JPS63116699A - モノクロ−ナル抗体および真菌病原体の検出方法 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体および真菌病原体の検出方法Info
- Publication number
- JPS63116699A JPS63116699A JP61254569A JP25456986A JPS63116699A JP S63116699 A JPS63116699 A JP S63116699A JP 61254569 A JP61254569 A JP 61254569A JP 25456986 A JP25456986 A JP 25456986A JP S63116699 A JPS63116699 A JP S63116699A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- antigen
- item
- antibody
- complex
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 title description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 title 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 49
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 36
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 36
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 241001450594 Pichiaceae Species 0.000 claims description 17
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 14
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 13
- 241000233639 Pythium Species 0.000 claims description 13
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 10
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 9
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 9
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 8
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 7
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims 2
- 241000875883 Phytopythium vexans Species 0.000 claims 1
- 241000233612 Pythiaceae Species 0.000 claims 1
- 241001505297 Pythium irregulare Species 0.000 claims 1
- 241000918584 Pythium ultimum Species 0.000 claims 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 4
- 241001518640 Sclerotinia homoeocarpa Species 0.000 abstract 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 8
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010058643 Fungal Proteins Proteins 0.000 description 4
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 4
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 3
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 3
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 2
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 2
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 244000291564 Allium cepa Species 0.000 description 1
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 1
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 241001323275 Andex Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 1
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 1
- 241000710076 Bean common mosaic virus Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- 125000000824 D-ribofuranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 1
- 244000309456 Decussocarpus nagi Species 0.000 description 1
- 235000008375 Decussocarpus nagi Nutrition 0.000 description 1
- 240000006497 Dianthus caryophyllus Species 0.000 description 1
- 235000009355 Dianthus caryophyllus Nutrition 0.000 description 1
- 241001459693 Dipterocarpus zeylanicus Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000221785 Erysiphales Species 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 208000001126 Keratosis Diseases 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 206010027146 Melanoderma Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000233679 Peronosporaceae Species 0.000 description 1
- 244000082204 Phyllostachys viridis Species 0.000 description 1
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 241000918585 Pythium aphanidermatum Species 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 241000242678 Schistosoma Species 0.000 description 1
- 241000576755 Sclerotia Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N Streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 1
- 241000723681 Tomato ringspot virus Species 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000723798 Tulip breaking virus Species 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N dTMP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- JSRLJPSBLDHEIO-SHYZEUOFSA-N dUMP Chemical compound O1[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 JSRLJPSBLDHEIO-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000007773 growth pattern Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 210000001542 lens epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 235000021018 plums Nutrition 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001373 regressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000032255 sexual sporulation Effects 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/14—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/808—Automated or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は診断植物病理学の分野に関する。ざらに詳しく
