JPS6271860A - 受容体抗体サンドイツチアツセイ - Google Patents
受容体抗体サンドイツチアツセイInfo
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- JPS6271860A JPS6271860A JP61209760A JP20976086A JPS6271860A JP S6271860 A JPS6271860 A JP S6271860A JP 61209760 A JP61209760 A JP 61209760A JP 20976086 A JP20976086 A JP 20976086A JP S6271860 A JPS6271860 A JP S6271860A
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- G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
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- G—PHYSICS
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- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、０−アラニル−Ｄ−７ラニンジペブチドまた
は［）−７ラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴ
ペプチドに結合できる物質を決定するために新規なサン
ドイッチアッセ・ｆに関する。
は［）−７ラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴ
ペプチドに結合できる物質を決定するために新規なサン
ドイッチアッセ・ｆに関する。
それはバンコマイシンの部類あるいはその誘導体または
アグリコンを決定するたさ）に特別の用途を有する。こ
のアー７セイは、パンコマ１シンの部類の抗生物質に対
する適ちなり一アラニルーＤ−アラニノ、檎導体の高い
選択性および、決定の目的である部類の抗生物質に対し
、て向けられた抗体の特異性を兼備する。
アグリコンを決定するたさ）に特別の用途を有する。こ
のアー７セイは、パンコマ１シンの部類の抗生物質に対
する適ちなり一アラニルーＤ−アラニノ、檎導体の高い
選択性および、決定の目的である部類の抗生物質に対し
、て向けられた抗体の特異性を兼備する。
バンコマイシンの部類の抗生物質の例は、次のＡ４Ｊで
ある（バンコマイシンに加えて）：ティコプラニン、ア
クタプラニ〉′、リストセチン、アポバルジ７、アクチ
ノイジン、抗生物ＱＬＬ−ＡＭ−３７４、抗生物質Ａ４
７７、抗生物質ＯＡ７６５３、抗生物質Ａ３５５１２Ｂ
、抗生物質Ａ、５１５６６８、抗生物質Ａ／１−［１２
１６、抗生物質Ａ４１０３０、抗生物質Ａ４７９３４な
らびにそれらの個々の因子、誘４体またはアグリコン。
ある（バンコマイシンに加えて）：ティコプラニン、ア
クタプラニ〉′、リストセチン、アポバルジ７、アクチ
ノイジン、抗生物ＱＬＬ−ＡＭ−３７４、抗生物質Ａ４
７７、抗生物質ＯＡ７６５３、抗生物質Ａ３５５１２Ｂ
、抗生物質Ａ、５１５６６８、抗生物質Ａ／１−［１２
１６、抗生物質Ａ４１０３０、抗生物質Ａ４７９３４な
らびにそれらの個々の因子、誘４体またはアグリコン。
／ヘンコマイシンおよびリストセチンＡは、／゛クチリ
ア細胞壁のｌ−構造成分であるペプチドグリカンの合成
を妨害することが知られている。この妨害は、その細胞
の生長の阻害に導き、そして究極的に、溶菌によりその
細胞の破壊に導き、その理由はこれらの抗体と、カルボ
キシル末端にＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ残基を有するペン
タペプチド前駆物？ｆ （ＬＪ Ｄ Ｐ −Ｎ−アセチ
ルムラミルペンタペプチド）との間の特異的結合にある
と考えられている［Ｈ、Ｒ、パーキンス（Ｐｅｒｋｉｎ
Ｓ）、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍ、）１、Ｔ
、１１！、１９５、 （１９６９）］。
ア細胞壁のｌ−構造成分であるペプチドグリカンの合成
を妨害することが知られている。この妨害は、その細胞
の生長の阻害に導き、そして究極的に、溶菌によりその
細胞の破壊に導き、その理由はこれらの抗体と、カルボ
キシル末端にＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ残基を有するペン
タペプチド前駆物？ｆ （ＬＪ Ｄ Ｐ −Ｎ−アセチ
ルムラミルペンタペプチド）との間の特異的結合にある
と考えられている［Ｈ、Ｒ、パーキンス（Ｐｅｒｋｉｎ
Ｓ）、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍ、）１、Ｔ
、１１！、１９５、 （１９６９）］。
最近、また、ティコプラニンは、感受性のバクテリアの
生長するペプチドグツカンへの結合により、回−の機構
を通して作用することが発見された。さらに詳しくは、
ティコプラニンは、バンコマイシンおよびリストセチン
Ａおよび類似する抗体と同様に、カルボキシル末端にＤ
−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ残基を有するペプチドグリカンに
詰合することが発見された。モのようにすることにより
、それらは多分バクテリアのトランスペプチダーセを阻
害し、そして細胞壁のペプチドグリカンの架橋を妨害す
る。これらの抗体は、また、Ｄ−アラニ）ｖ−Ｄ−アラ
ニンジペプチドまたはＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカル
ボキシ末端オリゴペプチドに結合する。また、バンコマ
イシンの部類の他の抗体は同一の作用機構により作用す
ることが証明さねあるいは■１定され、そして、それゆ
えＤ−アラニル−Ｄ−アラニ〉・ジペプチドまたはＤ−
アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチ：
゛に結もすることができ、そしてそれは適ちな宿主中で
それらに対する抗体の形成を誘導することができる。
生長するペプチドグツカンへの結合により、回−の機構
を通して作用することが発見された。さらに詳しくは、
ティコプラニンは、バンコマイシンおよびリストセチン
Ａおよび類似する抗体と同様に、カルボキシル末端にＤ
−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ残基を有するペプチドグリカンに
詰合することが発見された。モのようにすることにより
、それらは多分バクテリアのトランスペプチダーセを阻
害し、そして細胞壁のペプチドグリカンの架橋を妨害す
る。これらの抗体は、また、Ｄ−アラニ）ｖ−Ｄ−アラ
ニンジペプチドまたはＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカル
ボキシ末端オリゴペプチドに結合する。また、バンコマ
イシンの部類の他の抗体は同一の作用機構により作用す
ることが証明さねあるいは■１定され、そして、それゆ
えＤ−アラニル−Ｄ−アラニ〉・ジペプチドまたはＤ−
アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチ：
゛に結もすることができ、そしてそれは適ちな宿主中で
それらに対する抗体の形成を誘導することができる。
バンコマイシンの部類に抗体に加疋て、この方υ、はＤ
−アラニル−Ｄ−アラニンジペプチドまたはＤ−アラニ
ル−ｐ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチドに結合
することができる他のグリコペプチド以外またはバンコ
マイシン類似物質以外の抗生物質を決定するために適当
に使用することができ、そしてそれは適当な宿−Ｌ中で
それらに対する抗体の形成を誘導することができる。
−アラニル−Ｄ−アラニンジペプチドまたはＤ−アラニ
ル−ｐ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチドに結合
することができる他のグリコペプチド以外またはバンコ
マイシン類似物質以外の抗生物質を決定するために適当
に使用することができ、そしてそれは適当な宿−Ｌ中で
それらに対する抗体の形成を誘導することができる。
Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンまたはＤ−アラニル−Ｄ−
アラニンオリゴペプチドは、それゆえ、前述の抗生物質
のための「分子−の受容体」と考えることができる。
アラニンオリゴペプチドは、それゆえ、前述の抗生物質
のための「分子−の受容体」と考えることができる。
抗生物質、とくにティコプラニンおよびバンコマイシン
部類の他の抗生物質を決定するためにそれ自体既知の方
法は、ＬとしてＴＩ、Ｃ，ＨＰＬＣおよび感受性微生物
を使用するパイオアフヤイに基バく。これらの抗生物質
のあるものの現在の治療学的使用または進歩した臨床学
的研究をかんがみて、特異的、迅速、容易であり、信頼
性があり、そして自動化に適する、流体、ことに生物学
的流体の中のそれらを決定するためのアッセイ法が必要
とされている。
部類の他の抗生物質を決定するためにそれ自体既知の方
法は、ＬとしてＴＩ、Ｃ，ＨＰＬＣおよび感受性微生物
を使用するパイオアフヤイに基バく。これらの抗生物質
のあるものの現在の治療学的使用または進歩した臨床学
的研究をかんがみて、特異的、迅速、容易であり、信頼
性があり、そして自動化に適する、流体、ことに生物学
的流体の中のそれらを決定するためのアッセイ法が必要
とされている。
とイに１体の滲出物、気管支の吐いた物、うみ、火傷を
した患者からの皮＋？：；の試料などの中のこれらの物
質の検出は、既知の技術では、１ｔ；った結果がＬばし
ばｆ’）られるので、ど（に困難である。本発明の方法
は、対照的に、ごれ゛ろの試料について、また、精確で
ありかつ信頼性がある。
した患者からの皮＋？：；の試料などの中のこれらの物
質の検出は、既知の技術では、１ｔ；った結果がＬばし
ばｆ’）られるので、ど（に困難である。本発明の方法
は、対照的に、ごれ゛ろの試料について、また、精確で
ありかつ信頼性がある。
したがって、本発明の方法は、Ｄ−アラニル−Ｄ−７ラ
ニンジベブチドまたはＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカル
ボキシ末端オリゴペプチｉ・によって代表される「分子
−の受容体」に結合するという特徴を有する分析物を特
別に決定するための、迅改な、容易な、信頼性ある、直
接法である。とくに、本発明のＬ法は、／ヘンコマ１ら
ンの部類の抗生物質の特別の決定を、同一部類の他の抗
生物質が存在してさ見、高い感受性、精度および精確さ
をもって、ｉ＋ｆ能とする。
ニンジベブチドまたはＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカル
ボキシ末端オリゴペプチｉ・によって代表される「分子
−の受容体」に結合するという特徴を有する分析物を特
別に決定するための、迅改な、容易な、信頼性ある、直
接法である。とくに、本発明のＬ法は、／ヘンコマ１ら
ンの部類の抗生物質の特別の決定を、同一部類の他の抗
生物質が存在してさ見、高い感受性、精度および精確さ
をもって、ｉ＋ｆ能とする。
さらに詳しくは、本発明の方法は、Ｌ程：ａ） 表面Ｉ
−に吸着できる適当な高分子化合物の担体と接合したＤ
−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチ
ドを支持する前記表面と試験溶液を接触させ、 ｂ） 洗浄後、検出すべき物質（分析物）に対しく特異
的に向けられた抗体を添加し、 Ｑ ） ：’Ｊ １−相トの抗原へ結合した前記抗体
を、検出可能なマーカー（ｍａｒｋｅｒ）に結合したこ
れらの結合抗体（抗抗体抗血清）に直接向けられた種特
異的抗ＩｇＧ抗体によって、明らかにする、 を含む。
−に吸着できる適当な高分子化合物の担体と接合したＤ
−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチ
ドを支持する前記表面と試験溶液を接触させ、 ｂ） 洗浄後、検出すべき物質（分析物）に対しく特異
的に向けられた抗体を添加し、 Ｑ ） ：’Ｊ １−相トの抗原へ結合した前記抗体
