JPS63305249A - ヒトの体液中の抗体の測定法及び対照試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ｉ朶上の坏１２用分野 本発明は、免疫検定のノ原則に依るヒトの体液中の抗体
の測定法及び適当な対照試薬に関し、この際、測定すべ
き抗体を含有する試料を、少なくとも２匈の異なる受容
体Ｒ１、Ｒ２（そのうち受容体Ｒ１は測足丁べき抗体に
対して物奔性の抗ふ決定因子を有し、受容体Ｒ２は標識
を何する）と共に恒温保持し、結合された標＠七有する
部分を非結合標識を有する部分から分離し、かつ標ｔａ
ｔ−両部分の１方でＩＩＪ定する。

従来の技術 体液中に存在する抗体の測定は屡々白望てれる。すなわ
ち測定される抗体の検出は、感染したか又はアレルギー
が生じているか金指摘する。

これは例えば、医薬投与の際アレルギーによるショック
全考慮すべきかどうか調べる際に重要である。更に自己
抗体の検出によシ自己免疫疾患を診断することができる
。例えは組換え蛋白質（例えばインシュリン、エリスロ
ポエチン（Ｅｒ７ｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ））　１に含
有する医薬での治療によシ生じる抗体、例えば抗インシ
ュリンー坑体の検出も重要である。

抗体は血中で隘めて少葺で存在するので、その検出には
極めて敏感な方法を必波とする。

従ってその検出には免疫検定の原則による方法がとられ
る。この測定法の利点はその正確性及び極少廿の物質を
検出することができる可能性である。

測定の実施のために、同質相並ひに湾質相での積々の変
法が可能である。１４質相ての実施態様においては、受
容体の１方を担体に結合さセる。例えはサンドイッチ（
日ａｎｄｗｉｃ’ｈ　）法では、測定すべき抗体に特異
性の抗原決定因子１ｃ刊する受容体を担体に結合させ、
試験溶液上添加し、この際試験溶液中に含有される測定
すべき抗体上受容体に結合さセる。次いで、抗体又は抗
原−抗体−複合体（Ｋｏｍｐ’ｌｅｘ　）と特勇的に反
応する標識化受容体を添加する。標識化受容体を弁して
試料中の抗体のｆｆ１ｋ測定することができる。

この一般的原則には多様の可変性がある。すなわち例え
ば３種の受容体で測定を行なうことができ、この際３ｍ
の受答体の１つは異質用で存在しかつ他の２つの受容体
は溶性でありかつ２つの溶性受容体の１方は標識されて
い工、他方は標識されていない。次いで不溶性受容体は
標識されてない溶性受容体に照準される。

インシュリン抗体の測定は慣例的に放射線免疫検定法（
Ｒｓｄｉｏ−Ｉｍｍｕｎｏａａａａｙ　）で行なう。こ
の際、患者試料をヨードで標識されたインシュリンと共
に恒温保持し、結合された放射性インシュリンをポリエ
チレンクリコールで又はヒトの免疫クロゾリンに対する
第２の抗体で沈殿させ、かつ沈殿物の放射能ｔ−？ｌｌ
ｊ定する。最近では酵素−免疫検定の原則による測定法
も記載された（ウィルキン（Ｔ、、ｒ、Ｗｉｌｋｉｎ　
）　（１’９８６年）、１デ・メジャーメント・オシ・
インシュリン・アンテイボディーズ・アンドΦイツツ・
インターブリチージョン（Ｔｈｅ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅ
ｎｔ　ｏｆｉｎｓｕｌｉｎ　ａｎｔｉ’ｂｏｄｉａｓｌ
　　ａｎ４　　ｉｔｓ　　１ｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏ
ｎ）”イムノアセイ・チクノロシイ（Ｉｍｍｕｎｏａｓ
ｓａｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　）第２巻（ｅｃ、８．Ｂ
、Ｐａｌ　）　Ｗ、ｄｅＧｒｕｙｔｅｒ　、ベルリン）
０ この公翅方法の欠点は、基質との異なる反応時間で又は
異なる反応条件下で異なる日に得られた試験結果が比較
することができないことである。従ってすでに、インシ
ュリンに対する抗体を含有することが知られている患者
血清又は陽性の患者血清から単離され九ヒト免疫グロブ
リン七内部標準として随伴することが提案された（デー
ｙ　（Ｂ、Ｍ、Ｄｅａｎ　）等著、（１９８６年）ディ
アペトロギア（ｐｌａｂｅｔｏｘｏｇｉａ　）　２９巻
、３３９〜３４２頁；ネル（Ｎｅ１ｌ　）等著（１９８
５年）ディアベテス（Ｄｉａｂｅｔｅｓ　）　３４巻６
０〜６６頁）。史に試験に使用さ詐る全試薬のための機
能対照として既知の陽性血清の試験が用いられる。しか
し陽性患者血清の使用の際の問題は、各実験室が相応す
る患者血清を入手できるとは限らずかつこの思渚血清七
十分な分で入手することもできないことである。史に、
患者血清が感染性でありうる、例えば肝炎ウィルス又は
ＨＩＶウィルスを含有する危険がある。

