JPWO2013039165A1 - 抗ヒトノロウイルスgii抗体 - Google Patents
抗ヒトノロウイルスgii抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2013039165A1 JPWO2013039165A1 JP2013533714A JP2013533714A JPWO2013039165A1 JP WO2013039165 A1 JPWO2013039165 A1 JP WO2013039165A1 JP 2013533714 A JP2013533714 A JP 2013533714A JP 2013533714 A JP2013533714 A JP 2013533714A JP WO2013039165 A1 JPWO2013039165 A1 JP WO2013039165A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gii
- amino acid
- norovirus
- antibody
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000532184 Norovirus GII Species 0.000 title claims abstract description 47
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 81
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 claims 1
- 241001263478 Norovirus Species 0.000 abstract description 50
- -1 X5 represents Q Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 59
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 59
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 25
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 10
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 9
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 9
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 6
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241001241344 Norovirus GII.10 Species 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- CXENHBSYCFFKJS-OXYODPPFSA-N (Z,E)-alpha-farnesene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C\C=C(\C)C=C CXENHBSYCFFKJS-OXYODPPFSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- VOPWNXZWBYDODV-UHFFFAOYSA-N Chlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)Cl VOPWNXZWBYDODV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 101150030521 gI gene Proteins 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 241001622774 recombinant Norovirus GII Species 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 101000768957 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 37.2 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000823746 Acidianus ambivalens Uncharacterized 17.7 kDa protein in bps2 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000916369 Acidianus ambivalens Uncharacterized protein in sor 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000769342 Acinetobacter guillouiae Uncharacterized protein in rpoN-murA intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000823696 Actinobacillus pleuropneumoniae Uncharacterized glycosyltransferase in aroQ 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000786513 Agrobacterium tumefaciens (strain 15955) Uncharacterized protein outside the virF region Proteins 0.000 description 1
- 101000618005 Alkalihalobacillus pseudofirmus (strain ATCC BAA-2126 / JCM 17055 / OF4) Uncharacterized protein BpOF4_00885 Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100020724 Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 101000967489 Azorhizobium caulinodans (strain ATCC 43989 / DSM 5975 / JCM 20966 / LMG 6465 / NBRC 14845 / NCIMB 13405 / ORS 571) Uncharacterized protein AZC_3924 Proteins 0.000 description 1
- 101000823761 Bacillus licheniformis Uncharacterized 9.4 kDa protein in flaL 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000819719 Bacillus methanolicus Uncharacterized N-acetyltransferase in lysA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000789586 Bacillus subtilis (strain 168) UPF0702 transmembrane protein YkjA Proteins 0.000 description 1
