JPS6310775A - 2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベンズチアゾロン - Google Patents

2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベンズチアゾロン

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JPS6310775A
JPS6310775A JP62132030A JP13203087A JPS6310775A JP S6310775 A JPS6310775 A JP S6310775A JP 62132030 A JP62132030 A JP 62132030A JP 13203087 A JP13203087 A JP 13203087A JP S6310775 A JPS6310775 A JP S6310775A
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hydrazono
dinitrobenzthiazolone
substance
reagent
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ヘルベルト・フーグル
アロイジウス・エンゲル
クラウス・ベーリング
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Bayer AG
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベンズチアゾロンが
貴重なアゾ染料の製造に適しており、さらに、物質の検
出に、特にH2O2の定量に、発色剤として使用され得
ることが見いだされた。
本発明は、式(I) NO3 式中、 Xlは水素、Cl−C<−アルキル、Cl−C1−ヒド
ロキシアルキル、C、−C、−スルホアルキルまたはC
l−C4−スルファトアルキルを表し、x2は水素また
は一5O2X、を表し、ここで、 X、は水素、Cl−C8−アルキルまたは置換されてい
ることもあるアリールを表し得るの 2−ヒドラゾノ−
4.6−ジニトロベンズチアゾロンに関するものである
Xlは好ましくは水素またはメチル基を表す。
Xlはまた、好ましいものとして下記式(II)O2 O2 式中、 X2は一般式(I)で特定した意味を有するに従って環
の窒素原子と炭素原子2との間の二重結合をも表す。
このヒドラゾンは保護された形状で、たとえば式(II
I )  2 N 式中、X4およびX5は相互に独立にcl−08−アル
キルを表し、 xlは上記一般式(I)で特定した意味を有する の脂肪族ヒドラゾンの形状で使用することもできる。
本発明は、さらに、−i式(I)の2−ヒドラゾノ−4
.6−ジニトロベンズチアゾロンのアゾ染料製造用の、
および物質検出用の、特にH2O2定量用の発色剤とし
ての使用に関するものでもある。
本発明の関連では、発色剤とは、適当なカプリング成分
を用いて酸化したのちに染料を形成するような物質を意
味するととるべきである。したがって、本発明はまた、
一般的に診断試験の領域に関するものでもあり、ここで
は、特に酸化可能な生物学的物質、たとえば乳酸、ブド
ウ糖、コレステロール、尿酸、クレアチニン、GPTま
たはグロセロール体およびケトン体の定性的、および定
量的測定に関係する試験に関するものである。この種の
試験では、これらの生物学的物質は通常、特定のオキシ
ダーゼにより酸化する。このとき、ペルオキシダーゼま
たは過酸化活性物質、たとえばヘモグロビンまたはメト
ヘモグロビンの触媒作用により、本発明記載の発色剤の
8202−依存性酸化が起きる。この酸化生成物は適当
なカプリング成分と反応して染料を形成し得る。本発明
記載の4.6−シニトロベンズチアゾールー2−オンは
また、ペルオキシダーゼまたは過酸化活性物質の検出に
も卓越して好適である。この種の検出は、上記の酸化お
よびカプリング反応の利用により行われ、!−1202
または他の過酸化物、たとえばクメンハイドロパーオキ
サイド、過酸化ス1〜ロンチウムもしくは2,5−ジメ
チルヘキサン2,5−シバイドロバ−オキサイドが酸化
剤として用いられる。
本発明のその他の成分は、溶液中の、または他の手段、
たとえば試薬中の、試験片中の、らしくは分析素子中の
本発明記載の発色剤、一般式(I)記載の2−ヒドラゾ
ノ−4.6−ジニトロベンズチアゾロンが調査すべき試
料の可視的な変色を生ずることを包括している。
2−ヒドラゾノ−4.6−シニトロペンズチアV′ロン
・は以下の方法により良好な収率で得られる。
2−アミノベンズチアゾールのニトロ化により得られる
2−アミノ−4,6−ジニトロベンズチアゾールを適当
