CN106018792B - 一种胃功能检测用免疫层析试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及免疫层析检测技术领域，具体公开了一种胃功能检测用试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括塑料板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜，样本垫和吸水垫，所述玻璃纤维素膜上包被有量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、胃蛋白酶原II抗体和幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的混合物；硝酸纤维素膜上设置有检测线1、检测线2、检测线3和控制线，检测线1上包被有胃蛋白酶原I二抗，检测线2上包被有胃蛋白酶原II二抗，检测线3上包被有幽门螺旋杆菌尿素酶抗原，控制线上包被有羊抗鼠lgG。该试剂盒，利用双抗体/抗原夹心原理结合量子点的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法对胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体进行快速、灵敏的联合检测。

Description

一种胃功能检测用免疫层析试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及免疫层析检测技术领域，具体涉及一种胃功能检测用免疫层析试剂盒及其制备方法。
背景技术
胃蛋白酶原始胃液中胃蛋白酶的无活性前体，由胃体的主细胞和黏液细胞分泌，大部分分泌到胃腔，少量可在血液中被检测到。根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群，1-5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原II，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原II。血清和血浆中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II比值的降低与胃体萎缩的严重程度呈正相关，中、重度萎缩性胃炎时，其比值为＜0.3，其胃癌的发病率显著增加，因此，联合测定胃蛋白酶原I核胃蛋白酶原II比值可起到早期胃癌风险提示的作用。另外，胃幽门螺旋杆菌是生存在人类胃粘膜的病原菌，是慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌的重量致病因子之一，是人胃内唯一能够产生大量尿毒酶的细菌，因此检测胃幽门螺旋杆菌抗体对胃功能和胃癌发病率的判断具有指示性的作用。
目前对于胃蛋白酶原和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的主要检测的方法由酶联免疫吸附法、化学发光免疫测定和荧光免疫层析法。酶联免疫吸附法检测精确，能准确定量，具有很高的敏感性，但是检测样品需要加样、温浴、洗涤、显色、终止等步骤，操作程序繁琐，耗时长，样品从处理到得到结论需要至少40分钟，不适合大规模的体检筛查；样品检测需要洗板机和酶标仪，携带不便，因而不能在病人家庭或急救车上进行检测；另外，其敏感性、特异性不够高，对低浓度样品检测的准确度不高。而化学发光免疫测定，虽然精确度高，检测速度快，但检测需要昂贵的化学发光免疫分析仪，要求特定的分析室，且其试剂成本也较高，无法广泛用于较基层的意愿和医疗机构中。荧光免疫层析法相比酶联免疫吸附法和化学发光免疫测定，检测灵敏度高、准确度高、操作简便、成本低，因而使其在胃蛋白酶原和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的检测方面具有更大的产业价值，然而目前无论是采用何种检测方法，大多是对胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体进行单独检测，还没有实现对胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体三种物质的一步联合检测。
发明内容
为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种灵敏度高、准确度高、操作简便、成本低的胃功能检测用试剂盒，实现对胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体三种成分的同时联合检测。
本发明的目的还在于提供一种胃功能检测用试剂盒的制备方法。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：
一种胃功能检测用试剂盒，包括塑料板、设置在塑料板上的玻璃纤维素膜、设置在玻璃纤维素膜上的硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上一端设有样本垫，对应的另一端设有吸水垫，所述玻璃纤维素膜上包被有量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的混合物；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线1、检测线2、检测线3和控制线，所述检测线1上包被有胃蛋白酶原I二抗，所述检测线2上包被有胃蛋白酶原II二抗，所述检测线3上包被有幽门螺旋杆菌尿素酶抗原，所述控制线上包被有羊抗鼠lgG。