- 101000792624 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YbxH Proteins 0.000 description 1
- 101000790792 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YckC Proteins 0.000 description 1
- 101000819705 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxR Proteins 0.000 description 1
- 101000948218 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YtxJ Proteins 0.000 description 1
- 101000718627 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Putative RNA polymerase sigma-G factor Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000641200 Bombyx mori densovirus Putative non-structural protein Proteins 0.000 description 1
- 208000006339 Caliciviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000947633 Claviceps purpurea Uncharacterized 13.8 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102100025698 Cytosolic carboxypeptidase 4 Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 238000011891 EIA kit Methods 0.000 description 1
- 101000948901 Enterobacteria phage T4 Uncharacterized 16.0 kDa protein in segB-ipI intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000805958 Equine herpesvirus 4 (strain 1942) Virion protein US10 homolog Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 101000790442 Escherichia coli Insertion element IS2 uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000788354 Escherichia phage P2 Uncharacterized 8.2 kDa protein in gpA 5'region Proteins 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 101000770304 Frankia alni UPF0460 protein in nifX-nifW intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 101000797344 Geobacillus stearothermophilus Putative tRNA (cytidine(34)-2'-O)-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000748410 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in fumA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000772675 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) UPF0438 protein HI_0847 Proteins 0.000 description 1
- 101000631019 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Uncharacterized protein HI_0350 Proteins 0.000 description 1
- 101000768938 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 8.9 kDa protein in int-C1 intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000785414 Homo sapiens Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000932590 Homo sapiens Cytosolic carboxypeptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000833492 Homo sapiens Jouberin Proteins 0.000 description 1
- 101000651236 Homo sapiens NCK-interacting protein with SH3 domain Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100024407 Jouberin Human genes 0.000 description 1
- 101000782488 Junonia coenia densovirus (isolate pBRJ/1990) Putative non-structural protein NS2 Proteins 0.000 description 1
- 101000811523 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 55.8 kDa protein in cps region Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 101000818409 Lactococcus lactis subsp. lactis Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in lacX 3'region Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101000878851 Leptolyngbya boryana Putative Fe(2+) transport protein A Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 101000758828 Methanosarcina barkeri (strain Fusaro / DSM 804) Uncharacterized protein Mbar_A1602 Proteins 0.000 description 1