な溶媒中でヒドラジン永和物と反応させる。
溶媒としては、たとえば2−エトキシエタノールを使用
する。この反応は好ましくは加熱して、特に好ましくは
70℃ないし150℃で実施するが、上記混合物の沸点
(約128−130℃)で行うと優れた収率が得られる
ヒドラジン水和物は好ましくは100%の純度で使用す
る。反応の継続時間は約1時間で、連続工程法も可能で
ある。この反応混合物を冷却したのち酸性にした水溶液
中に移す。氷酢酸の水溶液を使用すると良好な効果が得
られる6反応生成物を分離し、好ましくは洗浄し、乾燥
する。
本件新規な2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベンズチ
アゾロンを酸化して、多くのカプリング成分とともにア
ゾ染料の製造に使用し得ることが見いだされた。この様
式で製造されるアゾ染料は、天然および合成繊維、織物
または編み物の染色に用いて、特に良好な効果を挙げ得
る。
2−ヒドラゾノ−4.6−ジニトロベンズチアゾロンの
酸化的カプリングによるアゾ染料の製造は、簡単かつ経
済的に極めて重要な方法を代表する。
親電子的攻撃を受は易い芳香族化合物、たとえば下記の
化合物が、酸化的カプリングのカプリング成分として、
本発明に従つ°C使用し得る。
カプリング成分 1゜ H R1およびR2は同一であっても異なっていてもよく、
水素、C、−C、−アルキル、CビC1−アルコキシ、
フェニル、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素、好ましく
は水素を表す。
2゜ H R3およびR4は同一であっても異なっていてもよく、
水素、−C2H4−0−R5、−C2H4−0−CO−
RsまたはCl−C4−アルキル(ここで、R1はC1
−C4−アルキルまたはフェニルを表す)、を表し、好
ましくは水素を表す。
3゜ R1およびR1は2.に特定したものと同一の意味を有
し、好ましくは水素またはエチルを表す。
4゜ N HCz H<  N H2 R6は水素またはメチルを表す。
6゜ R9 R1およびR,同一であっても異なっていてもよく、水
素;スルホ、スルファト、ヒドロキシル、シアノ、ハロ
ゲン、C,−C4−アルコキシ、−0COR5、−CO
ORs、−0CONHR5、フェニルまたはスルホフェ
ニルにより置換されていることもある C2−01アル
キルを表し、またC 、−C,−アルケニルをも表す。
式中のR5はC+ −C4−アルキルまたはフェニルを
表す。R7およびR8は好ましくは水素、エチル、ヒド
ロキシエチル、シアンエチル、プロピル、ブチル、アセ
トキシエチル、メト・キシカルボニルエチル、エトキシ
カルボニルエチル、メチルアミノカルボニルオキシエチ
ル、フェニルアミノカルボニルオキシエチル、ベンジル
、フェネチルおよびスルホベンジルを表す。
R3は水素、C+ −C4−アルキル、C、−C、−ア
ルコキシ、ヒドロキシル、−NHCOR5または−N 
HS O2Rsを表し、式中のR1は上記の意味を有す
る。
Rtは好ましくは水素、メチル、NHCOCl−1、お
よびNHSO2CHffを表す。
R14は水素、ハロゲン、C+ −C4−アルキル、C
、−C、−アルコキシまたはC2−C、−アルコキシア
ルキルを、好ましくは水素、塩素、メチルまたはメトキ
シを表す。
OH Rloは水素、メチル、ヒドロキシルまたは塩素を、好
ましくはメチルまたはヒドロキシルを表す。
8゜ R1は水素、C0OHまたはSO,Hを表し、 好ましくは COOH である。
9゜ OH R12は水素またはSO”Hを、好ましくは水素を表し
、 Rt3は水素または0−CH(OH5)−COOHを表
す。
10゜ OH 11゜ R。
R15は0抜たはNHを表し、 R1,はCH,、C0OHまたはN H2を、好ましく
はメチルを表し、 R17はC2−C、−アルキル、I4、フェニル、スル
ホフェニルを、好ましくはフェニルまたはスルホフェニ
ルを表す。
12゜ R1,はCH,またはフェニルを、好ましくはメチルを
表し、 R3,は、Hまたは5o3Hを表ず。
13゜ CH3C0CH,C0NH R20ハH、OCH3、CIまたはCH,を、好ましく
はOCR,を表す。
14゜ CI(2 2N R21およびR22は同一であっても異なっていてもよ
く、CN またはC00C,R5を、好ましくはCN 
を表す 15゜ R23はNH,またはOHを表し、 R24は水素またはSOOHを表し、 Rzsはトl またはSOOHを表し、好ましくは である。
16゜ NH2 上記のカプリング成分は全て、織物繊維染色用のアゾ染
料の製造、および本発明記載の方法による診断試験の実
施のいずれにも貴重である。6゜に特定したような式の
カプリング成分を使用すれば、特番こ極めて高品質の合
