JPS63250360A - サイモペンチンレトロ−インバーソ類似体及びそのフラグメント - Google Patents

サイモペンチンレトロ−インバーソ類似体及びそのフラグメント

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JPS63250360A
JPS63250360A JP63063716A JP6371688A JPS63250360A JP S63250360 A JPS63250360 A JP S63250360A JP 63063716 A JP63063716 A JP 63063716A JP 6371688 A JP6371688 A JP 6371688A JP S63250360 A JPS63250360 A JP S63250360A
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JP63063716A
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アレサンドロ・シスト
アントニオ・シルビオ・ベルディーニ
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Sclavo SpA
Eni Tecnologie SpA
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Sclavo SpA
Eniricerche SpA
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0212—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -N-C-N-C(=0)-, e.g. retro-inverso peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders

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  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 レトローインバーソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）類
似体及びそのフラグメント、該新規化合物の製法、その
間に得られる中間体及び該新規化合物の医薬組成物の調
製における使用に係る。
本発明の第１の目的は、下記一般式（Ｉ）で表されるサ
イモベンチン（ＴＰ５）のレトローインバーソ類似体及
びそのトリペプチドフラグメント（ＴＰ５”’）及び相
当する薬学上許容される酸一及び塩基付加物にある。
一般式（Ｉ） ［式中、 Ｒは水素又はアシル基であり、 Ｒ’は一ＯＲ”又は Ｈ （ここで、Ｒ″は、水素又は炭素数１〜６の直鎖状又は
分枝状アルキル基、炭素数３〜６の直鎖状又は分枝状ア
ルケニル基又はアルキニル基、又は炭素数７〜ｌ２のア
リール−アルキル基又はアルキル−アリール基である）
である］ 上記構造式で表される本発明の化合物は、国際的に認め
られたペプチドの表示記号を使用することにより次のよ
うに簡略的に表される。
ＲＮＨ−ｇＡｒｇ−ｍＬｙｓ−Ａｓｐ−Ｒ’　　　　（
Ｉ　）［式中、Ｒは水素又はアシル基であり、Ｒ１は−
ＯＲ”又は−Ｍａｌ−Ｔｙｒ−ＯＲ”　（ここで、Ｒ３
は上記と同意義である）であるコ 上記式において、ｇＡｒｇは、末端カルボキシル基をア
ミノ基で交換することによりアルギニンから誘導される
ｇｅｍ−ジアミノ残基を表し、ｍＬｙｓは、２位におい
てリシン側鎖によって置換されたマロニル残基を表す。
ＡｓｐＳＭａｌ、及びＴｙｒは、それぞれアスパラギン
酸、バリン及びチロシン残基を表す。
本発明の目的に関し、「アシル基、」は、炭素数１〜６
の直鎖状又は分枝状アルカノン酸から誘導されるアシル
基（たとえば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル
基、スクシノイル基等）、及び安息香酸及び置換安息香
酸から誘導されるアシル基（たとえば、ベンゾイル基、
４−ニトロ−ベンゾイル基、２，３．４−１−リメトキ
シベンゾイル基等）を示す。
ここで使用している「薬学上許容される塩」とは、一般
式（Ｉ）の新規化合物の酸−及び塩基付加塩であり、そ
のアニオン又はカチオンは、良好な生理活性を呈する用
量において哺乳動物に対して比較的無毒性かつ無害であ
り、かかるアニオン又はカチオンに起因する副作用が活
性化合物の有益な効果を低下させることはない。
これらペプチドと薬学上許容される付加塩を形成しうる
酸としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸等の無機
酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、マロン酸、コハ
ク酸、安息香酸等の有機酸、及びメタンスルホン酸又は
ナフタレンスルホン酸等の有機スルホン酸がある。
これらペプチドと薬学上許容される付加塩を形成しうる
塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水
酸化アンモニウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ト
リエタノールアミン等の有機塩基がある。
上記付加塩は、新規レトロ−インパーツペプチドの調製
に係る本発明の方法から直接に、又は常法に従い、一般
式（Ｉ）のペプチドを１又はそれ以上の当量の酸又は塩
基と反応させることにより得られる。必要であれば、Ｒ
，Ａ、Ｂ１５ｓ＋ｏｎａｓらにより［ヘルベチカ・シミ
力・アクタ（Ｈｅｌｖ、　Ｃｈｉｔ　Ａｃｔａ）Ｊ４３
　１３４９、　（Ｉ９６０）に記載されたように適当な
イオン交換樹脂による処理を介して、特定の酸付加塩を
他の酸付加塩に変換することもできる。好適なイオン交
換樹脂は、セルロースを基材とする陽イオン交換体及び
強塩基性陰イオン交換樹脂である。
本発明の化合物の好適なグループは、一般式（Ｉ）にお
けるＲ１が前記と同意義であり、Ｒ８が水素であり、Ｒ
が水素又は代謝活性アシル基（すなわち、生成物の代謝
初期段階の間に、インビボで容易かつ迅速に開裂され、
しかも一般式（Ｉ）で表される生物活性化合物の所望の
薬理効果を呈する濃度において、治療の際、何等毒性又
は禁忌作用を示さないアシル基）である化合物でなる。
最も好適な化合物のグループは、一般式（Ｉ）における