所述玻璃纤维上包被的量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的混合物中量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的质量比为1：1：1。
所述量子点为硒化镉或硫化镉量子点。
所述硝酸纤维素膜上设置的检测线1与检测线2之间、检测线2与检测线3之间、检测线1与控制线之间的间隔均不小于5mm。
上述胃功能检测用试剂盒的制备方法，包括以下操作步骤：
1)原材料的制备：
A：制备玻璃纤维素膜：将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体、量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合包被在玻璃纤维素膜上，干燥，备用；
B：制备硝酸纤维素膜：取硝酸纤维素膜，间隔划分出检测线1、检测线2、检测线3和控制线，然后将胃蛋白酶原I二抗、胃蛋白酶原II二抗、幽门螺旋杆菌尿素酶抗原、羊抗鼠lgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线1、检测线2、检测线3和控制线上，之后将包被后的硝酸纤维素膜放入封闭液中封闭，干燥，备用；
2)组装：在塑料板上放置步骤1)制备的玻璃纤维素模，然后在步骤1)制备的玻璃纤维素膜上放置步骤1)制备的硝酸纤维素膜，然后在硝酸纤维素的一端放置样品垫，对应的另一端放置吸水垫，干燥，即完成。
步骤A中还包括首先制备量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的混合物，具体方法包括以下操作步骤：
a：在胶乳颗粒悬浊液中加入改性环糊精，混匀24小时，纯化，得改性环糊精-胶乳复合物悬浊液；
b：在步骤a制备的改性环糊精-胶乳复合物悬浊液中加入量子点，混匀24小时，纯化，得量子点-改性环糊精-胶乳复合物悬浊液；
c：在步骤b制备的量子点-改性环糊精-胶乳复合物悬浊液中加入活化剂，活化15分钟，纯化，之后加入胃蛋白酶原I抗体，混匀2～4小时后，离心得沉淀物颗粒，将沉淀物颗粒用封闭液重悬，室温混匀1小时，之后再进行纯化，即得量子点标记的胃蛋白酶原I抗体；
d：按照上述步骤a～c同样的方法制备量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原，然后将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合，备用；
所述改性环糊精为羧甲基化改性环糊精或氨基化改性环糊精。
所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
步骤c中所述量子点-改性环糊精-胶乳复合物悬浊液与活化剂的质量比为1：10。
步骤B中所用的封闭液为牛血清白蛋白溶液。
步骤c中所用的封闭液为牛血清白蛋白溶液。
步骤a中所述改性环糊精与胶乳颗粒的质量比为20：1；步骤b中所述量子点与环糊精-乳胶复合物的质量比为10：1；步骤c中所述胃蛋白酶原I抗体与量子点-改性环糊精-胶乳复合物的质量比为1：20。
步骤a中胶乳颗粒使用前进行纯化处理，所述纯化处理的具体方法为：取胶乳颗粒加入第一缓冲液中，离心分离，弃去上清，再用第一缓冲液重悬沉淀物颗粒，然后再离心分离，弃去上清，再用第一缓冲液重悬沉淀物颗粒，4℃保存备用。
上述纯化后的胶乳颗粒在使用时取胶乳颗粒，采用第二缓冲液将胶乳颗粒稀释成浓度为10mg/ml。
上述步骤b中还包括首先将步骤a中制备的改性环糊精-胶乳复合物悬浊液，采用第二缓冲液稀释成浓度为10mg/ml的悬浊液，然后再加入量子点。
上述步骤c中还包括首先将步骤b中制备的量子点-改性环糊精-胶乳复合物悬浊液，采用第二缓冲液稀释成浓度为10mg/ml的悬浊液，然后再加入活化剂活化。
步骤c中所述封闭后进行纯化的具体方法为：8000rpm条件下离心15min，弃去上清，沉淀复溶于分散液中。
步骤A中将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体、量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合包被在玻璃纤维素膜上的具体方法为：将将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合物均匀喷涂于玻璃纤维素膜上。
步骤a和步骤b中所述纯化的具体方法为：8000rpm条件下离心，弃去上清，沉淀用第一缓冲液进行重悬，之后在8000rpm条件下离心，弃去上清，沉淀复溶于第一缓冲液中。
步骤c中活化后纯化的具体方法为：8000rpm条件下离心弃去上清，沉淀用第一缓冲液进行重悬。
步骤B中将胃蛋白酶原I二抗、胃蛋白酶原II二抗、幽门螺旋杆菌尿素酶抗原、羊抗鼠lgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线1、检测线2、检测线3和控制线上的具体方法为：分别取浓度均为1mg/ml的胃蛋白酶原I二抗、胃蛋白酶原II二抗、幽门螺旋杆菌尿素酶抗原和羊抗鼠IgG，以1ul/cm，10cm/秒的速度分别喷涂到硝酸纤维的检测线1、检测线2、检测线3和控制线上。
步骤1)和步骤2)中所述的干燥为37℃干燥3～5小时。
