JPWO2003045433A1 - Cardiac dysfunction drug - Google Patents

Abstract

アダム分子、特にアダム１２のプロテアーゼ活性に対する阻害剤（例えばヒドロキサム酸化合物）は、心肥大に伴う心機能不全の治療薬として有用である。Inhibitors to the protease activity of Adam molecules, particularly Adam 12, such as hydroxamic acid compounds are useful as therapeutic agents for cardiac dysfunction associated with cardiac hypertrophy.

Description

（技術分野）
アダム（ＡＤＡＭ；Ａ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ Ａｎｄ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ）とは、その名の通りシステイン残基を多く含むディスインテグリン様ドメインと金属プロテアーゼ様ドメインを含む分子であり、プロテアーゼ活性のみならず接着分子活性をも発揮し得る機能性タンパク質として注目を集めている。
本願発明は、このアダム分子、より詳しくは、アダム１２のプロテアーゼ活性を阻害することにより、ヘパリン結合性ＥＧＦ（上皮増殖因子）様増殖因子（以下、ＨＢ−ＥＧＦと略記する）の可溶化を抑制する作用を有する化合物を有効成分とする、心肥大に伴う心機能不全治療薬に関する。
（背景技術）
現在までにアダムファミリーに属する２０種以上の分子が報告されている〔例えば、アダム１７／Ｎａｔｕｒｅ，３８５，７２９（１９９７），ｉｂｉｄ．，３８５，７３３（１９９７）；アダム９／Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１３２，７１７（１９９６）；アダム１０／Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１７，４５（１９９６），；アダム１２／Ｎａｔｕｒｅ，３７７，６５２（１９９５）；アダム１５／Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，４５９３（１９９６）；アダム２０／Ｇｅｎｅ，２０６，２７３（１９９８）等〕。
これらの多くは膜貫通型ドメインを有して細胞膜に局在し、細胞表面における分子制御に極めて重要な役割を果たしていることが明らかになってきた。例えば、アダム１７は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の転換酵素（可溶化酵素）として知られている。また、アダム１０はノッチシグナル（Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌ）の制御に関与し、神経形成に重要な役割を果たしている他、膜タンパクのプロセシング、更には細胞外マトリックス成分の分解への関与も示唆されている。アダム１２がプロテアーゼ活性を有することは既に知られているが、その生理的意義は不明である。
これらアダム分子によるプロセシングの標的分子のひとつに成長因子がある。今日までに種々の成長因子ファミリーが知られているが、例えば、ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）リガンドの成長因子ファミリー（ＥＧＦの他、ＨＢ−ＥＧＦ、トランスフォーミング成長因子−α、アンフィレギュリン、エピレギュリン等）は、いずれも膜結合型として生体内で合成された後、プロセシングを受けて可溶化されることが知られている。成長因子の可溶化酵素について、イズミ（ｉｚｕｍｉ）等は、ＨＢ−ＥＧＦの可溶化プロセスにアダム９が関与することを述べている〔ＥＭＢＯ Ｊ．，１７，７２６０−７２７２（１９９８）〕。
最近、成長因子が心肥大を引き起こす因子のひとつとして注目されている。心肥大は、本来、種々の負荷に対する心臓の適応反応であるが、長期にわたる心肥大は慢性的な心機能障害や突然死にも関連するのでそのメカニズム解明は重要である。
フェニレフリン、アンジオテンシンＩＩ、エンドセリン−１のような血管収縮性薬物が心肥大を引き起こすことが既に知られている。これらの薬物はいずれもＧ−タンパク連結受容体（ＧＰＣＲ）に結合した後、一連のシグナル伝達を介してタンパク合成を刺激し心肥大を引き起こすことが知られている。