成繊維染色用の染料が得られる。
織物用染料の製造のための酸化的カプリングは、それ自
体公知の様式で実施する。無機塩、たとえば過ヨウ素酸
塩、ポウ酸塩、鉄酸塩、およびベルオキソニ硫酸塩が酸
化剤として用いられ、メタ過ヨウ#:*ナトリウム、ヘ
キサシアノ鉄酸カリウムおよび臭素酸カリウムが特に適
している。
このようにして得られる染料は、また、たとえば米国特
許明細書箱3,057,848号に特定された方法によ
り、2−アミノ−4,6−シニトロペンズチアゾールの
ジアゾ化およびカプリングを経由しても得られる。
本発明はさらに、酸化可能な生物学的物質の定量方法に
関するものでもある0本発明の関連では、この種の物質
はH,O□の発生または遊離を伴って酸化されるような
ものを含むと解釈されるべきである。この反応は、好ま
しくは水性媒体中で進行する。
この検出方法を実施するためには、分析すべき酸化し得
る生物学的物質の試料を、適当なオキシダーゼおよび過
酸化活性を有する物質、発色剤としての2−ヒドラゾノ
−4,6−ジニトロベンズチアゾロン、ならびにカプリ
ング成分と接触させる。
本発明はさらに分析成分およびこの方法を実施するため
の試薬に関するものでもあり、この種の試薬は適宜に他
の物質、たとえばM[r剤、水和剤および安定剤を含有
することもできる。適当な緩衝剤はホウ酸塩、クエン酸
塩、リン酸塩、グルタル酸塩、炭酸塩、またはトリスア
ミンMtfl剤である。
H,02およびH20□の発生を伴って反応する物質の
定性的検出可能性および定量的測定可能性は、多くの分
野で極めて重要である。挙げ得る例は物質、たとえばグ
ルコース、コレステロール、尿酸、および他の多くのも
のの、酵素、たとえばグルコースオキシダーゼ、コレス
テロールオキシダーゼおよびウリカーゼの、酸素の存在
下における作用による酵素的測定の間に生成する H,
O□の検出および定呈である。試料中に存在する酵素基
質の存在量または定量的量さえも、発生するH7O2の
量から測定することができる。
この種の系内で発生する H202検出および/または
定量的測定用の公知の試薬には、一般的に、過酸化活性
を有する物質、たとえば、ペルオキシダーゼもしくはペ
ルオキシダーゼ型物質たとえばヘモグロビン、または、
さらにH,O□の存在下に検出可能な変化を受ける物質
が含まれる。ペルオキシダーゼは、H2O2による発色
剤の酸化を触媒する酵素である。ペルオキシダーゼの製
造は周知されており、また、この種の酵素は市販されて
いる。■I20□の検出のための酸化的カプリングは、
既に公知である(ベルクマイヤー(H,II。
Bergmeyer) 、酵素的分析の方法(Meth
od or Enzymatic Analysis)
 、第3版、■巻、 1984.216ページを参照)
、驚くべきことには、2−ヒドラゾノ−4,6−シニト
ロペンズチアゾールが、この種の反応に発色剤として極
めて好適であることが見いだされた。
H20!、過酸化活性を有する物質および発色剤、なら
びに色素カプラーの存在または生成は、この種の検出反
応を実施する際に重要である。この混合物が試験すべき
試料の変色を引き起こすのである。
本発明は極めて低濃度のI(20,の測定を可能にする
。一定の組成を有する緩衝された試薬または試薬系が好
適に使用される。有利なことには、本件呈色反応は極め
て高感度であり、かつ、広い濃度範囲で直線性を有する
ので、この範囲では、t:とえば、単に試薬ストリップ
を読むことにより、少なくとも半定量的な報告ができる
。このことは、本発明の大きな利点を生き生きと説明し
ている。
生成する色は、極めて長い時間、色安定性があり、広い
時間間隔にわたって読み取りが可能である。
さらに、種々のカプリング成分の組み合わせにより、種
々の色合いの染色が達成される。このことは特に、これ
まで若干の発色源のみが応用可能であった長波長領域で
いえる。これにより、ヘモグロビンまたはビリルビンに
よるスペクトル的妨害、または濁度による影響を実質的
に回避し得る。
H2O,またはH,O□を遊離する物質の検出用の呈色
反応は、明解な形では、次式を基礎にしている。
2N ペルオキシダーゼ R−NH−NH”+2H20 −28”  −2e− +KH(カプリング成分) □−〉 +1/20゜ H,02濃度の定量的尺度としての染料密度の測定は通
常の方法、たとえば分光光度計、好ましくは反射計を用
いて光学的に、または、色スケール(colour 5
cale) 、色カードを用いる、もしくは標準溶液を
用いる比色法により実施する。
本発明記載の組成物は、さらに、緩衝剤またはpHを酸
性領域に調節し得るようにする物質を含有していてもよ
い、pHをこの種の酸性領域に調節することは絶対的な
必要条件ではないが、特に本発明記載の診断試薬または
素子としての用途においては好ましい、酸調節は、本発