上述第一缓冲液为0.02M，pH7.4的PB缓冲液。上述第二缓冲液为0.02M，pH6.1的MES缓冲液。
上述胃功能检测用试剂盒在使用时，将待测样品加入试剂盒的样品垫上，玻璃纤维素膜上的量子化标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体、量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合物首先特异性的捕捉到待测样品中的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体，然后在达到检测线3时，量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原-幽门螺旋柑橘尿素酶抗体结合物与检测线3上的幽门螺旋柑橘尿素酶抗原特异性结合，；依次的在检测线2时，量子点标记的胃蛋白酶原II抗体-胃蛋白酶原II结合物与检测线2上的胃蛋白酶原II二抗特异性结合；在检测线1时，量子点标记的胃蛋白酶原I抗体-胃蛋白酶原I结合物与检测线1上的胃蛋白酶原I二抗特异性结合；之后通过检测检测线1、检测线2和检测线3上结合的量子点的荧光效应，定量和定性判断待测样品中胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体。
本发明胃功能检测用试剂盒，以量子化标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体、量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合物包被在玻璃纤维素膜上，作为检测探针，利用双抗体/抗原夹心原理结合量子点的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法对胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体进行快速、特异、简便、灵敏的联合检测。本发明胃功能检测用试剂盒检测线低，检测灵敏度高。
本发明胃功能检测用试剂盒的制备方法，操作简便，易于控制，适于工业化推广应用。
进一步优选的，本发明制备方法中，创新量子点标记技术，采用羧甲基化或氨基化改性的环糊精修饰量子点，然后将胃蛋白酶原I抗体、胃蛋白酶原II抗体、幽门螺旋杆菌尿素酶抗原分别结合在改性环糊精的羧甲基基团或氨基基团上，实现制备获得量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体、量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原。
附图说明
图1是采用实施例1制备的试剂盒检测胃蛋白酶原Ⅰ标准样品发光值与实际浓度之间对应关系的标准曲线；
图2是采用实施例1制备的试剂盒检测胃蛋白酶原Ⅱ标准样品发光值与实际浓度之间对应关系的标准曲线；
图3是采用实施例1制备的试剂盒检测幽门螺旋杆菌尿素酶抗原标准样品发光值与实际浓度之间对应关系的标准曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本实施例胃功能检测用试剂盒，包括塑料板、设置在塑料板上的玻璃纤维素膜、设置在玻璃纤维素膜上的硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上一端设有样本垫，对应的另一端设有吸水垫，所述玻璃纤维素膜上包被有质量比为1：1：1的量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的混合物；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线1、检测线2、检测线3和控制线，所述检测线1上包被有胃蛋白酶原I二抗，所述检测线2上包被有胃蛋白酶原II二抗，所述检测线3上包被有幽门螺旋杆菌尿素酶抗原，所述控制线上包被有羊抗鼠lgG；所述量子点为硒化镉量子点。
本实施例胃功能检测用试剂盒的制备方法，具体操作步骤为：
1)制备玻璃纤维素膜：
a：取1ml未标记胶乳颗粒加入10ml，0.02M，pH7.4PB缓冲液中；离心机10000rpm离心20min；去掉上清液，再用10ml，0.02M，pH7.4PB缓冲液重悬沉淀颗粒物；之后再离心机10000rpm离心20min，去掉上清并用5ml0.02M，pH7.4，PB缓冲液重悬沉淀颗粒物，4℃保存待用；
b：取步骤a制备的胶乳颗粒用0.02M，pH6.1的MES缓冲液将胶乳颗粒稀释至10mg/ml，取0.05ml稀释后的胶乳颗粒悬浊液加入10mg羧甲基化改性环糊精，混匀24小时后，离心机8000rpm离心，弃去上清，并用0.02M，pH7.4的PB缓冲液重悬沉淀颗粒物，之后再次离心机8000rpm离心，弃去上清，沉淀颗粒物复溶于0.02M，pH7.4的PB缓冲液中，得羧甲基化改性环糊精-胶乳复合物悬浊液；
c：取步骤b制备的羧甲基化改性环糊精-胶乳复合物悬浊液，用0.02M，pH6.1的MES缓冲液将其稀释至10mg/ml，取20ml稀释后的羧甲基化改性环糊精-胶乳复合悬浊液，加入20mg硒化镉量子点，混匀24小时，离心机8000rpm离心，弃去上清，并用0.02M，pH7.4的PB缓冲液重悬沉淀颗粒物，之后再次离心机8000rpm离心，弃去上清，沉淀颗粒物复溶于0.02M，pH7.4的PB缓冲液中，得量子点-羧甲基化改性环糊精-胶乳复合物悬浊液；