Ｒが水素であり　Ｒ１が前記と同意義であり、Ｒ３が水
素である化合物でなる。
本発明の化合物は、顕著な免疫薬理特性を有する。
過去１５年の間では、Ｇ、Ｇｌｄｏｓｔｅｉｎ及び共同
研究者らは、胸腺の類上皮細胞によって分泌されるポリ
ペプチドホルモンであるサイモポイエチン（その−次セ
クエンスはアミノ酸４９個を含有する）の生物学的活性
及び薬理作用に関する研究を行っている（Ｃｉ、Ｇｌｄ
ｏｓｔｅｉｎ　「ネーチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ）Ｊ　２４
ユ、１１゜（Ｉ９７４）　；Ｄ、Ｈ，Ｓｃｈｌｅｓｉｎ
ｇｅｒら「セル（Ｃｅｌｌ）Ｊ旦、　３６１゜（Ｉ９７
５）　；Ｔ、Ａｕｄｈｙａら［バイオケミストリー（Ｂ
ｉｏｃｈｅ−ｇｔｉｓｔｏｒｙ）Ｊ　　糾、　　６１９
５．（Ｉ９８１））。
サイモポイエチンは、神経筋伝達、Ｔ−Ｂ細胞分化、及
び免疫応答に関与する多数の生物学的調節効果を有して
いる（それぞれ、Ｇ、Ｇｌｄｏｓｔｅｉｎ　ｒランセッ
ト（Ｌａｎｃｅｔ）Ｊ　２．　１１９．（Ｉ９６ｇ）；
　Ｍ、Ｐ、５ｃｈｅｉｄら「ジャーナル・オブ・エクス
ペリメンタル・メディカル（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、）Ｊ
　１４７．　１７２７．（Ｉ９７８）；　Ｃ，Ｙ、Ｌａ
ｕら［ジャーナル・オプ・イミュノロジ−（Ｊ、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、）Ｊ昼互、　１６３４．（Ｉ９１３０）　）
。
構造−活性に関する研究から、サイモポイエチンのアミ
ノ酸３２−３６に相当するペンタペプチド（サイモペン
チンーＴＰ５） Ｈ−Ａｒｇ　−Ｌｙｓ　−Ａｓｐ　−１／ａｌ　−Ｔｙ
ｒ　−Ｏｔ（がインビトロ及びインビボのいずれにおい
ても天然ホルモンの生物学的特性を有することを示し、
生物学的活性には、サイモポイエチンのすべてのアミノ
酸４９個が必要ではないことが明らかになった（Ｇ、Ｇ
ｌｄｏｓｔｅｉｎら「サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）Ｊ
　２０４゜１：（０９，（Ｉ９７９）　）。
さらに詳述すれば、事実、インビトロ実験では、サイモ
ポイエチン及びサイモペンチン（ＴＰ５）のいずれも、
選択的にＴリンパ球の分化を誘発し、一方、Ｂリンパ球
の成熟を阻害するこ、とが明らかになった。
さらに、インビボ実験では、サイモペンチンも、先天的
に胸腺か欠損し、このため循環する成熟Ｔリンパ球の量
が少ないヌードマウスにおける工Ｚく並でのＴ細胞の分
化を行うことを示した（Ｇ、Ｂ。
ＲａｎｇｅｓｒＪ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄｉ　１５６．１０５
７．　（Ｉ９８２）　）。このようにして、この化合物
の主免疫機能が確立された。
サイモポイエチン及びサイモベンチンは、末梢Ｔ細胞に
おける明確なサイクリックＧＮＰ仲介作用によると考え
られる免疫抑制作用を示す。
さらに詳述すれば、動物試験では、サイモペンチンは、
免疫偏向の際の免疫正常化活性を有し、活発化又は抑制
化が必要となる場合、すなわち、たとえば自己免疫疾患
におけるように高応答の場合、又は胸腺摘除又は老化に
伴う胸腺の衰退におけるように低応答の場合のいずれに
おいても、免疫系を正常方向にもたらすことが明らかに
なった（Ｅ、■、Ｇｏｌｄｂｅｒｇら［イミュノジェネ
ティックス（ｌｓａ＋ｕｎｏｇｅｎｅｔｆｃｓ）Ｊ　１
３．２０１．（Ｉ９ｇり：　Ｃ，Ｙ、Ｌａｕら［セル・
イミュノロジ−（Ｃｅｌｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）Ｊ　６
６、２１７゜（Ｉ９ｇ２）　）。
サイモペンチンは、慢性関節リウマチの如き自己免疫疾
患の治療、又は胸腺の欠損又は胸腺の不完全な発達（こ
れにより、Ｔリンパ球の成熟の変調を生ずる）によって
起こる一次免疫欠損の治療用として、及び予防接種にお
けるアジュバントとして臨床的に使用されている。
しかしながら、有効な用量、投与の適当なルート及び様
式の決定における困難性のため、適切な治療スケジュー
ルを定めることが困難である。事実、薬理効果は投与ル
ート及び様式に応じて非常に顕著に変化することが知ら
れている（Ｔ、Ａｕｄｈｙａらｒｓｕｒｖ、　Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ、　Ｒｅｓ、Ｊ　４　：　５ｕｐｐ１．１．１？
。
（Ｉ９８５）；　Ｔ、Ａｕｄｈｙａら［インターナショ
ナル・ジャーナル・オブ・ペプチド・プロティン・リサ
ーチ（Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ　Ｒｅｓ、）Ｊ　２２．５６８゜（Ｉ９８３）　’）
。
Ｂｏｌｌａらにより、「インターナショナル・ジャーナ
ル・オブ・クリニカル・ファーマコロジー・リサーチ（
Ｉｎｋ、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｒｅｓ、
）Ｊ　■（６）、４３１゜（Ｉ９８４）に非常に興味深
い観察結果が報告されている。これによれば、ＴＰ５皮
下投与によって誘発される抗体生成の促進は、同じ用量
を静脈内投与する場合には完全に抑制される。その原因
は、ＴＰ５の血漿半減期が短かいためと考えられる。事
実、ＴＰ５は、ヒト血漿中に存在するプロテアーゼによ
って迅速に開裂されるため、インビボでは非常に急速な
酵素分解作用を受ける。血清中におけるサイモペンチン
の半減期は約１．５分であることが知られている（Ｔ、
Ｐ、Ｔｉ５ｃｈｉｏらｒｌｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄ
ｅＰｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、　Ｊ　１４．４７９．（Ｉ
９７９）　）。
ここ数年間では、酵素分解に対する抵抗性を有する丁Ｐ
５類似体を得ることに研究が集中している。
たとえば、ヨーロッパ特許出願第１３５，７２２号及び
米国特許第４，５０５，８５３号を参照すれば、これら
は、５位に変更を加えたサイモペンチンの合成類似体に
係るものである。
最近では、サイモペンチンフラグメント　１−３Ｈ−Ａ
ｒｇ　−Ｌｙｓ　−Ａｓｐ　−０Ｈ（ＴＰ５”）も免疫
促進活性を有することが明らかにされている（Ｌ、Ｋ１
５ｆａｌｕｄｙらｒＨｏｐｐｅ−８ｅｙｌｅｒｓ’ｓ　
Ｚ、Ｐｈｙｓｉｏｌ。
Ｃｈｅｍ、Ｊ　３６土、　９３３．　（Ｉ９８３）　）