このＧＰＣＲにより開始される一連のシグナル伝達系にＥＧＦＲの活性化が関与している例が種々の細胞で報告されている。例えば、エグチ（Ｅｇｕｃｈｉ）等は、ラットの血管平滑筋細胞を用いた実験からアンジオテンシンＩＩがＧＰＣＲに結合した後、ＥＧＦＲのリン酸化を生じさせることを示した〔Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．，２７３，８８９０−８８９６（１９９８）〕。また、プレンツェル（Ｐｒｅｎｚｅｌ）等は、ＧＰＣＲの活性化によりＨＢ−ＥＧＦにおける前駆体からの可溶化プロセスが促進され、生じた活性化ＨＢ−ＥＧＦがＥＧＦＲと結合してこれを活性化するスキームを提出し、ＨＢ−ＥＧＦの可溶化プロセスをブロックすることによりＧＰＣＲを介して誘起されるＥＧＦＲ活性化を阻害できることを示した〔Ｎａｔｕｒｅ，４０２，８８４（１９９９）〕。
（発明の開示）
本願発明の目的は、心肥大に伴う、心機能不全の新たな治療薬を提供することにある。
発明者等は、心筋細胞においてＨＢ−ＥＧＦの可溶化酵素阻害剤（ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ０１／７０２６９）がＥＧＦＲのリン酸化に及ぼす影響を調べたところ、フェニレフリン、アンジオテンシンＩＩ、エンドセリン−１によるＥＧＦＲのリン酸化は阻害を受けるが、リコンビナントＨＢ−ＥＧＦ（可溶化されたＨＢ−ＥＧＦ）によるリン酸化は影響されないことを見出した。フェニレフリン、アンジオテンシンＩＩ、エンドセリン−１によるＥＧＦＲのリン酸化は、ＨＢ−ＥＧＦの中和抗体によっても阻害を受けることから、可溶化されたＨＢ−ＥＧＦがＥＧＦＲの活性化に寄与していることが明らかとなった。
次いで、発明者等は、心筋細胞においてＨＢ−ＥＧＦの可溶化を担っている酵素の同定を行った。ＨＢ−ＥＧＦの可溶化がプロテインキナーゼＣのδフォーム（ＰＫＣδ）を介することが知られているので、ＰＫＣδとの結合能を指標としてヒト心臓ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、可溶化酵素がアダム１２であることを明らかにした。
次に、心肥大モデルマウスにおいて、可溶化酵素阻害剤が心肥大および心機能に及ぼす効果を確認した（後記試験例１〜３参照）。
以上の結果より、本願発明者らは、心肥大には可溶型のＨＢ−ＥＧＦが極めて重要な働きをしていることを見い出し、この産生を阻害すれば心肥大に基づく心機能不全の治療に有効であることを確認して本願発明を完成した。
（発明を実施するための最良の形態）
本発明の心機能不全治療剤は、アダム分子のプロテアーゼ活性に対する阻害剤、特に、心筋細胞におけるＨＢ−ＥＧＦの可溶化酵素であるアダム１２のプロテアーゼ活性を阻害する化合物を有効成分とする。その有効成分としては、ヒトにおいてアダム１２のプロテアーゼ活性を阻害する化合物であれば特に限定はされないが、例えば、ＰＣＴ国際公開公報（ＷＯ９７／３１１０９号）に開示されたメルトリン（アダム１２の別名；Ｍｅｌｔｒｉｎ α）のアンタゴニストであってアダム１２のプロテアーゼ活性を阻害し得るものは本発明の心機能不全治療剤として用いることができる。その他、マトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤として知られている多くのヒドロキサム酸化合物がアダムのプロテアーゼ活性を阻害することが知られており（例えば、米国特許６１１０９６４号、同６１１４３６１号、同６１５６７９８号、同６１９７８１０等）、ＭＭＰ阻害作用を有するヒドロキサム酸化合物も本発明の心機能不全治療剤として用いることができる。また、以下の化合物も本発明の心機能不全治療剤として用いることができる。
１）４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（特開平７−１０１９２５号）
２）［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１−ナフチル）アラニン−Ｎ−メチルアミド（ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９７／９０６６号）
３）［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチルサクシニル］−Ｌ−３−（１−ナフチル）アラニン−Ｎ−メチルアミド〔Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５，７６５−７７８（１９９７）〕