d：取步骤c制备的量子点-羧甲基化改性环糊精-胶乳复合物悬浊液，用0.02M，pH6.1的MES缓冲液将其稀释至10mg/ml，然后按照量子点-改性环糊精-胶乳复合物与活化剂的质量比为1：10，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化15分钟后，8000rpm离心，弃去上清，并用0.02M，pH7.4的PB缓冲液重悬沉淀物颗粒，之后按照胃蛋白酶原I抗体：量子点-羧甲基化改性环糊精-胶乳复合物＝1：20的比例加入胃蛋白酶原I抗体，混匀3小时后，8000rpm离心15分钟，将沉淀物颗粒用封闭液重悬，室温混匀1小时，之后8000rpm离心15min，沉淀颗粒物复溶于分散液，即得量子点标记的胃蛋白酶原I抗体；
e：按照上述步骤a～c同样的方法制备量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原，然后将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合，喷涂于玻璃纤维素模上，37℃干燥4小时，即得量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合物标记的玻璃纤维素膜；
2)制备硝酸纤维素膜：取硝酸纤维素膜，间隔6mm依次划分检测线3、检测线2、检测线1和控制线，之后取浓度均为1mg/ml的胃蛋白酶原I二抗、胃蛋白酶原II二抗、幽门螺旋杆菌尿素酶抗原、羊抗鼠igG，以1ul/cm，10cm/秒的速度分别喷涂到硝酸纤维膜的检测线1、检测线2、检测线3和控制线上，之后将硝酸纤维素膜放入牛血清白蛋白溶液中封闭，37℃干燥3小时，即得所述的硝酸纤维素膜；
3)组装：在塑料板上放置步骤1)制备的玻璃纤维素模，在步骤1)制备的玻璃纤维素膜上放置步骤2)制备的硝酸纤维素膜，然后在硝酸纤维素的一端放置样品垫，对应的另一端放置吸水垫，37℃干燥5小时，即完成。
实施例2
本实施例胃功能检测用试剂盒，与实施例不同的地方在于，采用的量子点为硫化镉量子点，采用的改性环糊精为氨基化干性环糊精，制备胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的过程中，在活化的量子点-改性环糊精-胶乳悬浊液中加入抗体或抗原的混匀时间为2小时，其他同实施例1。
实施例3
本实施例胃功能检测用试剂盒，与实施例不同的地方在于，制备胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的过程中，在活化的量子点-改性环糊精-胶乳悬浊液中加入抗体或抗原的混匀时间为4小时，其他同实施例1。
试验例：
将胃蛋白酶原I稀释为7.8125ug/L、15.625ug/L、31.25ug/L、62.5ug/L、125ug/L、250ug/L、500ug/L；胃蛋白酶II稀释为3.90625ug/L、7.8125ug/L、15.625ug/L、31.25ug/L、62.5ug/L、125ug/L、250ug/L；幽门螺旋杆菌尿素酶抗体稀释为1.5625ug/L、3.125ug/L、6.25ug/L、12.5ug/L、25ug/L、50ug/L、100ug/L作为标准品溶液，并同时配制空白溶液。
分别取各浓度的标准品100ul分别加入到实施例1制备的试剂盒的样品垫上，5min后将显色完成的试剂盒放入荧光免疫层析读数仪(南京美宁康诚生物科技有限公司)重，读取相应检测线的发光值，并记录各浓度标准样品检测的发光值与实际浓度之间的对应关系，绘制标准曲线，如图1～图3所示，胃蛋白酶原I的标准曲线回归方程为：y＝-0.00003x2+0.03545x+0.11366，R2＝0.99967；胃蛋白酶原II的标准曲线回归方程为：y＝-0.00013x2+0.07164x-0.03524，R2＝0.99983；幽门螺旋杆菌尿毒酶抗体的标准曲线回归方程：y＝-0.00039x2+0.08853x+0.01878，R2＝0.99965，由上述标准曲线可知本发明制备的试剂盒针对胃蛋白酶原I的最低检测限为2μg/L、胃蛋白酶原II的最低检测限为1μg/L、幽门螺旋杆菌尿毒酶抗体的最低检测限为0.5μg/L。
另外，取空白溶液加入到实施例1制备的试剂盒中，未检测到荧光效应。
取100例随机的临床样本，采用本发明实施例1制备的试剂盒对胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的浓度进行联合检测。检测方法为：100ul待测样品(50ul样品+50ul样品稀释液)滴入试剂盒样本垫上，5min后将显色完成的标准品与待测样品的试纸条放入荧光免疫层析读数仪(南京美宁康诚生物科技有限公司)中，读取T/C线的发光值，并记录，将待测样品T/C值带入标准曲线中，得到胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和幽门螺旋杆菌尿素酶抗体浓度结果，如下表1所示：
表1
由此可见，本方法可以直接定量检测胃蛋白酶原，不需专业培训，操作方便，快速，20min即可获得结果，适合在基层医院和体检中心推广和运用。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (9)

