JPS63188392A - ３−クロロ乳酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、メタノール資化性を有しかつ３−クロロ−１
，２−プロパンジオールを３−クロロ乳酸に変換させる
能力を有する微生物の菌体もしくは菌体処理物を酵素源
として、３−クロロ−１，２−プロパンジオールから３
−クロロ乳酸を生成させこれを採取することを特徴とす
る３−クロロ乳酸の酵素的製造法である。

３−クロロ乳酸は、Ｌ−力ルニチンやβ−クロロアラニ
ンなど種々の有用な化合物の合成原料である。

従来の技術 従来、トリコスポロン属、ゲオトリクム属、エンドマイ
セス属、ハンセヌラ属、キャンディダ属、スポリディオ
ポリス属、ロデロマイセス属、ピチア属微生物の菌体を
特徴とする特許−クロロ−１，２−プロパンジオールか
らの３−クロロ乳酸の製法が知られている〔ジャーナル
・オブ・ファーメンティジョン・テクノロジー（Ｊ、Ｆ
ｅｒｍｅｎｔ、Ｔｅｃｈｎｏｌ、）　６４　、　Ｎｏ、
３　、２５１−２５４、（１９８６）　）。

発明が解決しようとする問題点 上記した３−クロロ乳酸の製造法において、反応速度、
反応収率はまだまだ満足すべきものではなく、さらにす
ぐれた技術の開発が求められている。

問題点を解決するだめの手段 本発明者は、新たに、３−クロロ乳酸を生成する能力を
有する微生物を求めて検索した結果、メタノール資化性
を有する微生物の中に３−クロロ乳酸生成能を有する微
生物が存在することを見出した。

以下に、本発明の詳細な説明する。

本発明は、メタノール資化性を有しかつ３−クロロ−１
，２−プロパンジオールを３−クロロ乳酸に変換させる
能力を有する微生物の菌体もしくは菌体処理物を３−ク
ロロ−１，２−プロパンジオールに作用させ、反応液中
に３−クロロ乳酸を生成蓄積させ、これを採取すること
を特徴とする３−クロロ乳酸の製造法を提供する。

本発明において用いる微生物きしては、メタノール資化
性を有しかつ３〜クロロ−１，２〜プロパンジオールを
３−クロロ乳酸に変換する能力を有するものであればい
ずれも使用できる。

例えばシュードモナス属、アクロモバクタ−属、キャン
ディダ属、ハイホミクロビウム属、クレブシエラ属、メ
タノモナス属、メチロバクター属、メチロバクテリウム
属、メチロコッカス属、メチロモナス属、メチロファガ
属、ミクロサイクラス属、パラコッカス属、プロトモナ
ス属、ピチア属、アースロバクター属、ノカルディア属
、プロタミノバクタ−属などに属するメタノール資化性
菌が使用でき、具体的には、下記の菌株があげられる。

シュード壬ナス・インスエタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
　　１ｎｓｕｅｔａ）ＡＴＣＣ２１２７６シｌ−ド毫ナ
ス・エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ｓｐ、）Ｎ
ＣｒＢ９１３３ハイホミクロビウ上・力Ｌｆｉ−（Ｈｙ
ｐｈｏｍｊｃｒｏｂ］ｕｔｎ　　ｖｕｌｇａｒｅ）ＤＳ
Ａｌ１５６４クレブシェラ・エスピー（Ｋｌｅｂｓｉｅ
ｌｌａ　　ｓｐ、）　　Ｎα１０１　　ＦＢＲＭ　　Ｐ
−２４９８メタＲｆス・ｊチロポ５（Ｍｅｔｈａｎｏｍ
ｏｎａｓ　　ｍｅｔｈｙｌｏｖｏｒａ）ＡＴＣＣ２１３
６９メチロモナス・サラシカ（Ｍｅｔｈｙｌｏｍｏｎａ
ｓ　　ｔｈａｌａｓｓｉｃａ）＾ＴＣＣ３３１４６メチ
ｎ１ｙ’Ｂ・’２リナ（Ｍｅｔｈｙｌｏｐｈａｇａ　　
ｍａｒｉｎａ）ＡＴＣＣ３５８４２ミクａサイクラス・
エブルネウス（Ｍｉｃｒｏｃｙｃｌｕｓ　　ｅｂｕｒｎ
ｅｕｓ）ＡＴＣＣ２１３７３プロトモナス・エクストロ
クｘンス（Ｐｒｏｔｏｍｏｎａｓ　　ｅｘｔｒｏｑｕｅ
ｎｓ）口５Ｍ１３３７ビチア・バストリス（Ｐｉｃｈｉ
ａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ）ＡＴＣＣ２８４８５これらの
微生物の菌体を培養するための培地としては、炭素源、
窒素源、無機イオンなどを程よく含有する培地ならば天
然培地９合成培地のいずれも用いることができる。炭素
源とじては、メタノール、エタノール、１．２−プロパ
ンジオールなどのアルコール類、グルコース、シューク
ロース、廃糖蜜、デンプン、デンプン加水分解物などの
炭水化物、ギ酸、酢酸、乳酸、フマール酸、マレイン酸
などの有機酸類などが適宜使用される。窒素源としては
、アンモニアガス、アンモニア水、アンモニウム塩、尿
素などが用いられる。無機イオンとしてはマグネシウム
、カルシウム、燐酸、カリウム、鉄、マンガンなどのイ
オンが用いられる。

培養は好気的条件下で、ｐＨ４〜８、温度２５〜４０℃
の範囲に保ちながら、１〜１０日間行う。得られる菌体
はそのままでも反応に使用できるし、さらに該菌体を種
々処理して得られる処理物を反応に用いてもよい。

菌体処理物としては、菌体の機械的摩砕処理物、超音波
処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理物、乾
燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画、菌体
および前記菌体処理物の固定化物などが用いられる。

反応は、上記のようにして得られる菌体またはその処理
物を、３−クロロ−１，２−プロパンジオールを含有す
る水溶液中で好気的に反応させることによって行われる
。

反応に使用する３−クロロ−１，２−プロパンジオール
は、１〜１００　ｇ／βの濃度範囲で添加される。

作用条件としては、温度２０〜７０℃、好ましくは２０
〜４５℃、ｐＨ５〜１１、好ましくは７〜８で、５〜５
０時間反応を行う。

このようにして反応液中に３−クロロ乳酸が生成する。

反応液から３−クロロ乳酸を回収する方法としては溶媒
抽出法、イオン交換樹脂法、沈澱法などが用いられる。

以下に実施例を示す。

実施例１ 極東粉末ブイヨン２％、酵母エキス０．５％、寒天１．
５％の組成の培地を１２０℃で２０分間加熱殺菌後、メ
ンブレンフィルター（ポアサイズ０．４５μ）で除菌し
たメタノールを１％添加して固化させて調製した斜面寒
天培地に、シュードモナス　エスピー　ＮＣｌ３９１３
３を塗抹して２８℃で４８時間静置培養して得られる菌
体を種培養として用いた。

得られた菌体を１エーゼずつ、上記の組成の培地から寒
天を除いた液体培地３　Ｑ＋ｎｌを含む３００１１１１
容三角フラスコに接種して、２８℃で２４時間、２１Ｏ
ｒｐｍの振盪条件下で振盪培養した。この培養液６０ｍ
１を、下記の組成の生育培地５０３ｍｌを含んだ突起付
き２β三角フラスコに接種して、これに上記と同様にし
て除菌したメタノール１％を添加して、２１Ｏｒｐｍ。

２８℃で振盪培養し、培養２４時間目にさらにメタノー
ル１％を添加して合計７２時間振盪培養した。生育培地
の組成は次の通りである。

（ＮＨ４）２ＳＯ４０，４％、　ＫＨ２Ｐ口、　０．１
％　、　Ｋ、ＨＰｏ、　　０．７％　、Ｆｅ５０＜４Ｈ
２０１０ｍｇ／ｍｌ　、ｕｎｓｏ４・４Ｈ２０８ｍｇ／
Ｌチアミン・１Ｉｃｉ’　　１ｍｇ＃！、ビオチンｌｈ
ｇ／ｊ！、ＮａＣβ０．旧％、カザミノ酸０．０５％、
ｐＨ７，２培養終了後、生理食塩水を用いて１回菌体を
遠心洗浄して菌体を集菌し、得られた菌体を一２０℃で
凍結保存した。この菌体を、融解後、湿菌体重量として
２５ｍｇ／ｍ＋　になるように１０ｍ１の反応液（３−
クロロ−１，２−プロパンジオ−ルｌ　Ｏｍｇ／ｍｌを
含んだ０．１Ｍリン緩衝液、ｐ　Ｈ７，０＞に懸濁して
、２８℃、２１Ｏｒｐｍの振盪条件下で７２時間反応さ
せた。

生成した３−クロロ乳酸を酢酸エチルで抽出後、日立１
６３ガスクロマトグラフイーを用いて定量した結果、反
応液１ｍｌ当り２．１ｍｇの３−クロロ乳酸の生成が認
められた。対照として、３−クロロ−１，２−プロパン
ジオール無添加で同様に実施した反応液中の３−クロロ
乳酸の定量値は反応液１ｍｌ当り０．０１ｍｇ以下であ
った。

発明の効果 本発明によれば、３−クロロ−１，２−プロパンジオー
ルを微生物を用いて酵素的に変換して、３−クロロ乳酸
を収率よく製造することができる。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）メタノール資化性を有しかつ３−クロロ−１，２
   −プロパンジオールを３−クロロ乳酸に変換させる能力
   を有する微生物の菌体もしくは菌体処理物を３−クロロ
   −１，２−プロパンジオールに作用させ、反応液中に３
   −クロロ乳酸を生成蓄積させ、これを採取することを特
   徴とする３−クロロ乳酸の製造法。
2. （２）該微生物が、シュードモナス属、アクロモバクタ
   ー属、キャンディダ属、ハイホミクロビウム属、クレブ
   シエラ属、メタノモナス属、メチロバクター属、メチロ
   バクテリウム属、メチロコッカス属、メチロモナス属、
   メチロファガ属、ミクロサイクラス属、パラコッカス属
   、プロトモナス属、ピチア属、アースロバクター属、ノ
   カルディア属およびプロタミノバクター属から選ばれる
   属に属することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
   の製造法。