JPS63284470A - 多価抗原の定量的測定法及びその試薬並びに受容体の製造法 - Google Patents
多価抗原の定量的測定法及びその試薬並びに受容体の製造法Info
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- JPS63284470A JPS63284470A JP63100445A JP10044588A JPS63284470A JP S63284470 A JPS63284470 A JP S63284470A JP 63100445 A JP63100445 A JP 63100445A JP 10044588 A JP10044588 A JP 10044588A JP S63284470 A JPS63284470 A JP S63284470A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、液状試料中の多価、すなわち少なくとも二官
能性の抗原の免疫化学的測定法、測定のための試薬及び
その製法に関る、。
能性の抗原の免疫化学的測定法、測定のための試薬及び
その製法に関る、。
従来の技術
様々の抗原決定因子に対応している2種の抗体の使用下
に多価抗原(−1!プチド、蛋白質)の感度測定は、例
えばJ、 CL i n、 Chem、 C7i n。
に多価抗原(−1!プチド、蛋白質)の感度測定は、例
えばJ、 CL i n、 Chem、 C7i n。
Biochem、 18巻(1980年)197〜2゜
8頁から公知である。この方法の多数の変法が、例えば
西ドイツ国特許公開公報(DE−O3)第340002
7号明細書から知られている。
8頁から公知である。この方法の多数の変法が、例えば
西ドイツ国特許公開公報(DE−O3)第340002
7号明細書から知られている。
この公開公報によると、多価抗原の測定のために3種の
異なる受容体(Rezeptor )を用いて定温保持
を実施し、そのうち第1及び第3は液相で溶解して存在
し、かつ抗原と結合る、ことができ、一方第2受容体は
同相で存在し、かつ第1受容体と結合る、ことができ、
かつ第3受容体は標識されていて、第1及び第2受容体
と交差反応しない。3種の受容体を用いて測定すべき抗
原の異なる方法で実施可能な定温保持によシ、固相に結
合したサンドイッチ(Sandwich)−構造を最終
的に得て、その場合に、固相に結合した第2受容体は、
第1受容体を結合し、後者は再び抗原を結合しかつ抗原
は最後に標識された第3受容体を結合る、。
異なる受容体(Rezeptor )を用いて定温保持
を実施し、そのうち第1及び第3は液相で溶解して存在
し、かつ抗原と結合る、ことができ、一方第2受容体は
同相で存在し、かつ第1受容体と結合る、ことができ、
かつ第3受容体は標識されていて、第1及び第2受容体
と交差反応しない。3種の受容体を用いて測定すべき抗
原の異なる方法で実施可能な定温保持によシ、固相に結
合したサンドイッチ(Sandwich)−構造を最終
的に得て、その場合に、固相に結合した第2受容体は、
第1受容体を結合し、後者は再び抗原を結合しかつ抗原
は最後に標識された第3受容体を結合る、。
この原則に基づく方法及び試薬の欠点は、このために使
用される試薬の不十分な安定性にある。この場合、安定
性とは長時間にわたる較正曲線の一定(分析物(Ana
Ayten)のシグナル/a度)のことである。不十分
な安定性は、新たに製造した試薬の較正曲線が貯蔵され
た試薬の較正曲線と一致しないという結果となる。通例
、貯蔵が長くなると共に較正曲線はよシ平坦となること
が認められる。これについての理由は知られていない。
用される試薬の不十分な安定性にある。この場合、安定
性とは長時間にわたる較正曲線の一定(分析物(Ana
Ayten)のシグナル/a度)のことである。不十分
な安定性は、新たに製造した試薬の較正曲線が貯蔵され
た試薬の較正曲線と一致しないという結果となる。通例
、貯蔵が長くなると共に較正曲線はよシ平坦となること
が認められる。これについての理由は知られていない。
発明が解決しようとる、課題
ところで本発明の課題は、前記の方法及び試薬を次のよ
うに改善る、ことであシ、すなわち較正曲線の安定性を
従来よシも長時間にわたって得ること、換言すれば、二
重抗体−サンドインチ法(DOppeAant iko
rper−3andwichver fahren)(
DASP ) の信頼性を改善る、ことである。
うに改善る、ことであシ、すなわち較正曲線の安定性を
従来よシも長時間にわたって得ること、換言すれば、二
重抗体−サンドインチ法(DOppeAant iko
rper−3andwichver fahren)(
DASP ) の信頼性を改善る、ことである。
課題を解決る、ための手段
この課題は、本発明により、3種の異なる受容体(その
うち第1(R1)及び第3(R3)は液相で溶解して存
在しかつ抗原と結合る、ことができ、第2受容体(R2
)は固相で存在し、かつ(R1)と結合る、ことができ
、かつ(R3)は標識されていて、かつ(R1)及び(
R2)と交差結合しない)との定温保持による多価抗原
の定量的測定、液相から固相の分離及び相の1方におけ
る標識の測定のための方法によって解決され、この方法
は、少なくとも2種の相互に結合した抗体分子又は抗体
分子断片(そのうち少なくとも1個は測定すべき抗原と
特異的に結合る、)よりなる第1受容体(R1)を使用
る、ことを特徴とる、。
うち第1(R1)及び第3(R3)は液相で溶解して存
在しかつ抗原と結合る、ことができ、第2受容体(R2
)は固相で存在し、かつ(R1)と結合る、ことができ
、かつ(R3)は標識されていて、かつ(R1)及び(
R2)と交差結合しない)との定温保持による多価抗原
の定量的測定、液相から固相の分離及び相の1方におけ
る標識の測定のための方法によって解決され、この方法
は、少なくとも2種の相互に結合した抗体分子又は抗体
分子断片(そのうち少なくとも1個は測定すべき抗原と