1.一种胃功能检测用试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂盒包括塑料板、设置在塑料板上的玻璃纤维素膜、设置在玻璃纤维素膜上的硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上一端设有样本垫，对应的另一端设有吸水垫，其特征在于，所述玻璃纤维素膜上包被有量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的混合物；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线1、检测线2、检测线3和控制线，所述检测线1上包被有胃蛋白酶原I二抗，所述检测线2上包被有胃蛋白酶原II二抗，所述检测线3上包被有幽门螺旋杆菌尿素酶抗原，所述控制线上包被有羊抗鼠lgG；
具体制备方法包括以下操作步骤：
1)原材料的制备：
A：制备玻璃纤维素膜：将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体、量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合包被在玻璃纤维素膜上，干燥，备用；
B：制备硝酸纤维素膜：取硝酸纤维素膜，间隔划分出检测线1、检测线2、检测线3和控制线，然后将胃蛋白酶原I二抗、胃蛋白酶原II二抗、幽门螺旋杆菌尿素酶抗原、羊抗鼠lgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线1、检测线2、检测线3和控制线上，之后将包被后的硝酸纤维素膜放入封闭液中封闭，干燥，备用；
2)组装：在塑料板上放置步骤1)制备的玻璃纤维素模，然后在步骤1)制备的玻璃纤维素膜上放置步骤1)制备的硝酸纤维素膜，然后在硝酸纤维素的一端放置样品垫，对应的另一端放置吸水垫，干燥，即完成；
其中，步骤A中还包括首先制备量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的混合物，具体方法包括以下操作步骤：
a：在胶乳颗粒悬浊液中加入改性环糊精，混匀24小时，纯化，得改性环糊精-胶乳复合物悬浊液；
b：在步骤a制备的改性环糊精-胶乳复合物悬浊液中加入量子点，混匀24小时，纯化，得量子点-改性环糊精-胶乳复合物悬浊液；
c：在步骤b制备的量子点-改性环糊精-胶乳复合物悬浊液中加入活化剂，活化15分钟，纯化，之后加入胃蛋白酶原I抗体，混匀2～4小时后，离心得沉淀物颗粒，将沉淀物颗粒用封闭液重悬，室温混匀1小时，之后再进行纯化，即得量子点标记的胃蛋白酶原I抗体；
d：按照上述步骤a～c同样的方法制备量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原，然后将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合，备用。
2.如权利要求1所述的胃功能检测用试剂盒的制备方法，其特征在于，所述改性环糊精为羧甲基化改性环糊精或氨基化改性环糊精。
3.如权利要求1所述的胃功能检测用试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤a中所述改性环糊精与胶乳颗粒的质量比为20：1；步骤b中所述量子点与环糊精-乳胶复合物的质量比为10：1；步骤c中所述胃蛋白酶原I抗体与量子点-改性环糊精-胶乳复合物的质量比为1：20。
4.如权利要求1所述的胃功能检测用试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤A中将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体、量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合包被在玻璃纤维素膜上的具体方法为：将量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原混合物均匀喷涂于玻璃纤维素膜上。
5.如权利要求1所述的胃功能检测用试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤B中将胃蛋白酶原I二抗、胃蛋白酶原II二抗、幽门螺旋杆菌尿素酶抗原、羊抗鼠lgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线1、检测线2、检测线3和控制线上的具体方法为：分别取浓度均为1mg/ml的胃蛋白酶原I二抗、胃蛋白酶原II二抗、幽门螺旋杆菌尿素酶抗原和羊抗鼠IgG，以1ul/cm，10cm/秒的速度分别喷涂到硝酸纤维的检测线1、检测线2、检测线3和控制线上。
6.一种胃功能检测用试剂盒，其特征在于，由权利要求1～5任一项所述的制备方法制备而成。
7.如权利要求6所述的胃功能检测用试剂盒，其特征在于，所述玻璃纤维上包被的量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的混合物中量子点标记的胃蛋白酶原I抗体、量子点标记的胃蛋白酶原II抗体和量子点标记的幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的质量比为1：1：1。
8.如权利要求6所述的胃功能检测用试剂盒，其特征在于，所述量子点为硒化镉或硫化镉量子点。
9.如权利要求6所述的胃功能检测用试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设置的检测线1与检测线2之间、检测线2与检测线3之间、检测线1与控制线之间的间隔均不小于5mm。
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