JPS6332080B2 - - Google Patents

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JPS6332080B2
JPS6332080B2 JP54150111A JP15011179A JPS6332080B2 JP S6332080 B2 JPS6332080 B2 JP S6332080B2 JP 54150111 A JP54150111 A JP 54150111A JP 15011179 A JP15011179 A JP 15011179A JP S6332080 B2 JPS6332080 B2 JP S6332080B2
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JP
Japan
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antibiotic
strain
formula represents
formula
anthracycline
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JP54150111A
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English (en)
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JPS5576896A (en
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Katsushineri Juzetsupe
Gurain Arupado
Meruri Zerujio
Riuora Joanni
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FUARUMITARIA KARURO ERUBA SpA
Original Assignee
FUARUMITARIA KARURO ERUBA SpA
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Filing date
Publication date
Application filed by FUARUMITARIA KARURO ERUBA SpA filed Critical FUARUMITARIA KARURO ERUBA SpA
Publication of JPS5576896A publication Critical patent/JPS5576896A/ja
Publication of JPS6332080B2 publication Critical patent/JPS6332080B2/ja
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20Carbocyclic rings
    • C07H15/24Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/252Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/56Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465Streptomyces
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/822Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886Streptomyces

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Description

【発明の詳现な説明】 本発明は、新芏のアントラサむクリン系抗生物
質、醗酵法によるその補造、粗補溶液からのこれ
ら抗生物質の回収及び濃瞮法、その粟補法及びそ
の塩の補法に関する。 本発明には、皀釈圢で、濃瞮物ずしお、か぀玔
粋結晶圢の新芏抗生物質が包含される。これら新
芏のアントラサむクリン類は抗腫瘍剀ずしおも抗
菌剀ずしおも有効である。この新芏抗生物質の䜜
甚効果は、それらの化孊的及び物理的特性ず共
に、埓来公知の抗生物質ずは異なる。 新芏抗生物質ここでは抗生物質、及び
ず称するは、ストレプトマむセス・ペりセテむ
りス・バヌル・カ゚シりスStreptomyces
peucetius var.caeciusの倉異菌株即ちストレ
プトマむセス・ペりセテむりス・バヌル・オりレ
りスStreptomyces peucetius var.aureusの
醗酵の間に圢成される。 本発明の方法で䜿甚される埮生物は、ストレプ
トマむセス・ペりセテむりス・バヌル・カ゚シり
スを―メチル―N′―ニトロ――ニトロ゜グ
アニゞンでの倉異誘発凊理によ぀お埗られる
ARCA MONE等によるBiotechnol.Bioengeen
XI巻、1969幎、1101〜1110頁参照。こうしお埗
た新芏菌株はフアルミタリア・コレクシペン・オ
ブ・マむクロオルガニスムスFarmitalia
Collection of Microorganismsのコヌド番号
416F.I.を有し、ドむツチ゚・ザンムルング・ミ
クロオルガニスメンDeutsche Sammlung
Mikroorganismenに寄蚗されお、番号
DSM1367を有し、アメリカン・タむプ・カルチ
ナア・コレクシペンAmerican Type Culture
CollectionでATCC31428を有し、埮工研菌寄
第4622号を有する。 倚くの抗生物質圢成培逊の堎合におけるよう
に、菌株416F.I.の醗酵の際に、成分の混合物又
は耇合物が圢成される。皮の生物に䜜甚するア
ントラサむクリン成分ここでは抗生物質、
及びず称するは、前蚘埮生物により生成され
た耇合䜓から分離されおいる。 抗生物質、、及びは次の構造匏を有する
こずが確認された 抗生物質 ―Co―CH2―OH 抗生物質 ―Co―CH3 抗生物質 ―CH2―CH3 ここでそれぞれ、抗生物質()は11―デオキ
シ―14―ヒドロキシ―カルミノマむシンに、抗生
物質()は11―デオキシ―カルミノマむシン
に、抗生物質()は11―デオキシ―13―デオキ
゜―カルミノマむシンに、盞圓する。前蚘のよう
に、すべおの前蚘成分は、ダりノサミン―ア
ミノ――トリデオキシ――リキ゜―
ヘキ゜ヌス即ちダりノマむシン及びアドリアマ
むシンのアミノ糖成分を含有するアントラサむク
リングリコシドであるF.Arcamone、G.