を、検出可能なマーカー（ｍａｒｋｅｒ）に結合したこ
れらの結合抗体（抗抗体抗血清）に直接向けられた種特
異的抗ＩｇＧ抗体によって、明らかにする、 を含む。
Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプ
チドはトリペプトド、テトラペプトド、ペンタペプトド
、ヘキサペプトドまたはへプタペプＩ・ドであることが
でき、ここでカルボキシ末端ジペプトドはＤ−アラニル
−Ｄ−アラニンジペプチドによって代表される。好まし
いＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペ
プチドは（−７ミノカプロイルーＤ−アラニル−Ｄ−ア
ラニン（以後、ε−Ａｃａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａ
１ａ）である。
チドはトリペプトド、テトラペプトド、ペンタペプトド
、ヘキサペプトドまたはへプタペプＩ・ドであることが
でき、ここでカルボキシ末端ジペプトドはＤ−アラニル
−Ｄ−アラニンジペプチドによって代表される。好まし
いＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペ
プチドは（−７ミノカプロイルーＤ−アラニル−Ｄ−ア
ラニン（以後、ε−Ａｃａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａ
１ａ）である。
Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプ
チドを適当な担体と接合して、それが１／、ｌ相表面ヒ
に吸着でさるようにする。適当ぼ担体は、この場合にお
いて、Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリ
ゴペプチドに！（有結合して、選釈した固相表面に吸着
できる（すなわち、物理的結合を構成できる）接合体を
形成できる、任意の蛋白質または他の品分／、 ｌ、ｊ
物質であることができる。
チドを適当な担体と接合して、それが１／、ｌ相表面ヒ
に吸着でさるようにする。適当ぼ担体は、この場合にお
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ゴペプチドに！（有結合して、選釈した固相表面に吸着
できる（すなわち、物理的結合を構成できる）接合体を
形成できる、任意の蛋白質または他の品分／、 ｌ、ｊ
物質であることができる。
このような担体の好ましい例は、アルブミンおよびとく
にウシアルブミンである。しかしながら、卵、ヒトまた
はブタのアルブミンを同様によく使用可能である。
にウシアルブミンである。しかしながら、卵、ヒトまた
はブタのアルブミンを同様によく使用可能である。
Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプ
チドを支持する担体をその］−に吸着する固相表面は、
好ましくは分析用支持体の表面である。この本願におい
て、 ＩｌｌｊＭ ’分析用支持体」は、液状試薬を含
イマすることができるか、あるいは少なくともそれに暴
露することができ、それゆえ適当な高分子化合物のＪｌ
ｊ体と接合したＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ
末端オリゴペプチドを支持する表面として使用すること
ができる、任意の分析用丁段であることができる。これ
らの好ましい例は、ガラスまたはプラスチ−２りのマイ
クロタイタープレートまたは試験管またはプラスナック
シートである。最も好ましい「分析用支持体」は、ポリ
エチレンまたはポリスチレンのマイクロタイタープレー
トのウェル（ｗｅ Ｉ １）である。
チドを支持する担体をその］−に吸着する固相表面は、
好ましくは分析用支持体の表面である。この本願におい
て、 ＩｌｌｊＭ ’分析用支持体」は、液状試薬を含
イマすることができるか、あるいは少なくともそれに暴
露することができ、それゆえ適当な高分子化合物のＪｌ
ｊ体と接合したＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ
末端オリゴペプチドを支持する表面として使用すること
ができる、任意の分析用丁段であることができる。これ
らの好ましい例は、ガラスまたはプラスチ−２りのマイ
クロタイタープレートまたは試験管またはプラスナック
シートである。最も好ましい「分析用支持体」は、ポリ
エチレンまたはポリスチレンのマイクロタイタープレー
トのウェル（ｗｅ Ｉ １）である。
したがって、本発明の最も好ましい「被覆された分析用
支持体Ｊ （すなわち、オリゴペプチドをその１−に支
持して有する表面）は、０．０２５マイクログラム〜１
マイクログラム、好ましくはＯ１１イクログラム〜０．
２マイクログラムのＢＳＡ −ε−Ａ Ｃａ−Ｄ−Ａ
ｌ ａ−Ｄ −、Ａ Ｉ ａテ被覆されたプラスチック
のウェルまたは管である。
支持体Ｊ （すなわち、オリゴペプチドをその１−に支
持して有する表面）は、０．０２５マイクログラム〜１
マイクログラム、好ましくはＯ１１イクログラム〜０．
２マイクログラムのＢＳＡ −ε−Ａ Ｃａ−Ｄ−Ａ
ｌ ａ−Ｄ −、Ａ Ｉ ａテ被覆されたプラスチック
のウェルまたは管である。
すでに述べたように、「試験溶液１中に存在するとイ［
定ごれる分析物は、バンコマイシンの部類の抗生物質あ
るいは、より一般的には、Ｄ−アラニル〜Ｄ−７ラニン
ジペブ千ドまたはＤ−アテニル−Ｄ−アラニンカルボキ
シ末・瑞オリゴペプチドに結合できる物質である。
定ごれる分析物は、バンコマイシンの部類の抗生物質あ
るいは、より一般的には、Ｄ−アラニル〜Ｄ−７ラニン
ジペブ千ドまたはＤ−アテニル−Ｄ−アラニンカルボキ
シ末・瑞オリゴペプチドに結合できる物質である。
１２（ましい分析物はテイコブラ二〕あるいはその個々
の因子、誘導体またはアグリコンである。
の因子、誘導体またはアグリコンである。
［決定すべき物質に特異的に向けられた抗体Ｊは、試験
すべき結合の適当な接合体を注射により、動物の中で誘
導された抗体である。これらの抗体は、動物、例えば、
ウサギ、う・シ（・または他の人：１１；以外の咄乳動
物を免疫化することにより得られる汀通の抗血清である
ことができ、あるいはＣ，マイルスティン（ＭｉｌｓＬ
ｅｉ：ｒ）およびＧ、コヘラー（Ｋｏｈｅｌｅｒ）Ｉｊ
イチャー（Ｎａ ｔ ｕ ｒｅ）、２５６．４９５−４
９７ （１９７５）］の細胞融合技術に本質的に従って
調製された前記物質に対する七ノ′クローナル抗体であ
ることができろ。
すべき結合の適当な接合体を注射により、動物の中で誘
導された抗体である。これらの抗体は、動物、例えば、
ウサギ、う・シ（・または他の人：１１；以外の咄乳動
物を免疫化することにより得られる汀通の抗血清である
ことができ、あるいはＣ，マイルスティン（ＭｉｌｓＬ
ｅｉ：ｒ）およびＧ、コヘラー（Ｋｏｈｅｌｅｒ）Ｉｊ
イチャー（Ｎａ ｔ ｕ ｒｅ）、２５６．４９５−４
９７ （１９７５）］の細胞融合技術に本質的に従って
調製された前記物質に対する七ノ′クローナル抗体であ
ることができろ。
分Ｊｆｉ物はハブテンである（すなわち、分析物は人間
以外の１１１乳動物に！１：人されたとき、それに対す
る抗体の生産をそれ自体で誘導できるばかりでなぐ、か
つまた適当な品分／、ｌ龜の担体、例えば、蛋白質に結
合したとき、発現されうる免疫原性質を有する）ので、
分析物は、選択した宿主動物を免疫化する前に、一般に
ウシ血清アルブミンのような蛋白質である適当な担体へ
接合される。
以外の１１１乳動物に！１：人されたとき、それに対す
る抗体の生産をそれ自体で誘導できるばかりでなぐ、か
つまた適当な品分／、ｌ龜の担体、例えば、蛋白質に結
合したとき、発現されうる免疫原性質を有する）ので、
分析物は、選択した宿主動物を免疫化する前に、一般に
ウシ血清アルブミンのような蛋白質である適当な担体へ
接合される。
ｆｆ通の抗血清を生産する便利な宿り動物はウサギであ
る。次いで、この抗血清は粘製または分別してＩｇＧ類
を巾離することができる。反対に、モノクローナル抗体
は、！−に引用したマイルスティンＣＭｉｌｓｔｅｉｎ
）およびコヘラー（Ｋ。
る。次いで、この抗血清は粘製または分別してＩｇＧ類
を巾離することができる。反対に、モノクローナル抗体
は、！−に引用したマイルスティンＣＭｉｌｓｔｅｉｎ
）およびコヘラー（Ｋ。
ｈｅｊｅｒ）のＬ順に本質的に従い、融合促進剤の存在
下に、ラットの肺細胞または相同骨髄腫細胞を癩合する
ことによって得られたハイブリドーマにより河通に生産
される。汀通の抗血清のポリクローナル抗体の有意の比
率および、［決定すべき物質に特異的に向けられた抗体
」を代表することができるモノクローナル抗体の両者は
、分析物（すなわち、決定すべ５抗生物質）と「分子の
受容体」 （すなわち、適当な表面Ｈに吸着し、ｌ、Ｄ
。
下に、ラットの肺細胞または相同骨髄腫細胞を癩合する
ことによって得られたハイブリドーマにより河通に生産
される。汀通の抗血清のポリクローナル抗体の有意の比
率および、［決定すべき物質に特異的に向けられた抗体
」を代表することができるモノクローナル抗体の両者は
、分析物（すなわち、決定すべ５抗生物質）と「分子の
受容体」 （すなわち、適当な表面Ｈに吸着し、ｌ、Ｄ
。
Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａｌミオリボペプチド結１＼を妨害し
てはならず、そして明らかなように、試＃−ｔｉｘに存
在しかつ同時に分子の受容体へ結合することができる部
類の他の抗生物質と交差反応してはならない。
てはならず、そして明らかなように、試＃−ｔｉｘに存
在しかつ同時に分子の受容体へ結合することができる部
類の他の抗生物質と交差反応してはならない。
本発明の方法において使用する「抗抗体抗血情」は、あ
る動物種の免疫グロブリン類Ｇ ＣＩ ｇＧ類）に対す
るｆ′ｆ通の抗体調製物であり、ぞして前記動物種は［
第１Ｊ抗体（すなわち、ろユ析物に対して向けられたも
の）が屈する動物種である。
る動物種の免疫グロブリン類Ｇ ＣＩ ｇＧ類）に対す
るｆ′ｆ通の抗体調製物であり、ぞして前記動物種は［
第１Ｊ抗体（すなわち、ろユ析物に対して向けられたも
の）が屈する動物種である。
これらの抗体、例えば、ウサギに対するヤキ抗１ｒ１１
清、ヤギ抗うヅト抗体の調製物は、？Ｖ連の技術に従い
得られ、そしてまた商業的に人’ ”ｒ （ｋである。
清、ヤギ抗うヅト抗体の調製物は、？Ｖ連の技術に従い
得られ、そしてまた商業的に人’ ”ｒ （ｋである。
この抗抗体抗血清と結合する検出τす能なマーカーは、
免疫アッセイにおいて通常の「マーカー」の１つ１例え
ば、酵素、放射性同位元素または蛍光染料である。好ま
しい酵素はベルオギシダーゼ、例えば、ワサビのベルオ
キシターゼ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉ
ｄａｓｅ）であり、これは過酸化水素の存在ドにその発
色性基質の１種、例えば、オルトフェニレンジアミンに
より色度１１１１＋１定的に＋！ｌＨらかにしかつ定１
ｉ）することができる。また、検出Ｉｌｆ能なマーカー
に結合した抗抗体抗血１＋′ｊは商業的に人ＬＩＩｒ能
であり、あるいは昔−通の「順によって調製することが
できる。
免疫アッセイにおいて通常の「マーカー」の１つ１例え
ば、酵素、放射性同位元素または蛍光染料である。好ま
しい酵素はベルオギシダーゼ、例えば、ワサビのベルオ
キシターゼ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉ
ｄａｓｅ）であり、これは過酸化水素の存在ドにその発
色性基質の１種、例えば、オルトフェニレンジアミンに
より色度１１１１＋１定的に＋！ｌＨらかにしかつ定１
ｉ）することができる。また、検出Ｉｌｆ能なマーカー
に結合した抗抗体抗血１＋′ｊは商業的に人ＬＩＩｒ能
であり、あるいは昔−通の「順によって調製することが
できる。
この分９？において知られているように、Ｄ−アラニル
−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチドと適当な
神体とに結合１士それ自体既知の技術によって達成する
ことができる。便Ｊｌｊには、結合剤を使用する。Ｉｌ
ｆましい結合剤はグルタルアルデヒドである。他の既知
の結合剤は、次のものを包含する二カーポジイミド、ジ
イソシアネート、無水物、ジアツ：ウム化合物、アジＩ
Ｓ、および臭化ンアン。同様に、既知の結合手順および
試薬を使用して抗抗体抗血清を検出１１［俺なマーカー