特異的に結合る、)よりなる第1受容体(R1)を使用
る、ことを特徴とる、。
意外にも、オリゴマー又はポリマーの第1受容体(R1
)の使用の際に、この方法もしくは試薬の安定性の実際
の改善を得ることが判明した。
)の使用の際に、この方法もしくは試薬の安定性の実際
の改善を得ることが判明した。
本発明の範囲において受容体としては特異的に結合可能
な物質、特にポリクローナル又はモノクローナルであっ
てよい特異的に結合可能な完全抗体、その抗体断片又は
抗体又は抗体断片とハシテン又は抗原との結合体(Ko
n jugate)を使用る、。モノクローナル抗体を
有利に使用る、。
な物質、特にポリクローナル又はモノクローナルであっ
てよい特異的に結合可能な完全抗体、その抗体断片又は
抗体又は抗体断片とハシテン又は抗原との結合体(Ko
n jugate)を使用る、。モノクローナル抗体を
有利に使用る、。
本明細書中“抗体“もしくは“抗体分子“という表示は
完全抗体ばかシでなく、当業者に公知のその結合能力を
有る、断片もこれに属る、。
完全抗体ばかシでなく、当業者に公知のその結合能力を
有る、断片もこれに属る、。
ここで多価抗原としては、数個の抗原決定因子を有る、
抗原である。
抗原である。
両受容体R1及びR2は相互に特異的に結合る、ことが
できる物質対を形成る、。すなわち例えば受容体R1が
抗体である場合には、受容体R2は受容体R1に適合し
た免疫グロブリン又は蛋白質Aであってよい。更に受容
体R1がビオチニル化された又はアビジン(Avidi
n)を与えた抗体である場合には、受容体R2は、アビ
ジン、ストレプトアビジン又はビオチンであってよい。
できる物質対を形成る、。すなわち例えば受容体R1が
抗体である場合には、受容体R2は受容体R1に適合し
た免疫グロブリン又は蛋白質Aであってよい。更に受容
体R1がビオチニル化された又はアビジン(Avidi
n)を与えた抗体である場合には、受容体R2は、アビ
ジン、ストレプトアビジン又はビオチンであってよい。
その他の物質対は適当であシ、当業者に公知である。
殊に第1受容体(R1)は相互に網状化された同一の抗
体又はその結合能力を有る、断片よりなり、それはモノ
クローナル又はポリクローナルであってよい。この際個
々の抗体分子は2価又は多価のリンカ−(架橋形成体)
によシ相互に結合している。2価のリンカ−による網状
化が有利であり、それというのもこれは受容体の“重合
度(Polymer 1sat ionsgrades
)′のよシ容易な調整を可能にる、からである。しかし
ながら本発明による作用は多価リンカ−を用いても達成
される。
体又はその結合能力を有る、断片よりなり、それはモノ
クローナル又はポリクローナルであってよい。この際個
々の抗体分子は2価又は多価のリンカ−(架橋形成体)
によシ相互に結合している。2価のリンカ−による網状
化が有利であり、それというのもこれは受容体の“重合
度(Polymer 1sat ionsgrades
)′のよシ容易な調整を可能にる、からである。しかし
ながら本発明による作用は多価リンカ−を用いても達成
される。
受容体(R1)がそれよりなる個々の抗体の結合位置が
リンカ−によって遮断されないように、抗体分子1個当
シ1o個以上のリンカ−を結合させないようにる、のが
有利である。抗体分子1個当92〜5個のリンカ−が有
利である。
リンカ−によって遮断されないように、抗体分子1個当
シ1o個以上のリンカ−を結合させないようにる、のが
有利である。抗体分子1個当92〜5個のリンカ−が有
利である。
リンカ−の結合官能基の反応性に依り、リンカ−及び抗
体をモル比約1=1〜50:1で網状化のために使用る
、場合に、この有利な結合生成物(Kupp7ungs
−produkte)が得られる。
体をモル比約1=1〜50:1で網状化のために使用る
、場合に、この有利な結合生成物(Kupp7ungs
−produkte)が得られる。
リンカ−(架橋形成体)としては、水溶液中で蛋白質の
官能性基と共有構造の形成下に反応る、ことができる反
応性の基を有る、ような化合物を使用る、ことができる
。このために好適な2官能又は多官能性の多数のリンカ
−は当業者に公知である。本発明の範囲で好適なホモ−
又はヘテロ2官能性及び3官能性リンカ−の典型例を次
の第1表に挙げる。
官能性基と共有構造の形成下に反応る、ことができる反
応性の基を有る、ような化合物を使用る、ことができる
。このために好適な2官能又は多官能性の多数のリンカ
−は当業者に公知である。本発明の範囲で好適なホモ−
又はヘテロ2官能性及び3官能性リンカ−の典型例を次
の第1表に挙げる。
第 ■ 表
ルジチオ)−プロピオネート
EADB エチル4−アジドフェニル−1,4−ジチオ
プ、チルイミデート・HC7 FNPA 4−フルオロ−3−二トロフェニルアジド HSAB N−ヒドロキシサクシンイミジルー牛−ア
シトベンゾエート MABL メチル−4−アジドベンゾイミデート・H
CA MBS m−マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシ
サクシンイミドーエステル NHS−ASA N−ヒドロキシサクシンイミジルー生
−アシトサリチル酸 MHS m−マレイミドヘキサノイル−N−ヒドロキ
シサクシンイミドーエステル PNP−DTP p−ニトロフェニル−2−ジアゾ−3
,3,3−)リフルオロプロピオ ネート 5ADP N−サクシンイミジル(4−アジドフェニ
ル) 1 、3’−ジチオプロピオネート 5AND スルホサクシンイミジル−2−(m−アジ
ド−O−ニトロベンズアミド)− エチル−1,3′−ジチオプロピオネート 5ANPAHN−サクシンイミジル−6(4′−アジド
−2−ニトロフェニル−アミノ) ヘキサノエート 5ASD スルホサクシンイミジル2−(p−アジド
サリチルアミド)エチル−1,3′−ジチオプロピオネ
ート 5IAB N−サクシンイミジル(4−イオドアセチ
ル)アミノベンゾエート lミドエチル)シクロヘキサン−1− カル?キシレート SMPB ?クランイミジル−+−<p−マレイミド