は、本発明は1種々の植物病の病因々子であることか知
られている真M類の種々のタクソンの免疫学的検出に関
する。
は、本発明は1種々の植物病の病因々子であることか知
られている真M類の種々のタクソンの免疫学的検出に関
する。
発明の背景
XVS類は群として、多くの植物病の原因となる。
検討の目的から、真菌類は3つの大きな綱(class
1すなわち、子嚢菌類(Ascornycetes)
、担子菌類(Baiidiomyceteりまたは藻
菌類(Phycomyceceりの1つに属するものと
して分類できる。
1すなわち、子嚢菌類(Ascornycetes)
、担子菌類(Baiidiomyceteりまたは藻
菌類(Phycomyceceりの1つに属するものと
して分類できる。
子嚢菌類
この綱のものは、減数***および有性胞子の形成を行な
う分化した生殖構造〔子嚢〕を有する。
う分化した生殖構造〔子嚢〕を有する。
子嚢菌類が病因々子として同定されたより一般的な植物
病の例には、穀物、果実および多くの他の作物のうどん
こ病、ニレ立ち枯れ病、穀類の変角病、桃およびプラム
の褐色菌核病、バラの黒点病およびリンゴ腐敗病が包含
される。
病の例には、穀物、果実および多くの他の作物のうどん
こ病、ニレ立ち枯れ病、穀類の変角病、桃およびプラム
の褐色菌核病、バラの黒点病およびリンゴ腐敗病が包含
される。
担子菌類
この綱のものは、担子として知られる有性胞子形成構造
の存在によって同定される。病原形には黒穂病、さび病
およびキノコのような肉厚種が包含される。例としては
、コムギさび病、ストローブマツざび病、針葉樹のさび
病、コーン、オーツ、大麦、オニオンおよび小麦におけ
る黒穂病が挙げられる。
の存在によって同定される。病原形には黒穂病、さび病
およびキノコのような肉厚種が包含される。例としては
、コムギさび病、ストローブマツざび病、針葉樹のさび
病、コーン、オーツ、大麦、オニオンおよび小麦におけ
る黒穂病が挙げられる。
藻菌類
この綱のものは、子鉢菌類や担子菌類のものに比べて、
より原子的であると考えられ、それらを識別する形態学
的特徴は菌糸に隔壁を欠くことである。この綱のものに
原因する病気の例には、ブドウおよび他の宿主のべと病
、根騙れ病およびジャガイモ、トマトの斑点病か包含さ
れる。
より原子的であると考えられ、それらを識別する形態学
的特徴は菌糸に隔壁を欠くことである。この綱のものに
原因する病気の例には、ブドウおよび他の宿主のべと病
、根騙れ病およびジャガイモ、トマトの斑点病か包含さ
れる。
本発明の背景では、ピチウム(Pythtum) 属の
ものが特−こ重要である。この属についての記載は18
00年代の中Inまでさかのぼり、いくつかのすぐれた
論文が存在し、この属の棟々の種の詳細な分類学的およ
び形態学的記載を与えている〔例工+X、 シイ・エム
・ウォーターハウス、マイコロシカ/l/−ぺiバーズ
(G、M、 w&terhouse 。
ものが特−こ重要である。この属についての記載は18
00年代の中Inまでさかのぼり、いくつかのすぐれた
論文が存在し、この属の棟々の種の詳細な分類学的およ
び形態学的記載を与えている〔例工+X、 シイ・エム
・ウォーターハウス、マイコロシカ/l/−ぺiバーズ
(G、M、 w&terhouse 。
Mycological Papers )、?hl
lO(1968);ジエイ・ティ・ミドルトン、メモリ
ー・トーレーーボタニカ/L/ Iクラブ(J、T、M
iddleEoi: 、Mem。
lO(1968);ジエイ・ティ・ミドルトン、メモリ
ー・トーレーーボタニカ/L/ Iクラブ(J、T、M
iddleEoi: 、Mem。
Torrey bot、 C1ub )、2Q(1)
:1−171(194B)参照〕。ピチウムはビチアセ
アエ(Pythiaccae )科に属し、これには7
つの属および約180の種が含まれる。ピチウムは10
0種以上を含む最も重要な属である。より重要な椎のい
くつかを第1表に総括する。
:1−171(194B)参照〕。ピチウムはビチアセ
アエ(Pythiaccae )科に属し、これには7
つの属および約180の種が含まれる。ピチウムは10
0種以上を含む最も重要な属である。より重要な椎のい
くつかを第1表に総括する。
? ”I−”’??? “ 冑
!シ シ − シ シ シ ン
シ シー 1.1 シ ’、−J
’lj ’J ”、)J
シある種の分類学的矛盾を解消する試みにおいて。
!シ シ − シ シ シ ン
シ シー 1.1 シ ’、−J
’lj ’J ”、)J
シある種の分類学的矛盾を解消する試みにおいて。
クリビースニチェクおよびドルウォルト、カナ子゛′イ
アン・ジャーナル・オブ・ボタニー(Kryiesnc
yzk bヨびDorworth 、 Can、 J−
Botany)5811412(1980)!こより、
いくつかのピチウム種に対するポリクローナル抗血清が
生成され、交差反応性が測定された。研究された9種は
、二重拡散および免疫111気泳動法により相互に対し
てテストした場合のそれらの免疫交差反応性またはその
欠如に基いて、4つの群に分けることかできた。
アン・ジャーナル・オブ・ボタニー(Kryiesnc
yzk bヨびDorworth 、 Can、 J−
Botany)5811412(1980)!こより、
いくつかのピチウム種に対するポリクローナル抗血清が
生成され、交差反応性が測定された。研究された9種は
、二重拡散および免疫111気泳動法により相互に対し
てテストした場合のそれらの免疫交差反応性またはその
欠如に基いて、4つの群に分けることかできた。
ハイブリドーマ・モノクロ−チル抗体法例々の抗原を二
対する締体撫(丈す−る抗体源としての体細胞ハイブリ
ッド細胞系の使用はケーラーおよびミルスタイン、ネー
チャー(Kohler およびMilstein 、
Nature ) 256 : 495−497(19
75)の研究に始渡る。生成された抗体は、通常の免疫
された動物からの抗血清から回収されるものと全く異な
る。各バイブ11ツド細胞株は、in vivoで動物
が抗原やこ応答して合成できる種々様々なタイプの抗体
のたソ1つしか表わさない均質なイムノグロブリンを合
成する。各イムノグロブリン生産クローンは単一タイプ
の抗体を生産することにより特徴づけられるので、モノ
クローナル抗体という語か採用されている。モノクロー
ナル抗体の利点は非常に多く、大短に得ることができ、
抗原反応性か均質で、非常にに時間存続する。
対する締体撫(丈す−る抗体源としての体細胞ハイブリ
ッド細胞系の使用はケーラーおよびミルスタイン、ネー
チャー(Kohler およびMilstein 、
Nature ) 256 : 495−497(19
75)の研究に始渡る。生成された抗体は、通常の免疫
された動物からの抗血清から回収されるものと全く異な
る。各バイブ11ツド細胞株は、in vivoで動物
が抗原やこ応答して合成できる種々様々なタイプの抗体
のたソ1つしか表わさない均質なイムノグロブリンを合
成する。各イムノグロブリン生産クローンは単一タイプ
の抗体を生産することにより特徴づけられるので、モノ
クローナル抗体という語か採用されている。モノクロー
ナル抗体の利点は非常に多く、大短に得ることができ、
抗原反応性か均質で、非常にに時間存続する。
ハイブリドーマ/モノクローナル抗体法の原理は、2つ
の体細胞を融合させる場合、生じるバイア’llツドは
両方の親細胞タイプの特徴ケ示すという観察に基いてい
る。モノクロナール抗体生産の場合、ある抗体を合成す
る能力は免役された供給動物から取った免疫】開路細胞
(通常、膵臓細胞〕から由来し、−万、細胞培養中で連
続的に***する能力は他の融合パートナ−である腫Mf
細胞系(しばしば骨髄腫〕か寄与している。初期の融合
は、骨髄腫細胞系もモノクロナール抗体馨生顔し、した
がって、ハイブリッドがしばしば、骨髄腫起源のものと
、免疫適格細胞の遺伝情報によって管理されるもう】つ
のものとの2つのモノクローナル(12〕 抗体を生産するという事実によって複雑であった。
の体細胞を融合させる場合、生じるバイア’llツドは
両方の親細胞タイプの特徴ケ示すという観察に基いてい
る。モノクロナール抗体生産の場合、ある抗体を合成す
る能力は免役された供給動物から取った免疫】開路細胞
(通常、膵臓細胞〕から由来し、−万、細胞培養中で連
続的に***する能力は他の融合パートナ−である腫Mf
細胞系(しばしば骨髄腫〕か寄与している。初期の融合
は、骨髄腫細胞系もモノクロナール抗体馨生顔し、した
がって、ハイブリッドがしばしば、骨髄腫起源のものと
、免疫適格細胞の遺伝情報によって管理されるもう】つ
のものとの2つのモノクローナル(12〕 抗体を生産するという事実によって複雑であった。
その後、それ自体のモノクローナルを生産できないM8
瘍細胞系、例えば、8 P2 / 0− Agl 4
またはX63−八g 8.653が用いられ、それに
より、得られた融合生成物の分析が簡単になった。
瘍細胞系、例えば、8 P2 / 0− Agl 4
またはX63−八g 8.653が用いられ、それに
より、得られた融合生成物の分析が簡単になった。
他の技術的考rハには、2つのタイプの親細胞からの成
功した融合事象(ハイブリッド細胞)を選択するための
理論的根拠がある。通常、融合爽験法では、百方または
それ以上の各タイプの細J@か用いられ、融合は100