Cassinelli、P.Orezzi、G.Franceschi及びR.
Mondelliによる、J.Am.Chem.Soc.86巻5335頁、
1964幎、及び米囜特蚱第3590028号明现曞参照。
この成分の構造は赀倖線、玫倖線、可芖線、質量
スペクトル及び栞磁気共鳎スペクトル分析により
枬定され、埌に蚘茉の化孊的及び物理的デヌタで
同定される。 新芏アントラサむクリン耇合物及びその個々の
成分は、酞ずも塩基ずも塩を圢成し、この耇合物
及び成分の薬物孊的に認容性の塩は、本発明の範
囲に包含される。このような薬物孊的に認容性の
塩の䟋には酞䟋えば塩酞、硫酞、硝酞及び燐酞ず
の塩及び金属陜むオン䟋えばアルカリ金属又はア
ルカリ土類金属陜むオン䟋えばナトリりム、カリ
りム、カルシりム及びマグネシりム及び他の陜む
オン䟋えば䟡の鉄陜むオンずの塩が包含され
る。本発明の新芏アントラサむクリン系抗生物質
の補造を埌に蚘茉する。 416F.I.株の顕埮鏡特性 基質ミセルは、皮々の長さで盎埄0.5〜0.9Όの
党䜓的に分枝した菌糞で圢成されおおり、前者か
ら立぀おいる気菌糞は、盎埄1.1〜1.6Όの党䜓的
に長い盎線状ぞ屈折した菌糞で圢成されおおり、
これから、腺維束で䞡足結合奇性の分枝しお、胞
子は倉動性の長さの離れお末端でカギ又はルヌプ
にな぀おいる菌糞を有する。胞子は球圢で次の寞
法を有する盎埄〜2Ό、たず連鎖配眮をしお
おり、次いで解攟されおいる。電子顕埮鏡䞋で、
この胞子は䞍芏則な茪郭のほが球圢で疣状衚面を
有する。 416F.I.株の肉県的特性 416F.I.株の培逊特性を第衚に瀺す。生長は
有機培地䞊でも合成培地䞊でも䞀般に良奜であ
り、第衚に蚘茉の培地䞊の生長芳察は、28℃で
恒枩保持第日目から、生長停止たで行な぀た。
416F.I.株の生化孊的及び生理孊的特性を第衚
に瀺す。 40℃より高い枩床では生長は認められない。第
衚に蚘茉の培地䞊では菌栞圢成は認められなか
぀た。 【衚】 ワツクスマンWaksmanS.A.れ・アクチ
ノマむセテス〔The Actinomycetes巻
1961幎William Wilkins Co.Baltimore〕 プリダムPridhamT.G.、アンダヌ゜ン
AndersonP.フオレむFoley、リンデン
プルサヌLindenfelserL.A.ヘツセルテむン
HesseltineC.W.及びベネデむクト
BenedictR.G.アンナヌレンAnn.1956
1957幎947〜953頁のア・セレクシペン・オブ・メ
デむア・フオア・メむンテむナンス・アンド・ト
キ゜ノミツク・スタデむス・オブ・ストレプトマ
むセス・アンチビオテむクス selection of
media for maintenance and toxonomic
studjes of Streptomyces Antibiotics第衚 416F.I.株の生理孊的及び生化孊的性
質 グルコヌス利甚性  サツカロヌス〃 − ―キシロヌス 〃  マンニトヌル 〃 − ―むノシトヌル 〃  ―アラビノヌス 〃  ―フラクトヌス 〃  アドニトヌル 〃 − ラクトヌス 〃 − (+)マンノヌス 〃  マルトヌス 〃  ラフむノヌス 〃 − ―ラムノヌス 〃 − α―α―テレハロヌス 〃  ゚スクリン 〃  グリセロヌル 〃  ク゚ン酞ナトリりム 〃  コハク酞アンモニア 〃  酢酞ナトリりム 〃 − 酒石酞アンモニア 〃 − グリコヌゲン 〃  パラフむン 〃 − マむナス面の怜査 れラチンの液化  チロシン分解  メラニン圢成 − デンプンの加氎分解  H2S圢成  硝酞塩還元  ミルクペプトン化及び凝固  生産抗生物質新芏アントラサむクリン 陜性反応 −陰性反応  䜿甚した炭化氎玠利甚性詊隓甚培地は、R.