。予備的なインビボテストでは、胸腺適除したマウスに
おいて免疫応答を回復させるうろことが証明されている
。
しかしながら、この場合にも、血漿プロテアーゼによる
酵素分解に対するこの化合物の感受性が大きいこと及び
その半減期が短かいことが重大な欠点である。
発明者らは、上記一般式（Ｉ）の化合物が、相当する親
の化合物ＴＰ５及びＴＰ５１−３と比較する場合、同等
又はそれ以上の生物学的活性と共に、実質的に低減され
た抗酵素分解性を有することを見出し、本発明に至った
。
特に、ＴＰ５及び［ｇＡｒｇｌ、　（Ｒ，Ｓ）ｍＬｙｓ
２］　ＴＰ５のヒト血漿中における酵素加水分解に対す
る感受性を、ヘパリン処理した（ｈｅｐａｒｉｎｉｚｅ
ｄ）ヒト血漿を使用し、血漿濃度約３０ナノモル／ｆｆ
＋２で上記ペプチドを別個にインキュベートすることに
よって評価した。
インキュベーションを３７℃で行ない、一定時間毎に一
定量（各１００μＱ）を集め、１０％トリフルオル酢酸
で処理してブロック化し、５分間遠心分離した（Ｉ０．
ＯＯＯｒｐｍ）。上澄液から得た一定量についてクロマ
トグラフィーによってアッセイを行ない、各時間毎のテ
ストペプチドの濃度を測定した。このようにして得られ
た速度から、半減期（すなわち、テストペプチドの５０
％を減成させるために必要な３７℃でのインキュベーシ
ョンの時間）を算定する。
得られた結果を下記第１表に示す。
第　　１　　表 ヒト血漿中における酵素加水分解 に対する安定性 （分） ＴＰ５　　　　　　　　１．５ ［ｇＡｒｇ　、（Ｒ，Ｓ）ｍＬｙｓ２］ＴＰ５　　　３
２一般式（Ｉ）におけるＲ１が一０Ｒ１（ここで、Ｒ１
は水素である）である化合物も、相当する粗化合物ＴＰ
５”よりも大きい血漿プロテアーゼに対する安定性及び
１０倍以上長い半減期を有することを示した。
相当する粗化合物ＴＰ５及びＴＰ５１−３と比べてのか
かるレトロ−インパーツ類似体の実質的に増大された安
定性は、単離された酵素（ロイシンアミノペプチダーゼ
及びカルボキシペプチダーゼ）に対しても証明されてい
る。
［ｇＡｒｇ’、（Ｒ，Ｓ）ｍＬｙｓ２］ＴＰ５の免疫賦
活活性を、イーンビトロ及びインビボの両方においてＴ
Ｐ５と比較してテストし、一方、一般式（Ｉ）における
、Ｒが水素であり、Ｒ１が−ＯＲ’（ここで、Ｒ８は水
素である）である化合物の活性を、直接インビボにおい
て、相当する粗化合物ＴＰ５１−３と比較して評価した
。
特に、インビトロテストとして、抹消血マストセル（Ｐ
ＢＭＣ）及び磨帯血細胞（ＣＢＣ）の両方についてロゼ
ツトＥ形成テストを行なった。使用したＣＢＣは、ヒツ
ジ赤血球（ＳＲＢＣ）によるロゼツトＥ形成割合２〇−
４０％を与える。テストは、ヒトＴ細胞の５ＲＢＣによ
るロゼツトＥ形成能力に基づくものである。Ｏ，Ｇ。
Ｂｉｅｒらによって［ファンダメンタルズ・オブ・イミ
ュノロジー（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ　ｏｆ　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ）ＪＳｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ　
（Ｉ９８１）に記載された方法に従って実施したアッセ
イは、ＣＢＣをテストペプチドと共に又は単独で、５％
ＣＯ１の存在下、３７℃で一夜インキュベーションする
こ゛とによるものである。得られた結果を下記第２表に
示す。
第　　２　　表 化合物　　　　　　　　インキスへ゛−ノ１ン後に　　
　　　ロセ゛ブトＥの生きている細胞　　形成割合 の割合　（％）　　　　　（％） ＣＢＣ−７’　５７り　　　　　　　　　　　　　１０
０　　　　　　　　　　　　　　　２３ＴＰ５１０ｎｇ
＃１２　　　　　６５　　　　　　　２８ＴＰ５１１０
０ｎ／ｊＩｉ２　　　　　６５　　　　　　　３３ＴＰ
５−Ｒ１１０ｎｇ／ＲＱ６８　　　　　　　３４１〜２ インビボテストとして、１ｉｊｅｒｎｅによって開示さ
れた、いわゆる「プラグ形成細胞」テストを使用した（
上述のものと同じ文献参照）。このテストでは、テスト
ペプチドを投与したマウスの胛蔵細胞を５ＲＢＣと共に
インキュベートし、形成されたプラグの数を計測する。
実施にあたっては、各グループのマウス（各グループは
マウス３匹でなる）に、抗原（ＳＲＢＣ）接種後１時間
の時点で、テストペプチド約１　ｎｇ７１匹を腹腔内投
与する。この処置後４日の時点で、牌蔵細胞を適除し、
直ちにテストを実施する。得られた結果を下記第３表に
示す。
第　　３　　表 化合物　　　　形成された　　プラクのｌｏｇ数７１ラ
クの数 ７１ランク　　　　　　　　　　　　　４２．０００　
　　　　　　　　　　４．６２ＴＰ５　　　　　　　　
　　　　　　　４８．３７５　　　　　　　　　　　４
．６８ＴＰ５−Ｒ１，２８５，５８３４，９３ＴＰ５”
’　　　　　　４８．９１７　　　　　４．６７ＴＰ５
”’　−Ｒ１ ，２６３，１２５４，７８ 上記第３表及び本明細書において使用しているｒＲＩＪ
は、「レトロ−インパーツ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓ
ｏ）Ｊの意味である。従って、ＴＰ５−［，２は、１２
ペプチド結合部でレトロ逆転したサイモベンチン類似体
を意味する。また、ＴＰ５１−３−Ｒ１は、１−２ペプ
チド結合部でレトロ逆転したサイモペンチントリベプチ
ドフラグメントＴＰ５１−３類似体を意味する。
プラク形成テストを、抗原（ＳＲＢＣ）の接種３日前に
テストマウスをＴＰ５又は相当するレトロ−インパーツ
類似体ＴＰ５−Ｒ１１−２で処理する場合についても実
施した。得られた結果を、下記第４表に示す。
第　　４　　表 化合物　　　形成されたプラク数　　プラクのｌｏｇ数
フ゛ランク　　　　　　　　　　　　４４．０００　　
　　　　　　　　　　　４．６４ＴＰ５　　　　　　　
　８２．ＱＯＯ４，７９ＴＰ５−Ｒ１，２１０３，００
Ｇ　　　　　　　５．０１上記結果か、ら、本発明のペ
プチドは身体の免疫応答に影響を及ぼしうる、代表的に
は欠損の際に免疫応答を促進しうるちのであることが明
らかである。従って、本発明の化合物は、免疫原性欠損
によって生ずる各種疾患の治療に有用である。これらの
疾患としては、たとえば、胸腺の先天的欠損によって特
徴ずけられるＤｉＧｅｏｒｇｅ症候群、又は慢性ウィル
ス感染症、真菌感染症又はマイコプラズマ感染症がある
。
本発明のいくつかの化合物は、異常な場合の免疫系活性
を抑制することによる免疫調節活性をも有する。かかる
化合物（ＴＰ５−Ｒ１１−２を含む）は免疫調節剤とし