%の頻度では起らないので、未融合または自己融合親細
胞の高バックグラウンドから融合生成物を回収する仕事
は非常に回帰なものである。前ご己のごとく、ハイブリ
ドーマは魚介抗体生産(肺臓)細胞および使命骨髄腫細
胞の融合によって形成される。望ましい結果は、抗体を
生産する長命細胞系である。膵臓細胞は培養中、有限の
寿命ン有するので、単に、全ての未融合または自己融合
肺臓細胞が死滅する適当な時間待つことができる。しか
し、やはり、得られた集団の長命抗体非生産細胞から長
命抗体生産細胞を回収しなければならない。ハイブリッ
ド細胞の一般的選択手段は、いわゆる)l A T−選
択系である。この系は、酵素ヒポキサンチン−グアニン
−ホス小リボシル・トランスフェラーゼ(HG P R
T )の使用を包含する。この酵素は哺乳動物細胞にお
けるプリン回収経路で機能する。これらの細胞は覧だ−
からプリンを合成する能力を有している。
功した融合事象(ハイブリッド細胞)を選択するための
理論的根拠がある。通常、融合爽験法では、百方または
それ以上の各タイプの細J@か用いられ、融合は100
%の頻度では起らないので、未融合または自己融合親細
胞の高バックグラウンドから融合生成物を回収する仕事
は非常に回帰なものである。前ご己のごとく、ハイブリ
ドーマは魚介抗体生産(肺臓)細胞および使命骨髄腫細
胞の融合によって形成される。望ましい結果は、抗体を
生産する長命細胞系である。膵臓細胞は培養中、有限の
寿命ン有するので、単に、全ての未融合または自己融合
肺臓細胞が死滅する適当な時間待つことができる。しか
し、やはり、得られた集団の長命抗体非生産細胞から長
命抗体生産細胞を回収しなければならない。ハイブリッ
ド細胞の一般的選択手段は、いわゆる)l A T−選
択系である。この系は、酵素ヒポキサンチン−グアニン
−ホス小リボシル・トランスフェラーゼ(HG P R
T )の使用を包含する。この酵素は哺乳動物細胞にお
けるプリン回収経路で機能する。これらの細胞は覧だ−
からプリンを合成する能力を有している。
多くの条件下、多分1両方の経路が働いている。
もし、細胞がHGPRTY欠く場合、1収経路は遮断さ
れ、プリンは非プリン物簀から製造しなげればならない
。
れ、プリンは非プリン物簀から製造しなげればならない
。
8−アザグアニンは、グアニンをプリンと見せかけ、そ
の旧常な反応のいくらかでプリンと置換させることので
きる抗代間1物である。アザグアニンはDNA中に取り
込Jれ、正常な増殖パターンを干渉し、細胞を致死させ
る。アザグアニンは回収されるはずであるから、HGP
RT活性を欠くいずれの細胞もアザグアニン?利用でき
ず、その存在下で増殖する。
の旧常な反応のいくらかでプリンと置換させることので
きる抗代間1物である。アザグアニンはDNA中に取り
込Jれ、正常な増殖パターンを干渉し、細胞を致死させ
る。アザグアニンは回収されるはずであるから、HGP
RT活性を欠くいずれの細胞もアザグアニン?利用でき
ず、その存在下で増殖する。
同じ酵素に作用するか、)IGPRT陽性細胞を選択す
る点で逆のセンスの選択系がジエイ・ダブリユウ・リト
ルフィールド、ザイエンス(J、W。
る点で逆のセンスの選択系がジエイ・ダブリユウ・リト
ルフィールド、ザイエンス(J、W。
Littlefield、 5cience )1
45 : 7(19(1964)により記載されて
いる。これはIIATと称され、ヒポキサンチン、アミ
ノプテリンおよびチミジン(HA T培地)を含む。ア
ミノプテリンは−からのプリン合成およびデオキシウリ
ジレートのメチル化によるチミジレートの形成を防ぐ抗
代謝物である。了ミノプテリンか−からのプリン生合成
なaiWTL、チミジンか子ミジレートのメチル化の必
要性を回避する結果、ヒポキサンチンが回収できるプリ
ンとして役立つことができる。かくして、アミノプテリ
ンの存在下、HGPRT活性の陽性ないずれの細胞も増
殖し、−万、HGPRT活性陰性細胞は致死する。
45 : 7(19(1964)により記載されて
いる。これはIIATと称され、ヒポキサンチン、アミ
ノプテリンおよびチミジン(HA T培地)を含む。ア
ミノプテリンは−からのプリン合成およびデオキシウリ
ジレートのメチル化によるチミジレートの形成を防ぐ抗
代謝物である。了ミノプテリンか−からのプリン生合成
なaiWTL、チミジンか子ミジレートのメチル化の必
要性を回避する結果、ヒポキサンチンが回収できるプリ
ンとして役立つことができる。かくして、アミノプテリ
ンの存在下、HGPRT活性の陽性ないずれの細胞も増
殖し、−万、HGPRT活性陰性細胞は致死する。
本発明における選択に用いるハイブリッド系では、骨髄
細胞はアザグアニンに耐性であり、アミノプテリンに感
受性で、すなわち、これらはHGPRT陰性である。し
たかって、これらはアミノプテリンの存在下、致死する
。抗体生産細胞は■1GPRT陽性である。細胞を融合
させ、アザグアニンのない)i A T培地(HT培地
)で増殖させることにより、融合に成功した細胞が選択
される。
細胞はアザグアニンに耐性であり、アミノプテリンに感
受性で、すなわち、これらはHGPRT陰性である。し
たかって、これらはアミノプテリンの存在下、致死する
。抗体生産細胞は■1GPRT陽性である。細胞を融合
させ、アザグアニンのない)i A T培地(HT培地
)で増殖させることにより、融合に成功した細胞が選択
される。
なぜならば、増殖糸を構成する骨髄細胞はHG PRT
活性の存在下でしか増殖できず、また、この活性はHG
PRT陽性細胞系によって供給されるはずであるからで
あ乙。抗体生1HGPRT陽性細胞系はこの培地では致
死しない。これらはある期間生存するが、増殖しない。
活性の存在下でしか増殖できず、また、この活性はHG
PRT陽性細胞系によって供給されるはずであるからで
あ乙。抗体生1HGPRT陽性細胞系はこの培地では致
死しない。これらはある期間生存するが、増殖しない。
かくして、)iAT培地中で細胞を融合することにより
、骨髄腫細胞と抗体生産細胞か、ハイブリッド細胞を生
M7するに充分な時間増殖でき、かつ、ハイブリッド細
胞だけが生存し、増殖できる系が得られる。選択後、各
ハイブリドーマ・クローンを、その所望の抗体生産能に
ついてスクリーニングする。
、骨髄腫細胞と抗体生産細胞か、ハイブリッド細胞を生
M7するに充分な時間増殖でき、かつ、ハイブリッド細
胞だけが生存し、増殖できる系が得られる。選択後、各
ハイブリドーマ・クローンを、その所望の抗体生産能に
ついてスクリーニングする。
ハイブリドーマ/モノクローナル抗体法は非常に成功し
ており、1つの表れとして、米国特許商標局の分類シス
テム中の1つのサブクラス全体(4251548)かモ
ノクローナル抗体に与えられていることが挙げられる。
ており、1つの表れとして、米国特許商標局の分類シス
テム中の1つのサブクラス全体(4251548)かモ
ノクローナル抗体に与えられていることが挙げられる。
モノクローナル抗体技術の分野における活動の例は、ウ
ィルスに対するモノクローナル抗体の製法に関する米国
特許第4196265号、ハイブリドーマの培賛法およ
びハイブリダイゼーションの増加法に関する米国特許第
4404279号、および免疫する前に抗原調製物をあ
る種のモノクローナル抗体で予備吸着するモノクローナ
ル抗体の製法に関する米国特許第4427653号であ
る。余すところのないリストではないか、モノクローナ
ル抗体はつぎの抗原に対して開発されている。
ィルスに対するモノクローナル抗体の製法に関する米国
特許第4196265号、ハイブリドーマの培賛法およ
びハイブリダイゼーションの増加法に関する米国特許第
4404279号、および免疫する前に抗原調製物をあ
る種のモノクローナル抗体で予備吸着するモノクローナ
ル抗体の製法に関する米国特許第4427653号であ
る。余すところのないリストではないか、モノクローナ
ル抗体はつぎの抗原に対して開発されている。
トレポネ−r 、 ハリジウA (Treponema
pal l idum)(EPO−83302898
,8)、肝炎抗J9.(EPO−83103858,3
)、抗)(−Y(EPQ−83301214,9)、レ
ンズ上皮細胞(EPO−83301176,0)、感層
抗原(1’CT−WO/81101469)、ウロキナ
ーゼ(EPO−83100190,4ン、ヘルペス(E
PO−83400074,7)、ラット肝細胞(EPO
−823064(19,2)、シストゾーマーマンソニ
(Schistosoma mansonf )
(1’cT−WO/83101837)、ライシュマ=
T (Leishnania ) (PCT−WO/
8310178B)%トランスフェリン受容体糖蛋白(
EPO−82305658,5ン、11 ウvH)’因
子(P CT−WO/8310i 118)%ヒト胃癌
の細胞表面抗IJit(EPO−82107155,8
)、アルファ・インターフェロン(PcT−WO/81
/(32899)、T−細胞抗原(■シPO−8130
0047.8八ヒト抑制性工゛−細胞(EPO−803
04348,8)。
pal l idum)(EPO−83302898
,8)、肝炎抗J9.(EPO−83103858,3
)、抗)(−Y(EPQ−83301214,9)、レ
ンズ上皮細胞(EPO−83301176,0)、感層
抗原(1’CT−WO/81101469)、ウロキナ
ーゼ(EPO−83100190,4ン、ヘルペス(E
PO−83400074,7)、ラット肝細胞(EPO
−823064(19,2)、シストゾーマーマンソニ
(Schistosoma mansonf )
(1’cT−WO/83101837)、ライシュマ=
T (Leishnania ) (PCT−WO/
8310178B)%トランスフェリン受容体糖蛋白(
EPO−82305658,5ン、11 ウvH)’因
子(P CT−WO/8310i 118)%ヒト胃癌
の細胞表面抗IJit(EPO−82107155,8
)、アルファ・インターフェロン(PcT−WO/81
