JPWO2008143171A1 - 糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定により胃粘膜の状態を判断する方法 - Google Patents

Abstract

本発明の課題は、被験者の負担が少なく簡便に実施することができ、かつ、見逃し例の割合が極めて少ない、胃粘膜の状態を病態およびその程度とともに胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率についても詳細に細分化することが可能な、胃粘膜の状態を判断するための方法を提供することにある。また、各病態の判断に関連して胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量するための方法をも提供することにある。前記課題は、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する方法および前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する方法により解決される。

Description

本発明は、糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、胃粘膜の状態を判断する方法および胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する方法に関する。

ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori、以下、「ヘリコバクター・ピロリ」、「Ｈｐ」または「ピロリ菌」などと表記する）は、ヒト胃粘膜に存在するらせん形状のグラム陰性細菌である。ヒトのヘリコバクター・ピロリへの感染率は、年齢にしたがって高くなる傾向があり、中高年では７０〜８０％にものぼると言われている。

近年では、ヘリコバクター・ピロリが健常な胃に感染した場合には、まず胃粘膜に組織学的な炎症を呈し、そして次第に炎症が高度（活動性胃炎）になり、やがて胃粘膜萎縮（萎縮性胃炎）を併せ持つ状態になり、さらに胃粘膜萎縮が高度になると腸上皮化生が惹起されると考えられている。また、このヘリコバクター・ピロリの感染に基づく胃炎進行の過程と胃癌との関連についても盛んに議論がなされており、胃粘膜萎縮の程度が軽度の場合に比べ、中等度、高度になるほど胃癌発生の危険率は高くなり、腸上皮化生を認める場合には腸上皮化生を認めない場合よりも胃癌発生の危険率は高くなることが報告されるとともに、特に分化型胃癌に関してこの傾向が顕著であることも示唆されている（非特許文献１および２参照）。したがって、ヘリコバクター・ピロリへの感染は、胃炎発症の直接の原因であるのみならず、胃癌発生の危険因子の一つであると考えられている。現在、胃潰瘍ならびに十二指腸潰瘍と診断された場合に健康保険内でのヘリコバクター・ピロリの除菌治療が実施されるようになり、この除菌治療の前提または結果判定としてヘリコバクター・ピロリに対する感染の診断が行われている。ヘリコバクター・ピロリとの関連性が示唆されている胃潰瘍、十二指腸潰瘍ならびに胃癌等の疾病の予防、胃癌発症患者の治療を目的とした健康保険内での除菌治療は現状認められていないが、その必要性についても学会等で議論されている。

ヘリコバクター・ピロリへの感染を診断する方法としては、内視鏡検査と組織生検を必要とする侵襲的検査法と、これらを要さない非侵襲的方法とがあり、前者には、迅速ウレアーゼ試験（ＲＵＴ）、鏡検法、培養法が用いられ、後者には、尿素呼気試験（ＵＢＴ）、抗ヘリコバクター・ピロリ抗体測定、便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定が用いられている。

侵襲的検査法では、被験者の負担が大きいという点の他に、ヘリコバクター・ピロリが胃内に不均一に分布しており、また腸上皮化生に至った胃粘膜にはヘリコバクター・ピロリが生息できないため、偽陰性が生じやすいという問題がある。また、その一方で、非侵襲的検査法では、比較的簡便に実施できるものの、ＵＢＴは、感度、特異度が高いが、ウレアーゼ活性を阻害する作用のある薬剤が投与されている場合には偽陰性が生じやすいという問題があり、また、抗ヘリコバクター・ピロリ抗体測定では、感染初期には陰性となり、逆に除菌直後は陽性となることから、検査時期によっては正確な診断を行うことができないという問題がある。これに対し、便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定は、胃から消化管を経由して***される糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原を検出するもので、偽陰性が生じにくく、抗原性が便中の存在形態でも保たれていることから、感染状況の直接評価が可能という点で優れている（非特許文献３参照）。しかしながら、前記の検査法はいずれも上記の通り除菌療法を前提としてもしくは除菌の結果を判断するために感染の有無を診断することを目的として使用されるものであって、胃内ヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する必要性はなかったため、従来、胃内に存在する菌量自体の定量する方法については検討されてこなかった。

一方、胃炎の診断方法としては、従来から内視鏡検査およびペプシノーゲン法が用いられてきた。内視鏡検査は、炎症の程度および胃炎の種類ともに正確な診断が可能ではあるものの、被験者に対する肉体的負担が大きい上に費用の面でも負担が多いという点で、健康診断等の健常人が多く含まれる集団に対する胃炎の診断に用いるには不向きであり、また、ペプシノーゲン法は、血液中のペプシノーゲン濃度を測定するだけなので被験者の負担も少なく安価で簡便に実施できるものの、萎縮性胃炎の有無と程度を一定の基準値に基づいて判断する方法であり、胃粘膜萎縮に至っていない活動性の炎症（活動性胃炎）については評価することはできないという問題がそれぞれ存在する。

さらにまた、ペプシノーゲンＩ、ガストリンおよびヘリコバクター・ピロリ感染マーカーを検定することにより萎縮性胃炎を診断する方法等も提案されているが（特許文献１参照）、ヘリコバクター・ピロリ感染マーカーとしてヘリコバクター・ピロリ抗原を使用する場合については、具体的な実施例は記載されておらず、また診断のためのカットオフ値に関する検討は全くなされていない。さらに、萎縮性胃炎の程度、また萎縮を伴わない胃炎における炎症の程度を診断する方法についても、検討されていない。
したがって、胃炎の診断方法として、被験者の負担が少なく、簡便に実施することができ、かつ、胃炎の程度を詳細に細分化して診断できる方法の開発が求められていた。

そしてまた、胃癌の診断方法、胃癌に罹患している危険率あるいは将来胃癌に罹患する危険率の診断方法としては、Ｘ線検査、ペプシノーゲン法、内視鏡検査が実際の臨床現場では用いられている。Ｘ線検査は、早期胃癌の発見に活用されているが、見逃し例が多く、また将来胃癌に罹患する危険率の診断には用いることができないという問題があり、ペプシノーゲン法等の他の診断方法も併用してより正確な診断を行う必要がある。ペプシノーゲン法は、簡便であるが、見逃し例が一定の割合で存在する上に、Ｘ線検査と併用した場合にも発見できない胃癌症例もあり、また、胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率の程度を細分化することはできず、該当する癌の種類（未分化型癌もしくは分化型癌等）の判断をすることができない。さらに、内視鏡検査は、胃癌のみならず胃癌に罹患する危険率が高い胃粘膜の状態も正確に診断できるが、被験者の負担が大きく費用も高いことから、健康診断等の健常人が多く含まれる集団に対する１次スクリーニングには不適であるという欠点がある（非特許文献４参照）。