- 101001122401 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF3 Proteins 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 101001033003 Mus musculus Granzyme F Proteins 0.000 description 1
- 101001055788 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) Pentapeptide repeat protein MfpA Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 101000740670 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Protein C42 Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 101000769182 Photorhabdus luminescens Uncharacterized protein in pnp 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101710159752 Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase subunit PhaE Proteins 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 description 1
- 101000961392 Pseudescherichia vulneris Uncharacterized 29.9 kDa protein in crtE 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000731030 Pseudomonas oleovorans Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001065485 Pseudomonas putida Probable fatty acid methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 101000711023 Rhizobium leguminosarum bv. trifolii Uncharacterized protein in tfuA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000948156 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 47.3 kDa protein in thcA 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000917565 Rhodococcus fascians Uncharacterized 33.6 kDa protein in fasciation locus Proteins 0.000 description 1
- 101000790284 Saimiriine herpesvirus 2 (strain 488) Uncharacterized 9.5 kDa protein in DHFR 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000936719 Streptococcus gordonii Accessory Sec system protein Asp3 Proteins 0.000 description 1
- 101000788499 Streptomyces coelicolor Uncharacterized oxidoreductase in mprA 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101001102841 Streptomyces griseus Purine nucleoside phosphorylase ORF3 Proteins 0.000 description 1
- 101000708557 Streptomyces lincolnensis Uncharacterized 17.2 kDa protein in melC2-rnhH intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000649826 Thermotoga neapolitana Putative anti-sigma factor antagonist TM1081 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000827562 Vibrio alginolyticus Uncharacterized protein in proC 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000778915 Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6 (strain RIMD 2210633) Uncharacterized membrane protein VP2115 Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000003163 cell fusion method Methods 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002288 cocrystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 238000002447 crystallographic data Methods 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002650 laminated plastic Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940089531 polyethylene glycol 3500 Drugs 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
したがって、遺伝子型の異なる多数のノロウイルスGIIを一括して検出できる抗体の創生が望まれていた。
1)ヒトノロウイルスGIIのカプシド構造タンパクのPドメインに存在する下記式(1)及び(2)で表されるアミノ酸領域に含まれるエピトープ、並びに配列番号1で示されるアミノ酸配列の483番目のアミノ酸又はこれに相当するアミノ酸からなるエピトープの1以上に結合する抗ヒトノロウイルスGII抗体。
P−X1−X2−P−G−E ・・・(1)
X3−X4−X5−F−Y−X6−L−X7−P−X8 ・・・(2)