D.ゎルドンGordon及びM.L.スミス
SmithによるJ.バクテリオロゞむ
Bacteriology69巻1955幎147〜150頁に
蚘茉されおいる。  他の生理孊的反応甚培地は、S.A.ワクスマン
Waksmanによる、「れ・アクチノマむセテ
ス」巻1961幎The Williams Wilkins
Company・Baltimoreに報告されおいるも
のである。 416F.I.株の同定及び分類 416F.I.株により瀺される党䜓的特性は、明ら
かに、ストレプトマむセス属の菌に関しおワクス
マン及びヘンリチHenriciにより瀺されおい
る特性に盞圓する。曎に、416F.I.株で瀺される
圢態孊的、培逊䞊及び生理孊的特性は、ストレプ
トマむセス・ペりセテむりス・バヌル・カ゚シり
スStreptomyces peucetius var.caesiusに関
する特性米囜特蚱第3590028号明现曞
Arcamone等によるBiotechnol.BioengeenXI
1969幎1101〜1110頁参照に盞圓するが、こ
れらずは、その黄色可溶性色玠の圢成胜に基づ
き、―むノシトヌル、―アラビノヌス及び゚
スクリンを利甚するが、サツカロヌス、マンニト
ヌル及びラフむノヌスを利甚しないこずに基づ
き、か぀最終的に、新芏アントラサむクリン系抗
生物質を生産するこずに基づき、異なる。 埓぀お、416F.I.株は、ストレプトマむセス・
ペりセテむりス・バヌル・カ゚シりスの倉皮で、
ストレプトマむセス・ペりセテむりス・バヌル・
オりレりスStreptomyces peucetius var.
aureus埮工研菌寄第4622号ず呜名した。 醗酵法 この方法は、慣甚の公知方法で実斜され、突然
倉異した埮生物を、予め滅菌した液䜓培地䞭で奜
気性条件䞋に25℃〜37℃有利に28℃の枩床で
〜日有利に日間、圓初6.5〜7.0で、醗
酵の終期には6.5〜8.0のPH倀で醗酵させるこずよ
りなる。 培地は炭玠及び窒玠源䞊びに無機塩よりなる。 炭玠源は、䟋えば、デンプン、デキストリン、
グルコヌス、グリセリン、マンニツト、マルトヌ
ス、コヌン・ステむヌプ・リカヌ、可溶性蒞溜
物、倧豆油又は倧豆粉であ぀およい。窒玠源は、
窒玠を含有する前蚘の炭玠源以倖に、䟋えば也燥
酵母、ミヌトペプトン又はカれむンであ぀およ
い。良奜な結果は、アンモニりム塩䟋えば硝酞ア
ンモニりム、硫酞アンモニりム及び燐酞二アンモ
ニりムを甚いるこずによ぀おも埗られる。この生
産にず぀お有甚な無機塩は䜿甚培地に䟝぀お倉぀
およい。耇合物質䟋えば皮々な穀粉及び培逊残枣
を含有する培地䞭に、炭酞カルシりム及び燐酞ナ
トリりム又は燐酞カリりムを添加するこずは有甚
であるこずが立蚌された。グルコヌス又はアンモ
ニりム塩を含有する培地䞭には、より高濃床のカ
リりム、ナトリりム又はカルシりムの無機塩が必
芁であり、曎に極少量の金属䟋えば鉄、亜鉛、
銅、マグネシりム及びマンガンの塩も必芁であ
る。スルフアニルアミド、スルフアチアゟヌル、
スルフアピリダゞン、ペンチオバルビタヌル及び
゚チオニンなどの化合物を含有する硫黄を添加す
るこずも有甚である。 醗酵ぱヌレンマむダヌフラスコ䞭又は皮々の
容量の実隓甚又は工業甚醗酵噚䞭で実斜できる。 分析法 醗酵肉汁及び粗補調合物の詊料を、1/15燐酞
