小児用調製粉乳に用いられることが好ましい。乳幼児用調製粉乳とは、0〜12か月の乳児を対象とする乳児用調製粉乳、6〜9か月以降の乳児および年少幼児(3歳まで)を対象とするフォローアップミルク、出生時の体重が2500g未満の新生児(低出生体重児)を対象とする低出生体重児用調製粉乳、牛乳アレルギーや乳糖不耐症等の病的状態を有する児の治療に用いられる各種治療用ミルクなどを指す。さらに、該組成物を保健機能食品や病者用食品に適用することができる。保健機能食品制度は、内外の動向、従来からの特定保健用食品制度との整合性を踏まえて、通常の食品のみならず錠剤、カプセル等の形状をした食品を対象として設けられたもので、特定保健用食品(個別許可型)と栄養機能食品(規格基準型)の2種類の類型からなる。
具体的には、下記工程(A)〜(C)を含む、母乳成分増強用粉乳の製造方法を提供する:
(A)乳成分を含有する培地で本発明のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスを培養し、培養物を得る工程;
(B)前記培養物を噴霧乾燥および/または凍結乾燥に供し、それぞれの菌体粉末を得る工程;
(C)前記菌体粉末とヒトミルクオリゴ糖を混合し、調製粉乳を得る工程。
(A)ヒトミルクオリゴ、発明のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクス、および乳成分を混合し、粉乳を得る工程。
(A)ヒトミルクオリゴ糖、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクス、および賦形剤を混合し、混合物を得る工程;
(B)前記混合物を打錠する工程。
本技術に係る栄養組成物は、公知の医薬品又は医薬部外品(以下、「医薬品等」ともいう)に添加して調製することもできるし、医薬品等の原料中に混合して新たな医薬品等を製造することもできる。
なお、製剤化は剤形に応じて、適宜、公知の方法により実施できる。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
本技術に係る栄養組成物は、公知の飼料に添加して調製することもできるし、飼料の原料中に混合して新たな飼料を製造することもできる。
[1]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する栄養組成物。
[2]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する飲食品組成物。
[3]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する調製粉乳。
[4]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する医薬品又は医薬部外品組成物。
[5]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する飼料組成物。
[6]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の栄養組成物への使用。
[7]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の飲食品組成物への使用。
[8]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の調製粉乳への使用。
[9]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の医薬品又は医薬部外品組成物への使用。
[10]
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の飼料組成物への使用。
[11]
栄養組成物の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
[12]
飲食品組成物の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
[13]
調製粉乳の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
[14]
医薬品又は医薬部外品組成物の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
[15]
飼料組成物の製造のための、
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
の使用。
[16]
[1]〜[15]において、
前記ヒトミルクオリゴ糖が、2’−フコシルラクトース及び/又はラクト−N−ネオテトラオースである。
[17]
[1]〜[16]において、
前記プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム属細菌(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く)及び/又は乳酸菌である。
[18]
[17]において、
前記ビフィドバクテリウム属細菌(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く)が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムから選択される1以上の細菌である。
[19]
[17]において、
前記乳酸菌が、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリから選択される1以上の細菌である。
[20]
[1]〜[19]において、
前記ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌が、ビフィドバクテリウム・ビフィダムATCC29521、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−1252)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02648)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02433)、から選択される1以上の細菌である。
