JPS63304992A

JPS63304992A - 油脂の分解法

Info

Publication number: JPS63304992A
Application number: JP62142724A
Authority: JP
Inventors: Yoshio Kachi; 可知　良夫; Tamio Mase; 民生間瀬
Original assignee: Amano Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Amano Enzyme Inc
Priority date: 1987-06-08
Filing date: 1987-06-08
Publication date: 1988-12-13

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔利用分野〕本発明は酵素による油脂の分解法に関する。さらに詳細
にはキヤンデイダ・シリンドラセＵ−３（Ｃａｎｄｉｄ
ａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ　Ｕ−３）の産生ずるリパ
ーゼを用いた、作用温度が４０℃以上である油脂の分解
法に関する。

〔従来技術〕

一般に油脂のリパーゼに依る分解法には４０℃以下で液
体である油脂に対してはリパーゼの水溶液を用いてバッ
チ攪拌方式で検討されている。又、４０℃以下で固体で
ある油脂のリパーゼに依る加水分解方法としては、酵素
液と溶解した油脂源ミキシングして乳化分散状態として
分解する固相静置加水分解方法が開発されている（特開
昭５７−５７７９９号）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

油脂分解の原料としては牛脂、豚脂及びヤシ油などが用
いられている。しかし、従来のキヤンデイダ・シリンド
ラセの産生ずるリパーゼの作用温度は３０〜４０℃と低
く　〔日本農芸化学会誌、５８（８）。

７９９〜８０４．　（１９８４）　）　、工業的に多用
される牛脂等の様な常温で固体の油脂に対しては通常の
バッチ攪拌方式による油脂の分解には酵素の熱安定性が
低い為、使用が出来ない状態であった０本発明は常温で
固体である高融点油脂、例えば牛脂等の加水分解を４０
℃以上の作用温度でバッチ攪拌方式を用いて可能ならし
めるとともに、従来反応が遅かった油脂に対しても作用
温度を高めることに依って分解を有利に行う方法を提供
するものである。

〔問題を解決するための手段及びその作用〕油脂の分解
は油脂中への水の溶解炭が増大するほど反応はより早く
進行するものと考えられ、固体状態の油脂に対してより
も液体状態の油脂の方がより分解はスムーズに行われる
。従来より用いられているキヤンデイダ・シリンドラセ
の産生ずる酵素は作用温度範囲が３０〜４０℃で低い為
、４０℃以下では固体状態である牛脂等の高融点油脂を
分解するには不適当であった０本発明者らは、鋭意検討
を重ねた結果、キヤンデイダ・シリンドラセの１変異株
が従来の作用温度よりも高い作用温度を示すリパーゼを
産生ずることを発見し、この酵素を用いることに依って
４０℃以上で油脂を分解する方法を発明した０次いで本
発明の詳細な説明する。

本発明に用いられるリパーゼはキヤンデイダ・シリンド
ラセ　ＡＴＣＣ１４８３０（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉ
ｎｄｒａｃｅａ＾ＴＣＣ１４８３０）株を変異改良して
得られた菌株（本菌株は微工研菌寄第９３６５号として
工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている。）
を適当な培地に培養し、得られた培養物から採取する事
が出来る。具体的には深部通気攪拌培養を行い、培地と
して使用する培養源としては一般に微生物培養に用いら
れる炭素源、窒素源、無機塩及びその（ｂの微量栄養源
の他、キャンデイダ属に属する微生物の利用出来る栄養
源であれば全て使用出来る。

培地の炭素源としてはブドウ糖、シヨ糖、ラスターゲン
、グリセリン、デキストリン、澱粉等の他、脂肪酸、油
脂、有機酸などが単独で又は組み合せて用いられる。窒
素源としては、無機窒素源。

有機窒素源のいずれも使用可能であり、無機窒素源とし
ては、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝
酸ソーダ、塩化アンモニウム等が上げられる。又、有機
窒素源としては、大豆、米。

トウモロコシ、小麦などの粉、ｍ、脱脂粕をはじめコー
ンステイープリカ、ペプトン、肉エキス。

カゼイン、アミノ酸、酵母エキス等が上げられる。

無機塩及び微量栄養素としては、リン酸マグネシウム、
カリウム、鉄、カルシウム、亜鉛等の塩類、他ビタミン
、非イオン界面活性剤、消泡剤等の菌の生育やリパーゼ
の生産を促進するものであれば必要に応じて使用出来る
。培養は好気的条件で培養温度は菌が生育し、リパーゼ
が産生ずる範囲であれば良く、好ましくは２０〜３０℃
である。培養時間は条件により異なるがリパーゼが最も
産生される時間まで培養されれば良く、通常２〜４日程
度である。リパーゼは培養液中に熔解されており、培養
終了後、培養液より固形分を除いた培養ろ液より採取さ
れる。培養ろ液よりリパーゼを精製するには通常酵素精
製に用いられるあらゆる方法が使用出来る。例えばエタ
ノール、アセトン、イソプロピレンアルコール等の有機
溶媒による処理、硫安９食塩等による塩析、透析、限外
ろ適法、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマト
グラフィー、ゲルろ過、吸着剤、等電点分画等の方法が
使用できる。又、これらの方法を適当に組み合せること
により、リパーゼの精製度が上がる場合は、適宜組み合
わせることができる。これらの方法によって得られる酵
素は安定化剤として各種の塩類１ｗＩ類、蛋白質、脂質
、界面活性剤等を加え或いは加えることなく、限外ろ過
濃縮、逆浸透濃縮、減圧乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥の方
法により液状又は固形のリパーゼを得ることができる。

以上の方法によって得られたリパーゼの酵−′−学的性
質は以下の通りである。

ａ）作用トリグリセライドの全ての位置のエステル結合を加水分
解し、脂肪酸とグリセリンを生成する。

ｂ）基質特異性広く天然の油脂に作用し、特に短鎖脂肪酸エステルに良
く作用する特徴を有し、その基質特異性については、各
種測定法における活性の比較として表−１に示す０表−
１において、標準法の基質としてはオリーブ油が使用さ
れ、キット法においては三酪酸ジメルカプロールが使用
され、ＰＮＰＬ法においてはＰ−ニトロフェニールラウ
リン酸が使用される。

（以下余白）表−１以下に上記表−１においての各種測定法の詳細を示す。

■標準法オリーブ油乳化液５＋ａｅにｐＨ７，０のリン酸塩緩衝
液４−を加え、更に酵素液ＩＷＩｔを加えて３７℃で３
０分間反応し、遊離した脂肪酸を水酸化ナトリウムで中
和滴定して定量する。上記条件下で１分間に１マイクロ
当量の脂肪酸を生成する酵素量を１単位とする。

■キット法リパーゼキラ）Ｓ（大日本製薬■製）を用い、３７℃、
１５分間インキュベートした後の４１２ｎａ＋の吸光度
の上昇を測定する。吸光度を１上昇させる酵素量を１単
位とする。

■ＰＮＰＬ法２．５＋ｗＭのＰ−ニトロフェニールラウリル酸及び２
．０％トリ！−：／Ｘ−１００を含む５０ＩＩＩＭ酢酸
塩緩衝液０．０５−を混合し、３７℃で１５分間インキ
ュベートした後、４１０１の吸光度の上昇を測定する。

前記条件で１分間に１マイクロモルのＰ−ニトロフェノ
ールを遊離させる酵素量を１単位とする。

Ｃ）至適ｐＨ約７．０（図−１に示される。）ｄ）安定
ＰＨ約４〜７　（図−２に示される。）ｅ）至適温度　
　約５０℃（図−３に示される。）ｆ）温度安定性　ｐ
Ｈ７，０において５０℃まで安定（図−４に示される。

）ｇ）活性測定法前記の標準法を準用する。

キヤンデイダ・シリンドラセより得られるリパーゼとし
てはリパーゼＭＹ　（多糖産業■製）及びシグマ社製等
が知られているが、本発明に使用される酵素と比較する
とき、基質特異性に大きな差が認められる。各種測定法
による酵素活性の比較を表−２に示す。

表−２つまり、合成基質の様な短鎖脂肪酸エステルに対して本
発明に使用されるリパーゼは作用性が高い。

又、従来のキヤンデイダ・シリンドラセのリパーゼと比
較して温度安定性も良く、至適温度も高温域にシフトし
ている。

キヤンデイダ・シリンドラセＵ−３より得られるリパー
ゼは粗製又は精製された状態の何れでも良く、又分解の
目的とされる油脂は牛脂等の室温で固体である油脂ばか
りでなく、勿論液体の油脂にも適用できる。

以下に実施例、比較例および参考例を示すが本発明はこ
れらに限定されるものではない。

実施例１牛脂５ｇ、０．５Ｍマツキルパイン緩衝液（ｐＨ７，０
）　　４ａｆ、キヤンデイダ・シリンドラセυ−３（Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｔｎｄｒａｃｅａ　Ｕ−３）より
得られた各種濃度の酵素液１−及び直径５日のガラスピ
ーズ３０個を１００　Ｗ１１容のフラスコに入れ、４５
℃において振盪しながら２２時間インキュベートした０
反応後、反応混合物中の油層を石油エーテルで抽出しエ
ーテルを除去した後、その酸価（ＡＶ）及びケン化価（
ＳＶ）を測定し得られた値より下記の式に従って油脂の
分解率を算出した。

＾Ｖ油脂の分解率（％）　−−Ｘ　１００ｖ（結果は表−３および図−５に示す。）実施例２オリーブ油５ｇを用い、実施例１と同様に操作して油脂
の分解率を算出した。

（結果は表−３および図−６に示す。）実施例３パーム油５ｇを用い、実施例１と同様に操作して油脂の
分解率を算出した。

（結果は表−３および図−７に示す。）比較例１実施例１において、キヤンデイダ・シリンドラセＵ−３
の酵素の代わりに市販酵素リパーゼＭＹ（多糖産業■製
）を用いた時の油脂の分解率を算出した。

（結果は表−３および図−５に示す、）比較例２実施例２において、キヤンデイダ・シリンドラセＵ−３
の酵素の代わりに市販酵素リパーゼＭＹ　（多糖産業■
製）を用いた時の油脂の分解率を算出した。

（結果は表−３および図−６に示す、）比較例３実施例３において、キヤンデイダ・シリンドラセ〇−３
の酵素の代わりに市販酵素リパーゼＭＹ（多糖産業■製
）を用いた時の油脂の分解率を算出した。

（結果は表−３および図−７に示す。）表−３似下余白）参考例オリーブ油５ｇを用い、反応温度３５℃で実施例１と同
様にしてキャンディダ・シリンドラセＵ−３の酵素及び
市販酵素リパーゼＮＹ（多糖産業■製）を使用した時の
油脂の分解率を算出し、比較する。

（結果は表−４および図−８に示す、）表−４図−６および図−８からも明らかに本発明に使用する酵
素は３５℃、４５℃のいずれの温度でも良く油脂を分解
する。

（発明の効果〕本発明により従来キヤンデイダ・シリンドラセ由来のリ
パーゼでは作用温度が比較的低温であった為、高融点油
脂の分解が不可能でありかつ反応温度を高くすることが
出来ない為、他の油脂の分解においても不充分であった
が、本発明によってそれが可能となり油脂工業界におい
て多大な貢献をもたらすものである。

【図面の簡単な説明】

図−１、図−２、図−３および図−４は本発明に使用す
るリパーゼの酵素化学的性質を示すものであり、各々至
適ｐＨ１安定ｐｉ、至適温度および温度安定性を示す０
図−５、図−６および図−７は本発明による牛脂、オリ
ーブ油およびパーム油の各種酵素濃度における４５℃で
の分解率を示すものであり、図中で一〇−は本発明に使
用するキヤンデイダ・シリンドラセＵ−３株のリパーゼ
の結果を示し、−・−は市販酵素リパーゼＭＹ（多糖産
業■製）の結果を示すものであり、図−８はオリーブ油
の各種酵素濃度における３５℃での分解率を示すもので
あり、図中で一〇−は本発明に使用するキヤンデイダ・
シリンドラセＵ−３株のリパーゼの結果を示し、−・−
は市販酵素リパーゼＭＹ（多糖産業■製）の結果を示す
。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）作用温度が４０℃以上であるキヤンデイダ・シリ
ンドラセ変異株の産生するリパーゼを用いることを特徴
とする油脂の分解法。
（２）キヤンデイダ・シリンドラセ変異株がキヤンデイ
ダ・シリンドラセＵ−３である特許請求の範囲第１項記
載の油脂の分解法。