JPS63267729A - ス−パ−オキシドジスムタ−ゼ誘導体の経口投与用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はスチレン−無水マレイン酸共重合体残基ｔＶす
るスーパーオキシドジスムターゼ（以下これをＳＯＤ誘
導体と略記する）の経口投与用組成物に関する。

従来の技術 スーパーオキシドジスムターゼ（以下、これをＳＯＤと
称する）は動物、植物、微生物などの生体内に広く存在
し、生体に有害なスーパーオキシドを分解する酵素とし
て知られている。蛾近、単離されｆｉｓＯＤｉ抗炎症剤
として用いようとする試みがなさｎており〔ファルマシ
ア、１７巻４１１頁（１９８１年）およびカレント・セ
ラボイテイツクｅリサーチ（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｈｅｒ
ａｐｅｕｔｉｃ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）、１６巻７０６
頁（１９７４年）参照〕、を九−活性の放射線大腸炎の
治療ま几は胃潰瘍の予防、治療に用いる検討もなさｎて
いる〔実験医学、４巻１２号３９頁（１９８６年）参照
〕。

５ＯＤｔ−静脈内投与し九場合、その血中半減期は僅か
４〜６分とされており、ＳＯＤは速かに尿中に***代謝
される。ＳＯＤの血中半減期を延長させるためにＳＯＤ
をフィコール、ポリエチレングリコールま九はラットア
ルブミンで修飾し、巨大分子化することが試みられてき
九が、フィコールまたはポリエチレングリコールで修飾
され次ＳＯＤではＳＯＤの酵素活性が大幅に低下し、ま
たラットアルブミンで修飾されたＳＯＤには抗原性があ
る。まｔイヌリンで修飾されたＳＯＤではＳＯＤに比べ
て酵素活性の低下が認められるが、その血中半減期は大
幅に延長されたことが報告されている〔特開昭５８−３
２８２６号公報参照〕ｏしかしながら、これら修飾ＳＯ
Ｄは上記の理由、ま友は巨大分子化に伴う組織内浸透性
の低下などの点でいずれも実用上問題がある。

そこで、巨大分子化されていないスーパーオキシド誘導
体が提案され、部分半ブチルエステル化したスチレン−
無水ｉレイン酸共重合体で修飾され７？：ＳＯＤがＳＯ
Ｄの酵素活性を概ね保持し７′２：ままで該Ｓ６Ｄに比
べて大幅に延長され九血中半減期を有することが報告さ
れるに至った〔第３７回タンパク質構造討論会講演要旨
集（昭和６１年９月１０日発行）、６１〜６４頁参照〕
０発明が解決しようとする問題点 上記の部分半ブチルエステル化したスチレン−無水マレ
イン酸共重合体で修飾され７ｊＳＯＤに代宍されるＳＵ
Ｄ誘導体が経口投与用に喪剤化されｎば、患者に苦痛を
与えることなく、シかも患者Ｏ自己投与によって該ＳＯ
Ｄ＃導体を患者の体内に投与することが可能となり、優
れ九薬理作用金有する５ＯＤｔ−有効に患者の体内に存
在せしめることができる。

しかして、本発明の目的は、ＳＯＤの酵素活性を概ね保
持し、かつ大幅に延長された血中半減期ｔ−有するＳＯ
Ｄ誘導体の経口投与用製剤を提供するにある。

問題点を解決するための手段 本発明によれば、上記の目的は、ＳＯＤ誘導体と中級な
いし高級脂肪酸のグリセライドとからなる経口投与用組
成物を提供することによって達成さｎる。

ここで、ＳＯＤ誘導体としては例えば、式％式％（１） 〔式中、（ＳＯＤＩはアミノ基に換えてアミノ基から１
個の水素原子を除い友基を１ないし２２個ま九は２４個
有するスーパーオキシドジスムターゼを表わし、〔２〕
は すか、ま九は炭素数が１ないし４のアルカノール、炭素
数が１もしくは２のアルキル基部分を含むエチレンクリ
コールモノアルキルエーテルまたは炭素数が１もしくは
２のアルキル基部分を含むグリセリンジアルキルエーテ
ルから水酸基を除いた残基全表わす）で示される基およ
び 暑 原子の結合手は［ＳＯＤ］と結合するものであることを
意味する）で示される基 會構取単位とし、かつ平均分子量が８００ないし２００
００である共重合体の一価の基を表わし、ｎは（ＳＯＤ
）が有するアミノ基から１個の水素原子を除い友基の数
に対応するｌないし２２１ｔＵ２４の整数ｔ−表わす〕 で示さｎるスーパーオキシドジスムターゼ誘導体〔以下
、これｔ−ＳＯＤ勝導体（１）と略記する〕が挙げられ
る。