更に患者と患者との間には大きな差があシ、従って試験
結果は、異なる患者の標準血清とは比較不可能である。

種々の時間に同一の恵渚から採取した血清でさえも、異
なる抗体力価’ｋｔＩｔ算しなければならない。種々の
実験歴によって得られた値の比較可能性は全くない。

発明が解決しようとするＦａｂ 従って本発明のｌＪＩ！題は、抗体の検出のための測定
法の機能対照（Ｆｕｎｋｔｉｏｎｓｋｏｎｔｒｏｌｌｅ
　）　ｆ可能にし、かつ更に試駆結果を比較することを
可能にする方法を得ることである。

課題全解決するための手段 この課題は、免疫検定の原則によるヒトの体液中の抗体
の測定法によシ解決され、この際測定すべき抗体を含有
する試料を少なくとも２種の異なる受容体Ｒ１、Ｒ２（
そのうち受容体Ｒ１は測定すべき抗体に対して特異性の
抗原決定因子を有し、受容体Ｒ２は標Ｒｔ−有する）と
共に恒温保持し、結合された椋識全有する部分を非結合
標識を有する部分から分離しかつ標瞳を両部分の１方で
測定し、この方法は、対照のために、試料の代りに、測
定すべき抗体に対して特異性の受容体Ｒ８と結合可能な
抗体又はそのＦａｂ−又はＦ　（ａｂ’　）　２−断片
（Ｆｒａｇｍｅｎｔ　）及びヒト免疫グロブリン又はそ
のＦｃ一部分よりなる結合体（Ｋｏｎｊｕｇａｔ　）を
含有する標準溶液を使用すること全特徴とする。

測定すべき抗体に対して特異性のエピトープ（Ｅｐｉｔ
ｏｐ　）と結合可能である抗体及び非唱異性のヒト免疫
グロブリンよりなる化学的に合成された結合体が１．＠
渚試料からの相応する抗体と全く同杓に反応することが
意外にも確認された。この際、ヒト以外の結合体抗体部
分は、受容体Ｒｓとの特異反応をもたらし、一方ヒト免
疫グロブリンは検出可能性を保鉦する。本発明により使
用される結合体は無制限量で入手されかつ常に繰シ返し
再現可能でｉ造することができる〇 免疫検定の原則によるヒトの体液中の抗体の測定法は自
体公知である。この方法は１力では、細菌又はウィルス
に対して住じる抗体を検出するために使用される。この
方法ですでに起った感染又はその経過を追跡することか
できる。このための例は肝炎ウィルスに対する又はＨＩ
Ｖに対する抗体である。他方、この方法は、自己抗体を
検出するために使用される。自己抗体は、生体に特有な
抗！ＫＭ準された抗体であり、これは自己免疫疾患の存
在時に生じる。この際自己抗体の検出は病気の診断に用
いられる。例は甲状腺抗体又は膵臓の特有のインシュリ
ンに対する又は島細胞に対する自己抗体であシ、これは
多分真性糖尿病の出現と関係する。動物性インシュリン
で処理するヒトの糖尿病、０名に生じるインシュリン抗
体の検出も１要である。インシュリンは種と種の間でそ
れ程違わないので、強い交差反応になり、従って特定の
インシュリンに対する抗体によシ血渭中のインシュリン
が中和され、かつ場合によってはむしろインシュリン抵
抗が生じうる。組換え蛋白質（例えばエリスロポエチン
又はプラスミノデン活性体）での処理の際には、これら
蛋白質に対する抗体の生成を予測し、かつこれを同様に
試験すべきである。史にアレルイーの診刈のために一定
のアレルゲンに対してｆｒ異的な抗体の検出が１要であ
る。

抗体の測定法の実施には極めて多くの変法が可能である
。極めて広く普及し九変法はサンドインチ検定法であり
、この場合には、受容体Ｒ工は固相に結合して存在し、
−力椋証１［−ηする他の受容体Ｒ２は溶性でちる。便
に２種の品性受容体Ｒ１、Ｒ２を用いる又は結合受容体
Ｒ１及び２種の溶性受容体（そのうち１槌のＲ２は標識
を有する）ｔ−用いるもう１つの変法がある。本発明に
よる方法は全てのこれらの変法に適当である〇 受容体Ｒ□及びＲ２としては、例えば測定すべき抗体に
対して特異性のエピトープを有する物質を使用すること
ができる。これらは抗原、抗原断片、アンチイディオタ
イプ抗体（Ａｎｔｉｉｊ−ｄｉｏｔｙｐａｎｔｉｋｏｒ
ｐｅｒ　）スはノ・ブテンであってよい。受容体Ｒ１及
びＲ２中に含有される抗体特異物質は同−又は異なって
いてよい。

受容体の標識は自体公知である。通例、酵素、故Ｉｌ性
物質、螢光性又は化学発光性物質を使用する。次いで検
出は自体公知の方法で放射能、化学発光又は螢ブ０のｉ
ｕ＋＋定によシ又は相応する色紮基負との酵素反応によ
り行なう。

受容体Ｒεとは、」ＩＪ定すべき抗体に対して特異性の
少なくとも１１のエピトープを有する物質、例えば抗原
、抗原断片、アンチイディオタイプ抗体又はハプテンで
ある。本発＠１ｊにより使用される、この受容体Ｒ８と
結合可能な抗体又は抗体断片には、抗体又は抗体断片と
ハプテン包 との結合体も鍵含される。

ところで抗体の測定のための免疫検定の笑施には、本発
明によｐ１対魚を内部標準として随伴する。東にこの対
照は試験中に使用される全試葬のための機能対照として
用いられる。このために試料の代、りに標ｆＦ４溶液を
使用し、これは法１１定すべき抗体に対して特ｐ性の抗
原法定ｉ子と結合可能な抗体及びヒト免疫グロブリンよ
りなる結合体を含有する。完全な抗体のみならずそのＦ
′ａｂ−又は１’　（ａｂ’　）２−断片を使用するこ
ともできる。ヒト免疫グロブリンの代りに同様にそのＦ
ｃ−断片２使用することができる。この際両方の成分及
びその断片の間の全ての組合せが可能である□ 結合体は両方の成分（抗体及びヒト免疫グロブリン、も
しくはその断片）の共有結合によって装造される。蛋白
質の共有知合法は四矧である。方法の多数は例、ｔばｌ
’、Ｔｉｊａｅｅｎ著、プラクテイスーアンドｅセオリ
ーΦオプ・エンチーム・イ人ノアツセイス（Ｐｒａｃｔ
ｉａｅ　ａｎｄ　Ｔｈｅｏｒ７　ｏｆＦＸｎ　Ｚ７ｍｌ
ｌ工ｍｍｕｎｏａｓｓａｙｇ　）、エルゼビール（Ｅｌ
ａｅｖｉａｒ　）　、アムステルダム、１９８５年、１
１章に記載されている。これらの方法は網状化剤として
同質２官能又は異質２官能試薬の使用下に本発明によシ
使用される結合体の製造に好適である。

結合体の製造のために、両成分の１力にチオール基をか
つ両成分の他方にマレイミド基を導入するのが有利であ
る。次いでこの結合はチオール成分とマレイミド官能基
との共有結合によって達成される。

抗体としては、測定すべき抗体に対してＱ＃異性の抗原
決定因子と結合可能であるポリクローナル韮ひにモノク
ローナル抗体が適当である。

しかしながら抗原決定因子と結合可能な抗体を生成する
動物よシなるモノクローナル抗体を使用するのが有利で
ある。動物種としては例えはモルモットが挙げられる：
マウス又はラットよシなる抗体を使用するのが有利であ
る。

測定すべき抗体は種々の抗体群に由来しうる。

例としては、例えば感染の診断では、工ｇＧ；感染の早
期では工ｇＭ　ｉ特別な感染、例えばエプスタイン−バ
ール（Ｅｐａｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ　）ウィルスでの感染
の検出では工ｇａかつアレルヤーの際に生じる工ｇＥ！
が挙げられる。

更に本発明の目的は、免疫検定の原則によるヒトの体液
中の抗体の測定のための対ｌφ試薬であシ、これは測定
すべき抗体に対して特異性の抗原決定因子と結合可能な
抗体又はそのＦａｂ−又はＦ（ａｂ’　）２−断片及び
ヒト免疫グロブリン又はそのＦｃ−部分よシなる結合体
を含有する。

本発明による対照試薬をそのつどの特別な免疫検定のた
めに製造する。その際、各試験に対してそのつど！￥ｆ
異的に抗体又はそのＦａｂ−又はＦ（ａｂ’ン２−断片
をヒト免疫グロブリン又はそのＦｃ−部分と結合させる
。未知の血清試料とので有する標準血清中に対照試薬を
溶解させるのが有利である。しかし、血清不含の緩衝液
中の溶液も可能である。

本発明によシ、試験結果を相互に比較すること及び測定
の正確性を高めるための内部標準を随伴することを可能
にする体液中の抗体の御」定のための方法及び対熱試薬
が得られる。本発明によシ使用される結合体は魚制限量
で再現可能に製造することができる。

実施例 本発明を次の芙ぬ例につき説明する： 例１ インシュリンに対するマウスモノクローナル抗体及びヒ
ト免疫γグロブリンよりなる結合体の製造 両成分（インシュリン抗体及び免＆ｒクロプリン）ｔ−
網状化するために、抗体中にチオール基を、かつ免疫γ
グロブリン中にマレイミド基を導入した。マウス抗体中
へのチオール基の導入は、英際に、クロッノ（Ｋｌｏｌ
　）及びハイネイ（Ｈｅ１ｎｅｙ　）　（アーカイプス
・オプ・ビオケミストリー・アンド・ビオフィジクス（
Ａｒｃｈ。

Ｂ１００Ｍｍ、Ｂ１０ｐｈ７Ｂ　、　）、９６巻（１９
６２年）６０５〜６１２頁）で記載されているように実
施した。このために、マウス−抗インシュリンー抗体、
ＡＴＯＯＨＢ１２３　１　ｏＩＲｇｔ、ＮａｃＪ　１５
０ｍＭ　ｆ含有するｐ［（８，２の０．１　Ｍ燐量カリ
ウム浴液１ｄ中に沼かした。無水Ｓ−アセチルメルカプ
トスクシン２０μＪ（ジメチルスルホキシド４３．６１
ｎ９／ｌ／）を前記の溶液に硲加しかつ１ｈ間２５℃で
１５Ｌ応てせた。引続きムシ混合物を、ＥＤＴＡ　１１
１１Ｍ　ｔ　２有するＬ）、１Ｍ燐飲カリウムメ１６．
２に対して４℃で透析さセた。

ヒト免疫γグロブリン３０■を、…７の燐酔ナトリウム
ｍｆｉ（３０ｍＭ）ＦＬｌ中に溶解させた。マレイミド
へキサノイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
（ジメチルスルホキシド１８．４■／ｌＩｊン２０μＩ
ｔ添加しかつ１時間２５℃で反応させた。溶液をウルト
ロデル（ＵｌｔｒｏｇｅｌンＡｃａ　２０２カラム上に
加え、かつ蛋白質を含有する画分を集めた。

アセチルメルカプトスクシン化したマウス抗体６　ｍ９
及びマレイミドヒト−完投−γ−グロブリウム沼Ｍ（０
，１Ｍ）５−と共に恒温保持した。

この際ヒドロキシルアミンは、チオール基をチオールエ
ステル結合の離脱により活性化するために片いた。反応
混合物ｔ−２時間２５℃で恒温保持した。恒温保持混合
物を次いで限外ａ！！過にぶって１ｄまで目線し、セフ
ァクリル（Ｅｌｅｐｈａ−ｃｒｙｌ）−８−５０［Ｊ（
１，５Ｘ５０−）カラム上に加えかつＮａｃＪ　（１５
０ｍＭ　）及びナトリワムアシド（０，１％）１１：含
有する燐酸ナトリウム（５０ｍＭ　）で平衡化した。免
疫ｒグロゾリンモノマーの前に溶離された画分を集める
と、これはマクス抗インシュリン抗体及びヒト免疫グロ
ブリンよりなる結合体を含有した。

