JPS63119500A

JPS63119500A - 硫酸化多糖体ｄｓ４１５２を含有する血管新生抑制剤及び抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPS63119500A
Application number: JP62125443A
Authority: JP
Inventors: Kazukiyo Inoue; 井上　和泓; Noriko Tanaka; 紀子田中; Hiroshi Korenaga; 是永　博; Hidemasa Ogawa; 小河　秀正
Original assignee: Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1986-05-23
Filing date: 1987-05-22
Publication date: 1988-05-24
Anticipated expiration: 2011-10-16
Also published as: JP2544136B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、新規な硫酸化多糖体ＤＳ　４１５２並びにこ
れを有効成分として含有する血管新生抑制剤及び抗腫瘍
剤並びにこれと更にステロイド剤を含有する血管新生抑
制剤及び抗腫瘍剤に関する。

〔従来の技術及びその問題点〕

従来、ミクロコツカスａｐ、　ＡＴ−２５の発酵生産物
中に線溶誘導作用、感染防御作用およびインターフェロ
ン誘起作用を有する硫酸化多糖体ＤＦ　４６３９が存在
することが知られていた（特開昭５６−６７３０１号、
特開昭５７−４２６２７号および特開昭５９−２５３２
９号）。

本発明者らは、種々の有用性の期待される硫酸化多糖体
ＤＦ　４６３９について生物学的特性を明らかにすべく
検討をおこなった結果、ＤＦ　４６３９が強い発熱性を
有することを知ったＯ〔問題を解決するための手段〕そこで、本発明者らは、この発熱性物質を除去すべく、
更に研究をおこなっていたところ、　ＤＦ　４６３９は
、いくつかの成分の混合物であり、そのうちのＤＳ　４
１５２と名づけられた一成分は発熱性がなく、シかも優
れた血管新生抑制作用及び抗腫瘍作用を有することを見
出した。

更にまた、本発明者は、このＤＳ　４１５２とステロイ
ド剤とを組合せると血管新生抑制作用及び抗腫瘍作用が
相乗的に増強されることを見出した。

本発明は、上記の知見に基くものであシ、その目的は、
新規な硫酸化多糖体ＤＳ　４１５２を提供するものであ
る。

また、本発明の他の目的は、硫酸化多糖体ＤＳ　４１５
２を有効成分として含有する血管新生抑制剤及び抗腫瘍
剤を提供するものである。

更に、本発明の他の目的は、硫酸化多糖体ＤＳ　４１５
２とステロイド剤とを有効成分として含有する血管新生
抑制剤及び抗腫瘍剤を提供するものである。

本明細書中の「血管新生抑制」とは、胚の発育、黄体形
成、創傷の治癒等に極めて重要なだけでなく、関節リュ
ーマチを含む慢性炎症。

免疫応答、腫瘍増殖等の病的状態においてもその病体の
進展に深く関与している血管の新生作用を弱めることを
いう。したがって、血管新生抑制剤は、上記血管の新生
作用が関与する諸疾、＠１例えばリューマチ性関節炎、
増殖性網膜炎、転意、糖尿性網膜炎、未熟児網膜症等の
治療、予防に有用なものである。特に腫瘍は強す血管新
生を促し、新生された血管よシ供給される血液がさらに
膝瘍の増殖と進展を促進するとされているので、抗腫瘍
剤としても有効である。

本発明の硫酸化多糖体ＤＳ　４１５２は、アルスロバク
タ−ｓｐ、ＡＴ　　２５　　（工業技術院微生物工業技
術研究所には、Ｍｉｅｒｏｃｏｃｅｏｇ　ｓｐ。

人Ｔ−２５として、ＦＥＲＭ　Ｐ−５２５５及びＡｒｔ
ｈｒｏｂａｅｔｏｒ　ｓｐ、ＡＴ−２５としてＦＢＲＭ
ＢＰ−１３５７の番号で寄託されている）の培養物から
分離されるＤＦ　４６３９　（特開昭５６−８７３０１
号参照）から、その中に含まれる分子量約Ｌ　５　Ｘ　
Ｌ　Ｏ’以上の発熱性物質等を適当な分子量分画法、例
えばゲルろ過性や限外ろ過性、アルコール沈澱法で除く
ことによって得られる。

すなわち、グルろ過性によればＤＦ　４６３９を適当な
ゲルろ過担体、例えば、セファクリル〔５ｅｐｈａｃｒ
ｙｌ　Ｓ　−３００（ファルマシア製〕〕を用いてグル
ろ過を行い、得られるフラクションについて高速グルろ
過クロマトグラフィー（東洋ソーダＩｆ！Ｇ３０００　
　ＳＷカラム使用）を行い、排除限界（ビイド・ケリュ
ーム、マｏｉｄ　ｖｏｌｕｍｅ　）にピークを示すフラ
クション（Ｈ画分）とピイド・ボリュームにピークを与
えず分子量約２ＸＬＯ’〜８　Ｘ　１０’の範囲に溶出
されるフラクション（Ｌ画分）を各々集め、透析する。

また、限外沢過は適当な膜（例えばＡｒｎｌｃｏｎ社製
のＹＭＩＯ％　ＹＭ３０　、　　ＸＭ５０　、　　ＰＭ
３０やＰｊｌｔｒｏｎ社製のＮ０ＶＡ１００　、　　Ｏ
ＭＥＧＡｌｏｏ　。

Ｎ０ＶＡ５０、ＯＭｇＧＡ５０　　等特にｙＭｔｏ　）
を用い、窒素ガスによる加圧またはべりスタリツク（ｐ
ｅｒｉｓｔａｌｌｃ　）　ｅンプによって加圧（Ｑ５〜
５　ｋｇ／二２　程度）し、透過液をＤＳ　４１５２と
して集めればよい。使用溶媒は、水−エタノール（１０
：２〜３）または水が適当であり、４℃乃至室温で行な
うのが一般的である。

得られた各透析内液を濃縮後ろ過し、ろ液を数倍量のエ
タノール中に攪拌下注ぐことによシ生成する白色沈澱を
集め、９０％エタノール、エタノール、アセトンの順に
洗った後、減圧乾燥すれば、目的とするＤＳ　４１５２
　（Ｌ画分）と発熱性物質（Ｈ画分）が各々得られる。

こうして得られるＤａ　４１５２は以下に述べる物理化
学的諸性質を示す。下記の物性はそのナトリウム塩につ
いてのものである。

（１）　　分子量（グルろ過去による）２９，０００±
ａｏｏ。

（２）　　元素分析値（５０ツトの巾を示す）Ｃ２４，
４２〜２３７６％　Ｈ３，３４〜３９８％ＷＱ５１〜０
８９％　８　１０６〜１１７％Ｐ　　０７７〜１．０６
％（３）糖および蛋白質の含量糖含量（％）：５７±３（フェノール−硫酸法、ガラク
トース標準）蛋白含量（％）：１±０５（ローリー・フオリン法、牛
血清アルブミン標準）（４）比旋光度〔α櫂−３７±１　（０５％水溶液）（５）赤外線吸収スペクトルにおける主要吸収帯１２４
ｏ、８４０（肩）　、　８１０　（ｃｌＬ−’；　ＫＢ
ｒ　）（６）　　溶解性水に易ｆｆｌ。エーテル、ベンゼン、クロロホルム、メ
タノール、エタノール等の有機溶媒には殆ど不溶。

（７）　　呈色反応フェノール−硫酸、アンスロン−硫酸、ビュレット反応
およびローリー・フオリン反応は陽性。水解液のエルリ
ン・モルガン反応およびニンヒｒリン反応も陽性。カル
バゾール反応および坂口反応は陰性。

（８）塩基性、中性、酸性の区別ｐＨ６〜８（３％濃度水溶液）（９）　　構成糖および硫酸基、燐の含量Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−ガラクトース、５ｏ３Ｎ畠およびＰ（燐）の含
有モル比はＤ−グルコースを１０としてそれぞれ約１０
：６１ニア３：６である。

（至）　構成アミノ酸およびアミノ糖酸加水分解物のアミノ酸分析計による分析で、アラニン
、グリシン、グルタミン酸、シアミノピメリン酸、グル
コサミンおよびムラミン酸の存在を認める。

叙上のＤＳ　４１５２は、後記実施例で示す如く、単独
でも血管新生抑制作用を有するものであるが、ステロイ
ド剤と組合せることにょシ、更に優れた血管新生抑制作
用を示す。

尚、％本発明の血管新生抑制剤においては、ＤＳ　４１
５２の代りにへ、Ｑリン、低分子へ、ｔｉｌＪン等を使
用することもできる。

従来１２″レドニゾロン％６α−メチルプレドニゾロン
、デキサメサゾン等のステロイドホルモンが、鶏胚漿尿
膜、兎角膜、ハムスタ−螺装に実験的に誘導された血管
新生を抑制する作用を有することが報告されている（　
Ｃａｎｃｅｒ、Ｒａｍ、　３９　１３０５（１９７９）
　Ｊ、Ｎａｔｌ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、　５７　７８９（１９７８）
及びＰｒｏｅ。

Ｎａｔｌ　、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳ人　７８　１１７
６（１９８１））。

また、ステロイドホルモンのうち、糖質コルチコイＦ’
（７’レドニゾロン、ソレドニゾン、ベタメサゾン等）
は白血病、悪性リンフ９腫、乳癌、前立腺癌の治療に使
用されている。

更に、アントロスタンを母核とする男性ホルモンである
テストステロンプロピオネート、フルオキシメステロン
等が杭孔腺腫瘍剤として用いられておｆｉ、２０〜３０
％の有効率が得られると報告されている（　Ｏｎｃｏｌ
ｏｇｉａ　Ｌ　０７２（１９８４））。

更にまた、プロゲステロンの誘導体、テストステロンの
誘導体およびニストロジエン剤が前立腺癌の治療に用い
られている。

前記のＤＳ　４１５２と組合せ用いることのできるステ
ロイド剤は、糖質コルチコイド類、黄体ホルモン類、エ
ストラン類及びアントロスタン類等であシ、よシ具体的
には次のものが例示される。

（１）７°レグナンを母核とするステロイドホルモン、
すなわちグルココルチコイドであり、たとえばコーチシ
ンおよびその誘導体（アセテート、エナンテート、ラン
デシレート等）；ハイドロコーチシンおよびその誘導体
（アセテート、ヘミサクシネート、カプロエート等）；
ゾレドニゾンおよびその誘導体：′：ｆレドニゾロンお
よびその誘導体（アセテート、ヘミサクシネート、フォ
スフェート、ブチルアセテート、テトラヒドロフタレー
ト、トリメチルアセテート等）；メチルプレドニゾロン
およびその誘導体（アセテート、ヘミサクシネート等）
；ベタメサゾンおよびその誘導体（フォスフェート、バ
レレート等）が挙ケラれる。

また、グルココルチコイドのＣ−１１位の水酸基がα配
置になった異性体（たとえば、１１α−エピハイドロコ
ーチシン）も含まれるし、前記グルココルチコイドのテ
トラノ１イドロ代謝物（グルココルチコイド活性の有無
は関連しない）も含まれる。

更に、黄体ホルモンであるプロプステロン、メトロキシ
プロゲステロンおよびその誘導体（アセテート等）、デ
ィトログストロンおよびその１７α−アセトキシ誘導体
（デュファストン）等があげられる。

更にまた、ミネラロコルテコイドであるアルドステロン
、デンキシコルチコステロンおよびその誘導体（アセテ
ート、トリメチルアセテート、エナンテート、フェニル
プロピオネート等）もあげられる。

（２）　　アントロスタンを母核とするステロイドホル
モン、すなわち、男性ホルモンであり、たとえばｂ　ア
ンドロステロン、テストステロンおよびその誘導体（プ
ロピオネート、エナンテート、ブチレート、カプリレー
ト等）があげられる。また、エビチオスタノールおよび
その誘導体、ミピテオスタンがあげられる。

さらにフルオキシメステロンおよびその誘導体、メチル
テストロンおよびその誘導体、スタノロンおよびその誘
導体も含まれる。

（３）　　エストランを母核とするステロイドホルモン
、すなわち、卵胞ホルモンでアシ、たとえば、エストロ
ンおよびその誘導体、エストラジオールおよびその誘導
体（ベンゾエート、ゾゾロぎオネート、バレレート、ウ
ンデセノエート等）、エストＩＪオールおよびその誘導
体（トリプロピオネート等）があげられる。

本発明の血管新生抑制剤の剤型としては、有効成分を医
学的に許容される担体、賦形剤を含有する種々の形態、
例えば水または各種の輸液用製剤に溶解させた液剤、散
剤、顆粒剤、錠剤、注射剤、坐剤等が挙げられる。

本発明の血管新生抑制剤がＤＳ　４１５２とステロイド
剤とを含有するものである場合、これらをそれぞれ別個
に上記剤型の単剤に調製して組合せ剤とすることも、あ
るいは両成分を含む合剤とし製剤化することもできる。

本発明の血管新生抑制剤は、静脈内、動脈内、経口、皮
下、直腸内、粘膜内または患部局所内に投与することが
できる。その投与量は、成人の経口−日量で、ＤＳ　４
１５２として１〜２０００　Ｉｎｇ程度であシ、ステロ
イド類は男性ホルモン剤、糖質コルチコイド剤で１０〜
１０ｏＯＷＬｇ、通常３０〜６０７＠が適当で、漸減し
ていくのが好ましいことがある。プロゲステロン剤では
１００〜１２００＋９が適当である。注射による投与の
場合は通常経口の１１５量が適当である。

また１本発明の血管新生抑制剤を抗腫瘍剤として用いる
場合の投与方法及び用量も、はぼ上記と同じである。

〔発明の効果〕

本発明のＤＳ　４１５２はそれ単独であっても血管新生
抑制作用を奏するが、これを更にステロイド剤と組合せ
るとよシ優れた血管新生抑制作用を奏する。

したがって、　ＤＳ　４１５２単独であっても血管新生
抑制剤として有用であるが、更にステロイド剤と組合せ
たものは相乗的に作用が増強されるので、例えば腫瘍血
管の新生を抑制し、癌の増殖を防ぐ血管新生抑制剤とし
て特に有用なものである。

〔実施例〕

次に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。

実施例１（Ａ）特開昭５８−６７３０１号に記載の方法により得られた
ＤＦ　４６３９　（ａｏ　ｙ　）を１５−のＱ　Ｉ　Ｍ
　　ＮａＣ１に溶解し、これをＱ　Ｉ　Ｍ　ＮａＣ１で
平衡化したカラム（セファクリルＳ　−３００；ａｏｘ
ｓｏｃＩＩＬ）にかけて同溶媒にて溶出し、１８ｔｉｆ
ずつ溶出液を集めた。得られたフラクションについて高
速グルー過クロマトグラフィー（東洋ソーダ製　Ｇ３０
０ｏ　　ｓｗカラム、溶媒０．１　Ｍ酢酸カリウム緩衝
液ｐＨ６，５）を行い、ボイド・、ｌ？　＋７ユームに
ピークを与えず、分子量（デキストラン標準）が約２Ｘ
１０’〜８　Ｘ　１０’　　の範囲に溶出される７ラク
シヨンを集め（約７００　ｙｄ　）　ｓ脱イオン水に対
して透析した。透析内液を約５０ｍまで濃縮後ろ過した
。ろ液を約４００１１１のエタノール中へ攪拌下部下し
て、生成した沈澱を集め、これを９０％エタノール、エ
タノール、アセトンの順に洗った後、減圧乾燥（５Ｏ℃
、６時間）して目的物のＤＳ　４１５２の白色粉末３８
？を得た。

一方、上記高速グルｒ過クロマトグラフィーでゲイト・
ボリュームにピークを与えるフラク／ヨンを集め（約９
０ｙＬｌ）、上述のＤＳ４１５２の場合と同様に処理し
て、Ｈ画分を微黄色粉末としてａｌｓ　を得た。

ＤＳ　４１５２の物理化学的性質および生物学的性質を
ＤＦ　４６３９およびそのＨ画分と比較して示す。

（、）　　糖、蛋白、ＳおよびＰ含量（第１表）第１表１）フェノール−硫酸法（ガラクトース換算）２）アン
トノ？ラスの方法（Ｃ，Ａ、Ａｎｔｏｎｏｐｏｕｌｏｓ
。

Ａｃｔａ　Ｃｈｅｍ、５ｃａｎｄ、　１６　、１５２１
　（１９６２）　）による３）ローリ−・７オリン法（牛血清アルブミン換算）４
）チェノらの方法（Ｐ、Ｓ、Ｃｈｅｎ　ｅｔ　ａＬ、、
Ａｎａｌ、Ｃｈ＠ｍ。

２８．１７５８（１９５６））による。

（ｂ）　　ガラクトース、グルコース、硫酸基および燐
の構成モル比検体を１規定硫酸中Ｌ　ＯＯ”Ｃで５時間加水分解しイ
オン交換樹脂で脱塩処理した後、常法によりアルゾトー
ルアセテートとしてガスクロマトグラフィーで分析した
。また、硫酸基および燐のモル比は、ＳおよびＰの含量
（％）から算出した。

第２表第２表は、グルコースを１．０モルとした場合の各成分
のモル比の１例である。

（ｃ）構成アミノ酸およびアミノ糖の同定ＤＳ　４１５
２を３規定塩酸中、１００℃１６時間加水分解した後、
常法によりアミノ酸分析計にて分析した結果、アラニン
、グリシン、グルタミン酸、シアミノピメリン酸、グル
コサミンおよびムラミン酸のピークを認めた。

（ｄ）　　比旋光度：〔α）　”、、　（ｅ　＝０．５
、水）第３表（、）　　グルろ過溶出ノＱターン第１図、第２図および第３図に、それぞれＤＳ　４１５
２、ＤＦ　４６３９および３画分の高速グル濾過クロマ
トグラムを示す（東洋ソーダ製Ｇ３０００　　ｓｗカラ
ム使用、溶媒ＱＩＭ酢酸カリウム緩衝液ｐＨａ５、ａ　
９ｄ／分、標準物質デキストランＴ−１０およびＴ−４
０）。

（ｆ）　　紫外部吸収スペクトル２　ｍ９　／　ｄ水溶液において２２０〜３４０　ｎｍ
に極大吸収Ｆｉ認められない。

（ｇ）　　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠）１２４０
．８４０（肩）および８１０ｃｍ−’に、硫酸化多糖に
特徴的な吸収を示す。

ＤＳ４１５２の構造としては、主としてＤ−ガラクトー
スとＤ−グルコースから成る糖質部分にムラミン酸フォ
スフェートを介してペゾチドグリカン部の結合した硫酸
化多糖体であると推定される。

（ｈ）　　発熱性試験日本薬局方（第１０改正）に準じて行った発熱性試験の
結果を第４表に示す。

以下余白（ｉ）　　ＤＳ　４１５２の急性毒性（マウス、静注）
は、ＬＤ、ｏが２０００ｍ９／ｋｐ以上テアツタ。

実施例１（Ｂ）ＤＦ　４６３９　（ａｏ　ｔ　）を３００−の水−エタ
／−ル（１０：３）溶媒に溶解し、ＹＭＩＯ膜（４ｘ、
５ｃＩＩｔ２．７　ミ＝Ｆ　７社Ｈ）　ｅ用イテ、窒素
テ加圧（′Ｌ５１Ｃ９／ｃ！ＩＬ２）下、室温で限外濾
過した。上記溶媒を追加しながら透過液量が約３ｔとな
るまで実施した。透過液の濃縮液（約５０＋ｕ／）に１
００１１１９の酢酸ナトリウムを加えて溶解した後、遠
心分離により得られる上清を約５００ｍ／のエタノール
中へ攪拌下滴下した。生成した沈澱を集め、９０％エタ
ノール、エタノール、アセトンの順に洗った後、減圧乾
燥（５５°Ｃ，５時間）してＤＳ　４１５２の白色粉末
３３Ｆを得た。

このものの物理化学的性質は、次に示す糖、蛋白、Ｓ及
びＰの含量を除き、実施例１（Ａ）のＤＳ　４１５２と
同一であった。

糖含量　　５８％Ｓ含量　　１１．３％蛋白含量　０９％Ｐ含量　　０．９２％高速グルｆ過クロマトグラムを第４図に示す（Ｇ３００
０　　ＳＷカラム、ＱＩＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐａ
ａ５）、Ｑ８ｉＥ／／分）。

実施例２鶏胚漿尿膜血管新生阻止試験（直接法）：鶏胚を用い、
ティラーとフォークマン（Ｎａｔｕｒｅ　２９７　：　３０７．（１９８２）　
）の方法を一部改良した以下の方法で行った。

鶏（ノーリンクロス）の４〜５日齢受精卵の漿尿膜に１
生理食塩水で溶解したＤＳ　４１１５２又はへ／９リン
を添加し、３７℃で培養した。

薬物添加２日後に、漿尿膜血管の発達塵を生理食塩水の
みを添加した対照と比較し、プロビット法により、５０
％血管新生阻止量（ＩＤ５゜値）を算出した。

この結果、本発明のＤＳ　４１５２のＩＤ、。値は、１
６０ｎｆであった。これに対し、へ、Ｑリンは、１００
μ？でも作用を示さなかった。

実施例３鶏胚漿尿膜血管新生阻止試験（直接法）：実施例２と同
様にして、ステロイドとＤＳ　４１５２を併用した場合の効果について調べた。

ステロイドとしては、酢酸コーチシンを０５μｆ／鶏胚
のｉｔ（血管新生に影響のない量）用いた。また、比較
として、　ＤＦ　４６３９及びＨ画分についてもその活
性を調べた。この結果を第５表に示す。

第５表５０％血管新生阻止量（ＩＤ、。値）実施例４実施例２と同様な方法で、各種ステロイドとＤＳ　４１
５２の併用によるＩＤ、。値の変化を検討した。この結
果、種々のステロイドに１０ｎ２のＤＳ　４１５２　　
を加えれば、それぞれの鶏胚漿尿膜血管新生阻止活性が
１６〜１００倍に増加することが明らかとなった（第６
表）。

第６表実施例５血管新生阻止作用（・ＸｖＩｖｏ法）：ＤＳ　４１５２
を生理食塩水に溶解し、　　ＩＣＲ系雄マウスに皮下も
しくは経口で投与し、６時間後に血液を採取した。０３
１３％クエン酸ナトリウムで凝固を阻止し、直接法と同
様に５日齢受精鶏卵漿尿膜に添加し、２日後に判定した
。この結果を第７表に示す。

第７表この結果から明らかなように、用量依存的な血管新生抑
制作用が認められた。

実施例６血管新生阻止作用（ｅｘ　ｖｉｖｏ法）：実施例５と同
様にして、ステロイドとＤＳ　４１５２を併用した場合の効果について調べた。

ステロイドとしては、酢酸コーチシンを５■／ゆの割合
で用い、ＤＳ　４１５２は３０１Ｅｇ／に９又は３００
■／ゆとなるよう調整して加えた。また、比較としてＤ
ｒ　４６３９及びＨ画分を用いた。この結果を第８表に
示す。なお、表中の数値は、生理食塩水を同量投与した
対照マウスよシ採取した血液を添加した漿尿膜血管の発
達度を１００％とした時の阻止率である。

第８表ＤＳ　４１５２およびＤＦ’　４６３９は経口、皮下い
ずれの経路によっても漿尿膜血管新生を抑制することが
認められた。

実施例７血管新生阻止作用（ａｘ　ｖｉｖｏ法）：ＩＣＲ系雄マ
ウスに、生理食塩水に溶解したＤＳ　４１５２を経口投
与した。ステロイドは、ＤＳ　４１５２と共にまたは単
独で、生理食塩水に懸濁して経口または筋肉内投与した
。

投与６時間後に採血し、０３１３％クエン酸ナトリウム
で凝固を阻止し、これを直接法と同様に５日齢受精卵漿
尿膜に加え、２日後に血管新生に及ぼす効果を判定した
。結果は、同量の生理食塩水のみを投与したマウスの、
６時間経過後の血液を加えた場合の漿尿膜血管の発達度
を対照とし、阻止百分率で示した。

この結果は第９表の通りである。

以下余白実施例８抗腫瘍試験：Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスに同系の卵巣由来腹水腫瘍Ｍ５
０７６をｔ　ｘ　ｔ　ｏ’個皮下接種し、５日目よシＤ
Ｓ　４１５２を３０Ｗｇ／ゆ１日１回週６回皮下投与し
たところ、著名な抗腫瘍効果と生存日数の有意な延長が
認められた。すなわち第１０表に示すように移植２１日
目の腫瘍平均重量は対照群の３７％（６３％抑制）であ
シ、かつメディアン生存日数が対照群よ９３３％延長し
た。

本腫瘍平均重量は、腫瘍塊の長軸と短軸の長さを測定し
、以下の式から求めた。

腫瘍平均重量＝（長軸）×（短軸）２×−実施例９抗腫瘍試験：ＩＣＲ系雄マウス（５週齢）Ｋ：ザルコーマ１８０（８
１８０）をｔ　ｘ　ｔ　ｏ’個皮下接種し、３日目より
酢酸コーチシンの生理食塩水懸濁液を２５Ｏｒ！ｔｇ／
１ｗ／日の割合で３日間、１００■／ｋＩＦ／日の割合
で１日投与した。

ＤＳ　４１５２は生理食塩水に溶解し、Ｑ６１もしくは
６．１■／マウスとなる様１日１回皮下もしくは経口に
て４日間投与した。移植７日目に屠殺して腫瘍重量を対
照と比較したところ第１１表に示す如く酢酸コーチシン
のみを投与した群では腫瘍重量は生理食塩水投与群と差
がなかったが、さらにＤＳ　４１５２を投与することに
より顕著な増殖阻止作用が得られ、対照群の腫瘍重量の
６．９〜１７５％であった。

第１１表＊　Ｐ　＜　Ｑ　Ｏ５ｓ　　林Ｐ＜ＱＯＬ　　スチュー
デントを一検定による実施例１゜顆粒剤：ＤＳ４１３２６Ｗｔ９、乳糖３００Ｒｇ、トウモロコシ
デンプン１４４ｒＲｇ、カルゲキシメチルセルロースカ
ルシウム３０Ｒ９及びヒドロキシゾロビルセルロース２
０Ｒｇを用い、常法に従って５００■の顆粒剤を調製し
た。この顆粒剤は症状にあわせて１日５００Ｒｇ〜５ｆ
を服用する。