４）［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリルメチル）サクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド〔Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５，７６５−７７８（１９９７）〕
５）４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソプロピル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミド〔Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，１６，１１９−１３０（１９９９）〕
６）４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミド（米国特許４７４３５８７号）
これらの化合物は、経口又は非経口で人間に投与することができる。
経口投与の剤型としては、錠剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、硬カプセル剤等の固形製剤の他、シロップ剤、軟カプセル剤等の液剤が含まれる。これらの製剤は常法によって製剤可能であり、錠剤、顆粒剤、散剤又は細粒剤は、上記化合物又はその薬学的に許容される塩と、例えば、乳糖、でんぷん、結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、タルク等の通常用いられる医薬添加物とを混合して製造され、硬カプセル剤はこれら細粒剤又は散剤を適宜カプセルに充填することにより製造される。又、シロップ剤は白糖、カルボキシセルロース等を含む水溶液に上記化合物又はその薬学的に許容される塩を溶解又は懸濁して製造され、軟カプセル剤は、脂質賦形剤、例えば、植物油、油性エマルジョン、グリコール等に前記の化合物又はその薬学的に許容される塩を溶解または懸濁し、軟カプセルに充填して製造される。
非経口投与の剤形としては、注射剤の他、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤等の外用剤、坐薬、膣坐薬等の坐剤、噴霧剤等の経鼻投与剤等が例示される。これらの製剤は常法によって製造可能であり、例えば注射剤は、前記の化合物又はその薬学的に許容される塩を生理食塩液又は脂質賦形剤、例えば、植物油、油性エマルジョン、グリコール等に溶解又は乳化させ無菌的にアンプル又はバイヤルに封入することによって製造される。又、軟膏剤は、例えばワセリン、パラフィン、グリセリン等の基剤に前記の化合物又はその薬学的に許容される塩を加え、必要に応じて乳化剤、保存剤等を添加して常法により製造される。
本発明の薬剤の投与量は、剤型、患者の年齢、性別若しくは体重又は症状によっても異なるが、一般には、有効成分として０．１〜６００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは１０〜２００ｍｇ／ｋｇ体重／日が適量であり、これを１日１回または２〜４回に分けて投与する。
本発明の薬剤は、心肥大モデルマウスにおいて心肥大を有意に抑制し、また心機能の回復効果を示した（試験例１〜３）。組織学的検査によっても線維症または筋原線維の分解等は認められない。よって、本発明の薬剤は心肥大に伴う心機能不全の治療薬として有用である。
試験例１ 心肥大抑制効果（左心室壁の厚さの変化）
１．供試化合物
化合物ａ：４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（特開平７−１０１９２５号）
２．試験方法
胸部大動脈狭窄マウス（ＴＡＣマウス）を用いて、左右頸動脈間に収縮期圧でおよそ４５ｍｍＨｇの血圧傾斜を作製し、圧負荷により形成される、後部左心室壁の肥厚に及ぼす供試化合物の影響を観察した。
ＴＡＣマウスは、８週齢、体重２０−２５ｇのＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウスを用い、左右頸動脈間の大動脈に隣接する部位において２７−ゲージ針と縫合糸を用いて横行大動脈の縮窄をすることにより作製した。
化合物ａは、０．５％カルボキシメチルセルロースに懸濁して、ＴＡＣマウスに対して１日あたり１００ｍｇ／ｋｇを４週間腹腔内投与し、心エコー図測定により左心室壁の厚さを測定した。
３．試験結果
測定結果を表１に示す。