また、上記のペプシノーゲンＩ、ガストリンおよびヘリコバクター・ピロリ感染マーカーを検定することにより萎縮性胃炎を診断する方法において、癌の危険性の診断についても言及されているが（特許文献１参照）、ヘリコバクター・ピロリ感染マーカーとしてヘリコバクター・ピロリ抗原を使用する場合の具体的な実施例は記載されておらず、該当する癌の種類（未分化型癌もしくは分化型癌等）の判断については何ら検討されていない。
したがって、胃癌の一次スクリーニング法として、被験者の負担が少なく簡便に実施することができ、かつ、見逃し例の割合をできるだけ低くすることができ、さらに胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率の診断方法としても危険率の程度と危険率の高い胃癌の種類を詳細に細分化して診断できる方法の開発が求められていた。

柳岡公彦ら、消化器内視鏡、２００６年、１８：４６３−４６８ 菅野健太郎、榊信広著「Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ発癌のエビデンス」、医学書院、２００４年１１月１日、ｐ６−１３およびｐ２０−２９ 加藤知惠子ら、Helicobacter Research、２００６年、１０：４０４−４１０ 三木一正編「ペプシノゲン法ハンドブック」、メディカルレビュー社、２００１年３月、ｐ１０−２７およびｐ５０−５２ 特表２００４−５１７３２２号公報

したがって、本発明の課題は、被験者の負担が少なく簡便に実施することができ、かつ、見逃し例の割合が極めて少ない、胃粘膜の状態を病態およびその程度とともに胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率についても詳細に細分化することが可能な、胃粘膜の状態を判断するための方法を提供することにある。また、各病態の判断に関連して胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量するための方法をも提供することにある。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねる中で、多数の対象についてＵＢＴ（尿素呼気試験）、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原の測定、血清ペプシノーゲンの測定を行い、それぞれの測定結果とその相関性を解析したところ、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量的に評価することができることを見出し、かかる知見に基づいてさらに研究を進めた結果、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、対象の胃粘膜の状態を簡便かつ正確に判断することが可能であることを発見して本発明を完成させた。

すなわち、本発明は、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する方法に関する。
また、本発明は、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する、前記方法に関する。
本発明は、さらに、対象の血液中におけるペプシノーゲンＩＩの濃度に対するペプシノーゲンＩの濃度の比を指標とする、前記の方法に関する。
本発明はまた、対象の血液中におけるペプシノーゲンＩＩの濃度に対するペプシノーゲンＩの濃度の比が、３以下であることまたは３を越えることを指標とする、前記方法に関する。

さらにまた、本発明は、胃粘膜の状態が、軽度、中等度もしくは高度の炎症から選択される少なくとも１つである、前記の方法に関する。
また、本発明は、胃粘膜の状態が、軽度、中等度もしくは高度の萎縮から選択される少なくとも１つである、前記の方法に関する。

本発明はさらに、胃粘膜の状態が、現在、胃癌に罹患している危険率の高い状態である、前記の方法に関する。
また、本発明は、胃癌が、未分化型胃癌または分化型胃癌である、前記方法に関する。
さらに本発明は、胃粘膜の状態が、将来、胃癌に罹患する危険率の高い状態である、前記の方法に関する。
本発明はまた、胃癌が、未分化型胃癌または分化型胃癌である、前記方法に関する。
さらにまた、本発明は、ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値が、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法により測定されたものである、前記の方法に関する。
そしてまた、本発明は、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体がモノクローナル抗体である、前記方法に関する。

本発明は、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する方法に関する。
本発明はさらに、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する、前記方法に関する。
また本発明は、ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値が、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法により測定されたものである、前記の方法に関する。
そしてまた、本発明は、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体がモノクローナル抗体である、前記の方法に関する。
なお、本発明の方法は、糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の測定値を指標として採用したことにより、ヘリコバクター・ピロリの感染および増殖に起因して変化する胃粘膜の状況を時間差なくモニターすることを可能にし、またそのことにより胃粘膜の状況を簡便かつ正確に判断することを可能にしたものである。

本発明によれば、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原を定量的に測定するだけで、対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの総菌量を定量的に評価することができる。
そしてまた、本発明によれば、対象の胃内におけるヘリコバクター・ピロリの総菌量を定量的に反映する糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、対象の胃粘膜の状態を極めて正確に判断することができる。例えば、胃粘膜の炎症については、発症直後の極めて軽微な炎症から進展した高度の炎症まで、詳細に分類することができ、また胃粘膜の萎縮および炎症の程度という観点から細分化した判断を行うことができる。胃癌の一次スクリーニングについては偽陰性率や見逃し率が極めて低いことから信頼性の高い判断を行うことができるとともに、胃癌に罹患している危険率や、未発症者については将来罹患する危険率の程度とその癌の種類についても判断することが可能である。

したがって、本発明によれば、炎症、萎縮および胃癌等の胃粘膜の異常を有する対象を早期の段階で発見することができ、また、対象の糞便中のピロリ菌抗原を測定するだけで、前記の判断を行うことができるため、内視鏡検査や採血を必ずしも必要としないことから、対象の負担を従来に比べ大きく軽減することができ、本発明の方法は、健康診断等の健常人が多く含まれる集団に対する一次スクリーニング方法として特に優れたものである。

また、本発明によれば、萎縮を有さない対象についても、従来のペプシノーゲン法によっては見出すことができなかった炎症の程度や進行の程度を併せて正確に判断することができるため、活動性胃炎を発生母地とする未分化型胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率についても判断することが可能である。

そして、本発明において、対象の糞便中に存在するピロリ菌抗原の定量的測定値のみでなく、対象の血液中におけるペプシノーゲンＩＩの濃度に対するペプシノーゲンＩの濃度の比をさらに指標として用いる場合には、萎縮性胃炎における萎縮の程度をも細分化して判断することが可能であることから、ピロリ菌感染に起因する慢性胃炎の自然経過に伴って進行する胃粘膜の萎縮と相関した胃粘膜の老化についても、その程度を詳細に分類して判断することが可能である。したがって、萎縮性胃炎の程度に応じて発生率が高くなると考えられている、胃癌に罹患している危険率や将来罹患する危険率の高い状態についても細分化して判断することができ、胃癌に罹患している危険率の高い対象にはさらに内視鏡検査を行って胃癌の確定診断を実施し、胃癌未発症であるが将来罹患する危険率の高い者について除菌治療等の予防や定期的な管理健診のなどの対策を検討するために活用することができる。