/(32899)、T−細胞抗原(■シPO−8130
0047.8八ヒト抑制性工゛−細胞(EPO−803
04348,8)。
植物病に関して、エイチ・ティ・ヒスら、エイ会ニス、
xム、 ニーx (f−1,Tj口u、etal、、
ASMNewす50(3E 99−101(1984
月れそれに対するモノクローナル抗体が開発されている
18mの植物ウィルス41ストしている。これには、カ
ーネーション・エツチド會すングtウィルス、ジャガイ
モ葉巻病ウィルス、ザザーン・ビーン・モザイク病ウィ
ルス、タバコ・モザイク病ウィルス、トマト・輪斑紋病
ウィルスおよびチューリップ・ブレーキング・ウィルス
か包含される。
xム、 ニーx (f−1,Tj口u、etal、、
ASMNewす50(3E 99−101(1984
月れそれに対するモノクローナル抗体が開発されている
18mの植物ウィルス41ストしている。これには、カ
ーネーション・エツチド會すングtウィルス、ジャガイ
モ葉巻病ウィルス、ザザーン・ビーン・モザイク病ウィ
ルス、タバコ・モザイク病ウィルス、トマト・輪斑紋病
ウィルスおよびチューリップ・ブレーキング・ウィルス
か包含される。
真菌類に対するモノクローナル抗体は、当初、ヒトの病
気の診断用に開発された。例えば、英国特許出願GB2
138444Aおよび(ンB2138445Aは、各々
、カンジダ(Candida、 ) オよびγスベルギ
ルス(Aspergillum )と反応性のモノクロ
ーナル抗体に関する。
気の診断用に開発された。例えば、英国特許出願GB2
138444Aおよび(ンB2138445Aは、各々
、カンジダ(Candida、 ) オよびγスベルギ
ルス(Aspergillum )と反応性のモノクロ
ーナル抗体に関する。
発明の開示
本明細臀はビ千了セア工科(腐敗病菌科)の真菌に特異
的に反応性のモノクローナル抗体およびその製法を開示
するものである。この抗体はピチウム属の感染を広範囲
にわたって検出するのに特に有用でε・・、る。
的に反応性のモノクローナル抗体およびその製法を開示
するものである。この抗体はピチウム属の感染を広範囲
にわたって検出するのに特に有用でε・・、る。
本発明はピチアセアエ科の真菌の少なくとも1つの株か
らの抗原に対するモノクロ−・ナル抗体を生成するハイ
ブリドーマに関する。
らの抗原に対するモノクロ−・ナル抗体を生成するハイ
ブリドーマに関する。
もう1つの具体例において、本発明はピチアセアエ科の
真菌の少なくとも1つの抗原に対するモノクローナル抗
体に提供する。
真菌の少なくとも1つの抗原に対するモノクローナル抗
体に提供する。
さらに1つの具体例において、本発明は、ピチアセアエ
科抗原の粗抽出物ケ供給し、(]9) 叔抽出物で動物ン免疫し、 該動物から免疫適格細胞を回収し、 該免疫適格細胞?骨髄腫細胞と融合させてハイブリドー
マを形成させ、 グルタルアルデヒド架橋により検出すべき抗原を固体担
体に固定させることにより、ピチアセアエ抗原に対する
モノクロナール抗体を生産する能力のあるバイブリド−
7を検出し、ついで、アヒシンービオチン酵素免疫測定
法により、該固定した抗原と結合したモノクローナル抗
体の存在を表示することを特徴とするビチアセT工科に
属する真菌の抗原に対するモノクローナル抗体を生産す
る能力′l¥:有するハイブリドーマの調製法を提供す
る。
科抗原の粗抽出物ケ供給し、(]9) 叔抽出物で動物ン免疫し、 該動物から免疫適格細胞を回収し、 該免疫適格細胞?骨髄腫細胞と融合させてハイブリドー
マを形成させ、 グルタルアルデヒド架橋により検出すべき抗原を固体担
体に固定させることにより、ピチアセアエ抗原に対する
モノクロナール抗体を生産する能力のあるバイブリド−
7を検出し、ついで、アヒシンービオチン酵素免疫測定
法により、該固定した抗原と結合したモノクローナル抗
体の存在を表示することを特徴とするビチアセT工科に
属する真菌の抗原に対するモノクローナル抗体を生産す
る能力′l¥:有するハイブリドーマの調製法を提供す
る。
ざらに1つの具体例において、本発明は、ビチγセア工
科に属する真菌種の抗原と、それと反応する能力を有す
る第1の抗体との間で二元複合体を形成させ、 該二元複合体を第2のモノクローナル抗体と接触させて
三元複合体を形11fflさせ、該三元複合体ケ、分析
的に検出可能な免疫試薬と接触させて該三元複合体の存
在な検知し、それにより、該抗原の存在を検出すること
を特徴とする。ビチアセT工科に属する真菌種の抗原を
含有する試料中の該抗原の存在を検出する方法を提供す
る。
科に属する真菌種の抗原と、それと反応する能力を有す
る第1の抗体との間で二元複合体を形成させ、 該二元複合体を第2のモノクローナル抗体と接触させて
三元複合体を形11fflさせ、該三元複合体ケ、分析
的に検出可能な免疫試薬と接触させて該三元複合体の存
在な検知し、それにより、該抗原の存在を検出すること
を特徴とする。ビチアセT工科に属する真菌種の抗原を
含有する試料中の該抗原の存在を検出する方法を提供す
る。
最後の具体例において、本発明は、
抗原抽出手段、
ビチγセア工科の抗原と二元複合体を形成する能力を有
する抗体を固定した固体担体、該二元複合体と反応して
三元複合体音形成するモノクローナル抗体、 三元複合体を検出する手段、および これらを密封状態で受は入れるために仕切られた担体 からなることを特徴とする植物のピチアセアエ感染の免
疫学的診断用キットを提供する。
する抗体を固定した固体担体、該二元複合体と反応して
三元複合体音形成するモノクローナル抗体、 三元複合体を検出する手段、および これらを密封状態で受は入れるために仕切られた担体 からなることを特徴とする植物のピチアセアエ感染の免
疫学的診断用キットを提供する。
本発明は、プチウム・アファニデルマタム(PytbJ
llITlaphanidennattun )に対す
るモノクローナル抗体の製法、該モノクローナル抗体自
体、該抗体奢生産する能力を有するハイブリドーマ細胞
系および該モノクロ−・ナル抗体を用いる植物組繊中の
ピ千T七アエ感染診断法およびそのキットに関する。
llITlaphanidennattun )に対す
るモノクローナル抗体の製法、該モノクローナル抗体自
体、該抗体奢生産する能力を有するハイブリドーマ細胞
系および該モノクロ−・ナル抗体を用いる植物組繊中の
ピ千T七アエ感染診断法およびそのキットに関する。
真菌蛋白の抽出法
25 I) mlフラスコ中、PDB(ポテトφデキス
トロース・ブロス)培地50g1中で真I!lyh:培
養するr一般に、 ピチウム・アフγニデルマタム(P
ythium aphanldermatum (E
dm 、) Fi t z 、 ) 211χ用いる〕
。1週間後、真菌培養物を培地から収集し、Pu5(リ
ン酸緩衝生理食塩水、PH7,4)で2回洗浄する。0
.50m/無鉛ガラスピーズ〔インt<ンデ”ガラス(
IMl’ANDEX)1240ml?:含WfるDYN
O−Ml]1fiKDL300miバ”iチ・子ヤンバ
ーに移す。バッチ−チャンバーの冷却ジャケラトラ冷水
通水で8℃に予冷する。抽出物を300 Orpmで5
分間粉砕し、ついで、バッチ・チャンバーの内容物を5
0m1ポリスチレン試験管に移し、88=34サイズの
ローターを用い、’/ ルハル(5orval l %
C−5B 冷却遠心機中、17000rpm(3454
0g)で遠心分離する。
トロース・ブロス)培地50g1中で真I!lyh:培
養するr一般に、 ピチウム・アフγニデルマタム(P
ythium aphanldermatum (E
dm 、) Fi t z 、 ) 211χ用いる〕
。1週間後、真菌培養物を培地から収集し、Pu5(リ
ン酸緩衝生理食塩水、PH7,4)で2回洗浄する。0
.50m/無鉛ガラスピーズ〔インt<ンデ”ガラス(
IMl’ANDEX)1240ml?:含WfるDYN
O−Ml]1fiKDL300miバ”iチ・子ヤンバ
ーに移す。バッチ−チャンバーの冷却ジャケラトラ冷水
通水で8℃に予冷する。抽出物を300 Orpmで5
分間粉砕し、ついで、バッチ・チャンバーの内容物を5
0m1ポリスチレン試験管に移し、88=34サイズの
ローターを用い、’/ ルハル(5orval l %
C−5B 冷却遠心機中、17000rpm(3454
0g)で遠心分離する。
真菌上溝液を分け、使用するまで凍結する。試料の総蛋
白含量は0.5〜2ダ/ゴの範囲である。
白含量は0.5〜2ダ/ゴの範囲である。
モノクローナル抗体生産
方法はケラ−およびミルスタイン(前出〕およびハンマ
ーリング、ヨーロピアン・ジャーナル・オブーイムノロ
ジイ(Harnnerling 、 Emrr、 J。
ーリング、ヨーロピアン・ジャーナル・オブーイムノロ
ジイ(Harnnerling 、 Emrr、 J。
1面ano1.)71743(1977)によって開発
された方法の変法である。
された方法の変法である。
注射:テスト動物は、米国、マザチューセツツ州、ウイ
ルミントンの千ャールス・リバー中ブリーディング・ラ
ボラドリース赤インコーポレーテッド(Charles
River Br@eding Laboya
tories。
ルミントンの千ャールス・リバー中ブリーディング・ラ
ボラドリース赤インコーポレーテッド(Charles
River Br@eding Laboya
tories。
Inc、、 Wilmington、 Mass、 )
から購入t、り4〜5週令の雌B A L Is /
cマウスである。
から購入t、り4〜5週令の雌B A L Is /
cマウスである。
記1日
第1回注射! PBS緩衝液0.1. ml中、真菌蛋
白0.051%’+フロイントの完全アジュバント0.
11、腹腔門注射。
白0.051%’+フロイントの完全アジュバント0.
11、腹腔門注射。
@22日
@2回注射!前記と同じ。
@36日
第3回注射+PBS、11衝液0.5 ml中、真菌蛋
白0.0251v+フロイントの完全アジュバント0.
05m1 s腹腔同注射。
白0.0251v+フロイントの完全アジュバント0.