ＳＯＤ誘導体の製造方法＠ＳＯＤ誘導体（１）の製造方
法を例にとって以下に説明する。

５ＯＤｌｌ導体（りはＳＯＤと特定の共重合体、すなわ
ち すか、ｉたは炭素数が１ないし４のアルカノール、炭素
数が１もしくは２のアルキル基部分を含むエチレングリ
コールモノアルキルエーテルｔａａ炭素数が１もしくは
２のアルキル基部分を含むグリセリンジアルキルエーテ
ルから水酸基を除い九残基を表わす）で示される基およ
び で示される基を構成単位とし、かつ平均分子量が８００
ないし２００００である共重合体（以下、これを共重合
体と略称する）と七反りさせることによって製造するこ
とができる。この反応は通常炭酸ナトリウム、重炭酸ナ
トリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどの塩
の水溶液中に５ＯＤｔ−溶解し、得られた溶液に粉末状
の共重合体を次はジメチルスルホキシドなどの有機溶媒
に溶解した共重合体を添加することにより行われる。反
応中、ＳＷの…は７〜１１に維持されていることが必要
であり、…が７より低い場合には、共重合体の溶解性が
低下して反応は進行しない０ま九、…が１１より高い場
合には、ＳＯＤの酵素活性が失活して有効なＳＯＤ誘導
体を得ることにできない。

反応温度としては、約３〜５０℃が好ましく、３〜４０
℃がさらに好ましい。また、反応時間は反応温度、共重
合体の添加方法により異なるが、通常１０分〜３時間で
ある。共重合体の使用量は５ＯＤＩモルに対して約０．
５〜３０モルの範囲である。この使用量によってＳＯＤ
に結合させる共重合体の分子数を調整することができる
。

このようにして得られ九反応液にはＳＯＤ誘導体と未反
応のＳＯＤおよび共重合体などが存在するが、かかる反
応液を濾過し、濾液をゲル濾過し、得られるＳＯＤ＠導
体を含む溶出液を必要に応じてハイドロフォービック・
クロマトグラフィーに付し九のち限外濾過に付すること
により濃縮したのち、凍結乾燥することによＱＳＯＤ誘
導体の固聾物を取得することができる。

上記の反応により、ＳＯＤが有するアミノ基と共重合体
が有する無水マレイン酸環とが結合し、８０Ｄ誘導体が
生成する。例えば、ヒト型ＳＯＤには１分子当りアミノ
基が２２個（ヒト赤血球型８０Ｄまたは酵母にて遺伝子
組換え操作により得られたヒ）ｆｉｓ　ＯＤ　）ま九は
２４個（大腸菌にて遺伝子組換え操作により得られ次ヒ
ト型５ＯＤ）存在するが、上記の反応により、いずれか
のアミノ基と共重合体が有する１個の無水マレイン酸環
とが反応し、ＳＯＤの１分子当り共重合体が１ないし２
２ま九は２４分子結合し７２ＳＯＤ紡導体が得られる。

原料として用いる共重合体には１分子中に通常無水ｉレ
イン酸環が平均０．５〜２個存在するが、これらの無水
マレイン酸環のなかの１個がＳＯＤのアミノ基と結合し
た場合、残りの無水マレイン酸環はさらに別のアミン基
と反応するこで示されるマレイン酸由来の基となり易い
。し九がって、５ＯＤｉｌ導体の構成単位には前記（り
の式においてＲが水素原子である基も包含される◇また
原料として部分半エステル化共重合体を用いる場合には
、得られるＳＯＤ誘導体の構造単位に前記（ｃｌ）の基
として上記のマレイン酸由来の基が半エステル化された
ものだけでなく、少量の該マレイン酸由来の基が含まれ
る。共重合体の１分子とＳＯＤの複数分子とが反応して
該共重合体の複数個の無水マレイン酸環と各ＳＯＤのア
ミノ基とがそれぞれ結合した化合物が副生する可能性が
あるが、かかる副生物が少量混入し九ＳＯＤ縛導体を本
発明において用いることに不都合はない。しかしながら
、医薬の有効成分化合物は単一の化学構造を有する化合
物であることが好ましい状況にあることを考慮すｎば、
上記の副生物の混入量が多いＳＯＤ誘導体については、
これをゲル濾過などの操作に付することにより該副生物
を除外して用いることが好ましい。また、上記の反応に
よって得られるＳＯＤ誘導体はＳＯＤに種々の分子数の
共重合体が結合して得られ九ものの混合物であり、それ
ら個々のＳＯＤ誘導体のＳＯＤに結合している共重合体
の分子数は同一ではない。し友がって、ＳＯＤ誘導体を
表わす前記式において、ｎはＳＯＤ１分子に結合する共
重合体分子数の平均値を表わすことを意味する。しかし
ながら、ＳＯＤに結合する共重合体の分子数が同数のＳ
ＯＤ誘導体が所望される場合には、前記の方法により得
られるＳＯＤ誘導体をさらにゲル濾過などの操作に付す
ることにより所望のＳＯＤ＠導体を取得することが可能
である。なお、前記の反応および反厄後の処理において
、５ＯＤｉｉｌ導体が有するカルボキシル基がアルカリ
金属塩またはアンモニウム塩を形成する可能性があるが
、かかる塩を形成したカルボキシル基を有する５ＯＤｉ
ｌ導体も本発明において使用することができる。

