JPS6327658B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS6327658B2 JPS6327658B2 JP52147771A JP14777177A JPS6327658B2 JP S6327658 B2 JPS6327658 B2 JP S6327658B2 JP 52147771 A JP52147771 A JP 52147771A JP 14777177 A JP14777177 A JP 14777177A JP S6327658 B2 JPS6327658 B2 JP S6327658B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- serum
- latex
- analysis
- human
- item
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 67
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 20
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 20
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 15
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 14
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 7
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 7
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 4
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 claims description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024799 Thyroid disease Diseases 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000016917 Complement C1 Human genes 0.000 description 1
- 108010028774 Complement C1 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005112 continuous flow technique Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000005206 flow analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000010405 reoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
- G01N33/539—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody involving precipitating reagent, e.g. ammonium sulfate
- G01N33/541—Double or second antibody, i.e. precipitating antibody
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/971—Capture of complex after antigen-antibody reaction
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/821—Chemistry: analytical and immunological testing involving complement factors or complement systems
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は液体試料特に血清や尿のような生物学
的流体の熱凝集免疫グロブリン当量を定めるため
の液体試料分析方法に関するものである。本明細
書においては、記号Ag、AbおよびA:Agはそ
れぞれ抗原(このことばにはハプテンやその他の
抗体または同様な結合たん白質によつて結合され
うる物質を含む)、抗体(同様な結合たん白質を
含む)および抗体:抗原複合体を意味するものと
して使われる。
的流体の熱凝集免疫グロブリン当量を定めるため
の液体試料分析方法に関するものである。本明細
書においては、記号Ag、AbおよびA:Agはそ
れぞれ抗原(このことばにはハプテンやその他の
抗体または同様な結合たん白質によつて結合され
うる物質を含む)、抗体(同様な結合たん白質を
含む)および抗体:抗原複合体を意味するものと
して使われる。
よく知られているように、液体特に生物学的液
体中のAb、AgまたはAb:Agの存在を知るため
にその液体を分析できるということは重要であ
