JPS63129997A - α−アミラ−ゼ活性測定用基質及び測定方法 - Google Patents
α−アミラ−ゼ活性測定用基質及び測定方法Info
- Publication number
- JPS63129997A JPS63129997A JP27770286A JP27770286A JPS63129997A JP S63129997 A JPS63129997 A JP S63129997A JP 27770286 A JP27770286 A JP 27770286A JP 27770286 A JP27770286 A JP 27770286A JP S63129997 A JPS63129997 A JP S63129997A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- formula
- glucose
- amylase activity
- measuring
- general formula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 37
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title claims abstract description 36
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 34
- FYGDTMLNYKFZSV-DZOUCCHMSA-N alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-D-Glcp Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-DZOUCCHMSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 10
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 10
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims description 4
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims description 4
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 3
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 3
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N fructose group Chemical group OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 claims 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 13
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 abstract description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 abstract description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 abstract description 5
- 238000013329 compounding Methods 0.000 abstract 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 8
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 4
- 108010025880 Cyclomaltodextrin glucanotransferase Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 4
- 108020000290 Mannitol dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 4
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 4
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 3
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 benzyl glycoside Chemical class 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 3
- 150000002303 glucose derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N UNPD130147 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(OC4C(OC(O)C(O)C4O)CO)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 2