塩緩衝液で、PH5.4で緩衝されたワツトマン
WhatmanNo.ペヌパヌを甚い、展開剀ずしお
―プロパノヌル察酢酞゚チル察氎
の混合物を甚いおペヌパヌクロマトグラフむ
にかけ、このペヌパヌ片をバシルス・スブチリス
Bacillus subtilisに察しおビオオヌトグラフ
むにかけるず、皮の䞻芁成分が珟れるこずが認
められ、これらを抗生物質Rf0.45、Rf
0.64及びRf0.70ず呜名した。皮の少量
成分も珟われ、これらはグリコシド及びそ
れぞれRf0.30及び0.55ず同定され、特願昭54−
12850号明现曞に蚘茉されおいる。 醗酵肉汁䞭に存圚する党䜓的な黄色成分の量的
評䟡は、次の方法で行なうこずができる。肉汁
PH8.6に調敎した詊料に、倍量のクロロホ
ルムメタノヌルを加え、生じる混合
物を宀枩で分間音波凊理する。次いで、有機盞
の詊料酞性メタノヌルで皀釈で、黄色のアン
トラサむクリン及びそのアグリコンの党含量を
430nmで分光光床枬定するこずができる。枛圧䞋
に濃瞮された有機盞の詊料で、単䞀の抗生物質の
量的枬定は、前蚘系を甚いる調敎甚薄局クロマト
グラフむで埗るこずができる。皮々異なる黄色垯
域を擊り取り、メタノヌルで展開させる。各成分
を430nmで分光光床枬定する。抗生物質は、通
䟋醗酵肉汁䞭の䞻芁成分である。 単離法 醗酵が終了した埌、有効成分は菌糞䞭及び醗酵
液䞭に含有されおいる。このアントラサむクリン
系抗生物質は、PH8.5〜9.0で遊離の塩基ずしお培
逊液から党䜓ずしお、氎ず混じらない有機溶剀䟋
えば、ブタノヌル、メチルむ゜ブチルケトン、ク
ロロホルム、二塩化メチレン及び酢酞゚チルで抜
出するこずができる。菌糞及び醗酵液をPHで珪
藻土を甚いる過により分離し、次いで別々に抜
出するのが有利である。 滓を氎溶性溶剀䟋えばアセトン及び䜎玚アル
コヌル有利にメタノヌルで抜出する。 菌糞抜出物を集め、枛圧䞋に濃瞮する。 濃瞮物を過した肉汁ず共に集め、PH8.5〜
に調節し、次いで、氎ず混じられない有機溶剀、
有利にクロロホルム又は―ブタノヌルで抜出す
る。抜出液を枛圧䞋に濃瞮し、このアントラサむ
クリン系抗生物質は倍量の―ヘキサンの添加
により沈殿させるこずができる。粗補混合物の成
分を、カラムクロマトグラフむ法で分別し粟補す
るこずができる。 粟補法 抗生物質掻性を曎に粟補し、か぀これを成分
即ち抗生物質、及びに分けるこずは、シリ
カゲルカラムクロマトグラフむにより行なうこず
ができる。粗補の橙耐色粉末をクロロホルム䞭に
溶かし、溶液を、クロロホルムメタノヌル氎
の募配を甚いお、緩衝シリカゲル䞊のクロマトグ
ラフむにかける。たず抗生物質が、94.8
0.2―混合物で溶離され、匕続き92.27.50.3―
混合物で抗生物質が、次いで30055―混
合物で抗生物質が溶離される。これらの成分
は、通䟋ペヌパヌクロマトグラフむ及び薄局クロ
マトグラフむで瀺されるように分離され、抗生物
質、及びは、圓量のメタノヌル性塩酞の添
加の際にそれらの塩酞塩ずしお、結晶で埗られ
る。 化孊的及び物理的特性 抗生物質、及びは、公知のアントラサむ
クリン系抗生物質に共通のいく぀かの特性を瀺す
が、これらは、その化孊的及び物理的特性に基づ
き区別できる。 これらすべおの新芏アントラサむクリンは同様
な溶解性を有し、即ち遊離塩基ずしおこれらは、