る。例えば多くの病気はAb:Agの存在により特
徴づけられる。したがつてそれを検出し特性づけ
ることができれば、その病気を診断に価置ある情
報を提供することができる。Ag、Abおよび
Ab:Agを検出しそして定量する技術および特に
存在するAgの性質を決定し、その量を定量する
数多くの技術が知られている。これらの定量技術
は“免疫学的分析方法”と呼ばれている。
体中のAb、AgまたはAb:Agの存在を知るため
にその液体を分析できるということは重要であ
る。例えば多くの病気はAb:Agの存在により特
徴づけられる。したがつてそれを検出し特性づけ
ることができれば、その病気を診断に価置ある情
報を提供することができる。Ag、Abおよび
Ab:Agを検出しそして定量する技術および特に
存在するAgの性質を決定し、その量を定量する
数多くの技術が知られている。これらの定量技術
は“免疫学的分析方法”と呼ばれている。
驚くべきことには、マウスの血清全体中には活
性な画分が含まれており、それはAb、Agおよび
Ab:Agの分析に非常に有用な試薬となり、そし
てそれを使えばこの免疫学的分析方法を簡単に
し、より精確なものにすることが本発明者らによ
り発見された。特にマウスの血清には、Ab:Ag
とは結合するが、遊離のAbまたはAgとは結合し
ない画分が含まれていることが発見された。
性な画分が含まれており、それはAb、Agおよび
Ab:Agの分析に非常に有用な試薬となり、そし
てそれを使えばこの免疫学的分析方法を簡単に
し、より精確なものにすることが本発明者らによ
り発見された。特にマウスの血清には、Ab:Ag
とは結合するが、遊離のAbまたはAgとは結合し
ない画分が含まれていることが発見された。
さらにこの画分は熱凝集した免疫グロブリンを
ラテツクスに結合した免疫グロブリンよりも優先
的に凝着させる。
ラテツクスに結合した免疫グロブリンよりも優先
的に凝着させる。
従つて本発明は試料液体に(i)マウスの全血清の
活性画分、すなわち上記の性質をもつ画分、およ
び(ii)ラテツクスに結合した免疫グロブリンを混合
し、前記活性画分によりラテツクス結合免疫グロ
ブリンが凝着するのを試料が阻害する度合を測定
し、 測定の結果を、等量の前記活性画分およびラテ
ツクス結合免疫グロブリンと混合したときに同じ
度合の凝集阻害を与える熱凝集免疫グロブリンの
量で表わす、液体試料分析方法を提供する。
活性画分、すなわち上記の性質をもつ画分、およ
び(ii)ラテツクスに結合した免疫グロブリンを混合
し、前記活性画分によりラテツクス結合免疫グロ
ブリンが凝着するのを試料が阻害する度合を測定
し、 測定の結果を、等量の前記活性画分およびラテ
ツクス結合免疫グロブリンと混合したときに同じ
度合の凝集阻害を与える熱凝集免疫グロブリンの
量で表わす、液体試料分析方法を提供する。
本発明に使われるマウス血清活性画分は真性グ
ロブリン(euglobulin)である。その性質のある
ものは、人間のC1qに近似している。例えばそれ
はAb:Agと結合するが、遊離のAbまたはAgと
は結合しない。それはIOSの沈降定数をもつてい
る。それは選択的にIgGおよびIgMと結合するが
IgAとはしない。それはIgGまたはIgMでコーチ
ングされたラテツクス粒子と凝着する。そしてそ
れはIgGのFc鎖の人間のC1qが付着するのと同じ
部分に付着する。しかしその他の点ではそれは人
間のC1qとは全く異なる性質をもつている。例え
ばそれは高いPH値例えば8以上、特に9.2以上で
も活性を残している。(このようなPH値では人間
のC1qは不活性である)。その活性は0.1Mプトレ
シンまたは0.1Mヒドラジンによつても失われな
い。
ロブリン(euglobulin)である。その性質のある
ものは、人間のC1qに近似している。例えばそれ
はAb:Agと結合するが、遊離のAbまたはAgと
は結合しない。それはIOSの沈降定数をもつてい
る。それは選択的にIgGおよびIgMと結合するが
IgAとはしない。それはIgGまたはIgMでコーチ
ングされたラテツクス粒子と凝着する。そしてそ
れはIgGのFc鎖の人間のC1qが付着するのと同じ
部分に付着する。しかしその他の点ではそれは人
間のC1qとは全く異なる性質をもつている。例え
ばそれは高いPH値例えば8以上、特に9.2以上で
も活性を残している。(このようなPH値では人間
のC1qは不活性である)。その活性は0.1Mプトレ
シンまたは0.1Mヒドラジンによつても失われな
い。
マウスの活性画分は当業界で普通に使われる分
離技術、例えば人間の血清から人間のC1qが得ら
れるのと同様な方法によつて得られる。すなわち
例えばマウスの全血清を、(グルタールアルデヒ
ドによつて)それに結合した人間のIgGをもつア
ミノ化されたアガローズ(agarose)のクロマト
グラフカラムを通すことによつて、マウス血清の
活性画分が吸着されている。次いでその画分を
1M塩化ナトリウム溶液によつて溶離することが
できる。溶離物から塩化ナトリウムを透析によつ
て分離し、そして最後に活性画分をGBS(0.1Mグ
リシン−塩酸緩衝液、PH9.2)中に溶解すること
ができる。
離技術、例えば人間の血清から人間のC1qが得ら
れるのと同様な方法によつて得られる。すなわち
例えばマウスの全血清を、(グルタールアルデヒ
ドによつて)それに結合した人間のIgGをもつア
ミノ化されたアガローズ(agarose)のクロマト