- 239000003377 acid catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N malto-pentaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJQKKZNUWRIHCS-VBNQBVOGSA-N maltodecaose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@@H](O[C@@H](O[C@H]4[C@@H](O[C@@H](O[C@H]5[C@@H](O[C@@H](O[C@@H]6[C@H](O[C@H](O[C@@H]7[C@H](O[C@H](O[C@@H]8[C@H](O[C@H](O[C@@H]9[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]9O)CO)[C@H](O)[C@H]8O)CO)[C@H](O)[C@H]7O)CO)[C@H](O)[C@H]6O)CO)[C@@H](O)[C@@H]5O)CO)[C@@H](O)[C@@H]4O)CO)[C@@H](O)[C@@H]3O)CO)[C@@H](O)[C@@H]2O)CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RJQKKZNUWRIHCS-VBNQBVOGSA-N 0.000 description 2
- FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N maltopentaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LERPTDWHHCFIMD-BVEVKQQOSA-N (2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol;(2r,3r,4r,5r)-2,3,5,6-tetrahydroxy-4-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexanal Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LERPTDWHHCFIMD-BVEVKQQOSA-N 0.000 description 1
- HEVMDQBCAHEHDY-UHFFFAOYSA-N (Dimethoxymethyl)benzene Chemical compound COC(OC)C1=CC=CC=C1 HEVMDQBCAHEHDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WMXFNCKPYCAIQW-UHFFFAOYSA-N 1,2-dimethoxy-3-methylbenzene Chemical compound COC1=CC=CC(C)=C1OC WMXFNCKPYCAIQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HEWZVZIVELJPQZ-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethoxypropane Chemical compound COC(C)(C)OC HEWZVZIVELJPQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- 108010009384 L-Iditol 2-Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000178960 Paenibacillus macerans Species 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 1
- 206010034038 Parotitis Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000009569 Phosphoglucomutase Human genes 0.000 description 1
- 102100026974 Sorbitol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- MNZMECMQTYGSOI-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydron;bromide Chemical compound Br.CC(O)=O MNZMECMQTYGSOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 1
- 125000000649 benzylidene group Chemical group [H]C(=[*])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 108010046301 glucose peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-PQLUHFTBSA-N keto-D-tagatose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-PQLUHFTBSA-N 0.000 description 1
- HNCXNMMGWQLEQH-NPKNYADYSA-N maltohexadecaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O[C@@H]6[C@H](O[C@H](O[C@@H]7[C@H](O[C@H](O[C@@H]8[C@H](O[C@H](O[C@@H]9[C@H](O[C@H](O[C@@H]%10[C@H](O[C@H](O[C@@H]%11[C@H](O[C@H](O[C@@H]%12[C@H](O[C@H](O[C@@H]%13[C@H](O[C@H](O[C@@H]%14[C@H](O[C@H](O[C@@H]%15[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]%15O)CO)[C@H](O)[C@H]%14O)CO)[C@H](O)[C@H]%13O)CO)[C@H](O)[C@H]%12O)CO)[C@H](O)[C@H]%11O)CO)[C@H](O)[C@H]%10O)CO)[C@H](O)[C@H]9O)CO)[C@H](O)[C@H]8O)CO)[C@H](O)[C@H]7O)CO)[C@H](O)[C@H]6O)CO)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O HNCXNMMGWQLEQH-NPKNYADYSA-N 0.000 description 1