明記載のアゾ染料の製造用の使用にも同様に必要ではな
い。
本発明記載の試薬は、試験すべき試料を単に添加すれば
よいような溶液の形状で、または、測定の直前に試料を
添加する試験キットの形状で存在し得る。
本発明の他の有利な具体例においては分析成分を使用す
る。この種の成分は、たとえば適当な吸収物質たとえば
吸取紙と試薬溶液とを充填することにより製造し得る。
この種の成分は、幾つかの異なる層からなっている。試
験ストリップの公知の製造法が、本発明に広く使用され
得る。
本発明記載の測定用試薬は、たとえば、水を添加するこ
とにより診断用溶液に転化し得るような乾燥混合物の形
状で存在してもよい。
本発明の主題は、以下の実施例により、より詳細に説明
される。
及1」−し 次式のヒドラジンの製造 O2 アミノ−4,6,−ジニトロベンズチアゾール24.。
gを200 mlの2−エトキシエタノール中で、2゜
11のヒドラジン水和物(純度100%)とともに1時
間、沸膓状憇に加熱する。室温に冷却したのち、この反
応混合物を750 ml水と20 wlの氷酢酸との混
合物に注ぎ入れ、1時間撹拌し、吸引炉別し、水洗し、
乾燥する。2−ヒドラジノ−4,6ジニトロペンズチア
ゾール21.0 gが得られる。
融点210−214℃(分解)、2−メトキシエタノー
ルで再結晶したのちの融点216−217°C(分解)
11匹−1 2−ヒドラジノ−4,6−ジニトロベンズチアゾール1
8.5 g、 N、N−ジブチルアニリン15.Ogお
よびメタ過ヨウ素酸ナトリウム15.5 gの全体を1
0個の部分に分け、500 mlの氷酢酸に、室温で撹
拌しながら4時間かけて添加する。続いて、ごの混合物
をさらに5時間撹拌し、水を添加し、生成物を吸引炉別
し、ジメチルホルムアミドで再結晶し、乾燥する。この
染料は式 の構造を有し、ポリエステル繊維を良好な堅牢性を有す
る青色に染める。
下表に示した染料は類推的な、または類似の作業工程で
、良好な収率で得られる。
次式の染料 o2 2 N 実施例    K       ポリエステルNo、 
             での−金!−青みがかった ボルドー 赤みがかった 暗青色 過         の   の  −的 −質以下の
手順に従い、過酸化物指示薬の光学的性質を測定する。
2−ヒドラゾノ−4.6−ジニトロペンゾチアゾロンお
よび適当なカプリング成分は、O,i M i衝液中の
濃縮貯蔵溶液(2−10ミリモル/!〉として製造され
る。物質が定量的には溶解しないならば、緩衝液/DM
F または緩衝液/DMSO混合物を用いて溶解させる
。続いて、この溶液を必要な緩衝溶液と混合してさらに
希釈し、pHをチェックする。この溶液500μ!をセ
ルに入れ、これに10μ!のペルオキシダーゼを添加し
て吸光の空値を測定し、ついで、新しく調製した過酸化
物溶液(I−5ミリモル/β)10A11を添加して反
応を開始させる。5分後、再び吸光度を測定し、空値を
差し引く。
240 r+mの吸光度を測定して、使用した過酸化物
の濃度をチェックするく5ミリモル/lでE240≦0
.25)。下記の指示薬についての試験バッチでは、下
記の濃度を用いた。
ヒドラゾノー4.6−シニトロ ベンゾチアゾロン   5ミリモル/lカプリング成分
       5ミリモル/1ペルオキシダーゼ   
    5 kU/1クエン酸緩衝液、pH5,010
0ミリモル/l過酸化物試験溶液      5ミリモ
ル/1下記の吸光度の差は、下記吸収極大において、5
分間の反応時間ののちに測定した。
工              − ベ          (n            
   f               いCH3 NHC2H,NH。
CH。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、式( I ) ▲数式、化学式、表等があります▼( I ) 式中、 X_1は水素、C_1−C_4−アルキル、C_1−C
    _4−ヒドロキシアルキル、C_1−C_4−スルホア
    ルキルまたはC_1−C_4−スルファトアルキルを表
    し、X_2は水素または−SO_2X_3を表し、ここ
    で、 X_3は水素、C_1−C_8−アルキルまたは置換さ
    れていることもあるアリールを表し得る の2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベンズチアゾロン
    。 2、式中の、 X_1が水素またはメチル基を表す ことを特徴とする特許請求の範囲第1項記載のヒドラゾ
    ノ−4,6−ジニトロベンズチアゾロン。 3、式(II) ▲数式、化学式、表等があります▼(II) 式中、 X_2は特許請求の範囲第1項記載の意味を有する により表される特許請求の範囲第1項記載の2−ヒドラ
