JPWO2007122885A1 - インターロイキン産生調節剤、該インターロイキン産生調節剤を含む医薬組成物及び飲食品、並びにその製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
インターロイキン−10の産生の維持又は促進作用と、インターロイキン−12の産生の維持又は抑制作用とを有するインターロイキン産生調節剤を、
ビフィドバクテリウム属に属する微生物を破砕する工程、
を含む方法によって、製造する方法にある。
ビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)に属する微生物、ビフィドバクテリウム・アングレイタム(Bifidobacterium angulatum)に属する微生物、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム(Bifidobacterium pseudocatenulatum)に属する微生物、ビフィドバクテリウム・カテニュレイタム(Bifidobacterium catenulatum)に属する微生物を含む群から選択された1種類以上の微生物であることが好ましい。
インターロイキン−10の産生の維持又は促進作用と、インターロイキン−12の産生の維持又は抑制作用とを有するインターロイキン産生調節剤にもある。
ビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)BP−7787株破砕物150g、ラクチュロース粉末(森永乳業社製)100g、マルツデキストリン(松谷化学工業社製)635g、脱脂粉乳(森永乳業社製)85g、ステビア甘味料(三栄源エフ・エフ・アイ社製)1g、ヨーグルト・フレーバー(三栄源エフ・エフ・アイ社製)5g、グリセリン脂肪酸エステル製剤(理研ビタミン社製)24gの各粉末を添加して均一に混合し、打錠機(畑鉄鋼所社製)を使用して、錠剤1錠当り0.5gとし、12錠/分打錠速度、9.8KPaの圧力で前記混合粉末を連続的に打錠し、炎症性腸疾患及び過敏性腸症候群の症状緩和剤及び/又は治療剤であるビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)BP−7787株破砕物を含有するタブレット1800錠(約900g)を製造した。
[本発明の試験例で用いたビフィズス菌]
本発明の試験例で用いたビフィズス菌の菌株の属種、寄託機関、番号、本明細書中での識別名を表1に示した。
(未破砕菌体試料の調製)
ビフィズス菌の各菌株をMRS(de Man Rogasa Sharpe)培地(Difco)で16時間培養した物を、PBS(phosphate-buffer saline)で2回洗浄し、さらに蒸留水で2回洗浄した後に蒸留水で懸濁し、凍結乾燥を行った。凍結乾燥したものをPBSで懸濁し、100℃30分間の加熱処理を行い、未破砕菌体試料とした。
表1に示したビフィズス菌の各菌株をMRS(de Man Rogasa Sharpe)培地(Difco)で16時間培養した物を、PBS(phosphate-buffer saline)で2回洗浄し、さらに蒸留水で2回洗浄した後に蒸留水で懸濁し、約4mlの試料を超音波破砕機(BRANSON SONIFIER 450)にて60分間(output control 4、出力約35W相当、周波数20kHz、constant)の超音波処理を氷上で行った。これらの試料を800 x g 30分で遠心し、未破砕の菌体を除去した。得られた試料は、未破砕の菌体が残っていないことを検鏡にて確認し、凍結乾燥を行った。凍結乾燥したものをPBSで懸濁し、100℃30分間の加熱処理を行い、完全破砕菌体試料とした。
B. pseudocatenulatum JCM7041株をMRS(de Man Rogasa Sharpe)培地(Difco)で16時間培養した物を、PBS(phosphate-buffer saline)で2回洗浄した後にPBSで懸濁し、超音波破砕機(BRANSON SONIFIER 450)にて0,5,15,30,60分間(output control 4、出力約35W相当、周波数20kHz、constant)の超音波処理を、体積約4mlとした懸濁溶液に対して氷上で行い,100℃30分間の加熱処理を行った。
実験動物には6週齢のオスBALB/cマウス(チャールズリバー)を用い、7-9週齢時に解剖し脾臓を採取した。採取した脾臓より脾細胞を採取し、赤血球溶血液(0.144M 塩化アンモニウム、17mM トリスアミノメタン、pH7.65)にて3分間処理し、赤血球を除去したものを調製した。