- JFISLVOULYSJEI-UHFFFAOYSA-N maltosyl sucrose Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 JFISLVOULYSJEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 108091000115 phosphomannomutase Proteins 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003459 sulfonic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野]
本発明は新規なα−アミラーゼ活性測定用基質及びそれ
を用いたα−アミラーゼ活性測定方法に関するものであ
る。
を用いたα−アミラーゼ活性測定方法に関するものであ
る。
[従来の技術]
急性すい炎、耳下腺炎等の診断のために、血清や尿中の
α−アミラーゼ活性を測定する手法がある。
α−アミラーゼ活性を測定する手法がある。
Q−アミラーゼ活性測定用基質として、従来はでんぷん
が用いられてきたが、精度の点で難点があった。このた
め、でんぷんに代って、近年、マルトペンタオース(G
5)に代表されるマルトオリゴ環がアミラーゼ活性測定
用基質として採用されつつある。即ち、α−アミラーゼ
の共役酵素として、α−グルコシダーゼを用いると、次
の方法によってα−アミラーゼの活性を測定することが
できる。
が用いられてきたが、精度の点で難点があった。このた
め、でんぷんに代って、近年、マルトペンタオース(G
5)に代表されるマルトオリゴ環がアミラーゼ活性測定
用基質として採用されつつある。即ち、α−アミラーゼ
の共役酵素として、α−グルコシダーゼを用いると、次
の方法によってα−アミラーゼの活性を測定することが
できる。
マルトース(G2)+マルトリオース(G3)α−グル
コシダーゼ G 2 + 03 5 G +ここ
で生成したグルコース(G1)は、例えばグルコースオ
キシダーゼ/パーオキシダーゼ/色素系又はヘキソキナ
ーゼ/ホスホグルコムターゼ/グルコース−6−ホスフ
ェートデヒドロゲナーゼ/NADH+等により定量され
、α−アミラーゼ活性が測定される。
コシダーゼ G 2 + 03 5 G +ここ
で生成したグルコース(G1)は、例えばグルコースオ
キシダーゼ/パーオキシダーゼ/色素系又はヘキソキナ
ーゼ/ホスホグルコムターゼ/グルコース−6−ホスフ
ェートデヒドロゲナーゼ/NADH+等により定量され
、α−アミラーゼ活性が測定される。
また、最近になって、還元末端のグルコースにアブリボ
ンとしてバラニトロフェノール等のフェノール系化合物
を導入し、アブリボンを遊離させてそのスペクトル吸収
を測定することにより、α−アミラーゼ活性を測定する
方法も提案されている(特公昭57−53079)。
ンとしてバラニトロフェノール等のフェノール系化合物
を導入し、アブリボンを遊離させてそのスペクトル吸収
を測定することにより、α−アミラーゼ活性を測定する
方法も提案されている(特公昭57−53079)。
[発明が解決しようとする問題点]
しかしながら、前述のマルトオリゴ糖をアミラーゼ活性
測定基質として用いる場合には、試料である血清や尿中
に内因性のグルコースやマルトースが存在するため、そ
の影響を受け、測定誤差が生じることになる。このため
、マルトオリゴ糖を基質として用いる場合には、試料中
のグルコース等を予めヘキソナーゼ等を用いて処理する
必要があった。
測定基質として用いる場合には、試料である血清や尿中
に内因性のグルコースやマルトースが存在するため、そ
の影響を受け、測定誤差が生じることになる。このため
、マルトオリゴ糖を基質として用いる場合には、試料中
のグルコース等を予めヘキソナーゼ等を用いて処理する
必要があった。
一方、特公昭57−53079の方法において、アブリ
ボンとしてフェノール系化合物を用いた場合には、遊離
した発色基は試料中に共存する種々の物質によって作用
を受け、吸光度が変動しやすくなり、その結果、測定精
度が劣る場合があった。
ボンとしてフェノール系化合物を用いた場合には、遊離
した発色基は試料中に共存する種々の物質によって作用
を受け、吸光度が変動しやすくなり、その結果、測定精
度が劣る場合があった。
このように、従来のα−アミラーゼ活性測定方法は、い
ずれも操作性や測定精度等に問題を有するものであった
。
ずれも操作性や測定精度等に問題を有するものであった
。
[問題点を解決するための手段]
本発明者は、これら従来技術の問題点を解決するべく、
鋭意研究を行なった結果、内因性のグルコースやマルト
ースの影響を受けず、かつ、精度の高い吸光度の測定が
可能なα−アミラーゼ活性測定用基質及びそれを用いた
α−アミラーゼ活性測定方法を見出し、本発明を完成さ
せた。
鋭意研究を行なった結果、内因性のグルコースやマルト
ースの影響を受けず、かつ、精度の高い吸光度の測定が
可能なα−アミラーゼ活性測定用基質及びそれを用いた
α−アミラーゼ活性測定方法を見出し、本発明を完成さ
せた。
即ち、本発明は、
下記一般式(I)で表わされるマルトオリゴ糖を含むこ
とを特徴とするα−アミラーゼ活性測定用基質 A−Gn−B ・・・・・・ (I)(式中、Aは、 又は を、Bはグルコース以外の!#糖類又はその誘導体を、
Gはグルコースを、nは4〜15の整数をそれぞれ表わ
す。ただし、(II )式又は(III ’)式におい
て、RI−R4は水素原子、低級アルキル基又は(CH
2) y COOM (Vは0,1又は2、Mは水素原
子又はアルカリ金属を表わす、)を、xI〜x4は酸素
原子又はイオウ原子をそれぞれ表わす、) 及び 上記一般式(I)で表わされるマルトオリゴ糖と試料と
をグルコシダーゼの共存下に接触させ、遊離する単糖類
又はその誘導体を測定することにより、試料中のα−ア
ミラーゼ活性を測定することを特徴とするα−アミラー
ゼ活性測定方法、を要旨とするものである。
とを特徴とするα−アミラーゼ活性測定用基質 A−Gn−B ・・・・・・ (I)(式中、Aは、 又は を、Bはグルコース以外の!#糖類又はその誘導体を、
Gはグルコースを、nは4〜15の整数をそれぞれ表わ