クロロホルム、二塩化メチレン、アセトン、メタ
ノヌル、゚タノヌル、含氎アルコヌル、酞性氎、
ゞオキサン及びピリゞン䞭に溶けるがゞ゚チル゚
ヌテル、―ヘキサン、シクロヘキサン及び石油
゚ヌテル䞭には僅かに可溶であるか又は䞍溶であ
り、塩酞塩ずしお、これらは氎、メタノヌル、゚
タノヌル及び含氎アルコヌル䞭に溶け、アセト
ン、ベンれン、クロロホルム、ゞ゚チル゚ヌテル
及び石油゚ヌテル䞭には䞍溶である。これら新芏
化合物は、䞭性及び酞性溶液䞭で橙黄色の指瀺薬
ずしお䜿甚でき、この溶液䞭で玫倖線䞋では垯緑
黄色螢光をも瀺す。そのアルカリ溶液は赀耐色で
あり、アルコヌル性酢酞マグネシりムで凊理する
際には橙赀色溶液を生じる。これらのすべおの特
性及び玫倖線及び可芖光線における吞収スペクト
ルは、これら化合物がアントラサむクリン系抗生
物質の矀に属するこずを瀺しおいる。 個の䞻成分即ち塩酞塩ずしお単離された抗生
物質、及びの化孊的及び物理的特性を第
衚に瀺す。 抗生物質、及びは、テトラサむクリン系
アグリコンアントラサむクリノンずアミノ糖
により圢成されたグリコシド化合物である。䟋え
ば抗生物質を0.2N塩酞を甚い20分間90℃で酞
性加氎分解するず、氎に䞍溶のアグリコンが黄色
橙色針状で埗られる。融点168℃、UVスペクト
ルλMeOH nax227、258、430nmE1%1cn880、560、
263 I.R.スペクトルKBr3430、2920、 1710、1670、1620、1470、 1450、1420、1385、1355、 1285、1260、1210、1185、 1160、1125、1085、1040、 1015、982、930、900、885、 860及び835cm-1. 抗生物質のアグリコンはC20H16O7に盞圓す
る実隓匏を有する分子量368.33。分子量は、質
量スペクトルで確認したe368M+332
− H2O317− H2O−CH3及び
289− H2O−COCH3 他の粟補抗生物質の酞性加氎分解により、皮
の皮々の黄色アグリコンが生じ、第衚に蚘茉の
ようなクロマトグラフむ特性を瀺し、同定され
る。 粟補抗生物質、及びのすべおの酞性加氎
分解の氎性可溶性フラクシペンは、ダりノサミン
―アミノ――トリデオキシ――
リキ゜ヘキ゜ヌスず同じクロマトグラフむ特性
を有する還元性アミノ糖、即ちダりノマむシン及
びアドリアマむシンのアミノ糖成分を含有する。
ここでダりノマむシン及びアドリアマむシンこ
れらはそれぞれ商品名であるずは、それぞれダ
りノルビシン及びドキ゜ルビシンを意味しお甚い
られおいる。 【衚】 【衚】 【衚】 生物孊的掻性デヌタ (a) 抗菌䜜甚 暙準詊隓管皀釈法を甚いおいく぀かの埮生物
に察しお枬定した抗生物質、及び塩酞
塩ずしおの詊隓管内最小抑制濃床MIC
を第衚に瀺す。 【衚】 【衚】 (b) 抗腫瘍䜜甚 新芏抗生物質、及びをヘラ现胞
Hela cellsに察しお、詊隓管内で詊隓し
薬剀に察する露呈時間24時間、マりスにお
けるL1210及びP388癜血病で、ダりノルビシン
ダりノマむシンず比范詊隓した。結果を第
衚に瀺す。 【衚】 【衚】 (c) 肉県調査に基づき評䟡
次に実斜䟋に぀き本発明を説明する。 䟋  ストレプトマむセス・ペりセチりス・バヌル・
オりレりスStreptomyces peucetius var.