ての広範な治療での利用が期待される。
本発明の他の目的は、一般式（Ｉ）で表される化合物の
１又はそれ以上を治療上の有効量で含有してなる医薬組
成物にある。
免疫促進剤又は免疫調節剤としての使用のため、本発明
の化合物は、非経口的、経口的、鼻腔内又は舌下的に簡
単に投与される。
新規化合物を含有する組成物は、常法に従い、主剤を不
活性な医薬品キャリヤーと混合し、又は任意に、所望タ
イプの組成物の調製にあたり有用であることが知られて
いる一般的な添加剤の中から適当に選択されたものと共
に混合することによって調製される。好適な医薬品キャ
リヤー及び処方方法は基本書（たとえばｒＲｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａ−ｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｔ
ｅｎｃｅｓＪ　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｒｉｇ　Ｃ
ｏ、発行）に記載されているとおりである。しかしなが
ら、経口投与又は舌下投与の場合には、デンプン、砂糖
、水、アルコール等の如きキャリヤー及び／又は添加剤
を使用して調製され、かつ任意に香料、安定剤、保存剤
、滑沢剤を含有してなる錠剤、カプセル剤、ドロップ剤
、エリキシル剤等として本発明の化合物を投与できる。
非経口又は鼻腔内投与では、ビヒクルとして注射用滅菌
水を使用する。
常法に従って、添加剤を添加することもできる。
治療効果を得るための１日当たりの用量は、病状及び重
篤性、患者の体重及び年齢、投与ルート及び当分野で公
知の他のファクターに応じて、患者毎に異なるが、１日
当たりの用量は、一般に約１０ないし２００ｎｇ／体重
Ｌｋｇであり、１回又は複数回に分けて投与される。こ
のように、本発明の医薬組成物は、かかる１日当たりの
用量を提供するに適する量で一般式（Ｉ）の化合物を含
有する。
本発明の化合物は、一般式（ｎ） ＮＩＰ’ （式中、Ｐ法側鎖アミノ基の保護基であり、ｐ　ｔ＆グ
アニジノ基の保護基である）で表されるペプチドフラグ
メントを、一般式（ＩＩＩ） Ｈ，Ｎ−ＣＨ−ＣＯＲ３ ＯＯＰ ［式中、Ｒ３は−ＯＲ”（ここで、Ｒ２は前記と同意義
である）、−ＯＰ　（ここで、Ｐはカルボキシル保護基
である）、又は式（ＩＶ） −ＮＨ−ＣＨ−Ｃｏ−ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＰＣＨ−ＣＨ
ｓ　　ＣＨｓ （ここで、Ｐは前記と同意義であり、ＰＩはチロシン水
酸基の保護基である）で表される基であるコで表される
化合物と縮合させ、このようにして得られた一般式（Ｖ
） Ｈ，Ｎ−Ｃ０−ＣＨ−ＮＨ−Ｃｏ−ＣＨ−Ｃｏ−ＮＨ−
ＣＨ−ＣＯＲ”ＨＰＧ で表される中間体の末端アミド基を、Ｉ、Ｉ−ビス−ト
リフルオロアセトキシヨードベンゼン（ＴＩＢ）による
処理を介して第１級アミノ基に変化させて一般式（ＶＩ
） ）１．Ｎ−ＣＨ−ＮＨ−Ｃｏ−ＣＨ−Ｃｏ−ＮＨ−ＣＩ
−ＣＯＲ’で表される中間体を生成し、続いて末端アミ
ノ基を任意にアシル化し、保護基を除去することによっ
て調製される。
一般式（Ｉ）におけるＲが水素であり　Ｒ１が−ＯＲ”
である化合物が望まれる場合には、アミド−アミン変換
工程及び脱保護化工程の順序は逆転されうる。しかしな
がら、一般式（Ｉ）におけるＲ′が−Ｖａｎ−Ｔｙｒ−
ＯＲ”である化合物が望まれる場合には、チロシンにお
ける水酸基がＴＵＨに対して感受性であり、アミド−ア
ミン変換工程の際に保護されていなければならないため
、工程順序の逆転は不可能である。
一般式（Ｉ）におけるＲ１が−ＯＲ”である化合物が望
まれ、ＴＩＢによるアミド−アミン変換前に保護基の開
裂を行なう場合には、一般式（■）ＮＨＮＨ，Ｃ０ＯＨ Ｃ士ＮＨ ＮＨ。
で表される中間体が得られる。ついで、この中間体をＴ
ＩＢと反応させることにより、所望の一般式（Ｉ）で表
されるレトロ−インパーツペプチドが生成される。
本発明の他の目的は、一般式（Ｉ）の薬理活性化合物の
合成の間に得られる一般式（Ｖ）、（ＶＩ）及び（■）
で表される中間体にある。
さらに詳細には、本発明の製法における第１工程は、ペ
プチド合成に関する文献において公知の各種カップリン
グ法に従って容易に行なわれる。
生成物の収率及び純度について最良の結果は、ジシクロ
へキシルカルボジイミド又はジイソプロピルカルボジイ
ミドの如きカルボジイミド及び１−ヒドロキシベンゾト
リアゾールを使用する際に得られる。さらに好ましくは
、わずかに過剰量の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
を一般式（Ｉ［）で表される原料の酸の溶液に低温で添
加し、ついでジシクロへキシル−又はジイソプロピルカ
ルボジイミド及びさらに一般式（■）で表される反応体
を添加することによって行なわれる。
この縮合反応に関し、反応体を溶解するが反応の進行に
は悪影響を及ぼさない極性、非プロトン性の有機溶媒を
使用し、好ましくは温度０℃ないし室温で行なう。
使用できる溶媒としては、任意に極性の劣る溶媒（たと
えばハロゲン化脂肪族炭化水素、具体的には塩化メチレ
ン、ジクロロエタン等）と混合したジメチルホルムアミ
ド、アセトニトリル、及びジメチルスルホキシドがある
。
この製法で好適に使用される保護基は、文献において公
知のもの及びペプチド化学で一般的に使用されているも
のである。特に、本発明の製法の好適な具体例によれば
、ＰＬはベンジルオキシカルボニル基（任意にニトロ又
はハロゲン置換されたもの）であり；Ｐｏは、たとえば
アルキルベンゼンスルホニル基（トルエンスルホニル等
）又はアルキルアルコキシベンゼンスルホニル基（４−
メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル
基）の如き各種置換ベンゼンスルホニル基であり；ＰＩ
は好ましくは第３級ブチル基又は第３級アミル基であり
（これらの基はＴ［Ｈに対して安定である）；Ｐは、た
とえばアルキル基（第３級ブチル基又は第３級アミル基
等）又はアラルキル基（ベンジル基゛　　又は置換ベン
ジル基等）の如き末端カルボキシル基の一般的な保護基
のいずれかである。
縮合反応（その進行はｔｌｃによって容易に監視される
）が完了したところで、得られた生成物を常法によって
回収する。特に、本発明の製法の好適な具体例によれば
、カップリング剤としてカルボジイミドを使用する場合
には、回収にあたり、生成した尿素の濾過による分離、
溶媒の留去、残渣又はその溶液の弱塩基性溶液及び弱酸