また、本発明の方法によれば、コストがかからず、煩雑な手順を踏むことなく、極めて短時間に、胃粘膜の状態を分析することができる。例えば、本発明の方法に係るプログラムを作製して使用する場合、コンピュータ等に、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみ、あるいはさらに対象の血液中におけるペプシノーゲンＩＩの濃度に対するペプシノーゲンＩの濃度の比等を入力するだけで、分析する対象の胃粘膜の状態を自動的にコンピュータ等のディスプレイ上に出力することができる。

さらに、本発明によれば、対象の胃粘膜の状態を、胃粘膜の状態別カテゴリーに区画された直線上あるいは平面上に点などで表示することができるため、対象の現在の位置と周辺の区画の病態から、現在の状態および将来のリスクを視覚的に確認することができる。また、経時的に本発明の方法により胃粘膜の状態が判断されている対象では、点の経時変化をベクトルで示すこともできるため、以前からの改善の程度や進行の程度、将来のリスクなどを簡単に把握することができる。

すなわち、本発明は、対象に経済的、時間的、身体的負担をかけることなく前記対象の胃粘膜の状態を極めて正確に判断することができ、対象の炎症や萎縮の程度、また胃癌に罹患している危険率や将来罹患する危険率の程度を詳細に分類して判断することができるものであって、かかる効果を有する胃粘膜の状態を判断する方法は、本発明により初めて実現されたものである。

ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団を、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値とを軸とした散布図において、ＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の集団とＰＧＩ／ＰＧＩＩが３を超える集団とに分けて示す図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団を、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値とを軸とした散布図において、両者の間に相関性がある集団と両者の間に相関性がない集団とに分けて示す図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団について便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを軸とした散布図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団を、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを軸とした散布図において、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値との間に相関性がある集団（既存集団）と、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値との間に相関性がない集団（新規集団）とに分けて示す図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団について便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩとを軸とした散布図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団について便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩＩとを軸とした散布図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団についてＵＢＴ値とＰＧＩとを軸とした散布図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団についてＵＢＴ値とＰＧＩＩとを軸とした散布図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団についてＵＢＴ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを軸とした散布図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団を、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを軸とした散布図において、胃粘膜の状態に関してカテゴリーＩ〜ＩＶならびに便中ピロリ菌抗原ＯＤ値０．１未満をＰＧＩ／ＰＧＩＩが３を基準に分けて示す図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団を、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを軸とした散布図において、胃粘膜の状態に関してカテゴリーＩ〜ＩＶの４集団とに分け、胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率とその癌の種類を示す図である。 ヘリコバクター・ピロリ陽性健常者の集団を、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを軸とした散布図において、胃粘膜の状態に関してカテゴリーＩ〜ＩＶの４集団とに分け、胃癌未発症者に対して将来胃癌を罹患する危険率に基づき予防・治療対策の例を示す図である。 便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを指標として分類したカテゴリーＩ〜ＩＶとＰＧＩ値との関係を示す図である。 便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを指標として分類したカテゴリーＩ〜ＩＶとＰＧＩＩ値との関係を示す図である。 ピロリ菌感染性胃炎の推移の典型例を示す図である。

本発明によれば、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリ菌量を定量する方法および前記対象の胃粘膜の状態を判断する方法が提供される。

本発明において、「対象」は、任意の生物個体を意味し、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトの個体である。本発明において、対象は健常であっても、何らかの疾患に罹患していてもよい。

本発明の方法において指標として用いられる、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値は、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の量に応じて、連続的な数値として得られる測定法により得られたものであればどのような測定法を用いて得られたものでもよく、例えば、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した、酵素免疫測定法（enzyme immunoassay、ＥＩＡ）、放射線免疫測定法（radio immunoassay、ＲＩＡ）あるいは蛍光免疫測定法（fluorescence immunoassay）などの既知の方法により得られた測定値を用いることができるが、これらのなかでも操作の簡便性という観点から酵素免疫測定法を用いて測定された測定値であることが特に好ましい。

本発明の方法において用いられるヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体（以下、「抗ヘリコバクター・ピロリ抗原抗体」とも表記する）としては、ポリクローナル抗体を用いてもよく、またモノクローナル抗体を用いてもよいが、抗原に対する特異性と結果の再現性という観点からモノクローナル抗体を用いることが好ましい。ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体は、例えば、ヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ、熱ショックタンパク質もしくはカタラーゼ、また、ヘリコバクター・ピロリの生菌、ヘリコバクター・ピロリの死菌もしくはその断片などが抗原となり得る状態で糞便中に存在することから、これらを抗原として、既知の抗体作製法により作製することが可能である。

ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法は、例えば以下のように行うことができる；
まず、マイクロプレートのウェルやプラスチックチューブなどの固相にあらかじめ抗ヘリコバクター・ピロリ抗原抗体を結合させておき、これにサンプル（対象の糞便の希釈液）を添加して、サンプル中のヘリコバクター・ピロリ抗原を抗原抗体反応により固相に結合させる。次いで、夾雑物を洗い流した後、酵素標識した第二の抗体（抗ヘリコバクター・ピロリ抗原抗体）を添加して再度抗原抗体反応により「固相化抗体／ヘリコバクター・ピロリ抗原 ／酵素標識抗体」のサンドイッチ構造を構築させる。ここで遊離の酵素標識抗体を洗い流し、発色基質を添加して、サンドイッチ構造の量（すなわち、サンプル中のヘリコバクター・ピロリ抗原の量）に比例した発色反応を起こさせる。その後、生成した発色物質の量を吸光度計等で読み取り、得られた吸光度などを測定値とする。

上記の抗ヘリコバクター・ピロリ抗原抗体を標識するために用いられる酵素としては、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどを用いることができる。抗体の酵素標識は、マレイミド法等の既知の方法により適宜行うことができる。さらに、上記の発色基質として、上記の酵素としてペルオキシダーゼを用いる場合には、３，３’−５，５’−テトラメチルベンチジン、２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン）−６−スルホン酸（ＡＢＴＳ）、ルミノール、もしくはｏ−フェニレンジアミン等、上記の酵素としてアルカリフホスファターゼを用いる場合には、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、メチルウンベリフェリルホスフェート、もしくは３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’−ホスホリルオキシ）フェニル−１，２−ジオキセタン等、上記の酵素としてβ−ガラクトシダーゼを用いる場合には、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド、もしくはメチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド等を用いることができる。

糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原を酵素免疫測定法により測定するためのキットとしては、「テストメイト ピロリ抗原 ＥＩＡ」（わかもと製薬株式会社／協和メデックス株式会社）、「メリディアンＨｐＳＡ ＥＬＩＳＡ」（Meridian Bioscience Inc.／テイエフビー）などが市販されており、いずれも本発明におけるヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定に用いることができるが、「テストメイト ピロリ抗原 ＥＩＡ」は、抗ヘリコバクター・ピロリ抗原抗体としてモノクローナル抗体を用いているため、本発明において特に好ましく用いられる。