に結合することができる。これらのＬ順は、）二として
、逆折した検出可能なマーカーの特性に依存する。
−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチドと適当な
神体とに結合１士それ自体既知の技術によって達成する
ことができる。便Ｊｌｊには、結合剤を使用する。Ｉｌ
ｆましい結合剤はグルタルアルデヒドである。他の既知
の結合剤は、次のものを包含する二カーポジイミド、ジ
イソシアネート、無水物、ジアツ：ウム化合物、アジＩ
Ｓ、および臭化ンアン。同様に、既知の結合手順および
試薬を使用して抗抗体抗血清を検出１１［俺なマーカー
に結合することができる。これらのＬ順は、）二として
、逆折した検出可能なマーカーの特性に依存する。
検出用′敞なマーカーが酵素であるとき、Ｉ−に報告し
たような結合手順を使用できる。また、この場合におい
て、グルタルアルデヒドはＩｌｆましい結合剤である。
たような結合手順を使用できる。また、この場合におい
て、グルタルアルデヒドはＩｌｆましい結合剤である。
これらの結合反応において１反応成分の間の比−Ｖは非
常に有意に変化することができ、それでもなお多くの場
合において、反応成分間のｌ：１の比は好ましい。そノ
１−１ε−Ａｃａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａテ
あるＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルポキシ末端オリゴ
ペプチドとウシ血清アルブミン（Ｂ Ｓ Ａ）である高
分子化合物の４口体との間の結合反応の場合において、
これらの２試薬の間のモル比はｌ：ｌ〜１０：１の間で
変化できる。
常に有意に変化することができ、それでもなお多くの場
合において、反応成分間のｌ：１の比は好ましい。そノ
１−１ε−Ａｃａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａテ
あるＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルポキシ末端オリゴ
ペプチドとウシ血清アルブミン（Ｂ Ｓ Ａ）である高
分子化合物の４口体との間の結合反応の場合において、
これらの２試薬の間のモル比はｌ：ｌ〜１０：１の間で
変化できる。
さらに詳しく説引すると、本発明の好ましい実施Ｆ；様
は次の通りである： ａ） 既知ｊｌｉの分析物を使用して適当な希釈ｗｔ
衝液中で標準曲線を作成し、 ｂ） 、７．料をべＩ８備し、モして１−と同一の希
釈緩衝液中で前記試料を適当に希釈し、 Ｃ） 別々に、標準の希釈物と試料とを、ヒに定義した
被覆した分析用支持体へ添加し、ｄ） 、−Ｑをした
湿気を含む箱の中で室温においてインキュベーションし
た後、被覆した分析用支持体を洗浄し、そして便利には
Ｌの希釈緩衝液中で希釈した「第１」抗体（抗分析物抗
体）の調製物を添加し、 ｅ） 被覆した分析用支持体を再び洗浄し、そして乾炊
した後、「第２」抗体調製物（抗抗体調製物）添加し、
ここで種物異的抗体は検出可能なマーカーへ結合し、そ
して最後に、 ｆ） 被覆した分析系に結合した「検出可能なマーカー
」を決定することによって、試料中の分析物のＣ度を標
準曲線の値を参照して１汁イ面する。
は次の通りである： ａ） 既知ｊｌｉの分析物を使用して適当な希釈ｗｔ
衝液中で標準曲線を作成し、 ｂ） 、７．料をべＩ８備し、モして１−と同一の希
釈緩衝液中で前記試料を適当に希釈し、 Ｃ） 別々に、標準の希釈物と試料とを、ヒに定義した
被覆した分析用支持体へ添加し、ｄ） 、−Ｑをした
湿気を含む箱の中で室温においてインキュベーションし
た後、被覆した分析用支持体を洗浄し、そして便利には
Ｌの希釈緩衝液中で希釈した「第１」抗体（抗分析物抗
体）の調製物を添加し、 ｅ） 被覆した分析用支持体を再び洗浄し、そして乾炊
した後、「第２」抗体調製物（抗抗体調製物）添加し、
ここで種物異的抗体は検出可能なマーカーへ結合し、そ
して最後に、 ｆ） 被覆した分析系に結合した「検出可能なマーカー
」を決定することによって、試料中の分析物のＣ度を標
準曲線の値を参照して１汁イ面する。
１−の希釈緩衝液は、水性緩衝液であり、好ましぐはｐ
Ｈ７，０〜７．５のリン酸塩緩衝食塩水（：５ａｌｉｎ
ｅ）である、好ましくは、試料が血清、気管支の吐いた
物、うみまたはＩｕ病であるとき、希釈緩衝液は１０〜
３０容星二％、最も好ましくは約２０容コ龜％の血清ま
たは血清蛋白質調装を含イ１する。
Ｈ７，０〜７．５のリン酸塩緩衝食塩水（：５ａｌｉｎ
ｅ）である、好ましくは、試料が血清、気管支の吐いた
物、うみまたはＩｕ病であるとき、希釈緩衝液は１０〜
３０容星二％、最も好ましくは約２０容コ龜％の血清ま
たは血清蛋白質調装を含イ１する。
未発明の方法の１つの利点は、同・の部類の他の構成（
１の存在ドにバンコマイシンの部類の抗生物質を容易に
かつ迅速に決定することが今回ｒＩｒ能となったという
ことである。′１９実、／゛：：ンコマイシン類のすべ
ての抗生物質は選択的に、′異なる程度であるが、Ｄ−
Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａカルボキシ末端ペプチドに
結合し、試験すべきＷｉ生物質のみが特定の抗体と反応
するであろう。したがって、例えば、バンコマイシンの
部類の２種類の抗生物質（例えば、バンコマイシンおよ
びティコプラニン）を含有する生物学的流体を本発明の
ノｊ法により７ツセイするとき、両者の抗生物質は、適
当な高分子化合物の担体と接合したＤ−アラニル−Ｄ−
アラニンカルボキシ末端オリゴペプチドを表面１−に吸
着して有する分析用支持体へ選択的に結合するが、試料
中に存在しかつ通常妨害するすべての他の物質は洗？Ｔ
１シ去られるであろう。次いで、特定の抗体（例えば、
ティコプラニンに対して向けられた抗体）は吸着したＤ
−アラニル−Ｄ−アラニンペプチドに結合した関連する
抗生物質（、例えば、ティコプラニン）にのみ結合する
が、他の抗生物質（例えば、バンコマイシン）には同様
には結合しないであろう。
１の存在ドにバンコマイシンの部類の抗生物質を容易に
かつ迅速に決定することが今回ｒＩｒ能となったという
ことである。′１９実、／゛：：ンコマイシン類のすべ
ての抗生物質は選択的に、′異なる程度であるが、Ｄ−
Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａカルボキシ末端ペプチドに
結合し、試験すべきＷｉ生物質のみが特定の抗体と反応
するであろう。したがって、例えば、バンコマイシンの
部類の２種類の抗生物質（例えば、バンコマイシンおよ
びティコプラニン）を含有する生物学的流体を本発明の
ノｊ法により７ツセイするとき、両者の抗生物質は、適
当な高分子化合物の担体と接合したＤ−アラニル−Ｄ−
アラニンカルボキシ末端オリゴペプチドを表面１−に吸
着して有する分析用支持体へ選択的に結合するが、試料
中に存在しかつ通常妨害するすべての他の物質は洗？Ｔ
１シ去られるであろう。次いで、特定の抗体（例えば、
ティコプラニンに対して向けられた抗体）は吸着したＤ
−アラニル−Ｄ−アラニンペプチドに結合した関連する
抗生物質（、例えば、ティコプラニン）にのみ結合する
が、他の抗生物質（例えば、バンコマイシン）には同様
には結合しないであろう。
したがろて、検出１１「俺なマーカーに結合した種物Ｗ
的抗抗体抗血清は、いったん添加されると、抗分析物（
この場合、抗ティコプラニン）抗体に特Ｕ的に結合し、
これは、次いで、「静市相」へ特異的抗原（この場合、
ティコプラニン）の結合を介して結合するであろう。し
たがって、結合した［マーカー」の検出による「結合し
た」種４￥ＩＩＩＩｊ的抗抗体抗血清の引き続く評価は
、同一部類の他の抗生物質（この場合、バンコマイシン
）の存在五においてさえ、アッセイの選択した目的であ
る部類の特異的抗生物質（この場合、ティコプラニン）
にのみ相互に関係づけられる。
的抗抗体抗血清は、いったん添加されると、抗分析物（
この場合、抗ティコプラニン）抗体に特Ｕ的に結合し、
これは、次いで、「静市相」へ特異的抗原（この場合、
ティコプラニン）の結合を介して結合するであろう。し
たがって、結合した［マーカー」の検出による「結合し
た」種４￥ＩＩＩＩｊ的抗抗体抗血清の引き続く評価は
、同一部類の他の抗生物質（この場合、バンコマイシン
）の存在五においてさえ、アッセイの選択した目的であ
る部類の特異的抗生物質（この場合、ティコプラニン）
にのみ相互に関係づけられる。
本発明の好ましい実施態様はヒに記載した方法であり、
ここで表面上ぼ吸着できる適当な高分子化合物の担体と
接合したＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オ
リゴペプヂドを前記表面１−に支持する分析用支持体は
ＢＳＡ−ε−Ａｃａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ
で被覆したプラスチックのマイクロブｌ／−トのウェル
であり、検出すべき物質に対して向けられた抗体はバン
コマイシンの部類の抗生物質に対するウサギ抗血清であ
り、そして検出可イ駐なマーカーに結合した抗抗体抗血
清はベルオキシダーセと結合したウサギＩｇＧである。
ここで表面上ぼ吸着できる適当な高分子化合物の担体と
接合したＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オ
リゴペプヂドを前記表面１−に支持する分析用支持体は
ＢＳＡ−ε−Ａｃａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ
で被覆したプラスチックのマイクロブｌ／−トのウェル
であり、検出すべき物質に対して向けられた抗体はバン
コマイシンの部類の抗生物質に対するウサギ抗血清であ
り、そして検出可イ駐なマーカーに結合した抗抗体抗血
清はベルオキシダーセと結合したウサギＩｇＧである。
バンコマイシンの部類の前もって決定した抗生物質（「
前もって決定した抗生物質」）に対するウサギ抗血１＋
’ｉは、それ自体既知の方７．ｌ：により、例えば、ウ
シ血清アルブミンのｌΦ゛ｊ１１部につき約１〜約１０
市早部のｒ ＋ｉｉｉもって決定した抗生物質」を使用
することにより、 ｒ ＋ｉＱちって決定した抗生物ｒ
１」およびウシ血清アルブミンを結合することによって
調製された［而もって決定した抗生物質」−アルブミノ
接合体の有効抗ｒ ｌ１ｉｊもって決定した抗生物質」
抗体＋Ｈ４１１’１−を、ウサギに、反復（３か月間３
閘毎に）注入することによって得られる。
前もって決定した抗生物質」）に対するウサギ抗血１＋
’ｉは、それ自体既知の方７．ｌ：により、例えば、ウ
シ血清アルブミンのｌΦ゛ｊ１１部につき約１〜約１０
市早部のｒ ＋ｉｉｉもって決定した抗生物質」を使用
することにより、 ｒ ＋ｉＱちって決定した抗生物ｒ
１」およびウシ血清アルブミンを結合することによって
調製された［而もって決定した抗生物質」−アルブミノ
接合体の有効抗ｒ ｌ１ｉｊもって決定した抗生物質」
抗体＋Ｈ４１１’１−を、ウサギに、反復（３か月間３
閘毎に）注入することによって得られる。
動物から４ｉｊ ’ｄ４採血し、そして抗ｒ ＋ｉＤも
って決定した抗生物質」抗体の力価を、分析法、例えば
、エリザ（ＥＬＩＳＡ）法に従い、同一の［曲もって決
定した抗生物質」で被覆した分析用支持体および適当な
検出１１ｒ１七なプローブ、例えば、ベルオギシターゼ
と結合したウサギＴｇＧ類に対するヤギ抗血清を使用し
て決定する。分析的に有効な抗体の生トｆが達成された
とき、動物から採血し、そして抗血清を回収し、次いで
、必要に応じて、トとし、て抗ウシ血清アルブミンの免
疫グロブリンを除去するためにさらに精製する。前記精
製は、変性したマトリ二・クス、例えば、それ自体既知
の方法により活性化されたアガロースゲル［例えば、セ
フｙロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ＠３ ］とウシ血清ア
ルブミンを結合することによって調製したマトリ−、ク
スを使用する吸収クロマトグラフィーを含むことができ
る。Ｌで使用した用語「分析用支持体」はヒと同一の意
味を有する。とくに、［１ｉ１ちって決定した抗生物質
」の分析的に検出＋−＋（俺な峨をその表面トに吸着で
きるＰｖＣマイクロブし一ト、試験管またはプラスチ・
シクシ−１・は分析法における使用にとくに適当な手段
である。
って決定した抗生物質」抗体の力価を、分析法、例えば
、エリザ（ＥＬＩＳＡ）法に従い、同一の［曲もって決