偽処置群に対する化合物非投与群、及び化合物非投与群に対する化合物投与群の測定値の有意差検定を実施して、結果をそれぞれ＊及び†で表した。
＊ Ｐ＜０．０５
† Ｐ＜０．０５
供試化合物は、明らかに左心室壁の肥厚を抑制する効果を示した。
試験例２ 心肥大抑制効果（心臓重量の変化）
１．供試化合物
化合物ａ：４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（特開平７−１０１９２５号）
２．試験方法
試験例１のＴＡＣマウスにおいて、４週後に体重および心臓重量を測定した。
３．試験結果
測定結果を表２に示す。
【表２】

偽処置群に対する処置群、及び化合物非投与群に対する化合物投与群の測定値の有意差検定を実施して、結果をそれぞれ＊及び†で表した。
＊ Ｐ＜０．０５
† Ｐ＜０．０５
供試化合物は、明らかに心臓重量の増加を抑制する効果を示した。
試験例３ 心機能の保護効果
１．供試化合物
化合物ａ：４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（特開平７−１０１９２５号）
２．試験方法
試験例１に同じ。
２週間経過後および４週間経過後に、心エコー図測定により心筋収縮率を測定した。
３．試験結果
測定結果を表３に示す。
【表３】

偽処置群に対する処置群、及び化合物非投与群に対する化合物投与群の測定値の有意差検定を実施して、結果をそれぞれ＊及び†で表した。
＊ Ｐ＜０．０５
† Ｐ＜０．０５
供試化合物は、明らかに心筋収縮率の低下を抑制する効果を示した。
以下に参考例及び実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。
実施例１
錠剤の製造
以下の通り、１錠中に４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（化合物ａ）１００ｍｇを含有する錠剤を得る。
［処方］

［操作］
主薬、コーンスターチ及び微結晶セルロースを混合し、これに水５０重量部に溶解したヒドロキシプロピルセルロースを加えて充分練合する。この練合物を篩に通して顆粒上に造粒して乾燥した後、得られた顆粒にステアリン酸マグネシウムを混合し１錠２５０ｍｇに打錠する。
実施例２
顆粒剤の製造
以下の通り、４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（化合物ａ）を含有する顆粒剤を得る。
［処方］

［操作］
主薬、乳糖及びコーンスターチを混合し、これに水１２０重量部に溶解したヒドロキシプロピルセルロースを加えて充分練合する。この練合物を２０メッシュの篩に通して造粒し、乾燥して整粒を行い、５００ｍｇ中に主薬２００ｍｇを含有する顆粒剤を得る。
実施例３
カプセル剤の製造
以下の通り、１カプセル中に４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（化合物ａ）１００ｍｇを含有するカプセル剤を得る。
［処方］