[21]
下記工程(A)〜(C)を含む、調製粉乳の製造方法。
(A)乳成分を含有する培地でビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスを培養し、培養物を得る工程;
(B)前記培養物を噴霧乾燥および/または凍結乾燥に供し、それぞれの菌体粉末を得る工程;
(C)前記菌体粉末とヒトミルクオリゴを混合し、調製粉乳を得る工程。
[22]
下記工程(A)を含む、調製粉乳の製造方法:
(A)ヒトミルクオリゴ糖、ビでビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクス、および乳成分を混合し、粉乳を得る工程。
[23]
下記工程(A)および(B)を含む、母乳成分増強用サプリメントの製造方法
(A)ヒトミルクオリゴ糖、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌、ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクス、および賦形剤を混合し、混合物を得る工程;
(B)前記混合物を打錠する工程。
[24]
前記乳成分が、乳タンパク質である、[21]または[22]に記載の方法。
[25]
前記乳タンパク質が、ホエイ、ホエイ加水分解物、カゼインからなる群より選択される少なくとも1つの成分である、[24]に記載の方法。
[26]
下記工程(A)および(B)を含む、サプリメントの製造方法:
(A)い、ビフィドバクテウム(Bifidobacterium)属細菌、および賦形剤を混合し、混合物を得る工程;
(B)前記混合物を打錠する工程。
[27]
[21]〜[26]において、
前記ヒトミルクオリゴ糖が、2’−フコシルラクトース及び/又はラクト−N−ネオテトラオースである。
[28]
[21]〜[27]において、
前記プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム属細菌(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く)及び/又は乳酸菌である。
[29]
[28]において、
前記ビフィドバクテリウム属細菌(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く)が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムから選択される1以上の細菌である。
[30]
[28]において、
前記乳酸菌が、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリから選択される1以上の細菌である。
[31]
[21]〜[30]において、
前記ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌が、ビフィドバクテリウム・ビフィダムATCC29521、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−2429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−1252)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−2431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02648)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02433)、から選択される1以上の細菌である、請求項1から5のいずれか一項に記載の栄養組成物。
(1)糖溶液の調製
グルコース(ナカライテスク株式会社製)、HMOsの一例として、2’−FL((≧95%)フナコシ社、シグマ社から入手可能)、LNnT(ELICITYL社製)を、イオン交換水で10%溶液を調製し、Millex-GV(SLGV033RS)を用いて無菌濾過をした。
下記表1(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌)及び下記表2の菌株に、Lactobacilli MRS Broth(BD)(ビフィドバクテリウム属細菌には0.05%L-Cysteine Hydrochloride)を添加し、滅菌処理後に菌液を3%接種し、37℃で嫌気的に16時間培養した(前々培養)。
翌日、表3に示した改変BL寒天培地(光岡知足著「ビフィズス菌の研究」p.306,(財)ビフィズス菌センター,1994年発行)に、1%グルコースを加えて調製し、滅菌処理後に前々培養菌液を3%接種し、37℃で嫌気的に12時間前培養した(前培養)。
前培養が終了した菌液を集菌し、滅菌生理食塩水で1回洗浄後、表3に示した改変BL寒天培地(光岡知足著「ビフィズス菌の研究」p.306,(財)ビフィズス菌センター,1994年発行)で等量にメスアップし、懸濁した菌液を調製した。
表3に示した改変BL寒天培地(光岡知足著「ビフィズス菌の研究」p.306,(財)ビフィズス菌センター,1994年発行)を60%の容量で調製して、オートクレーブ滅菌処理後、(1)で調製したそれぞれの糖溶液40%を無菌的に加えて、糖濃度が4%となる培地を調製した。
96穴のプレートに培養する容量の半分の容量である前記(3)で調製した培地を分注し、残りの半分の容量に菌液が6%となるように前記(2)で調製した菌液を分注し、最終的な糖濃度を2%とした。菌液を分注したプレートは37℃で嫌気的に8時間培養した。
96穴のプレートに無菌的に培養する容量の半分の容量である前記(3)で調製した培地を分注し、残りの4分の1の容量である前記(3)で調製した培地に菌液が12%となるように前記(2)で調製した表1のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と表2のヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクスの菌株の菌液をそれぞれ分注し、最終的な糖濃度を2%とした。菌液を分注したプレートは37℃で嫌気的に8時間培養した。