定した抗生物質」で被覆した分析用支持体および適当な
検出１１ｒ１七なプローブ、例えば、ベルオギシターゼ
と結合したウサギＴｇＧ類に対するヤギ抗血清を使用し
て決定する。分析的に有効な抗体の生トｆが達成された
とき、動物から採血し、そして抗血清を回収し、次いで
、必要に応じて、トとし、て抗ウシ血清アルブミンの免
疫グロブリンを除去するためにさらに精製する。前記精
製は、変性したマトリ二・クス、例えば、それ自体既知
の方法により活性化されたアガロースゲル［例えば、セ
フｙロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ＠３ ］とウシ血清ア
ルブミンを結合することによって調製したマトリ−、ク
スを使用する吸収クロマトグラフィーを含むことができ
る。Ｌで使用した用語「分析用支持体」はヒと同一の意
味を有する。とくに、［１ｉ１ちって決定した抗生物質
」の分析的に検出＋−＋（俺な峨をその表面トに吸着で
きるＰｖＣマイクロブし一ト、試験管またはプラスチ・
シクシ−１・は分析法における使用にとくに適当な手段
である。
溶液、例えば、発酵培養基または抽出液の中の分析物の
特異的な、迅速な、容易な検出およびアッセイにおいて
有用であるほかに、本発明の方法は、生物学ｒド流体、
例えば、血液およびその分画、尿、体の滲出物、うみ、
気管支の吐いた物および皮膚の検出およびアー、セイに
応用できる。
特異的な、迅速な、容易な検出およびアッセイにおいて
有用であるほかに、本発明の方法は、生物学ｒド流体、
例えば、血液およびその分画、尿、体の滲出物、うみ、
気管支の吐いた物および皮膚の検出およびアー、セイに
応用できる。
未発明の方法を生物学的流体に適用するために、一般に
、試料の特定の予備処理は不必要であるが、通常、選択
した条件ドでこの方法の測定の用途に入れるためにＲ＋
ｉ液によりん釈（および、まれに、試料のｅ縮）は七分
であろう。
、試料の特定の予備処理は不必要であるが、通常、選択
した条件ドでこの方法の測定の用途に入れるためにＲ＋
ｉ液によりん釈（および、まれに、試料のｅ縮）は七分
であろう。
好ましくは、アシセイすべき同一に生物学的流体中に溶
解した分析物の標準の調製物を使用して検１．ｊ線を作
成する。
解した分析物の標準の調製物を使用して検１．ｊ線を作
成する。
Ｓｊ；管支の吐いた物、滲出物、うみおよび皮１−１の
場合において、分析的に試ネ１を通常の「１段により均
質化することが・般°に必要である。試料を、 一般に
、通常均質化の＋ｉＪに、緩衝液で希釈する。
場合において、分析的に試ネ１を通常の「１段により均
質化することが・般°に必要である。試料を、 一般に
、通常均質化の＋ｉＪに、緩衝液で希釈する。
ｔｉｒましくは、緩４＋１液ｊよ、ｐＨ７〜７．５の水
性緩衝液であり、血清または血清蛋白質と一緒に添加し
、希釈緩衝液は合計容Ｈ，Ｈ−の約１０〜３０％、好ま
しくは約２０％である。
性緩衝液であり、血清または血清蛋白質と一緒に添加し
、希釈緩衝液は合計容Ｈ，Ｈ−の約１０〜３０％、好ま
しくは約２０％である。
本発明の々ｆましい実施態様は、バンコマイシン、アポ
バルシン、リストセチン、抗生物’５ｊＡ３５５１２Ｂ
、アクタブラニン、抗生物質Ａ４１０３０、ＦｉＣ生物
’６ ／、 ４７９３４およびノヘンコマイシンＣ′）
部類の他の抗生物質と交差反応しない抗ティコプラニン
抗血枯の使用によτて代表される。
バルシン、リストセチン、抗生物’５ｊＡ３５５１２Ｂ
、アクタブラニン、抗生物質Ａ４１０３０、ＦｉＣ生物
’６ ／、 ４７９３４およびノヘンコマイシンＣ′）
部類の他の抗生物質と交差反応しない抗ティコプラニン
抗血枯の使用によτて代表される。
本発明の好ましいへ用範囲は１１０−１Ｏ００ｎ ／
ｍ Ｉの分析物であり、最もＯｆましい範囲はｌＯ〜ｌ
ｏＯｎｇ／ｍｉの分析物である。アッセイ間の粘度ζＣ
〜′）は−・般に１０”２５％である。
ｍ Ｉの分析物であり、最もＯｆましい範囲はｌＯ〜ｌ
ｏＯｎｇ／ｍｉの分析物である。アッセイ間の粘度ζＣ
〜′）は−・般に１０”２５％である。
この方法のＩＦ確さおよび精度は、既知の統計学的分布
法の寄与−により誤差を最小とすることを目的とする適
ｐＪな実験の設計によりさらに改良することができる。
法の寄与−により誤差を最小とすることを目的とする適
ｐＪな実験の設計によりさらに改良することができる。
未発１！１１の「分析用支持体」は、「動ならびにｎｔ
ｌｊ化されたアｉ・セイのＬ順における使用に適する。
ｌｊ化されたアｉ・セイのＬ順における使用に適する。
この柔軟性は最絆の使Ｉｌ１者の要求を満足するために
適する。・疼実、１〕動化された手順は、多くの処置し
た患者の臨床的監視において、例えば、治療の投グー州
の調節および生物学的流体中・〜の薬物の分４１の研究
のために極めて有用であることがあり、 一方り動手順
は実験室規模の分析に十分であろう。
適する。・疼実、１〕動化された手順は、多くの処置し
た患者の臨床的監視において、例えば、治療の投グー州
の調節および生物学的流体中・〜の薬物の分４１の研究
のために極めて有用であることがあり、 一方り動手順
は実験室規模の分析に十分であろう。
組成物の面で、本発明は、また、構成成分：ａ） 表面
を有する分析用支持体、前記支持体はその表面にに吸着
できる適当な高分子化合物の担体と接合したＤ−アラニ
ル−Ｄ−アラニ〉・カルボキシ末端オリゴペプチドを支
持する、 ｂ） 検出すべき物質である分析物に対して特異的に向
けられた抗体を含有する抗体：Ａ型物、および必要に応
じて、 Ｃ） 分析物に対して向けられかつ検出０■能なマーカ
ーと結合した「第１」抗体の源の動物種の免疫グロブリ
ンに対して特異的に向けられた抗生を含有する種物異的
抗抗体調袈物、 からなる試薬のキットを包含し、このキットは、Ｄ−ア
ラニル−Ｄ−アラニンジペプチドまたはＤ−アラニル−
Ｄ−７ラニンカルボキシ末端オリゴペプチドによって代
表される「分子の受容体」、ことにパンコマ１゛シンの
部類の抗生物質、その個々のｌｕ ｆ、誘導体またはア
グリコソヘ結合する特徴を有する分析物の容易な、迅速
な、信頼性あるかつｉ′Ｉ確な決定のための本発明の方
法を実施するために使用する。
を有する分析用支持体、前記支持体はその表面にに吸着
できる適当な高分子化合物の担体と接合したＤ−アラニ
ル−Ｄ−アラニ〉・カルボキシ末端オリゴペプチドを支
持する、 ｂ） 検出すべき物質である分析物に対して特異的に向
けられた抗体を含有する抗体：Ａ型物、および必要に応
じて、 Ｃ） 分析物に対して向けられかつ検出０■能なマーカ
ーと結合した「第１」抗体の源の動物種の免疫グロブリ
ンに対して特異的に向けられた抗生を含有する種物異的
抗抗体調袈物、 からなる試薬のキットを包含し、このキットは、Ｄ−ア
ラニル−Ｄ−アラニンジペプチドまたはＤ−アラニル−
Ｄ−７ラニンカルボキシ末端オリゴペプチドによって代
表される「分子の受容体」、ことにパンコマ１゛シンの
部類の抗生物質、その個々のｌｕ ｆ、誘導体またはア
グリコソヘ結合する特徴を有する分析物の容易な、迅速
な、信頼性あるかつｉ′Ｉ確な決定のための本発明の方
法を実施するために使用する。
すでに述へたように、好ましい「表面を有する分析用支
持体、ｉｉｆ記支持体はその表面１−に吸着できる適当
な品分Ｙ−化合物の担体と接合し、たＤ−アラニル−Ｄ
−アラニンカルポギシ末端オリゴペプチ：・を支持する
」 （被覆された分析用支持体）は、０．０２５マイク
ログラ１、〜ｌマイクログラム、好ましくはＯ１■マイ
クロクラム〜０．２マイクログラムのＢＳＡ −ε−Ａ
Ｃａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａｌａで＃覆された微１
Ｉｉ−滴定用のプレートのプラスチックウェル、試験管
またはプラスチックシートによって代表される。
持体、ｉｉｆ記支持体はその表面１−に吸着できる適当
な品分Ｙ−化合物の担体と接合し、たＤ−アラニル−Ｄ
−アラニンカルポギシ末端オリゴペプチ：・を支持する
」 （被覆された分析用支持体）は、０．０２５マイク
ログラ１、〜ｌマイクログラム、好ましくはＯ１■マイ
クロクラム〜０．２マイクログラムのＢＳＡ −ε−Ａ
Ｃａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａｌａで＃覆された微１
Ｉｉ−滴定用のプレートのプラスチックウェル、試験管
またはプラスチックシートによって代表される。
第１抗体調製中の分析物に対して特急的な抗体のｊ！−
は、検出すべき分Ｍ；物のＸ＋１°を越えてはならなン
）。ぞれはモノクローナル抗体によって、あるいは採血
時にｉｏ−４より高い抗体力化を有する免疫化したウサ
ギによって好ましくは得られたポリクローナル抗体によ
って代表される。
は、検出すべき分Ｍ；物のＸ＋１°を越えてはならなン
）。ぞれはモノクローナル抗体によって、あるいは採血
時にｉｏ−４より高い抗体力化を有する免疫化したウサ
ギによって好ましくは得られたポリクローナル抗体によ
って代表される。
明らかなように、「第２」抗体調製物、すなわち、種物
異的抗体調製物、の濃度は、支持する固体表面ｌ―の分
析物に結合するようになる「第１」抗体の喉に１５Ｆｌ
係し、そして等モル比率であるかあるいは便利な過剰ｊ
ＩＦであるべきである。
異的抗体調製物、の濃度は、支持する固体表面ｌ―の分
析物に結合するようになる「第１」抗体の喉に１５Ｆｌ
係し、そして等モル比率であるかあるいは便利な過剰ｊ
ＩＦであるべきである。
５７者にとって明らかなように、他の構成成分、例えば
、緩衝液、明らかにする１段（ｒｅｖｅａｌｉｎｇ
ｍｅａｎｓ）などを必要に応じて「キラＩ・」中に存在
させることができるばがりでなぐ、かづまた別に形態で
あるが同一用途のために存在させることができる。また
、本発明の方法において使用するための成分のこれらの
別々の形態は本発明の組成物および方法に包含される。
、緩衝液、明らかにする１段（ｒｅｖｅａｌｉｎｇ
ｍｅａｎｓ）などを必要に応じて「キラＩ・」中に存在
させることができるばがりでなぐ、かづまた別に形態で
あるが同一用途のために存在させることができる。また
、本発明の方法において使用するための成分のこれらの
別々の形態は本発明の組成物および方法に包含される。
本発明は、ウシ血情アルブミンの１重ψ部につき約１〜
約１０ 屯＋１ｊ一部のティコプラニンの結合により調
製されたテイコプラニン−アルブミン接合体の有効抗テ
ィコプラニン抗体湧導Ｈ，Ｘをウサギに反復往射（７１
分析的に有効な抗体の生産を達成するためば十分な時間
の後、前記動物から採血し、得られた抗血清を回収し、
ぞして必要に応じて、約１重ＸＩＦ部のウシ血清アルブ
ミンを約１００容：ｙ部の活性化＋影ｉｙ；アガロース
と結合することによって得られたマトリックスの約１７
ｉ） （容： ｌ、ｊ、 ）との接触により前記抗血清
を抗つシ血清アルブミン免疫グロブリ〉′から精製する
ことによって得られたことを特命・とする抗テイコプラ
ニ／ウサギ抗血情、をさらに提供する。
約１０ 屯＋１ｊ一部のティコプラニンの結合により調
製されたテイコプラニン−アルブミン接合体の有効抗テ
ィコプラニン抗体湧導Ｈ，Ｘをウサギに反復往射（７１
分析的に有効な抗体の生産を達成するためば十分な時間
の後、前記動物から採血し、得られた抗血清を回収し、
ぞして必要に応じて、約１重ＸＩＦ部のウシ血清アルブ
ミンを約１００容：ｙ部の活性化＋影ｉｙ；アガロース
と結合することによって得られたマトリックスの約１７
ｉ） （容： ｌ、ｊ、 ）との接触により前記抗血清
を抗つシ血清アルブミン免疫グロブリ〉′から精製する
ことによって得られたことを特命・とする抗テイコプラ
ニ／ウサギ抗血情、をさらに提供する。
本発明は、さらに、表面−Ｈに適当な−ｔｉｚのティコ
プラニンを吸着する、ＰＶＣマイクロプレート、試験管
またはプラスチックシートかう成ることを特徴とするテ
ィコプラニンおよび抗テイコブラニ、／抗体の分析的決
定に使用するための被覆分析用支持体、を提供する。
プラニンを吸着する、ＰＶＣマイクロプレート、試験管
またはプラスチックシートかう成ることを特徴とするテ
ィコプラニンおよび抗テイコブラニ、／抗体の分析的決
定に使用するための被覆分析用支持体、を提供する。
次の実施例により本発明を説明するが、これらの実施例
は本発明の範囲を限定するもと解釈すべきではない。
は本発明の範囲を限定するもと解釈すべきではない。
実施例１
ＢＳＡ −ｑ−Ａ ｃ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ−Ｄ−Ａ
ｌ ａ０週舅 ａ） ε−７ミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−ア