「(脾細胞の調製)」の方法で調製した脾細胞を、RPMI1640(SIGMA)に10% FCS(Gibco)、100IU/ml ペニシリン、0.1mg/ml ストレプトマイシンを加えた培地で、2 x 106 cells/mlになるように懸濁し、この細胞浮遊液を0.5mlと菌体試料を終濃度1μg/ml、10μg/mlで混合し、48穴のマイクロプレート(FALCON)にて37℃、5% CO2存在下で培養した。2日後に培養上清を回収し、培養上清中のサイトカインを測定した。
IL-10濃度はDuo Set(R&D systems)を用いてELISA法により測定した。IL-12p70濃度は、培養上清を限外ろ過(MultiScreen Ultrcel-10, MILLIPORE社製)により1/10に濃縮し、Quantikine(R&D systems)を用いてELISA法により測定した。
各株の未破砕菌体試料または完全破砕菌体試料によるマウス脾細胞から誘導されるサイトカイン産生量を図1(IL-12p70)と図2(IL-10)に示す。
各破砕時間の破砕菌体試料(添加濃度10μg/ml)によるマウス脾細胞から誘導されるサイトカイン産生量を図3(B. pseudocatenulatum JCM7041株)に示す。
Claims (17)
- インターロイキン−10の産生の維持又は促進作用と、インターロイキン−12の産生の維持又は抑制作用とを有するインターロイキン産生調節剤を、
ビフィドバクテリウム属に属する微生物を破砕する工程、
を含む方法によって、製造する方法。 - インターロイキン−10の産生の維持又は促進作用によって促進的に産生されるインターロイキン−10の産生量と、インターロイキン−12の産生の維持又は抑制作用によって抑制的に産生されるインターロイキン−12の産生量との比の値(インターロイキン−10/インターロイキン−12)が、10以上である、請求項1に記載の製造方法。
- 微生物を破砕する工程が、物理的破砕によって行われる、請求項1又は請求項2に記載の製造方法。
- 微生物を破砕する工程が、超音波破砕によって行われる、請求項1〜3のいずれかに記載の製造方法。
- ビフィドバクテリウム属に属する微生物が、
ビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)に属する微生物、ビフィドバクテリウム・アングレイタム(Bifidobacterium angulatum)に属する微生物、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム(Bifidobacterium pseudocatenulatum)に属する微生物、ビフィドバクテリウム・カテニュレイタム(Bifidobacterium catenulatum)に属する微生物を含む群から選択された1種類以上の微生物である、請求項1〜4のいずれかに記載の製造方法。 - 請求項1〜5のいずれかに記載の製造方法によって得られる、
インターロイキン−10の産生の維持又は促進作用と、インターロイキン−12の産生の維持又は抑制作用とを有するインターロイキン産生調節剤。 - インターロイキン−10の産生の維持又は促進作用によって促進的に産生されるインターロイキン−10の産生量と、インターロイキン−12の産生の維持又は抑制作用によって抑制的に産生されるインターロイキン−12の産生量との比の値(インターロイキン−10/インターロイキン−12)が、10以上である、請求項6に記載のインターロイキン産生調節剤。
- 請求項6又は請求項7に記載のインターロイキン産生調節剤を有効成分とする、医薬組成物。
- 請求項6又は請求項7に記載のインターロイキン産生調節剤を有効成分とする、自己免疫疾患又は消化管疾患の予防及び/又は治療用の医薬組成物。
- 自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病(I型糖尿病)、又は慢性関節リウマチである、請求項9に記載の医薬組成物。
- 消化管疾患が消化性大腸炎、クローン病、難治性炎症性腸疾患又は過敏性腸症候群である、請求項9に記載の医薬組成物。
- 請求項6又は請求項7に記載のインターロイキン産生調節剤を含む、飲食品。
- 請求項6又は請求項7に記載のインターロイキン産生調節剤を含む、自己免疫疾患又は消化管疾患の予防及び/又は治療用の飲食品。
- 自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病(I型糖尿病)、又は慢性関節リウマチである、請求項13に記載の飲食品。
- 消化管疾患が消化性大腸炎、クローン病、難治性炎症性腸疾患又は過敏性腸症候群である、請求項13に記載の飲食品。
- 飲食品が、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、栄養機能食品、特定保健用食品、又は条件付き特定保健用食品である、請求項12〜15のいずれかに記載の飲食品。
- 請求項6又は請求項7に記載のインターロイキン調節剤を含む、飼料。
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