本発明おいて「対象の胃粘膜の状態を判断する」とは、対象の胃粘膜の状態が、正常であるか、炎症を呈しているか、あるいは慢性胃炎（活動性胃炎、萎縮性胃炎）、胃癌に罹患している危険率や将来罹患する危険率が高い状態等に該当することを判断することを意味し、炎症を呈している場合については、さらに、炎症の程度を、軽度、中等度、高度に分類して判断することができ、慢性胃炎の種類として、活動性胃炎もしくは萎縮性胃炎に該当するか否か、そして活動性胃炎もしくは萎縮性胃炎に分類された場合には炎症と萎縮に分けてその程度（進行度）を軽度、中等度、高度に細分化して判断することができる。胃癌については、未分化型胃癌または分化型胃癌に罹患している危険率が高いか、また、罹患していない場合には、将来、それぞれの癌に罹患する危険率を判断することが可能である。さらに、これらをより細分化した分類を設定して、それに合わせた判断をすることもできる。

本発明において、胃粘膜の炎症とは、ヘリコバクター・ピロリに感染した胃粘膜に全例で認められる炎症であって、好中球浸潤を有するものをいう。
また、本発明において、慢性胃炎とは、加齢に応じて発症頻度が高い慢性的な胃炎をいい、従来は老化現象と考えられていたが、近年ヘリコバクター・ピロリにより発生することが分かってきたもので、活動性胃炎、萎縮性胃炎などに区別される。

さらに、活動性胃炎とは、ヘリコバクター・ピロリの持続的な感染により炎症が活発化した慢性胃炎を意味し、萎縮性胃炎とは、ヘリコバクター・ピロリの持続的感染により胃粘膜の萎縮を生じた慢性胃炎を意味する。ここで、胃粘膜の萎縮とは、胃酸を分泌する胃固有腺が減少した状態を指し、ヘリコバクター・ピロリによる胃粘膜の炎症を経て萎縮を生じ、萎縮は時間経過により進展していくことが知られている。
また、腸上皮化生とは、胃粘膜に特有の組織構造、すなわち胃酸を分泌する胃固有腺が失われて腸粘膜に類似した状態に変化した粘膜をいう。

また、本発明において、分化型胃癌とは、元の胃粘膜に近い構造を持つ胃癌で、症状が進行すると塊のように大きくなっていき、肝臓に転移しやすいという特徴を持つ癌を意味する。高齢者に多い癌で、萎縮性胃炎を発生母地としており、予後の良好な癌と言われているものである。未分化型胃癌とは、元の胃粘膜とはかけ離れた構造を持つ胃癌で、はっきりとした境界を持たず、癌細胞が分散した状態で大きくなっていき、リンパ節への転移が多いという特徴を持つ癌をいう。若年者にも見られる癌で、活動性胃炎を発生母地とし、予後の悪い癌と言われている。

胃癌に罹患する危険率は、現在は胃癌に罹患していないが、対象が現在該当している胃粘膜の状態が将来にわたって維持された場合に、該対象が胃癌を罹患する危険率が、他のより良好な胃粘膜の状態にある場合と比べて統計的に高いかあるいは低いかということに基づいて判断される。したがって、腸上皮化生を有する対象は、これを有さない対象よりも胃癌を罹患する危険率は高く、胃粘膜萎縮を有する対象は、その萎縮の程度が大きくなるほど胃癌を罹患する危険率は高く、高度な炎症を有する対象は、これを有さない対象よりも胃癌を罹患する危険率は高いことが知られているから、本発明の方法により、胃炎の炎症の程度、活動性胃炎か否か、萎縮性胃炎か否か、またこれらの胃炎の程度、腸上皮化生を有するか否かを判断することにより、前記の危険率と病態との関連に基づき、各対象の胃癌に罹患する危険率を判断することができる。

以下に、本発明の具体的態様について述べる。
対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗体の定量的測定を行うときの手順を、例えば、上記の「テストメイト ピロリ抗原 ＥＩＡ」を用いた場合について簡単に述べる。
各対象の採便容器から、便希釈液１滴（５０μｌ）を、抗ヘリコバクター・ピロリnative カタラーゼマウスモノクローナル抗体（２１Ｇ２）を固相化した９６穴マイクロプレートに加え、さらに、ペルオキシダーゼ標識抗ヘリコバクター・ピロリnative カタラーゼマウスモノクローナル抗体（２１Ｇ２）液５０μｌを加えて１時間反応させる。次いで、各ウェルを洗浄液により５回洗浄して未反応物を除去し、基質液（過酸化水素およびテトラメチルベンチジン）１００μｌを加えて１０分間反応させた後、反応停止液（０．５ｍｏｌ／ｌ硫酸）を加えて反応を停止させ、マイクロプレートリーダーで吸光度（４５０ｎｍ／６３０ｎｍ）を測定する。

対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する場合、上記キットによる測定で得られたＯＤ値（以下、単に「ＯＤ値」とも表記する）が低いほど炎症が軽度であり、ＯＤ値が高いほど炎症が高度になる傾向がある。人種、年齢、性別など対象とする母集団の種類により若干の違いはあり得るが、例えば、ＯＤ値が、０以上０．１未満である場合を正常な胃粘膜、０．１以上１．５未満である場合を軽度の活動性胃炎、１．５以上である場合を中等度から高度の活動性胃炎と判断することができる。また、ＯＤ値が高いほど炎症が高度になるとともに活動性胃炎の進展の程度も高度になる。

また、胃癌に関しては、例えば、ＯＤ値が１．５以上である場合に、胃粘膜の状態が、胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率の高い状態であると判断することができる。
上記の胃炎の分類にしたがえば、各胃炎の状態と胃癌との関連を合わせて考慮すると、例えば、ＯＤ値が、１．５以上である場合を未分化型胃癌に罹患している危険率、未発症者については将来罹患する危険率が高い状態にあると判断することができる。

さらにまた、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値と、対象の血液中のペプシノーゲンＩＩ（ＰＧＩＩ）に対するペプシノーゲンＩ（ＰＧＩ）の濃度の比（以下、「ＰＧＩ／ＰＧＩＩ」と表記する）とを指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断することができる。ＰＧＩ／ＰＧＩＩが、所定の値以下、例えば３以下の場合を萎縮性胃炎とし、そして萎縮性胃炎においては、ＯＤ値が高いほど炎症が強くＰＧＩ／ＰＧＩＩが低くなるにつれて萎縮性胃炎の程度（進行の程度）も高度になる。さらにＯＤ値が低くＰＧＩ／ＰＧＩＩも低いほど炎症が弱くなるとともに萎縮性胃炎の程度（進行の程度）が高度になり腸上皮化性の可能性が高いと判断することができる。