ラニン（ｅ−Ａ ｃ ａ−Ｄ−Ａ ｉ ａ−Ｄ−Ａ １
ａ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）への接合 ε−Ａ Ｃａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ、−Ｄ−Ａ ｌ ａをＢ
ＳＡヘグルタルアルデヒドを使用する１２王程法」によ
り接合し、この２官能性架橋試薬： ＢＳＡ （２５０
ｍｇ）を０．１モル＋７） Ｎ ａ −ｉ５酸Ｎ ａ
／ ｉＫ’＋Ｒ酸塩、ｐＨ９、５（４，５ｍ１）中に溶
解する。グルタルアルデヒド（０，５ｍｌの２５％の抗
血清）を添加し、そして室温で１時間反応させる。次い
で、この反応の塊を０．９％のいＮａＣ１に対して１夜
透析する。ε−Ａｃａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ
ａ （１２５ｍｇ）を０．５ｍｌの０．５モルのＮａ−
１３酸塩緩衝液、ｐＨ９，５中に溶解し、透析した反応
の塊に添加し、そして室温で６時間ｊ■拌する。次いで
、１モルのリジン（０、５ｍ ｉ）を添加し そしてこ
の混合物を室温に２時間保持して未反応の活性基を遮断
する。次いで、この接合体を０９１５モルのＮａＣ１を
含イＪする０、０５モルのに一リン酸塩に対して透析す
る。
ｌ ａ０週舅 ａ） ε−７ミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−ア
ラニン（ｅ−Ａ ｃ ａ−Ｄ−Ａ ｉ ａ−Ｄ−Ａ １
ａ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）への接合 ε−Ａ Ｃａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ、−Ｄ−Ａ ｌ ａをＢ
ＳＡヘグルタルアルデヒドを使用する１２王程法」によ
り接合し、この２官能性架橋試薬： ＢＳＡ （２５０
ｍｇ）を０．１モル＋７） Ｎ ａ −ｉ５酸Ｎ ａ
／ ｉＫ’＋Ｒ酸塩、ｐＨ９、５（４，５ｍ１）中に溶
解する。グルタルアルデヒド（０，５ｍｌの２５％の抗
血清）を添加し、そして室温で１時間反応させる。次い
で、この反応の塊を０．９％のいＮａＣ１に対して１夜
透析する。ε−Ａｃａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ
ａ （１２５ｍｇ）を０．５ｍｌの０．５モルのＮａ−
１３酸塩緩衝液、ｐＨ９，５中に溶解し、透析した反応
の塊に添加し、そして室温で６時間ｊ■拌する。次いで
、１モルのリジン（０、５ｍ ｉ）を添加し そしてこ
の混合物を室温に２時間保持して未反応の活性基を遮断
する。次いで、この接合体を０９１５モルのＮａＣ１を
含イＪする０、０５モルのに一リン酸塩に対して透析す
る。
ｂ） 接合体のゲル＠過
ｉ剰の未反応材制または紙分（Ｈ，Ｘ副生物か、′：）
接合体を精製するために、トで得られた透析した混合物
を、令却したセファクリル（：５ｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ
−１００カラと（調節された穴の共有架橋したアルキル
デキストランおよびＮ、Ｎ’−７チレンヒスーアクリル
７三ド）ｒファーマシアーファイン・ケミカルズ（Ｐ
ｈ ａ ｒ ｒ−１ａ ｃ ｉ ａＦｉｎｅ Ｃｈｍ
ｅｉｃａｌｓ）］ （０゜８ｃｍＸ１００ｃｍ）に通
過させ、接触させ、そしてＰＢＳ ｐＨ１Ｏ，４（流
速＝１０ｍｌ／時間）で溶離した。溶離を２８０ｎｍに
おける透過の記録によって分光光度測定的に監視する。
接合体を精製するために、トで得られた透析した混合物
を、令却したセファクリル（：５ｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ
−１００カラと（調節された穴の共有架橋したアルキル
デキストランおよびＮ、Ｎ’−７チレンヒスーアクリル
７三ド）ｒファーマシアーファイン・ケミカルズ（Ｐ
ｈ ａ ｒ ｒ−１ａ ｃ ｉ ａＦｉｎｅ Ｃｈｍ
ｅｉｃａｌｓ）］ （０゜８ｃｍＸ１００ｃｍ）に通
過させ、接触させ、そしてＰＢＳ ｐＨ１Ｏ，４（流
速＝１０ｍｌ／時間）で溶離した。溶離を２８０ｎｍに
おける透過の記録によって分光光度測定的に監視する。
カラムの空隙体積で溶離されたピークに相当する分画を
プールしく合計の体積＝ １５ｍ ｌ＞、１モルのＨＣ
ｌで中和し、そしてＰＢＳ ｐＨ７，３で４倍に希釈
する。この混合物の０．５ｍｌの７リコートをバイアル
の中に分配し、ＩＪｔ結乾燥し、そして−８０℃に保持
する。
プールしく合計の体積＝ １５ｍ ｌ＞、１モルのＨＣ
ｌで中和し、そしてＰＢＳ ｐＨ７，３で４倍に希釈
する。この混合物の０．５ｍｌの７リコートをバイアル
の中に分配し、ＩＪｔ結乾燥し、そして−８０℃に保持
する。
−１重施例２
凍結乾燥したＢＳＡ −ｅ−Ａ ｃ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ
ａ−Ｄ−Ａｌａのバイアルの内容物（Ｉ−の実施例に記
載したようにＡ！Ａした）をＰＢＳ ＰＨ１，３（０
、５ｍ ｌ）中に溶解することによって、マイクロプレ
ートの毎酉調製用に原溶液を調製する：この溶液は数−
１１１１活性の損失なしに貯蔵することができ、それゆ
えイｌｔ四の調製のための原溶液として使ｉＴｌするた
めに漱する。
ａ−Ｄ−Ａｌａのバイアルの内容物（Ｉ−の実施例に記
載したようにＡ！Ａした）をＰＢＳ ＰＨ１，３（０
、５ｍ ｌ）中に溶解することによって、マイクロプレ
ートの毎酉調製用に原溶液を調製する：この溶液は数−
１１１１活性の損失なしに貯蔵することができ、それゆ
えイｌｔ四の調製のための原溶液として使ｉＴｌするた
めに漱する。
マイクロプレートのウェル［ファルコン・マイクロテニ
：ｌ・（Ｆａｉｃｏｎ Ｍｉｃｒｃｔｅｓｔ Ｑ！Ｉ
＋） ｌＩｔフレキシブルΦアー、セイ・プレート（Ｆ
ｌｅｘｉｂｌｅ Ａｓ５ａｙ Ｐｌａｔｅ）；ベク
Ｉ・ン・ディ千ンソン・アンド・カンパニー（Ｂｅｃｋ
ｔｃｎ Ｄｉｃｋｉｎ：；ａｎ ａｎｄ Ｃ０−
）、カリフ中ルニア州、；「キシナート（Ｏｘｎａｒｄ
）９３０３０］に、この原溶液ノ１／２０ＯＡ、釈物の
１００−ｆイクロリットル／ウェルを充填し、ただしブ
ランクとして保持したウェルの４ｉ １１’７の列を除
外する。これらのウェルに、 １００マ、ｆクロ９．ト
ルのＰＢＳ ｐＨ７，３を充填する。マイクロブし・
−トを室温ｔ％蓋をした箱の中で３時間インキュベーシ
ョンし、次いで空にしかつノに留水を充填することによ
って５回洗浄する。ＰＢＳ ｐＨ７，３中の３％のＢ
Ｓ Ａ−の２０ＱマイクロリンＩ・ル／つ□ルを添加
し、そして室温において２時間吸ノｉさせて未被覆のプ
ラスチック表面を４断する。プレートを＋Ｉｒ ｔＪ蒸
留水で洗浄し、振盪乾奴・シ、そして使川するまで４℃
で！貯蔵する。
：ｌ・（Ｆａｉｃｏｎ Ｍｉｃｒｃｔｅｓｔ Ｑ！Ｉ
＋） ｌＩｔフレキシブルΦアー、セイ・プレート（Ｆ
ｌｅｘｉｂｌｅ Ａｓ５ａｙ Ｐｌａｔｅ）；ベク
Ｉ・ン・ディ千ンソン・アンド・カンパニー（Ｂｅｃｋ
ｔｃｎ Ｄｉｃｋｉｎ：；ａｎ ａｎｄ Ｃ０−
）、カリフ中ルニア州、；「キシナート（Ｏｘｎａｒｄ
）９３０３０］に、この原溶液ノ１／２０ＯＡ、釈物の
１００−ｆイクロリットル／ウェルを充填し、ただしブ
ランクとして保持したウェルの４ｉ １１’７の列を除
外する。これらのウェルに、 １００マ、ｆクロ９．ト
ルのＰＢＳ ｐＨ７，３を充填する。マイクロブし・
−トを室温ｔ％蓋をした箱の中で３時間インキュベーシ
ョンし、次いで空にしかつノに留水を充填することによ
って５回洗浄する。ＰＢＳ ｐＨ７，３中の３％のＢ
Ｓ Ａ−の２０ＱマイクロリンＩ・ル／つ□ルを添加
し、そして室温において２時間吸ノｉさせて未被覆のプ
ラスチック表面を４断する。プレートを＋Ｉｒ ｔＪ蒸
留水で洗浄し、振盪乾奴・シ、そして使川するまで４℃
で！貯蔵する。
Ｘ庵例Ａ
抗ティコプラニン抗血清の調製
テイコプラニン−アルブミン接合体（Ｔ−ＢＳＡ）を使
用して、ウサギを免疫して抗テイコブラニ〉抗什の生産
を誘導する。
用して、ウサギを免疫して抗テイコブラニ〉抗什の生産
を誘導する。
Ｔ−ＢＳＡは、ゲットフィールド（Ｇ ｏ ｏ ｄ ｆ
ｉ ｅ Ｉ ｄ）らに従い、ｐＨ５，５の５ｍｌの水中
で結合試薬とし、てｌ−エチル−３−（３−メチルアミ
ノプロピル）−カーポジイミド■！！酸塩（３００ｒ！
１ｇ）を使川して、２００ｍｇのティコプラニンを５０
ｍｇのＢＳＡへ結合することによって調製する［ゲット
フィールド（Ｇｏｏｄｆｉｅｌｃｌ）Ｔ、Ｌ、、Ｃ、シ
ービン（Ｌｅｖｉｎ）およびＧ、Ｄ、７７スマン（Ｆａ
ｓｍａｎ）、１９６４、サイエンス（Ｓｃ ｉ ｅｎｃ
ｅ）１４４．１３４．４］。このＴ−ＢＳＡを！夜透析
し、凍結乾燥し、次し゛で１ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ （
ｒ、濃度で５０容ｊｉ％−％（７）７０インドアシユパ
ンＩ・を含有する生理学的溶液中に懸濁させる。５匹の
雌のｕ庚なニューシーラントの白ウサギの各々に、１．
２ｍｌのしの浮：液を皮Ｆ−注射する。０．５ｍｌの同
一抗原溶液を使用して、３濾毎に３か月間併進注射を行
なう。この１り１間の間、動物から％濾採血し、そして
明らかにするプローブ（ｒｅｖａａｌｉｎｇ ｐ
ｒ ｏ ｖｅ）としてウサギＩｇＧ類に対するワサビの
ベルオキンターゼ標識ヤキ抗血清を使用して、テメコブ
ラニン被覆マイクロブレーＩ・を用いるエリザ（ＥＬｒ
ＳＡ）法により、抗テイコブラ二ンカ価を決定する。
ｉ ｅ Ｉ ｄ）らに従い、ｐＨ５，５の５ｍｌの水中
で結合試薬とし、てｌ−エチル−３−（３−メチルアミ
ノプロピル）−カーポジイミド■！！酸塩（３００ｒ！
１ｇ）を使川して、２００ｍｇのティコプラニンを５０
ｍｇのＢＳＡへ結合することによって調製する［ゲット
フィールド（Ｇｏｏｄｆｉｅｌｃｌ）Ｔ、Ｌ、、Ｃ、シ
ービン（Ｌｅｖｉｎ）およびＧ、Ｄ、７７スマン（Ｆａ
ｓｍａｎ）、１９６４、サイエンス（Ｓｃ ｉ ｅｎｃ
ｅ）１４４．１３４．４］。このＴ−ＢＳＡを！夜透析
し、凍結乾燥し、次し゛で１ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ （
ｒ、濃度で５０容ｊｉ％−％（７）７０インドアシユパ
ンＩ・を含有する生理学的溶液中に懸濁させる。５匹の
雌のｕ庚なニューシーラントの白ウサギの各々に、１．
２ｍｌのしの浮：液を皮Ｆ−注射する。０．５ｍｌの同
一抗原溶液を使用して、３濾毎に３か月間併進注射を行
なう。この１り１間の間、動物から％濾採血し、そして
明らかにするプローブ（ｒｅｖａａｌｉｎｇ ｐ
ｒ ｏ ｖｅ）としてウサギＩｇＧ類に対するワサビの
ベルオキンターゼ標識ヤキ抗血清を使用して、テメコブ
ラニン被覆マイクロブレーＩ・を用いるエリザ（ＥＬｒ
ＳＡ）法により、抗テイコブラ二ンカ価を決定する。
１ｉ１述のエリザ（ＥＬＩＳＡ）法は次のように実施す
る。
る。
ＰＶＣマイ〃ロブレート ［ファルコン１マイクロテス
ト（Ｆａｌｃｏｎ Ｍｉｃｒａｔｅｓｔ＠）［１フレ
キシブル拳アツセイ・プレー１・（Ｆ！ｅｘｉｂｌｅ
Ａｓ５ａｙ Ｐｌａｔｅ）：ベクトレ・ディキンソ
ンΦアンド・カンパニー（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋ
ｉｎｓｏｎ ａｒ、ｄ Ｃ０９）、カリフ≠ルニア
州、オキシナート（Ｏｘｎａｒｄ）９３０３０ｊに、０
．４ｇ／ｌのティコプラニンおよび５８ｇ／ｌのＮａＣ
１を含有する溶液の０．１ｍｌ／ウェルを充填する。マ
イクロプレートを３７°Ｃで４をした箱の中で３時間イ
ンキ、ペーションし、次いで空にしかつリンＩ’ｌＸＮ
ｉ食塩水ｐＨ７，３（０，１５モルｔＴ） Ｎ ａ Ｃ
１，０，０５モルのリン酸ナトリウム）を充填すること
によ−）て３回洗浄する。
ト（Ｆａｌｃｏｎ Ｍｉｃｒａｔｅｓｔ＠）［１フレ
キシブル拳アツセイ・プレー１・（Ｆ！ｅｘｉｂｌｅ
Ａｓ５ａｙ Ｐｌａｔｅ）：ベクトレ・ディキンソ
ンΦアンド・カンパニー（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋ
ｉｎｓｏｎ ａｒ、ｄ Ｃ０９）、カリフ≠ルニア
州、オキシナート（Ｏｘｎａｒｄ）９３０３０ｊに、０
．４ｇ／ｌのティコプラニンおよび５８ｇ／ｌのＮａＣ
１を含有する溶液の０．１ｍｌ／ウェルを充填する。マ
イクロプレートを３７°Ｃで４をした箱の中で３時間イ
ンキ、ペーションし、次いで空にしかつリンＩ’ｌＸＮ