05m1 s腹腔同注射。
第38日
融合
膵臓摘出
動物を頚部脱臼によって殺す。牌l1liを摘出し、ダ
ルベツコの変法イーグル培地20vtl中に入れる。
ルベツコの変法イーグル培地20vtl中に入れる。
肺臓を80メツシユ滅菌スクリーン上にのせる。
肺臓を切断し、DMEM(ダルベツコの変法イーグル培
如、ギブコ・ラボラドリース(Gibco Labs、
)カタログ&320−1965)で漕流し、1Qce使
い捨てプラスチック・シリンジからの滅菌プランジャー
で静かにマツサージする。膵臓細胞抽出の金工aを通じ
、スクリーンを連続的にDMEMでリンスする。内容物
’(r50g1l使い捨て遠沈管にピペットで入れ、1
200rpfnで10分間遠心分離する(N温で行なう
)。上溝をデカンテーションし、細胞ベレットを1oW
ll赤血球溶解液(0,33%MI Cg、 0.01
M K)IcO3、Q、 l mM EDTA)で室
温にて90秒間洗浄する。1)MEM40m7で希釈し
て溶解反l6yt停止させる。試料を3分間放置し、上
溝′f&:5(J璽l遠沈管にピペットで取る。遠心分
子a後、ベレットを50震lのDMEMで洗浄し、再び
遠心分離する。最終のベレツ)YDMEM5wlで再懸
濁する。膵臓細胞の少量の試料を保持し、計数および細
胞の生存のチェックケ行なう。膵臓細胞の最適a度は1
(J7細胞/ mlである、骨髄腫細胞(ATCCから
得られる8P2−0−Ag14)を培簀から50ゴフア
ルコン試験管に移す(濃度1 x I Q6細胞/ w
l )。融合用の骨髄腫細胞を遠心分離する( i、
200 rpm にて室温で10分間)、遠心分離後、
上清を透明ガラス・ビー力・−中に捨て、細胞Y D
M E Mで洗浄し、再度遠心分離するC、膵臓細胞を
、洗浄した骨髄腫ペレットχ含有する試験管に加える。
如、ギブコ・ラボラドリース(Gibco Labs、
)カタログ&320−1965)で漕流し、1Qce使
い捨てプラスチック・シリンジからの滅菌プランジャー
で静かにマツサージする。膵臓細胞抽出の金工aを通じ
、スクリーンを連続的にDMEMでリンスする。内容物
’(r50g1l使い捨て遠沈管にピペットで入れ、1
200rpfnで10分間遠心分離する(N温で行なう
)。上溝をデカンテーションし、細胞ベレットを1oW
ll赤血球溶解液(0,33%MI Cg、 0.01
M K)IcO3、Q、 l mM EDTA)で室
温にて90秒間洗浄する。1)MEM40m7で希釈し
て溶解反l6yt停止させる。試料を3分間放置し、上
溝′f&:5(J璽l遠沈管にピペットで取る。遠心分
子a後、ベレットを50震lのDMEMで洗浄し、再び
遠心分離する。最終のベレツ)YDMEM5wlで再懸
濁する。膵臓細胞の少量の試料を保持し、計数および細
胞の生存のチェックケ行なう。膵臓細胞の最適a度は1
(J7細胞/ mlである、骨髄腫細胞(ATCCから
得られる8P2−0−Ag14)を培簀から50ゴフア
ルコン試験管に移す(濃度1 x I Q6細胞/ w
l )。融合用の骨髄腫細胞を遠心分離する( i、
200 rpm にて室温で10分間)、遠心分離後、
上清を透明ガラス・ビー力・−中に捨て、細胞Y D
M E Mで洗浄し、再度遠心分離するC、膵臓細胞を
、洗浄した骨髄腫ペレットχ含有する試験管に加える。
IC1ylピペツトおよび自動ピペッタ−を用い、骨髄
腫および膵臓細胞を静かに再懸濁し、] 200 rp
inにて室温で10分間遠心分離する。遠心分離後、上
溝を捨てる。
腫および膵臓細胞を静かに再懸濁し、] 200 rp
inにて室温で10分間遠心分離する。遠心分離後、上
溝を捨てる。
融合
予め47℃に7]rl温した融合培地、50チPEG(
ポリエチレングリコール) 1.500 (エム・エイ
・バイオプロダクツ、カタログNttl 7−7802
)なりMEMitに懸濁させる。融合培地1mを再懸濁
骨髄腫および肺臓細胞を含有する試験管に30秒間で滴
下する。融合反応の最後の7分でPEGy、=DMEM
で徐々に希釈する。希釈の終りにおいて、試験管Eりの
最終容量は5(JslVC達する。融合の全期間7通じ
、試験管′?:緩かにたたいて適正な混合?保証する。
ポリエチレングリコール) 1.500 (エム・エイ
・バイオプロダクツ、カタログNttl 7−7802
)なりMEMitに懸濁させる。融合培地1mを再懸濁
骨髄腫および肺臓細胞を含有する試験管に30秒間で滴
下する。融合反応の最後の7分でPEGy、=DMEM
で徐々に希釈する。希釈の終りにおいて、試験管Eりの
最終容量は5(JslVC達する。融合の全期間7通じ
、試験管′?:緩かにたたいて適正な混合?保証する。
試験管?涼心分離しく室温にて、1200 rpmで1
(J分間)、上清を除去する。予め加温したH A
T培地(後記) 33 Wllを試験管に加え、試験管
内容物を10がlピペットで懸濁させる。肺臓細胞の最
終濃度は1.4X106細胞である。
(J分間)、上清を除去する。予め加温したH A
T培地(後記) 33 Wllを試験管に加え、試験管
内容物を10がlピペットで懸濁させる。肺臓細胞の最
終濃度は1.4X106細胞である。
細胞を96ウエル・マイクロタイターやプレート〔リム
ブo 、 7 ル+ ウx /l/ (Limbro
tnultiweLl):]の中央の60ウエルに入れ
る。各ウェルに融合骨髄腫/膵臓物質150plを加え
る。ついで、マイクロタイター・プレートの外側のウェ
ル’4HAT培地で満たす。マイクロタイター・プレー
トを、ウォーター・ジーVケット付の37℃の71C0
2インキユベータに入れる。
ブo 、 7 ル+ ウx /l/ (Limbro
tnultiweLl):]の中央の60ウエルに入れ
る。各ウェルに融合骨髄腫/膵臓物質150plを加え
る。ついで、マイクロタイター・プレートの外側のウェ
ル’4HAT培地で満たす。マイクロタイター・プレー
トを、ウォーター・ジーVケット付の37℃の71C0
2インキユベータに入れる。
細胞は4日ごとにH,AT培地YM供給する。目に見え
るハイブリドーマ増殖は7〜iQ日後に表れはじめる。
るハイブリドーマ増殖は7〜iQ日後に表れはじめる。
第2表
HAT培地組成
ダルベツコ変法イーグル培地
ジブコ・ラプス、カタログ〜λ
32(+−1965766zl
L−グルタミニ/(20omM)
100×濃度、ジブコ・ラプス、
カタログ隘320−5030 1.0tsl
ペニシリン/ストレプトマイシン 溶液、10000 μ/w1. 1 (Jj%’/Ml
、シグマ、カタログ?1hP 0781 10w1
アミノプテリン(50X)シグマ、 カタログ凪A−51594ml ヒボキサンチン/チミジン溶液 10w1チミジ
ン、シグマ、カタログ 隘T−925038,8■ ヒポキサンチン、シグマ、 カタログNuH−9377, 136,1■ (滅菌水]、 OOtri添付、滅菌 I N NaOHテpH8,5トスル。)ウシ月汗児血
清、ハツレトン・ト イチェランド・インコーホレイ テッド、カタログ述] 2−10378 20 (J
ulハイブリドーマのスクリーニング 真菌病原体に対する抗体を生じるl)イブリドーマを、
アビジン/ビオチン増幅グルタルアルデヒド・エライザ
CELISA)φフォーマットで、調製したピチウム会
Tファニデルマタム(P。
ペニシリン/ストレプトマイシン 溶液、10000 μ/w1. 1 (Jj%’/Ml
、シグマ、カタログ?1hP 0781 10w1
アミノプテリン(50X)シグマ、 カタログ凪A−51594ml ヒボキサンチン/チミジン溶液 10w1チミジ
ン、シグマ、カタログ 隘T−925038,8■ ヒポキサンチン、シグマ、 カタログNuH−9377, 136,1■ (滅菌水]、 OOtri添付、滅菌 I N NaOHテpH8,5トスル。)ウシ月汗児血
清、ハツレトン・ト イチェランド・インコーホレイ テッド、カタログ述] 2−10378 20 (J
ulハイブリドーマのスクリーニング 真菌病原体に対する抗体を生じるl)イブリドーマを、
アビジン/ビオチン増幅グルタルアルデヒド・エライザ
CELISA)φフォーマットで、調製したピチウム会
Tファニデルマタム(P。
aphaniderrnatum (Ed m 、 )
plt Z 、 )の真菌物質(PBSi衝液中衝止
中llI閲15μg/震l)を用いで同定する。
plt Z 、 )の真菌物質(PBSi衝液中衝止
中llI閲15μg/震l)を用いで同定する。
スクリーニング法
この方法はJil、菌病原体に対する抗体を分泌するバ
イブリド讐マをスクリーニングするエンハンスメント法
に関する。
イブリド讐マをスクリーニングするエンハンスメント法
に関する。
アビジン/ビオチン中グルタルアルデヒドエライサ・ス
クリーニング エライザ−グルタルアルデヒド法 1、グルタルアルデヒド200Al’E各ウエル〔(ム
O:/ (!mnulon ) Iプレート〕に入れ、
55℃で3時間インキュベートシ、室温で冷却し、脱イ
オン(DI)水で3回プレートヲ洗浄する。
クリーニング エライザ−グルタルアルデヒド法 1、グルタルアルデヒド200Al’E各ウエル〔(ム
O:/ (!mnulon ) Iプレート〕に入れ、
55℃で3時間インキュベートシ、室温で冷却し、脱イ
オン(DI)水で3回プレートヲ洗浄する。
2.0.15λtP B S (pI(7,2)で希釈
した抗原200μeを各ウェルに入れる。グルタルアル
デヒド対照用に1列は空のまま残す。混合物を4℃で2
4時間インキュベートし、残った懸濁液乞捨て、II
B Sで3回洗浄する。
した抗原200μeを各ウェルに入れる。グルタルアル
デヒド対照用に1列は空のまま残す。混合物を4℃で2
4時間インキュベートし、残った懸濁液乞捨て、II
B Sで3回洗浄する。
3、(モノ)エタノールアミン溶液200μeを各ウェ
ルに入れ、4℃で2[時間インキュベートし、残った溶
液を捨て、プレート’1IPBsで3回洗浄する。
ルに入れ、4℃で2[時間インキュベートし、残った溶
液を捨て、プレート’1IPBsで3回洗浄する。
4,0.15M PBS(pH7,2) で希釈し
た適当な血清試、H2O0/116’に各ウェルに入れ
、33℃にて湿潤下、2時間インキュベートする。残っ
た溶液を捨て、プレートをPBSで3回洗浄する。
た適当な血清試、H2O0/116’に各ウェルに入れ
、33℃にて湿潤下、2時間インキュベートする。残っ
た溶液を捨て、プレートをPBSで3回洗浄する。
5、 上# ’l’ 吸引L、200#PBSで2回洗
浄する。
浄する。
6、ビメチニル化杭マウスIgG iたはIgM4バ
ーオ年シダーゼ結合γビジン試薬〔ベクター・ラボラl
−13−X (VECTORLABORATORIES
マウス抗1gGまたはIgMHABC試薬〕10g/:
PB8+100A#正常ウマ血清+1滴ビオチニル化h
1マウスIgG 10g1PBS(0゜1%ツイーン〕 ABC試薬A2滴を加える。
ーオ年シダーゼ結合γビジン試薬〔ベクター・ラボラl
−13−X (VECTORLABORATORIES
マウス抗1gGまたはIgMHABC試薬〕10g/:
PB8+100A#正常ウマ血清+1滴ビオチニル化h
1マウスIgG 10g1PBS(0゜1%ツイーン〕 ABC試薬A2滴を加える。
市ちに、ABC試薬B2滴を鉗え、混合し、使用前30
分間放置する。
分間放置する。
7.50μC/ウエルのビオチン/抗マウス溶液を加え
、室温で15分間インキュベートする。
、室温で15分間インキュベートする。
8、混合物を吸引し、200μl PBSで2回洗浄す
る。
る。
9、ABC試薬(前記)750μI/ウエルで加え、室
温で15分間インキュベートし、吸引し、200μg
PBS/ウェルで5回洗浄する。
温で15分間インキュベートし、吸引し、200μg
PBS/ウェルで5回洗浄する。
狛、つぎの基質溶液を200μe/ウエルで加える。
クエン酸塩リン酸塩緩衝液
7.1 g N a 28 P 04 (500ts
l )9.6g クエン酸(500gl) (第1液のPHをクエン酸の添加により、P116.0
に調製する) 50111緩衝液 20elyx=vンジアミン−HCl! 1.2−ベ
ンゼンジアミン(OPD)、シグマP3888167μ
g 3 % H202 混合物を室温で10分間インキュベートし、405 n
mにおける吸収ケ読む。
l )9.6g クエン酸(500gl) (第1液のPHをクエン酸の添加により、P116.0
に調製する) 50111緩衝液 20elyx=vンジアミン−HCl! 1.2−ベ
ンゼンジアミン(OPD)、シグマP3888167μ
g 3 % H202 混合物を室温で10分間インキュベートし、405 n
mにおける吸収ケ読む。
必要な溶液
1、グルタルアルデヒド緩衝液+QJMクエン酸塩緩衝
液中、0.1多グルタルアルデヒド、、炭酸塩(31) 酸衝液(P)19.0)はDI水1g当り、N&2CO
3L5’llおよびN aHcO32,93gからなる
。
液中、0.1多グルタルアルデヒド、、炭酸塩(31) 酸衝液(P)19.0)はDI水1g当り、N&2CO
3L5’llおよびN aHcO32,93gからなる
。
2、PBS−ツイーンjDl水III当り、NaCJ8
、 D ir、 KN2PO40,2g、 i’lk水
NazH1’041,151、KC60,2g。
、 D ir、 KN2PO40,2g、 i’lk水
NazH1’041,151、KC60,2g。
3、(七))エタノールアミン溶液=1〜/ ml溶液
(117DX水1g)。
(117DX水1g)。
サブクローン法
エライザ・テストに苅して陽性の応答を与えるウェルを
限外4釈に付し、ハイブリドーマ細胞の純粋株!培養さ
せる。限外希釈法にζエハイブリドーマの系列希釈の培
養か包含される。各8沢系列は96ウエル墳養プレート
の6〜12ウエルで組立てる。これらのウェルを、つい
で、真菌蛋白に対する特異抗体活性について書テストす
る。陽性ウェルな20w1培養フラスコに移し、大量培
養する。
限外4釈に付し、ハイブリドーマ細胞の純粋株!培養さ
せる。限外希釈法にζエハイブリドーマの系列希釈の培
養か包含される。各8沢系列は96ウエル墳養プレート
の6〜12ウエルで組立てる。これらのウェルを、つい
で、真菌蛋白に対する特異抗体活性について書テストす
る。陽性ウェルな20w1培養フラスコに移し、大量培
養する。
クローンNuPA5111 Fl 1および14PA5
VIF9−Es−C6の特徴づけ クローンNIJ、PA51 I I Fl 1はピチウ
ム・アフy=デルマタム(P 、 aphaniden
natum (Ed s 、)Fitz)に対するIg
M クラスの抗体を分泌する。
VIF9−Es−C6の特徴づけ クローンNIJ、PA51 I I Fl 1はピチウ
ム・アフy=デルマタム(P 、 aphaniden
natum (Ed s 、)Fitz)に対するIg
M クラスの抗体を分泌する。
クローン鬼PA5VIF9−Eg−C6は該真菌に対す
るIgG クラスの抗体を分泌する。
るIgG クラスの抗体を分泌する。
4つの植物病原体に対するグルタルアルデヒド−エンハ
ンスメント拳アビジン/ビオチンーエライサ・スクリー
ニング 酵素′fi笹反応のインキュベーションを室温で行なっ
た。
ンスメント拳アビジン/ビオチンーエライサ・スクリー
ニング 酵素′fi笹反応のインキュベーションを室温で行なっ
た。
−ωN −閃 1へ 0 0 N
寸’−’ !Do ロO、:)、:)
OO、:) ロv ciciss、s、:;o
i O= 6獣 謳 べ 印の 前記の操作で単離されたクローンの2つの反応性をざら
にテストするため、前記のアビジン/ビオチン系ン用い
、IgM分泌タイプであるFilおよびIgG 分泌タ
イプであるF9’&al々の真菌株に対してスクリーニ
ングした。
寸’−’ !Do ロO、:)、:)
OO、:) ロv ciciss、s、:;o
i O= 6獣 謳 べ 印の 前記の操作で単離されたクローンの2つの反応性をざら
にテストするため、前記のアビジン/ビオチン系ン用い
、IgM分泌タイプであるFilおよびIgG 分泌タ
イプであるF9’&al々の真菌株に対してスクリーニ
ングした。
檜 + + +++++ +バ
ー −〜 〜 −−山 −〜(± +
+++++ + 枢 (4υ + + \ +−)十It ++ N 呻 へ 閃 −Q へ Φ
Gへ −−ロ ト の ロ
ロ ロロ ロ ロ ロ ロ
ロ ロ ロ dセ 1口 +++ + + + ++
1− 膿 トCo M u”+
ooeq ■卜
ト I +++ 1 ψ 閃 啼 へ 啼
哨(4;す さらに実験な行なってF9およびFIX上清の他のピチ
アセアエ科の真菌との反応性を証明した。
+++++ + 枢 (4υ + + \ +−)十It ++ N 呻 へ 閃 −Q へ Φ
Gへ −−ロ ト の ロ
ロ ロロ ロ ロ ロ ロ
ロ ロ ロ dセ 1口 +++ + + + ++
1− 膿 トCo M u”+
ooeq ■卜
ト I +++ 1 ψ 閃 啼 へ 啼
哨(4;す さらに実験な行なってF9およびFIX上清の他のピチ
アセアエ科の真菌との反応性を証明した。
実験は前記F9およびFilクローンから由来したもう
1組の上清Y用いた。絶対的な吸光度は前記のもの釦は
匹敵しないが、反応性のパターンは同じである。これら
の実験は、F9およびFIXクローンによって生産され
たモノクローン抗体がブイドブ−トラ(Phytopt
hora )属の真菌とも反応することを示している。
1組の上清Y用いた。絶対的な吸光度は前記のもの釦は
匹敵しないが、反応性のパターンは同じである。これら
の実験は、F9およびFIXクローンによって生産され
たモノクローン抗体がブイドブ−トラ(Phytopt
hora )属の真菌とも反応することを示している。
+ + + + +
+ + + +I本発明の実施に有用な
株の寄託 以下のハイブリドーマの寄託11985年3月14日お
よび1985年7月18日に、メリーランド州、ロック
ビル、バークローン・ドライブ、12301のアメリカ
ン船タイプーカルチャー・コレクションに行ない、生存
試験および必要な手数料納付後、以下の寄託番号を付与
された。
+ + + +I本発明の実施に有用な
株の寄託 以下のハイブリドーマの寄託11985年3月14日お
よび1985年7月18日に、メリーランド州、ロック
ビル、バークローン・ドライブ、12301のアメリカ
ン船タイプーカルチャー・コレクションに行ない、生存
試験および必要な手数料納付後、以下の寄託番号を付与
された。
ハイブリドーマ ATCC凪Bulbs
/SP2 P^5111ムrxx 8750
旧tlbg/SP2 PAVIF9−E8−C6887
8真菌病原体の検出および検出用キット 本発明は+j:J記のモノクロ−プル抗体のピチアセア
エ科感染の検出系における使用も含む。すなわち、核微
生物感染の疑いのある植物物質の試料を、磨砕によるよ
うな物理的破壊を行ない、得られた粗抽出物な本望たは
緩衝液中で希釈することによる抽出操作に付す。粗抽出
物の試qを、検出すべき微生物の抗原決定因子と特異的
に反応する第1のり1体と接触させる。好ましくは、抗
体をマイクロタイター・プレート壁のような固体担体上
に固定化する。抗体はモノクローナル抗体でも、ポリク
ローナル血清の1成分でもよい。洗浄して未反応物質を
除去した後、得られた三元複合体(抗原−抗体複合体)
を、検出すべき抗原と特異的に反応するモノクローナル
抗体と接触させる。当然、@1の抗体としてモノクロー
ナル抗体を用いた場合は、決定因子が抗原中に複コピー
で存在することが示されないかぎり%第2のモノクロー
ナルは第1のモノクローナルとは異なる決定因子と反応
性のものでなければならない。固定二元複合体に第2の
モノクローナル抗体を接触させることにより、三元複合
体が形成される。二元複合体と結合しなかったいずれの
第2の抗体をも洗浄除去した後、該三元複合体は種々の
分析技術により検出することができる。第2のモノクロ
ーナル44接ラベルして三元複合体を示すことができる
。別法として、前記のエライサ系を用いることができ、
ここでは、三元複合体をビオチン・ラベル抗イムノグロ
ブリンと反応させ、ついで、反応生成物をアビジン酵素
試薬と接触させる。−度反応したら、酵素の基質Y7J
Oえ、酵素反応生成物を検出し、微生物望たはそれから
の抗原の存在を示す。
/SP2 P^5111ムrxx 8750
旧tlbg/SP2 PAVIF9−E8−C6887
8真菌病原体の検出および検出用キット 本発明は+j:J記のモノクロ−プル抗体のピチアセア
エ科感染の検出系における使用も含む。すなわち、核微
生物感染の疑いのある植物物質の試料を、磨砕によるよ
うな物理的破壊を行ない、得られた粗抽出物な本望たは
緩衝液中で希釈することによる抽出操作に付す。粗抽出
物の試qを、検出すべき微生物の抗原決定因子と特異的
に反応する第1のり1体と接触させる。好ましくは、抗
体をマイクロタイター・プレート壁のような固体担体上
に固定化する。抗体はモノクローナル抗体でも、ポリク
ローナル血清の1成分でもよい。洗浄して未反応物質を
除去した後、得られた三元複合体(抗原−抗体複合体)
を、検出すべき抗原と特異的に反応するモノクローナル
抗体と接触させる。当然、@1の抗体としてモノクロー
ナル抗体を用いた場合は、決定因子が抗原中に複コピー
で存在することが示されないかぎり%第2のモノクロー
ナルは第1のモノクローナルとは異なる決定因子と反応
性のものでなければならない。固定二元複合体に第2の
モノクローナル抗体を接触させることにより、三元複合
体が形成される。二元複合体と結合しなかったいずれの
第2の抗体をも洗浄除去した後、該三元複合体は種々の
分析技術により検出することができる。第2のモノクロ
ーナル44接ラベルして三元複合体を示すことができる
。別法として、前記のエライサ系を用いることができ、
ここでは、三元複合体をビオチン・ラベル抗イムノグロ
ブリンと反応させ、ついで、反応生成物をアビジン酵素
試薬と接触させる。−度反応したら、酵素の基質Y7J
Oえ、酵素反応生成物を検出し、微生物望たはそれから
の抗原の存在を示す。
検出を容易にするため、種々の試薬をキットの形で提供
する。
する。
時計111人 フランク−ビータ−県ビーターセン(ほ
か3名]
か3名]
Claims (22)
- (1)ピチアセアエ(Pythiaceae)科の真菌
の少なくとも1つの抗原に対するモノクローナル抗体。 - (2)ピチアセアエ科の少なくとも20株からの抗原と
複合体形成能を有する前記第(1)項のモノクローナル
抗体。 - (3)該抗体がIgGまたはIgMクラスである前記第
(1)項または(2)項のモノクローナル抗体。 - (4)該モノクローナルが分析的に検知できる試薬でラ
ベルされた前記第(1)項〜第(3)項いずれか1つの
モノクローナル抗体。 - (5)該試薬が螢光染料、放射能または酵素である前記
第(4)項のモノクローナル抗体。 - (6)該モノクローナル抗体が固体担体に固定されてい
る前記第(1)項〜第(5)項いずれか1つのモノクロ
ーナル抗体。 - (7)ハイブリドーマから製造される前記第(1)項〜
第(6)項いずれか1つのモノクローナル抗体。 - (8)モノクローナル抗体生産条件下でハイブリドーマ
を培養することにより製造される前記第(7)項のモノ
クローナル抗体。 - (9)ハイブリドーマがATCC8878または875
0の特徴を有する前記第(7)項または第(8)項のモ
ノクローナル抗体。 - (10)ピチアセアエ科の真菌の少なくとも1つの株か
らの抗原に対するモノクローナル抗原を生産するハイブ
リドーマ。 - (11)ATCC8878または8750の特徴を有す
る前記第(10)項のハイブリドーマ。 - (12)ピチアセアエ科抗原の粗抽出物を供給し、該抽
出物で動物を免疫し、 該動物から免疫適格細胞を回収し、 該免疫適格細胞を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドー
マを形成させ、 グルタルアルデヒド架橋により検出すべき抗原を固体担
体に固定させることにより、ピチアセアエ科抗原に対す
るモノクロナール抗体を生産する能力のあるハイブリド
ーマを検出し、ついで、アビジン−ビオチン酵素免疫測
定法により、該固定した抗原と結合したモノクロナール
抗体の存在を表示することを特徴とするピチアセアエ科
に属する真菌の抗原に対するモノクロナール抗体を生産
する能力を有するハイブリドーマの調製法。 - (13)ピチアセアエ科に属する真菌種の抗原と、それ
と反応する能力を有する第1の抗体との間で二元複合体
を形成させ、 該二元複合体を第2のモノクロナール抗体と接触させて
三元複合体を形成させ、 該三元複合体を、分析的に検出可能な免疫試薬と接触さ
せて該三元複合体の存在を検知し、それにより、該抗原
の存在を検出することを特徴とする、ピチアセアエ科に
属する真菌種の抗原を含有する試料中の該抗原の存在を
検出する方法。 - (14)第1の抗体がモノクローナルまたはポリクロー
ナルである前記第(13)項の方法。 - (15)第1の抗体が固体担体に固定されている前記第
(13)項または第(14)項の方法。 - (16)分析的に検出可能な免疫試薬が第2のモノクロ
ーナル抗体に対して反応性の第3の抗体である前記第(
13)項〜第(15)項いずれか1つの抗体。 - (17)該検出を、ビオチン、放射能、螢光染料または
酵素でのラベルによつて行なう前記第(16)項の方法
。 - (18)ラベルがビオチンで、その存在をアビジンとの
反応で示す前記第(17)項の方法。 - (19)アビジンが酵素と複合体を形成し、該複合体を
、酵素反応生成物の測定によつて検出する前記第(18
)項の方法。 - (20)真菌種がピチウム・アフアニデルマタム、ピチ
ウム、カララタム、ピチウム、シルバチカム、ピチウム
・ウルチマム、ピチウム、パロエカンダルム、ピチウム
、サルピンゴホルム、ピチウム・イレギユラレ、ピチウ
ム・ミリオチルム、ピチウム・ベクサンスまたはフイト
プトラ・パラシチカである前記第(13)項〜第(19
)項の方法。 - (21)抗原抽出手段、 ピチアセアエ科の抗原と二元複合体を形成する能力を有
する抗体を固定した固体担体、 該二元複合体と反応して三元複合体を形成するモノクロ
ーナル抗体、 三元複合体を検出する手段、および これらを密封状態で受け入れるために仕切られた担体 からなることを特徴とする植物のピチアセアエ感染の免
疫学的診断用キット。 - (22)三元複合体検出手段がビオチン−アビジン酵素
結合免疫測定系である前記第(21)項のキット。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/834,198 US4803155A (en) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | Monoclonal antibodies to Sclerotinia homoeocarpa |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63116699A true JPS63116699A (ja) | 1988-05-20 |
Family
ID=25266351
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61254569A Pending JPS63116699A (ja) | 1986-02-27 | 1986-10-24 | モノクロ−ナル抗体および真菌病原体の検出方法 |
JP62046659A Pending JPS62232383A (ja) | 1986-02-27 | 1987-02-27 | モノクロナ−ル抗体および真菌病原菌の検出方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP62046659A Pending JPS62232383A (ja) | 1986-02-27 | 1987-02-27 | モノクロナ−ル抗体および真菌病原菌の検出方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4803155A (ja) |
EP (1) | EP0234501B1 (ja) |
JP (2) | JPS63116699A (ja) |
AT (1) | ATE90381T1 (ja) |
DE (1) | DE3786090D1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5187064A (en) * | 1986-02-27 | 1993-02-16 | Agri-Diagnostics Associates | Monoclonal antibodies and methods for fungal pathogen detection |
US4894328A (en) * | 1986-03-26 | 1990-01-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunodiagnostic test for syphilis and other treponemal infections |
US4879217A (en) * | 1987-04-28 | 1989-11-07 | Agri-Diagnostics Associates | Test for Rhizoctonia brown and yellow patch |
DE69124294T2 (de) * | 1990-06-29 | 1997-11-13 | Ciba Geigy Ag | Monoklonale Antikörper gegen Mycosphaerella-Arten |
US5217871A (en) * | 1990-08-21 | 1993-06-08 | Ciba-Geigy Corporation | Monoclonal antibodies to leptosphaeria nodorum |
US5365360A (en) * | 1991-11-15 | 1994-11-15 | International Business Machines Corporation | Method and apparatus for presenting information contained within a data icon by assigning attributes to various dimensions of the data icon |
US5789183A (en) * | 1992-08-14 | 1998-08-04 | University Of Arkansas | Serological detection and identification of rice blast |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3968239A (en) * | 1975-03-07 | 1976-07-06 | O. M. Scott & Sons Company | Fungicidal compositions containing a phthalonitrile |
US4503143A (en) * | 1982-08-20 | 1985-03-05 | Btc Diagnostics Limited Partnership | Enzyme immunoassay with two-part solution of tetramethylbenzidine as chromogen |
SE8401943L (sv) * | 1983-04-08 | 1984-11-22 | Kureha Chemical Ind Co Ltd | Antikropp till fungi av candida |
-
1986
- 1986-02-27 US US06/834,198 patent/US4803155A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-10-24 JP JP61254569A patent/JPS63116699A/ja active Pending
-
1987
- 1987-02-18 AT AT87102322T patent/ATE90381T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-02-18 EP EP87102322A patent/EP0234501B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-02-18 DE DE8787102322T patent/DE3786090D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-02-27 JP JP62046659A patent/JPS62232383A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US4803155A (en) | 1989-02-07 |
ATE90381T1 (de) | 1993-06-15 |
EP0234501B1 (en) | 1993-06-09 |
EP0234501A3 (en) | 1988-10-05 |
DE3786090D1 (de) | 1993-07-15 |
EP0234501A2 (en) | 1987-09-02 |
JPS62232383A (ja) | 1987-10-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPS6279795A (ja) | モノクロ−ナ抗体および真菌病原体の検出方法 | |
US7871621B2 (en) | Anti-HBs monoclonal antibody | |
JPS63116699A (ja) | モノクロ−ナル抗体および真菌病原体の検出方法 | |
US4879217A (en) | Test for Rhizoctonia brown and yellow patch | |
Perotto et al. | 12 Use of Monoclonal Antibodies to Study Mycorrhiza: Present Applications and Perspectives | |
GB2138444A (en) | Antibody to candida fungi | |
US5187064A (en) | Monoclonal antibodies and methods for fungal pathogen detection | |
CA1339582C (en) | Monoclonal antibodies and methods for diagnosis of phytophthora infection | |
RU2583306C1 (ru) | Штамм гибридных культивированных клеток животных mus musculus хт 2е5 - продуцент моноклональных антител изотипа g 1 к в-субъединице холерного токсина | |
JP3250039B2 (ja) | レプトスフェリアに対するモノクローナル抗体 | |
WO1989000607A1 (en) | Preparation of human monoclonal antibodies of selected specificity and isotypes | |
JPH06153979A (ja) | 魚類イリドウイルスに対するモノクローナル抗体並びに該抗体を製造するためのハイブリドーマ及び方法 | |
RU2395575C1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО Mus musculus L. - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БЕЛКА VP40 ВИРУСА МАРБУРГ (ШТАММ Рорр) (ВАРИАНТЫ), МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, ПРОДУЦИРУЕМОЕ ШТАММОМ (ВАРИАНТЫ), НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ФОРМАТА "СЭНДВИЧ" ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ МАТРИКСНОГО БЕЛКА VP40 ВИРУСА МАРБУРГ (ШТАММ Рорр) | |
RU1791453C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS L., используемый дл получени моноклональных антител к мембраносв занной и растворимой формам Н-антигена человека | |
CA2045875C (en) | Monoclonal antibodies to mycosphaerella species | |
RU2590587C1 (ru) | Штамм гибридных культивированных клеток животных mus musculus хт 3е5 - продуцент моноклональных антител изотипа g 2а к в-субъединице холерного токсина | |
EP0093776A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
RU2265658C2 (ru) | Штамм гибридных клеток животного mus musculus l. 9e2, используемый для получения моноклональных антител к белку e вируса западного нила штамм wnv/leiv-vig99-27889 | |
SU1752764A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к бактери м рода BRUceLLa | |
Jordan | Production and Application of Monoclonal Antibodies to Plant-Pathogenic Bacteria, Spiroplasmas, and Mycoplasma-Like Organisms | |
SU1604849A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L., продуцирующий моноклональные антитела к бактери м рода BRUceLLa | |
RU1808872C (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS L., используемый дл получени моноклональных антител к М @ зависимой ДНКазе хроматина печени крыс | |
Hamilton | The use of monoclonal antibodies and cDNA for detection of plant viruses | |
JPH01257477A (ja) | 安定なウサギ−マウスハイブリドーマ及びその分泌物 | |
JPH01290699A (ja) | 安定なウサギ−マウスハイブリドーマ及びその分泌物 |