また、ＰＧＩ／ＰＧＩＩが、所定の値、例えば３を超えている場合は、胃粘膜の萎縮は生じていないため、ＯＤ値が高いほど炎症が高度になるとともに活動性胃炎の広がりの程度も高度になり、ＯＤ値が低いほど炎症が軽度になり正常に近づくと判断することができる。

さらに細かく分類して、ＯＤ値が０以上０．１未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３を越える場合を正常な胃粘膜と判断し、ＯＤ値が０．１以上１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３を越える場合を軽度の炎症、ＯＤ値が１．５以上かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３を越える場合を中等度から高度の炎症と判断することができる。萎縮をともなうＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の群については、ＯＤ値が１．５以上かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下であれば高度の炎症を伴う萎縮性胃炎、さらにＯＤ値が１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下であれば軽度から中等度の炎症を伴う萎縮性胃炎と判断することができる。ＯＤ値が１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下については、ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩが低いほど腸上皮化生を有する可能性の高い、高度の萎縮と判断することができる。

また、胃粘膜の状態が癌である場合には上記の胃炎の分類にしたがえば、各胃炎の状態と癌との関連を合わせて考慮すると、例えば、ＯＤ値が１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３を越える場合は胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率が極めて低く、一方、ＯＤ値が１．５以上もしくはＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の場合は胃癌に罹患している危険率が高く、胃癌に罹患していなくとも将来罹患する危険率が高い状態にあると判断することができる。さらに細分化して、ＯＤ値が１．５以上かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３を越える場合、ＯＤ値が１．５以上かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の場合、ＯＤ値が１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の場合の順に胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率が高まり、特にＯＤ値が１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の場合はハイリスクと判断することができる。また、その際の胃癌のタイプはＯＤ値が１．５以上の場合には未分化型胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率が高い状態にあると判断することができ、さらに、ＯＤ値が１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の場合には分化型胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率が高い状態にあると判断することができる。

本発明においては、上記のとおり、典型的には、「ＰＧＩ／ＰＧＩＩについて３を基準値とすること」および「ＯＤ値について１．５を基準とすること」によって、対象の胃粘膜の状態を判断することができるが、前記のとおり、人種、年齢、性別など対象の母集団の種類、あるいはＰＧ法による見逃し症例のスクリーニングなど胃粘膜状態の判断の目的に応じて、ＰＧＩ／ＰＧＩＩについて２〜３の所定の値を基準値とすることおよびＯＤ値について１．５〜２．０の所定の値を基準とすることができる。なお、具体的な例については、後述の実施例２において詳細に説明する。
さらに、ＰＧＩ／ＰＧＩＩのほか、年齢や他の検査値（血液中のＰＧＩ濃度、血液中のＰＧＩＩ濃度、血液中の抗ＣａｇＡ抗体の濃度）、対象の自覚症状（上部腹痛、胃もたれ、胸焼け、悪心・嘔気、腹部膨満感など）の有無等を指標として加えてもよく、これらの指標を用いてさらに詳細に分類することもできる。

なお、上記ＯＤ値の例は、いずれも「テストメイト ピロリ抗原 ＥＩＡ」を用いた場合の例であるが、「メリディアンＨｐＳＡ ＥＬＩＳＡ」を用いてヘリコバクター・ピロリの定量的測定を行った場合にも、同様の数値範囲で判断することが可能である。また、前記の２つのキットを用いることなく、ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定を行った場合には、例えば、酵素免疫測定法により吸光度を測定値として用いる場合には、定量的に検出可能な下限値〜上限値の範囲を、前記の「テストメイト ピロリ抗原 ＥＩＡ」を用いた場合の吸光度の下限値〜上限値の範囲にそれぞれ対応させる数値補正を行うことにより、適宜上記と同様の数値範囲を設定することが可能であり、さらに、放射線免疫測定法あるいは蛍光免疫測定法を用いた場合も、定量的に検出可能な下限測定値〜上限測定値の範囲を上述の数値範囲に対応させることにより、上記と同様の数値範囲を設定することが可能である。

そしてまた、本発明の方法によれば、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値から、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量的に評価することができ、例えば、上記のキット「テストメイト ピロリ抗原 ＥＩＡ」を用いた場合には、測定値である吸光度が高いほど、胃内ピロリ菌量が多いと評価することができる。前記キットを用いた場合のＯＤ値によれば、ＯＤ値が例えば、０以上０．１未満であれば胃内にピロリ菌は存在しないと判断し、０．１以上１．５未満であれば、胃内ピロリ菌量は少ないと判断し、１．５以上では胃内ピロリ菌量が多いと判断することもできる。また、このような分類をさらに細分化して判断することも可能である。本発明の方法により、予防対策や治療を施した場合における対象の菌量の変動を直接的にモニターすることができる。

本発明を、以下の実施例を用いてより具体的に説明するが、本発明の範囲は、これらの実施例に限定されるものではない。
＜実施例１＞
ヘリコバクター・ピロリ陽性の健常者１０４名（男性３６名、女性６８名）を対象として、ＵＢＴ（尿素呼気試験）、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定、血液中ペプシノーゲン（ＰＧＩおよびＰＧＩＩ）濃度、血液中抗ＣａｇＡ抗体濃度の測定を行った。
測定方法は、ＵＢＴ（尿素呼気試験）はユービット錠（大塚製薬）を用いて行い、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定は「テストメイト ピロリ抗原 ＥＩＡ」を用いて行った。なお、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定によりＯＤ値０．１以上を陽性と判定した。

対象となった１０４名の年代別人数は以下の表の通りである。

（１）糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値とＵＢＴ値との関係の検討
まず、上記１０４名の集団に関し、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定により得られた定量的測定値（以下、「便中ピロリ菌抗原ＯＤ値」と記載する）とＵＢＴ値との関係について検討するため、胃粘膜萎縮が存在しないとされるＰＧＩ／ＰＧＩＩ＞３の集団とおよび胃粘膜萎縮が存在するとされるＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団とに分けて散布図を作成し（図１）、さらに、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値との間の相関係数を、前記のＰＧＩ／ＰＧＩＩ＞３の集団およびＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団に分けて算出した。その結果を表２に示す。

表２より、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ＞３の集団では前記便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値との間に有意な相関性が認められるが、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団では相関性が認められないことが示された。

従来から胃粘膜萎縮により胃内のピロリ菌量は減少すると考えられており、また、実際、図１においても、胃粘膜萎縮があるＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団ではＵＢＴ値は低値を示す傾向がみられるが、その一方で、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団において、ＵＢＴ値は低いにもかかわらず便中ピロリ菌抗原ＯＤ値の高い集団が存在することを見出した。この集団は、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値との間に相関性が認められない集団であって、本発明により初めて発見された集団であるということができ、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団のうち、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値１．５以上であることを基準として分類することができた。