原料として用いらｎるＳＯＤは、動物（ヒト、ウシなど
）、植吻、微生物などの生物中に含まれているものを公
知の方法によりそれぞれの生物体から抽出されｔもの、
Ｉｔは遺伝子工学の手法を用いて取得され友ものなどで
ある。ＳＯＤの化学構造（配位金属、分子量、アミノ酸
配列など）はかなり解明されてきており、ＳＯＤはＦｅ
配位ＳＯＤ、Ｍｎ配位ＳＯＤ、Ｃｕ　−Ｚｎ配位ＳＯＤ
の３種類に分類され、存在している生体組織によって異
なるが３万〜８万の分子量を有している。８０Ｄのアミ
ノ酸配列も存在している生体組織によって若干相異して
いるが、その詳細はスーパーオキサイドと医学７４−９
０（大柳善彦著、共立出版刊、昭和５６年５月２５日発
行）；ジャーナル・オプ・バイオロジカル・ケミストリ
ー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ）、　２４６．２８７５〜２８８０（１
９７１）；同１１遼、６１０７〜６１１２（１９７５）
：プロシーデイングズ・オプ・ザ・ナショナル・アカデ
建イーオブーサイｚ　ｙ　シス（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ
ｓ　ｏｆｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　
ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　）　、　７０．３７２５〜３
７２９（１９７３）ｆアルカリ金属・オプ・バイオケミ
ストリー・アンドφバイオフィジックス（人ｒｃｈｌｖ
ｅｓ　　ｏｆ　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　
Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ　）ｔ　　１７ジ。

２４３〜２５６（１９７７）などの文献の記載を参照さ
れたい。原料のＳＯＤとしてはヒト型のＣｕ　−Ｚｎ配
位ＳＯＤが好ましい。このものは分子量３．３万を有し
、ま九分子中に２２個ｉ危は２４個のアミノ基を有する
。ヒト型ＳＯＤは、例えば、ヒトの血液ｔ−順次熱処理
、イオン交換、ゲル濾過に付することにより、ｉ次遺伝
子工学の手法を用いることによって取得される。

ま九原料として用いる共重合体は、上記（イ）の構成単
位に対応する単量体と無水マレイン酸との共重合体を部
分加水分解〔少量（１分子当り平均０．５〜２個）の無
水マレイン酸環が残存し、他の無水マレイン酸環は加水
分解〕することにより、ま九上記（イ）の構成単位に対
応する単量体と無水マレイン酸との共重合体をアルコー
ルで部分半エスチル化〔少量（１分子当り平均０．５〜
２個）の無水マレイン酸環が残存し、他の無水マレイン
酸環は牛エステル化〕することにより得らｎる。このよ
うにして得ら九る共重合体として、例えば、部分加水分
解されたスチレンと無水マレイン酸との共重合体；部分
半エステル化（メチルエステル、エチルエステル、フロ
ビルエステル、ｎ−７’チルエステル、メトキシエチル
エステル、エトキシエチルエステル、１．３−ジメトキ
シ−２−プロピルエステル、２．３−−／メトキシー１
−プロピルエステル％１，３−’）エトキシ−２−７’
ロビルエステル、２−エトキシ−３−メトキシ−１−プ
ロピルエステルなど）されたスチレンと無水マレイン酸
との共重合体などが挙げられる。

これらの共重合体はいずれも疎水性基と親水性基の両者
を持つことによる適度な疎水性會有し、かつ極性の高い
カルボキシル基を有する。したがって、かかる共重合体
が結合しているＳＯＤ＠導体は血清蛋白および生体膜と
の可逆的な結合性を有しており、このことにより血中半
減期が延長され、ま九臓器への移行性が良好となる。な
かでも構成単位（イ）としてスチレン由来の基を有する
５ＯＤｌｌ導体および構成単位（ロ）として半エステル
化され九基を有する５ＯＤｉｌ導体は疎水性がより高く
これらの効果を発現する点で好ましい。

共重合体において、構成単位（イ）と構成単位（Ｃ＝）
およびｅつの構成モル比「（イ）／（ロ）＋ｅつ」に実
質的に約１〜１．３の範囲であることが好ましく、通常
は１でめる。構成モル比が１よりも小さいものは構成単
位（イ）に相当する単量体と無水マレイン酸との共重合
で得ることは困難である◇また、構成モル比が１．３よ
りも大きいものは、構成単位（ロ）が半エステル化され
ｔものである場合、かかる共重合体を塩の水溶液中に溶
層させてＳＯＤと反応させる際に、共重合体の水溶液へ
の溶解性が不良となるので好ましくない。

上記の共重合体はいずれも公知のものであり、それらの
重量平均分子量は通常８００〜２００００の範囲である
。これらの共重合体から得られるＳＯＤ誘導体の扶患局
所への移行性の点から、共重合体の重量平均分子量は３
０００以下であることが好ましい。共重合体の分子量分
布については特に制限はない。上記の構成単位０）に相
当する単量体と無水マレイン酸とをラジカル共重合する
ことにより得られる共重合体（重量平均分子量／数平均
分子量との比が約２．０またはそれ以上のもの）を分別
することなく、そのまま部分加水分解ま次は部分半エス
テル化したものを原料として用いることもできるし、ま
几分別して分子量分布を狭くシ九ものを部分加水分解ま
たは部分半エステル化して原料として用いてもよい。

また、中級ないし高級脂肪酸グリセライドは炭素数６〜
２０個の飽和ま九は不飽和脂肪酸のモノ−、ジーま九は
トリ・グリセライドである。上記の脂肪酸グリセライド
に含まれる代表的なものを挙げると、例えば、カプリル
酸、カプリン識、ラウリン酸、ミリスチン酸、バルミチ
ン酸、オレイン酸、リノール酸、リルン酸の七ノー、ジ
〜ま次はトリグリセライドなどである。これらの脂肪酸
グリセライドは単独ま九は適宜混合して使用できる。Ｉ
ｔ、脂肪酸グリセライドは天然のもの、合成または半合
成のもののいずれであってもよい。

通常、天然の植物油を使用するのが便利である。

本発明の組成物に使用される植物油としては、例えば、
オリーブ油（オレイン酸７０〜８５饅、リノール酸４〜
１２ｓ１バルンチン酸７〜１５％）、トウモロコシ油（
リノール酸４０〜６０％、パルミチン酸２５〜４５％）
％ゴマ油（オレイン酸３５〜４６％、　　リノール酸３
５〜４８％）、ツバキ油、ヤシ油（ラウリン酸４５〜５
２Ｌカプリン酸４〜１２　＊　ｓ　カプリル酸６〜１０
チ）、パーム油などが好ましい。これらは、市販品をそ
のまま用いることができ、市販の中鎖脂肪酸トリグリセ
２イドとしては、例えば日本油脂（株）裏のバナセート
８７５Ａ同８１０■、同ＳＯＯ■（カプリル酸含量１０
〜１００％）、日清製油（株）！Ｊ４のＯＤＯ■（カプ
リル酸含量６７チ）などが、中鎖脂肪酸モノグリセライ
ドとしては、例えば花王（株）ｊｌＭのホモチフスＰＴ
■（カプリン酸含量的６０％）などが、中鎖脂肪酸のモ
ノグリセライドとジグリセ２イドとの混合物としては、
例えば、ダイナミツト　ノーペル社製のＷｉｔａｆｒｏ
ｌ■などが、また高級脂肪酸トリグリセライドとしては
和光紬薬工業（株）製のオリーブ油、日本油脂（（ホ）
製のリノール酸、その他市販の食用油などがそれぞれ利
用できる。