前記(4)と前記(5)のプレートの各ウェルから、培養前(0時間)と培養後(8時間)に、MICROPLATE READER SH-9000(CORONA ELECTRIC社製)でOD650を測定した。濁度測定後に菌体を回収し、DNA抽出を行った。DNA抽出後、表4に示した菌種特異的プライマーを用いて、定量PCR法によりビフィズス菌・乳酸菌の増殖菌数を解析した(渡辺幸一著「腸内フローラの構造解析」―定量的PCRを用いたヒト糞便中の菌叢解析― 腸内細菌学雑誌、20:35−42,2006参照)。
(1)ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌のHMOsの利用性
表1のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌について、HMOsである2’−FL又はLNnTを糖源として、各菌株を単菌で培養し、OD650を測定した。結果を下記表5に示す。表5は、2’−FL又はLNnTを糖源として表1のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌7株の8時間培養後のOD650増加値を示す。
表2の菌株について、HMOsである2’−FL又はLNnTを糖源として、各菌株を単菌で培養し、OD650を測定した。2’−FLについての結果を下記表6に、LNnTについての結果を下記表7示す。
〔ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02429)+ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低いプロバイオティクス〕
前記で2’−FL又はLNnTの利用性が見られたビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02429)を、2’−FL又はLNnT利用できない表2の菌株と組み合わせて培養することとした。ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02429)と2’−FL又はLNnTを利用できない表2の菌株を2’−FL又はLNnTを糖源として混合培養し、8時間培養後の各菌株の菌数の増殖割合(増殖割合=8時間混合培養後の菌数/単菌培養後の菌数)を表2の菌株の表4に示す各菌株特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて定量PCR法で測定した。結果を表8に示す。
2’−FL又はLNnTを糖源として、表1のビフィドバクテリウム・ビフィダム7株と2’−FL又はLNnTを利用することができないビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムBB536を混合培養し、8時間培養後のビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムBB536の菌数と単菌培養8時間後の菌数を表4に示すビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて定量PCR法で測定し、増殖割合(増殖割合=8時間後の混合培養菌数/8時間単菌培養菌数)を比較した。結果を表9に示す。
2’−FL又はLNnTを糖源として、表1のビフィドバクテリウム・ビフィダム7株と2’−FL又はLNnTを利用することができないビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスMCC−525を混合培養し、8時間培養後のビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティスMCC−525の菌数と単菌培養8時間後の菌数を表4のビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて定量PCR法で測定し、増殖割合(増殖割合=8時間後の混合培養菌数/8時間単菌培養菌数)を比較した。結果を表10に示す。
2’−FLを糖源として、表1のビフィドバクテリウム・ビフィダム7株と2’−FLを利用することができないラクトバチルス・ガセリATCC 33323Tを混合培養し、8時間後のラクトバチルス・ガセリATCC 33323Tの菌数と単菌培養8時間後の菌数を表4のラクトバチルス・ガセリ特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いて定量PCR法で測定し、増殖割合(増殖割合=8時間後の混合培養菌数/8時間単菌培養菌数)を比較した。結果を表11に示す。
2’−FL又はLNnTを糖源として、表1のビフィドバクテリウム・ビフィダム7株と2’−FL又はLNnTを利用することができないラクトバチルス・パラカゼイATCC 25302Tを混合培養し8時間後のラクトバチルス・パラカゼイATCC 25302Tの菌数を単菌培養後の菌数の増殖割合(増殖割合=8時間後の混合培養菌数/8時間単菌培養菌数)を定量PCR法で測定した。結果を表12に示す。
下記に栄養組成物、医薬品組成物、及び食品組成物の製造例を示す。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを、MRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末(菌末)を得る。ビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む菌末と、プロバイオティクス・ヒトミルクオリゴ糖(フナコシ社から入手可能)・ホエイタンパク質濃縮物(Whey protein concentrate;WPC)と、プレバイオティクス(ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖)を均一に混合して組成物を得る。当該組成物20gを200gの水に溶かし、栄養組成物を得る。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを、MRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末(菌末)を得る。菌末と、プロバイオティクス・ヒトミルクオリゴ糖(フナコシ社から入手可能)・乳タンパク質濃縮物の乾燥粉末(MPC480、フォンテラ社製、タンパク質含量80質量%、カゼインタンパク質:ホエイタンパク質=約8:2)と、プレバイオティクス(ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖)を均一に混合して、当該組成物20gを200gの水に溶かし、栄養組成物を得る。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを、MRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末(菌末)を得る。次に、ビフィドバクテリウム・ビフィダムを含む菌末と、プロバイオティクス・ヒトミルクオリゴ糖(フナコシ社から入手可能)・プレバイオティクス(ラクチュロース、ラフィノース及びガラクトオリゴ糖)、結晶セルロースを撹拌造粒機に投入し混合する。その後、精製水を加え造粒、造粒物を乾燥し、細菌の抽出成分及びプレ、プロバイオティクスを含有し、賦形剤を含有してなる造粒物(医薬品組成物)を得る。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを添加した発酵乳の製造法を下記に示す。
まず、乳原料、および必要に応じた水、その他の成分等を混合し、好ましくは均質化処理を行い、加熱殺菌処理する。均質化処理および加熱殺菌処理は常法により行うことができる。加熱殺菌された殺菌調乳液に乳酸菌スターターを添加(接種)し、所定の発酵温度に保持して発酵させ、発酵物を得る。発酵によりカードが形成される。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムを添加した調製粉乳の製造法を下記に示す。
脱塩牛乳乳清蛋白質粉末(ミライ社製)10kg、牛乳カゼイン粉末(フォンテラ社製)6kg、乳糖(ミライ社製)48kg、ミネラル混合物(富田製薬社製)920g、及びビタミン混合物(田辺製薬社製)32g、ヒトミルクオリゴ糖、ラクチュロース(森永乳業社製)500g、ラフィノース(日本甜菜製糖社製)500g、ガラクトオリゴ糖液糖(ヤクルト薬品工業社製)900gを温水300kgに溶解し、さらに90℃で10分間加熱溶解し、調製脂肪(太陽油脂社製)28kgを添加して均質化する。その後、殺菌、濃縮の工程を行って噴霧乾燥し、調製粉乳約95kgを調製する。これに、澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ビフィダムの菌体粉末100g、及び乳酸菌・ビフィズス菌の菌体粉末100gを加えてビフィドバクテリウム・ビフィダム・ヒトミルクオリゴ糖(フナコシ社から入手可能)配合調製粉乳約95kgを調製する。得られた調製粉乳を水に溶解して、標準調乳濃度である総固形分濃度14%(w/V)の調乳液としたとき、調乳液中のビフィドバクテリウム・ビフィダムの菌数は2.7×109CFU/100mlを得ることができる。上述のようにして得られた調製粉乳を投与することにより、プロバイオティクスが腸内で増殖促進可能になる。
Claims (8)
- ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌と、
ヒトミルクオリゴ糖の資化能が低い1種以上のプロバイオティクスと、
ヒトミルクオリゴ糖と、
を含有する栄養組成物。 - 前記ヒトミルクオリゴ糖が、2’−フコシルラクトース及び/又はラクト−N−ネオテトラオースである、請求項1記載の栄養組成物。
- 前記プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム属細菌(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く)及び/又は乳酸菌である、請求項1又は2に記載の栄養組成物。
- 前記ビフィドバクテリウム属細菌(ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌を除く)が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムから選択される1以上の細菌である、請求項3記載の栄養組成物。
- 前記乳酸菌が、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ガセリから選択される1以上の細菌である、請求項3記載の栄養組成物。
- 前記ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する細菌が、ビフィドバクテリウム・ビフィダムATCC29521、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−2429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−1252)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−2431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02648)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP−02433)、から選択される1以上の細菌である、請求項1から5のいずれか一項に記載の栄養組成物。
- 請求項1から6のいずれか一項に記載の栄養組成物を含有する飲食品組成物。
- 請求項1から6のいずれか一項に記載の栄養組成物を含有する調製粉乳。
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