    ゾノ−4,6−ジニトロベンズチアゾロン。 4,2−アミノ−4,6−ジニトロベンズチアゾールを
    適当な溶媒中でヒドラジン水和物と反応させ、続いて酸
    性媒体中で処理し、続いて精製し、乾燥することを特徴
    とする式( I )の2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロ
    ベンズチアゾロンの製造方法。 5、溶媒2−エトキシエタノールを用いることを特徴と
    する特許請求の範囲第4項記載の方法。 6、反応を高温で、好ましくは70℃ないし150℃で
    、特に好ましくは上記混合物の沸点で実施することを特
    徴とする特許請求の範囲第4または第5項記載の方法。 7、式( I )の2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベ
    ンズチアゾロンの、酸化的カプリングによるアゾ染料製
    造用の使用。 8、式( I )の2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベ
    ンズチアゾロンの過酸化水素定量用の発色剤としての使
    用。 9、式( I )の2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベ
    ンズチアゾロンを発色剤として使用することを特徴とす
    る、分析すべき液体の試料を過酸化活性を有する物質、
    および過酸化水素と過酸化活性を有する物質の存在下に
    反応して染料を形成する発色剤、およびカプリング成分
    と接触させる、水性液体中の過酸化水素の定量方法。 10、緩衝物質、過酸化活性を有する物質、および発色
    剤としての式( I )の2−ヒドラゾノ−4,6−ジニ
    トロベンズチアゾロン、ならびにカプリング成分を含有
    する水性溶液中の過酸化水素定量用試薬。 11、発色剤として式(I)の2−ヒドラゾノ−4,6
    −ジニトロベンズチアゾロンを含有することを特徴とす
    る、非繊維性の、等方的に多孔質の分散層、および試薬
    層を有し、かつ、 a)分析すべき化学種と接触して過酸化水素を発生させ
    る酵素、および b) I 、過酸化活性を有する物質 II、発色剤 III、カプリング成分、および、適宜に IV、緩衝物質 よりなる過酸化水素定量用試薬 を含有する水性液体中の分析すべき化学種の定量用の分
    析用成分。 12、酵素としてオキシダーゼを含有することを特徴と
    する特許請求の範囲第11項記載の成分。 13、過酸化活性を有する物質としてペルオキシダーゼ
    を含有することを特徴とする特許請求の範囲第11また
    は第12項記載の成分。 14、5ないし8、好ましくは7ないし8のpHに緩衝
    されていることを特徴とする特許請求の範囲第11ない
    し第13項の1または2以上に記載された成分。 15、ホウ酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、グルタル酸塩
    、炭酸塩またはトリスアミン緩衝物質で構成されるグル
    ープの1種または2種以上の物質よりなる緩衝物質を含
    有することを特徴とする特許請求の範囲第11ないし第
    14項の1または2以上に記載された成分。 16、発色剤として式( I )の2−ヒドラゾノ−4,
    6−ジニトロベンズチアゾロンを含有することを特徴と
    する、 a)分析すベき化字種と接触して過酸化水素を発生させ
    る酵素、および b) I 、過酸化活性を有する物質 II、発色剤 III、カプリング成分、および、適宜に IV、緩衝剤 を有する過酸化水素定量用試薬 を含有する、分析すべき化学種の定量用の吸着物質。 17、発色剤として式( I )の2−ヒドラゾノ−4,
    6−ジニトロベンズチアゾロンを含有することを特徴と
    する、 a)過酸化活性を有する物質 b)発色剤、および c)カプリング成分 を含有する、過酸化水素またはH_2O_2の発生を伴
    う反応が可能な物質の定量分析用試薬。 18、特許請求の範囲第10ないし第17項の1または
    2以上に記載された試薬または成分の、ヘモグロビンの
    、好ましくは便および/または尿中の潜血の検出用の使
    用。
JP62132030A 1986-06-04 1987-05-29 2−ヒドラゾノ−4,6−ジニトロベンズチアゾロン Pending JPS6310775A (ja)

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