〔式中、X1はL、V、N、T、S、M又はRを示し、X2はF、Y又はMを示し、X3はV又はGを示し、X4はN又はSを示し、X5はQ、P又はSを示し、X6はS、T又はIを示し、X7はA又はSを示し、X8はM又はVを示す。〕
2)式(1)で表されるアミノ酸領域が配列番号1で示されるアミノ酸配列の419番目〜424番目のアミノ酸領域又はこれに相当する領域であり式(2)で表されるアミノ酸配列が配列番号1で示されるアミノ酸配列の516番目〜525番目のアミノ酸領域又はこれに相当する領域である上記1)の抗ヒトノロウイルスGII抗体。
3)上記1)又は2)に記載の抗体を含むヒトノロウイルスGII検出試薬。
4)ヒトノロウイルスGIIを含む疑いのある検体を上記1)又は2)の抗体と反応させ、免疫学的測定法により当該ウイルスを検出することを特徴とするヒトノロウイルスGIIの検出方法。
本発明の抗ヒトノロウイルスGII抗体は、ヒトノロウイルスGIIのカプシド構造タンパクのPドメインに存在する下記式(1)及び(2)で表されるアミノ酸領域に含まれるエピトープ、並びに配列番号1で示されるアミノ酸配列の483番目のアミノ酸又はこれに相当するアミノ酸からなるエピトープの1以上に結合するものである。
P−X1−X2−P−G−E ・・・(1)
X3−X4−X5−F−Y−X6−L−X7−P−X8 ・・・(2)
〔式中、X1はL、V、N、T、S、M又はRを示し、X2はF、Y又はMを示し、X3はV又はGを示し、X4はN又はSを示し、X5はQ、P又はSを示し、X6はS、T又はIを示し、X7はA又はSを示し、X8はM又はVを示す。〕
ヒトノロウイルスのカプシド構造タンパク(VP1)は、shell領域(Sドメイン)と突出領域(Pドメイン)から成ることが知られている。Sドメインは、VP1のアッセンブリーを司ると考えられている。一方、Pドメインは、更にP1とP2サブドメインに分かれ、P1サブドメインは、Sドメインと相互作用し、カプシドの物理的安定性を増強すること、P2サブドメインは,ウイルス粒子の最外郭に位置し、マウスノロウイルスでは中和抗体の標的となることが報告されている。
本発明の式(1)及(2)で表されるアミノ酸領域、並びに配列番号1で示されるアミノ酸配列の483番目のアミノ酸又はこれに相当するアミノ酸は、ヒトノロウイルスGIIのカプシド構造タンパクのPドメイン上に存在し、各遺伝子型で保存性の高い領域及びアミノ酸で遺伝子変異が少ないと考えられるが、これまでに斯かる領域又はアミノ酸を認識する抗体は知られていない。
X1はL(ロイシン)、V(バリン)、N(アスパラギン)、T(スレオニン)、S(セリン)、M(メチオニン)又はR(アルギニン)を示す。
X2はF(フェニルアラニン)、Y(チロシン)、S(セリン)又はM(メチオニン)を示すが、Fであるのが好ましい。
(1−1)P−L−F−P−G−E
(1−2)P−V−F−P−G−E
(1−3)P−N−F−P−G−E
(1−4)P−T−F−P−G−E
(1−5)P−S−F−P−G−E
(1−6)P−T−Y−P−G−E
(1−7)P−M−F−P−G−E
(1−8)R−L−S−L−V−S
(1−9)P−R−M−P−G−E
X3はV(バリン)又はG(グリシン)を示すが、Vであるのが好ましい。
X4はN(アスパラギン)又はS(セリン)を示すが、Nであるのが好ましい。
X5はQ(グルタミン)、P(プロリン)又はS(セリン)を示すが、Qであるのが好ましい。
X6はS(セリン)、T(スレオニン)又はI(イソロイシン)を示すが、S又はTであるのが好ましい。
X7はA(アラニン)又はS(セリン)を示すが、Aであるのが好ましい。
X8はM(メチオニン)又はV(バリン)を示すが、Mであるのが好ましい。
(2−1)V−N−Q−F−Y−S−L−A−P−M
(2−2)V−N−P−F−Y−T−L−A−P−M
(2−3)V−N−Q−F−Y−T−L−A−P−M
(2−4)V−N−Q−F−Y−T−L−A−P−V
(2−5)V−N−Q−F−Y−S−L−A−P−M
(2−6)G−N−Q−F−Y−T−L−A−P−M
(2−7)V−N−Q−F−Y−S−L−A−P−V
(2−8)V−S−S−F−Y−I−L−S−P−V
本発明において、配列番号1で示されるアミノ酸配列の419番目〜424番目のアミノ酸領域に相当する領域、516番目〜525番目のアミノ酸領域に相当する領域、及び483番目のアミノ酸に相当するアミノ酸とは、例えば、GII/1型の485株のVP1アミノ酸配列をもとに、遺伝子情報処理ソフトウェアGENATYXを用い各遺伝子型とのアライメントをとった場合に、配列番号1で示されるアミノ酸配列の419番目〜424番目のアミノ酸領域、516番目〜525番目のアミノ酸領域、及び483番目のアミノ酸に対応する領域又はアミノ酸を意味する(図1参照)。VP1のアミノ酸配列をこのような方法で整列させることにより、アミノ酸配列中にある欠失にかかわらず、各ヒトノロウイルスGIIのPドメインにおけるアミノ酸配列中の特定領域を決めることが可能である。相同する領域は、三次元構造中で同じ領域に存在すると考えられ、ヒトノロウイルスGIIについて同様のエピトープを有するものと推定できる。
ここで、「エピトープ」とは、抗原決定基であり、抗体と特異的に結合する構造部位を意味する。本発明におけるエピトープは、上記のアミノ酸領域の一部の連続したアミノ酸の他、該領域の不連続なアミノ酸であってもよい。
また、「結合」とは、リガンドと基質間の相互作用を意味し、バックグラウンドまたは非特異的或いは特異的相互作用とは区別され得る。
式(1)で表されるアミノ酸領域に含まれるエピトープとしては、好適には、「X1」であり、式(2)で表されるアミノ酸領域に含まれるエピトープとしては、好適には、「X4」及び/又は「Y−X6−L」が挙げられる。
また、GII/1型のNG1株の例においては、式(1−2)で表されるアミノ酸領域のうち、配列番号1で示されるアミノ酸配列の427番目のV、式(2−2)で表されるアミノ酸領域のうち524番目のN、527番目〜529番目のY−S−L及び490番目のEから選ばれる1以上をエピトープとするものが好適に挙げられる。
また、本発明の抗ヒトノロウイルスGII抗体は、IgG、IgA、IgY、IgD、IgM、IgEまたはそれらの1つ以上の一部、例えば、重鎖、軽鎖、FcまたはF(ab)一部のような任意の要求された類型であることができる。
前記免疫細胞と融合される他方の親細胞としての哺乳動物のミエローマ細胞は、すでに、公知の種々の細胞株、例えばP3X63、NS−1、MPC−11、SP2/0等が適宜使用される。
ハイブリドーマの産生する抗体の活性を検出する方法は、公知の方法を使用することができる。例えばELISA法、凝集反応法、ラジオイムノアッセイ法が挙げられる。
免疫学的測定法としては、特に制限されないが、抗ノロウイルスGII抗体と標識抗ノロウイルスGII抗体を用いたサンドイッチ法が好ましく、固定化抗ノロウイルスGII抗体と標識抗ノロウイルスGII抗体を用いる方法がさらに好ましい。
固定化抗ノロウイルスGII抗体としては、ポリスチレンプレート、ラテックス粒子、磁性粒子、ガラス繊維膜、ナイロン膜、ニトロセルロース膜、酢酸セルロース膜等の不溶性支持体に固定化したものが好ましい。
また、標識抗ヒトノロウイルスGII抗体としては、公知の標識体、例えば、放射性同位体(例えば、32P、35S、3H)、酵素(例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、ルシフェラーゼ)、タンパク(例えば、アビジン)、低分子化合物(例えば、ビオチン)、蛍光物質(例えば、FITC)、化学発光物質(例えば、アクリジニウム) 、ラテックス粒子(例えば、着色ラテックス粒子、蛍光ラテックス粒子)、金属(例えば、金、銀、白金等の貴金属)コロイド粒子、炭素原子等を用いることができる。
