JPS63149561A - プロスタグランデインの分析方法 - Google Patents
プロスタグランデインの分析方法Info
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- JPS63149561A JPS63149561A JP29485886A JP29485886A JPS63149561A JP S63149561 A JPS63149561 A JP S63149561A JP 29485886 A JP29485886 A JP 29485886A JP 29485886 A JP29485886 A JP 29485886A JP S63149561 A JPS63149561 A JP S63149561A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、プロスタグランディンの分析方法に係り、特
に液体クロマトグラフを用いた生体試料中のプロスタグ
ランディンの分析方法に関する。
に液体クロマトグラフを用いた生体試料中のプロスタグ
ランディンの分析方法に関する。
プロスタグランディンは、生体機能をコントロールする
重要なホルモン様機能を有する物質であり、これを含有
する生体組織又は生体液を処理して液体クロマトグラフ
で分析することが知られている。
重要なホルモン様機能を有する物質であり、これを含有
する生体組織又は生体液を処理して液体クロマトグラフ
で分析することが知られている。
特開昭６１−２０２１６４には、生体試料に、あらかじ
めｍｍした９−アンスリルジアゾメタンＣ以下ＡＤＡＭ
と略称する）を作用させてプロスタグランディン（以下
ＰＧと略称する）を誘導体化した後、各種の前処理を施
してから液体クロマトグラフで分析する方法が示されて
いる。
めｍｍした９−アンスリルジアゾメタンＣ以下ＡＤＡＭ
と略称する）を作用させてプロスタグランディン（以下
ＰＧと略称する）を誘導体化した後、各種の前処理を施
してから液体クロマトグラフで分析する方法が示されて
いる。
従来は、ＰＧを含む試料と反応させる前にＡＤＡＭを精
製していた。というのは、市販されているＡＤＡＭは多
くの共存物質を有しており、そのままでは分析試薬とし
て適用できないからである。一方、ＡＤＡＭ自体は不安
定で変質しやすく、試料中のＰＧも急速な経時変化を起
こしやすいという問題がある。しかし、ＰＧがＡＤＡＭ
と反応して生じた誘導体は、経時的に安定であり、蛍光
性を有するので、クロマトグラフ分針によって蛍光を検
出して定量することができるので、実用的に利用されて
いる。
製していた。というのは、市販されているＡＤＡＭは多
くの共存物質を有しており、そのままでは分析試薬とし
て適用できないからである。一方、ＡＤＡＭ自体は不安
定で変質しやすく、試料中のＰＧも急速な経時変化を起
こしやすいという問題がある。しかし、ＰＧがＡＤＡＭ
と反応して生じた誘導体は、経時的に安定であり、蛍光
性を有するので、クロマトグラフ分針によって蛍光を検
出して定量することができるので、実用的に利用されて
いる。
ＡＤＡＭｔ−ＰＧとの反応の前に精製すると、精製操作
の間に変質してしまうという問題があった。
の間に変質してしまうという問題があった。
さらに従来の方法によれば、不純物を十分に除去しきれ
ないという問題があった。
ないという問題があった。
本発明の目的は、ＡＤＡＭの利用効率が高く、ＰＧの変
性も少なくできるＰＧの分析方法を提供することにある
。
性も少なくできるＰＧの分析方法を提供することにある
。
本発明は、プロスタグランディンを含む試料に酢酸エチ
ルを溶媒とした９−アンスリルジアゾメタン溶液を混合
して上記プロスタグランディンを誘導体化し、この液の
溶媒を揮散せしめて除去した後、残留物をメタノール又
はアセトニトリルで溶解し、この溶解液を冷却して不溶
物を析出させ、この析出不溶物を分別除去した液の溶媒
を揮散せしめて除去し、残留物を酢酸エチルで溶解し、
この溶解液をゲルパーミェーションカラムを通して低分
子物質を分離除去し、上記ゲルパーミェーションカラム
からの回収液を逆相分配カラムを備えた液体クロマトグ
ラフで分析することを特徴とする。
ルを溶媒とした９−アンスリルジアゾメタン溶液を混合
して上記プロスタグランディンを誘導体化し、この液の
溶媒を揮散せしめて除去した後、残留物をメタノール又
はアセトニトリルで溶解し、この溶解液を冷却して不溶
物を析出させ、この析出不溶物を分別除去した液の溶媒
を揮散せしめて除去し、残留物を酢酸エチルで溶解し、
この溶解液をゲルパーミェーションカラムを通して低分
子物質を分離除去し、上記ゲルパーミェーションカラム
からの回収液を逆相分配カラムを備えた液体クロマトグ
ラフで分析することを特徴とする。
本発明では、冷却保存してあったＡＤＡＭを最初に精製
するのではなく、精製前にまずＰＧと反応させＰＧの誘
導体を形成する。この反応時にはＡＤＡＭ溶液の溶媒と
して酢酸エチルを使用し。
するのではなく、精製前にまずＰＧと反応させＰＧの誘
導体を形成する。この反応時にはＡＤＡＭ溶液の溶媒と
して酢酸エチルを使用し。
ＰＧを抽出させる。
次に、溶媒除去した残留物をメタノール又はアセトニト
リルで溶解した液を低温（−２０’Ｃ）に冷却して夾雑
物を析出させ、析出物を遠心分離法又は濾過法によって
除去する。これによって高分子不純物が除去される。
リルで溶解した液を低温（−２０’Ｃ）に冷却して夾雑
物を析出させ、析出物を遠心分離法又は濾過法によって
除去する。これによって高分子不純物が除去される。
次いで、再び溶媒除去し、残留物酢酸エチルで溶解した
液をゲルパーミェーションカラム（以下ＧＰＣカラムと
称す）に通し、初期に溶出する溶は排出し、残りの溶出
液を回収する。この回収液では低分子不純物が除去され
ている。かくして得たＰＧ誘導体を含む液を逆相分配カ
ラムを備えた液体クロマトグラフで分析する。
液をゲルパーミェーションカラム（以下ＧＰＣカラムと
称す）に通し、初期に溶出する溶は排出し、残りの溶出
液を回収する。この回収液では低分子不純物が除去され
ている。かくして得たＰＧ誘導体を含む液を逆相分配カ
ラムを備えた液体クロマトグラフで分析する。
溶媒として酢酸エチルを用いることにより、通常の溶媒
を用いる場合に比べて、ＡＤＡＭの変性を低減でき、水
溶性成分との分離性も良くなる。
を用いる場合に比べて、ＡＤＡＭの変性を低減でき、水
溶性成分との分離性も良くなる。
本発明の一実施例の分析操作を第１図に示す。
生体試料には、蛋白質を除くための前処理を施す。
血清試料または生体組織の１ｍ１２を限外濾過法にて処
理し、濾液を回収する。この限外濾過器には、アミコン
社製のセントリーフローＣＦ ２５を用いた。
理し、濾液を回収する。この限外濾過器には、アミコン
社製のセントリーフローＣＦ ２５を用いた。
次に、ＰＧを含む濾液１ ｍ Ｑに、酢酸エチルで溶解
したＡ Ｄ Ａ Ｍ試薬液（０，１％）１ｍ＋２を加え
て３分間振盪し、次いで遠心分離器に設置して１０００
Ｇの重力にて遠心分離する。ＡＤＡＭとの反応によって
生成されたＰＧ誘導体は、酢酸エチル液層内に溶解され
ている。この液層を試験管内に取り出し、温浴上で窒素
ガスを通気させながら、溶媒を揮散せしめ除去する。
したＡ Ｄ Ａ Ｍ試薬液（０，１％）１ｍ＋２を加え
て３分間振盪し、次いで遠心分離器に設置して１０００
Ｇの重力にて遠心分離する。ＡＤＡＭとの反応によって
生成されたＰＧ誘導体は、酢酸エチル液層内に溶解され
ている。この液層を試験管内に取り出し、温浴上で窒素
ガスを通気させながら、溶媒を揮散せしめ除去する。
乾固された残留物を、１ｍｆｌのメタノール又はアセト
ニトリルに溶解した後、−２０℃にて１２時間冷却し、
高分子不純物を析出させる。次にこのけん濁液を遠心分
離器にかけて、析出物を分別し、液層を取り出す。この
場合、遠心分離の代りに濾過を行ってもよい。
ニトリルに溶解した後、−２０℃にて１２時間冷却し、
高分子不純物を析出させる。次にこのけん濁液を遠心分
離器にかけて、析出物を分別し、液層を取り出す。この
場合、遠心分離の代りに濾過を行ってもよい。
取り出された液を試験管内に取り出し、再度温浴上で窒
素ガスを通気させながら、溶媒を揮散せしめて除去し乾
固する。この残留物を１００μΩの酢酸エチルで溶解し
、この溶液をＧＰＣカラムに導入し、クロロホルムを溶
離液として分離し、ＧＰＣカラムからの初期の溶出液を
排出して残りを回収する。ＧＰＣカラムとしては１日立
化成社のＧＥＬＰＡＤＫ−Ｒ４２０を用いた。これによ
り、低分子不純物を除去する。
素ガスを通気させながら、溶媒を揮散せしめて除去し乾
固する。この残留物を１００μΩの酢酸エチルで溶解し
、この溶液をＧＰＣカラムに導入し、クロロホルムを溶
離液として分離し、ＧＰＣカラムからの初期の溶出液を
排出して残りを回収する。ＧＰＣカラムとしては１日立
化成社のＧＥＬＰＡＤＫ−Ｒ４２０を用いた。これによ
り、低分子不純物を除去する。
このようにして分取液として得られた液には。
従来のものより大幅に不純物が減少されている。
この分取液を逆相分配カラムを備えた液体クロマトグラ
フで分離分析し、誘導体化されたＰＧのクロマトグラム
を得る。検出器として蛍光光度計を用いる。
フで分離分析し、誘導体化されたＰＧのクロマトグラム
を得る。検出器として蛍光光度計を用いる。
第２図には従来法に基づいて得られたクロマトグラムを
示し、第３図には同じ試料について本発明に基づいて得
られたクロマトグラムを示す、ピーク１はトロンボキサ
ンＢｚ（ＴＸＢｚ）であり。
示し、第３図には同じ試料について本発明に基づいて得
られたクロマトグラムを示す、ピーク１はトロンボキサ
ンＢｚ（ＴＸＢｚ）であり。
ピーク２はＰ Ｇ Ｅ ｚであり、ピーク３はＰ Ｇ
Ｆ ｚαであり、ピーク４は６−ケトＰＧＦｚαであり
。
Ｆ ｚαであり、ピーク４は６−ケトＰＧＦｚαであり
。
ピーク５はＰ Ｇ Ｅ ｓである。本発明に基づけば、
不純物によるピークが減少されていることが理解される
。
不純物によるピークが減少されていることが理解される
。
上述した実施例によれば、試料の前処理時のプロスタグ
ランディンの変性を少なくでき、また、ラベル化剤の精
製は１反応後に行なうことができるので、安定した誘導
体化が可能である。特にプロスタグランディンおよびＡ
ＤＡＭ共にそれ自体不安定であるが、誘導体化物は安定
であることから水沫は有効である。クロマトグラムもＡ
Ｄ Ａ Ｍ試薬の高分子領域はメタノールで、低分子
領域はＧＰＣ法で除去することにより、定量精度が向上
した。
ランディンの変性を少なくでき、また、ラベル化剤の精
製は１反応後に行なうことができるので、安定した誘導
体化が可能である。特にプロスタグランディンおよびＡ
ＤＡＭ共にそれ自体不安定であるが、誘導体化物は安定
であることから水沫は有効である。クロマトグラムもＡ
Ｄ Ａ Ｍ試薬の高分子領域はメタノールで、低分子
領域はＧＰＣ法で除去することにより、定量精度が向上
した。
発明によれば、Ａ Ｄ Ａ Ｍを変質が進む前に反応に
利用でき、ＰＧの測定精度を向上することかできる。
利用でき、ＰＧの測定精度を向上することかできる。
第１図は１本発明の一実施例の分析操作を示す図、第２
は従来法によるクロマトグラムを示す図。 第３図は本発明に基づくクロマトグラムを示す図 、−
１、ｆｌ である。 、
−・・１）・−一 ′
は従来法によるクロマトグラムを示す図。 第３図は本発明に基づくクロマトグラムを示す図 、−
１、ｆｌ である。 、
−・・１）・−一 ′
Claims (1)
- １、生体組織又は生体液中のプロスタグランデインを液
体クロマトグラフで分析する方法において、プロスタグ
ランデインを含む試料に酢酸エチルを溶媒とした９−ア
ンスリルジアゾメタン溶液を混合して上記プロスタグラ
ンデインを誘導体化し、この液の溶媒を揮散せしめて除
去した後、残留物をメタノール又はアセトニトリルで溶
解し、この溶解液を冷却して不溶物を析出させ、この析
出不溶物を分別除去した液の溶媒を揮散せしめて除去し
、残留物を酢酸エチルで溶解し、この溶解液をゲルパー
ミェーションカラムを通して低分子物質を分離除去し、
上記ゲルパーミェーションカラムからの回収液を逆相分
配カラムを備えた液体クロマトグラフで分析することを
特徴とするプロスタグランデインの分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29485886A JPS63149561A (ja) | 1986-12-12 | 1986-12-12 | プロスタグランデインの分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29485886A JPS63149561A (ja) | 1986-12-12 | 1986-12-12 | プロスタグランデインの分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63149561A true JPS63149561A (ja) | 1988-06-22 |
Family
ID=17813162
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29485886A Pending JPS63149561A (ja) | 1986-12-12 | 1986-12-12 | プロスタグランデインの分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63149561A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997040357A1 (fr) * | 1996-04-19 | 1997-10-30 | Dainippon Seiki Co., Ltd. | Equipement d'extraction automatique et equipement de mesure automatique de la concentration d'une substance constitutive d'un echantillon liquide |
| JP2007109716A (ja) * | 2005-10-11 | 2007-04-26 | Nippon Mektron Ltd | ケーブル部を有するプリント基板の製造方法 |
-
1986
- 1986-12-12 JP JP29485886A patent/JPS63149561A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997040357A1 (fr) * | 1996-04-19 | 1997-10-30 | Dainippon Seiki Co., Ltd. | Equipement d'extraction automatique et equipement de mesure automatique de la concentration d'une substance constitutive d'un echantillon liquide |
| JP2007109716A (ja) * | 2005-10-11 | 2007-04-26 | Nippon Mektron Ltd | ケーブル部を有するプリント基板の製造方法 |
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