実施例１１注射剤：ＤＳ　４１５２　　１２ｍｇ、塩化ナトリウム９０■を
注射用蒸留水に溶解し、１０ｄとする。

この溶液をメンブランフィルタ−で濾過した後、アンプ
ルに充填し、１１５℃で３０分間滅菌し注射剤とする〇実施例１２錠剤：ＤＳ　４１５２　６ｍ９、プレドニゾロン２０１ＩＩｇ
、乳糖５ｏ＃Ｉｇ、トウーｖ−ｏ：ｒシデンデ７１　ａ
５′Ｒｇ、カル？キシメチルセルロースカルシウム５１
１ｇ、ヒドロキシゾロビルセルロース３ＴＲｇ及びステ
アリン酸マグネシウム０５嘘を常法に従って混合、打錠
し、１錠とする。

【図面の簡単な説明】

第１図ないし第４図は高速ダルｒ過りロマトダラムであ
る。以上第１図第２図溶出時間（分）

Claims

【特許請求の範囲】１、ナトリウム塩として下記の物理化学的性質を有する
硫酸化多糖体ＤＳ４１５２。（１）分子量（ゲルろ過法による）２９，０００±３，０００（２）元素分析値Ｃ２４．４２〜２５．７６％Ｈ３．３４〜３．９８％Ｎ
０．５１〜０．８９％Ｓ１０．６〜１１．７％Ｐ０．７
７〜１．０６％（３）糖および蛋白質の含量糖含量（％）：５７±３（フェノール−硫酸法、ガラク
トース標準）蛋白含量（％）：１±０．５（ローリー・フオリン法、
牛血清アルブミン標準）（４）比旋光度〔α〕＾２＾５＿Ｄ−３７°±１°（０．５％水溶液）
（５）赤外線吸収スペクトルにおける主要吸収帯１２４
０、８４０（肩）、８１０（ｃｍ＾−＾１；ＫＢｒ）（
６）溶解性水に易溶。エーテル、ベンゼン、クロロホルム、メタノール、エタノール等の有機溶媒には殆ど不
溶。（７）呈色反応フェノール−硫酸、アンスロン−硫酸、ビュレット反応およびローリー・フオリン反応は陽性。水
解液のエルソン・モルガン反応およびニンヒドリン反応
も陽性。カルバゾール反応および坂口反応は陰性。（８）塩基性、中性、酸性の区別ｐＨ６〜８（３％濃度水溶液）（９）構成糖および硫酸基、燐の含量Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、ＳＯ＿３Ｎａおよ
びＰ（燐）の含有モル比はＤ−グルコースを１０として
それぞれ約１０：６１：７３：６である。（１０）構成アミノ酸およびアミノ糖酸加水分解物のアミノ酸分析計による分析で、アラニン、グリシン、グルタミン酸、ジアミノピメ
リン酸、グルコサミンおよびムラミン酸の存在を認める
。２、硫酸化多糖体ＤＳ４１５２を有効成分として含有す
る血管新生抑制剤。３、リューマチ性関節炎、増殖性網膜炎、乾癬、糖尿性
網膜炎、未熟児網膜症に有効な特許請求の範囲第２項記
載の血管新生抑制剤。４、硫酸化多糖体ＤＳ４１５２を有効成分として含有す
る抗腫瘍剤。５、硫酸化多糖体ＤＳ４１５２と、ステロイド剤とを有
効成分として含有する血管新生抑制剤。６、ステロイドが糖質コルチコイド類、黄体ホルモン類
、エストラン類及びアンドロスタン類から選ばれたもの
である特許請求の範囲第５項記載の血管新生抑制剤。７、リューマチ性関節炎、増殖性網膜炎、乾癬、糖尿性
網膜炎、未熟児網膜症に有効な特許請求の範囲第５項記
載の血管新生抑制剤。８、硫酸化多糖体ＤＳ４１５２と、ステロイド剤とを有
効成分として含有する抗腫瘍剤。