ｉ食塩水ｐＨ７，３（０，１５モルｔＴ） Ｎ ａ Ｃ
１，０，０５モルのリン酸ナトリウム）を充填すること
によ−）て３回洗浄する。
リン酸Ｉ′ｉ！緩衝食塩水ｐＨ７，３（０，１５モルの
ｒＪａｃｌ、ｏ、ｃ’５モルのリン酸ナトリウム）中の
ＢＳＡの溶液（３０ｇ／Ｉ）をウェルに加え（０，２ｍ
ｌ／ウェル）、そして室温で２時間吸７１させて未反応
のプラス千ンク表面を遮断する。
ｒＪａｃｌ、ｏ、ｃ’５モルのリン酸ナトリウム）中の
ＢＳＡの溶液（３０ｇ／Ｉ）をウェルに加え（０，２ｍ
ｌ／ウェル）、そして室温で２時間吸７１させて未反応
のプラス千ンク表面を遮断する。
プレートを＋Ｉｒびリン耐塩緩衝食塩水ｐＨ７、３ＣＱ
、 ｌ りモルｃ７）Ｎ ａＣｌ 、 ０ 、０５
モル（７）リン酸ナトリウム）で３回洗浄し、次し゛で
ウサキ抗血清試験溶液（０，１ｍｌ／ウェル）を異なる
１０のスカラー希釈物（ｓｃａｌａ、ｒ ｄｉｌｕｔ
ｉｏｎ） （１： Ｊ−１： １０６）に添加し、そ
して３７°Ｃで２時間増団したウェル１′対して反応さ
せる。＋） ンＮＩｔｔ［［ｉｆ［５に、ｐＨ７、３（
０、１５モルのＮａＣ１，０，０５モルのリン酸す１・
１１、ラム）でよ〈洗浄した後、ワサビのペルオキシダ
ーゼで標識したウサギＩｇＧ類に対するヤギ抗血？＋’
ｊをウェルに添加しｒ□、１ｍｌ／ウェル）、そして３
７℃で１時間反応させる。０．０１％（Ｖ／ｖ）のツイ
ーン（Ｔｗｅｅｎ＠）２０を含有する０、０１％（Ｖ
／ Ｖ ） （７） ’；イーン（Ｔｖｔｅｅｎ＠）２
０でよく坊、ｆＩ１１シた後、マイクロプレートを振盪
乾燥し、そして０．２ｎｕｌのペルオキシダーゼ基質の
発色性溶液（０，１モルのクエン酸１′１１緩衝液ｐＨ
５中のｌ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ ｌ７１ｏ −７、−＝
、 Ｌ／ ７ジアミン、５ミリモルの過酸化水素）を各
１゛イクロタイターウエルに添加する。
、 ｌ りモルｃ７）Ｎ ａＣｌ 、 ０ 、０５
モル（７）リン酸ナトリウム）で３回洗浄し、次し゛で
ウサキ抗血清試験溶液（０，１ｍｌ／ウェル）を異なる
１０のスカラー希釈物（ｓｃａｌａ、ｒ ｄｉｌｕｔ
ｉｏｎ） （１： Ｊ−１： １０６）に添加し、そ
して３７°Ｃで２時間増団したウェル１′対して反応さ
せる。＋） ンＮＩｔｔ［［ｉｆ［５に、ｐＨ７、３（
０、１５モルのＮａＣ１，０，０５モルのリン酸す１・
１１、ラム）でよ〈洗浄した後、ワサビのペルオキシダ
ーゼで標識したウサギＩｇＧ類に対するヤギ抗血？＋’
ｊをウェルに添加しｒ□、１ｍｌ／ウェル）、そして３
７℃で１時間反応させる。０．０１％（Ｖ／ｖ）のツイ
ーン（Ｔｗｅｅｎ＠）２０を含有する０、０１％（Ｖ
／ Ｖ ） （７） ’；イーン（Ｔｖｔｅｅｎ＠）２
０でよく坊、ｆＩ１１シた後、マイクロプレートを振盪
乾燥し、そして０．２ｎｕｌのペルオキシダーゼ基質の
発色性溶液（０，１モルのクエン酸１′１１緩衝液ｐＨ
５中のｌ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ ｌ７１ｏ −７、−＝
、 Ｌ／ ７ジアミン、５ミリモルの過酸化水素）を各
１゛イクロタイターウエルに添加する。
色を室温で３０分間発生させ、そして０．０５ｍ１／ウ
エルの４．５モルの硫酸を添加すること【こよって件Ｉ
Ｉ−させる。
エルの４．５モルの硫酸を添加すること【こよって件Ｉ
Ｉ−させる。
１５分ψ、４９２ｎｍにおける吸収を測定する。０．２
光学ＩＣ度中位をγえる希釈計数として、抗体の力価を
表わす。
光学ＩＣ度中位をγえる希釈計数として、抗体の力価を
表わす。
抗体の力価が少なくとも１：１０’であるとき、分析的
に右動な抗体の生産が達成され、そして動物を完全に放
血し、そして所ｑ！の抗血清を回１１ｙＬ、そして使用
するまで一２０°Ｃに保持する。
に右動な抗体の生産が達成され、そして動物を完全に放
血し、そして所ｑ！の抗血清を回１１ｙＬ、そして使用
するまで一２０°Ｃに保持する。
実施例４
結合緩衝液として０．１モルの炭酸ナトリウム緩衝液（
ｐＨ８，３）を使用して、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ
）、８０ｍｇ、をＣＮＢｒ活性化セフ７０−ズ（Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ＠）［７７−マシア・ファイン・ケミカル
ズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｍｅｉｃ
ａｌｓ）：１０ｍ１の膨ｆｉｔＪシた樹庄］と結合する
ことによって、変性マトリックスを調製する。次いで、
このＲＳＡ−７カロースマトリツクスを使用して、前の
実施例３に従い得られた抗血清から抗ＢＳＡ免疫グロブ
リンを除去する。これは＋ｉ？ｊ記ウサギを２ｍｌの沈
殿シたＢＳＡ−７ガロースマトす・、クスと接触させる
パン千１吸着クロマトグラフィーによって実施する。こ
の混合物を１時間室温で接触ゴせ、次いでガラスフィル
ター口に注ぎ、３％（Ｗ／Ｖ）のＢＳＡおよび０．０５
％（ｖ／ｖ）ノツィーン（Ｔｗｅｅｎ＠）２０を含有す
るリン酸＋１！ Ｈｌｉ食塩水ｐＨ７，３（０，１５モ
ルのＮａｃ Ｉ、０゜０５モルのリン酸ナトリウム、）
の６ｍｌで３回洗ｎ−する。回収される６Ｆ！液は、抗
ＰＳＡ抗体が除去されてたもとの抗血清の１．０倍の希
釈物に相当する。
ｐＨ８，３）を使用して、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ
）、８０ｍｇ、をＣＮＢｒ活性化セフ７０−ズ（Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ＠）［７７−マシア・ファイン・ケミカル
ズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｍｅｉｃ
ａｌｓ）：１０ｍ１の膨ｆｉｔＪシた樹庄］と結合する
ことによって、変性マトリックスを調製する。次いで、
このＲＳＡ−７カロースマトリツクスを使用して、前の
実施例３に従い得られた抗血清から抗ＢＳＡ免疫グロブ
リンを除去する。これは＋ｉ？ｊ記ウサギを２ｍｌの沈
殿シたＢＳＡ−７ガロースマトす・、クスと接触させる
パン千１吸着クロマトグラフィーによって実施する。こ
の混合物を１時間室温で接触ゴせ、次いでガラスフィル
ター口に注ぎ、３％（Ｗ／Ｖ）のＢＳＡおよび０．０５
％（ｖ／ｖ）ノツィーン（Ｔｗｅｅｎ＠）２０を含有す
るリン酸＋１！ Ｈｌｉ食塩水ｐＨ７，３（０，１５モ
ルのＮａｃ Ｉ、０゜０５モルのリン酸ナトリウム、）
の６ｍｌで３回洗ｎ−する。回収される６Ｆ！液は、抗
ＰＳＡ抗体が除去されてたもとの抗血清の１．０倍の希
釈物に相当する。
χ凰例１
ティコプラニンう、右のアラでイ
３％（ｗ／ｖ） のＢｓＡおよび０．０５％（ｖ／Ｖ）
のツイーン（Ｔｗｅｅｎ’ｕ）２０を含有するリン酸塩
緩衝食塩水ｐＨ７，３（０，１５モルのＮａＣ１，０，
０５モルのリン酸ナトリウム）中の０．００１−１マイ
クログラム／ｍｌの濃度のティコプラニンのスカラー希
釈物を使用して、標へ１１曲線を作成する。これらの溶
液ならびに血清緩衝液中で１０倍に孔釈した試料を、１
〕の実施例２ （７） Ｌ順に従い調製したＢＳＡ −
ｑ−Ａｃ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ被覆フ
レキシブルプレートのウェルに、３回の反復実験におい
て、別々に添加する。より高いＣ１■の溶液を、また、
「ブランク」のワエル（すなわち、特界的Ｄ−Ａｌａ−
Ｄ−Ａｌａ結合剤で被覆されていないもの）に添加して
特Ｉ苗的結合を評価する。次いで、各プレートをＺｉを
した湿った箱内で室温において２時間インキュベーショ
ンし、そして空にしかつリン酸ａ！緩衝食塩水ｐＨ７、
３［０、１５モルノＮ ａＣｌ、０．０５モルのリン酸
ナトリウム、０．０５％（ｖ ／ ｖ ）のツイーン（
Ｔｗｅｅｎ＠’）２０を含イ！１“る］を范ルすること
によって８回洗浄し、そして振盪乾燥する。
のツイーン（Ｔｗｅｅｎ’ｕ）２０を含有するリン酸塩
緩衝食塩水ｐＨ７，３（０，１５モルのＮａＣ１，０，
０５モルのリン酸ナトリウム）中の０．００１−１マイ
クログラム／ｍｌの濃度のティコプラニンのスカラー希
釈物を使用して、標へ１１曲線を作成する。これらの溶
液ならびに血清緩衝液中で１０倍に孔釈した試料を、１
〕の実施例２ （７） Ｌ順に従い調製したＢＳＡ −
ｑ−Ａｃ ａ−Ｄ−Ａ Ｉ ａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ被覆フ
レキシブルプレートのウェルに、３回の反復実験におい
て、別々に添加する。より高いＣ１■の溶液を、また、
「ブランク」のワエル（すなわち、特界的Ｄ−Ａｌａ−
Ｄ−Ａｌａ結合剤で被覆されていないもの）に添加して
特Ｉ苗的結合を評価する。次いで、各プレートをＺｉを
した湿った箱内で室温において２時間インキュベーショ
ンし、そして空にしかつリン酸ａ！緩衝食塩水ｐＨ７、
３［０、１５モルノＮ ａＣｌ、０．０５モルのリン酸
ナトリウム、０．０５％（ｖ ／ ｖ ）のツイーン（
Ｔｗｅｅｎ＠’）２０を含イ！１“る］を范ルすること
によって８回洗浄し、そして振盪乾燥する。
次いで、１−の実施例３および４に従って調製したティ
コ１プラニンに対する精製したウサギ抗血清を、リン酩
１１！緩衝食塩水［０，０５モルのリン酸ナトリウム、
０ 、１５−ｔ−ルｃ７）ＮａＣＩ、０．０５モル
のリン酸ナトリウム、ｐＨ７，３，３％（ｓｑ／’ｖ）
のＢＳＡおよび０．０５％（ｖ／ｖ）のンイー７ （Ｔ
ｗｅｅ ｎ＠’）２０を含有する１で５０倍に６釈する
：この溶液の１００マイクロリツトルを各ウェルに添加
し、そして室温において１時間反応させる。前述のよう
にリン酸塩緩衝食塩水ｐＨ７，３［０，１５モルｃ７）
ＮａＣｌＯ，０５モルのリン酸ナトリウム、０．０５％
（ｖ ／’ ｖ ）のツイーン（Ｔｗｅｅ ｎ＠）２０
を含有する］で８回洗節し、振盪乾燥した後、ウサギＥ
ｇＧ類ヤこ対するワサとのペルオキシダーゼ接合ヤギ
抗＋ｆｉｌ ｉ＋’；Ｑ／＜イオネチクス・インコーポ
！／−テッド（Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｃ、）］
のリン酸用緩衝食塩水中の１〜５００倍希釈物の１０
０マイルロリツトルを各ウェルに添加し、そして室温で
１時間装置する。次いで、各ウェルを再び前述のように
リン酸１１４緩衝食塩水ｐＨ７，３［０，１５モルｆＮ
ａｃ１．０．０５モルのリン酸すＩ・リウム、０．０５
％（Ｖ／Ｖ）（７）ツイーン（Ｔｗｅｅｉ’）２０を含
イｆする］で洗油しかつ振盪乾燥し、そしてベルオキシ
ターゼの発色性基質（０゜１モルのクエン酸ナトリウム
緩衝液、ｐＨ５中の１ｍｇ／ｍ Ｉの０−フェニレンジ
アミン、５ミリモルの過酸化水素）の２００マイクロリ
ツトル／ウエルの溶液を各ウェルに添加し、そして色を
室温で３０分間発生させる。次いで発色反応を５０マイ
クロリツトル／ウエルの４．５モルの硫酸の流力１１に
より！’７’＋ｌ−させ、そ（７）１５分後、４９２ｎ
ｍにおける吸収をタイターチク−マルチスキャン（Ｔｉ
ｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ）光度計［フロー
ラボラトリーズ・インコーボレー・テッド（Ｆｌｏｗ
Ｌａｂ、 Ｉｎｃ、）］ で測定する。吸収値を半
対数紙上にティコプラニンの濃１■の関数としてプロ、
、、 トすることによって、結合曲線を４ｊ＋ｒる。０
．０１マイルログラム／ｍ ｌ−１マイクロそル／ｍｌ
の範囲のティコプラニンを使用して投ｊｔ−一応答曲線
を作成し、そして試料中の濃度を標準曲線Ｉ−で内槽す
ることによって決定する。
コ１プラニンに対する精製したウサギ抗血清を、リン酩
１１！緩衝食塩水［０，０５モルのリン酸ナトリウム、
０ 、１５−ｔ−ルｃ７）ＮａＣＩ、０．０５モル
のリン酸ナトリウム、ｐＨ７，３，３％（ｓｑ／’ｖ）
のＢＳＡおよび０．０５％（ｖ／ｖ）のンイー７ （Ｔ
ｗｅｅ ｎ＠’）２０を含有する１で５０倍に６釈する
：この溶液の１００マイクロリツトルを各ウェルに添加
し、そして室温において１時間反応させる。前述のよう
にリン酸塩緩衝食塩水ｐＨ７，３［０，１５モルｃ７）
ＮａＣｌＯ，０５モルのリン酸ナトリウム、０．０５％
（ｖ ／’ ｖ ）のツイーン（Ｔｗｅｅ ｎ＠）２０
を含有する］で８回洗節し、振盪乾燥した後、ウサギＥ
ｇＧ類ヤこ対するワサとのペルオキシダーゼ接合ヤギ
抗＋ｆｉｌ ｉ＋’；Ｑ／＜イオネチクス・インコーポ