本発明のノロウイルスGIIの検出方法としてはELISA及びイムノクロマトグラフ法がより好ましい。
本発明の方法に使用する抗体は以下の方法で作成した。
GIIノロウイルス様中空粒子(VLP)50μgをマウス腹腔にアジュバントと共に数回免疫し、その血清力価が上昇したことを確認した。追加免疫(静脈内)後3日目に脾臓を取り出し、脾細胞を得た。これとマウスミエローマ細胞をポリエチレングリコール3500の存在下(10:1細胞)で融合させ、ハイブリドーマ細胞を作製した。この細胞を1週間CO2気下37℃で培養し、その培養上清中の抗ノロウイルス抗体の有無を調べた。そこで抗体産生を認めた陽性ウェル中の細胞を限界希釈法により希釈し2週間培養し、同様に培養上清の抗ノロウイルス抗体の有無を調べた。更にその後、抗体産生を認めた陽性ウェル中の細胞を再度限界希釈し、同様の培養を行った。この段階で抗ノロウイルス抗体を産生している細胞を、フラスコにて培養し、その一部をジメチルスルホキシド(DMSO) 10%含有ウシ胎児血清(FCS)にサスペンドし(5×106個/mL)、液体窒素中に保存した。
次に、これらの細胞を25mLのフラスコで培養し、更に75mLのフラスコで培養した。この細胞をプリスタン処理マウス腹腔中に注射し、腹水を採取した。
モノクローナル化ハイブリドーマ細胞の選択においては、下記実施例3に記載の方法と同様の方法でモノクローナル抗体とノロウイルスとの結合状態を確認することにより、Pドメイン上のアミノ酸領域に結合し得るモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを再現性良く選択することができる。
上記実施例1の方法において、GIIノロウイルス様中空粒子(VLP)を免疫する代わりに、ノロウイルス様中空粒子(VLP)のPドメインタンパク質を免疫する事により、再現性良くPドメイン上のアミノ酸領域に結合し得るモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを再現性良く取得することができる。Pドメインタンパク質の取得方法は実施例3に記載のある通りである。
また、本発明の式(1)及び(2)で表されるアミノ酸領域、並びに配列番号1で示されるアミノ酸配列の483番目のアミノ酸又はこれらに相当するアミノ酸配列を選択してこれらアミノ酸配列からなるポリペプチドを製造し、該ポリペプチドを免疫する事により、再現性良くPドメイン上のアミノ酸領域に結合し得るモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを再現性良く取得することができる。
該ポリペプチドはヒトノロウイルスGIIの抗原として使用することができる。
得られた腹水(10mL)と混濁血清処理剤(FRIGEN(登録商標)II:協和純薬工業社製)を、腹水1.5容に対してFRIGEN(登録商標)IIを1容の比率で混和し、1〜2分攪拌振とうすることで、腹水からの脱脂を行った。遠心機で3000rpm(1930×g)、10分間遠心分離を行い、清澄化された腹水遠心上清(10mL)を分取した。この腹水遠心上清(10mL)に硫安分画処理(終濃度50%飽和硫安)を氷浴中で1時間施し、沈降したイムノグロブリン画分をPBSで懸濁溶解させた。この硫安分画操作を計2回行い、腹水からのイムノグロブリン粗画分を得た。得られたイムノグロブリン粗画分(10mL)に対して等量の20mMリン酸ナトリウム, pH7.0(以下、20mM NaPB,pH7.0と称す)を混合し、プロテインGカラム(HiTrap Protein G HP,5mL:Amersham BioSciences社製)を用いてアフィニティー精製を行った。サンプルをプロテインGカラムに吸着後、20mM NaPB,pH7.0(50mL)をプロテインGカラム内に通し、サンプル中のIgG以外の夾雑物を洗浄除去した。その後、プロテインGカラムにアフィニティー吸着したIgGは、0.1M グリシン-HCl,pH2.7で溶出させ、カラムからの溶出直後の溶出画分を1M Tris(hydroxymethyl)aminomethane-HCl,pH9.0(以下、Tris(hydroxymethyl)aminomethaneをTrisと略す)で中和し回収した。中和後、アフィニティー精製物に対して500倍容のPBSで4℃、6時間の透析を行い、本透析は計2回行った。本透析操作に用いた透析膜は透析用セルロースチューブ(Viskase Companies社製)で行った。そこで得られたIgG溶出画分を、抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)の精製物とし、4℃での保存ならびに後述する操作に用いることとした。尚、本精製には、BioLogic LPシステム(Bio Rad Laboratories社製)に上述のプロテインGカラムを接続し、流速は1mL/minで一貫して行った。
実施例1で得られた抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)を用いて、以下の手順でイムノクロマト法を利用したノロウイルスGII検出試薬を作成した。
ニトロセルロースメンブレンシートに抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)を0.36〜1.45 mg/mL含有する溶液を0.25〜1.00 μL/5mmの量で、線状に塗布しテストラインとした。コントロールラインは抗マウスグロブリン抗体を上記同様に塗布した。
抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)を結合させたラテックスを0.04〜0.15w/v%含有する溶液を抗体結合ラテックス溶液(5B-18-3M)とした。ラテックス溶液をコンジュゲートパッドに含浸させ、乾燥したものを作成した。
プラスチック製バッキングシート上に、サンプルパッド、上記メンブレン、コンジュゲートパッド及び吸収パッドをこの順で隣り合う部材が一部重なるように貼り付けた後に、プラスチックラミネートで被覆し、5mm幅に切断して、テストストリップを作製する。
上記で作成した試薬を、下記の手順でノロウイルスの各遺伝子型との反応を確認した。
ノロウイルスの各遺伝子型の組換え抗原を希釈液に浮遊し、浮遊した抗原75μLを上記で作成したテストストリップのサンプルパッドに滴下した。15〜30℃で15分間静置した後、ラインの有無を確認した。結果を表1に示す。尚、124株とは、Hu/NV/GI/Aichi124-89/89/JP(GeneBank accession number: AB031013)株を意味し、258株とは、Hu/NV/GI/Funabashi258/96/JP(GeneBank accession number: AB078335)株を意味し、645株とは、Hu/NV/GI/Kashiwa645/99/JP(GeneBank accession number: BD011871)株を意味し、CV株とは、Hu/NV/GI/Chiba407/87/JP(GeneBank accession number: AB042808)株を意味し、W18株とは、Hu/NV/GI/WUG1/00/JP(GeneBank accession number: AB081723)株を意味し、#8株とは、Hu/NV/GI/8/99/JP(GeneBank accession number: AB058547)株を意味し、485株とは、Hu/NV/GII/Noda485/00/JP(GeneBank accession number: 未登録)株を意味し、NG1株とは、Hu/NV/GII/NG1/02/JP(GeneBank accession number: AB195225)株を意味し、809株とはHu/NV/GII/Sanbu809/98/JP(GeneBank accession number: BD011876)を意味し、18-3株とは、Hu/NV/GII/Matsudo18/00/JP(GeneBank accession number: 未登録)株を意味し、336株とは、Hu/NV/GII/Kashiwa336/00/JP(GeneBank accession number: 未登録)株を意味し、104株とは、Hu/NV/GII/Narita104/97/JP(GeneBank accession number: 未登録)株を意味し、754株とは、Hu/NV/GII/Ichikawa754/98/JP(GeneBank accession number: BD011877)株を意味し、7k株とは、Hu/NV/GII/Ueno7k/94/JP(GeneBank accession number: AB078337)株を意味し、445株とは、Hu/NV/GII/Sanbu445/00/JP(GeneBank accession number: 未登録)株を意味し、10-25株とは、Hu/NV/GII/Osaka10-25/99/JP(GeneBank accession number: BD011881)株を意味し、U25株とは、Hu/NV/GII/SaitamaU25/**/JP(GeneBank accession number: AB039780)株を意味し、1876株とは、Hu/NV/GII/Chitta/Aichi76-96/96/JP(GeneBank accession number: AB032758)株を意味し、NG15株とは、Hu/NV/GII/NG15/03/JP(GeneBank accession number: 未登録)株を意味し、47株とは、Hu/NV/GII/Kashiwa47/97/JP(GeneBank accession number: AB078334)株を意味し、Kamo株とは、Hu/NV/GII/Kamo8/03/JP(GeneBank accession number: 未登録)株を意味し、Alph株とは、Hu/NV/GII/Alph23/**/JP(GeneBank accession number: 未登録)株を意味する。
抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)とノロウイルスとの結合状態を把握するため、以下の手順でX線結晶構造解析を行った。
(1)サンプルの調製
<ノロウイルスP領域のタンパク質発現、精製と結晶化>
ノロウイルスVietnam026 GII.10のP領域の全長に近い(アミノ酸残基224-538)P領域(アミノ酸の長さ314)を、E.coliでの発現のためにデザインし、BamHIとNotI(New England Biolabs)制限酵素サイトで切断したpMal-c2xベクターに挿入し、発現クローンを作製した。これをE.coli BL21細胞(Invitrogen)にトランスフォームし、発現は、IPTG(1mM)で22℃で18時間誘導した。His-tagged融合P領域タンパク質は、Niカラム(Qiagen)で精製し、HRV-3Cプロテアーゼ(Novagen)により、4℃で一晩処理した。その後、再度その処理液をNiカラムに通すことで、P領域を精製した。
P領域はSuperdex 200カラム(GE)で分子ふるいクロマトグラフィーにより、さらに精製し、2-10mg/mlまで濃縮した後、結晶化の前にGFB(0.35M NaCl、2.5mMトリスpH 7.0、0.02% NaN3)に保存した。
精製した5B-18-3M IgGを約60 mg使用し、Fabの調整をした。5B-18-3M IgG は、100mM dTTで37℃で1時間還元した。還元した5B-18-3M IgGは、透析カセットで4℃で1時間透析を行い、20mM HEPES(pH 7.7)を含むGFBにBuffer置換し、4℃で48時間2mMヨードアセトアミドを含むGFBでアルキル化した。その後、カセットをヨードアセトアミドを含まない新しいGFBに移し、4℃で1h Buffer置換を行った。5B-18-3M IgGは、5mg/mLに濃縮し、キット(pierce,Rockford, USA)を用いてパパインで消化した。消化した5B-18-3M IgGは、プロテインAカラムでFabのみ精製し、Fabは、さらにSuperdex 200カラム(GE)で分子ふるいクロマトグラフィーにより精製し、5mg/mLに濃縮した後GFBに保存した。
精製したそれらの、ノロウイルス GII.10のP領域と、5B-18-3M Fabは、1:1で混合し25℃で1時間反応させ、最終的に分子ふるいクロマトグラフィーにより精製した。
上記、ノロウイルスP領域と抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)のFab の複合体はハンプトンリサーチ社の試薬とhanging-drop vapor diffusion法を用いるのとは少し異なる状況下で結晶化させた。
この研究のために、P領域-Fab複合体の結晶は、GII.10 P領域-Fab複合体とPEG400(40% v/v)、PEG3350(5% w/v)、0.1M酢酸(pH5.5)を含むGFBを1:1の比率で混合し、成長させた。データ収集の前に結晶は、30%のエチレングリコールにGFBを含む凍結防止剤へ移した。
抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)とノロウイルスGII.10キャプシドタンパクP領域との複合体の結晶のX線回析データは、アルゴンヌ国立研究所(Argonne, IL)のビームライン、Southeast Regional Collaborative Access Team (SER-CAT) 22-IDと22-BMを使用して作成された。回析データは蛋白・低分子データ処理ソフトウェアHKL2000とプログラムパッケージXDSによって処理した。構造は、PDB( Protein Data Bank) コード1WEJを抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体のFabのサーチモデルとし、PDB コード2OBRをノロウイルスキャプシドP領域のサーチモデルとして、分子置換による構造解析ソフトPHASERを用いて、回析データと抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)とノロウイルスGII.10キャプシドタンパクP領域アミノ酸配列より立体構造を構築した。
その後、モデル構築ソフトCOOT内に構築されているマニュアルモデルで立体構造を調整し、精密化プログラムREFMACのTLS refinementと自動構造決定ソフトウェアPHENIXで修正を行い、CCP4によって、重ね合わせ(superposition)と平均二乗偏差(RMSD)が計算され、分子グラフィックスツールPyMOLに描画した。
これにより得られた、図2の構造よりGII.10キャプシドタンパクP領域に抗ノロウイルスGIIモノクローナル抗体(5B-18-3M)が結合している部位のノロウイルスGII.10キャプシドタンパクP領域のアミノ酸配列の同定を行ったところ、3箇所の部位が明らかとなった。その後、各遺伝子型のアミノ酸配列の相同性比較を行った結果、図1に示すように、各遺伝子間で非常に保存された3ヶ所の領域であるという結果が得られた。
Claims (4)
- ヒトノロウイルスGIIのカプシド構造タンパクのPドメインに存在する下記式(1)及び(2)で表されるアミノ酸領域に含まれるエピトープ、並びに配列番号1で示されるアミノ酸配列の483番目のアミノ酸又はこれに相当するアミノ酸からなるエピトープの1以上に結合する抗ヒトノロウイルスGII抗体。
P−X1−X2−P−G−E ・・・(1)
X3−X4−X5−F−Y−X6−L−X7−P−X8 ・・・(2)
〔式中、X1はL、V、N、T、S、M又はRを示し、X2はF、Y又はMを示し、X3はV又はGを示し、X4はN又はSを示し、X5はQ、P又はSを示し、X6はS、T又はIを示し、X7はA又はSを示し、X8はM又はVを示す。〕 - 式(1)で表されるアミノ酸領域が配列番号1で示されるアミノ酸配列の419番目〜424番目のアミノ酸領域又はこれに相当する領域であり式(2)で表されるアミノ酸配列が配列番号1で示されるアミノ酸配列の516番目〜525番目のアミノ酸領域又はこれに相当する領域である請求項1記載の抗ヒトノロウイルスGII抗体。
- 請求項1又は2に記載の抗体を含むヒトノロウイルスGII検出試薬。
- ヒトノロウイルスGIIを含む疑いのある検体を請求項1又は2に記載の抗体と反応させ、免疫学的測定法により当該ウイルスを検出することを特徴とするヒトノロウイルスGIIの検出方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011199059 | 2011-09-13 | ||
JP2011199059 | 2011-09-13 | ||
PCT/JP2012/073511 WO2013039165A1 (ja) | 2011-09-13 | 2012-09-13 | 抗ヒトノロウイルスgii抗体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2013039165A1 true JPWO2013039165A1 (ja) | 2015-03-26 |
JP6105474B2 JP6105474B2 (ja) | 2017-03-29 |
Family
ID=47883382
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013533714A Active JP6105474B2 (ja) | 2011-09-13 | 2012-09-13 | 抗ヒトノロウイルスgii抗体 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9244072B2 (ja) |
EP (1) | EP2757111B1 (ja) |
JP (1) | JP6105474B2 (ja) |
KR (1) | KR102000479B1 (ja) |
WO (1) | WO2013039165A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AR096236A1 (es) | 2013-05-09 | 2015-12-16 | The Us Secretary Dept Of Health And Human Services Nat Inst Of Health Office Of Tech Transfer | Anticuerpos de dominio simple vhh dirigidos a norovirus gi.1 y gii.4 y sus usos |
US10233232B2 (en) | 2014-10-14 | 2019-03-19 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Norovirus antibodies |
KR101762815B1 (ko) * | 2015-09-17 | 2017-07-28 | 강원대학교산학협력단 | 노로바이러스 재조합 항원 및 그 항원에 특이적인 항체 |
EP3459970A1 (en) | 2017-09-20 | 2019-03-27 | Universität Heidelberg | Norovirus nanobodies |
WO2020046857A1 (en) * | 2018-08-27 | 2020-03-05 | Vanderbilt University | Human monoclonal antibodies that neutralize pandemic gii.4 noroviruses |
KR20240009997A (ko) * | 2021-05-20 | 2024-01-23 | 덴카 주식회사 | 노로바이러스의 면역 측정 방법 및 면역 측정 기구 |
TW202306977A (zh) | 2021-05-20 | 2023-02-16 | 日商電化股份有限公司 | 抗諾羅病毒抗體 |
KR20240009996A (ko) | 2021-05-20 | 2024-01-23 | 덴카 주식회사 | 항노로바이러스 항체 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002040509A1 (fr) * | 2000-11-15 | 2002-05-23 | Bml, Inc. | Anticorps dirige contre le virus norwalk et procede de detection du virus a l'aide de l'anticorps |
JP2004301684A (ja) * | 2003-03-31 | 2004-10-28 | Denka Seiken Co Ltd | ノロウイルス又はサポウイルス検体用希釈液及びウイルス検出試薬 |
JP2009542715A (ja) * | 2006-06-30 | 2009-12-03 | キム ラボラトリーズ | ノロウイルス用抗体 |
-
2012
- 2012-09-13 JP JP2013533714A patent/JP6105474B2/ja active Active
- 2012-09-13 EP EP12831058.8A patent/EP2757111B1/en active Active
- 2012-09-13 KR KR1020147006737A patent/KR102000479B1/ko active IP Right Grant
- 2012-09-13 US US14/344,784 patent/US9244072B2/en active Active
- 2012-09-13 WO PCT/JP2012/073511 patent/WO2013039165A1/ja active Application Filing
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002040509A1 (fr) * | 2000-11-15 | 2002-05-23 | Bml, Inc. | Anticorps dirige contre le virus norwalk et procede de detection du virus a l'aide de l'anticorps |
JP2004301684A (ja) * | 2003-03-31 | 2004-10-28 | Denka Seiken Co Ltd | ノロウイルス又はサポウイルス検体用希釈液及びウイルス検出試薬 |