さらに、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値との間に、相関性が認められる集団と、相関性が認められない集団とを、散布図上で分けて示したところ（図２）、便中ピロリ菌抗原測定によるピロリ菌への感染診断結果とＵＢＴによるピロリ菌への感染診断結果が一致するという従来の知見からはその存在が予測できない、新規集団（便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値との間に相関性のない集団）を発見することができた。

（２）便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとの関係の検討
次に、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとの関係について検討するため、上記１０４名の集団の散布図を作成したところ（図３）、胃粘膜萎縮を有する集団（ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３）において、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が高い集団が含まれることが見出された。よって、胃粘膜萎縮により胃内のピロリ菌量は減少するという従来の知見に反して、胃粘膜萎縮を呈していても、胃内のピロリ菌量が多い集団が存在することが示唆された。
また、図３において、上記（１）の図２と同様に、相関性が認められる集団と、相関性が認められない集団とを、散布図上で分けて示したところ（図４）、上記（１）で見出された「便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＵＢＴ値との間に相関性のない」新規集団は、胃粘膜萎縮を有する集団（ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３）のうち、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値１．５以上である集団に特に顕著に認められることが明らかになった。

（３）便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ値またはＰＧＩＩ値との関係の検討
さらに、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ値またはＰＧＩＩ値との関係を検討するため、それぞれ上記１０４名の集団の散布図を作成し（図５および６）、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ値、または便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩＩ値との相関係数を算出した（表３および４）。

ペプシノーゲン（ＰＧ）はペプシンの前駆体であり、本来は、胃の内腔に分泌され、ペプシンに変化して蛋白分解酵素として働くものであるが、ＰＧの１％程度が血液中に認められる。ＰＧは免疫学的にＰＧＩとＰＧＩＩに大別され、それぞれの胃内の分布が異なっている。ＰＧＩは胃底腺領域（主細胞および副細胞）に存在し、ＰＧＩＩはそのほかにも噴門腺、幽門腺、Brunner腺にも広く存在する。この両者の分布の違いにより、胃粘膜の状態を反映し血液中の濃度も変化することが知られており、特に、ＰＧＩ／ＰＧＩＩが萎縮の進展に相関して低値となることが示唆されているが、ＰＧＩ値ならびにＰＧＩＩ値の単独においても胃粘膜の炎症や萎縮を反映することが知られている。ＰＧＩ値が７０を越える場合ならびにＰＧＩＩ値が２０を越える場合のようにＰＧＩ値およびＰＧＩＩ値が高値である場合は、炎症が高度であると説明できる。

表３から理解される通り、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ値との間には有意な相関性は認められなかった。一方、表４から理解される通り、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩＩ値との間には有意な相関性が認められることを見出した。ＰＧＩＩ値は、胃粘膜の炎症の程度と正の相関を示すことが知られていることから、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値は胃粘膜の炎症の程度を表す指標となることを発見するとともに、さらに、胃粘膜の炎症の程度は、胃内のピロリ菌量の増加に伴って高度になることが知られていることから、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値は胃内のピロリ菌量を表す指標となることをも発見した。

（４）ＵＢＴ値とＰＧＩ値またはＰＧＩＩ値との関係の検討
上記（４）と同様に、ＵＢＴ値とＰＧＩ値またはＰＧＩＩ値との関係を検討するため、それぞれ上記１０４名の集団の散布図を作成し（図７および８）、相関係数を算出したが、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値の場合とは異なり、ＵＢＴ値とＰＧＩ値、また、ＵＢＴ値とＰＧＩＩ値との間にいずれも有意な相関は認められなかった。

（５）ＵＢＴ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとの関係の検討
次に、ＵＢＴ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとの関係について検討するため、上記１０４名の集団の散布図を作成したところ（図９）、胃粘膜萎縮を有する集団（ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３）では、ＰＧＩ／ＰＧＩＩの低下にしたがって、ＵＢＴ値が低下することが見出された。これは、ＵＢＴ値がヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ活性を検出するものであることから、胃粘膜萎縮が進行してＰＧＩ／ＰＧＩＩ値が低下するのに伴って、胃酸分泌が減少して胃内ｐＨが上昇し、ヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ活性が低下したためと考えられる。
したがって、ＵＢＴ値は、胃粘膜萎縮を呈する場合（ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３）には、胃内に存在するピロリ菌量の指標とはならないことが理解される。

以上の結果より、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値は、胃粘膜の炎症の程度を表す指標となること、また、胃内に存在するピロリ菌量を定量的に表す指標となることが示唆され、特に、胃粘膜萎縮を有する場合（ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３）には、胃内に存在するピロリ菌量を定量的に表す指標はＵＢＴ値ではなく、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値であることが見出された。さらに、従来は胃粘膜萎縮に伴って胃内ピロリ菌量が減少すると考えられていたが、胃粘膜萎縮を有する集団（ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３）のうち、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が高い（便中ピロリ菌抗原ＯＤ値≧１．５）新規集団の発見により、胃粘膜萎縮を有していても胃内のピロリ菌量が多い集団が存在することが初めて示唆された。

（６）便中ピロリ菌抗原ＯＤ値による分類の臨床的意義の検討
上記の通り、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値に関して１．５を基準として集団を統計学的に分類し得ることを見出したことから、本実施例において対象となったヘリコバクター・ピロリ陽性の健常者１０４名を便中ピロリ菌抗原ＯＤ値に関して１．５以上の集団と１．５未満の集団に分け、そのＰＧＩ値およびＰＧＩＩ値の範囲の分布から、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が具体的な胃粘膜の状態にどのように対応しているかについて検討した。ＰＧＩ値については、ＰＧＩ値≦３０、３０＜ＰＧＩ値≦５０、５０＜ＰＧＩ値≦７０、７０＜ＰＧＩ値の４つに分類し、ＰＧＩＩ値については、ＰＧＩＩ値≦１０、１０＜ＰＧＩＩ値≦２０、２０＜ＰＧＩＩ値の３つに分類した。結果を以下の表５に示す。