［操作］
上記の各成分を充分混合して、この混合末の２００ｍｇ宛をカプセルに充填してカプセル剤を得る。
実施例４
注射剤の製造
４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（化合物ａ）０．５重量部およびソルビット５重量部の混合物に注射用蒸留水を加えて溶解し、１００重量部とし、この水溶液をメンブランフィルターで濾過する。濾液を窒素置換したアンプルに５ｇずつ充填し、溶閉後、１２０℃で１５分間滅菌処理して１アンプル中に化合物ａ２５ｍｇを含有する注射剤を得る。(Technical field)
ADAM (A Disintegrin And Metalloprotease) is a molecule containing a disintegrin-like domain containing many cysteine residues and a metalloprotease-like domain as its name suggests, and can exhibit not only protease activity but also adhesion molecule activity. Has attracted attention as a functional protein.
The present invention suppresses the solubilization of this Adam molecule, more specifically, the protease activity of Adam 12, thereby inhibiting the solubilization of heparin-binding EGF (epidermal growth factor) -like growth factor (hereinafter abbreviated as HB-EGF). The present invention relates to a therapeutic agent for cardiac dysfunction associated with cardiac hypertrophy, which comprises a compound having an action to act as an active ingredient.
(Background technology)
To date, more than 20 types of molecules belonging to the Adam family have been reported [for example, Adam 17 / Nature, 385, 729 (1997), ibid. 385, 733 (1997); Adam 9 / J. Cell Biol. , 132, 717 (1996); Adam 10 / Biochem. J. et al. 317, 45 (1996); Adam 12 / Nature, 377, 652 (1995); Adam 15 / J. Biol. Chem. 271, 4593 (1996); Adam 20 / Gene, 206, 273 (1998), etc.].
Many of these have transmembrane domains, are localized in the cell membrane, and have been found to play an extremely important role in molecular control on the cell surface. For example, Adam 17 is known as a tumor necrosis factor (TNF) convertase (solubilizing enzyme). In addition, Adam 10 is involved in the control of Notch signal and plays an important role in neurogenesis, and is also suggested to be involved in the processing of membrane proteins and the degradation of extracellular matrix components. It is already known that Adam 12 has protease activity, but its physiological significance is unknown.
One of the target molecules for processing by these Adam molecules is a growth factor. To date, various growth factor families are known. For example, EGF receptor (EGFR) ligand growth factor family (in addition to EGF, HB-EGF, transforming growth factor-α, amphiregulin, epiregulin, etc. ) Is known to be solubilized by being processed in vivo as a membrane-bound type and then subjected to processing. Regarding growth factor solubilizing enzymes, Izumi et al. Describe that Adam 9 is involved in the solubilization process of HB-EGF [EMBO J. et al. 17, 7260-7272 (1998)].
Recently, growth factors have attracted attention as one of the factors that cause cardiac hypertrophy. Cardiac hypertrophy is essentially an adaptive response of the heart to various loads, but long-term cardiac hypertrophy is also associated with chronic cardiac dysfunction and sudden death, so elucidating the mechanism is important.
It is already known that vasoconstrictive drugs such as phenylephrine, angiotensin II, endothelin-1 cause cardiac hypertrophy. All of these drugs are known to bind to G-protein coupled receptors (GPCRs) and then stimulate protein synthesis through a series of signal transductions to cause cardiac hypertrophy.
Examples in which EGFR activation is involved in a series of signal transduction systems initiated by this GPCR have been reported in various cells. For example, Eguchi et al. Have shown from an experiment using rat vascular smooth muscle cells that angiotensin II causes phosphorylation of EGFR after binding to GPCR [J. Bio. Chem. , 273, 8890-8896 (1998)]. Also, Prenzel et al. Submitted a scheme in which activation of GPCR promotes the solubilization process from precursors in HB-EGF, and the resulting activated HB-EGF binds and activates EGFR. It was shown that EGFR activation induced through GPCR can be inhibited by blocking the solubilization process of HB-EGF [Nature, 402, 884 (1999)].
(Disclosure of the Invention)
An object of the present invention is to provide a new therapeutic agent for cardiac dysfunction associated with cardiac hypertrophy.
The inventors examined the effect of solubilizing enzyme inhibitor of HB-EGF (PCT International Publication No. WO01 / 70269) on EGFR phosphorylation in cardiomyocytes. As a result, EGFR induced by phenylephrine, angiotensin II and endothelin-1 was investigated. It was found that phosphorylation is inhibited, but phosphorylation by recombinant HB-EGF (solubilized HB-EGF) is not affected. EGFR phosphorylation by phenylephrine, angiotensin II and endothelin-1 is also inhibited by HB-EGF neutralizing antibody, so it is clear that solubilized HB-EGF contributes to EGFR activation. It became.
Next, the inventors identified an enzyme responsible for solubilization of HB-EGF in cardiomyocytes. Since it is known that solubilization of HB-EGF is mediated by the δ form (PKCδ) of protein kinase C, a human heart cDNA library is screened using the binding ability to PKCδ as an index. Clarified that there is.
Next, effects of solubilizing enzyme inhibitors on cardiac hypertrophy and cardiac function were confirmed in cardiac hypertrophy model mice (see Test Examples 1 to 3 below).
From the above results, the present inventors have found that soluble HB-EGF plays an extremely important role in cardiac hypertrophy, and treatment of cardiac dysfunction based on cardiac hypertrophy if this production is inhibited. It was confirmed that the present invention was effective.
(Best Mode for Carrying Out the Invention)
The therapeutic agent for cardiac dysfunction according to the present invention comprises an inhibitor for the protease activity of an Adam molecule, particularly a compound that inhibits the protease activity of Adam 12, which is a solubilizing enzyme of HB-EGF in cardiomyocytes. The active ingredient is not particularly limited as long as it is a compound that inhibits the protease activity of Adam 12 in humans. For example, Meltrin (also known as Adam 12; Meltrin) disclosed in PCT International Publication (WO97 / 31109) An antagonist of α) that can inhibit the protease activity of Adam 12 can be used as the therapeutic agent for cardiac dysfunction of the present invention. In addition, it is known that many hydroxamic acid compounds known as matrix metalloprotease (MMP) inhibitors inhibit the protease activity of Adam (for example, US Pat. Nos. 6,110,964, 6,114,361, 6,156,798, And the hydroxamic acid compound having an MMP inhibitory action can also be used as a therapeutic agent for cardiac dysfunction according to the present invention. The following compounds can also be used as the therapeutic agent for cardiac dysfunction of the present invention.
1) 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide (JP-A-7-101925)
2) [4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-3- (5,6,7,8-tetrahydro-1-naphthyl) alanine-N-methylamide ( PCT International Publication No. WO 97/9066)
3) [4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutylsuccinyl] -L-3- (1-naphthyl) alanine-N-methylamide [Bioorg. Med. Chem. , 5,765-778 (1997)]
4) [4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3- (1,2,3,4-tetrahydroisoquinolylmethyl) succinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide [Bioorg. Med. Chem. , 5,765-778 (1997)]
5) 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isopropyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylalanine-N-methylamide [Drug Design and Discovery, 16, 119-130 (1999)]
6) 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylalanine-N-methylamide (US Pat. No. 4,743,587)
These compounds can be administered to humans orally or parenterally.
The dosage forms for oral administration include liquid preparations such as syrups and soft capsules, as well as solid preparations such as tablets, granules, powders, fine granules, and hard capsules. These preparations can be prepared by conventional methods. Tablets, granules, powders or fine granules are prepared by combining the above-mentioned compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof with, for example, lactose, starch, crystalline cellulose, magnesium stearate, It is produced by mixing with commonly used pharmaceutical additives such as hydroxypropylcellulose and talc, and hard capsules are produced by appropriately filling these fine granules or powders into capsules. A syrup is prepared by dissolving or suspending the above compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an aqueous solution containing sucrose, carboxycellulose, etc., and soft capsules are lipid excipients such as vegetable oils and oil emulsions. It is produced by dissolving or suspending the above-mentioned compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in glycol or the like and filling it in soft capsules.
Examples of parenteral dosage forms include injections, external preparations such as ointments, lotions and creams, suppositories such as suppositories and vaginal suppositories, and nasal administration agents such as sprays. These preparations can be produced by a conventional method. For example, an injection is prepared by dissolving the above-mentioned compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in a physiological saline solution or a lipid excipient such as a vegetable oil, an oily emulsion, or a glycol. Alternatively, it is produced by emulsifying and aseptically enclosing it in an ampoule or vial. The ointment is prepared by a conventional method by adding the above-mentioned compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a base such as petrolatum, paraffin, glycerin and the like, and adding an emulsifier, a preservative, etc. as necessary. The
The dose of the drug of the present invention varies depending on the dosage form, patient age, sex or body weight or symptoms, but generally 0.1 to 600 mg / kg body weight / day, preferably 10 to 200 mg / kg as an active ingredient. The body weight / day is an appropriate amount, which is administered once a day or divided into 2 to 4 times.
The drug of the present invention significantly suppressed cardiac hypertrophy in cardiac hypertrophy model mice and showed an effect of restoring cardiac function (Test Examples 1 to 3). Histological examination does not show fibrosis or degradation of myofibrils. Therefore, the agent of the present invention is useful as a therapeutic agent for cardiac dysfunction associated with cardiac hypertrophy.
Test Example 1 Cardiac hypertrophy inhibitory effect (change in left ventricular wall thickness)
1. Test compound Compound a: 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide (JP-A-7-101925)
2. Test method Using a thoracic aortic stenosis mouse (TAC mouse), a blood pressure gradient of approximately 45 mmHg was created between the left and right carotid arteries at systolic pressure, and the test compound exerted on the thickening of the posterior left ventricular wall formed by pressure loading The effect of was observed.
TAC mice are 8 weeks old, C57BL / 6J male mice weighing 20-25g, and contracting the transverse aorta using a 27-gauge needle and suture at the site adjacent to the aorta between the left and right carotid arteries. It was produced by.
Compound a was suspended in 0.5% carboxymethylcellulose, 100 mg / kg per day was intraperitoneally administered to TAC mice for 4 weeks, and the thickness of the left ventricular wall was measured by echocardiography.
3. The test results are shown in Table 1.

A significant difference test was performed on the measured values of the compound non-administered group with respect to the sham-treated group and the compound-administered group with respect to the compound non-administered group, and the results were represented by * and †, respectively.
* P <0.05
† P <0.05
The test compound clearly showed the effect of suppressing left ventricular wall thickening.
Test Example 2 Cardiac hypertrophy inhibitory effect (change in heart weight)
1. Test compound Compound a: 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide (JP-A-7-101925)
2. Test Method In TAC mice of Test Example 1, body weight and heart weight were measured after 4 weeks.
3. The test results are shown in Table 2.
[Table 2]

A significant difference test was performed on the measured values of the treatment group for the sham treatment group and the compound administration group for the non-compound administration group, and the results were represented by * and †, respectively.
* P <0.05
† P <0.05
The test compound clearly showed the effect of suppressing the increase in heart weight.
Test Example 3 Protective effect of cardiac function Test compound Compound a: 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide (JP-A-7-101925)
2. Test method Same as Test Example 1.
After 2 weeks and 4 weeks, the myocardial contraction rate was measured by echocardiography.
3. Table 3 shows the test results.
[Table 3]

A significant difference test was performed on the measured values of the treatment group for the sham treatment group and the compound administration group for the non-compound administration group, and the results were represented by * and †, respectively.
* P <0.05
† P <0.05
The test compound clearly showed the effect of suppressing the decrease in myocardial contraction rate.
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to reference examples and examples.
Example 1
Manufacture of tablets 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide (compound a) 100 mg in one tablet as follows. A tablet containing is obtained.
[Prescription]

[operation]
The main ingredient, corn starch and microcrystalline cellulose are mixed, and hydroxypropylcellulose dissolved in 50 parts by weight of water is added thereto and kneaded sufficiently. The kneaded product is passed through a sieve, granulated on the granules and dried, and then the resulting granules are mixed with magnesium stearate and compressed into one tablet of 250 mg.
Example 2
Production of granule Granules containing 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide (compound a) as follows Get the agent.
[Prescription]

[operation]
The main drug, lactose and corn starch are mixed, and hydroxypropylcellulose dissolved in 120 parts by weight of water is added and kneaded sufficiently. This kneaded product is passed through a 20-mesh sieve, granulated, dried and sized to obtain granules containing 200 mg of the active ingredient in 500 mg.
Example 3
Production of capsules 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide (compound a) in one capsule as follows Capsules containing 100 mg are obtained.
[Prescription]

[operation]
Each of the above components is mixed well, and 200 mg of the mixed powder is filled into a capsule to obtain a capsule.
Example 4
Preparation of injection 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -isobutyl-3-methylsuccinyl] -L-phenylglycine-N-methylamide (compound a) 0.5 parts by weight and sorbite 5 parts by weight Add distilled water for injection to dissolve it to 100 parts by weight, and filter this aqueous solution with a membrane filter. The filtrate is filled with 5 g each in an ampoule substituted with nitrogen, melted and closed, and then sterilized at 120 ° C. for 15 minutes to obtain an injection containing 25 mg of compound a in one ampoule.

Claims (3)

アダム分子のプロテアーゼ活性に対する阻害剤を有効成分とする、心肥大に伴う心機能不全の治療薬。A therapeutic agent for cardiac dysfunction associated with cardiac hypertrophy, comprising an inhibitor of the protease activity of the Adam molecule as an active ingredient. アダム分子のプロテアーゼ活性に対する阻害剤がマトリクスメタロプロテアーゼ阻害活性を有するヒドロキサム酸化合物である、請求項１の治療薬。The therapeutic agent according to claim 1, wherein the inhibitor for the protease activity of the Adam molecule is a hydroxamic acid compound having matrix metalloprotease inhibitory activity. アダム分子がアダム１２である請求項１又は２の治療薬。The therapeutic agent according to claim 1 or 2, wherein the Adam molecule is Adam 12.