性溶液による洗浄及び得られた中間体の結晶化又はクロ
マトグラフィーによる精製を行なう。
ついで、このようにして得られた生成物とＴＩＢとの反
応を、イタリー国特許出願Ｎｏ、　２５７５５　Ａ／８
１に記載の方法に従って行なう。水及びたとえばジメチ
ルホルムアミド、アセトニトリル等の如き不活性溶媒の
混合物を反応溶媒として、アミド物質とわずかに過剰量
のＴＩＢとを反応させる。反応は、不活性ガス（代表的
には窒素）を反応混合物内で発泡させ、反応の進行をｔ
ｌｃで監視して行なわれる。
アミド−アミン変換反応が完了したところで、有機溶媒
を留去して、生成物を凍結乾燥によって容易に回収でき
る。
必要であれば、酸の活性エステル（たとえばｐ−ニトロ
フェニルエステル、２，４．５−　）リクロロフェニル
エステル等）を使用して、得られた生成物のアシル化を
行なう。
保護基の除去は、各保護基について当分野で公知の方法
によって実施される。一般に、チロシンにおける水酸基
の保護のための第３級ブチル基又は第３級アミル基、リ
シン残基におけるε−アミノ基の保護のためのカルボキ
シル基、第３級ブトキシカルボニル基又はベンジルオキ
シカルボニル基、及びアルギニンにおけるグアニジノ基
の保護のためのベンゼンスルホニル基の如き一般的な保
護基が使用されている場合には、これらの保護基は、少
量のエタンジチオール、アニソール、チオアニソール、
又はレゾルシノール（生成するカルボカチオンを補集す
るためのスカベンジャーとして使用）の存在下、たとえ
ば酢酸、トリフルオル酢酸又はトリフルオル酢酸−トリ
フルオルメタンスルホン酸混合物で希釈した塩酸によ１
．る酸性溶媒中での酸分解によって容易に除去される。
脱保護化工程の終了後、一般式（Ｉ）の所望化合物（そ
のままの状態のもの、又は相当する付加塩）を常法によ
って回収、精製する。
一般式（Ｉ）におけるＲが水素であり、Ｒ１が−ＯＲ”
である化合物が望まれる場合には、前述した如く、連続
するアミド−アミン変換工程及び脱保護化工程の順序を
逆転させることが好ましい。しかじながら、これらの工
程を実施する一般的方法は前記と同じである。
このようにして得られた一般式（Ｉ）の化合物の均質性
をｔｌｃ及びＨＰＬＣでアッセイし、純度をアミノ酸分
析及びＮＭＲスペクトル分析によって測定する。
一般式（Ｉ［）及び（ＩＩＩ）で表される原料化合物は
、市販生成物から容易に調製され、あるいはペプチド合
成及び有機化学の分野で公知の方法によって容易に調製
される。
特に、一般式（ＩＩ）で表されるフラグメントは、ペプ
チド合成において公知の方法に従って、一般式（■） １１Ｊ−ＣＯ−ＣＨ−Ｎｕｔ （ＣＨ＊）ｓ Ｈ （式中　ｐＧはグアニジノ基の保護基である）で表され
るアミド及び一般式（ＩＸ） ＥｔＯ−ＣＯ−ＣＨ−Ｃ０ＯＨ （ＣＨＩ）４ ＨＰＬ （式中、ＰＬはアミノ基の好適な保護基である）で表さ
れる２−置換マロン酸ヘミエステルを原料として容易に
調製される。
なお、一般式（■）の化合物は、適当にグアニジノ基及
びアミノ基を保護した相当・するアミノ酸から、アミド
を生成し、アミノ基を脱保護化することによって調製さ
れ、一方、一般式（ＩＸ）の化合物は、マロン酸ジエチ
ルから、２位に置換基を導入し、ついでジエステルの部
分的加水分解を行なうことによって調製される。
一般式（ＩＩＩ）で表されるペプチドフラグメントを調
製する方法は、オリゴペプチドの合成で従来から使用さ
れている方法である。
本発明の化合物は２種類の異性体形状で存在しうる。
実際、構造式（Ｉ）中には、少なくとも３個の不斉炭素
が存在するが、末端アミノ酸（Ａｓｐ、　Ｖａｔ。
Ｔｙｒ）は天然形又はＬ形であり（フラグメント（Ｉ）
は好適に選択したし一アスパラギン酸、Ｌ−バリン、及
びＬ−チロシン誘導体から調製される）、ｇｅＩｌｌ−
ジアミノ炭素原子の絶対配置も、一般式（■）のフラグ
メントがＤ−アルギニンを原料として得られるため一定
である。
最後に、マロニル不斉炭素原子はＲ−又はＳ−配置を持
ちうる。従って、一般式（Ｉ）の化合物は、純粋な各異
性体として又は各種割合の異性体混合物として得られ、
使用される。一般式（Ｉ）の化合物の調製法がジアステ
レオ異性体の混合物を生成するものである場合、必要で
あれば、公知の分割法に従い、かかる混合物を単一のジ
アステレオ異性体に分離することもできる。
下記の実施例は本発明のいくつかの代表的な化合物及び
その調製法を詳述するものであるが、本発明の精神を限
定するものではない。
実施例１ 計ｉ彫− 町！− −ＮＨ−ＣＩ−Ｃｏ−ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＲ”Ｉ ギ酸アンモニウム（０，７３９，１１，７ミリモル）の
メタノール（Ｉ０ｉ＋１２）溶液及び木炭に担持したパ
ラジウム（Ｉ，５９）を、［ニュー・アスベクツ・イン
・フィジオロジカル・アンチツモール・サブスタンシー
ズ（Ｎｅｗ　Ａｓｐｅｃｔｓ　ｉｎ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ　Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　５ｕｂ−ｓｔａｎｃ
ｅｓ）ｊ　Ｋａｒｇｅｒ、　Ｂａ５ｅｌ　（Ｉ１８５）
、　ｐ３３に記載された方法に従って調製したし一チロ
シンー〇−第３級ブチルエーテル第３級ブチルエステル
（Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）ＯＢｕｔＸ２９．４，６８ミリモ
ル）のメタノール（２０ｊ１１２）溶液に添加した。得
られた溶液を２５℃に約２５分間維持した。ついで、シ
ーライト上で反応混合物を濾過し、溶媒を留去して、透
明な油状物を得た（Ｉ．Ｂｙ、８７％）。
Ｒｆ（ＣＭＡ、　８５：１０：５容量）　＝　０．２（
ただし、ＣＭＡ＝クロロホルム：メタノール：酢酸）１
−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０，６
５２ｙ、４．４７ミリモル）のジメチルホルムアミド（
ＤＭＦ）（５村）溶液及びジシクロへキシルカルボジイ
ミド（ＤＣＣＸｏ、９２１９、４．４７ミリモル）　の
ＤＭＦ　　（５ｚＱ）　　溶液を、０℃に冷却しかつ撹
拌しながら　Ｈ（Ｘ−ベンジルオキシカルボ＝　ルー　
Ｌ−バリ：／（Ｚ−ＶａｌＸｌ、１２９、４　、４７　
ミＩ７モル）のＤＭＦ（２５１ｆ２）溶液に添加した。
３０分後、水浴を取去り、さらに３０分間撹拌を続けた
。ついで、前記工程１）で得られた化合物（Ｉ，１１ｇ
、４．０６ミリモル）及びＮ−メチルモルホリン（ＮＭ