表５より、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上の集団は、７０＜ＰＧＩ値、２０＜ＰＧＩＩ値のように、ＰＧＩ値およびＰＧＩＩ値ともに高値である対象の占める割合が高いことから、胃粘膜の炎症の程度が高い集団であることが理解される。一方、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５未満の集団は、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上の集団と比較して、ＰＧＩ値、ＰＧＩＩ値ともにより低値である対象の占める割合が高く、胃粘膜の炎症の程度が低い集団であることが理解される。
さらに、表６より、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５未満の集団および１．５以上の集団の２つの集団について、ＰＧＩ値ならびにＰＧＩＩ値を比較したところ、ＰＧＩＩ値に関して統計的に有意な差を確認することができた。
したがって、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値１．５を基準として分類することが臨床的にも意義のあるものであることが示された。
なお、表６においては、ＯＤ値の基準値を２．０にした場合についても示しているが、１．５の場合と同様の結果が得られた。すなわち、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が２．０未満の集団および２．０以上の集団の２つの集団について、ＰＧＩ値ならびにＰＧＩＩ値を比較したところ、ＰＧＩＩ値に関して統計的に有意な差を確認することができた。

（７）便中ヘリコバクター・ピロリ抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを指標とした胃粘膜の状態の分類
便中ピロリ菌抗原ＯＤ値については１．５、また、ＰＧＩ／ＰＧＩＩについては萎縮の有無の指標となる３を基準として、本実施例において対象となったヘリコバクター・ピロリ陽性の健常者１０４名をカテゴリーＩ（便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が０．１以上１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以上）、カテゴリーＩＩ（便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３未満）、カテゴリーＩＩＩ（便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下）およびカテゴリーＩＶ（便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が０．１以上１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下）の４つの集団に分類した（図１０）。

カテゴリーＩは、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が０．１以上１．５未満でありかつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３より大きい集団であり、胃粘膜萎縮を伴わず、軽度の炎症を有する軽症の胃炎の集団であると考えられる。
カテゴリーＩＩは、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３より大きい集団であり、胃粘膜萎縮を伴わず、中等度〜高度の炎症を有する活動性胃炎の集団であると考えられる。カテゴリーＩＩ内では、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が上昇するほど、活動性胃炎の程度が進行している（高度になる）とみなされる。

カテゴリーＩＩＩは、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の集団であり、高度の活動性炎症を併せもつ萎縮性胃炎の集団であると考えられる。カテゴリーＩＩＩ内では、ＯＤ値が高いほど炎症が強くＰＧＩ／ＰＧＩＩが低くなるにつれて萎縮性胃炎の程度は進行している（高度になる）とみなされる。

カテゴリーＩＶは、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の集団であり、軽度から中等度の炎症を伴う萎縮性胃炎の集団であると考えられる。カテゴリーＩＶ内では、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩが低いほど腸上皮化生を有する可能性が高くなり、慢性化が最も進んだ萎縮性胃炎に進行している（高度になる）とみなされる。
なお、胃粘膜の状態が健常であると分類されるには、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が０．１未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３を越える必要がある。

ヘリコバクター・ピロリに感染した場合は、カテゴリーＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、さらにＯＤ値が０．１未満かつＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下の集団の順に、時間の経過とともに胃粘膜の状態が推移し、すなわち胃粘膜の老化が進行していくと考えられる。
さらに、カテゴリーＩ〜ＩＶに関して、それぞれ、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値、ＰＧＩ値、ＰＧＩＩ値の平均値を以下の表７に示す。

さらに、上記のカテゴリーＩ〜ＩＶの分類と胃癌に罹患している危険率や将来罹患する危険率の程度に関して述べる。上記の分類にしたがって、各胃炎の状態と癌との関連を合わせて考慮すると、ＯＤ値＜０．１かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ＞３の集団ならびにカテゴリーＩは胃癌に罹患している危険率や将来罹患する危険率が極めて低い状態にあると判断することができる。カテゴリーＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶならびにＯＤ値＜０．１かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団は胃癌に罹患している危険性があり、胃癌が発生していない場合でも将来罹患する危険率が高い状態にあると判断することができる。カテゴリーＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶならびにＯＤ値＜０．１かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団の順に胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率が高まり、特にカテゴリーＩＶならびにＯＤ値＜０．１かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団はハイリスクと判断することができる。また、胃癌のタイプはカテゴリーＩＩ、ＩＩＩは未分化型胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率が高い状態にあると判断することができ、さらに、ＩＶならびにＯＤ値＜０．１かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３の集団は分化型胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率が高い状態にあると判断することができる。したがって、胃癌の一次スクリーニングにおいて、図１１に示すリスク群、特にハイリスク群に対して内視鏡検査による確定診断を行うことにより効率的に胃癌の早期発見につなげることが可能となる。また、胃癌に罹患していない者に対しても、図１２に示すように、例えば、カテゴリーＩＩおよびＩＩＩに含まれる対象には、積極的な予防や定期的な管理検診の受診を指導したり、カテゴリーＩＶおよびＯＤ値＜０．１かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦３に含まれる対象には、定期的な管理検診の受診を徹底するとともに、除菌治療の実施を行うなどの具体的対策を講じることが可能である。

また、便中ヘリコバクター・ピロリ抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩとを指標とした胃粘膜の状態の上記各分類（カテゴリーＩ〜ＩＶ）に関して、ＰＧＩ値またはＰＧＩＩ値との関係を検討した（図１３および１４）。
表８に示すように、ＰＧＩ／ＰＧＩＩが３以下で萎縮性胃炎と判断される集団を便中ピロリ菌抗原ＯＤ値１．５で分類したカテゴリーＩＩＩとカテゴリーＩＶを比較すると、カテゴリーＩＩＩのＰＧＩＩは統計的に有意に高値であり、炎症が高度であることが確認された。その他に、カテゴリーＩＩとカテゴリーＩＩＩのＰＧＩＩにも統計的な有意差が確認された。このように、カテゴリーＩからカテゴリーＩＶの分類化は臨床的にも意義のあるものであることが示された。

＜実施例２＞
ピロリ菌感染性胃炎の進行は、図１５に示すとおり、典型的には、前庭部優勢胃炎、pangastritis、体部優勢胃炎へと推移する（前庭部優勢胃炎は、欧米人に多いタイプであり、pangastritisおよび体部優勢胃炎は４０歳以上の日本人に多いタイプである）。この胃炎の進行の各ステージと、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原ＯＤ値との関連性について明らかにするため、成人２００例（男性９４例、女性１０４例、平均年齢５５歳（２２〜８４歳））を対象として、実施例１と同様に、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定、血液中ペプシノーゲン（ＰＧＩおよびＰＧＩＩ）濃度、血液中抗ＣａｇＡ抗体濃度の測定を行なった。さらに内視鏡的検証のため、上部消化管検査による内視鏡的萎縮境界の判定（木村・竹本分類）、腸上皮化生、組織学的胃炎評価（シドニーシステムによる評価；前庭部大弯、体下部小弯、体上部大弯）について検討した。