JP2009542715A (ja) * | 2006-06-30 | 2009-12-03 | キム ラボラトリーズ | ノロウイルス用抗体 |
Non-Patent Citations (9)
Title |
---|
JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, vol. 38, no. 4, JPN6012057003, 2000, pages 1656 - 1660, ISSN: 0003269716 * |
JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, vol. 40, no. 7, JPN6012057000, 2002, pages 2459 - 2465, ISSN: 0003269715 * |
JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, vol. 41, no. 6, JPN6012057008, 2003, pages 2367 - 2371, ISSN: 0003501344 * |
JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY, vol. 86, JPN6012056997, 2005, pages 2799 - 2806, ISSN: 0003269714 * |
JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY, vol. 87, JPN6012057004, 2006, pages 909 - 919, ISSN: 0003269717 * |
JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 79, no. 12, JPN6012056996, 2005, pages 7402 - 7409, ISSN: 0003269713 * |
JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 81, no. 22, JPN6012056995, 2007, pages 12298 - 12306, ISSN: 0003269712 * |
VIROLOGY, vol. 346, JPN6012057005, 2006, pages 312 - 323, ISSN: 0003269718 * |
VIRUS RESEARCH, vol. 151, JPN6012057007, 2010, pages 142 - 147, ISSN: 0003501343 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20140068067A (ko) | 2014-06-05 |
WO2013039165A1 (ja) | 2013-03-21 |
EP2757111A4 (en) | 2015-04-22 |
US20140349277A1 (en) | 2014-11-27 |
EP2757111B1 (en) | 2017-11-08 |
KR102000479B1 (ko) | 2019-07-16 |
EP2757111A1 (en) | 2014-07-23 |
US9244072B2 (en) | 2016-01-26 |
JP6105474B2 (ja) | 2017-03-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6105474B2 (ja) | 抗ヒトノロウイルスgii抗体 | |
Koromyslova et al. | Nanobody binding to a conserved epitope promotes norovirus particle disassembly | |
KR100916992B1 (ko) | B형 간염 바이러스 s 항원의 검출법 | |
CN113138276B (zh) | 用于检测HBcAg的方法及抗体 | |
JP2009197033A (ja) | 抗hcvコア蛋白質モノクローナル抗体 | |
Caixia et al. | Development of a blocking ELISA kit for detection of ASFV antibody based on a monoclonal antibody against full-length p72 | |
KR20070108284A (ko) | C형 간염 바이러스의 검출 방법 | |
JP6808178B2 (ja) | ヒトパルボウイルスb19抗原および抗体の同時検出方法及びキット | |
JP3847257B2 (ja) | Hbvの検出又は測定方法 | |
JP2023052742A (ja) | アデノウイルスの免疫測定方法及び免疫測定器具 | |
JP2023052731A (ja) | アデノウイルスの免疫測定方法及び免疫測定器具 | |
WO2022244860A1 (ja) | 抗ノロウイルス抗体 | |
WO2022244861A1 (ja) | 抗ノロウイルス抗体 | |
WO2022244862A1 (ja) | ノロウイルスの免疫測定方法及び免疫測定器具 | |
RU2817391C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная ДНК pQE30-Ig-TIM1, обеспечивающая экспрессию иммуноглобулинового домена гена TIM-1/HAVCR-1 человека в клетках E. coli для диагностических и научных исследований | |
JP7256144B2 (ja) | アデノウイルスの免疫測定方法及び免疫測定器具 | |
US11560421B2 (en) | Broad-spectrum monoclonal antibodies against chikungunya virus E1 structural protein | |
JP4829961B2 (ja) | プロスタシン部分ペプチド及び抗プロスタシン抗体 | |
JP2001224371A (ja) | Hcvの検出又は測定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150525 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160315 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160516 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161004 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161201 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170221 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170302 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6105474 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |