JPS6330499A

JPS6330499A - オピオイドペプチド・ポリペプチド複合体

Info

Publication number: JPS6330499A
Application number: JP61176446A
Authority: JP
Inventors: Yukio Imanishi; 今西　幸男; Shunsaku Kimura; 俊作木村; Motohiko Tsukada; 塚田　躬彦
Original assignee: Unitika Ltd
Current assignee: Unitika Ltd
Priority date: 1986-07-24
Filing date: 1986-07-24
Publication date: 1988-02-09

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、オピオイドペプチドをポリペプチドに共有結
合で結合させることにより得られる副作用のない鎮痛作
用の改良されたオピオイドペプチド・ポリペプチド複合
体に関するものである。

（従来の技術）従来１モルヒネが鎮痛剤として医療分野で広く用いられ
ているが、麻薬性があるために１モルヒネに代る非麻薬
性の鎮痛剤の開発が望まれている。

エンケファリン、エンドルフィン、グイノルフィン、ネ
オエンドルフィン等の内因性のモルヒネ様ペプチドホル
モンはモルヒネと同様の鎮痛作用を示すため１モルヒネ
に代る非麻薬性の鎮痛剤として期待されており、生体よ
り抽出、精製された内因性のオピオイドペプチドあるい
はアミノ酸配列の一部を変更したオピオイドペプチドが
鎮痛剤として検討されている。たとえば、ブタ視床下部
よりネオエンドルフィン系オピオイドペプチドが抽出、
精製されている（特開昭５７−１３４４５１号公報参照
）、また、　　Ｌ−ｃｌｙ”をＤ−Ａｊ２ａ”に代えた
Ｌｅｕ−エンケファリン及びＭ　ｅ　ｔ−エンケファリ
ンのマウス輸精管標本による生理活性の相対強度はＭ　
ｅ　ｔ−エンケファリンを１．０として、それぞれ６．
１９．５．０である（モレキュラー　ファーマコロジイ
ー、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　
２０４８４〜４９１（１９８１））　。

（発明が解決しようとする問題点）上記のように内因性のオピオイドペプチドはモルヒネ様
の鎮痛作用を示すが生体内で酵素によって分解されて短
時間で失活する。又、酵素による分解に対する抵抗性を
向上させるためにアミノ酸配列゛の一部のアミノ酸を他
のアミノ酸に代えたり。

削除することが試みられているが、アミノ酸配列が変っ
たために鎮痛作用が低下したり９発熱等の副作用が生じ
て目的が達せられていない。また。

β−エンドルフィンのように構成しているアミノ酸の数
が多いオピオイドペプチドは、鎮痛作用は強いが、構造
が複雑なため、生体より分離、精製したり、あるいは化
学合成することは困難である。

以上のような理由でまルヒネに代る実用的な非麻薬性の
鎮痛剤としてのオピオイドペプチドは得られていないの
が現状である。

（問題点を解決するための手段）本発明者らは、かかる観点から鋭意研究を行い。

次の式で示されるオピオイドペプチド・ポリペプチド複
合体が鎮痛剤として有効な鎮痛効果を有し。

鎮痛作用の持続時間が長（、シかも副作用のない物質で
あることを見い出し１本発明を完成したちのである。

すなわち９本発明は一般式％式％（式中Ｂはアミノ酸残基又はペプチドフラグメントを＋
Ｊｌ及びＪ２はＬｙｓ又はＡｒｇから選ばれたアミノ酸
残基を＋ＺＩ　はＤ−ＡＪａ　、　　Ｄ−Ｍｅｔ及びＤ
−３ｅｔからなる群より選ばれたアミノ酸残基を、Ｚｔ
はＬｅｕ又はＭ　ｅ　ｔを、Ｕはアミノ酸残基を。

Ｔｒｙ、　　Ｇｌｙ　、　　Ｐｈｅ、　　Ｌｅｕ、　　
Ｌｙｓ、　Ａｒｇ、　　Ａｊ！ａ。

Ｍｅｔ、　　Ｓｅｒは、夫々チロシン、グリシン、フェ
ニルアラニン、ロイシン、リシン、アルギニン、アラニ
ン、メチオニン、セリーンを、ＸはＣ＝ＯＣＨ。

ＣＨ−Ｃｏ○Ｈ ■ （ＣＨ２）　ｍ　　　　　　ｍ＝１　〜５畷Ｃ＝０を表し、ｎは、２〜２０の整数を表す、）。

で示されるオピオイドペプチド・ポリペプチド複合体を
要旨とするものである。

本発明のオピオイドペプチド・ポリペプチド複合体を得
るには９例えば２通常行われているペプチド合成法によ
り合成したオピオイドペプチドとポリペプチドとを共有
結合させればよい。このオピオイドペプチドとしては９
例えばエンケファリンアナログがあげられる。エンケフ
ァリンは。

１９７５年Ｈｕｇｈｅｓらによりブタ脳より分離、同定
された５個のアミノ酸よりなる内因性のオピオイドペプ
チドであり、生体内で生合成されるが１通常のペプチド
合成法により合成することが可能である。

たとえば、アミノ基を保護したアミノ酸とカルボキシル
基を保護したアミノ酸とを、ジオキサン。

ＤＭＦ　（ジメチルホルムアミド）等の適当な溶媒に溶
解し、水冷下に当量のＴＥＡ　（トリエチルアミン）を
加え、１．２当量のＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボン
ジイミド）によりカップリングしてペプチドを得ること
ができる。得られたペプチドはカルボキシル基あるいは
、アミノ基のいずれかの保護基を除去して同様の合成方
法によりアミノ酸の数を増加させることができる。上記
の操作を繰り返すことにより目的のペプチドを得ること
ができる。保護基の除去は、たとえばアミノ基の保護基
がＢｏｃ（第３ブチルオキシカルボニル基）であれば、
ＨＣＩＩ／ジオキサン、ＨＢｒ／酢酸。

ＨＣ１／酢酸のいずれかにより除去することができる。

又、カルボキシル基の保護基がメチル基あるいはエチル
基であれば、苛性ソーダによりケン化することで除去す
ることができる。さらに上記以外の通常行われているペ
プチド合成法により目的のペプチドを合成することが可
能である。エンケファリンの酵素による分解に対する安
定性を向上させるには、たとえばｔ、−ｃｌｙ２をＤ−
Ａｊ？ａ２に置換させることによりエンケファリンアナ
ログが得られる。

本発明に用いられるポリペプチドとしては、ポリリシン
であれば市販品を用いることができるが。

新規に設計したポリペプチドは通常行われているシーケ
ンシャルオリゴマーの縮合法により合成することができ
る。すなわち、必要なアミノ酸繰返し単位をペプチド合
成法により合成し、これを縮合して目的とするポリペプ
チドを得ることができる。ポリペプチドのアミノ酸配列
は任意に選ぶことができるが、疎水性のアミノ酸と親水
性のアミノ酸を適当に選んで配列することによって得ら
れるポリペプチドの性質を制御することが可能である。

たとえば、リシンを重合して得られるポリリシンは疎水
性アルキル鎖の末端に親水性のカチオンを有する両親媒
性のポリペプチドである。又。

親水性のりシン、グルタミン酸、アルギニンと疎水性の
アラニン、ロイシン、グリシン、アミノイソ酪酸とを適
当に配列することにより得られるポリペプチドは親水性
と疎水性とを兼ね具えた両親媒性のポリペプチドである
。両親媒性のポリペプチドはオピオイドペプチドが作用
する細胞膜に対する親和性が良＜、シたがって、ポリペ
プチドの両親媒性を制御することにより、細胞膜との親
和性、すなわち鎮痛作用を制御することができる。

ポリペプチドの分子量は細胞膜との親和性を制御するた
めに、　１，０００以上であることが好ましく。

さらに鎮痛作用の改良のためには２，５００以上である
ことが好ましい。

このような具体的なポリペプチドとして、ポリリシン以
外に＋Ａｊ！ａ　−Ｌｙｓ−Ａｊｌ！ａ　−Ｌｅｕ＋。

＋Ａｉｂ　−Ｌｙｓ　−Ａｉｂ　−Ｌｅｕ＋　（Ａｉｂ
はアミノイソ酪酸を表す）、÷Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ａ
ｉｂ　−Ｌｅｕ　−Ａｉｂ−Ｌｙｓ　−Ａｉｂ＋　、　
　÷Ａ１ａ　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｌｅｕ＋、＋Ａｉ
ｂ　、−Ａｒｇ−Ａｉｂ−Ｌｅｕ＋＋　　＋Ｌｅｕ−Ａ
ｒｇ−Ａｉｂ−Ｌｅｕ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｉｂ）。

千Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ａｉｂ　−Ｌｅｕ　−Ａｉｂ　
−Ａｒｇ　−Ａｉｂ＋。

などのアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる
。

このようなポリペプチドにはエンケファリンアナログを
結合させるための反応基であるアミノ基を導入するが、
そのような置換基をもつアミノ酸としてリシン、アルギ
ニンが有効である。

このようにして得られたエンケファリンアナログとポリ
ペプチドとはアナログ分子中に導入されたりシン残基又
は、アルギニン残基のアミノ基を利用して共有結合によ
り複合体とすることができる。たとえば、リシン残基の
アミノ基を利用してエンケファリンアナログに導入した
マレイミド基とポリペプチドに導入したチオール基との
反応により両者を共有結合で結合させることができる。

エンケファリンアナログとポリペプチドとの結合反応と
しては、エンケファリンアナログの活性を失うラセミ化
等を引き起こす厳しい反応は好ましくない。このとき、
ポリペプチドに結合するエンケファリンアナログの数（
一般式におけるｎに相当する。）は２個以上２０個以下
が望ましい。さらに好ましくは５個以上１５個以下が適
当である。

ポリペプチドに結合するエンケファリンアナログの数が
１個では目的とする鎮痛効力は得られず。

又２０個以上結合させることは困難で、かつ、それ以上
結合させても鎮痛効果の向上は得られない傾向がある。

（実施例）次に本発明を実施例により具体的に説明する。

実施例１　　（Ｂ＝　（Ａｊ２ａ−Ｌｙｓ−Ａｆａ　−
Ｌｅｕ）ｖ＋ｎ＝６．ｍ＝５の合成例）エンケファリン・アナログの合成５０ｍｍｏｌのＢｏｃ−ａｌａ　（ａｌｌａはＤ−Ａｌ
ａを表す）と５０ｍｍｏｆのＧｌｙ　−ＯＭｅ　−ＨＣ
ｌ１とを６０ｍｌのジオキサンに溶解し、水冷下に当量
のＴＥＡを加え１．２当量のＤＣＣによりカップリング
してＢｏｃ−ａｌｌａ−Ｇｌｙ−ＯＭｅを得た。これを
１０当量のＨＣＩＩ／ジオキサンによりＢｏｃ基を除去
した後、　　Ｂｏｃ−Ｔｙｒと同様の反応によりＢｏｃ
−Ｔｙｒ−ａｌａ−Ｇｌｌｙ−ＯＭｅを得た。

一方、５０ｍｍｏ／のＢｏｃ　−Ｐ　ｈ　ｅ　、　Ｂｏ
ｃ　−Ｌｅｕ＋Ｇ１１ｙ　−ＯＭｅ　−ＨＣＣＬｙｓ　
（Ｚ）−ＮＨｚより上記と同様にしてＢｏｃ　−Ｐｈｅ
　−Ｌｅｕ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｌｙｓ　（Ｚ）−ＮＨｔを
合成した。

次にＢｏｃ−Ｔｙｒ−ａｌａ　−Ｇａｙ−ＯＭｅをＩＮ
のＮａＯＨ２当量でケン化して得たＢｏｃ−Ｔｙｒ−ａ
ｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨとＢｏｃ　−Ｐｈｅ　−Ｌｅｕ　−
Ｇ　ｌ　ｙ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−ＮＨｚを４ＮのＨＣ１／
ジオキサン１０当量でＢｏｃ基を除去して得たＰｈｅ−
Ｌｅｕ　−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＮＨｚ　とをカップ
リングして。

Ｂｏｃ−Ｔｙｒ　−ａｌａ−Ｇ　ｌｙ　−Ｐｈｅ　−Ｌ
ｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−ＮＨｚを得た。

得られたＢｏｃ−Ｔｙｒ　−ａｌａ　−Ｇ（ｌｙ　−Ｐ
ｈｅ　−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ　−Ｌｙｓ　（Ｚ）　　ＮＨｚ
を少量のＤＭＦに溶解し、セファデックスＬＨ−２０カ
ラム（２０ｍｍφＸ９００ｍｍ／ＤＭＦ）により分離、
精製して２．３ｍｍｏ　ｌのエンケファリンアナログを
得た。エンケファリンアナログであることを元素分析に
より確認した。

Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−ａｌｌａ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｐｈｅ　−
Ｌｅｕ　−Ｇ　ｌｙＬ　Ｖ　ｓ　（Ｚ　）　　Ｎ　Ｈｚ
の元素分析結果（Ｃｓｏ　ＨｈｑＮ９０１□）。

エンケファリンアナログ・６−マレイミドヘキサノイル
誘導体の合成りｏｃ　−Ｔｙｒ−ａｌａ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｐｈｅ　−
Ｌｅｕ　−Ｇ　ｊａｙ−Ｌｙｓ（Ｚ）　−Ｎ　Ｈｚ　３
８３　ｍｇ　（０，３８１１１ｍｏｊりを１５ｍ１のＤ
ＭＦに溶解し、１００■のパラジウム・ブラックを加え
てＨ２気流下に攪拌、還元してＺ（ベンジルオキシカル
ボニル）基を除去し２次いでパラジウム・ブラックを濾
去し、エチルアルコールで洗浄して３５９■（０，３６
ｍｍｏ　／ｌ　）のＢｏｃ−Ｔｙｒ−ａｌａ−Ｇ　Ａｙ
　−Ｐｈｅ　−Ｌｅｕ−Ｇ　Ａｙ　−Ｌｙｓ　−ＮＨｔ
を得た。得られたＢｏｃ　−Ｔｙｒ−ａ　ｌ　ａ　−Ｇ
　ｌ　ｙ−Ｐｈｅ　−Ｌｅｕ−Ｇ　ｊａｙ　−Ｌｙｓ−
ＮＨｔ　３５９　ｗ（０，３６ｍｍｏｊりを８ｆｆＩｌ
のＤＭＦに溶解し、攪拌しながら少量のＤＭＦに溶解し
たＮ（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミ
ド１１０ｍｇ（０，３６ｍｍｏ　ｌ　）を加えて温室で
４８時間反応させた後３反応混合物を濃縮してセファデ
ックスＬＨ−２０カラム（２０ｍｎ＋φＸ　９００　ｍ
＋ｗ／　Ｄ　Ｍ　Ｆ　）により分離、精製した。得られ
たものがエンケファリンアナログ・６−マレイミドヘキ
サノイル誘導体であることを元素分析により確認した。

エンケファリンアナログ・６−マレイミド・ヘキサノイ
ル誘導体の元素分析結果（Ｃｓｚ　Ｈ？４　Ｎ、。０１３）。

両親媒性ポリペプチドポリ　（Ａ　ｌａ　−Ｌｙｓ　（
ＨＢｒ）”、Ａｌａ−Ｌｅｕ）の合成りｏｃ−Ａｊ！ａとＬｅｕ−ＯＥｔ−ＨＣｌとをカップ
リングしてＢｏｃ−ＡバーＬｅｕ−ＯＥｔを合成し。

次いで、ＨＣ１／ジオキサンでＢｏＣ基を除去して得た
Ａｊ！ａ−Ｌｅｕ−ＯＥｔ−ＨＣｌとＢｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｚ）とをカップリングしてＢｏｃ　−Ｌｙｓ　（Ｚ）　
−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＥｔを得た。同様にしてＢｏｃ−
ＡｌａとＬｙｓ（Ｚ）−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＥｔ−ＨＣ
ＩとをカップリングしてＢｏｃ−ＡバーＬｙｓ（Ｚ）−
Ａ　ｌａ　−Ｌｅｕ　−ＯＥｔを得た。

得られたＢｏｃ−ＡバーＬｙｓ　（Ｚ）　−Ａｊ！ａ　
　Ｌｅｕ−ＯＥｔを、ＩＮのＮａＯＨでケン化し、さら
に。

ＨＯ５ｕ（Ｎ−ヒドロキシ・スクシンイミド）によりＯ
３ｕ化した後、　　Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−
Ａ　ｌａ　−Ｌｅｕ　−ＯＳｕを得た。得られたものが
Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−ｆｉ、１ａ−Ｌｅｕ
−Ｏ３ｕであることを元素分析により確認した。

Ｂｏｃ−Ａ　ｌａ　−Ｌｙｓ　（Ｚ）　−Ａ　ｌａ　−
Ｌｅｕ−○Ｓｕの元素析結果（Ｃ１ｓ　Ｈｓｚ　Ｎｈ　
Ｏ＋＋）。

得られたＢｏＣ−Ａｌａ−Ｌｙｓ　（Ｚ）　−ＡＩ！ａ
　−Ｌｅｕ−Ｏ３ｕをＴＦＡ　（）リフルオロ酢酸）で
処理してＢｏＣ基を除去し、ＤＭＦ中で当量のトリエチ
ルアミンを加え、活性エステル法によりポリ（Ａｌａ−
Ｌｙｓ　（Ｚ）　−Ａｊ！ａ−Ｌｅｕ）を得た。

得られたポリ　（Ａｊ！ａ−Ｌｙｓ　（Ｚ）　−Ａｊ！
ａ　−Ｌｅｕ）をＴＦＡ中でＨＢｒ／酢酸によりＺ基を
除去してポリ　（Ａ６ａ−Ｌｙｓ　（ＨＢｒ）−Ａｈａ
−Ｌｅｕ）を得、さらに得られたポリ（Ａ　１ａ　−Ｌ
ｙｓ　（ＨＢｒ）−Ａｌａ−Ｌｅｕ）を少量のＤＭＦに
溶解し、セファデックスＬＨ−６０カラム（２０ｍｍφ
×９００ｒｒｌｌＩＩ／ＤＭＦ）により分離、精製して
３．５　ｍｍｏＪのポリ（Ａｌａ−Ｌｙｓ　（ＨＢｒ）
−Ａｌａ−Ｌｅｕ）を得た。

得られたものが（Ａｎ！ａ−Ｌｙｓ　（ＨＢｒ）−Ａｊ
！ａ−Ｌｅｕ）であることを”Ｃ−ＮＭＲにより確認し
た。また５分子量をセファデックスＧ−５０カラム（１
８ｍｍφＸ　６００　ｍｍ／　Ｈｚ　Ｏ）により測定し
た結果、　２８，０００であった。

ポリ　（Ａｊ２ａ−Ｌｙｓ　（ＨＢｒ）−Ａｊ！ａ−Ｌ
ｅｕ）のＩ３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（δｐｐｍ　、　　
ＤＭＳＯ−ｄい３０℃）。

Ａｆａ；　　４７．８　（Ｃα）　、　１８．０　（Ｃ
β）　、　１７２．７（Ｃ＝Ｏ）Ｌｙｓ　　；　　５２．１　（Ｃα）　、　４２．０　
（Ｃβ”）　、　３１．５（Ｃγ）　、　２８．９　（
Ｃδ）　、　２２．１　（Ｃε）。

１７１．９（Ｃ＝　Ｏ）Ｌｅｕ　　；　　５１．８　（Ｃα）　、　４１．１　
（Ｃβ）　、　２３．７（Ｃγ）　、　２２．８．　２
１．６．（Ｃδ）。

１７１．８（Ｃ＝○）ポリ　（ＡバーＬｙｓ　−Ａ　ＩＩ　ａ　−Ｌｅｕ）　
ヘのチオール基の導入ポリ　（Ａ　ｌａ　−Ｌｙｓ　（ＨＢｒ）　−Ａ　ｊ２
ａ　−Ｌｅｕ）　４０■を３０ｍＡの蒸留水に溶解し、
当量のトリエチルアミンを加えた後、２５当量のＳ−ア
セチルメルカプトコハク酸無水物を０．ＩＮのＮａＯＨ
水溶液でｐＨを６．８に調整しながら徐々に添加した。

２時間攪拌しながら反応させた後、蒸留水で１昼夜透析
し、ＮＨ，ＯＨで水溶液のＰＨを７．４に調整し、２４
時間静置後、蒸留水で１週間透析を行った。この水溶液
の濃度は１■／１ｍｌであった。

得られたものをマーキュリ−・オレンヂ法〔生物化学実
験法１０ｒＳＨ基の定量法」松本博１国則登代著（学会
出版センター）〕により測定した結果、ポリ　（Ａｊ！
ａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ）　　１分子当たり６個の
チオール基が導入されていた。

エンケファリンアナログ・ポリ　（Ａｆａ−Ｌｙｓ−Ａ
ｊ！ａ−、Ｌｅｕ）複合体の合成チオール基を導入したポリ　（Ａｊ２ａ−Ｌｙｓ−Ａｌ
ａ−Ｌｅｕ）水溶液２５１Ｉｌｌを酢酸でｐ）Ｉを６に
調整し、濃縮して約１　ｔａｌｌとした。これにエンケ
ファリンアナログ・６−マレイミドヘキサノイル誘導体
７８．８　ｍｇを４　ｍｌのＤＭＳＯ（ジメチルスルホ
キシド）に溶解して添加し、室温で３日間反応させた後
１石油エーテルを加えて白色沈澱を得た。この白色沈澱
をＤＭＦに溶解し１石油エーテルで５回再沈澱を行い、
乾燥して白色粉末を得た。

得られた白色粉末２０ｇにアニソールを数滴加え、溶液
を水冷した。充分に冷却した後、ＴＦＡｌ　ｍｌを加え
て水冷下で２０分間攪拌３反応させてＢｏｃ基を除去し
た。次に反応混合物にエーテルを加えて目的物を沈澱さ
せ、エーテルで５回洗浄した後、濾取して白色粉末を得
た。得られた沈澱に酢酸を加えて溶解し蒸留水で１週間
透析した。

透析後、凍結乾燥により２３■の白色粉末状のエンケフ
ァリンアナログ・ポリ　（Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｊ！ａ−
Ｌｅｕ）複合体を得た。ポリ　（Ａｊ！ａ−Ｌｙｓ−Ａ
ｌａ−Ｌｅｕ）に結合されたエンケファリンアナログの
数はチオール基の消失より１分子当り６個であった。目
的物の確認は元素分析と１″Ｃ−ＮＭＨにより行った。

エンケファリンアナログ・ポリ　（、Ａｌａ−Ｌｙｓ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ）複合体の元素分析（Ｃｚｘ＋　Ｈａｏ
。

Ｎ６１１　０５４　　３）６　　。

エンケファリンアナログ・ポリ　（Ａｌ２ａ−Ｌｙｓ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ）複合体の”Ｃ−ＮＭＲスペクトル（δ
ｐｐｍ、　ＤＭＳＯ’６＋　３０℃）。

Ｔｙｒ　　；　５６．ＨＣα）　、　３６．７　（Ｃβ
）　、　１７１．３（Ｃ＝Ｏ）１２７．７　（芳香環ＣＩ）、　１２９．８　（芳香環
ｃｚ　、６）、　１１４．８　（芳香環Ｃ３，Ｓ）。

１５５．６　（芳香環Ｃ４）。

ａｊ！ａ　、　Ａｌ１ａ　：　４７．８（Ｃα）　、　
１８．１　（、Ｃβ）。

１６８．４（Ｃ＝　０）Ｇｌｙ；４１．４　　（Ｃα）　、　１６８．３，１６
８．５（Ｃ＝　０）Ｐｈｅ　　；　　５３．４　　（Ｃ
α）　、　３７．８　（Ｃβ）　、１７０．８（Ｃ＝Ｏ
）１３５．０　（芳香環Ｃ，）、　１２８．２　（芳香環
Ｃ２，６）＋　１２９．６　（芳香環Ｃ３，Ｓ）。

１２６．８　（芳香環Ｃ４）。

Ｌｅｕ　　　；　　　５１．５　（Ｃα）　　、　　４
０．８　（Ｃβ）　　、　　２３．９（ＣＴ）　　、　
　２２．８．２１．７　（Ｃδ）１７１．８（Ｃ−０）Ｌｙｓ　　　；　　　５２．１　　（Ｃｃｒ）　　、　
　４２．２　　（Ｃβ）、’３１．６（Ｃｒ＞　　、　
　２８．９　（Ｃδ）　　、　　２２．５　（Ｃｇ）　
　。

１７１．６　　（Ｃ＝Ｏ）スペーサ一部；　（五員環）１７２．５．１６９．４　
（Ｃ＝　Ｏ’）２４．３　　（ＣＨ，）　　　３５．９
　　（ＣＨ）（その他）　　１７１．２　、１７１．９
　、１７２．０　＜Ｃ＝Ｏ）３６．４　　（ＣＨ）　　
３２．０　、　２８．２　、　２７．６　、　２７．２
　。

２６．６　　、　２５．３　　（ＣＨ，）次に得られた
エンケファリンアナログ・ポリ（Ａ　ｊｌ！ａ　−Ｌｙ
ｓ−Ａ　Ｉｌａ　−Ｌｅｕ）の鎮痛作用を調べるため、
マウス輸精管標本によりＩＣＳ、値を測定し、Ｍｅｔ−
エンケファリンのＩＣ３゜値を１として相対活性を求め
た。

その結果を表１に示す。

表１表１より実施例１のエンケファリンアナログ・ポリ（Ａ
　Ｉｌａ　−Ｌｙｓ−Ａ　ｌａ　−Ｌｅｕ）の住理活性
はＭ　ｅ　ｔ−エンケファリンに比べて１　、３００倍
の効力を有することが明らかである。

実施例２　（Ｂ＝（Ｌｙｓ　Ｌｓ　、　ｎ＝１１．　ｍ
＝　５の合成例）実施例１のポリ　（Ａｊ！ａ−Ｌｙｓ
（ＨＢｒ）−ＡＡａ−Ｌｅｕ）（７）かわりに分子量２
９．０００のポリ　（Ｌ−リシン）塩酸塩を用いた以外
は実施例１と同様の方法でエンケファリンアナログ・ポ
リ　（Ｌ−リジン）複合体を得た。

得られたエンケファリンアナログ・ポリ　（Ｌ−リシン
）複合体にはチオール基の定量より１分子当たり１１個
のエンケファリンアナログが結合していることが分かっ
た。目的物の確認は元素分析。

”Ｃ−ＮＭＲによって行った。

エンケファリンアナログ・ポリ　（Ｌ−リシン）複合体
の元素分析結果（Ｃ目）　Ｈｔｈｘ　　ＮａＩ　０３０Ｓ）　　＋＋・
エンケファリンアナログ・ポリ　（Ｌ−リジン）複合体
の”Ｃ−ＮＭＲスペクトル（δｐｐｍ、ＤＭＳＯｄ＆、
３０℃）。

Ｔｙｒ　　；　　５６．ＨＣα）　、　３６．８　（Ｃ
β）　、　１７１．３（Ｃ＝Ｏ）１２７．８　（芳香環Ｃ，）、　１２９．８　（芳香環
Ｃｚ　、６）、１１４．９　（芳香環Ｃ３，Ｓ）。

１５５．７　（芳香環Ｃ４）。

ａｈａ　；　　４７．８（Ｃ＋７）　、　１８．２　（
Ｃβ）　、　１６８．４（Ｃ＝Ｏ）Ｇｌｙ：　　４１．３　　（Ｃα）　、　１６８．３．
１６８．５　（Ｃ＝Ｏ）Ｐｈｅ　　；　　５３．４　　
（Ｃα）、　３７．７　（Ｃβ）　、１７０．８（Ｃ＝
Ｏ）１３５．１　（芳香環Ｃ，）、　１２８．２　（芳香環
Ｃｚ　、６）、１２９．６　（芳香環Ｃｚ、ｓ）＋１２
６．７　（芳香環Ｃ４）１Ｌｅｕ　　　；　　　５１．５　　（Ｃα）　　、　　
、４０．７　　（Ｃβ”）　　、　　２３．９（Ｃγ）
　　、　　２２．９．　２１．７（Ｃδ）１７１．７（
ｃ　＝　ｏ）Ｌｙｓ　　　；　　、５２．２　（Ｃα）　　、　　４
２．２　（Ｃβ”）　　、　　３１．５（Ｃｒ’）　　
、　　２８．９　　（Ｃδ）　　、　　２２．４　　（
Ｃε）。

１７１．６　　（Ｃ＝Ｏ）スペーサ一部；　（五員環）１７２．４，１６９．４　
（Ｃ＝　０）２４．２　　（ＣＨｚ）　　　３５．８　
　（ＣＨ）（その他）　　１７１．１　、１７１９　、
１７２．０　（Ｃ＝０）３６．５　　（ＣＨ，）　　３
２．０　　、　２８．１　　、　２７．５　　。

２７．２　　、　２６．６　　、　２５．４　　、　　
（ＣＨ２）実施例３　（Ｂ＝　（Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｉ
ｂ−Ｌｅｕ　　）　ａ　。

ｎ＝５．ｍ＝５の合成例）実施例１のポリ　（Ａ　ｌａ　−Ｌｙｓ　（ＨＢｒ）　
　Ａ　ｊ！ａ−Ｌｅｕ）のかわりに分子量１４，８００
のポリ　（Ａｉｂ−Ｌｙｓ　（ＨＢｒ）　−Ａｉｂ　−
Ｌｅｕ）を用い、また、Ｌ−Ｇｌｙ２をＤ−Ｍｅｔ”に
代えたエンケファリンアナログを用いた以外は実施例１
と同様の方法でエンケファリンアナログ・ポリ　（Ａｉ
ｂ　−Ｌｙｓ−Ａｉｂ−Ｌｅｕ）複合体を得た。チオー
ル基の定量より得られたエンケファリンアナログ・ポリ
　（Ａｉｂ−Ｌｙｓ　−Ａｉｂ　−Ｌｅｕ）複合体には
、チオール基の定量より１分子当たり５個のエンケファ
リンアナログが結合していた。目的物の確認は元素分析
＋ｆｆＣ−ＮＭＲによって行った。

エンケファリンアナログ・ポリ　（Ａｉｂ−Ｌｙｓ　−
Ａｉｂ　　Ｌｅｕ）複合体の元素分析結果（ＣＩＳ：ｌ
　Ｈ２Ｓ９　Ｎｚｓ　Ｓｔ　）　ｓエンケファリンアナ
ログ・ポリ　（Ａｉｂ−Ｌｙｓ　−Ａｉｂ　　Ｌｅｕ）
複合体のＩ３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（δｐｐｍ　、　Ｄ
ＭＳＯ−ｄ６　、　３０℃）。

Ｔｙｒ　　；　５６．ＨＣα）　、　３６．８　（Ｃβ
）　、　１７１．２（Ｃ＝○）１２７．７　（芳香環Ｃ＋）、１２９．８　（芳香環Ｃ
ｚ　、ｈ”）−１１４，８（芳香環Ｃ，＋、ｓ）。

１５５．７　（芳香環Ｃ９）。

ａｌａ　　；　　４７．８（Ｃα）　　、　　１８．３
　（Ｃβ）、　　１６８．４（Ｃ＝Ｏ）Ｇｊ！ｙ；　　　４１．４　　（Ｃα）　、　　１６８
．３．　１６８．５（Ｃ＝Ｏ）Ｐｈｅ　　：　　　５３．４　　（Ｃα）　　、　　３
７．８　（Ｃβ’）　　、１７０．９（Ｃ＝Ｏ）１３５．２　（芳香環Ｃ，）、　１２８．２　（芳香環
Ｃｚ−ｈ）、１２９．７　（芳香環Ｃ：１．Ｓ）。

１２６．７　（芳香環Ｃ＃）。

Ｍｅｔ　　；　　５１．９　（Ｃα）　　、　　３２．
８（Ｃβ”）　　、　　３０．１（Ｃγ”）　　、　　
１４．９（Ｃδ）　　、１７１．０（Ｃ＝Ｏ）Ｌｙｓ　　；　　５２．３　（Ｃα’Ｉ　、　４２．２
　（Ｃβ）、３１５（Ｃγ）　　、　　２８．７　（Ｃ
δ）　　、　　２２．４　（Ｃε）。

１７１．７　　（Ｃ＝Ｏ）Ａｉｂ　　；　　４８．１　（Ｃα’）　　、　　１５
．５．１９．１　（、Ｃβ）。

１６９．１（Ｃ＝　Ｏ）スペーサ一部；　（五員環）　１７２．５，１６９．３
　（Ｃ＝　Ｏ”）２４．４　　（ＣＨり　　　　３５゜
８（ＣＨ）（その他）１７１．３　、１７１．８　、１
７２．０　（Ｃ＝Ｏ）３６．４　（ＣＨ）　　３２．０
　、　２Ｂ、１　、　２７．６　。

２７．１　　、　２６．６　、　２５．３　（Ｃ＝　Ｏ
）実施例４　（Ｂ＝　（Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｉｂ−Ｌｅ
ｕ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ａｉｂ）！　、ｎ＝７．ｍ＝４の
合成例）実施例１のポリ　（Ａ　ｌａ　−Ｌｙｓ　（Ｈ
Ｂ　ｒ）　−Ａｌａ−Ｌｅｕ）のかわりに分子量２２，
９００のポリ（Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　（ＨＢｒ）　−Ａｉ
ｂ　−Ｌｅｕ　−Ａｉｂ　−Ｌｙｓ（ＨＢｒ）　−Ａｉ
ｂ）と、ＧｌｙＺをＤ−３ｅｒ２に代えたエンケファリ
ン・アナログをＮ（ε−マレイミドブチルオキシ）スク
シンイミドで結合させた以外は実施例１と同様にしてエ
ンケファリンアナログ・ポリ　（Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｉ
ｂ−Ｌｅｕ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ　−Ａ　ｉｂ）複合体を得
り。チオール基の定量より得られたエンケファリンアナ
ログ・ポリ　（Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｉｂ　−Ｌｅｕ　−
Ａｉｂ　−Ｌｙｓ　−Ａｉｂ）複合体のチオール基の定
量より、１分子当たり７個のエンケファリンアナログが
結合していた。

目的物の確認は元素分析、１３Ｃ−ＮＭＲによって行っ
た。

エンケファリンアナログ・ポリ　（Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−
Ａｉｂ　−Ｌｅｕ　−Ａｉｂ　−Ｌｙｓ　−Ａｉｂ）複
合体の元素分析結果＜　ＣＩｑｚ　Ｈｚｓｚ○ａｓ　Ｓ
＞　？エンケファリンアナログ・ポリ　（Ｌｅｕ−Ｌｙ
ｓ　−Ａｉｂ　−Ｌｅｕ　−Ａｉｂ　−Ｌｙｓ　−Ａｉ
ｂ）複合体の１″Ｃ−ＮＭＲスペクトル（δｐｐｍ　、
　ＤＭＳＯ−ｄ６　。

３０℃）。

Ｔｙｒ　　；　　５６．１（Ｃα）　、　３６．７　（
Ｃβ’）　、　１７１．４（Ｃ＝　０）１２７．７　（芳香環Ｃ，）、　１２９．８　（芳香環
Ｃ，，６）、　１１４．９　（芳香環Ｃ，，Ｓ）。

１５５．６　（芳香環Ｃオ）。

Ｓｅｒ　　；　　５６．７（ＣＱ’）　、　６３．４　
（Ｃβ）　、　１７０．１（Ｃ＝○）Ｇｌｌｙ：　　　４１．３　　（Ｃα）、１６８．３（
Ｃ＝Ｏ）Ｐｈｅ　　　；　　　５３．３　　（Ｃα）、
　　３Ｔ、’７　　（Ｃβン　、１７１．０（Ｃ＝Ｏ）１３５．３　（芳香環Ｃ，）、　１２８．１　（芳香環
Ｃｚ　＝ｈ”）、１２９．６　（芳香環Ｃ：ｌ＋　ｓ）
　。

１２６．８　（芳香環Ｃ４）。

Ｌｅｕ　　　；　　　５１．６　　（Ｃα）　　、　　
４０．８　　（Ｃβ）　　、　　２３．８（Ｃｒ）、２
２．８　．２１．６（Ｃδ”）　　、１７１．９（Ｃ＝
Ｏ）Ｌｙｓ　　　；　　　５２．１　　（Ｃα）　　、　　
４２．３　　（Ｃβ）　　、　　３１．６（Ｃｙ）　　
、　　２８．８　　（Ｃδ）　　、　　２２．６　　（
Ｃε）１７１．６　　（Ｃ＝Ｏ）Ａｉｂ　　　；　　　４８．２　　（Ｃα）　　、　　
１５．６　．１９．２　　（Ｃβ）。

１６９．１　　（Ｃ＝Ｏ）スペーサ一部；　（五員環）　１７２．５．１６９．４
（Ｃ＝Ｏ）２４．４．　３５．９（ＣＨ）（その他）　
１７１．２　、１７１．９　、１７２．３　（Ｃ＝　０
）３６．３　　（ＣＨ）　　３２．１　　、　２８．２
　　、　２７．７　　。

２７．７　　、　２６．７　　、　２５．３　　（ＣＨ
２）参考例１実施例２〜４で得られたエンケファリンアナログ・ポリ
ペプチド複合体を実施例１と同様にして鎮痛作用を調べ
た。

その結果を表２に示す。

表２表２より実施例２，３．４のエンケファリンアナログ・
ポリペプチド複合体の生理活性は各々。

Ｍｅｔ−エンケファリンに比べて、それぞれ８８０倍、
　１．５００倍、　１　、７００倍の効力を有すること
が明らかである。

（発明の効果）本発明のオピオイドペプチド・ポリペプチド複合体は、
麻薬性のない鎮痛作用が強力で、かつ。

持続効果の長い鎮痛剤として有効なものであり。

純水、生理食塩水等に溶解して使用することができる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｂはアミノ酸残基又はペプチドフラグメントを、
Ｊ＿１及びＪ＿２はＬｙｓ又はＡｒｇから選ばれたアミ
ノ酸残基を、Ｚ＿１はＤ−Ａｌａ、Ｄ−Ｍｅｔ及びＤ−
Ｓｅｒからなる群より選ばれたアミノ酸残基を、Ｚ＿２
はＬｅｕ又はＭｅｔを、Ｕはアミノ酸残基を、Ｔｙｒ、
Ｇｌｙ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｌａ、Ｍ
ｅｔ、Ｓｅｒは、夫々チロシン、グリシン、フェニルア
ラニン、ロイシン、リシン、アルギニン、アラニン、メ
チオニン、セリンを、Ｘは ▲数式、化学式、表等があります▼ を表し、ｎは、２〜２０の整数を表す。）。で示されるオピオイドペプチド・ポリペプチド複合体。