フェニル)ブチレート DSS ジサクシンイミジルスペレートDMS ジメ
チルスペリイミデート トラウトの(Traut’s)試薬 2−イ゛ミノチオラン ・・・2,4.6)リクロル−5−)リアジン網状化の
実施のために相互に結合すべき抗体の溶液にリンカ−分
子を、直接網状化に至る条件下で、加えることができる
。網状化の程度はこの場合添加されるリンカ−の量によ
り調整る、。
プ、チルイミデート・HC7 FNPA 4−フルオロ−3−二トロフェニルアジド HSAB N−ヒドロキシサクシンイミジルー牛−ア
シトベンゾエート MABL メチル−4−アジドベンゾイミデート・H
CA MBS m−マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシ
サクシンイミドーエステル NHS−ASA N−ヒドロキシサクシンイミジルー生
−アシトサリチル酸 MHS m−マレイミドヘキサノイル−N−ヒドロキ
シサクシンイミドーエステル PNP−DTP p−ニトロフェニル−2−ジアゾ−3
,3,3−)リフルオロプロピオ ネート 5ADP N−サクシンイミジル(4−アジドフェニ
ル) 1 、3’−ジチオプロピオネート 5AND スルホサクシンイミジル−2−(m−アジ
ド−O−ニトロベンズアミド)− エチル−1,3′−ジチオプロピオネート 5ANPAHN−サクシンイミジル−6(4′−アジド
−2−ニトロフェニル−アミノ) ヘキサノエート 5ASD スルホサクシンイミジル2−(p−アジド
サリチルアミド)エチル−1,3′−ジチオプロピオネ
ート 5IAB N−サクシンイミジル(4−イオドアセチ
ル)アミノベンゾエート lミドエチル)シクロヘキサン−1− カル?キシレート SMPB ?クランイミジル−+−<p−マレイミド
フェニル)ブチレート DSS ジサクシンイミジルスペレートDMS ジメ
チルスペリイミデート トラウトの(Traut’s)試薬 2−イ゛ミノチオラン ・・・2,4.6)リクロル−5−)リアジン網状化の
実施のために相互に結合すべき抗体の溶液にリンカ−分
子を、直接網状化に至る条件下で、加えることができる
。網状化の程度はこの場合添加されるリンカ−の量によ
り調整る、。
相互に結合すべき抗体の半分を第1リンカ−と、リンカ
−の官能基の1つだけが抗体との構造形成に至る条件下
で、反応させる方法で、網状化を有利に行なう。同様の
方法で、網状化すべき抗体のもう半分を第2リンカ−と
反応させる。そうして得られる両抗体誘導体を次いで相
互に反応させる。この際、相互に結合すべき抗体誘導体
のモル比2:1〜1:2を使用る、のが有利である。約
1:1の比が特に有利である。
−の官能基の1つだけが抗体との構造形成に至る条件下
で、反応させる方法で、網状化を有利に行なう。同様の
方法で、網状化すべき抗体のもう半分を第2リンカ−と
反応させる。そうして得られる両抗体誘導体を次いで相
互に反応させる。この際、相互に結合すべき抗体誘導体
のモル比2:1〜1:2を使用る、のが有利である。約
1:1の比が特に有利である。
受容体(R1)は有利に抗体分子2〜20個、特に有利
に抗体分子4〜12個を含有る、。
に抗体分子4〜12個を含有る、。
前記の単一種の抗体から組成される受容体(R1)(オ
リゴマーもしくはポリマーとして存在る、同種抗体)の
場合のみならず、この受容体(R1)は、測定すべき抗
原に対してかつ受容体(R2)に対してそのつどそれ自
体極めて特異性の結合能力を有る、2種の異なる抗体か
ら組成されてもよい。この場合には完全受容体(R1)
の製造は、両方の異なる抗体の各個の誘導体化及び引続
く両方の誘導体相互の反応の前記の有利な方法によシ行
なう。
リゴマーもしくはポリマーとして存在る、同種抗体)の
場合のみならず、この受容体(R1)は、測定すべき抗
原に対してかつ受容体(R2)に対してそのつどそれ自
体極めて特異性の結合能力を有る、2種の異なる抗体か
ら組成されてもよい。この場合には完全受容体(R1)
の製造は、両方の異なる抗体の各個の誘導体化及び引続
く両方の誘導体相互の反応の前記の有利な方法によシ行
なう。
本発明の範囲での使用には、その重合度もしくはその中
に含有される個々の抗体分子の数に関してできる限シ均
等の組成を有る、受容体R1が有利である。これは簡単
な方法でクロマトグラフィーによる予備精製によって達
成る、ことができる。
に含有される個々の抗体分子の数に関してできる限シ均
等の組成を有る、受容体R1が有利である。これは簡単
な方法でクロマトグラフィーによる予備精製によって達
成る、ことができる。
受容体(R2)としては、受容体(R1)と結合る、こ
とができる不溶相に結合した受容体を使用る、。(R2
)は有利に前記の定義の意味における抗体である。(R
2)は同種抗体から組成される受容体(R1)の一部と
結合る、ことができるか又は異種組成受容体(R1)の
場合には、測定すべき抗原に対してよシ僅少の親和性を
示す成分と結合る、ことができる。受容体(R2)は有
利に受容体(R1)における抗体分子のFc一部分に対
応している。一般に免疫グロブリンのFc一部分に対応
している受容体(R2)も適描である。
とができる不溶相に結合した受容体を使用る、。(R2
)は有利に前記の定義の意味における抗体である。(R
2)は同種抗体から組成される受容体(R1)の一部と
結合る、ことができるか又は異種組成受容体(R1)の
場合には、測定すべき抗原に対してよシ僅少の親和性を
示す成分と結合る、ことができる。受容体(R2)は有
利に受容体(R1)における抗体分子のFc一部分に対
応している。一般に免疫グロブリンのFc一部分に対応
している受容体(R2)も適描である。
第3受容体(R3)は受容体(R1)と同様に測定すべ
き多価抗原と結合る、ことができる。
き多価抗原と結合る、ことができる。
これはポリクローナル又はモノクローナル抗体を含有る
、ことができる。モノクローナル抗体が問題となる場合
には、それが(R1)のように他のエピトープに結合る
、ように、それを選択る、。これは簡単な方法で、測定