す。ただし、(II )式又は(III ’)式におい
て、RI−R4は水素原子、低級アルキル基又は(CH
2) y COOM (Vは0,1又は2、Mは水素原
子又はアルカリ金属を表わす、)を、xI〜x4は酸素
原子又はイオウ原子をそれぞれ表わす、) 及び 上記一般式(I)で表わされるマルトオリゴ糖と試料と
をグルコシダーゼの共存下に接触させ、遊離する単糖類
又はその誘導体を測定することにより、試料中のα−ア
ミラーゼ活性を測定することを特徴とするα−アミラー
ゼ活性測定方法、を要旨とするものである。
以下、本発明の詳細な説明する。
本発明のα−アミラーゼ活性測定用基質において、前記
一般式(I)で表わされるマルトオリゴ環の、非還元末
端であるAは、未置換グルコースでも良いし、グルコー
スの4位及び/又は6位を置換したものでも良い(即ち
、前記一般式(II))。更にグルコースの4位と6位
が一緒になってアルキレン橋を形成しているものでも良
い(即ち、前記一般式(Ill))。
一般式(I)で表わされるマルトオリゴ環の、非還元末
端であるAは、未置換グルコースでも良いし、グルコー
スの4位及び/又は6位を置換したものでも良い(即ち
、前記一般式(II))。更にグルコースの4位と6位
が一緒になってアルキレン橋を形成しているものでも良
い(即ち、前記一般式(Ill))。
このように、一般式(I)において、Aは無修飾(未置
換)及び修飾(置換)されたグルコースを含むものであ
る。Aが無修飾のグルコースの場合でも、本発明の基質
は従来の基質に比べて、はるかに精度よくα−アミラー
ゼ活性を測定し得るものであるが、下記の理由により修
伽グルコースであることが好ましい。
換)及び修飾(置換)されたグルコースを含むものであ
る。Aが無修飾のグルコースの場合でも、本発明の基質
は従来の基質に比べて、はるかに精度よくα−アミラー
ゼ活性を測定し得るものであるが、下記の理由により修
伽グルコースであることが好ましい。
即ち、マルトオリゴ環からなる基質において、非還元末
端がグルコースそのものであると、α−アミラーゼ活性
測定時に使用する共役酵素であるグルコシダーゼが一部
の非還元末端のグルコースを切断し、α−アミラーゼ活
性測定に誤差を与えてしまう場合があるのである。
端がグルコースそのものであると、α−アミラーゼ活性
測定時に使用する共役酵素であるグルコシダーゼが一部
の非還元末端のグルコースを切断し、α−アミラーゼ活
性測定に誤差を与えてしまう場合があるのである。
修飾された非還元末端としては、前記一般式(11)又
は(III )において、下記第1表(a)、(b)に
示すような置換基を導入したものが例示される。
は(III )において、下記第1表(a)、(b)に
示すような置換基を導入したものが例示される。
第 1 表
(a) 一般式(!■)
(b) 一般式(III )
一般式(1)において、還元末端となるBはグルコース
以外のsm類又はその誘導体を表わす。
以外のsm類又はその誘導体を表わす。
Bがグルコースを含まないのは前述の通り内因性のグル
コースと区別するためである。Bの具体例としてはフル
クトース、マンノース、ガラクトース、ソルボース、タ
ガトース等が例示され、その誘導体としては、リン酸基
を導入したものが挙げられる。これらのうち、フルクト
ースが入手容易性や反応性等から最も好ましい。
コースと区別するためである。Bの具体例としてはフル
クトース、マンノース、ガラクトース、ソルボース、タ
ガトース等が例示され、その誘導体としては、リン酸基
を導入したものが挙げられる。これらのうち、フルクト
ースが入手容易性や反応性等から最も好ましい。
また、一般式(I)において、Gnは具体的にはマルト
ペンタオース(G5)、マルトオクタツース(Gδ)、
マルトデカオース(G10)、マルトヘキサデカオース
(GIG)等が挙げられる。
ペンタオース(G5)、マルトオクタツース(Gδ)、
マルトデカオース(G10)、マルトヘキサデカオース
(GIG)等が挙げられる。
これらのうち、05〜Gδは水溶性に優れるうえに2種
のアイソエンザイムの作用を均等に受ける可能性が高い
ため、基質として好ましい。
のアイソエンザイムの作用を均等に受ける可能性が高い
ため、基質として好ましい。
本発明のα−アミラーゼ活性測定用基質としては、一般
式(1)で表わされる化合物が、次の一般式(IV)で
表わされる化合物であることが最も好ましい。
式(1)で表わされる化合物が、次の一般式(IV)で
表わされる化合物であることが最も好ましい。
(式中、Zl、Z2は水素原子又はリン酸基を表わす。
)
以下において、上記一般式(IV)の化合物を、MeG
5Fと略すことがある。
5Fと略すことがある。
次に一般式(1)のマルトオリゴ環の製造方法の一例を
述べる。
述べる。
まず、サイクロデキストリン(α、β、γのいずれでも
良い、)と、グルコースを除く!#糖類、例えばしよg
I(G+F)とをサイクロデキストリングルカノトラン
スフェラーゼの共存下に反応させる。その結果、サイク
ロデキストリンが開環し、その還元末端にしよ糖が転穆
し、新たに還元末端がフルクトースとなる。もっとも、
この際、デキストリンの分断も行なわれるので、得られ
るデキストリンは原料のサイクロデキストリンのグルコ
ース数のものに限られず、それ以下のグルコース数のも
のも生成する。マルトオリゴ環のグルコース数が、この
操作で所望のものよりも少なければ、マルトース以上の
オリゴ糖と、得られた転位デキストリンとを再度サイク
ロデキストリングルカノトランスフェラーゼの共存下に
反応させれば良い。
良い、)と、グルコースを除く!#糖類、例えばしよg
I(G+F)とをサイクロデキストリングルカノトラン
スフェラーゼの共存下に反応させる。その結果、サイク
ロデキストリンが開環し、その還元末端にしよ糖が転穆
し、新たに還元末端がフルクトースとなる。もっとも、
この際、デキストリンの分断も行なわれるので、得られ
るデキストリンは原料のサイクロデキストリンのグルコ
ース数のものに限られず、それ以下のグルコース数のも
のも生成する。マルトオリゴ環のグルコース数が、この
操作で所望のものよりも少なければ、マルトース以上の
オリゴ糖と、得られた転位デキストリンとを再度サイク
ロデキストリングルカノトランスフェラーゼの共存下に