（１）便中ピロリ菌抗原ＯＤ値と胃炎分布の関係
胃炎分布の判定方法は、以下の規準にしたがって行なった。
〔判定基準〕
炎症なし：シドニー分類にて、前庭部大弯、体部大弯、体部小弯の何れの好中球も正常
前庭部優勢胃炎：シドニー分類にて、好中球のレベルが前庭部大弯＞体部大弯
pangastritis：シドニー分類にて、好中球のレベルが前庭部大弯＝体部大弯
体部優勢胃炎：シドニー分類にて、好中球のレベルが前庭部大弯＜体部大弯

表９に示すとおり、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上の場合、胃体部大弯の好中球の平均値は最も高い値を示した。また胃炎分布においても、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上の場合、５６例中４６例（８２．２％）において、pangastritisまたは体部優勢胃炎と判定された。また、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値は、体部大弯のアクティビティ（好中球の浸潤）、胃炎のパターンは有意な正の相関を示し、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値が１．５以上の場合、内視鏡的にも重症の胃炎である可能性が高いと判断できることが確認できた。また、ＯＤ値＞２または１．５の集団において、胃粘膜の中で最も炎症を生じにくいことが知られている胃体部大弯に、好中球浸潤を伴う組織学的な活動性胃炎（pangastritisや体部優勢胃炎）を有することを認めた。とりわけ、前庭部と胃体部ともに活動性胃炎が高度なpangastritisの症例が多く認められた。

（２）便中ピロリ菌抗原ＯＤ値によるＰＧ法見逃し症例のスクリーニング
症例の検討を進めていく中で、本発明者らは、ＰＧ法によって陰性と判断された患者（ＰＧＩ／ＰＧＩＩ＞３またはＰＧＩ＞７０）においても重症の胃炎患者が存在するが、このようなＰＧ法見逃し症例についても、本発明の方法において、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値の基準を１．５よりも高くすることによって、典型的にはＯＤ値の基準を２．０とすることによって、見逃すことなく胃炎状態を判別できることを見出した。
すなわち、ＰＧ法陰性の群では、体部大弯のアクティビティ（好中球浸潤）が軽度では全てＯＤ＜２であり、中等度から高度ではＯＤ値＞２となる症例が過半数であった。胃炎のパターンでもpangastritis、体部胃炎となるにつれてＯＤ値が上昇した。一方、ＰＧ法陽性群では、このような傾向は認めなかった。
したがって、ＯＤ値＞２であれば、体部の好中球浸潤が高く、pangastritisや体部優勢胃炎である可能性が高いと判別できることが確認された。このことは、ＯＤ値＞２の場合、pangastritisや体部優勢胃炎の炎症パターンと関連性が強い若年性未分化型胃ガンのリスク群であると判断できることをも示す。

（３）便中ピロリ菌抗原ＯＤ値とＰＧＩ／ＰＧＩＩ比との併用の検討 ピロリ菌感染が慢性化するとピロリ菌量が低下することから、ＯＤ値＜１．５の集団には、ピロリ菌感染初期集団と慢性化集団が混在する。また、ＯＤ値≧１．５の集団においても、胃粘膜萎縮への移行レベルが混在する。このようにＯＤ値だけでは、精緻な判断が容易ではない場合がある。このような場合など、判断すべき目的に応じて、便中ピロリ菌抗原ＯＤ値による胃粘膜状態の判断方法において、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ比を併用することができる。より効果的に精緻に胃粘膜状態を判断可能とするため、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ比の基準値をＰＧ法と同じく３とする場合と、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ比の基準値を２とする場合とを検討した。

表１０の結果および胃炎分布の内視鏡的検証から、ＯＤ値＜１．５かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ＞３の集団はピロリ菌陰性者もしくは感染初期段階であることが示唆された。また、ＯＤ値＜１．５で、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦２の集団は、過半数が体部優勢胃炎であり、慢性化が最も進んだ症例が多く含まれていた。

表１１において、萎縮境界の平均値は、萎縮なし、軽度の萎縮、中等度の萎縮、高度の萎縮を夫々スコア１〜４とし、その平均値を示す。また、腸上皮化生についても同様に、４段階のスコアの平均値を算出した。
表１１の結果から、萎縮進展（萎縮境界）および腸上皮化生においても、ＯＤ値＜１．５かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ＞３の集団はピロリ菌陰性者または感染初期段階であることが示唆された。また、ＯＤ値＜１．５で、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦２の集団は、腸上皮化生の平均値が高く、慢性化が最も進んだ症例が多く含まれていた。

表１２に示すとおり、ピロリ菌に対する血清ＣａｇＡＩｇＧ抗体およびＰＧＩ／ＰＧＩＩから、ＯＤ値＜１．５かつＰＧＩ／ＰＧＩＩ＞３の集団はピロリ菌陰性者または感染初期段階であることが示唆された。ＯＤ値＜１．５で、ＰＧＩ／ＰＧＩＩ≦２の集団は、ＯＤ≧１．５と比較して、ピロリ菌に対する抗体量、ＰＧＩやＰＧＩＩが低値であり、慢性化が最も進んだ症例が多く含まれていた。

胃粘膜の炎症、慢性胃炎（活動性胃炎、萎縮性胃炎）、胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率等の診断方法として、内視鏡検査による診断を行う前の簡便かつ効率的なスクリーニング方法としての役割を果たし、また、健康診断等での検査値から健康状態を解析するために用いられるソフトウェアやコンピュータなどへの応用が期待される。

Claims (16)

1. 対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する方法。
2. 対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する、請求項１に記載の方法。
3. さらに、対象の血液中におけるペプシノーゲンＩＩの濃度に対するペプシノーゲンＩの濃度の比を指標とする、請求項１に記載の方法。
4. 対象の血液中におけるペプシノーゲンＩＩの濃度に対するペプシノーゲンＩの濃度の比が、３以下であることまたは３を越えることを指標とする、請求項３に記載の方法。
5. 胃粘膜の状態が、軽度、中等度もしくは高度の炎症から選択される少なくとも１つである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
6. 胃粘膜の状態が、軽度、中等度もしくは高度の萎縮から選択される少なくとも１つである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
7. 胃粘膜の状態が、現在、胃癌に罹患している危険率の高い状態である、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
8. 胃癌が、未分化型胃癌または分化型胃癌である、請求項７に記載の方法。
9. 胃粘膜の状態が、将来、胃癌に罹患する危険率の高い状態である、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
10. 胃癌が、未分化型胃癌または分化型胃癌である、請求項９に記載の方法。
11. ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値が、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法により測定されたものである、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
12. ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体がモノクローナル抗体である、請求項１１に記載の方法。
13. 対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する方法。
14. 対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する、請求項１３に記載の方法。
15. ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値が、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法により測定されたものである、請求項１３または１４に記載の方法。
16. ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体がモノクローナル抗体である、請求項１５に記載の方法。

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