Ｍ）　（０、４１ｇ、４　、０６　ミＩＩモル）のＤＭ
Ｆ　（Ｉ５１１２）溶液を添加した。混合物を室温に１
時間静置した。生成したジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ
）を炉去し、ろ液を蒸発乾固させた。
得られた油状物を酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）　（５０１
１２）で抽出し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液と共に
２０分間撹拌した。有機相を分離し、連続して５％炭酸
水素ナトリウム水溶液、水、０．１１１　ＨＣｌ２及び
最後に水で順次洗浄した。有機溶媒を留去することによ
り、粗製の固状残渣が得られた。この固状残渣を少量の
温いイソプロピルエーテルに溶解し、冷却させて結晶化
させた。透明な結晶性生成物が得られた（Ｉ．６９．７
５％）。
＋１１．ｐ、　　　　　　　　　　　１１４−５℃Ｒｆ
（ＣＭＡ、　８’５：１０：５容量）０．８３）Ｎａ−
（Ｎ（ｘ−ベンジルオキシカルボニル）−アスパルチル
（−第３級ブチル）−バリル−チロシン−〇−第３級ブ
チルエーテル第３級ＨＯＢｔ　（０，４３４９，２，９
７ミリモル）のＤＭＦ　（３１Ｑ）溶液及びＤＣＣ（０
，６１３９、２，９７ミリモル）のＣＨ，Ｃム　（Ｉ０
ｘｆ２）溶液を、０℃に冷却しかつ撹拌しながら、Ｎ　
−ヘノジルオキシカルボニルアスパラギン酸（β−第３
級ブチルエステル）（Ｚ　−Ａｓｐ（ＯＢｕ’）　−０
ＨＸ１．０６９．２．９７ミリモル）のＣＬＣム（２０
ｘｆ２）溶液に添加した。３０分後、温度を室温に上昇
させ、撹拌をさらに３０分間続けた。
ＨＣＯＯＨ−Ｈ−Ｙａｌ　−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）　−０
Ｂｕｔ（前記工程２）で調製した中間体から、ギ酸アン
モニウム及びパラジウムを使用した接触水素化分解によ
りベンジルオキシカルボニル基を除去して得られたもの
）（Ｉ，２６９、２，７ミリモル）及びＮＭＭ　　（０
，２０７ｇ、　２，７ミリモル）　のＤＭＦ（Ｉ５１Ｑ
）溶液を混合物に添加した。反応混合物を室温で２４時
間撹拌し、ついで生成したＣＣＵを炉去し、減圧下で再
度溶媒を留去した。残渣をＡｃ０Ｅｔ（５０１１２）で
抽出し、飽和ＮａＨＣＯｓを添加し、混合物を２０分間
撹拌した。水相を除去し、有機相を飽和ＮａＨＣＯｓ、
水、０．１Ｎ　ＨＣｌ２及び水で順次洗浄した。有機相
をＭｇ５Ｏａにより乾燥させ、濃縮乾固させた。
生成物を酢酸エチル／ヘキサン混合物から結晶化させた
ところ、微小結晶性の透明な生成物が得られた（Ｉ．７
ｇ、９０％）。
ｍ、ｐ、　　　　　　　　　　　１８４−８５℃Ｒｆ（
ＣＭＡ、　８５：１０：５容量）０．９１−ヒドロキシ
ベンゾトリアゾールアンモニウム塩（ＨＯＢｔ　−Ｎ）
１３０３．０９、１６．４５ミリモル）及びＤＣＣ（３
，３８９，１６，４５ミリモル）のＤＭＦ（Ｉ０ｆｆｉ
（２）溶液を、０℃に冷却しかつ撹拌しながら、Ｎ“−
フルオレニルメトキシカルボニル−ＮＧ−（４−メトキ
シ−２，３，６−トリメチル）ベンゼンスルホニル−Ｄ
−アルギニン（Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−０Ｈ
Ｘ１０ｆ、　１６．４５ミリモル）のＤＭＦ（８０ｉＱ
）ｌこ添加した。
１時間後、温度を室温に上昇させ、撹拌をさらに６０分
間続けた。ついで、生成したＤＣＵを戸数し、ＤＭＦ（
Ｉ０ｆｆ１２）で処理した。ＤＭＦ洗液をろ液に併わせ
た。
溶媒を留去することによって油状残渣を得た。この油状
残渣をＡｃ０Ｅｔで抽出し、まず５％炭酸水素ナトリウ
ム溶液で洗浄し、ついで飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄
した。
有機相をＭｇ５Ｏ＋により乾燥し、濃縮乾固した。
得られた固状残渣をエチルエーテル（Ｉ００１１２）と
共に摩砕して、白色の固状物（９，２９，９３％）を得
た。
ｔｐ、１６８−７２℃ クロマトグラフィー分析（ｔｉｃ及び肝ＬＣ）では、不
純物が存在しないことを示した。
前記工程４）で得られた化合物（９９，１５，５ミ’Ｊ
モル）のＤＭＦ−ジエチルアミン混合物（８０：２０．
１００１（２）における懸濁液を１時間撹拌した。つい
で、減圧下、溶媒を留去し、残渣をＡｃ０Ｅｔ（Ｉ００
ｘＩ２）に取り、希塩酸で抽出した（５０峠Ｘ３）。水
性抽出液を集め、他のＡｃ０Ｅｔで洗浄し、繰返し凍結
乾燥させて無着色のフレーク状生成物の得た（４．５９
．８０％）。この生成物は明確に認識できる融点を示さ
ない。クロマトグラフィー分析では不純物が存在しない
ことを示した。
窒素雰囲気下、金属ナトリウム（０，２８９，０，０１
２モル）を無水エチルアルコール（ＥｔＯＨＸ９ｍ１２
）に溶解させた。混合物を６０℃に加熱し、ついでマロ
ン酸ジエチル（３，８９，０，０２４モル）を添加した
。得られた溶液に、室温において、Ｎ−第３級ブトキシ
カルボニル−４−クロロ−ブチルアミン（２，５９，０
，０１２モル）を徐々に添加した。反応混合物を室温で
２時間、還流温度で６時間撹拌し、その後、Ａｃ０Ｅｔ
／水混合物（Ｉ／１、ｖ／ｖ；１００ｍ１２）に注加し
た。分離した有機相を繰返し水で洗浄し、ＭｇＳＯ４に
より乾燥させた。
減圧下、１００℃で溶媒を留去して、粗製の油状生成物
を得た。ついで、逆転相ＨＰＬＣにより、ＲＰ−１８カ
ラムを使用し、ＣＨ，ＣＮ　（４５容量％）を添加した
水相で溶出して精製した。このようにして、所望の化合
物Ｑ、３１ｇ）が純粋な生成物として得られた。
ＫＯＨ（９，９７ミリモル）ノＥｔＯＨ（Ｉ０ｍ１２）
溶液を、上記工程で得られた化合物（３，４８９、ｌ０
９５ミリモル）のＥｔＯＨ（Ｉ５１１２）懸濁液に滴加
した。
１６時間後、反応混合物を水に溶解し、エチルエーテル
で抽出した。ついで、水相をＩＮ　ＨＣｌ２でｐＨ３と
し、再びＡｃ０Ｅｔで抽出した。有機抽出液を併わせ、
飽和塩化ナトリウムで洗浄し、Ｍｇ５Ｏ＊により乾燥さ
せた。
減圧下、溶媒を留去することによって、所望の生成物を
透明な油状物として得た。ＨＰＬＣ分析は、不純物が存
在しないことを示した。ＮＭＲスペクトルによって構造
を確認した。
ＨＯＢｔ（０，１５９ｉＦ、１．１ミリモル）のＤＭＦ
（３１１２）溶液及びＤＣＣ（０，２０４９，１，０ミ
リモル）のＤＭＦ（５１１２）溶液を、０℃に冷却しか
つ激しく撹拌しながら、上記工程で得られた化合物（０
，３０？、１．０ミリモル）のＤＭＦ（Ｉ０ｚ１２）溶
液に添加した。
１時間後、温度を室温に上昇させ、撹拌をさらに６０分
間続けた。ついで、前記工程５）で得られた化合物（０
，５Ｇ２９．１．２ミリモル）及びＮＭＭ（Ｉ，１２０
？、１．２ミリモル）のＤＭＦ　（Ｉ０１１２）溶液を
添加した。４時間後、ｔｉｅによってＨＯ−＋５Ｌｙｓ
（Ｂｏａ）−０Ｅｔの消失を確認した後、反応混合物を
濾過し、ろ液を蒸発乾固させた。このようにして得られ
た残渣をＡｃ０Ｅｔに溶解し、有機溶液を連続して５％
炭酸水素ナトリウム、水、Ｏ，ｌＮ　ＨＣｌ２及び水で
順次洗浄した。有機溶液をＭｇＳＯ４により乾燥させ、
蒸発させた。得られた油状残渣をヘキサンと共に摩砕し
、白色の微粉体を得た（０．５４６９．６８％）。
ｍ、ｐ、　　　　　　　１４７−４９℃（ｄｅｃ、）ク
ロマトグラフィー分析（ｔｉｃ及びＨＰＬＣ）では、不
純物が存在しないことを示した。ＮＭＲ分析によって構
造を確認した。
ＫＯＨ（０，０１７ｘｙ、０．３０μモル）のＢｔＯＨ
（ｌａｙＱ）溶液を、０℃に冷却しながら、上記工程で
得られた化合物（Ｉ８０ｕ、０．２６ミリモル）のＥｔ
ＯＨ（８ｍ１２）溶液に２時間で添加し、ついで反応混
合物を１６時間撹拌した。混合物を水で希釈し、減圧下
での蒸発によって容量を低下させた。その後、エチルエ
ーテルで抽出しく３　ｘ　５０ｘｆ２）、水相に０．１
Ｎ　ＨＣｌ２を添加してｐＨ３とし、再度Ａｃ０Ｅｔで
抽出した。有機抽出液を併わせ、ＭｇＳＯ４により乾燥
し、蒸発させた。油状残渣をエチルエーテルと共に摩砕
して、所望の化合物（０，１３０ｇ、収率８５％）をク
ロマトグラフィー（ｔｉｅ及び）ＩＰＬＣ）において純
粋な生成物として得た。ＮＭＲ分析によって、構造を確
認した。
ＨＯＢｔ（３９ｍ？、　０．２６ミリモル）及びＤＣＣ
（５５ｍｙ、　０．２６ミリモル）のＤＭＦ（４ｘυ溶
液を、０℃に冷却しながら、上記工程で得られた化合物
（Ｉ７０肩９．０．２６ミリモル）のＤＭＦ（８ｘＩ２
）溶液に添加した。６０分後、温度を室温に上昇させ、
撹拌をさらに６０分間続けた。
ついで、Ｎ　−アスパルチル（β−第３級ブチルエステ
ル）バリル−チロシル−〇−第３級ブチルエーテル第３
級ブチルエステル（Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）　−Ｖａｌ
−Ｔｙｒ（ＯＢｕ　）−０ＢｕｔＸ前記工程３）で調製
した化合物から、ギ酸アンモニウム及びパラジウムを使
用する接触水素化分解を介してベンジルオキシカルボニ
ル基を開裂することによって得られたもの）（２４３Ｍ
ｇ、　　０．３９ミリモル）及びＮＭＭ（３９１９、０
，３９ミリモル）を上記溶液に添加した。
１６時間後、ＤＣＵを炉去し、Ｐ液を蒸発乾固させた。
得られた固状残渣をヘキサンと共に摩砕して、白色の微
粉体を得た。得られた生成物を洗浄溶液中に懸濁化させ
ることにより、塩基溶液（５％炭酸水素ナトリウム）及
び酸溶液（０，１Ｎ　ＨＣｌ２）での洗浄を行なった。
このようにして、所望生成物（２５０１１９，７２％）
が得られた。
Ｉｆ）　［ｇＡｒｇ’、（Ｒ，Ｓ）ｍＬｙｓ”コＴＰ５
−酢酸塩上記工程で得られた化合物（３００１９）を、
ＣＨｓＣＮ（８ｍ１２）　−Ｈ，０（Ｉ０ｍ１２）混合
物に溶解させた。ついで、窒素雰囲気下、ＴＩＢ（Ｉ２
０ｕ）のＣＨｓＣＮ（２ｘＩ２）溶液をこれに添加し、
得られた混合物を３時間撹拌した。
反応混合物を蒸発乾固させ、黄色の油状物を得た。アミ
ノ酸分析により、アルギニンアミドがｇｅｆｆｌ−ジア
ミノ基に変換されていることを確認した。
得られた粗製油状物（Ｉ５０１１１２）を、エタンジチ
オール−トリフルオル酢酸−トリフルオルメタンスルホ
ン酸混合物（Ｉ０：８９：ｌＸ１００ｍ１２）ニ溶解す
セ、約２０分間反応させた。得られた混合物にトリエチ
ルアミン（Ｉ，５ｘ１２）を添加し、その後、窒素流下
で蒸発乾固させた。
残渣をエチルエーテル及び水の間で分配させた。
有機相を分離し、水で完全に抽出処理した。水相を併わ
せ、エタンジチオールが消失するまでエチルエーテルで
抽出し、その後、繰返し凍結乾燥した。ＣＭ　−５ｅｐ
ｈａｄｅｘ　Ｇ　−２５カラム（Ｉ５Ｘ　ｏ、９ｃｘＨ
ｚｙ）を使用し、０．１Ｍから０．６Ｍまでのリニアグ
ラディエンド酢酸アンモニウム（ｐＨ４，４；流速４２
酎／分）で溶出するイオン変換クロマトグラフィーによ
って生成物を酢酸付加塩として単離した。所望の生成物
を含有するフラクションを集め、減圧下で濃縮し、凍結
乾燥した。固状物４５ａ＋ｙ　（収率：理論値の４２％
）を得た。
クロマトグラフィー及びＮＭＲ分析によって、生成物が
純粋であること及びその構造を確認した。
実施例２ Ａ創叉 Ａｓｐ（ＯＢｕ　）−０Ｂｕｔ） ｔ ＨＯＢｔ（２８ｘｙ、　０．２０ミリモル）及Ｕ　ＤＣ
Ｃ（４０ｘｙ、　０．２０ミリモル）のＤＭＦ（５ＲＱ
）溶液を、前記実施例１の工程９）で得うレタ化合物（
Ｉ３０ｘ９．０．２０ミリ＋ル）ノＤＭＦ（５ｘ＆）溶
液に、０℃に冷却しかつ撹拌しながら添加した。
６０分後、混合物を室温とし、撹拌をさらに６０分間続
けた。ついで、ＮＭＭ　Ｃ２ＬＲ９，０，２１ミリモル
）及びＨ−Ａｓｐ（ＯＢｕ　　）　−０Ｂｕｔ（３９ｚ
９、０．２１ミリモル）のＤＭＦ（３３１１２）溶液を
添加した。
１６時間後、溶媒を除去して反応を停止させた。
得られた残渣をＡｃ０Ｅｔに取り、濾過した。ろ液に飽
和炭化水素ナトリウム溶液を添加し、混合物を３０分間
撹拌した。
有機相を分離し、連続して飽和炭酸水素ナトリウム溶液
、水、０．１Ｎ　ＨＣｌ２及び水で順次洗浄し、Ｍｇ５
Ｏａにより乾燥させた。
溶媒を留去することによって得られた残渣を、Ａｃ０Ｅ
ｔ／ヘキサンから結晶化させ、ｍ、ｐ、　＝　１５６−
５８℃及びＲｆ　（ＣＭＡ、　８５：１０：５容量）＝
０．４を有する所望の生成物（Ｉ４０ｚｇ）を得た。
上記工程で得られた化合物（ｓｏｘ９）を、エタンジヂ
オールートリフルオル酢酸−トリフルオルメタンスルホ
ン酸（Ｉ０：１１１９：ｌＸ２０ｍ１２）に窒素雰囲気
下で溶解させた。
１５分後、混合物を０℃に冷却し、トリエチルアミン（
０，３ＪＩ＋２）を添加した。窒素流下、混合物を蒸発
乾固させ、得られた残渣を水（２５１１Ｑ）に溶解させ
、エチルエーテル（Ｉ０１１１２）で抽出した。分離し
た有機相を水（２５ＲＱ）で抽出し、排出した。水性抽
出液を併わせ、エチルエーテルで洗浄しく２Ｘ　ｔｏｘ
ｆｆ）凍結乾燥して、白色の固状物（２５１１１９）を
得た。
Ｒｆ（ＢＰＡＷ、　１５：３：１２：１０；上澄相）＝
　０．２（シングルスポット） （ＢＰＡＷ＝ブタノール：ピリジン：酢酸：水）上記生
成物のＣＨｓＣＮ／　ＨｔＯ（５０／　５０．　ｖ／　
ｖＸ６ｍ１２）溶液にＩ、Ｉ−ビス−（トリフルオルア
セトキシ）ヨードベンゼン（３６ｍ９）を添加し、反応
混合物を４時間撹拌し、その後、乾固させた。残渣をＨ
ｔＯ（５０ｆｆ１２）に溶解させ、エチルエーテルで洗
浄した（３　ｘ　２５ｘＱ）。ついで、水相を希釈し、
凍結乾燥させた。ＣＭ　−５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　−２
５カラム（Ｉ５ｘ　Ｏ，９ｃｘ；２ｙ）を使用し、０．
１５Ｍから０．６Ｍまでのリニアグラディエンド酢酸ア
ンモニウム（ｐＨ４，４，８時間、流速４２ｘＱ１分）
で溶出するイオン変換クロマトグラフィーによって標記
生成物を単離した。６分毎にフラクションを集めた。
所望生成物を含有するフラクションを併わせ、減圧下で
濃縮し、凍結乾燥させた。このようにして、標記化合物
（Ｉ２ｊ！９）を白色の固状物として得た（収率４３％
）。
クロマトグラフィー（Ｒｆ（ＢＰＡＷ）　＝　０．１５
）及びＮＭＲ分析によって、生成物が純粋であること及
びその構造を確認した。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １　一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは水素又はアシル基であり、Ｒ＾１は−ＯＲ
    ＾２又は ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｒ＾２は、水素又は炭素数１〜６の直鎖状又
    は分枝状アルキル基、炭素数３〜６の直鎖状又は分枝状
    アルケニル基又はアルキニル基、又は炭素数７〜１２の
    アリール−アルキル基又はアルキル−アリール基である
    ）である］で表される化合物及び相当する薬学上許容さ
    れる酸−又は塩基付加塩。 ２　Ｒが水素であり、Ｒ＾１が−ＯＲ＾２又は▲数式、
    化学式、表等があります▼ （ここで、Ｒ＾２は水素である）である請求項１記載の
    化合物。 ３　Ｒ＾１が ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｒ＾２は水素である）である請求項２記載の
    化合物。 ４　［ｇＡｒｇ＾１，（Ｒ，Ｓ）ｍＬｙｓ＾２］ＴＰ５
    及びその付加塩から選ばれる請求項３記載の化合物。 ５　Ｒ＾１が−ＯＲ＾２である請求項２記載の化合物。 ６　［ｇＡｒｇ＾１，（Ｒ，Ｓ）ｍＬｙｓ＾２］ＴＰ５
    ＾１＾−＾３及びその付加塩から選ばれる請求項５記載
    の化合物。 ７　有効成分として請求項１記載の化合物を含有してな
    る医薬組成物。 ８　医薬品として使用される請求項１〜６のいずれかに
    記載の化合物。 ９　一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｐ＾Ｌは側鎖アミノ基の保護基であり、Ｐ＾Ｇ
    はグアニジノ基の保護基である）で表されるペプチドフ
    ラグメントを、一般式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＾３は−ＯＲ＾２（ここで、Ｒ＾２は前記請
    求項１で定義したものと同じ）、−ＯＰ（ここで、Ｐは
    カルボキシル保護基である）、又は式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｐは前記と同意義であり、Ｐ＾Ｉはチロシン
    水酸基の保護基である）で表される基である］で表され
    る化合物と縮合させ、このようにして得られた一般式（
    Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される中間体の末端アミド基を、Ｉ，Ｉ−ビス−ト
    リフルオロアセトキシヨードベンゼンによる処理を介し
    て第１級アミノ基に変化させて一般式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｐ、Ｐ＾Ｇ、Ｐ＾Ｌ、Ｒ＾８は前記と同意義で
    ある）で表される中間体を生成し、続いて末端アミノ基
    を任意にアシル化し、保護基を除去してなる請求項１記
    載の化合物の製法において、一般式（ I ）におけるＲ
    が水素であり、Ｒ＾１が−ＯＲ＾２である化合物が望ま
    れる場合、前記一般式（Ｖ）で表される中間体を、まず
    脱保護化して一般式（VII）▲数式、化学式、表等があ
    ります▼ で表される中間体を生成し、ついでＩ，Ｉ−ビス−トリ
    フルオロアセトキシヨードベンゼンによる処理を介して
    所望の一般式（ I ）で表される化合物に変化させるこ
    とを特徴とする、化合物の製法。 １０　一般式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼ 一般式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼ 一般式（VII） ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｐ＾Ｌは側鎖アミノ基の保護基であり、Ｐ＾Ｇ
    はグアニジノ基の保護基であり、Ｒ＾３は−ＯＲ＾２（
    ここで、Ｒ＾２は前記請求項１で定義したものと同じで
    ある）、−ＯＰ（ここで、Ｐはカルボキシル保護基であ
    る）、又は式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｐは前記と同意義であり、Ｐ＾Ｉはチロシン
    水酸基の保護基である）で表される基である］で表され
    る中間体。 １１　請求項１０記載のものにおいて、Ｐ＾Ｌが第３級
    ブトキシカルボニル基又は第３級アミロキシカルボニル
    基であり、Ｐ＾Ｇが任意に置換されたベンジルスルホニ
    ル基であり、Ｒ＾３は−ＯＲ＾２（ここで、Ｒ＾２は前
    記請求項１で定義したものと同じである）−ＯＰ（ここ
    で、Ｐは第３級ブチル基、第３級アミル基、ベンジル基
    又は置換ベンジル基である）、又は式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｐは前記と同意義であり、Ｐ＾Ｉは第３級ブ
    チル基又は第３級アミル基である）である、一般式（Ｖ
    ）、（VI）又は（VII）の中間体。
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