グラフカラムを通すことによつて、マウス血清の
活性画分が吸着されている。次いでその画分を
1M塩化ナトリウム溶液によつて溶離することが
できる。溶離物から塩化ナトリウムを透析によつ
て分離し、そして最後に活性画分をGBS(0.1Mグ
リシン−塩酸緩衝液、PH9.2)中に溶解すること
ができる。
人間の血清や馬、山羊および家兎のような他の
動物の血清はそのような画分をもつているとは思
われないから、マウスの血清が人間のC1qとは異
なる性質をもつ活性画分を含んでいることは予期
できないことである。マウス血清の活性画分と人
間のC1qとの間の性質の差違は人間の血清の分析
(後出)に実質的な利点を与えてくれる。
動物の血清はそのような画分をもつているとは思
われないから、マウスの血清が人間のC1qとは異
なる性質をもつ活性画分を含んでいることは予期
できないことである。マウス血清の活性画分と人
間のC1qとの間の性質の差違は人間の血清の分析
(後出)に実質的な利点を与えてくれる。
マウスの血清の活性画分が人間のC1qに似てい
るかぎりにおいて、人間のC1qと同様な方法で分
析に使うことができる。人間のC1qを分析に使用
することは本発明者らの英国特許出願第21619/
75号明細書に記載されており、これをさらに詳し
く参照すべきである。
るかぎりにおいて、人間のC1qと同様な方法で分
析に使うことができる。人間のC1qを分析に使用
することは本発明者らの英国特許出願第21619/
75号明細書に記載されており、これをさらに詳し
く参照すべきである。
人間のC1qの代りにマウス血清の活性画分を分
析に使うことの重要な利点はマウスの血清全体を
使うことができるということである。活性画分を
分離して取出すことは必須ではないし、通常その
必要さえない。対照的に人間のC1qを試薬として
使う大抵の分析では人間の血清全体を使うことは
不可能である。C1qは分離して取出さねばならな
い。このような分離工程を避けられることは非常
に有利である。さらにまたマウス血清は人間の
C1qよりもはるかに使い易い。それゆえにそれは
より経済的な試薬を提供する。
析に使うことの重要な利点はマウスの血清全体を
使うことができるということである。活性画分を
分離して取出すことは必須ではないし、通常その
必要さえない。対照的に人間のC1qを試薬として
使う大抵の分析では人間の血清全体を使うことは
不可能である。C1qは分離して取出さねばならな
い。このような分離工程を避けられることは非常
に有利である。さらにまたマウス血清は人間の
C1qよりもはるかに使い易い。それゆえにそれは
より経済的な試薬を提供する。
本発明の好ましい実施態様の中には次のものが
含まれる。
含まれる。
免疫グロブリンIgGもしくはIgMでコーチング
されたラテツクス粒子の既知量を試料液体に加
え、そしてまたある量の活性画分をも液体に加
え、こうしてできた混合物をインキユベートし、
そして凝着しない粒子の数を計数し、そしてそれ
によつて試料液体中の熱凝集免疫グロブリン当量
を計算することから成る、液体試料分析方法。こ
こで液体試料中に分析されるべきAbまたはAgに
対するAgまたはAbを加えて免疫グロブリンを生
成させ、分析を行うことにより、被験Abまたは
Agの量を熱凝集免疫グロブリン当量から導くこ
ともできる。
されたラテツクス粒子の既知量を試料液体に加
え、そしてまたある量の活性画分をも液体に加
え、こうしてできた混合物をインキユベートし、
そして凝着しない粒子の数を計数し、そしてそれ
によつて試料液体中の熱凝集免疫グロブリン当量
を計算することから成る、液体試料分析方法。こ
こで液体試料中に分析されるべきAbまたはAgに
対するAgまたはAbを加えて免疫グロブリンを生
成させ、分析を行うことにより、被験Abまたは
Agの量を熱凝集免疫グロブリン当量から導くこ
ともできる。
ラテツクス粒子の大きさは好ましくは0.8〜1.1
ミクロンである。
ミクロンである。
人間のC1qを使つての人の血清試料の分析にお
いては、血清そのものが人間の補体C1を含む事
実を考慮しなければならない。添加される試薬と
して人間のC1qを使う血清分析においては、血清
試料中のC1qによる妨害を避けるために、先ず試
料中のC1qの不活性化処理をしなければならな
い。このための1つの技術は血清を約56℃に加熱
しそしてその温度に約30分間保つことである。し
かしながらこの処理は自然本来のC1qを不活性に
するけれども、次に行なう分析の精度を低下させ
るというマイナスの作用を及ぼす。
いては、血清そのものが人間の補体C1を含む事
実を考慮しなければならない。添加される試薬と
して人間のC1qを使う血清分析においては、血清
試料中のC1qによる妨害を避けるために、先ず試
料中のC1qの不活性化処理をしなければならな
い。このための1つの技術は血清を約56℃に加熱
しそしてその温度に約30分間保つことである。し
かしながらこの処理は自然本来のC1qを不活性に
するけれども、次に行なう分析の精度を低下させ
るというマイナスの作用を及ぼす。
本発明によれば、試薬としてマウスの血清(も
しくは分離された活性画分)を使うことによつ
て、そして例えば9.2というような高いPHで分析
を行なうことによつて人間の血清を分析するとき
にこの加熱工程の必要性を避けることができる。
高いPHでは被験血清中の人間のC1qは不活性であ
る。しかしマウス血清の試薬は活性を保つ。一
方、分析を0.1Mヒドラジンまたは0.1Mプトレシ
ン(テトラメチレンジアミン)の存在下に行なう
ことができる。この条件下では人のC1qは不活性
であるがマウス血清は活性である。マウス血清の
これらの性質により自然のC1qによる妨害を避け
ることができる。
しくは分離された活性画分)を使うことによつ
て、そして例えば9.2というような高いPHで分析
を行なうことによつて人間の血清を分析するとき
にこの加熱工程の必要性を避けることができる。
高いPHでは被験血清中の人間のC1qは不活性であ
る。しかしマウス血清の試薬は活性を保つ。一
方、分析を0.1Mヒドラジンまたは0.1Mプトレシ
ン(テトラメチレンジアミン)の存在下に行なう
ことができる。この条件下では人のC1qは不活性
であるがマウス血清は活性である。マウス血清の
これらの性質により自然のC1qによる妨害を避け
ることができる。
人間の血清の分析においてマウス血清(または
その活性画分)を使うことは従つて大いに有利で
ある。
その活性画分)を使うことは従つて大いに有利で
ある。
本発明の方法は当業界で知られている連続流れ
式技術によつて有利に行なうことができる。連続
流れ式分析においては、マウス血清は人間のC1q
よりも便利に試薬として使うことができる。人間
のリウマトイド因子に使うマニホルドおよびイン
キユベーシヨン系は、マウス血清にも使えるが人
間のC1qには使えないからである。BALBCまた
はDBA2株のマウスからの血清を使うことが好ま
しい。マウス血清は使用時に通常約1/25ないし約
1/75に希釈される(しかし精確な希釈は意図する
特殊な用途によつて定まる)。この希釈には溶媒
として、例えば苛性ソーダでPH9.2に調整したそ
して0.15M MaClを含む、0.1Mグリシン緩衝液
を使う。
式技術によつて有利に行なうことができる。連続
流れ式分析においては、マウス血清は人間のC1q
よりも便利に試薬として使うことができる。人間
のリウマトイド因子に使うマニホルドおよびイン
キユベーシヨン系は、マウス血清にも使えるが人
間のC1qには使えないからである。BALBCまた
はDBA2株のマウスからの血清を使うことが好ま
しい。マウス血清は使用時に通常約1/25ないし約
1/75に希釈される(しかし精確な希釈は意図する
特殊な用途によつて定まる)。この希釈には溶媒
として、例えば苛性ソーダでPH9.2に調整したそ
して0.15M MaClを含む、0.1Mグリシン緩衝液
を使う。
以下本発明をその実施例につきさらに説明す
る。
る。
例 1
マウス血清はIgGでコーチングされたラテツク
ス粒子および熱凝集したIgGの凝集を起こさせる
が、マウス血清の活性画分は熱凝集したIgGと優
先的に反応する。
ス粒子および熱凝集したIgGの凝集を起こさせる
が、マウス血清の活性画分は熱凝集したIgGと優
先的に反応する。
すなわち、ある量のマウス血清をIgGでコーチ
ングされたラテツクス(ラテツクス−IgG)粒子
と混合すると、粒子の凝着が起こる。もし熱凝集
したIgGをここで加えると、マウス血清からの活
性画分は熱凝集IgGを凝着するのに取られ、結局
ラテツクス−IgGの凝着は残らなくなる。マウス
血清の活性度はラテツクス−IgGの凝集を防ぐた
めに必要な熱凝集IgGの量によつて表わされる。
従つて人間の血清試料によりマウス血清によるラ
テツクス−IgGの凝着を同じ程度まで防ぐことが
できればその試料の活性度を相当する熱凝集IgG
当量によつて表わすことができる。50人の健康な
供血者からの血清について試験を行なつたとこ
ろ、この活性度は最高10μg/ml熱凝集IgG当量
(EHA IgG)であることがわかつた。
ングされたラテツクス(ラテツクス−IgG)粒子
と混合すると、粒子の凝着が起こる。もし熱凝集
したIgGをここで加えると、マウス血清からの活
性画分は熱凝集IgGを凝着するのに取られ、結局
ラテツクス−IgGの凝着は残らなくなる。マウス
血清の活性度はラテツクス−IgGの凝集を防ぐた
めに必要な熱凝集IgGの量によつて表わされる。
従つて人間の血清試料によりマウス血清によるラ
テツクス−IgGの凝着を同じ程度まで防ぐことが
できればその試料の活性度を相当する熱凝集IgG
当量によつて表わすことができる。50人の健康な
供血者からの血清について試験を行なつたとこ
ろ、この活性度は最高10μg/ml熱凝集IgG当量
(EHA IgG)であることがわかつた。
75人の多発生硬化症患者からと58人の甲状腺障
害の患者からの人間の血清の活性度も測定された
が、多発生硬化症患者では30%が血清の活性度
10μg/ml(EHA IgG)以上を示し、そして甲
状腺障害患者では65.5%が血清活性度10μg/ml
(EHA IgG)以上を示した。このような比較的
高い活性は免疫複合体が血清中に存在することを
示す。(この免疫複合体は健康な患者の血清中に
は存在しないかあるいは実質的に存在しない。) マウス血清は免疫複合体のあるものに対しては
他のものに対するよりも貧欲性をもつている。
RFも同様に免疫複合体に対して種々の貧欲性を
もつている。従つて免疫複合体の存在を定めるた
めの人間の血清の試験では、マウス血清とRFの
両方の試験を平行して行なうことが望ましい。
(RFの使用に関する情報については本発明者らの
英国特許出願第21619/75号明細書を参照された
い。) 例 2 (1) マウス血清の調製 マウス血清はGBS(0.1Mグリシン−HCl緩衝
液、PH9.2、0.17M NaCl含有)中で希釈され
る。希釈範囲はマウス血清のバツチによるが、
1/50〜1/80の範囲である。
害の患者からの人間の血清の活性度も測定された
が、多発生硬化症患者では30%が血清の活性度
10μg/ml(EHA IgG)以上を示し、そして甲
状腺障害患者では65.5%が血清活性度10μg/ml
(EHA IgG)以上を示した。このような比較的
高い活性は免疫複合体が血清中に存在することを
示す。(この免疫複合体は健康な患者の血清中に
は存在しないかあるいは実質的に存在しない。) マウス血清は免疫複合体のあるものに対しては
他のものに対するよりも貧欲性をもつている。
RFも同様に免疫複合体に対して種々の貧欲性を
もつている。従つて免疫複合体の存在を定めるた
めの人間の血清の試験では、マウス血清とRFの
両方の試験を平行して行なうことが望ましい。
(RFの使用に関する情報については本発明者らの
英国特許出願第21619/75号明細書を参照された
い。) 例 2 (1) マウス血清の調製 マウス血清はGBS(0.1Mグリシン−HCl緩衝
液、PH9.2、0.17M NaCl含有)中で希釈され
る。希釈範囲はマウス血清のバツチによるが、
1/50〜1/80の範囲である。
(2) 分析前の患者の血清の調製
50mM EDTAを含むGBS(PH9.2)170μに
血清50μを加え、次いで1.5mMジチオトレイ
トール(15μ)で37℃で15分間還元する。次
に試料を0.2%H2O215μで再び酸化する。
血清50μを加え、次いで1.5mMジチオトレイ
トール(15μ)で37℃で15分間還元する。次
に試料を0.2%H2O215μで再び酸化する。
この血清試料の還元は阻止過程に干渉するこ
とのある凝着要因を取除く目的で行なう。再酸
化はマウス血清の凝着要素を破壊することのあ
る残留ジチオトレイトールを不活性にするため
に必要である。この処理は血清中の内因のC1q
を限られた範囲までは不活性にするが、その主
目的はRFのような他の凝着要素を不活性にす
ることである。C1qを完全に不活性にすること
はPH9.2で分析を行なうことによつて達成され
る。
とのある凝着要因を取除く目的で行なう。再酸
化はマウス血清の凝着要素を破壊することのあ
る残留ジチオトレイトールを不活性にするため
に必要である。この処理は血清中の内因のC1q
を限られた範囲までは不活性にするが、その主
目的はRFのような他の凝着要素を不活性にす
ることである。C1qを完全に不活性にすること
はPH9.2で分析を行なうことによつて達成され
る。
(3) ラテツクスの調製
ダウケミカル社製品のポリスチレン粒子
(0.794μ)を人間のIgGで次のようにしてコー
チングする。5倍に希釈したGBS 400μに
IgGの1%(重量/容量)溶液25μ、人間の
血清アルブミン(***ベーリングベルゲ社製
品)1%(重量/容量)溶液150μおよびラ
テツクスの10%(重量/容量)懸濁液50μを
加える。数秒間のかきまぜと室温で45分間イン
キユベーシヨンの後懸濁液を10000回転/分の
遠心分離器に5分間かけ、粒子を希釈した
GBS1mlで1回洗い、そして最後に牛の血清ア
ルブミン1%(重量/容量)を含むGBS 10ml
中に再懸濁する。
(0.794μ)を人間のIgGで次のようにしてコー
チングする。5倍に希釈したGBS 400μに
IgGの1%(重量/容量)溶液25μ、人間の
血清アルブミン(***ベーリングベルゲ社製
品)1%(重量/容量)溶液150μおよびラ
テツクスの10%(重量/容量)懸濁液50μを
加える。数秒間のかきまぜと室温で45分間イン
キユベーシヨンの後懸濁液を10000回転/分の
遠心分離器に5分間かけ、粒子を希釈した
GBS1mlで1回洗い、そして最後に牛の血清ア
ルブミン1%(重量/容量)を含むGBS 10ml
中に再懸濁する。
(4) 自動化分析
上記した血清試料マウス血清およびラテツク
ス懸濁液の同量(70μ)をいつしよにマニホ
ルドに吸入する。インキユベーシヨン時間は10
分間である。インキユベーシヨン後混合物はト
ウイーン20(Tween 20)0.1%を含むGBSで自
動的に2000倍に希釈され、そして凝着しないラ
テツクス粒子は上方および下方の入口をもつ光
学的自動計数器中で数えられる。この計数器は
テクニコン社製の差動セル計数器(商品名:
PACIA)であり、操作条件は37℃、PH9.2(差
動PH範囲は7〜9.2、最適値9.2)である。ま
た、この操作には計数を4000粒/秒の最高に制
限するためにラテツクス懸濁液を2000倍に希釈
することが必要である。
ス懸濁液の同量(70μ)をいつしよにマニホ
ルドに吸入する。インキユベーシヨン時間は10
分間である。インキユベーシヨン後混合物はト
ウイーン20(Tween 20)0.1%を含むGBSで自
動的に2000倍に希釈され、そして凝着しないラ
テツクス粒子は上方および下方の入口をもつ光
学的自動計数器中で数えられる。この計数器は
テクニコン社製の差動セル計数器(商品名:
PACIA)であり、操作条件は37℃、PH9.2(差
動PH範囲は7〜9.2、最適値9.2)である。ま
た、この操作には計数を4000粒/秒の最高に制
限するためにラテツクス懸濁液を2000倍に希釈
することが必要である。
(5) 試験結果
マウス血清を連続的に2倍にうすめて行く試
験結果では第1図の凝着曲線が得られた。縦座
標は記録計におけるピークの高さを表わし、こ
の高さは遊離(凝着しない)の粒子の数に直接
比例する。
験結果では第1図の凝着曲線が得られた。縦座
標は記録計におけるピークの高さを表わし、こ
の高さは遊離(凝着しない)の粒子の数に直接
比例する。
標準曲線(第2図)はGBS中の熱凝集IgGの
濃度にある範囲のもので定められた。これらの
結果は熱凝集した人間のIgG当量のμg/mlで
表わされている。この熱凝集IgGは人間の血清
プールからDEAE−セルロースクロマトグラフ
イによつて作られ、そして30分間63℃に加熱し
て凝集された。第3図は健康な供血者、乳ガン
患者および全身紅斑性狼瘡患者の血清によつて
マウス血清によるラテツクス−IgGの凝着が阻
害される結果を表わしている。標準値の上限は
7μg/ml熱凝集IgG当量である。
濃度にある範囲のもので定められた。これらの
結果は熱凝集した人間のIgG当量のμg/mlで
表わされている。この熱凝集IgGは人間の血清
プールからDEAE−セルロースクロマトグラフ
イによつて作られ、そして30分間63℃に加熱し
て凝集された。第3図は健康な供血者、乳ガン
患者および全身紅斑性狼瘡患者の血清によつて
マウス血清によるラテツクス−IgGの凝着が阻
害される結果を表わしている。標準値の上限は
7μg/ml熱凝集IgG当量である。
第1図はマウス血清を連続的に2倍にうすめて
行くときの希釈度と、遊離粒子の数に比例する記
録計におけるピークの高さとの関係を示す線図で
あり、第2図はGBS中の熱凝集IgGの濃度とピー
クの高さとの関係を示す線図であり、そして第3
図は健康人および患者の血清によるラテツクス−
IgG凝着阻害の結果を示す分布図である。
行くときの希釈度と、遊離粒子の数に比例する記
録計におけるピークの高さとの関係を示す線図で
あり、第2図はGBS中の熱凝集IgGの濃度とピー
クの高さとの関係を示す線図であり、そして第3
図は健康人および患者の血清によるラテツクス−
IgG凝着阻害の結果を示す分布図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 試料液体に(i)マウスの全血清の活性画分、す
なわち遊離の抗体(Ab)または抗原(Ag)とは
結合しないが、抗体:抗原複合体(Ab:Ag)と
は結合する性質および熱凝集した免疫グロブリン
をラテツクスに結合した免疫グロブリンよりも優
先的に凝着させる性質をもつ画分、および(ii)ラテ
ツクスに結合した免疫グロブリンを混合し、 前記活性画分によりラテツクス結合免疫グロブ
リンが凝着するのを試料が阻害する度合を測定
し、 測定の結果を、等量の前記活性画分およびラテ
ツクス結合免疫グロブリンと混合したときに同じ
度合の凝着阻害を与える熱凝集免疫グロブリンの
量で表わす、液体試料分析方法。 2 活性画分をマウスの全血清の形で添加する前
項1に記載の方法。 3 試料液体がヒトの生物学的流体である、前項
1に記載の方法。 4 分析を0.1Mプトレシンまたは0.1Mヒドラジ
ンの存在下に行なう前項1に記載の方法。 5 連続流れ方式で行なう、前項1に記載の方
法。 6 ラテツクスとして粒子サイズが約0.8〜1.1ミ
クロンのものを使う、前項1に記載の方法。 7 凝着阻害の度合を、凝着しなかつたラテツク
ス粒子の数を光学的に計数することによつて計測
する、前項1に記載の方法。 8 分析を少なくともPH8で行なう、前項1に記
載の方法。 9 分析を少なくともPH9.2で行なう、前項8に
記載の方法。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB51739/76A GB1592450A (en) | 1976-12-10 | 1976-12-10 | Biological analysis |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5396316A JPS5396316A (en) | 1978-08-23 |
JPS6327658B2 true JPS6327658B2 (ja) | 1988-06-03 |
Family
ID=10461187
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP14777177A Granted JPS5396316A (en) | 1976-12-10 | 1977-12-10 | Analysis of antigen * antibody or antigenn antibody complex in liquid |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4162895A (ja) |
JP (1) | JPS5396316A (ja) |
CA (1) | CA1091149A (ja) |
DE (1) | DE2754350C2 (ja) |
FR (1) | FR2392386A1 (ja) |
GB (1) | GB1592450A (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1603406A (en) * | 1977-08-31 | 1981-11-25 | Nat Res Dev | Assay of immune complexes |
IT1203071B (it) * | 1977-07-27 | 1989-02-15 | Biodata Spa | Mezzo accelerante di precipitazione nei dosaggi immunologici |
US4307190A (en) * | 1978-10-30 | 1981-12-22 | Technicon Instruments Corporation | Immunoassay using ascitic fluid |
GB2045431B (en) * | 1979-02-26 | 1983-04-20 | Technicon Instr | Immunoassay utilising two particulate reagents |
US4416784A (en) * | 1980-01-28 | 1983-11-22 | Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Filling composition for use in liquid chromatography |
US4342566A (en) * | 1980-02-22 | 1982-08-03 | Scripps Clinic & Research Foundation | Solid phase anti-C3 assay for detection of immune complexes |
US4329152A (en) * | 1980-10-06 | 1982-05-11 | International Lead Zinc Research Organization, Inc. | Determination of β2 -microglobulin in human urine and serum by latex immunoassay |
US4427781A (en) * | 1981-03-16 | 1984-01-24 | International Institute Of Cellular And Molecular Pathology | Particle agglutination immunoassay with agglutinator for determining haptens; PACIA |
US4450231A (en) * | 1982-03-31 | 1984-05-22 | Biostar Medical Products, Inc. | Immunoassay for determination of immune complexes with polymer-coated plastic base |
GB8924112D0 (en) * | 1989-10-26 | 1989-12-13 | Univ Southampton | Assay pretreatment |
US6943034B1 (en) * | 1991-11-22 | 2005-09-13 | Affymetrix, Inc. | Combinatorial strategies for polymer synthesis |
CN109991405B (zh) * | 2017-12-29 | 2023-01-24 | 上海索昕生物科技有限公司 | 一种免疫检测试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR1484727A (fr) * | 1966-04-19 | 1967-06-16 | Réactif immunologique et son procédé d'obtention | |
GB1179435A (en) * | 1966-06-17 | 1970-01-28 | Ortho Pharma Corp | Stable Reagent for the Detection of Rheumatoid Arthritis |
US3689632A (en) * | 1969-01-06 | 1972-09-05 | Kowa Co | Rheumatoid agglutination test and reagent |
CA951242A (en) * | 1969-03-26 | 1974-07-16 | Edward Shanbrom | Diagnostic reagent and method of determination of serum igm levels |
US3857931A (en) * | 1971-02-01 | 1974-12-31 | Hoffmann La Roche | Latex polymer reagents for diagnostic tests |
GB1508132A (en) * | 1974-05-20 | 1978-04-19 | Technicon Instr | Analysis of biological fluids |
-
1976
- 1976-12-10 GB GB51739/76A patent/GB1592450A/en not_active Expired
-
1977
- 1977-12-05 US US05/857,537 patent/US4162895A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-12-07 DE DE2754350A patent/DE2754350C2/de not_active Expired
- 1977-12-08 CA CA292,718A patent/CA1091149A/en not_active Expired
- 1977-12-09 FR FR7737121A patent/FR2392386A1/fr active Granted
- 1977-12-10 JP JP14777177A patent/JPS5396316A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US4162895A (en) | 1979-07-31 |
DE2754350C2 (de) | 1986-09-25 |
FR2392386A1 (fr) | 1978-12-22 |
DE2754350A1 (de) | 1978-06-29 |
CA1091149A (en) | 1980-12-09 |
FR2392386B1 (ja) | 1984-01-27 |
GB1592450A (en) | 1981-07-08 |
JPS5396316A (en) | 1978-08-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4062935A (en) | Immunoassay involving the binding of RF to the antigen-antibody complex | |
Cambiaso et al. | Particle counting immunoassay (PACIA). I. A general method for the determination of antibodies, antigens, and haptens | |
US4680274A (en) | Particles for inhibiting non-specific immunoreaction | |
EP0064274B1 (en) | Method for assaying antigen-antibody reactions and reagent therefor | |
EP0149602A1 (en) | Immunometric assay using polyclonal and monoclonal antibodies and a kit for use therein | |
Kohse et al. | Antibodies as a source of analytical errors | |
US4138213A (en) | Agglutination immunoassay of immune complex with RF or Clq | |
US4233286A (en) | Low affinity IGM-latex particles and assay therewith for immune complexes | |
US4283383A (en) | Analysis of biological fluids | |
US4210622A (en) | Kit for assay of immune complexes | |
DK174032B1 (da) | Sæt samt fremgangsmåde til immunometrisk dosering, der kan anvendes på hele celler | |
JPS6327658B2 (ja) | ||
US4141965A (en) | Assay of immune complexes | |
JPH04350559A (ja) | 特異抗体の測定法 | |
US4307190A (en) | Immunoassay using ascitic fluid | |
US6461825B1 (en) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells | |
JP3220546B2 (ja) | 免疫複合体存在下の抗原または抗体の測定方法 | |
EP4258227A1 (en) | Detection of target substances in biological samples | |
Sato et al. | Treponema pallidum specific IgM haemagglutination test for serodiagnosis of syphilis. | |
JPS63191960A (ja) | リガンドのアッセイ法 | |
JPH08304398A (ja) | 免疫測定方法 | |
Matsui et al. | IgE and IgE autoantibodies in patients with autoimmune thyroid disorders and their relatives | |
JPH03118472A (ja) | インスリン定量方法及び定量試薬 | |
CN116626307A (zh) | 一种IgA抗体检测试剂盒及检测方法 | |
JPS6363863B2 (ja) |