！／−テッド（Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｃ、）］
のリン酸用緩衝食塩水中の１〜５００倍希釈物の１０
０マイルロリツトルを各ウェルに添加し、そして室温で
１時間装置する。次いで、各ウェルを再び前述のように
リン酸１１４緩衝食塩水ｐＨ７，３［０，１５モルｆＮ
ａｃ１．０．０５モルのリン酸すＩ・リウム、０．０５
％（Ｖ／Ｖ）（７）ツイーン（Ｔｗｅｅｉ’）２０を含
イｆする］で洗油しかつ振盪乾燥し、そしてベルオキシ
ターゼの発色性基質（０゜１モルのクエン酸ナトリウム
緩衝液、ｐＨ５中の１ｍｇ／ｍ Ｉの０−フェニレンジ
アミン、５ミリモルの過酸化水素）の２００マイクロリ
ツトル／ウエルの溶液を各ウェルに添加し、そして色を
室温で３０分間発生させる。次いで発色反応を５０マイ
クロリツトル／ウエルの４．５モルの硫酸の流力１１に
より！’７’＋ｌ−させ、そ（７）１５分後、４９２ｎ
ｍにおける吸収をタイターチク−マルチスキャン（Ｔｉ
ｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ）光度計［フロー
ラボラトリーズ・インコーボレー・テッド（Ｆｌｏｗ
Ｌａｂ、 Ｉｎｃ、）］ で測定する。吸収値を半
対数紙上にティコプラニンの濃１■の関数としてプロ、
、、 トすることによって、結合曲線を４ｊ＋ｒる。０
．０１マイルログラム／ｍ ｌ−１マイクロそル／ｍｌ
の範囲のティコプラニンを使用して投ｊｔ−一応答曲線
を作成し、そして試料中の濃度を標準曲線Ｉ−で内槽す
ることによって決定する。
既知ｊＩＳ゛のティコプラニンを含有する溶液の反復す
るアッセイによって、この方法は感度、精度および１Ｆ
確さの分析の要件を満足することが示された。
るアッセイによって、この方法は感度、精度および１Ｆ
確さの分析の要件を満足することが示された。
１−の方法を反復しかつアポパルうン、リストセチン、
アクタプラニン、抗生物？ｔＡ３５５１２Ｂ、抗生物ｒ
ｔ Ａ ４１０３０ Ｂ、抗生物′ｅｉＡ４７９３４Ｂ
およびバンコマイシンの溶液を使用すると、結合は観測
されなかった。
アクタプラニン、抗生物？ｔＡ３５５１２Ｂ、抗生物ｒ
ｔ Ａ ４１０３０ Ｂ、抗生物′ｅｉＡ４７９３４Ｂ
およびバンコマイシンの溶液を使用すると、結合は観測
されなかった。
実施例６
血清試料を含有するティコプラニンの７−７セイ３％（
ｗ／ｖ） のＢｓＡ、０．０５％（ｖ／■）のツイーン
（Ｔｗｅｅｎ’）２０および２０％のヒト面詰を含有す
るリン酸塩緩衝食に１１木ｐＨ７，３（０，１５モルの
ＮａＣ１，０，０５モルのリン酸ナトリウム）中の０．
００１〜１マイクログラム／ｍ＋の濃度のティコプラニ
ンのスカラー希釈物を使用して、標準曲線を作成する。
ｗ／ｖ） のＢｓＡ、０．０５％（ｖ／■）のツイーン
（Ｔｗｅｅｎ’）２０および２０％のヒト面詰を含有す
るリン酸塩緩衝食に１１木ｐＨ７，３（０，１５モルの
ＮａＣ１，０，０５モルのリン酸ナトリウム）中の０．
００１〜１マイクログラム／ｍ＋の濃度のティコプラニ
ンのスカラー希釈物を使用して、標準曲線を作成する。
試料を血枯綴衝液中で５倍希釈し、そして０１１ｍ１の
これらの溶液を前の実施例２の手ＩＭｊに従ッテ調製し
たＢＳＡ −ｑ−Ａ ｃ ａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａ
ｌａ被覆したフレキシブルプレートのウェルに、３回の
反復実験において、添加する。
これらの溶液を前の実施例２の手ＩＭｊに従ッテ調製し
たＢＳＡ −ｑ−Ａ ｃ ａ−Ｄ−Ａ ｌ ａ−Ｄ−Ａ
ｌａ被覆したフレキシブルプレートのウェルに、３回の
反復実験において、添加する。
濃度が高い溶液を、また、「ブランク」のウェル（すな
わち、特Ｗ的の結合剤で被覆されていないもの）に添加
して′Ｉ￥異的結合を評価する。次いで、各マイクロブ
′／−トを室温において苫をした箱内で２・１ν間イン
キュベーションし、そして空に（、かつ＋） ンＭｊ２
ｊＲ衝食塩水ｐＨ７，３［０，１５モルのＮａＣ１，０
，０５モルのリン酸ナトリウＬ、、０．０５％（Ｖ／Ｖ
）のツイーン（Ｔｗｅｅｎ■）２０を含有する］を充填
することによって８回洗顔しか一つ振盪乾燥する。
わち、特Ｗ的の結合剤で被覆されていないもの）に添加
して′Ｉ￥異的結合を評価する。次いで、各マイクロブ
′／−トを室温において苫をした箱内で２・１ν間イン
キュベーションし、そして空に（、かつ＋） ンＭｊ２
ｊＲ衝食塩水ｐＨ７，３［０，１５モルのＮａＣ１，０
，０５モルのリン酸ナトリウＬ、、０．０５％（Ｖ／Ｖ
）のツイーン（Ｔｗｅｅｎ■）２０を含有する］を充填
することによって８回洗顔しか一つ振盪乾燥する。
次いで、トの実施例３および４に従って調製したティコ
プラニンに対する精製したウサギ抗血清を、リン酸Ｉｔ
！緩衝食塩水［０，０５モルのリン酸ナトリウム、０
、１５−ｆニル（１）ＮａＣＩ、０．０５モルのリン酸
ナトリウム、ＰＨ７，３，３％（Ｗ／Ｖ）のＢＳＡおよ
び０．０５％（ｖ／ｖ）のツイーン（Ｔｗｅｅｎ＠）２
０を含有する］テ５０倍に希釈する。
プラニンに対する精製したウサギ抗血清を、リン酸Ｉｔ
！緩衝食塩水［０，０５モルのリン酸ナトリウム、０
、１５−ｆニル（１）ＮａＣＩ、０．０５モルのリン酸
ナトリウム、ＰＨ７，３，３％（Ｗ／Ｖ）のＢＳＡおよ
び０．０５％（ｖ／ｖ）のツイーン（Ｔｗｅｅｎ＠）２
０を含有する］テ５０倍に希釈する。
この溶液のｌＯＯマイクロリットルを各ウェルに添加し
、そして室温において１時間反応させる。リン酸１１！
緩衝食塩水ｐＨ７，３［０，１５モルのＮａＣｌ ０
．０５モルのリン酸ナトリウム、０．０５％（Ｖ／Ｖ）
（７）ツイーン（Ｔｗｅｅｎ＠）２Ｃ’を含有する］で
８回洗浄し、振盪乾燥した後、ウサギＩｇＧ類に対する
ワサビのペルオキシダーゼ接合ヤギ抗血清［パイオネチ
クス・インコーホレーテッド（Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ
ＩｎＣ９）］のリン酸１′！！緩衝食塩水中の１〜５０
０倍希釈物の１００マイルロリツトルを各ウェルに添加
し、そ［５て室温で１時間放置する０次いで、各ウェル
をＨＴｆび前述のようにリン酸塩緩衝食塩水ｐＨ７，３
［０，１５モルのＮａＣ１，０，０５モルのリン酸ナト
リウム、０．０５％（Ｖ／Ｖ）のツイーン（Ｔｗｅｅ
ｎ・）２０を含有する］で洗浄しかつ振盪乾燥し、そし
てペルオキシダーゼの発色性基質（０，１モルのクエン
酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５中の１ｍｇ／ｍｌのｏ−７
，＝レンジアミン、５ミリモルの過酸化水素）の２００
マイクロリツトル／ウエルの溶液を各ウェルに添加し、
そして色を室温で３０分間発生させる０次いで発色反応
を５０マイクロリツトル／ウエルの４．５モルの硫酸の
添加により停止Ｆさせ、その１５分後、４９２ｎｍにお
ける吸収をタイターチク・マルチスキャン（Ｔｉｔｅｒ
ｔｅｋ Ｍｕｌｔｉ ＳＣａ ｎ）光度計［フローラ
ボラトリーズ・インコーホレーテッドＣＦＩＯＷ Ｌ
ａｂ、 ＩｎＣ０）］でＡｌｌ定する。吸収値を半対
数紙トにティコプラニンの濃度の関数としてプロットす
ることによって、結合曲線を得る。０．０１マイルログ
ラム／ｍ１−１マイクロモル／ｍｌの範囲のティコプラ
ニンを使用して投乍一応答曲線を作成し、そして試料中
の濃度を標準曲線りで白檀することによって決定する。
、そして室温において１時間反応させる。リン酸１１！
緩衝食塩水ｐＨ７，３［０，１５モルのＮａＣｌ ０
．０５モルのリン酸ナトリウム、０．０５％（Ｖ／Ｖ）
（７）ツイーン（Ｔｗｅｅｎ＠）２Ｃ’を含有する］で
８回洗浄し、振盪乾燥した後、ウサギＩｇＧ類に対する
ワサビのペルオキシダーゼ接合ヤギ抗血清［パイオネチ
クス・インコーホレーテッド（Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ
ＩｎＣ９）］のリン酸１′！！緩衝食塩水中の１〜５０
０倍希釈物の１００マイルロリツトルを各ウェルに添加
し、そ［５て室温で１時間放置する０次いで、各ウェル
をＨＴｆび前述のようにリン酸塩緩衝食塩水ｐＨ７，３
［０，１５モルのＮａＣ１，０，０５モルのリン酸ナト
リウム、０．０５％（Ｖ／Ｖ）のツイーン（Ｔｗｅｅ
ｎ・）２０を含有する］で洗浄しかつ振盪乾燥し、そし
てペルオキシダーゼの発色性基質（０，１モルのクエン
酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５中の１ｍｇ／ｍｌのｏ−７
，＝レンジアミン、５ミリモルの過酸化水素）の２００
マイクロリツトル／ウエルの溶液を各ウェルに添加し、
そして色を室温で３０分間発生させる０次いで発色反応
を５０マイクロリツトル／ウエルの４．５モルの硫酸の
添加により停止Ｆさせ、その１５分後、４９２ｎｍにお
ける吸収をタイターチク・マルチスキャン（Ｔｉｔｅｒ
ｔｅｋ Ｍｕｌｔｉ ＳＣａ ｎ）光度計［フローラ
ボラトリーズ・インコーホレーテッドＣＦＩＯＷ Ｌ
ａｂ、 ＩｎＣ０）］でＡｌｌ定する。吸収値を半対
数紙トにティコプラニンの濃度の関数としてプロットす
ることによって、結合曲線を得る。０．０１マイルログ
ラム／ｍ１−１マイクロモル／ｍｌの範囲のティコプラ
ニンを使用して投乍一応答曲線を作成し、そして試料中
の濃度を標準曲線りで白檀することによって決定する。
既知量のティコプラニンを含有する溶液の反復するアッ
セイによって、この方法は感度、精度および正確さの分
析の要件を満足することが示された。
セイによって、この方法は感度、精度および正確さの分
析の要件を満足することが示された。
１、ｔに例示した場合において、次の結果が得られ、こ
れらの結呆は一般的に本発明の方法のいかなる応用につ
いても有効である： 応用範囲（反復実験に基づ＜）：１０ｎｇ／ｍｌから 好ましい応用範囲＋ Ｌｏｎｇ／ｍｌ−１ｍｇ／ｌのテ
ィコプラニン。
れらの結呆は一般的に本発明の方法のいかなる応用につ
いても有効である： 応用範囲（反復実験に基づ＜）：１０ｎｇ／ｍｌから 好ましい応用範囲＋ Ｌｏｎｇ／ｍｌ−１ｍｇ／ｌのテ
ィコプラニン。
杭度ニ
ーアッセイ内：１０．５類に等しいＣＶ％−アー７セイ
聞：１３．５類に等しいＣＶ％Ｉ−の方法を反復しかつ
アポバルシン、リストセチン、アクタプラニン、抗生物
質Ａ３５５１２Ｂ、抗生物質Ａ４１０３０Ｂ、抗生物質
Ａ４７９３４Ｂおよびバンコマイシンの溶液を使用する
と、結合は観測されなかった。
聞：１３．５類に等しいＣＶ％Ｉ−の方法を反復しかつ
アポバルシン、リストセチン、アクタプラニン、抗生物
質Ａ３５５１２Ｂ、抗生物質Ａ４１０３０Ｂ、抗生物質
Ａ４７９３４Ｂおよびバンコマイシンの溶液を使用する
と、結合は観測されなかった。
ティコプラニンで処置した患者からのうみ、気管支の吐
いたおよび火傷をした患者からの皮膚の試料に１−の実
施例６に記載する回−手順を実質的に適用して、１−の
実施例に記載した２０％の血清緩衝溶液中で試料を均質
化した後、この抗生物質の濃度を決定した。この方法は
、また、これらの試料について、１−に報告した同一の
レベルの感度、精度およびＩＬ確さを維持した。
いたおよび火傷をした患者からの皮膚の試料に１−の実
施例６に記載する回−手順を実質的に適用して、１−の
実施例に記載した２０％の血清緩衝溶液中で試料を均質
化した後、この抗生物質の濃度を決定した。この方法は
、また、これらの試料について、１−に報告した同一の
レベルの感度、精度およびＩＬ確さを維持した。
ティコプラニンは、米国特許第４，２３９，７３１１２
１を培養し、そしてセファデクス（Ｓｅｐ ）、 ａ
ｄ ｅ ｘ反応）のカラムクロマトグラフィーまたは他
の同等の技術によって精製することによって調製する。
１を培養し、そしてセファデクス（Ｓｅｐ ）、 ａ
ｄ ｅ ｘ反応）のカラムクロマトグラフィーまたは他
の同等の技術によって精製することによって調製する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、工程： ａ）表面上に吸着できる適当な高分子化合物の担体と接
合したＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリ
ゴペプチドを支持する前記表面と、試験溶液を、接触さ
せ、 ｂ）洗浄後、検出すべき物質に対して特異的に向けられ
た抗体を添加し、 ｃ）静止相上の抗原へ結合した前記抗体を、検出可能な
マーカーに結合したこれらの結合抗体（抗−抗体抗血清
）に直接向けられた種特異的抗ＩｇＧ抗体によって、明
らかにする、からなることを特徴とするＤ−アラニル−