反応させれば良い。
なお、非還元末端のグルコースAは、前述の通り、その
4位及び/又は6位が修飾されている方が、測定誤差が
少なくなるので好ましいものである。非還元末端の4位
及び/又は6位を修飾する場合には、上述の方法で得ら
れた!#糖類転移マルトオリゴ糖を、酸触媒の存在下に
ジメトキシトルエンやジメトキシプロパンと反応させる
。その結果、一般式(III )で示される非還元末端
が得られる。
4位及び/又は6位が修飾されている方が、測定誤差が
少なくなるので好ましいものである。非還元末端の4位
及び/又は6位を修飾する場合には、上述の方法で得ら
れた!#糖類転移マルトオリゴ糖を、酸触媒の存在下に
ジメトキシトルエンやジメトキシプロパンと反応させる
。その結果、一般式(III )で示される非還元末端
が得られる。
一方、一般式Nl)で示される非還元末端を導入する場
合には、上記一般式(Ill )の化合物の6位及び/
又は4位を触媒存在下にOH基とし、次いで、ハロゲン
化アルキルを反応させ、接触y元すればよい。また、X
I−X 4のいずれかをSにしたい場合には、(n)
式又は(Ill )式の化合物をスルホン酸エステル化
し、メルカプタン類を反応させれば良い。
合には、上記一般式(Ill )の化合物の6位及び/
又は4位を触媒存在下にOH基とし、次いで、ハロゲン
化アルキルを反応させ、接触y元すればよい。また、X
I−X 4のいずれかをSにしたい場合には、(n)
式又は(Ill )式の化合物をスルホン酸エステル化
し、メルカプタン類を反応させれば良い。
なお、前述の例で、非還元末端にフルクトースを導入す
る場合の原料としてしょ糖を用いる例を示したが、マル
トシルシュクロースを原料としても良い。また、サイク
ロデキストリンのかわりに市販のマルトオリゴ糖を用い
ても良い。サイクロデキストリングルカノトランスフェ
ラーゼとしては、バチルズ・マセランス、バチルス・メ
ガテリウム、バチルス・サーキュランス及びバチルス・
オーベンシス等を起源とするものを使用できる。
る場合の原料としてしょ糖を用いる例を示したが、マル
トシルシュクロースを原料としても良い。また、サイク
ロデキストリンのかわりに市販のマルトオリゴ糖を用い
ても良い。サイクロデキストリングルカノトランスフェ
ラーゼとしては、バチルズ・マセランス、バチルス・メ
ガテリウム、バチルス・サーキュランス及びバチルス・
オーベンシス等を起源とするものを使用できる。
このようにして得られた反応生成液から、所望のマルト
オリゴ糖を分mm製する手段としては、GPC、イオン
交換クロマトグラフィー、合成吸着剤による方法等が挙
げられる。
オリゴ糖を分mm製する手段としては、GPC、イオン
交換クロマトグラフィー、合成吸着剤による方法等が挙
げられる。
次に、一般式(1)で示されるマルトオリゴ糖を用いて
、本発明の方法により試料中のα−アミラーゼ活性を測
定する方法について説明する。
、本発明の方法により試料中のα−アミラーゼ活性を測
定する方法について説明する。
体液等の試料に、基質及び共役酵素としてグルコシダー
ゼを加えると、下記のように反応が進む(なお、以下に
おいては一般式(I)の具体例として一般弐′rV)で
示されるMeGsFを用いる)。
ゼを加えると、下記のように反応が進む(なお、以下に
おいては一般式(I)の具体例として一般弐′rV)で
示されるMeGsFを用いる)。
α−アミラーゼ
eG5F
Me G3 + G2 Fα−グルコシダ
ーゼ G2−F 2GI+Fここで
遊離したフルクトースを例えばマンニトールデヒドロゲ
ナーゼ(MDH)やソルビトールデヒドロゲナーゼ(S
DH)と、NADH共存下に反応させることによりNA
Dを生成させ、その吸光度の変化によりフルクトース量
が測定できる。
ーゼ G2−F 2GI+Fここで
遊離したフルクトースを例えばマンニトールデヒドロゲ
ナーゼ(MDH)やソルビトールデヒドロゲナーゼ(S
DH)と、NADH共存下に反応させることによりNA
Dを生成させ、その吸光度の変化によりフルクトース量
が測定できる。
NADHNAD
NADHNAD
[作用コ
一般式(1)で表わされるマルトオリゴ糖は試料中のα
−アミラーゼ及び共役酵素のグルコシダーゼにより切断
されてフルクトース等の単糖類を生じる。この単糖類を
例えばMDHやSDR等で定量することにより、試料中
のα−アミラーゼ活性を測定できる。
−アミラーゼ及び共役酵素のグルコシダーゼにより切断
されてフルクトース等の単糖類を生じる。この単糖類を
例えばMDHやSDR等で定量することにより、試料中
のα−アミラーゼ活性を測定できる。
[実施例]
以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。
実施例1
竺j」1旦1」1遺
市販のG529.5gにピリジン140mftと無水酢
酸140mJ:Lを加え、室温で48時間反応させるこ
とにより、パーアセテート化G551.8gを得た。得
られたパーアセテート化G525.0gをクロロホルム
165mflに溶かし、10℃以下で30%HBr−酢
酸と2時間反応させることにより、パーアセテート化G
5ブロマイド24.5gを得た。このパーアセテート化
G5ブロマイドをベンゼン中、Hg(cN)26.7g
、ベンジルアルコール33m1と2時間還元反応させる
ことにより、パーアセテート化G5ベンジルグリコシド
を得た。次いで、パーアセテート化G5ベンジルグリコ
シドをメタノール中、ナトリウムメトキシドで室温加水
分解することにより、ベンジルグリコシド化G519.
9gを得た。
酸140mJ:Lを加え、室温で48時間反応させるこ
とにより、パーアセテート化G551.8gを得た。得
られたパーアセテート化G525.0gをクロロホルム
165mflに溶かし、10℃以下で30%HBr−酢
酸と2時間反応させることにより、パーアセテート化G
5ブロマイド24.5gを得た。このパーアセテート化
G5ブロマイドをベンゼン中、Hg(cN)26.7g
、ベンジルアルコール33m1と2時間還元反応させる
ことにより、パーアセテート化G5ベンジルグリコシド
を得た。次いで、パーアセテート化G5ベンジルグリコ
シドをメタノール中、ナトリウムメトキシドで室温加水
分解することにより、ベンジルグリコシド化G519.