例２ 抗体測定の実施を、笑際にゾーン等著（ディアペトロイ
プ２９巻（１９８６年）３３９〜５４２’ｔ４）に記載
されているように行なった。

インシュリン被横板のＩＩＪ造のために、ヒトインシュ
リン（１μ９／−）を−９，６の炭酸ナトリウム緩慟液
（５０ｍＭ　）中に浴かした。被１夏（１力ツプ拍り１
２５μ））は平底＊量潤定量プレー）　（Ｆｌａｃｈｂ
ｏｄｏｎｍｉｋｒｏｔｉｔｅｒｐｌａｔｔａｎ　）（Ｎ
ｕｎｏ　Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ工）中で２０℃で５時
間行った。その後にプレートを細筒し、繊維素（Ｚｅｌ
ｌａｔｏｆｆ　）上にたたき落し、かつＰＢ８（Ｐｈｏ
ｓｐｈａｔｅ　’ｂｕｆｆｓ；ｒＭ　ｅａｓｉｎｇ　）
中のヤ１１Ｉ′′標準血ｍ２０％（ｖ／ｖ）（１カップ
当り１ｓｏｕｇ）を２０℃で１夜後負荷させた。この後
負荷俗′に！ｉ、金領瀉し、板ｔ−繊維素上に光分に打
きＡＧし、９７品で１夜乾燥させ、引続き接着シートで
密刺しかつ使用するまで一２Ｄ℃で貯蔵する。

次いでこのプレートで酵素免疫検定全実施する。仁の際
試料恒温保持はｐｂｓ中の１０％（ｖ／ｖ　）ヤイ標準
血渭１５％（ｖ／ｖ　）ツウイー色 ン（Ｔｗｅｅｎ　）　２０中で１．５時間室温で持続に
振励させながら（５００ｒｐｍ　）行カつた。相応する
試料希釈は二重値（Ｄｏｐｐｒｌｗｅｒｔ　）として（
１カツプ当ｖ１００μｌ）恒温保持した。プレートは１
．５時間後に吸引？１−遍しかつそのつど１カップ当り
洗浄媒体５００βｌ　（ＰＢＳ中０．１％（ｖ／ｖ　）
ツクィーン２０）で１／６／３分曲の標阜時間で６回洗
イ〜ｐした。

結合したインシュリン抗体分子を、ヒト免反グロブリン
分子のＦｃγ一部力・に照準しかつその側でペルオキシ
ダーゼで標識さｎた、ヤギがらの第２抗体會用いて検出
した。この第２の免疫欣応は、１時間（同様に３０　Ｏ
ｒｐｍでの振動を伴う）持ｄしかつ前記の様に洗浄過程
で終了した。

ペルオキシダーゼの指示収応はクエンａｇｉｙ衝液中で
ｔＪ）Ｉ　４．５で行ない、この際ペルオキシダーゼｔ
−過＆ＪＩ　Ｗナトリウム及びＡＢＴＳ■と及応さセ、
かつ発色ｔ″所定時間でＥＥＬ工１３Ａ−光度言１を用
い４０５　ｎｍで（参Ｂ　ＣＦ、ｅｆａｒｅｎｚ　）　
−１Ｅｉ長４９０ｎｍにおけるシグナルを除いて）９値
としてのＡＢＴ−溶液を用いて測定した。

第１表は基質反応の開始後の種々の時間での試料評価を
示す。試料と官能対照との測定値の割合が全基質反応時
間の間で一定でるることが判明した。従つ″Ｃ基質反応
の開始後の任意の時間に測定することができる。

第　１表 権々の基Ｊｊ！ｉ反応時間後の試料計測（測定ざ艮４０
５　ｎｍ　） 第■表は異なる日の試料評価上水す。このへ合も（官能
対ｈｒこ関しては輯なったΔＥ−値にも拘らず）試料と
官能対＃ｌ＠との測距値の割合は一定であることが判る
。

第■表 例３ ポリクローナル抗インシュリン抗体のＦａｂ−断片とヒ
ト’？ａ　ｒ−断片よりなる結合体の！！迫ポリクロー
ナル抗体（西ドイツ−特：ｎ（Ｄｗ）第２７　４４　８
５５号明ａ曹に記載されたＬうな′Ａ造）からＴａｂ−
顕片七蘭腕石せ、チオール基ｔ−４人し、かつ例１に記
載したと同機にヒト−ＩｇＧのＰｃγ−断片と結合させ
た。抗体離脱、活性化及び結合の方法はＰ、Ｔｉｊｓｓ
・ｎ著、プラクテイス・アンド・セオリー・オプーエン
テーム・イムノアツセイズ（１９８５年〕エルセビール
、アムステルダムに記載されている。

例４ 母ル七ットからのポリクローナルインシュリン抗体のＦ
ａｂ−断片及びヒ）　Ｆｃ　ｒ−断片よりなる結合体に
よるインシュリン抗体試験の対照抗体測定を例２に記載
したように災施した。

結果を記！表にまとめる。

第！ｑシ 基質反志の全３回の１ｊ足時間で試料は官能対照と一定
の割合であることが判る。すなわち測定時間上自由に退
ぶことができる。

例５ ヒトのエリスロポエテン（ｇＰｏ　）に対するポリクロ
ーナル抗体及びヒト免疫グロブリンよシなる結合体の製
造並びに！Ｐ〇−抗体の測定白色ニュージーランドーイ
エウサｆｔ−ヒト−ＥＰｏ　５０μｇで、かつ７日、１
４日、３０日目に免疫し、かつ第１免疫後全て６０日に
それぞれ抗原２５μｇ／動物を後接稙した。付加的に常
時完全ソロインドアジュバントを添加した。

動物の血清から硫酸アンモニウム沈殿及び交換クロマト
グラフィーにより工ｇＧ？Ｉ−ｆｉｆｆｉした。引続き
これを例１に記載したようにヒトエｇＧに結合した。こ
の結合体ｔヒトのＫＰＯ抗体の測定のための対照試薬と
して用いた。

抗体測定の実施は、微量滴定量８ｉ’ｉ　ＥＰ○１．２
５μ＆／ｘｄで被優した以外、例２に記載したように行
った。

この場合も試料及び対照試薬の測定シグナルの一定の商
が得られ（第■表参照ン、従って基質反応の開始後１５
分及び６０分の間の任意の時点で発色を測定しがつ評価
することができる。

第１Ｖ表

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、測定すべき抗体を含有する試料を、少なくとも２種
   の異なる受容体Ｒ＿１、Ｒ＿２（そのうち受容体Ｒ＿１
   は測定すべき抗体に特異性の抗原決定因子を有し、受容
   体Ｒ＿２は標識を有する）と共に恒温保持し、結合され
   た標識を有する部分を非結合標識を有する部分から分離
   し、かつ標識を両部分の１方で測定することによって、
   免疫検定の原則によりヒトの体液中の抗体を測定するに
   あたり、対照のために、試料の代りに、測定すべき抗体
   に対して特異性の受容体Ｒｓと結合可能なヒト以外の抗
   体又はそのＦａｂ−又はＦ（ａｂ′）＿２−断片及びヒ
   ト免疫グロブリン又はそのＦｃ−部分よりなる結合体を
   含有する標準溶液を使用することを特徴とするヒトの体
   液中の抗体の測定法。 ２、抗体としてモノクローナル抗体を使用する、請求項
   １記載の方法。 ３、受容体Ｒｓと結合可能な抗体を形成する動物から、
   特にマウス又はラットからのモノクローナル抗体を使用
   する、請求項２記載の方法。 ４、自己抗体又は感染後、治療時又はアレルギーの結果
   で生じた抗体を測定する、請求項１記載の方法。 ５、ヒトの体液中の自己インシュリン抗体、島細胞抗体
   、肝炎抗体、エリスロポイエチン抗体、プラスミノゲン
   活性化体抗体及びＨＩＶ抗体を測定する、請求項１記載
   の方法。 ６、測定すべき抗体に特異性の受容体Ｒｓと結合可能な
   抗体又はそのＦａｂ−又はＦ（ａｂ′）＿２−断片及び
   ヒト免疫グロブリン又はそのＦｃ−部分よりなる結合体
   を含有する免疫検定の原則によるヒトの体液中の抗体の
   測定用対象試薬。 ７、インシュリンに対する抗体又はそのＦａｂ−又はＦ
   （ａｂ′）＿２−断片及びヒト免疫グロブリン又はその
   Ｆｃ−部分よりなる結合体を含有する、請求項６記載の
   対照試薬。