Ｄ−アラニンジペプチドまたはＤ−アラニル−Ｄ−アラ
ニンカルボキシ末端オリゴペプチドによって代表される
「分子の受容体」に結合する分析物を決定する方法。 ２、分析物は、バンコマイシン、テイコプラニン、アク
タプラニン、アポバルシン、アクチノイジン、抗生物質
ＬＬ−ＡＭ−３７４、抗生物質Ａ４７７、抗生物質ＯＡ
７６５３、抗生物質Ａ３５５１２Ｂ、抗生物質Ａ５１５
６６８、抗生物質ＡＡＤ２１６、抗生物質Ａ４１０３０
、抗生物質Ａ４７９３４ならびにそれらの個々の因子、
誘導体またはアグリコンから選択されるバンコマイシン
の部類の抗生物質である特許請求の範囲第１項記載の方
法。 ３、分析物はテイコプラニンまたはその個々の因子、誘
導体またはアグリコンである特許請求の範囲第１項記載
の方法。 ４、Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴ
ペプチドはε−アミノカブロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−
アラニンである特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５、高分子化合物の担体は蛋白質である特許請求の範囲
第１項記載の方法。 ６、高分子化合物の担体はアルブミンである特許請求の
範囲第１項記載の方法。 ７、支持手段はマイクロタイタープレートのウェルまた
は試験管、またはプラスチックシートによって提供され
る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ８、支持手段はポリエチレンまたはポリスチレンのマイ
クロタイタープレートのウェルである特許請求の範囲第
１項記載の方法。 ９、特異的抗体はウサギの抗体であり、そして種特異的
抗−抗体抗血清はウサギのＩｇＧ類に対するヤギの抗血
清である特許請求の範囲第１項記載の方法。 １０、特異的抗体は、分析物と吸着した「分子の受容体
」との結合を損傷しないモノクローナル抗体である特許
請求の範囲第１項記載の方法。 １１、構成成分： ａ）表面を有する分析用支持体、前記支持体はその表面
上に吸着できる適当な高分子化合物の担体と接合したＤ
−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリゴペプチ
ドを支持する、 ｂ）検出すべき物質である分析物に対して特異的に向け
られた抗体を含有する抗体調製物、および必要に応じて
、 ｃ）分析物に対して向けられかつ検出可能なマーカーと
結合した「第１」抗体の源の動物種の免疫グロブリンに
対して特異的に向けられた抗体を含有する種特異的抗−
抗体調製物、 からなることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
方法において使用するための分析用キット。 １２、Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシ末端オリ
ゴペプチドはε−アミノカブロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ
−アラニンである特許請求の範囲第１１項記載のキット
。 １３、高分子化合物の担体は蛋白質である特許請求の範
囲第１１項記載のキット。 １４、高分子化合物の担体はアルブミンである特許請求
の範囲第１１項記載のキット。 １５、分析用支持体はマイクロタイタープレートのウェ
ルまたは試験管、またはプラスチックシートである特許
請求の範囲第１１項記載のキット。 １６、分析用支持体はポリエチレンまたはポリスチレン
のマイクロタイタープレートのウェルである特許請求の
範囲第１１項記載のキット。 １７、それ自体既知の方法によりウシ血清アルブミンの
１重量部につき約１〜約１０重量部のテイコプラニンの
結合により調製されたテイコプラニン−アルブミン接合
体の有効抗テイコプラニン抗体誘導量をウサギに反復し
て注射し、分析的に有効な抗体の生産を達成するために
十分な時間の後、前記動物から採血し、得られた抗血清
を回収し、そして必要に応じて、約１重量部のウシ血清
アルブミンを約１００容量部の膨潤したアガロースと結
合することによって得られたマトリックスの約等量（容
量）との接触により前記抗血清を抗ウシ血清アルブミン
免疫グロブリンから精製する、ことによって得られたこ
とを特徴とする抗テイコプラニンウサギ抗血清。 １８、分析的に有効な抗体の生産は、エリサ（ＥＬＩＳ
Ａ）法によって、テイコプラニン被覆マイクロプレート
を用い、検出可能なプローブとしてウサギＩｇＧ類に対
するワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗血清を使用して
決定されている特許請求の範囲第１７項記援の抗血清。 １９、表面上に分析的に検出可能な量のテイコプラニン
を吸着するＰＶＣマイクロプレート、試験管またはプラ
スチックシートから成ることを特徴とするテイコプラニ
ンおよび抗−テイコプラニン抗体の分析的決定に使用す
るためのテイコプラニン被覆分析用支持体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB858522388A GB8522388D0 (en) | 1985-09-10 | 1985-09-10 | Receptor-antibody sandwich assay |
| GB8522388 | 1985-09-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6271860A true JPS6271860A (ja) | 1987-04-02 |
Family
ID=10584952
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61209760A Pending JPS6271860A (ja) | 1985-09-10 | 1986-09-08 | 受容体抗体サンドイツチアツセイ |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0221282B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6271860A (ja) |
| KR (1) | KR870003386A (ja) |
| CN (1) | CN86105930A (ja) |
| AT (1) | ATE64997T1 (ja) |
| AU (1) | AU600446B2 (ja) |
| CA (1) | CA1276880C (ja) |
| DE (1) | DE3680072D1 (ja) |
| DK (1) | DK165075C (ja) |
| ES (1) | ES2001636A6 (ja) |
| FI (1) | FI82987C (ja) |
| GB (1) | GB8522388D0 (ja) |
| GR (1) | GR862271B (ja) |
| HU (1) | HU201608B (ja) |
| IL (1) | IL79924A0 (ja) |
| NO (1) | NO167421C (ja) |
| NZ (1) | NZ217502A (ja) |
| PH (1) | PH26235A (ja) |
| PT (1) | PT83299B (ja) |
| ZA (1) | ZA866643B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014021387A1 (ja) * | 2012-07-31 | 2014-02-06 | 積水メディカル株式会社 | ラテックス凝集阻害免疫法 |
| WO2020171158A1 (ja) * | 2019-02-20 | 2020-08-27 | 株式会社パートナーファーム | 固相反応チップ及びこれを用いた測定方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5198340A (en) * | 1991-01-17 | 1993-03-30 | Genentech, Inc. | Assay for free igf-i, igf-ii, and gh levels in body fluids |
| JP3879866B2 (ja) * | 1995-04-04 | 2007-02-14 | アボット・ラボラトリーズ | 生物体液中のバンコマイシンの検出および定量化用試薬および方法 |
| US6797479B2 (en) | 1995-04-04 | 2004-09-28 | Abbott Laboratories | Reagents and methods for the detection and quantification of vancomycin in biological fluids |
| KR100505783B1 (ko) * | 2001-12-27 | 2005-08-03 | 근화제약주식회사 | 항생제 테이코플라닌의 면역분석 방법 |
| EP1806150A1 (en) * | 2006-01-05 | 2007-07-11 | NEED PHARMA S.r.l. | Teicoplanin composition |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4034074A (en) * | 1974-09-19 | 1977-07-05 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG) |
| US4410634A (en) * | 1979-10-26 | 1983-10-18 | Dynasciences Corporation | Method of passively adsorbing immuno-reactive haptens to solid phases |
| US4606855A (en) * | 1982-07-26 | 1986-08-19 | Mex Research Associates C/O Leon Reimer | Monoclonal antibody to digoxin |
| US4558009A (en) * | 1982-12-20 | 1985-12-10 | Eli Lilly And Company | Process for producing antibiotic A-51568 by fermentation and microorganism |
| GB8311136D0 (en) * | 1983-04-25 | 1983-06-02 | Lepetit Spa | Immobilised oligopeptides |
| GB8427436D0 (en) * | 1984-10-30 | 1984-12-05 | Lepetit Spa | Receptor assay |
-
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- 1985-09-10 GB GB858522388A patent/GB8522388D0/en active Pending
-
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- 1986-09-02 ZA ZA866643A patent/ZA866643B/xx unknown
- 1986-09-02 ES ES8601560A patent/ES2001636A6/es not_active Expired
- 1986-09-03 DE DE8686112170T patent/DE3680072D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-09-03 CN CN198686105930A patent/CN86105930A/zh active Pending
- 1986-09-03 EP EP86112170A patent/EP0221282B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-09-03 PT PT83299A patent/PT83299B/pt not_active IP Right Cessation
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