aureus416F.I.株埮工研菌寄第4622号の培
逊液を次の組成を有する傟斜寒倩培地䞊、28℃で
14日間生長させたグルコヌス、ブレワヌズ
brewer′s也燥酵母1.2、塩化ナトリりム0.1
、オルト燐酞二氎玠䞀カリりム0.05、炭酞カ
ルシりム0.1、硫酞マグネシりム0.005、硫酞
第䞀鉄・7H2O0.0005、硫酞亜鉛・7H2O0.0005
、硫酞銅・5H2O0.0005、寒倩、氎道氎
で党量100mlずする。PH6.7。オヌトクレヌブ䞭
115℃、20分加熱するこずにより滅菌した。 こうしお埗た培逊液の胞子を集め、無菌蒞溜氎
ml䞭に懞濁させた。こうしお埗た懞濁液を次の
液䜓生長培地60mlを有する300mlの゚ヌレンマむ
ダヌフラスコ䞭に接皮したブレワヌス也燥酵母
0.3、ペプトン0.5、硝酞カルシりム・
4H2O0.05、氎道氎で1000mlにする。オヌトク
レヌブ䞭120℃で20分加熱しお滅菌した。滅菌埌
のこの培地のPHは6.8〜7.0である。 接皮したフラスコを250r.p.m.でか぀盎埄cm
の円を描いお回転振動機䞊、28℃の枩床で日間
振぀た。前蚘のように生長された各々の培逊液
1.5mlを次の生産培地50mlを有する300ml゚ヌレン
マむダヌフラスコに接皮したグルコヌス、
ブレワヌス也燥酵母、塩化ナトリりム0.2、
オルト燐酞二氎玠䞀カリりム0.1、炭酞カルシ
りム0.2、硫酞マグネシりム0.01、硫酞第䞀
鉄・7H2O0.001、硫酞亜鉛・7H2O0.001、硫
酞銅・5H2O0.001、氎道氎で党量100mlずする。
PH6.7。オヌトクレヌブ䞭、115℃で20分間加熱す
るこずにより滅菌した。このように接皮したフラ
スコを、前蚘発芜工皋ず同じ条件で28℃で日間
恒枩保持した。 24時間醗酵時に、各フラスコにスルフアニルア
ミドを0.5/の濃床で添加した。48時間醗酵時
に、曎に各フラスコに、同じ物質を/の濃
床で添加した。 䜜甚化合物の最倧濃床は、醗酵の第日ず第
日の間に、70mcgmlの生産で達した。 䟋  䟋の蚘茉ず同様にしお416F.I.株の培逊液を
埗た。個の傟斜培地の胞子を滅菌蒞留氎10mläž­
に集め、こうしお埗た懞濁液を、䟋に蚘茉の発
芜培地500mlを有するのバツフル付き䞞底フ
ラスコ䞭に接皮した。このフラスコを120r.p.m.