9gを得た。
ベンジルグリコシド化G519.9gをDMF中、ベン
ズアルデヒドジメチルアセタール14,8gと、P−)
−ルエンスルホン酸触媒下85〜90℃で4時間反応を
行なうことにより、非還元末端4.6−0−ベンジリデ
ン、ベンジルグリコシド化G5を得た。
ズアルデヒドジメチルアセタール14,8gと、P−)
−ルエンスルホン酸触媒下85〜90℃で4時間反応を
行なうことにより、非還元末端4.6−0−ベンジリデ
ン、ベンジルグリコシド化G5を得た。
非還元末端4.6−0−ベンジリデン、ベンジルグリコ
シド化G5を、ピリジン100mJ2.無水酢酸100
mj2と室温で48時間反応させ、非還元末端4.6−
0−ベンジリデン、ベンジルグリコシド化G5パーアセ
テート26.2gを得た。非還元末端4.6−0−ベン
ジリデン、ベンジルグリコシド化G5パーアセテート2
6.2gを、ジオキサン370mIL中で、KOH18
0gとともに塩化ベンジル180mJ2と105〜11
0℃で6時間反応させることにより、非還元末端4.6
−0−ベンジリデンバーベルジル化G5を得た。更に、
非還元末端4.6−0−ベンジリデンバーペンジル化G
5を、アセトン750mJ2、IN−HCu160mj
2中、湯浴上で環流させ、ベンジリデンをはずすことに
より、非還元末端4.6−OHバーベンジル化G57.
6gを得た。
シド化G5を、ピリジン100mJ2.無水酢酸100
mj2と室温で48時間反応させ、非還元末端4.6−
0−ベンジリデン、ベンジルグリコシド化G5パーアセ
テート26.2gを得た。非還元末端4.6−0−ベン
ジリデン、ベンジルグリコシド化G5パーアセテート2
6.2gを、ジオキサン370mIL中で、KOH18
0gとともに塩化ベンジル180mJ2と105〜11
0℃で6時間反応させることにより、非還元末端4.6
−0−ベンジリデンバーベルジル化G5を得た。更に、
非還元末端4.6−0−ベンジリデンバーペンジル化G
5を、アセトン750mJ2、IN−HCu160mj
2中、湯浴上で環流させ、ベンジリデンをはずすことに
より、非還元末端4.6−OHバーベンジル化G57.
6gを得た。
この非還元末端4.6−OHバーベンジル化G57.6
gにBa023.1 g、Ba (OH)2・8H20
9,4gとともヨウ化メチル84m1をDMF240m
J2中で光遮断下、48時間室温にて反応させ、非還元
束i4,6−〇−メチルパーベンジル化G5を得、非還
元束J4.6−ジー0−メチルバーベンジル化G5を、
メタノール/酢酸エチル中でPdによる室温、常圧接触
還元を行なうことにより、非還元末端4.6−ジーO−
メチル化G51.2gを得た。
gにBa023.1 g、Ba (OH)2・8H20
9,4gとともヨウ化メチル84m1をDMF240m
J2中で光遮断下、48時間室温にて反応させ、非還元
束i4,6−〇−メチルパーベンジル化G5を得、非還
元束J4.6−ジー0−メチルバーベンジル化G5を、
メタノール/酢酸エチル中でPdによる室温、常圧接触
還元を行なうことにより、非還元末端4.6−ジーO−
メチル化G51.2gを得た。
次に、この非還元束@4.6−ジー0−メチル化G5を
10%W / Vのmン夜とし、これにしよ糖液4%w
/ vを等量混合し、バチルス・オーベンシス起源の
サイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼを添
加し、37℃、pH6,0の条件下で16時間静置し、
反応させた。16時間後、この反応液をカラムクロマト
グラフィー法で精製したところ、MG5F(ただし、Z
I及びZ2は水素原子)0.12gが得られた。
10%W / Vのmン夜とし、これにしよ糖液4%w
/ vを等量混合し、バチルス・オーベンシス起源の
サイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼを添
加し、37℃、pH6,0の条件下で16時間静置し、
反応させた。16時間後、この反応液をカラムクロマト
グラフィー法で精製したところ、MG5F(ただし、Z
I及びZ2は水素原子)0.12gが得られた。
実施例2
α−アミラーゼ活性測定例
下記配合にて試薬Iを調製した。
試薬I
上記で得られた基質
1mmoft/n(最終濃度)
α−グルコシダーゼ
25U/mfL(〃 )
マンニトールデヒドロゲナーゼ
400/mj2(// )
NADHO,16mmou/Il(// )PIPE
Sバッファー(pH7,0) 100mmo℃/flail ) 上記試薬■800μkに、α−アミラーゼ活性が90
m U / m fl 、及び270 m U / m
Aをそれぞれ含む検体血清100μmを加えて、37
℃で10分間インキュベーションしながら、340nm
で吸光度変化を測定した。
Sバッファー(pH7,0) 100mmo℃/flail ) 上記試薬■800μkに、α−アミラーゼ活性が90
m U / m fl 、及び270 m U / m
Aをそれぞれ含む検体血清100μmを加えて、37
℃で10分間インキュベーションしながら、340nm
で吸光度変化を測定した。
結果を第1図に示す。
第1図から、本発明の方法によれば、6分以降において
、いずれの濃度でも良好な直線関係が得られていること
から、本発明によれば、α−アミラーゼ活性の安定かつ
高精度な測定が可能であることがわかる。
、いずれの濃度でも良好な直線関係が得られていること
から、本発明によれば、α−アミラーゼ活性の安定かつ
高精度な測定が可能であることがわかる。
実施例3
実施例2において、各検体血清に更に、グルコースを1
00mg/mIl添加したこと以外は、同様の手順で測
定を行なった。
00mg/mIl添加したこと以外は、同様の手順で測
定を行なった。
その結果、第1図と殆ど同一の結果が得られた。
このことから、本発明は内因性のグルコース等によって
は全く影響を受けないことがわかる。
は全く影響を受けないことがわかる。
[発明の効果]
以上詳述した通り、本発明のα−アミラーゼ測定用基質
は、一般式(I)に示すマルトオリゴ糖を含むものであ
って、このマルトオリゴ糖は、試料中のα−アミラーゼ
及び共役酵素のグルコシダーゼにより切断されてフルク