両親媒性助剤は親水性と親油性の両性質を備え九非毒性
の物質である。代表的なものとしては、天然の両性界面
活性剤、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ　系）　
、ソルビタン脂肪酸エステル（Ｓｐａｎ系）、ポリエチ
レングリコールなどを挙げることがで鳶る。天然の両性
界面活性剤としては、好ましくは大豆リン脂質、卵黄レ
シチンおよびこれらの類縁化合物であり、例えば日本油
脂（株）製のホスファチジルコリン、卵黄レシチン、大
豆レシチン、ホスファチジルエタノールアミンなどが利
用できる。また、ポリグリセリン脂肪酸エステルとして
は、ユニグリ■〔日本油脂（株）製〕が、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステルとしては、例えばツイ
ーン（Ｔｗｅｅｎ　）　２０■　〔和光紬薬工業（株）
製〕が、ソルビタン脂肪酸エステルとしては、例えばス
パン（５ｐａｎ　）　２０■〔和光紬薬工業（株）製〕
が、ポリエチレングリコールとしては例えばＰＥＧ６０
００がそれぞれ利用できる。このほか、アニオン界面活
性剤として、例えばラウリル硫酸ナトリウムを、ま九カ
チオン界面活性剤として、例えば塩化ベンザルコニウム
、塩化ペンゼトニクム、エイシン■（米国Ｎｅ１ｓｏｎ
　Ｒｅｓ、　＆　Ｄｅｖ。

社製）をそれぞれ使用することができる。

本発明の組成物を製造するには、酢酸で田３付近に！Ｉ
ｌｌ整し７’ｊＳＯＤ誘導体の水溶液の凍結乾燥粉末を
予め両親媒性助剤を添加し九脂肪酸グリセライドもしく
は未添加の脂肪酸グリセライドに加えて均一に分散する
か、ま九はＳＯＤ誘導体の炭酸アンモニウム水溶液と両
親媒性助剤の水溶液との同量混合物を凍結乾燥し、乾燥
粉末に中級ないし高級脂肪酸グリセライド溶液を加えて
均一に分散する０ 脂肪酸グリセライドの使用量は、ＳＯＤ！！導体１１１
Ｆに対して０．１〜１００ｄ程度であり、好ましくは０
．５〜５ｍである。両親媒性助剤の添加は必ずしも必要
ではないが、こｆ’Ｌを添加する場合には油に対するク
エツテイング効果が付加され、分散溶解性が増し、安定
な組成物が得られるとともに、吸収促進効果が付加さｔ
ゐ０両親媒性助剤の添加量は、その種類に応じて変化す
るが、通常ＳＯＤ豹導体１岬に対して液体助剤では０．
Ｏ１〜０．１ｄ、また固体助剤では０．０５〜ｓｑが適
当である。

本発明の組成物は物理的、化学的に安定である。

すなわち、本発明の組成物を室温で５００　Ｏｒｐｍ　
。

１５分間の遠心操作に付した場合、または３７℃で１ケ
月間靜置した場合のいずれにおいても沈渣は認められな
い。また、遮光下で４℃の温度下ま几は室温下での保存
では、少くとも３ケ月間は本発明の組成物に視覚上の変
化は認められない。さらに１本発明の組成物に４℃と室
温の温度変化を各２４時間毎ＫＩＯ回与えた場合でも、
視覚上の変化は認められず、その力価は安定してい九０
発明の効果 上記のように、本発明の組成物は安定性に優れるととも
にＳＯＤＭＪ体の経口投与を可能にし友ものである。こ
れにより、ＳＯＤ誘導体さらにはＳＯＤそのものの利用
価値を高めることができる。

次に、動物実験により本発明の組成物の効果を具体的に
説明する。

（１）抗炎症作用試験 （１）　　インフルエンザ感染マウスの肺に生じるコン
ソリデージョン（炎症性硬変）に対する効果実験方法： イｙ　７　ｐｙ　ｘ　ンザウイ＃　ス（Ａｓ　／Ｋｕｍ
ａｍｏｔｏ　（Ｈ２Ｎ２　）　）をＬＤｅａ値の１００
倍量でｄｄＹ系マウス（５〜６週令、体重２２ｆ）に経
鼻噴霧感染させ、感染臼から６日間連続的に１日１回被
験薬剤の所定量を経口投与し次。マウスは１群３０匹用
い次。感染３日後、４日後または５日後にマウスを層殺
し、ホースホールの方法〔ジャーナル・オブ・エクスペ
リメンタルφメデイシｙ　（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅ
ｘｐ１３ｒｉｍｅｎｔａ１Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、９５，
１３５〜１４５（１９５２）参照〕によりマウスの肺の
コンソリデージョンのスコアを求め次。

結果を第１表に示す。なお、表中に示す肺のコンソリデ
ージョンのスコアは、マウスの肺を生還食塩水を心臓に
直接注射することにより充分洗滌し九のち観察し、次の
基準により判足したものである。

コンソリデージョン・　　　　肺野に占めるコンソリデ
ー０．５　　　　　　　　　　　　　１２．５１．０　
　　　　　　　　　　　　２５１．５　　　　　　　　
　　　　　３７．５２．０　　　　　　　　　　　　　
５０２．５　　　　　　　　　　　　　６２．５３．０
　　　　　　　　　　　　　７５３．５　　　　　　　
　　　　　　８７．５４．０　　　　　　　　　　　　
１００第　　１　　表 生理食塩水　　　　　０．５８　０．８３　１．０８（
対照） ＯＤＯ■単独　　　　　０．５５　　０．９０　　１．
１１（対照） 傘 Ｂｕ−８ＭＡ−８ＯＤ　　　　Ｏ，２Ｂ　　０．３３　
０．７５（１，１００ｕｎｉｔ、４ｙ） （対照） 調製例１１の組成物　　　０．２５　　０．３１　　０
．６９（１，１００ｕｎＩＶｋｑ） 以下余白 （２）火傷局所へのアルブミン漏出に対する効果実験方
法： エバンスプル−を濃度０．２重量％となるように生理食
塩水に溶解し、その溶液０．１８１／（１０■／Ｋｐ）
をｄｄＹ系マウス（８〜１０週令、体重３０ｆ）に静脈
内投与した。マウスは１群１０匹用いた。投与後、予め
温水浴中で７０℃に加熱しておいた鉄製の釘の頭部（直
径１２ｕ）をマウス腹部に１０秒間押し付けて火傷を作
成し、その直後に被験薬剤を経口投与した。薬剤投与２
時間後にマウスを層殺し、皮膚火傷部分を切除し、６０
℃のホルムアミド中に４８時間侵潰し、抽出されたエバ
ンスブルーの濃度を５２０　ｎｍの吸光度で定量した。

これよりエバンスブルー・アルブミン複合体の濃度を求
め、被験薬剤による火傷局所へのアルブミン漏出に対す
る抑制率（％）を算出した。

結果を第２表に示す。

以下余白 第　　　２　　　表 ＊　水性経口ポジティブコントロール また、上記の実験方法において薬剤投与６時間後にマウ
ムを層殺した以外は同様にして実験を行い、こｈよりエ
バンスブルー・アルブミン複合体の濃度を求め、ＯＤＯ
■単独投与群、Ｂｕ−８ＭＡ−８ＯＤ投与群および本角
明の組成物の投与群における火傷局所へのアルブミン漏
出に対する抑制率を算出したところ、それぞれ０％、１
５％および３８チであつ九。

以上のことから明らかなように、本発明の組成物を投与
した群では対照群に比べ有意に火傷局所へのアルブミン
漏出が抑制されていることがわかる。

（ＩＩ）　　経口投与油性化Ｂｕ−８ＭＡ−８ＯＤの血
中への移行試験 放射活性検定法によシ血中のＢｕ−８ＭＡ−８ＯＤ濃度
を測定した。その結果を試験方法とともに以下に説明す
る。

（１）　　１４０グリシン標識Ｂｕ−８ＭＡ−８ＯＤＯ
調製Ｂｕ−８ＭＡ−８ＯＤ　３６．Ｇ　ｊＩＩＦを蒸留
水３．Ｏｄに溶解し、そこに水溶性カルボジイミド４２
．２■を加え、５分後、１４ｃグリシン（米国Ｎｅｗ　
ＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ社製、１１３．０ｍＣ１
／ｍｍｏｊ）　０．１４１１１９　（０，５ｄ水溶液）
を加えた。１Ｍ重炭酸ナトリウム水溶液で川を６前後に
調整し、室温下Ｋｆｌ光下でゆるやかに攪拌しながら１
時間反応させた。ついで、１Ｍ酢酸緩衝液（Ｆ４４６．
０）を１．０−を加えて反応を停止させたのち、セファ
デックス（Ｓｅｐｂａｄｅ：ｃ■）Ｇ−２５カニ７　Ａ
　（ＰｈａｒｍａｃｉａＦ、Ｃ，社製）を充填した（２
．３Ｘ１０譚）で脱塩し、凍結乾燥した　１４（１グリ
シン標識Ｂｕ−８ＭＡ−８ＯＤ量は８．６岬、比放射能
は６．３２μＣｉ／〜で主として１分子のＢｕ−８ＭＡ
−８ＯＤに１個のグリシンが導入された単一標品が得ら
れた。このものはＢｕ−８ＭＡ−８ＯＤのカルホキクル
基にアミド結合を介してグリクンが結合しておシ、安定
な化合物である。

（２）経口投与による動物実験 上記１４Ｃグリシン標ｗｔＢｕ−８ＭＡ−８ＯＤを用い
て後記の調製例２の組成物を調製し、そのＱ、　２虎！
（３，０３μＣｉ）をステンレス族の胃ゾンデを用いて
強制的にｄｄＹ系雄性マウス（８週令）に経口投与した
。投与３時間後または７時間後にマウスを層殺し、血漿
、主要臓器における放射活性を測定した。放射活性は組
織１．０ｆあた“りのｄｐｍで表わした。結果を第３表
に示す。

以下余白 第　　　３　　　表 血　　漿　　　　　　２２５３　　　　　　　　５４６
９肝　　ｆｌｉｔ　　　　　　　７０７３　　　　　　
　３８０３０腎　　臓　　　　　　　１９７０　　　　
　　　　１６８１０牌　　臓　　　　　　３１６９　　
　　　　　　９９５Ｂ第３表は本発明の組成物が血中お
よび体内各組織中に能率よく運ばれていることを示す。

このことは水溶性のＢｕ−８ＭＡ−８ＯＤの経口投与に
よっては得られない利点である。

以上のとおり、本発明の組成物は経口投与により優れた
抗炎症効果を発現する。

本発明の組成物のヒトに対する臨床応用としては、この
組成物を用いて常法によシ、ソフトカプセル、カプセル
、錠剤、顆粒剤、液剤、串刺などの適宜の製剤に調製し
たのち患者に投与する。

投与は１日１〜５回、連日または隔日、１回当シＳＯＤ
誘導体０．１〜１００■当量を投与する。

実施例 次に実施例によシ本発明を具体的に説明する。

なお、ＳＯＤ誘導体としてＢｕ−８ＭＡ−８ＯＤを例に
挙げて説明するが、他のＳＯＤ誘導体においても同様の
組成物を与える。

調製法Ｉ Ｂｕ−８ＭＡ−８ＯＤを水冷下に蒸留水に溶かす（１０
■／ｄ’）。この水溶液に０．５　Ｍ酢酸を滴下して…
を約３．０に調整後、凍結乾燥する。得られた凍結乾燥
したＢｕ−８ＭＡ−８ＯＤ粉末Ｋ、予め両親媒性助剤を
添加また中級ないし高級脂肪酸グリセライドを加え、肉
眼で十分分散しているようになるまで振とり攪拌する。

振とり攪拌は、モデルＴＯＭＹ　　ＵＲ−１５０Ｐチッ
プ型超音波発生装置（Ｔｏｍｙ　５ｅｉｋｉ社！Ｒ）を
用いて超音波処理する。

処理時間は、３０秒内にとどめる。

調製法２ 両親媒性助剤４０■を蒸留水５ｗ１Ｋ加え、超音波処理
して溶かしたのち、１ｑＩｂ炭酸アンモニウム水溶液を
滴下して…を約８に調整する。この溶液と、Ｂｕ−８Ｍ
Ａ−８ＯＤ粉末を０．０２％炭酸アンモニウム水溶液に
氷冷下に溶解した溶液（４岬／Ｍｌ’）との同量を混合
攪拌したのち、凍結乾燥する。この凍結乾燥粉末に１中
級ないし高級脂肪酸グリセライドを加え、水中で超音波
処理を３０秒間行う。

上記の調製法によシ第４表に示す組成比の本発明の組成
物を得た。

以下余白 合成例 ウシ赤血球ｆｉｓＯＤ（シグマ社製）９５■を０−２　
’ｈ／１１Ｌ炭酸す）　リｔ　Ａ水溶液（Ｆｔ（８，０
）　１０ｍ１Ｋ４℃で攪拌しながら溶解させた。溶解後
、この溶液にスチレン−無水マ、レイン酸共重合体〔ジ
クミルパーオキシドを開始剤としてクメン中で溶液重合
したもの、スチレンと無水マレイン酸との共重合モル比
１：１、＆＝１２Ｈ１分子量分布：ＭｗΔａｎ　＝　１
．２０以下〕を部分半ブチルエステル化したスチレン−
無水マレイン酸共重合体〔本明細書において、これをＢ
ｕ−８Ｍ請・と略記する。　Ｍｗ＝１６００、エステル
化＆＝６０モルｓ、ｍ水マレイン酸環含有量＝２５モル
チ（１分子中に含まれる無水マレイン酸環は平均１．６
個存在））１００ηを固体粉末のまま徐々に添加し、１
．５時間反応させた。得られた反応液をセファデックス
（Ｓニー？　）Ｇ　−５０（ＰｈａｒｍｃｉａＦ、Ｃ，
社製）を充填したカラム（４，２Ｘ７５ａｎ）に注入し
、ゲル濾過した。蒸留水を溶出液とし、流出液を２８０
ｎｍ、２６ｏｎｍで検出し、未反志のＢｕ−８ＭＡを除
いた吸収部分の溶出液を分取し、これを凍結乾燥し、白
色粉末状の５ＯＤｎ導体〔本明細書において、これをＢ
ｕ−ＳＭＡ−ＳＯＤと称する〕を得た。

得られたＢｕ−ＳＭＡ−８ＯＤのＵＶスペクトルおよび
原料ＳＯＤとＢｕ−ＳＭＡのＵＶスペクトルをリン酸緩
衝液を用いて１１！１７．４　、濃度１■／ｒＲ１で測
定した。Ｂｕ−ＳＭＡ−８ＯＤのＵＶスペクトルおよび
原料ＳＯＤのＵＶスペクトルを第１図に示し、Ｂｕ−Ｓ
ＭＡのＵＶスペクトルを第２図に示した。

用いたウシ赤血球型ＳＯＤには１分子当シ２０個のアミ
ノ基が存在しておシ、これらのアミ７基がＢｕ−ＳＭＡ
と反応したことを確認するために、トリニトロベンゼン
スルホン酸ナトリウム（ＴＮＢＳ）で残存アミン基を定
量した。上記の反応条件下ではウシ赤血球型ＳＯＤのア
ミノ基の約２５モルチが減少しており、５ＯＤＩ分子に
平均５分子のＢｕ−８Ｍ、Ａが結合していることが確認
され九またヨーロピアン・ジャーナル・オプ・バイオケ
ミストリー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）、４７巻、４６９−４
７４頁ど１９７４年）Ｋ記載されているピロガロール自
己酸化法に従ってＢｕ−ＳＭＡ−８ＯＤの酵素活性を測
定した結果、Ｂｕ−ＳＭＡ−ＳＯＤには酵素活性が３５
％維持されていた。

【図面の簡単な説明】

第１図は合成例で得られたＢｕ−ＳＭＡ−８ＯＤおよび
原料５ＯＤｏＵＶスペクトルを示した図であり、第２図
は合成例で用いたＢ　ｕ　−ＳＭＡｏＵＶスペクトルを
示した図である。 特許出願人　　前　　１）　　　　　浩株式会社　り　
ラ　し

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、スチレン−無水マレイン酸共重合体残基を有するス
   ーパーオキシドジスムターゼと中級ないし高級脂肪酸の
   グリセライドとからなる経口投与用組成物。 ２、スチレン−無水マレイン酸共重合体残基を有するス
   ーパーオキシドジスムターゼが式 〔ＳＯＤ〕−〔Ｚ〕＿ｎ 〔式中、〔ＳＯＤ〕はアミノ基に換えてアミノ基から１
   個の水素原子を除いた基を１ないし２２個または２４個
   有するスーパーオキシドジスムターゼを表わし、〔Ｚ〕
   は （イ）式▲数式、化学式、表等があります▼で示される
   基、 （ロ）式▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ
   は水素原子を表わすか、または炭素数が１ないし４のア
   ルカノール、炭素数が１もしくは２のアルキル基部分を
   含むエチレングリコールモノアルキルエーテルまたは炭
   素数が１もしくは２のアルキル基部分を含むグリセリン
   ジアルキルエーテルから水酸基を除いた残基を表わす）
   で示される基および （ハ）式▲数式、化学式、表等があります▼（式中、カ
   ルボニル基の炭素原子の結合手は〔ＳＯＤ〕と結合する
   ものであることを意味する）で示される基 を構成単位とし、かつ平均分子量が８００ないし２００
   ００である共重合体の一価の基を表わし、ｎは〔ＳＯＤ
   〕が有するアミノ基から１個の水素原子を除いた基の数
   に対応する１ないし２２または２４の整数を表わす〕 で示されるスーパーオキシドジスムターゼ誘導体である
   特許請求の範囲第１項記載の経口投与用組成物。 ３、中級ないし高級脂肪酸のグリセライドが炭素数６な
   いし２０の脂肪酸のトリグリセライドまたはそれらの混
   合物である特許請求の範囲第１項記載の経口投与用組成
   物。 ４、中級ないし高級脂肪酸のグリセライドがカプリル酸
   トリグリセライド、カプリン酸トリグリセライドまたは
   それらの混合物である特許請求の範囲第１項または第３
   項記載の経口投与用組成物。 ５、スチレン−無水マレイン酸共重合体残基を有するス
   ーパーオキシドジスムターゼ、中級ないし高級脂肪酸の
   グリセライドおよび両親媒性助剤からなる経口投与用組
   成物。