すべき多価抗原と結合る、ことができるモノクローナル
抗体を、そのつど(R1)中で並びに(R3)中で使用
る、ことによって達成され、その際このモノクローナル
抗体は種々の抗原決定因子を認識る、。これは両方の抗
体が同一の実験動物から由来しうるという利点を有る、
。
、ことができる。モノクローナル抗体が問題となる場合
には、それが(R1)のように他のエピトープに結合る
、ように、それを選択る、。これは簡単な方法で、測定
すべき多価抗原と結合る、ことができるモノクローナル
抗体を、そのつど(R1)中で並びに(R3)中で使用
る、ことによって達成され、その際このモノクローナル
抗体は種々の抗原決定因子を認識る、。これは両方の抗
体が同一の実験動物から由来しうるという利点を有る、
。
更になお受容体R3は標識を担持る、。標識は酵素、放
射性物質、同位元素、螢光又は化学光物質であってよく
、その測定は当業者に周知の方法によシ実施される。す
なわち例えば標識を酵素、911えばペルオキシダーゼ
又はβ−ガラクトシダーゼで行なう場合には、この酵素
の活性は、このために一般に公知の方法で、この標識酵
素のために公知の検出試薬、例えば呈色試薬を添加しか
つ面相の存在で又は分離後に測定る、ことによって測定
される。この時測定した酵素活性は測定すべき多価抗原
の量に対る、尺度である。
射性物質、同位元素、螢光又は化学光物質であってよく
、その測定は当業者に周知の方法によシ実施される。す
なわち例えば標識を酵素、911えばペルオキシダーゼ
又はβ−ガラクトシダーゼで行なう場合には、この酵素
の活性は、このために一般に公知の方法で、この標識酵
素のために公知の検出試薬、例えば呈色試薬を添加しか
つ面相の存在で又は分離後に測定る、ことによって測定
される。この時測定した酵素活性は測定すべき多価抗原
の量に対る、尺度である。
本発明のもう1つの目的は、3種の受容体(R1,R2
,R3)(そのうち(R1)及び(R3)は溶性であシ
かつ抗原と結合る、ことができ、(R3)は標識されて
いてかっ(R1)及び(R2)と交差反応しない)を含
有る、多価抗原の定量的測定のための試薬であシ、これ
は、(R1)が少なくとも2個の相互に結合した抗体分
子又は抗体分子断片よりなる(そのうち少なくとも1個
は測定すべき抗原と特異的に結合る、)ことを特徴とる
、。
,R3)(そのうち(R1)及び(R3)は溶性であシ
かつ抗原と結合る、ことができ、(R3)は標識されて
いてかっ(R1)及び(R2)と交差反応しない)を含
有る、多価抗原の定量的測定のための試薬であシ、これ
は、(R1)が少なくとも2個の相互に結合した抗体分
子又は抗体分子断片よりなる(そのうち少なくとも1個
は測定すべき抗原と特異的に結合る、)ことを特徴とる
、。
この試薬の有利な実施態様は、測定方法と結びつけてず
でに詳細に述べてあシかつ試薬の組成にも同様に適用る
、。
でに詳細に述べてあシかつ試薬の組成にも同様に適用る
、。
本発明によシ異種の免疫検定、例えば二重−抗体−サン
ドイッチ−法のための試薬の安定性の改善、特に長時間
にわたる較正曲線の不変性に関る、改善が達成される。
ドイッチ−法のための試薬の安定性の改善、特に長時間
にわたる較正曲線の不変性に関る、改善が達成される。
達成される改善された較正曲線の不変性によシ測定の信
頼性が高められる。
頼性が高められる。
次の実施例及び図によシこれを更に説明る、。
第1図は西ドイツ国特許出願公告(DE−AS)第34
25008.2号明細書による回転子差込み部材を示し
ている。
25008.2号明細書による回転子差込み部材を示し
ている。
第2図は受容体R1′(非網状化)でのLH−較正曲線
を示す。
を示す。
第3図は受容体R1(網状化)でのLH−較正曲線を示
す。
す。
実施例
例I
AFPの測定
1 試薬の製造
1.1 緩衝液■:
に2HP04溶液50ミリモル/!及びKH2PO4溶
液50ミリモル/!を…値6.0の達成まで混合る、こ
とによって製造される燐酸カリウム緩衝液(pi(6,
0) 50 ミ’J モル/A。
液50ミリモル/!を…値6.0の達成まで混合る、こ
とによって製造される燐酸カリウム緩衝液(pi(6,
0) 50 ミ’J モル/A。
1.2 緩衝液■:
緩衝液■は、声値としてpH7,5を調整しかつ緩衝液
は付加的にウシ血清アルブミン10.P/!及びNa(
J 150 ミリモル/!を含有る、ことを相違して、
緩衝液Iと同様に製造る、。
は付加的にウシ血清アルブミン10.P/!及びNa(
J 150 ミリモル/!を含有る、ことを相違して、
緩衝液Iと同様に製造る、。
1.3 受容体(R1’)(非網状化の抗−AFP−
抗体) 受容体(R,1’)としテf ツク−y ス(Subk
7asse)IgG2B(ECACC87041002
)のモノクローナルマウス−抗−AFP−抗体を使用る
、。この抗体を含有る、腹水液に硫酸アンモニウム1゜
8Mまでを加える。沈殿を燐酸ナトリウム(P)(7,
0)15ミリモル及び塩化ナトリウム50ミリモルより
なる緩衝液に入れる。そうして得られる溶液をDEAE
−セルロースを介して通過させる。そうして得られる、
AFPと結合可能な抗体を含有る、溶離液を引続き凍結
乾燥させる。
抗体) 受容体(R,1’)としテf ツク−y ス(Subk
7asse)IgG2B(ECACC87041002
)のモノクローナルマウス−抗−AFP−抗体を使用る
、。この抗体を含有る、腹水液に硫酸アンモニウム1゜
8Mまでを加える。沈殿を燐酸ナトリウム(P)(7,
0)15ミリモル及び塩化ナトリウム50ミリモルより
なる緩衝液に入れる。そうして得られる溶液をDEAE
−セルロースを介して通過させる。そうして得られる、
AFPと結合可能な抗体を含有る、溶離液を引続き凍結
乾燥させる。
1.4 受容体(R1)(網状化の抗−AFP−抗体
) 1.4.1. AFP−特異抗体の誘導体化受容体(
R1’)(モノクローナルマウス抗−AFP−抗体、1
.3参照)10■を0.1M燐酸す。サクシンイミ//