トース等の単糖類を生じ、これにより定量が可能となる
が、その際、糖の還元末端にグルコースを除く単糖類を
転位させであるので、試料中に含まれる内因性グルコー
スやマルトース等の影響を受けることがない。従って、
本発明のα−アミラーゼ測定用基質によれば、正確にか
つ効率良くα−アミラーゼ活性を測定することが可能と
される。更に、一般式(I)の非還元末端に修飾したグ
ルコースを導入すると、より測定精度を上げることがで
きる。
は、一般式(I)に示すマルトオリゴ糖を含むものであ
って、このマルトオリゴ糖は、試料中のα−アミラーゼ
及び共役酵素のグルコシダーゼにより切断されてフルク
トース等の単糖類を生じ、これにより定量が可能となる
が、その際、糖の還元末端にグルコースを除く単糖類を
転位させであるので、試料中に含まれる内因性グルコー
スやマルトース等の影響を受けることがない。従って、
本発明のα−アミラーゼ測定用基質によれば、正確にか
つ効率良くα−アミラーゼ活性を測定することが可能と
される。更に、一般式(I)の非還元末端に修飾したグ
ルコースを導入すると、より測定精度を上げることがで
きる。
また、本発明のα−アミラーゼ活性測定方法は、一般式
(I)で表わされるマルトオリゴ糖と試料とをグルコシ
ダーゼの共存下に接触させ、遊離する単糖類又はその話
導体を測定することにより、試料中のα−アミラーゼ活
性を測定するものであって、α−アミラーゼ活性の安定
かつ高精度な測定を容易に行なうことができる。特に遊
離したIL1!類をNAD又はNADH共存下酵素処理
するとことによりNAD又はNADHが得られるが、こ
の際の吸光度測定は、試料中の他の夾雑物により影響を
受けず、安定して測定することができる。
(I)で表わされるマルトオリゴ糖と試料とをグルコシ
ダーゼの共存下に接触させ、遊離する単糖類又はその話
導体を測定することにより、試料中のα−アミラーゼ活
性を測定するものであって、α−アミラーゼ活性の安定
かつ高精度な測定を容易に行なうことができる。特に遊
離したIL1!類をNAD又はNADH共存下酵素処理
するとことによりNAD又はNADHが得られるが、こ
の際の吸光度測定は、試料中の他の夾雑物により影響を
受けず、安定して測定することができる。
第1図は実施例2で得られた吸光度変化の測定結果を示
すグラフである。
すグラフである。
Claims (6)
- (1)下記一般式( I )で表わされるマルトオリゴ糖
を含むことを特徴とするα−アミラーゼ活性測定用基質
。 A−G_n−B・・・・・・( I ) (式中、Aは、 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・(II) 又は ▲数式、化学式、表等があります▼・・・(III) を、Bはグルコース以外の単糖類又はその誘導体を、G
はグルコースを、nは4〜15の整数をそれぞれ表わす
。ただし、(II)式又は(III)式において、R_1〜
R_4は水素原子、低級アルキル基又は(CH_2)_
yCOOM(yは0、1又は2、Mは水素原子又はアル
カリ金属を表わす。)を、X_1〜X_4は酸素原子又
はイオウ原子をそれぞれ表わす。) - (2)前記( I )式中、Bがフルクトースであること
を特徴とする特許請求の範囲第1項に記載の基質。 - (3)マルトオリゴ糖は下記一般式(IV)で表わされる
ものであることを特徴とする特許請求の範囲第1項又は
第2項に記載の基質。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・(IV) (式中、Z_1、Z_2は水素原子又はリン酸基を表わ
す。) - (4)下記一般式( I )で表わされるマルトオリゴ糖
と試料とをグルコシダーゼの共存下に接触させ、遊離す
る単糖類又はその誘導体を測定することにより、試料中
のα−アミラーゼ活性を測定することを特徴とするα−
アミラーゼ活性測定方法。 A−G_n−B・・・・・・( I ) (式中、Aは、 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・(II) 又は ▲数式、化学式、表等があります▼・・・(III) を、Bはグルコース以外の単糖類又はその誘導体を、G
はグルコースを、nは4〜15の整数をそれぞれ表わす
。ただし、(II)式又は(III)式において、R_1〜
R_4は水素原子、低級アルキル基又は(CH_2)_
3COOM(yは0、1又は2、Mは水素原子又はアル
カリ金属を表わす。)を、X_1〜X_4は酸素原子又
はイオウ原子をそれぞれ表わす。) - (5)前記( I )式中、Bがフルクトースであること
を特徴とする特許請求の範囲第4項に記載の測定方法。 - (6)マルトオリゴ糖は下記一般式(IV)で表わされる
ものであることを特徴とする特許請求の範囲第4項又は
第5項に記載の測定方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・(IV) (式中、Z_1、Z_2は水素原子又はリン酸基を表わ
す。)
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP27770286A JPH0650996B2 (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | α−アミラ−ゼ活性測定用基質及び測定方法 |
US07/116,617 US5043436A (en) | 1986-11-20 | 1987-11-03 | Substrate for measurement of alpha-amylase activity |
DE19873738477 DE3738477A1 (de) | 1986-11-20 | 1987-11-12 | Substrat zur messung der (alpha)-amylaseaktivitaet |