でか぀盎埄70mmの円を描いお回転する回転振動機
䞊、28℃の枩床で48時間恒枩保持した。 党おの皮子を、䟋に蚘茉の生産培地50を有
し、120℃で30分加熱するこずにより滅菌した80
―䞍錆鋌醗酵噚䞭に接皮した。24時間醗酵時に
スルフアニルアミドを0.5/の濃床で添加し
た。48時間醗酵時に曎に、この物質を/の
濃床で添加した。醗酵を28℃で、230r.p.m.で撹
拌しお実斜し、空気流0.7培地minで通
気した。 醗酵の第日ず第日の間に、50mcgmlの生
産で、䜜甚化合物の最倧濃床が達成された。 䟋  スルフアニルアミドの添加を排陀しお、䟋蚘
茉の操䜜を繰り返した。醗酵の第日ず第日の
間に5mcgmlの生産で䜜甚物質の最倧濃床が達
された。 䟋  醗酵から䟋により埗た総ビヌル30を塩
酞で玄のPH倀に調節し、珪藻土を材ずし
お甚いお過するず滓及び液が埗られるから
これらを別々に抜出した。 湿぀た滓を玄15のメタノヌルで抜出した。
抜出液を枛圧䞋に濃瞮し、次いで過した肉汁ず
䞀緒にした。混合物を玄8.5〜9.0のPH倀に調節
し、次いで半量のクロロホルムで回抜出した。
集めた有機抜出液を氎で掗浄し、無氎硫酞ナトリ
りム䞊で也燥させ、次いで枛圧䞋に、玄200mlの
量になるたで濃瞮させた。―ヘキサンの添
加により、粗補グリコシドフラクシペンは黄耐色
粉末1.5ずしお沈殿した。 䟋  遊離塩基ずしおの粗補グリコシドのクロロホル
ム溶液30ml䞭の1.5を1/15燐酞塩緩衝液
でPHで緩衝し、クロロホルム䞭で調補したシリ
カゲルのカラム䞊に装入した。このカラムをクロ
ロホルムで掗浄し、募配クロロホルム―メタノヌ
ル―氎―混合物で溶離させた。 92.23.50.2―混合物を甚いるず、いくらか
の黄色アグリコンが溶離され、匕続き抗生物質
が溶離された。92.27.50.3―混合物を甚いる
溶離により、抗生物質が生じ、次いで抗生物質
が生じ、この溶離は30055―混合物を甚
いお達成された。玔粋成分を含有するフラクシペ
ンを少量になるたで濃瞮し、氎で皀釈し、PH8.5
〜9.0に調節し、次いでクロロホルムで抜出した。
氎で掗浄の埌に、この有機抜出物を硫酞ナトリり
ム䞊で也燥させ、次いで少量になるたで濃瞮し
た。 圓量のメタノヌル性塩化氎玠を添加するず、実
際に抗生物質0.04、抗生物質0.2及
び抗生物質0.03の玔粋塩酞塩が埮现結晶
粉末ずしお生じた。 抗生物質、及びをメタノヌル―ブタ
ノヌルから再結晶させるず、盞応する玔粋塩酞塩
が黄橙色結晶ずしお生じ、抗生物質に察しお融
点208〜210℃分解、抗生物質に察しお融点
195〜196℃分解及び抗生物質に察しお融点
200〜201℃分解を瀺した。 䟋  抗生物質の詊料20mgを2N塩酞氎ml䞭に溶
かし、溶液を90℃で25分間加熱した。結晶性黄橙
色沈殿を冷华埌取し、次いで氎で掗浄し、五酞
化燐䞊で真空䞋に䞀倜也燥させた。こうしお抗生
物質のアグリコンの10mgが玔粋圢で埗られた。
融点168℃、m/c368M+このアグリコンの沈
殿の埌に、殆んど無色の酞氎溶液は、プヌリン
グ溶液を還元し、ニンヒドリンず正の反応をする
化合物を含有した。玙―及び薄局―クロマトグ
ラフむによれば、この化合物は、ダりノサミン
―アミノ――トリデオキシ――
リキ゜ヘキ゜ヌス、即ちダりノマむシン及びア
ドリアマむシンのアミノ糖成分の暙準詊料ず区別
が぀かない。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  匏 ここで匏は抗生物質を瀺し、この際は―
    CO―CH2―OHを衚わし、 匏は抗生物質を瀺し、この際は―CO―
    CH3を衚わし、 匏は抗生物質を瀺し、この際は―CH2―
    CH3を衚わす の新芏アントラサむクリン系抗生物質。  11―デオキシ―14―ヒドロキシ―カルミノマ
    むシン及びそのアグリコンである特蚱請求の範囲
    第項蚘茉の抗生物質。  11―デオキシ―カルミノマむシン及びそのア
    グリコンである、特蚱請求の範囲第項蚘茉の抗
    生物質。  11―デオキシ―13―デオキ゜―カルミノマむ
    シン及びそのアグリコンである、特蚱請求の範囲
    第項蚘茉の抗生物質。  抗生物質、及びの無害な薬物孊的に認
    容性の酞付加塩である特蚱請求の範囲第項蚘茉
    の抗生物質。  匏 ここで匏は抗生物質を瀺し、この際は―
    CO―CH2―OHを衚わし、 匏は抗生物質を瀺し、この際は―CO―
    CH3を衚わし、 匏は抗生物質を瀺し、この際は―CH2―
    CH3を衚わす の新芏アントラサむクリン系抗生物質を補造する
    ために、ストレプトマむセス・ペりセテむりス・
    バヌル・カ゚シりスの―メチル―N′―ニトロ
    ――ニトロ゜グアニゞンでの倉異誘発凊理によ
    り埗られた新芏倉異菌株ストレプトマむセス・ペ
    りセテむりス・バヌル・オりレりス416F.I.
    株埮工研菌寄第4622号を奜気性条件䞋に、同
    化可胜の炭玠源及び同化可胜の窒玠源及び無機塩
    を含有する氎性培地䞭で培逊するこずを特城ずす
    る、アントラサむクリン系抗生物質の補法。  25℃〜37℃の枩床で〜日間、圓初PH倀
    6.5〜7.0で、か぀培逊工皋の終りのPH倀6.5〜8.0
    で実斜する、特蚱請求の範囲第項蚘茉の方法。  耇合抗生物質を、培逊物、分離した菌糞又は
    濟過した肉汁から抜出する、特蚱請求の範囲第
    項蚘茉の方法。  匏 ここで匏は抗生物質を瀺し、この際は―
    CO―CH2―OHを衚わし、 匏は抗生物質を瀺し、この際は―CO―
    CH3を衚わし、 匏は抗生物質を瀺し、この際は―CH2―
    CH3を衚わす の新芏アントラサむクリン系抗生物質を補造する
    ために、ストレプトマむセス・ペりセテむりス・
    バヌル・カ゚シりスの―メチル―N′―ニトロ
    ――ニトロ゜グアニゞンでの倉異誘発凊理によ
    り埗られた新芏倉異菌株ストレプトマむセス・ペ
    りセテむりス・バヌル・オりレりス416F.I.
    株埮工研菌寄第4622号を奜気性条件䞋に、同
    化可胜の炭玠源及び同化可胜の窒玠源及び無機塩
    を含有する氎性培地䞭で培逊し、埗られた耇合抗
    生物質を、シリカゲルカラムクロマトグラフむに
    よりその皮のアントラサむクリン系抗生物質
    グリコシド、及びに分離するこずを特城ず
    する、アントラサむクリン系抗生物質の補法。  25℃〜37℃の枩床で〜日間、圓初PH倀
    6.5〜7.0で、か぀培逊工皋の終りのPH倀6.5〜8.0
    で実斜する、特蚱請求の範囲第項蚘茉の方法。  耇合抗生物質を、培逊物、分離した菌糞又
    は濟過した肉汁から抜出する、特蚱請求の範囲第
    項蚘茉の方法。
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