ルー3−(2−ピリジルジチオ)−プロピオネート(S
PDP)0.1rII9の添加後に反応を25℃で1時
間行なう。…値を酢酸でpH4,5に変えかつジチオト
レイト(Dit−旧othreit)81n9を添加し
た後に更に20分間反応を25°Cで行なう。生成物を
、NaCA25ミリモル及びMgCA210ミリモルを
有る、燐酸カリウム緩衝液PI−16,15(10ミリ
モル)中、クロマトグラフィーカラム中でACA202
−グル(製造者:LKB、スウェーデン)10dを介る
、通過によシ脱塩る、。生成物を市販の限外濾過装置(
アミコン社(Ami con Corp。
) 1.4.1. AFP−特異抗体の誘導体化受容体(
R1’)(モノクローナルマウス抗−AFP−抗体、1
.3参照)10■を0.1M燐酸す。サクシンイミ//
ルー3−(2−ピリジルジチオ)−プロピオネート(S
PDP)0.1rII9の添加後に反応を25℃で1時
間行なう。…値を酢酸でpH4,5に変えかつジチオト
レイト(Dit−旧othreit)81n9を添加し
た後に更に20分間反応を25°Cで行なう。生成物を
、NaCA25ミリモル及びMgCA210ミリモルを
有る、燐酸カリウム緩衝液PI−16,15(10ミリ
モル)中、クロマトグラフィーカラム中でACA202
−グル(製造者:LKB、スウェーデン)10dを介る
、通過によシ脱塩る、。生成物を市販の限外濾過装置(
アミコン社(Ami con Corp。
)、USA)を用いて蛋白質濃度’J、+m9/atま
で濃縮る、。
で濃縮る、。
1、4.2 網状化成分の誘導体化
+ブtt ラxIgG1(ECACC87041001
)のモノクローナルマウス−抗−hCG−抗体(1,3
に記載したよって製造)10ダを公知方法によシ(イシ
カワ(l511 i kawa )等著、J。
)のモノクローナルマウス−抗−hCG−抗体(1,3
に記載したよって製造)10ダを公知方法によシ(イシ
カワ(l511 i kawa )等著、J。
ImmunOaSSay4巻(1983年)2O2頁以
降)、N−サクシンイミジル−4(N−マレイニミドメ
チル)−シクロヘキサン−1−カルゴキシレー) (S
MCC)で誘導体化る、。脱塩及び濃縮は1.4.1の
記載と同様に行なう。
降)、N−サクシンイミジル−4(N−マレイニミドメ
チル)−シクロヘキサン−1−カルゴキシレー) (S
MCC)で誘導体化る、。脱塩及び濃縮は1.4.1の
記載と同様に行なう。
1、4.3 結合(Konjugation)1.4
.1及び1.4.2からの抗体誘導体各10〜を一緒に
p)17.0及び25℃で1.5時間反応させる。反応
を、1ミリモルまでのシスティンの添加(30分間、2
5C)及び引続いてのヨードアセトアミド(1時間、2
5℃)の添加によシ止める。生成物を1.4.1に記載
したように脱塩し、濃縮る、。
.1及び1.4.2からの抗体誘導体各10〜を一緒に
p)17.0及び25℃で1.5時間反応させる。反応
を、1ミリモルまでのシスティンの添加(30分間、2
5C)及び引続いてのヨードアセトアミド(1時間、2
5℃)の添加によシ止める。生成物を1.4.1に記載
したように脱塩し、濃縮る、。
1.5 標識化受容体(R3)溶液:受容体(R3)
としてポリクローナルマウス−抗−AFP−抗体を使用
し、これを1.3に記載したように免疫吸着精製によシ
更に処理る、。
としてポリクローナルマウス−抗−AFP−抗体を使用
し、これを1.3に記載したように免疫吸着精製によシ
更に処理る、。
完全抗体を公知方法によシ、データー(R,R。
POrter)著、Biochem、 J、 73巻(
1959年)119頁の方法によシ、Fab断片に分離
る、。得られるFab断片をイシカワ等著のJ、ofI
rrn’1unOaSSay4巻(1983年)20G
1〜327貫により、β−ガラクトシダーゼと結合させ
る。受容体(R3)溶液を緩衝液n中で500mU/a
/(37℃でO−ニトロフェニル−β−ガラクトシドで
測定)の濃度まで希釈る、。
1959年)119頁の方法によシ、Fab断片に分離
る、。得られるFab断片をイシカワ等著のJ、ofI
rrn’1unOaSSay4巻(1983年)20G
1〜327貫により、β−ガラクトシダーゼと結合させ
る。受容体(R3)溶液を緩衝液n中で500mU/a
/(37℃でO−ニトロフェニル−β−ガラクトシドで
測定)の濃度まで希釈る、。
1.6 受容体(R2)溶液:
ヒツジー抗−マウスーFcγ−抗血清に硫酸アンモニウ
ムを1.8 Mまで加える。沈殿を燐酸ナトリウムpH
7,0(15ミリモル)及び塩化ナトリウム(50ミリ
モル)よりなる緩衝液中に入れる。そうして得られる溶
液をDEAE−セルロースを介して通過させる。特異抗
体を含有る、溶離液を緩衝液I中で蛋白質濃度5oμl
−/mlまで希釈る、。
ムを1.8 Mまで加える。沈殿を燐酸ナトリウムpH
7,0(15ミリモル)及び塩化ナトリウム(50ミリ
モル)よりなる緩衝液中に入れる。そうして得られる溶
液をDEAE−セルロースを介して通過させる。特異抗
体を含有る、溶離液を緩衝液I中で蛋白質濃度5oμl
−/mlまで希釈る、。
1.7 基質溶液:
クロルフェノールロート−β−ガラクトシド(西ドイツ
特許(DE)第3345748号明細書よシ製造)
5ミリモル/A (3,o 5 ?/1)HEPE
S 70ミリモル/Z(16,79−
/A)NaCA 154 ミI)モル
/!(9y−/Z)ウシ血清アルブミン 0
.3チ(3y−/A)ツイーン(Tween)20
0.2チ(2?/A)pH(NaOH)で
7.252 試薬担体の製造 2.1 試薬担体1′(比較;非網状化受容体(R1
’)):1.#当り、燐酸ナトリウムpH7,3(37
℃)100ミリモル、塩化マグネシウム2ミリモル、塩
化ナトリウム9ノ、ウシ血清アルブミン5ノ、マウスか
らの抗−AFP−モノクローナル抗体(受容体R1’)
5m9(20On、rAK/試験)、抗−AFP−抗
体−(マウス)−Feb断片−β−ガラクトシダーゼ−
複合体(受容体R3溶液、37℃でオルト−ニトロフェ
ニル−β−D−ガラクトシドで活性を測定る、)1、○
○OUを含有る、溶液40μ!を、市販のポリエステル
紙製のフリース上に滴下る、。引続き室温で乾燥る、。
特許(DE)第3345748号明細書よシ製造)
5ミリモル/A (3,o 5 ?/1)HEPE
S 70ミリモル/Z(16,79−
/A)NaCA 154 ミI)モル
/!(9y−/Z)ウシ血清アルブミン 0
.3チ(3y−/A)ツイーン(Tween)20
0.2チ(2?/A)pH(NaOH)で
7.252 試薬担体の製造 2.1 試薬担体1′(比較;非網状化受容体(R1
’)):1.#当り、燐酸ナトリウムpH7,3(37
℃)100ミリモル、塩化マグネシウム2ミリモル、塩
化ナトリウム9ノ、ウシ血清アルブミン5ノ、マウスか
らの抗−AFP−モノクローナル抗体(受容体R1’)
5m9(20On、rAK/試験)、抗−AFP−抗
体−(マウス)−Feb断片−β−ガラクトシダーゼ−
複合体(受容体R3溶液、37℃でオルト−ニトロフェ
ニル−β−D−ガラクトシドで活性を測定る、)1、○
○OUを含有る、溶液40μ!を、市販のポリエステル
紙製のフリース上に滴下る、。引続き室温で乾燥る、。
このフリースをその使用まで4 ”Oでかつ20%の相
対空気湿度で保存る、。
対空気湿度で保存る、。
2.2 試薬担体1(本発明による:網状化受容体(
R1)を用いて):その製造は、非線状化モノクローナ
ル抗−AFP−抗体(受容体(R1’))の代シにマウ
スからの網状化モノクローナル抗−AFP−抗体(受容
体(R1))を使用る、点は相違して、試薬担体1′の
ための製造と同様に行なう。
R1)を用いて):その製造は、非線状化モノクローナ
ル抗−AFP−抗体(受容体(R1’))の代シにマウ
スからの網状化モノクローナル抗−AFP−抗体(受容
体(R1))を使用る、点は相違して、試薬担体1′の
ための製造と同様に行なう。
2.3 試薬担体2:
マウス−抗体(受容体R3溶液)のFcγ一部分に対る
、ヒツジ−抗体を、ブロムシアン−活性化法(西ドイツ
国特許公開公報(”DE−OS)第1768512号明
細書)によシセルロースー7リース上に固定させ、この
際繊維材料1?当り抗体10 pPを固定に提供る、。
、ヒツジ−抗体を、ブロムシアン−活性化法(西ドイツ
国特許公開公報(”DE−OS)第1768512号明
細書)によシセルロースー7リース上に固定させ、この
際繊維材料1?当り抗体10 pPを固定に提供る、。
結合しなかった抗体を洗浄によって除去し、フリースを
室温で慎重に乾燥した。そうして得られる7リースの貯
蔵を試薬担体1と同様に行なう。
室温で慎重に乾燥した。そうして得られる7リースの貯
蔵を試薬担体1と同様に行なう。
3 測定の実施
この2つの試薬担体1及び2もしくは1′及び2を用い
る測定は、西ドイツ国特許出願公告(DE−AS’)第
3425008.5号明細書に記載の、分析的測定の実
施のための装置を用いて行なう(第1図)。
る測定は、西ドイツ国特許出願公告(DE−AS’)第
3425008.5号明細書に記載の、分析的測定の実
施のための装置を用いて行なう(第1図)。
これは、一定の試薬を浸み込ませた吸収力を有る、担体
材料をそのつど含有る、多数の試薬区分と連結している
試料装填室、少なくとも1かつ更に液体の収容のための
もう1つの室及びこの室から測定部に通じていてかつ試
料液体移送路と少なくとも部分的に同一である移送路を
有る、場合に、放射状に内から外へ至る試料液体移送路
と共に成る自動遠心分析機のための回転子差込み構成部
材を示す。この際、試料液体移送路は試料装填室(P)
から吸収力を有る、材料を充した、緩衝液を含有る、室
(a)、室(C)及び室(a)と(C)との間に配置さ
れた第1弁室(VKI)を経て第2弁室(VK2)に至
り、かつこれから室(d)を経てかつ収容室(AK)を
経て測定室(K)に至る。もう1つの液体を収容る、た
めに、ポンプ室として構成された基質室(PK)があら
かじめ備えられていて、これは配量室(DK)及び毛細
管(Kap )よりなる配量装置及び溢流室(UK)を
経て第2弁室(VK2)と結びついている。第1図は使
用される回転子差込み構成部材を図示している。
材料をそのつど含有る、多数の試薬区分と連結している
試料装填室、少なくとも1かつ更に液体の収容のための
もう1つの室及びこの室から測定部に通じていてかつ試
料液体移送路と少なくとも部分的に同一である移送路を
有る、場合に、放射状に内から外へ至る試料液体移送路
と共に成る自動遠心分析機のための回転子差込み構成部
材を示す。この際、試料液体移送路は試料装填室(P)
から吸収力を有る、材料を充した、緩衝液を含有る、室
(a)、室(C)及び室(a)と(C)との間に配置さ
れた第1弁室(VKI)を経て第2弁室(VK2)に至
り、かつこれから室(d)を経てかつ収容室(AK)を
経て測定室(K)に至る。もう1つの液体を収容る、た
めに、ポンプ室として構成された基質室(PK)があら
かじめ備えられていて、これは配量室(DK)及び毛細
管(Kap )よりなる配量装置及び溢流室(UK)を
経て第2弁室(VK2)と結びついている。第1図は使
用される回転子差込み構成部材を図示している。
試薬担体1もしくは1′を回転子差込み構成部材のC区
分に入れ、かつ試薬担体2を6区分に入れる。この際、
0.9%NaCJ溶液で1=3希釈した試料40μ!を
上級の開口部を通して直接の区分にピペットで入れる。
分に入れ、かつ試薬担体2を6区分に入れる。この際、
0.9%NaCJ溶液で1=3希釈した試料40μ!を
上級の開口部を通して直接の区分にピペットで入れる。
基質溶液270μ!を室PKにピペットで入れる。次い
で、高い回転数と停止を交互に組合せた適当な遠心分離
プログラムにより試料及び基質溶液を分離マトリックス
及びキュベツトの方向へ送る。
で、高い回転数と停止を交互に組合せた適当な遠心分離
プログラムにより試料及び基質溶液を分離マトリックス
及びキュベツトの方向へ送る。
この際プログラムの経過につれて受容体(R3)及び(
R1)もしくは(R1’ )はC区分の試料液体により
流離されかつ均質混合物を引続き反応させる。6区分で
、形成された複合体(Kompze大)を受容体(R2
)に結合させる。C区分から6区分への試料の移送は極
めて短かい時間内で行なわれる。
R1)もしくは(R1’ )はC区分の試料液体により
流離されかつ均質混合物を引続き反応させる。6区分で
、形成された複合体(Kompze大)を受容体(R2
)に結合させる。C区分から6区分への試料の移送は極
めて短かい時間内で行なわれる。
基質溶液を配量室DKを通して一定量に分配し、そのう
ち第1分配分を複合しなかった過剰の結合物の洗い出し
のために用いる。dでの複合体形成を介して結合したβ
−ガラクトシダーゼ活性は試料を含有る、AFP−量に
もしくは試料9値に比例る、。この活性をもう1つの基
質分で測定し、この際基質を5分間の反応で有色生成物
に変換させる。液相における生成した色及び他の色発現
/minをキュベツト中で576nmで測定る、。
ち第1分配分を複合しなかった過剰の結合物の洗い出し
のために用いる。dでの複合体形成を介して結合したβ
−ガラクトシダーゼ活性は試料を含有る、AFP−量に
もしくは試料9値に比例る、。この活性をもう1つの基
質分で測定し、この際基質を5分間の反応で有色生成物
に変換させる。液相における生成した色及び他の色発現
/minをキュベツト中で576nmで測定る、。
この条件下で負荷無し、並びに35℃で3週間負荷しそ
の試薬担体を含めた回転子差込み構成部材を用いて較正
直線を調べた。この際次の結果を得た: 例2 2.1 試薬の製造 2、1.1 受容体(R1’)(比較;非網状化抗−
hLH−抗体) 受容体(Rl’ )としてサブクラスIgG、(NCA
CC84122001)のモノクローナルマウス−抗−
hLH−抗体を使用る、。この抗体を含有る、腹水液に
硫酸アンモニウムを1.8Mまで加える。沈殿を燐酸ナ
トリウム15ミリモル、pH7,0及び塩化ナトリウム
50ミリモルよりなる緩衝液に入れる。そうして得られ
る溶液をDEAE−セルロースを介して通過させる。
の試薬担体を含めた回転子差込み構成部材を用いて較正
直線を調べた。この際次の結果を得た: 例2 2.1 試薬の製造 2、1.1 受容体(R1’)(比較;非網状化抗−
hLH−抗体) 受容体(Rl’ )としてサブクラスIgG、(NCA
CC84122001)のモノクローナルマウス−抗−
hLH−抗体を使用る、。この抗体を含有る、腹水液に
硫酸アンモニウムを1.8Mまで加える。沈殿を燐酸ナ
トリウム15ミリモル、pH7,0及び塩化ナトリウム
50ミリモルよりなる緩衝液に入れる。そうして得られ
る溶液をDEAE−セルロースを介して通過させる。
そうして得られる、hLH−結合能力を有る、抗体を含
有る、溶離液を引続き凍結乾燥させる。
有る、溶離液を引続き凍結乾燥させる。
2、1.2 受容体(R1)(本発明による;網状化
抗−hLH−抗体) 例1とは反対に例2ではそれ自体と網状化した抗体を使
用る、。製造には例1.1.4.1及び1、4.2によ
り受容体(R1”)を誘導体化る、。
抗−hLH−抗体) 例1とは反対に例2ではそれ自体と網状化した抗体を使
用る、。製造には例1.1.4.1及び1、4.2によ
り受容体(R1”)を誘導体化る、。
これらの抗体−誘導体各101n9を一緒に−7゜0及
び25℃で1.5時間反応させる。反応をシスティンの
1ミリモルまでの添加により(30分間、25℃)かつ
引続きヨードアセトアミドの添加により(1時間、25
℃)中止させる。
び25℃で1.5時間反応させる。反応をシスティンの
1ミリモルまでの添加により(30分間、25℃)かつ
引続きヨードアセトアミドの添加により(1時間、25
℃)中止させる。
生成物を例111.4.1で記載したように脱塩しかつ
濃縮る、。
濃縮る、。
2、1.3 標識化された受容体(R3)溶液(R3
)はβ−ガラクトシダーゼ及びモノクローナル抗−LH
−抗体−Fab断片よりなる結合体である。Fab断片
を、公知方法で、ポーター著、Biochem、 J、
73巻(1959年)119頁により、完全なモノク
ローナル抗−LH−抗体(NCACC84122005
)の分離により得る。(R3)の特異性は(R1)と異
なる。
)はβ−ガラクトシダーゼ及びモノクローナル抗−LH
−抗体−Fab断片よりなる結合体である。Fab断片
を、公知方法で、ポーター著、Biochem、 J、
73巻(1959年)119頁により、完全なモノク
ローナル抗−LH−抗体(NCACC84122005
)の分離により得る。(R3)の特異性は(R1)と異
なる。
(R3)はLH−分子上で種々の抗原決定因子を検出し
、かつ(R1)とサンドイッチ構造を形成る、ことがで
きる。抗体製造及び結合体合成は例1.1.5項に相応
る、。
、かつ(R1)とサンドイッチ構造を形成る、ことがで
きる。抗体製造及び結合体合成は例1.1.5項に相応
る、。
2、1.4 他の試薬
他の試薬(例えば緩衝液■及び■、受容体(R2)溶液
及び基質溶液は例1に使用した試薬と同一である。
及び基質溶液は例1に使用した試薬と同一である。
2.2 試薬担体の製造
2、2.1 試薬担体1′(非網状化受容体(R1’
)を用いて):1!当り燐酸ナトリウム(pH7,3)
(37°0)100ミリモル、塩化マグネシウム2ミリ
モル、塩化ナトリウム9y−、ウシ血清アルブミン5?
、マウスからの抗−hLH−モノクローナル抗体(受容
体R1’ ) 10■もしくハ20m9(400n?A
に/試験もしくは800ny−Aに/試験)、抗−hL
H−抗体−(マウス) −Fab断片−β−ガラクトシ
ダーゼ−結合体(受容体R3溶液、活性をオルト−ニト
ロフェニル−β−D−ガラクトシドで37°Cで測定)
1.0OOUを含有る、溶液40μ、tを、市販のポリ
エステル紙よりなるフリース上に滴下る、。
)を用いて):1!当り燐酸ナトリウム(pH7,3)
(37°0)100ミリモル、塩化マグネシウム2ミリ
モル、塩化ナトリウム9y−、ウシ血清アルブミン5?
、マウスからの抗−hLH−モノクローナル抗体(受容
体R1’ ) 10■もしくハ20m9(400n?A
に/試験もしくは800ny−Aに/試験)、抗−hL
H−抗体−(マウス) −Fab断片−β−ガラクトシ
ダーゼ−結合体(受容体R3溶液、活性をオルト−ニト
ロフェニル−β−D−ガラクトシドで37°Cで測定)
1.0OOUを含有る、溶液40μ、tを、市販のポリ
エステル紙よりなるフリース上に滴下る、。
引続き室温で乾燥る、。このフリースをその使用まで4
”O及び相対空気湿度20%で保持る、。
”O及び相対空気湿度20%で保持る、。
2、2.2 試薬担体1:
製造は、受容体(R1’ )の代シにそれ自体と網状化
した受容体(R1)を使用る、点で相違して、試薬担体
1′のための製造と同様に行なう。
した受容体(R1)を使用る、点で相違して、試薬担体
1′のための製造と同様に行なう。
2、2.3 試薬担体2:
セルロース−フリース上にブロムシアン活性化法(西ド
イツ国特許公開公報(DE−O3)第1768512号
明細書)によりマウス−抗体(受容体R2溶液)のFc
γ一部分に対る、ヒツジ抗体を固定し、この際固定のた
めに繊維材料1ノ当り抗体10μノを使用る、。洗浄に
より結合しなかった抗体を除去し、フリースを慎重に室
温で乾燥る、。そうして得られるフリースの貯蔵は試薬
担体1と同様に行なう。
イツ国特許公開公報(DE−O3)第1768512号
明細書)によりマウス−抗体(受容体R2溶液)のFc
γ一部分に対る、ヒツジ抗体を固定し、この際固定のた
めに繊維材料1ノ当り抗体10μノを使用る、。洗浄に
より結合しなかった抗体を除去し、フリースを慎重に室
温で乾燥る、。そうして得られるフリースの貯蔵は試薬
担体1と同様に行なう。
3 測定の実施
測定の実施は例1と同様に行う。第2図及び第3図は試
薬担体1′もしくは1における+00niP/Aに/試
験を使用しての結果を示す。
薬担体1′もしくは1における+00niP/Aに/試
験を使用しての結果を示す。
表■は400もしくは800n?AK/試験についての
結果を示す。
結果を示す。
第 ■ 表
A 試薬担体1′もしくは1における受容体R1’又は
R1(400n))の使用の結果 B 試薬担体1′もしくは1における受容体R1′1又
はR1(800rl’)(’)使用(’)結果※ 全測
定をλ=576 nmで層厚o、3crILテ実4回の
測定の平均値である。
R1(400n))の使用の結果 B 試薬担体1′もしくは1における受容体R1′1又
はR1(800rl’)(’)使用(’)結果※ 全測
定をλ=576 nmで層厚o、3crILテ実4回の
測定の平均値である。
※※ 較正曲線安定性の計算
第1図は回転子差込み構成部材の平面図を示し、第2図
及び第3図は試薬担体1′及び1における4 00 n
iP/Aに/試験の使用の際のLH−較正曲線を示す。 P・・・試料装填室、VKI・・・第1弁室、VK2・
・・第2弁室、AK・・・収容室、K・・・測定室、P
K・・・基質室、DK・・・配量室、UK・・・溢流室
。 FIG、2 LHImU/mll
及び第3図は試薬担体1′及び1における4 00 n
iP/Aに/試験の使用の際のLH−較正曲線を示す。 P・・・試料装填室、VKI・・・第1弁室、VK2・
・・第2弁室、AK・・・収容室、K・・・測定室、P
K・・・基質室、DK・・・配量室、UK・・・溢流室
。 FIG、2 LHImU/mll
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、3種の異なる受容体(そのうち第1(R1)及び第
3受容体(R3)は、液相で溶解して存在し、かつ抗原
と結合することができ、第2受容体(R2)は固相で存
在し、かつ(R1)と結合することができかつ(R3)
は標識されかつ(R1)及び(R2)と交差反応しない
)との恒温保持、液相から固相の分離及び相の1方にお
ける標識の測定によつて多価抗原を定量的に測定するた
めに、少なくとも2種の相互に結合した抗体分子又は抗
体分子断片よりなる(そのうち少なくとも1種は測定す
べき抗原と特異的に結合する)第1受容体(R1)を使
用することを特徴とする、多価抗原の定量的測定法。 2、(R1)は相互に網状化した同一のモノクローナル
又はポリクローナル抗体又は結合能力を有するそれらの
断片よりなる、請求項1記載の方法。 3、(R1)は相互に網状化した不同一のモノ−又はポ
リ−クローナル抗体又はそれらの結合能力を有する断片
よりなる、請求項1記載の方法。 4、(R1)は抗原に対して特異的な親和力を有する第
1抗体及び(R2)に対して特異的な結合能力を有する
第2抗体を含有する、請求項3記載の方法。 5、(R1)の個々の抗体成分は、2価又は多価のリン
カーによつて結合されている、請求項1から4までのい
ずれか1項記載の方法。 6、2〜20個の抗体分子又はそれらの断片を有する受
容体(R1)を使用する、請求項5記載の方法。 7、4〜12個の抗体分子又はそれらの断片を含有する
受容体(R1)を使用する、請求項6記載の方法。 8、(R2)の濃度の0.5〜1倍に相応する濃度で(
R1)を使用する、請求項1から7までのいずれか1項
記載の方法。 9、同一の完全抗体よりなる(R1)において、(R1
)の1部と結合することができる受容体(R2)を使用
する、請求項1から8までのいずれか1項記載の方法。 10、(R2)は(R1)中の抗体のFc−部分と結合
することができる、請求項9記載の方法。 11、請求項1から10までのいずれか1項に記載の方
法のための受容体(R1)を製造するために、結合すべ
き抗体又は結合能力を有するその断片の各1/4〜3/
4量を、2価又は多価リンカー各1個の1個の官能基と
反応させて誘導体とし、次いでリンカーの第2又はその
他の官能基が反応する条件下でこの誘導体2個を相互に
結合させることを特徴とする受容体(R1)の製法。 12、両方の誘導体をモル比2:1〜1:2で相互に反
応させる、請求項11記載の方法。 13、3種の受容体(R1、R2、R3)(そのうち(
R1)及び(R3)は溶性でありかつ抗原と結合するこ
とができ、(R3)は標識されかつ(R1)及び(R2
)と交差反応しない)を含有する多価の抗原の定量的測
定のための試薬として、(R1)が少なくとも2種の相
互に結合した抗体分子又は抗体分子断片(そのうち少な
くとも1方は測定すべき抗原と特異的に結合する)より
なることを特徴とする多価抗原定量測定用試薬。 14、(R1)は相互に網状化された、同一又は不同一
のモノクローナル又はポリクローナル抗体又は結合能力
を有するそれらの断片よりなる、請求項13記載の試薬
。 15、(R1)は抗原に対する特異的結合能力を有する
第1抗体及び(R2)に対する特異的結合能力を有する
第2抗体を含有する、請求項13又は14記載の試薬。 16、(R1)は2〜20価の抗体分子又はその断片を
含有する、請求項13から15までのいずれか1項記載
の試薬。 17、(R1)は4〜12個の抗体分子又はその断片を
含有する、請求項16記載の試薬。 18、(R1)は(R2)の0.5〜1倍の活性量で存
在する、請求項13から17までのいずれか1項記載の
試薬。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3714147.3 | 1987-04-28 | ||
DE19873714147 DE3714147A1 (de) | 1987-04-28 | 1987-04-28 | Immunchemisches verfahren und reagenz zur bestimmung eines polyvalenten antigens in einer fluessigen probe |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63284470A true JPS63284470A (ja) | 1988-11-21 |
JPH0731203B2 JPH0731203B2 (ja) | 1995-04-10 |
Family
ID=6326435
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63100445A Expired - Lifetime JPH0731203B2 (ja) | 1987-04-28 | 1988-04-25 | 多価抗原の定量的測定法及びその試薬並びに受容体の製造法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4885255A (ja) |
EP (1) | EP0289003B1 (ja) |
JP (1) | JPH0731203B2 (ja) |
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