US07/637,135 US5068183A (en) | 1986-11-20 | 1991-01-03 | Method for measurement of α-amylase activity |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP27770286A JPH0650996B2 (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | α−アミラ−ゼ活性測定用基質及び測定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63129997A true JPS63129997A (ja) | 1988-06-02 |
JPH0650996B2 JPH0650996B2 (ja) | 1994-07-06 |
Family
ID=17587121
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP27770286A Expired - Fee Related JPH0650996B2 (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | α−アミラ−ゼ活性測定用基質及び測定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0650996B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02177900A (ja) * | 1988-12-29 | 1990-07-10 | Sanko Junyaku Kk | α―アミラーゼの測定法 |
-
1986
- 1986-11-20 JP JP27770286A patent/JPH0650996B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02177900A (ja) * | 1988-12-29 | 1990-07-10 | Sanko Junyaku Kk | α―アミラーゼの測定法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0650996B2 (ja) | 1994-07-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPS6250119B2 (ja) | ||
JPS6054395A (ja) | オリゴグリコシド誘導体 | |
JPS6183195A (ja) | 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを基質として用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 | |
US5068183A (en) | Method for measurement of α-amylase activity | |
US4987067A (en) | Maltooligosaccharide derivatives and reagents for determination of amylase activity | |
JP2807949B2 (ja) | α−アミラーゼ活性測定用試薬および測定方法 | |
Hehre et al. | Hydrolysis of β-d-glucopyranosyl fluoride to α-d-glucose catalyzed by Aspergillus niger α-d-glucosidase | |
JPS63129997A (ja) | α−アミラ−ゼ活性測定用基質及び測定方法 | |
EP0557021B1 (en) | Oligosaccharide derivatives suitable for alpha-amylase determination | |
JPH01256399A (ja) | α−アミラーゼ活性測定方法 | |
JP2752523B2 (ja) | α‐アミラーゼアイソザイム活性の分別定量法 | |
JPS63214193A (ja) | 6−グルコシルマルトオリゴ糖誘導体の製法およびそれを用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 | |
JPS6087297A (ja) | α,β−核置換フエニルマルトオリゴサイドの環状アセタ−ル誘導体,その製造方法並びに該基質を用いるアミラ−ゼ活性の測定方法 | |
JPS63196300A (ja) | α−アミラ−ゼ活性測定方法 | |
JP3901990B2 (ja) | α−アミラーゼ活性測定用試薬および測定方法 | |
JP2678620B2 (ja) | 新規マルトオリゴ糖誘導体、その製造法およびα−アミラーゼ活性測定方法 | |
JP3029925B2 (ja) | マルトオリゴ糖誘導体およびその製造法 | |
JP4171088B2 (ja) | 新規オリゴ糖誘導体、それを含有するα−アミラーゼ活性測定試薬および測定方法 | |
JP3070709B2 (ja) | マルトオリゴ糖誘導体の製造法 | |
JP2770892B2 (ja) | アルコキシメチリデンマルトオリゴ糖誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 | |
JP3266967B2 (ja) | 新規なオリゴサッカライド誘導体及びその製法、並びにこれを基質として用いるα−アミラーゼ活性測定法 | |
JP5167451B2 (ja) | 蛍光性アミラーゼ基質及び該基質を用いたアミラーゼ活性測定方法 | |
JPH0198498A (ja) | アミラーゼアイソエンザイム活性分別定量方法 | |
JPH03200801A (ja) | アンヒドロマルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα―アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα―アミラーゼ活性の測定方法 | |
JPS637797A (ja) | α−アミラ−ゼの活性測定法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |