JPS6255084A - 生体の固定化方法及びそれから得られた不溶化生体複合体 - Google Patents
生体の固定化方法及びそれから得られた不溶化生体複合体Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は生体を固定化する方法に関する。さらに具体的
には、本発明は、生体を重合体と混合し、ガラス繊維又
はフィラメントに被覆し、かつ架橋剤又は縮合剤を添加
するごとによって不溶化する、生体の固定化方法に関す
る。
には、本発明は、生体を重合体と混合し、ガラス繊維又
はフィラメントに被覆し、かつ架橋剤又は縮合剤を添加
するごとによって不溶化する、生体の固定化方法に関す
る。
酵素もしくは酵素生産性微生物又は細胞のような生体は
合成反応及び分析技術の触媒としてしばしば使用される
。このような触媒は、それらが一般に穏やかな反応条件
で高い特異性及び効率をもって作用するので、望ましい
。
合成反応及び分析技術の触媒としてしばしば使用される
。このような触媒は、それらが一般に穏やかな反応条件
で高い特異性及び効率をもって作用するので、望ましい
。
酵素及び他の生物触媒は一般に水溶性であるので、これ
らはバッチ式の反応系で使用するのに適している。使い
終った反応媒体から、これらの生体を活性のある、又は
使用可能な状態で回収するのは困難であるので、このよ
うな酵素及び他の生物触媒の再使用は制限される。さら
に、これらの生体は汚染物として生成物中に残留する傾
向がある。これらの問題を避けるために、不溶性支持体
に、触媒活性を示す生体を固定化する方法が開発されて
きた。固定化は、過酷な繰返し又は連続使用に耐えるこ
とができる安定な生体を得ることを意図している。
らはバッチ式の反応系で使用するのに適している。使い
終った反応媒体から、これらの生体を活性のある、又は
使用可能な状態で回収するのは困難であるので、このよ
うな酵素及び他の生物触媒の再使用は制限される。さら
に、これらの生体は汚染物として生成物中に残留する傾
向がある。これらの問題を避けるために、不溶性支持体
に、触媒活性を示す生体を固定化する方法が開発されて
きた。固定化は、過酷な繰返し又は連続使用に耐えるこ
とができる安定な生体を得ることを意図している。
いくつかの生体固定化系が報告されている。酵素類は、
活性炭、ガラス、セルロース、燐酸カルシウムゲル、モ
ンモリロナイト及びとりわけ有機イオン交換樹脂のよう
な不溶性材料に吸着させることによって固定化された、
固定化は、デンプン及びアクリルアミドゲル内への封じ
込み、酵素と不溶性有機重合体との共有結合及び酵素分
子自体の共有結合によっても達成される。
活性炭、ガラス、セルロース、燐酸カルシウムゲル、モ
ンモリロナイト及びとりわけ有機イオン交換樹脂のよう
な不溶性材料に吸着させることによって固定化された、
固定化は、デンプン及びアクリルアミドゲル内への封じ
込み、酵素と不溶性有機重合体との共有結合及び酵素分
子自体の共有結合によっても達成される。
従来技術の方法は、対応する未固定の生体の活性に比べ
て、生物活性が減少した生成物を得ることがよくある。
て、生物活性が減少した生成物を得ることがよくある。
これらの生体は、熱的及び化学的変性又は不活性化に対
して感受性であることが知られている。重合体縮合反応
を伴なう場合に、特に、問題となることがある過酷な条
件下で固定化操作が行なわれる場合に、生物活性の損失
がしばしば生じる。さらに、従来技術の方法により得ら
れる生成物は、親水性、強度、耐久性及び多孔性に関し
てしばしば欠点を有する。
して感受性であることが知られている。重合体縮合反応
を伴なう場合に、特に、問題となることがある過酷な条
件下で固定化操作が行なわれる場合に、生物活性の損失
がしばしば生じる。さらに、従来技術の方法により得ら
れる生成物は、親水性、強度、耐久性及び多孔性に関し
てしばしば欠点を有する。
圧縮性の材料を使用する固定化系においては他の問題が
起りうる。固定化された生体のカラムが圧縮される場合
、使用中に均一でない流れを生じるチャネリングが起こ
る可能性がある。また支持材の圧縮性のために、カラム
の部分的崩壊及び系の圧力集中が起る可能性もある。
起りうる。固定化された生体のカラムが圧縮される場合
、使用中に均一でない流れを生じるチャネリングが起こ
る可能性がある。また支持材の圧縮性のために、カラム
の部分的崩壊及び系の圧力集中が起る可能性もある。
この分野で知られている不溶性固体支持体系が有するさ
らに他の問題は、大量の生体を封じ込めるために大きな
全表面積を有する多孔性材料に依存することである。こ
れらの多孔性材料は、他の系より多くの生体を含有する
ことができるが、ある種の基質分子は支持材料の孔より
大きい。このような場合、基質は多孔性材料中に容易に
拡散することかできず、生体で反応させることができな
い。
らに他の問題は、大量の生体を封じ込めるために大きな
全表面積を有する多孔性材料に依存することである。こ
れらの多孔性材料は、他の系より多くの生体を含有する
ことができるが、ある種の基質分子は支持材料の孔より
大きい。このような場合、基質は多孔性材料中に容易に
拡散することかできず、生体で反応させることができな
い。
孔中に拡散するのに十分小さい分子でさえ、固定化され
た生体で十分に反応させるのに十分な量では容易に拡散
しないかもしれないので、多孔性支持体は、小さい基質
分子を使用する場合にも問題がある。
た生体で十分に反応させるのに十分な量では容易に拡散
しないかもしれないので、多孔性支持体は、小さい基質
分子を使用する場合にも問題がある。
従って、本発明の目的は、生成物の生物活性を減少しな
い生体を固定化する方法を開発することである。
い生体を固定化する方法を開発することである。
本発明の他の目的は、不溶性固体支持体が非圧縮性であ
る生体を固定化する方法を開発することである。
る生体を固定化する方法を開発することである。
本発明のさらに他の目的は、大きな接近可能な表面積が
あるので、基質が生体と容易に反応することができる生
体を固定化する方法を開発することである。
あるので、基質が生体と容易に反応することができる生
体を固定化する方法を開発することである。
本発明のさらに他の目的は、得られた生成物が優れた強
度、耐久性及び生物安定性を呈する生体を固定化する方
法を開発することである。
度、耐久性及び生物安定性を呈する生体を固定化する方
法を開発することである。
本発明のなおさらに他の目的は、最終支持体の単位体積
当たりに大量の生体を固定化する方法を提供することで
ある。
当たりに大量の生体を固定化する方法を提供することで
ある。
本発明は、不）容化された生体複合体が、ガラス繊維又
はマトリックスに生体と重合体との混合物を被覆し、か
つ架橋剤又は縮合剤を添加して重合体を不溶化すること
によって製造される生体を固定化する方法を提供する。
はマトリックスに生体と重合体との混合物を被覆し、か
つ架橋剤又は縮合剤を添加して重合体を不溶化すること
によって製造される生体を固定化する方法を提供する。
生体の高度の触媒活性を維持しながら、生体を、従来技
術の問題点を排除する非圧縮性支持体に固定化すること
ができるということが判明した。
術の問題点を排除する非圧縮性支持体に固定化すること
ができるということが判明した。
本発明の方法は、ガラス繊維又はマトリックスに生体と
重合体との混合物を被覆し、かつ架橋剤又は縮合剤を添
加して重合体を不溶化することによって不溶化生体複合
体を製造することによって生体を固定化することから成
る。本発明において記述している被覆とは、ガラス繊維
又はマトリックスに生体を付与するいかなる方法をも意
味する。
重合体との混合物を被覆し、かつ架橋剤又は縮合剤を添
加して重合体を不溶化することによって不溶化生体複合
体を製造することによって生体を固定化することから成
る。本発明において記述している被覆とは、ガラス繊維
又はマトリックスに生体を付与するいかなる方法をも意
味する。
生体は重合体と混合できるように乾燥粉末状又は水性媒
体中に含まれているのがよい。製造した複合体はほとん
ど活性崩失を起さず、かつこの複合体は優れた強度及び
耐久性を示す。さらに、重合体が架橋又は縮合される場
合、これらの材料の親水性度が架橋又は縮合の程度を変
えることによって調節できる。各々が生体で被覆するこ
とができる表面積を提供する非常に多くの小さいガラス
繊維もしくはフィラメントは、大きな全外表面積を与え
ることができ、かつ基質分子が粒子間拡散のために孔内
に到達できずに生体で反応させることができない非常に
多孔質の材料で遭遇するような問題を回避することがで
きる。ガラス繊維は非圧縮性でもあるので、チャネリン
グ、不溶性支持体の部分的崩壊及び圧力集中が防止され
る。本発明の方法は、簡単な濾過によって反応混合物か
ら分離することができ、又は反応基質が充填塔式反応器
中を流れるもののような連続反応処理において使用する
ことができる複合体を生成する。
体中に含まれているのがよい。製造した複合体はほとん
ど活性崩失を起さず、かつこの複合体は優れた強度及び
耐久性を示す。さらに、重合体が架橋又は縮合される場
合、これらの材料の親水性度が架橋又は縮合の程度を変
えることによって調節できる。各々が生体で被覆するこ
とができる表面積を提供する非常に多くの小さいガラス
繊維もしくはフィラメントは、大きな全外表面積を与え
ることができ、かつ基質分子が粒子間拡散のために孔内
に到達できずに生体で反応させることができない非常に
多孔質の材料で遭遇するような問題を回避することがで
きる。ガラス繊維は非圧縮性でもあるので、チャネリン
グ、不溶性支持体の部分的崩壊及び圧力集中が防止され
る。本発明の方法は、簡単な濾過によって反応混合物か
ら分離することができ、又は反応基質が充填塔式反応器
中を流れるもののような連続反応処理において使用する
ことができる複合体を生成する。
本発明の方法に従えば、単一繊維、繊維マトリックス、
繊布、布、個々の連続又はチョソプトファイバーである
ストランド繊維、又はウールの形状を含む、種々の形態
のガラス繊維又はフイシン。
繊布、布、個々の連続又はチョソプトファイバーである
ストランド繊維、又はウールの形状を含む、種々の形態
のガラス繊維又はフイシン。
ントが支持体として使用できる。これらのガラス繊維は
良好な機械特性を存し、圧縮されず、かつ生体に対し熱
的、化学的又は生物的崩壊作用を持たない。ガラス繊維
又はフィラメントは、１グラムのガラス毎に１平方メー
トルまでの表面積を与えるので、大きな表面積を有する
。外表面積は繊維の直径によって決まる。より小さい直
径の繊維が使用される場合、より多くの繊維を同一の空
間に存在させることができるので、利用できる表面積が
さらに大きくなる。繊維の直径は２ミクロンもの細さで
あってもよく、２×１０ミクロンの間でありうる。一般
に、直径は８〜２０ミクロンの間である。本発明の方法
を使用すると、他の支持体を用いるより均一に架橋され
る。
良好な機械特性を存し、圧縮されず、かつ生体に対し熱
的、化学的又は生物的崩壊作用を持たない。ガラス繊維
又はフィラメントは、１グラムのガラス毎に１平方メー
トルまでの表面積を与えるので、大きな表面積を有する
。外表面積は繊維の直径によって決まる。より小さい直
径の繊維が使用される場合、より多くの繊維を同一の空
間に存在させることができるので、利用できる表面積が
さらに大きくなる。繊維の直径は２ミクロンもの細さで
あってもよく、２×１０ミクロンの間でありうる。一般
に、直径は８〜２０ミクロンの間である。本発明の方法
を使用すると、他の支持体を用いるより均一に架橋され
る。
ガラス繊維は、不溶化すべき生体と重合体との混合物で
被覆され、次いで重合体を不溶化し、かつし生体を重合
体に結合するために架橋剤又は縮合剤で処理される。必
要により、ガラス繊維又はフィラメントに付与される前
に、重合体はカルボン酸と化合され、水溶化プレポリマ
ーを生成することができる。ガラス繊維又はフィラメン
ト上の被覆は、ガラス繊維コアの全重量の５０％未満で
ある薄い被覆であるべきである。
被覆され、次いで重合体を不溶化し、かつし生体を重合
体に結合するために架橋剤又は縮合剤で処理される。必
要により、ガラス繊維又はフィラメントに付与される前
に、重合体はカルボン酸と化合され、水溶化プレポリマ
ーを生成することができる。ガラス繊維又はフィラメン
ト上の被覆は、ガラス繊維コアの全重量の５０％未満で
ある薄い被覆であるべきである。
本発明の方法は広くさまざまな生体複合体の製造を可能
にする。生体としては、酵素、微生物細胞、抗原、抗体
、抗生物質、補酵素、植物細胞、動物細胞、細菌、酵母
菌、菌類、組織培養物又はそれらの混合物を含むことが
できる。繊維を被覆し、次いで架橋剤を付与した後、そ
れらの細胞をガラス繊維マトリックスに吸着させること
によって、全細胞をマトリックス内に封じ込めることが
できる。重合体の架橋がマトリックス内に細胞を保持す
る。
にする。生体としては、酵素、微生物細胞、抗原、抗体
、抗生物質、補酵素、植物細胞、動物細胞、細菌、酵母
菌、菌類、組織培養物又はそれらの混合物を含むことが
できる。繊維を被覆し、次いで架橋剤を付与した後、そ
れらの細胞をガラス繊維マトリックスに吸着させること
によって、全細胞をマトリックス内に封じ込めることが
できる。重合体の架橋がマトリックス内に細胞を保持す
る。
ガラス繊維すなわちマトリックスが生体の固定化用の優
れた担体となることが判明した。これらのガラス繊維す
なわちマトリックスは、多孔質支持体に附随する欠点な
しに織布状繊維のマトリックス内に生物量を封じ込める
ことによって多孔質材料と同様に多くの生物量を保持す
ることができる。ガラス繊維マトリックスは良好な流れ
特性を示し、かつ生体を付与することができる大きな表
面積を与え、従って生体は、要求どうりに反応するよう
に、容易に入手および利用することが確実に可能となる
。生体を固定化する本発明方法から得られる固定化支持
体は剛性であり、かつ高活性である。
れた担体となることが判明した。これらのガラス繊維す
なわちマトリックスは、多孔質支持体に附随する欠点な
しに織布状繊維のマトリックス内に生物量を封じ込める
ことによって多孔質材料と同様に多くの生物量を保持す
ることができる。ガラス繊維マトリックスは良好な流れ
特性を示し、かつ生体を付与することができる大きな表
面積を与え、従って生体は、要求どうりに反応するよう
に、容易に入手および利用することが確実に可能となる
。生体を固定化する本発明方法から得られる固定化支持
体は剛性であり、かつ高活性である。
本発明の方法及び複合体に用いられる重合体は、反応条
件によって異なる分子量を有する。種々の重合体材料が
本発明の方法に使用できる。それらの材料としては、ポ
リアルキレンイミン類、多糖類、ポリアクリルアミド、
ポリウレタン、アルギネート及びカラジーナンがある。
件によって異なる分子量を有する。種々の重合体材料が
本発明の方法に使用できる。それらの材料としては、ポ
リアルキレンイミン類、多糖類、ポリアクリルアミド、
ポリウレタン、アルギネート及びカラジーナンがある。
好ましい重合体はポリアルキレンイミン類、特にポリエ
チレンイミン、ポリプロピレンイミン、ポリブチレンイ
ミン及びポリペンチレンイミンであり、ポリエチレンイ
ミンが特に好ましい。
チレンイミン、ポリプロピレンイミン、ポリブチレンイ
ミン及びポリペンチレンイミンであり、ポリエチレンイ
ミンが特に好ましい。
ポリアルキレンイミン類は、アルキレンイミンｊｉｉ
１１体の酸触媒付加重合によって合成することができる
。ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）は、それが比較的低い
価格で一般に容易に入手可能であり、かつ本発明で用い
られる縮合反応に十分作用するので、好ましいポリアル
キレンイミンである。ポリエチレンイミンは、鉱油のよ
うな触媒の存在下にエチレンイミンを開環重合すること
によって製造される。この重合体は非常に枝分れしてお
り、かつ第一級、第二級及び第三級アミノ基を有してい
る。ＰＥＩは水溶性であり、そして重合体鎖の架橋又は
縮合に際し、非水溶性生成物を生じる。
１１体の酸触媒付加重合によって合成することができる
。ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）は、それが比較的低い
価格で一般に容易に入手可能であり、かつ本発明で用い
られる縮合反応に十分作用するので、好ましいポリアル
キレンイミンである。ポリエチレンイミンは、鉱油のよ
うな触媒の存在下にエチレンイミンを開環重合すること
によって製造される。この重合体は非常に枝分れしてお
り、かつ第一級、第二級及び第三級アミノ基を有してい
る。ＰＥＩは水溶性であり、そして重合体鎖の架橋又は
縮合に際し、非水溶性生成物を生じる。
ポリエチレンイミンは、さらに安定性及び強度を付与す
るために、アミン用架橋剤で架橋することができる。こ
の処理は、ポリアルキレンイミンと生体の遊離アミノ基
との間のどれかを架橋させるので、生体を封じ込める結
果となる。架橋剤としては、グルタルアルデヒド、ジイ
ソシアネート類、ポリイソシアネート類、２，４．６−
）ザクロローＳ−トリアジン、ビスオキシラン、ビス
イミデート、ジビニルスルホン、１，５−ジフルオロ−
２゜４−ジニトロベンゼン、エポキシド類等がある。
るために、アミン用架橋剤で架橋することができる。こ
の処理は、ポリアルキレンイミンと生体の遊離アミノ基
との間のどれかを架橋させるので、生体を封じ込める結
果となる。架橋剤としては、グルタルアルデヒド、ジイ
ソシアネート類、ポリイソシアネート類、２，４．６−
）ザクロローＳ−トリアジン、ビスオキシラン、ビス
イミデート、ジビニルスルホン、１，５−ジフルオロ−
２゜４−ジニトロベンゼン、エポキシド類等がある。
グルタルアルデヒドがこの目的のためには好ましい。
選択された重合体は、ガラス繊維すなわちフィラメント
を実質的に被覆するのに十分な量で複合体に付与される
。この量は生体の性質及び所望の物性によって変化する
。使用される架橋剤の量は重合体の量に関係する。
を実質的に被覆するのに十分な量で複合体に付与される
。この量は生体の性質及び所望の物性によって変化する
。使用される架橋剤の量は重合体の量に関係する。
重合体がポリエチレンイミンである場合、非常に効率の
よい縮合方法は、隣接するＰＥＩ鎖のアミノ基を橋かけ
するためにポリカルボン酸（ＰＣＡ）を利用することで
ある。縮合剤、好ましくはカルボジイミドは縮合を容易
に遂行する。本発明の縮合ポリエチレンイミンを製造す
るのに必要な反応を下記に例示する。
よい縮合方法は、隣接するＰＥＩ鎖のアミノ基を橋かけ
するためにポリカルボン酸（ＰＣＡ）を利用することで
ある。縮合剤、好ましくはカルボジイミドは縮合を容易
に遂行する。本発明の縮合ポリエチレンイミンを製造す
るのに必要な反応を下記に例示する。
一（ＣｌｈＣｌｈＮ ） ｎ （ＣＨｚＣＨ２Ｎｌｌ）
ｎ ’ ＣＩＩｚＣｔｂＮＨｚ■ （Ｃ１ｈＣＩＩＪＨ） ｎ“−ＣｌｈＧＨｚＮＩｈ（Ｐ
ＥＩ） （ＰＥＩ） 反応（１）は、枝分れ鎖構造を有するＰＥＩを生成する
ためのエチレンイミンの重合反応を示す。但し、ｎ及び
ｎ′はＯより大きい整数でありｎ＃は０ （（Ｃ１ｈＣ
ＩＩ□Ｎ旧基が存在しないことを示す）又は０より大き
い。反応（２）はＰＥＩとポリカルボン酸との塩の生成
反応を示す。但し、Ｒは置換されている又は未置換の炭
化水素基である。反応（３）及び（４）は、カルボジイ
ミド架橋剤を使用する上記ＰＥｌとポリカルボン酸との
縮合反応を示す。Ｒ′及びＲ″は、他の反応剤及び例示
した反応の条件とともに、下記にさらに完全に説明する
。
ｎ ’ ＣＩＩｚＣｔｂＮＨｚ■ （Ｃ１ｈＣＩＩＪＨ） ｎ“−ＣｌｈＧＨｚＮＩｈ（Ｐ
ＥＩ） （ＰＥＩ） 反応（１）は、枝分れ鎖構造を有するＰＥＩを生成する
ためのエチレンイミンの重合反応を示す。但し、ｎ及び
ｎ′はＯより大きい整数でありｎ＃は０ （（Ｃ１ｈＣ
ＩＩ□Ｎ旧基が存在しないことを示す）又は０より大き
い。反応（２）はＰＥＩとポリカルボン酸との塩の生成
反応を示す。但し、Ｒは置換されている又は未置換の炭
化水素基である。反応（３）及び（４）は、カルボジイ
ミド架橋剤を使用する上記ＰＥｌとポリカルボン酸との
縮合反応を示す。Ｒ′及びＲ″は、他の反応剤及び例示
した反応の条件とともに、下記にさらに完全に説明する
。
一般に、本発明に使用するのに適したポリカルボン酸類
は少なくとも２個のカルボキシル基を存する置換されて
いる又は未置換のカルボン酸でありうる。本発明の方法
及び複合体に使用することができるポリカルボン酸の例
としてはアジピン酸、アゼライン酸、ｌ、１１−ウンデ
カンジカルボン酸、１．１２−ドデカンジカルボン酸、
トラウマチン酸、ペンタデカンジカルボン酸、ヘキサデ
カンジカルボン酸、セバシン酸、スベリン酸、グルタル
酸、マロン酸、ピメリン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレ
イン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、フ
マル酸、ポリアスパラギン酸等がある。
は少なくとも２個のカルボキシル基を存する置換されて
いる又は未置換のカルボン酸でありうる。本発明の方法
及び複合体に使用することができるポリカルボン酸の例
としてはアジピン酸、アゼライン酸、ｌ、１１−ウンデ
カンジカルボン酸、１．１２−ドデカンジカルボン酸、
トラウマチン酸、ペンタデカンジカルボン酸、ヘキサデ
カンジカルボン酸、セバシン酸、スベリン酸、グルタル
酸、マロン酸、ピメリン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレ
イン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、フ
マル酸、ポリアスパラギン酸等がある。
ジカルボン酸類が本発明に使用するのに好ましく、それ
らにはマレイン酸、コハク酸、グルタル酸及びアジピン
酸がある。高級ポリカルボン酸類は２個以上のカルボキ
シル基を含み、かつ５，０００〜５０、０００の分子量
を有するポリアスパラギン酸のような高分子量の重合体
物質を含むいかなる物質でもありうる。縮合反応は一般
に発熱反応であるので、反応混合物は固定化される生体
に有害でな、い温度、例えば約３７℃又はそれ以下に冷
却するのが有利である。
らにはマレイン酸、コハク酸、グルタル酸及びアジピン
酸がある。高級ポリカルボン酸類は２個以上のカルボキ
シル基を含み、かつ５，０００〜５０、０００の分子量
を有するポリアスパラギン酸のような高分子量の重合体
物質を含むいかなる物質でもありうる。縮合反応は一般
に発熱反応であるので、反応混合物は固定化される生体
に有害でな、い温度、例えば約３７℃又はそれ以下に冷
却するのが有利である。
反応物質の分子量がさまざまであるので、ポリカルボン
酸のポリアルキレンイミンに対するモル比（ＰＣＡ ：
ＰＡ Ｉ）は広範に変化しうる。一般に、そのような
比は１：２０〜ｌ ： ０．０００５ の範囲となる
。
酸のポリアルキレンイミンに対するモル比（ＰＣＡ ：
ＰＡ Ｉ）は広範に変化しうる。一般に、そのような
比は１：２０〜ｌ ： ０．０００５ の範囲となる
。
上記したように、ポリカルボン酸類によってポリアルキ
レンイミン鎖の縮合を遂行するために、縮合剤を使用す
るのが有利である。一般に、アミン類とカルボン酸類と
の反応を触媒する又は促進する縮合剤はどれでも使用す
ることができる。そのような縮合剤の例としては、Ｎ−
エチル−５−フェニル−イソアゾリウム−３−スルホネ
ート、ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ１．２−
ジヒドロキノリン、及び種々のカルボジイミド類がある
。カルボジイミド系縮合剤が好ましく、本発明の組成物
に使用できるものは式Ｒ＃−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ“を有する
。但し”、Ｒ′及びＲ＃は３から約２０個の炭素原子、
好ましくは約５から約１２個の炭素原子を有する炭化水
素基である。このような縮合剤としてはｌ−エチル３．
３−ジメチルアミノプロピルカルポジイミドハイポクロ
ライド、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−シクロ
ヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミ
ドメト−ｐ−トルエンスルホネート又はそれらの塩があ
る。カルボジイミド系縮合剤は、一般に、はぼ化学量論
量、例えば化学量論量の約０．２〜３倍、好ましくは約
０．５〜１．５倍である縮合する量で反応混合物に添加
される。各カルボジイミド分子はポリカルボン酸の単一
の酸基と反応する。例えば、一般に、約２：ｌのモル比
のカルボジイミドとジカルボン酸が本発明の方法に使用
される室温において縮合剤を添加すると、顕著な縮合が
３分以内に起り、一般に約２時間以内に完了する。
レンイミン鎖の縮合を遂行するために、縮合剤を使用す
るのが有利である。一般に、アミン類とカルボン酸類と
の反応を触媒する又は促進する縮合剤はどれでも使用す
ることができる。そのような縮合剤の例としては、Ｎ−
エチル−５−フェニル−イソアゾリウム−３−スルホネ
ート、ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ１．２−
ジヒドロキノリン、及び種々のカルボジイミド類がある
。カルボジイミド系縮合剤が好ましく、本発明の組成物
に使用できるものは式Ｒ＃−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ“を有する
。但し”、Ｒ′及びＲ＃は３から約２０個の炭素原子、
好ましくは約５から約１２個の炭素原子を有する炭化水
素基である。このような縮合剤としてはｌ−エチル３．
３−ジメチルアミノプロピルカルポジイミドハイポクロ
ライド、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−シクロ
ヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミ
ドメト−ｐ−トルエンスルホネート又はそれらの塩があ
る。カルボジイミド系縮合剤は、一般に、はぼ化学量論
量、例えば化学量論量の約０．２〜３倍、好ましくは約
０．５〜１．５倍である縮合する量で反応混合物に添加
される。各カルボジイミド分子はポリカルボン酸の単一
の酸基と反応する。例えば、一般に、約２：ｌのモル比
のカルボジイミドとジカルボン酸が本発明の方法に使用
される室温において縮合剤を添加すると、顕著な縮合が
３分以内に起り、一般に約２時間以内に完了する。
ポリエチレンイミンが縮合剤の添加によって不溶化され
た場合、所望により行ないうる後処理工程には、最終複
合体にさらに強度及び安定性を与えるために、上記した
グルタルアルデヒドのようなアミン用架橋剤で、縮合さ
れた被覆ガラス繊維又はフィラメントの架橋処理がある
。選択された重合体の種類によって、種々の縮合剤及び
架橋剤が当業界で知られたものから選択され、複合体を
強固にすることができる。本発明に好ましい組合せはＰ
ＥＩとグルタルアルデヒド、ＰＥＩとエポキシ化合物又
はＰＥＩとカルボジイミド類である。
た場合、所望により行ないうる後処理工程には、最終複
合体にさらに強度及び安定性を与えるために、上記した
グルタルアルデヒドのようなアミン用架橋剤で、縮合さ
れた被覆ガラス繊維又はフィラメントの架橋処理がある
。選択された重合体の種類によって、種々の縮合剤及び
架橋剤が当業界で知られたものから選択され、複合体を
強固にすることができる。本発明に好ましい組合せはＰ
ＥＩとグルタルアルデヒド、ＰＥＩとエポキシ化合物又
はＰＥＩとカルボジイミド類である。
次に実施例により本発明の固定化方法をさらに詳細に説
明する。これらの実施例は本発明の種々の実施態様を記
述するもので、限定するものと解釈すべきではない。
明する。これらの実施例は本発明の種々の実施態様を記
述するもので、限定するものと解釈すべきではない。
大旌桝上
粗製酵素グルコアミラーゼをチョップしたガラス繊維に
固定化した。酵素４．０ｇを均一になるまで０．４５
ｇの５０％ポリエチレンイミンと混合し、次いで２．４
ｇの繊維と混合した。グルタルアルデヒド（２５％水溶
液４ｃｃ）をゆっくりと添加し、均一に分散するまで攪
拌した。乾燥後、上記攪拌物を水洗し、８．０ｃｃの触
媒床容積を有するカラムに充填した。３０％部分的に加
水分解されたデンプン基質を３．６ｃｃ／時（０，４５
ＳＶ／時）の速度でカラムに通した。流出液を０−トル
イジンを用いる比色定量法でグルコースの量を測定する
ことによって経時的に分析し、グルコアミラーゼ活性に
ついて調べた。カラムの最初のグルコース生産性は触媒
床容積１リツトル当たり１０５ｇ／時であった。カラム
を６５日間、６０℃で連続操作し、最終時点におけるグ
ルコース生産性は触媒床容積１リットル当たり５７ｇ／
時であった。
固定化した。酵素４．０ｇを均一になるまで０．４５
ｇの５０％ポリエチレンイミンと混合し、次いで２．４
ｇの繊維と混合した。グルタルアルデヒド（２５％水溶
液４ｃｃ）をゆっくりと添加し、均一に分散するまで攪
拌した。乾燥後、上記攪拌物を水洗し、８．０ｃｃの触
媒床容積を有するカラムに充填した。３０％部分的に加
水分解されたデンプン基質を３．６ｃｃ／時（０，４５
ＳＶ／時）の速度でカラムに通した。流出液を０−トル
イジンを用いる比色定量法でグルコースの量を測定する
ことによって経時的に分析し、グルコアミラーゼ活性に
ついて調べた。カラムの最初のグルコース生産性は触媒
床容積１リツトル当たり１０５ｇ／時であった。カラム
を６５日間、６０℃で連続操作し、最終時点におけるグ
ルコース生産性は触媒床容積１リットル当たり５７ｇ／
時であった。
尖庭嵐１
４６．２００単位のアスパルターゼ活性を有する大腸菌
細菌ペーストをガラス繊維への全細胞固定化に使用した
。支持体は４０８本の異なる長さのフィラメント／スト
ランドガラス繊維を一緒により、それぞれが約０．５ｇ
の全重量を有するマトリックスを形成することによって
製造した。２４ｃｃの蒸留水及び０６７５ｇの５０％ポ
リエチレンイミンと混合した６ｇの大腸菌細胞ペースト
から成る被覆用混合物を調製した。混合物が均一になっ
てから、その２．５ｃｃを垂直につるしたそれぞれ０．
５ ｇの繊維マトリックスに均一にピペットで加え、１
５分間乾燥させた。次いで、グルタルアルデヒド（５％
水溶液０．４２ｃｃ）をこの被覆の上にピペットで加え
、−晩乾燥させた。全体で、合計２ｇのガラン、繊維と
１Ｏｃｃの被覆剤を使用した。
細菌ペーストをガラス繊維への全細胞固定化に使用した
。支持体は４０８本の異なる長さのフィラメント／スト
ランドガラス繊維を一緒により、それぞれが約０．５ｇ
の全重量を有するマトリックスを形成することによって
製造した。２４ｃｃの蒸留水及び０６７５ｇの５０％ポ
リエチレンイミンと混合した６ｇの大腸菌細胞ペースト
から成る被覆用混合物を調製した。混合物が均一になっ
てから、その２．５ｃｃを垂直につるしたそれぞれ０．
５ ｇの繊維マトリックスに均一にピペットで加え、１
５分間乾燥させた。次いで、グルタルアルデヒド（５％
水溶液０．４２ｃｃ）をこの被覆の上にピペットで加え
、−晩乾燥させた。全体で、合計２ｇのガラン、繊維と
１Ｏｃｃの被覆剤を使用した。
この材料を０．５ｃｍの断片に切断し、７．６ｃｃの最
終触媒床容積、０．２６ｇ／ｃｃの細胞ペースト密度を
有するカラムに充填した。次いで、カラムをフマル酸ア
ンモニウムをＬ−アスパラギン酸に転化するために使用
した。ｐＨ８，５の、１ｍＭの硫酸マグネシウムを含む
１．８Ｍのフマル酸アンモニウム溶液を３７℃、４ 、
２ｃｃ ／時（０，５５ＳＶ／時）の速度でカラムに通
した。流出液を２４０ｎＨの波長において分光光度計を
用いて消失フマル酸を測定することによって経時的に分
析し、アスパルターゼ活性について調べた。５日間の連
続カラム操作において平均９９．２％の基質転化率が維
持された。
終触媒床容積、０．２６ｇ／ｃｃの細胞ペースト密度を
有するカラムに充填した。次いで、カラムをフマル酸ア
ンモニウムをＬ−アスパラギン酸に転化するために使用
した。ｐＨ８，５の、１ｍＭの硫酸マグネシウムを含む
１．８Ｍのフマル酸アンモニウム溶液を３７℃、４ 、
２ｃｃ ／時（０，５５ＳＶ／時）の速度でカラムに通
した。流出液を２４０ｎＨの波長において分光光度計を
用いて消失フマル酸を測定することによって経時的に分
析し、アスパルターゼ活性について調べた。５日間の連
続カラム操作において平均９９．２％の基質転化率が維
持された。
失嵐開ユ
実施例２０大腸菌ペーストを０．１０２ｇ／ｃｃの密度
を有する繊維マトリックスに全細胞を固定化するために
同様に使用した。細胞ペースト（２０ｇ）を２．５ｇの
ポリエチレンイミンと均一になるまで混合し、次いで０
．７ｇのガラス繊維マトリックスと混合した。次いで、
グルタルアルデヒド（２５％溶液３．３ｇ）をＰＡ拌し
ながらゆっくり添加し、混合物を１時間乾燥した。
を有する繊維マトリックスに全細胞を固定化するために
同様に使用した。細胞ペースト（２０ｇ）を２．５ｇの
ポリエチレンイミンと均一になるまで混合し、次いで０
．７ｇのガラス繊維マトリックスと混合した。次いで、
グルタルアルデヒド（２５％溶液３．３ｇ）をＰＡ拌し
ながらゆっくり添加し、混合物を１時間乾燥した。
この材料を２２．４ｃｃの最終触媒床容積及び０．５ｇ
／ｃｃの細胞ペースト密度ををするカラムに充填した。
／ｃｃの細胞ペースト密度ををするカラムに充填した。
カラムは１６．４ｃｃ／時（０，７４ＳＶ／時）の速度
での一回の通過及び３７℃の条件で１．８Ｍのフマル酸
アンモニウムの９９．８％を転化した。
での一回の通過及び３７℃の条件で１．８Ｍのフマル酸
アンモニウムの９９．８％を転化した。
尖施炎↓
酵素アルカリ性プロテアーゼを生産すると知られている
バチルス種の生細胞を０．１１５ｇ／ｃｃの密度を有す
る繊維マトリックスに固定化した。細胞ペーストを１６
．０００デルフト（ｄｅｌｆｔ）単位／ｍｌのアルカリ
性プロテアーゼ活性を有する醗酵肉汁から収集した。細
胞ペースト（２ｇ）を３ｃｃの滅菌水及び０．２５ｇの
５０％のポリエチレンイミンと無菌状態で混合した。次
いで、０．７ｇの繊維マトリックスを加え、１５分間浸
漬した。ガラス繊維を取り出し、１０ｍ１の５％グルタ
ルアルデヒド溶液の人ったビーカーに入れ、５分間浸漬
してから、基質（１０％希釈醗酵媒体）中で洗浄した。
バチルス種の生細胞を０．１１５ｇ／ｃｃの密度を有す
る繊維マトリックスに固定化した。細胞ペーストを１６
．０００デルフト（ｄｅｌｆｔ）単位／ｍｌのアルカリ
性プロテアーゼ活性を有する醗酵肉汁から収集した。細
胞ペースト（２ｇ）を３ｃｃの滅菌水及び０．２５ｇの
５０％のポリエチレンイミンと無菌状態で混合した。次
いで、０．７ｇの繊維マトリックスを加え、１５分間浸
漬した。ガラス繊維を取り出し、１０ｍ１の５％グルタ
ルアルデヒド溶液の人ったビーカーに入れ、５分間浸漬
してから、基質（１０％希釈醗酵媒体）中で洗浄した。
全細胞を固定化した材料を、炭素及び窒素源から成る２
０ｍ１の培地と連続供給される熔解酵素とを含む３７℃
のバッチ式反応器に入れた。試料を２４時間処理し、カ
ゼイン基質を用いて酵素活性を測定することによってア
ルカリ性プロテアーゼの生産を経時的に調べた。アルカ
リ性プロテアーゼの生産はバイオリアクターの稼動中に
増加した。
０ｍ１の培地と連続供給される熔解酵素とを含む３７℃
のバッチ式反応器に入れた。試料を２４時間処理し、カ
ゼイン基質を用いて酵素活性を測定することによってア
ルカリ性プロテアーゼの生産を経時的に調べた。アルカ
リ性プロテアーゼの生産はバイオリアクターの稼動中に
増加した。
これは固定化された細胞によって酵素が生産されたこと
を示す。
を示す。
大旌炎玉
酵素フェニルアラニンアンモニアリアーゼを含むロドト
ルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ）
細胞をガラス繊維マトリックス材に固定化した。マトリ
ックス材は個々の繊維を束ねたものから成り、マトリッ
クスの全密度は０．１１５ｇ／ｃｃであった。乾燥重量
で１０％のロドトルラ・ルブラ細胞を含む溶液を調製し
、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を、ＰＥＩ？Ｍ度が１
０％になるまで溶液に加えた。次いで、２ｇのガラス繊
維マトリックス材をこの溶液に浸漬した。
ルラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ）
細胞をガラス繊維マトリックス材に固定化した。マトリ
ックス材は個々の繊維を束ねたものから成り、マトリッ
クスの全密度は０．１１５ｇ／ｃｃであった。乾燥重量
で１０％のロドトルラ・ルブラ細胞を含む溶液を調製し
、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を、ＰＥＩ？Ｍ度が１
０％になるまで溶液に加えた。次いで、２ｇのガラス繊
維マトリックス材をこの溶液に浸漬した。
この材料を取り出し、１２．５％のグルタルアルデヒド
溶液に５分間浸漬してから、取り出し、十分に洗浄した
。ロドトラル・ルブラ細胞は洗浄中に支持材から除去さ
れないのがわかった。次いで、固定化されたロドトルラ
・ルブラ細胞を用いて、ケイ皮酸アンモニウムからＬ−
フェニルアラニンを製造した。ｐｌｌｌｏ、０の６０ｍ
Ｍケイ皮酸塩、６Ｍのアンモニアを含む基質溶液５０ミ
ルリ・７トルを１８時間、室温で固定化されたロドトル
ラ・ルブラ細胞とともにビーカー中に放置した。■リッ
トルの出発基ｉにつき２ｇ以上のし一フェニルアラニン
が製造された。
溶液に５分間浸漬してから、取り出し、十分に洗浄した
。ロドトラル・ルブラ細胞は洗浄中に支持材から除去さ
れないのがわかった。次いで、固定化されたロドトルラ
・ルブラ細胞を用いて、ケイ皮酸アンモニウムからＬ−
フェニルアラニンを製造した。ｐｌｌｌｏ、０の６０ｍ
Ｍケイ皮酸塩、６Ｍのアンモニアを含む基質溶液５０ミ
ルリ・７トルを１８時間、室温で固定化されたロドトル
ラ・ルブラ細胞とともにビーカー中に放置した。■リッ
トルの出発基ｉにつき２ｇ以上のし一フェニルアラニン
が製造された。
Claims (41)
- （１）不溶化生体を製造することによって生体を固定化
する方法であって、 （ａ）ガラス繊維又はマトリックスに生体と重合体との
混合物を被覆する工程、および （ｂ）前記被覆されたガラス繊維又はマトリックスに架
橋剤又は縮合剤を付与することによって重合体を不溶化
する工程、 を備えた方法。 - （２）前記重合体がポリアルキレンイミン類、多糖類、
ポリアクリルアミド、ポリウレタン、アルギネート及び
カラギーナンから成る群から選択される特許請求の範囲
第１項に記載の方法。 - （３）前記重合体がポリアルキレンイミンである特許請
求の範囲第２項に記載の方法。 - （４）架橋する量のアミン用架橋剤が前記ガラス繊維又
はマトリックスに付与され、前記生体を固定化する特許
請求の範囲第３項に記載の方法。 - （５）前記ポリアルキレンイミン系重合体が、該重合体
をガラス繊維又はマトリックスに付与する前に、部分的
に予備縮合された水溶性重合体を形成するために、縮合
に必要な量のポリカルボン酸と混合される特許請求の範
囲第３項に記載の方法。 - （６）前記ポリアルキレンイミン系重合体が、該重合体
をガラス繊維又はマトリックスに付与した後に、縮合条
件下で縮合に必要な量のカルボジイミド系縮合剤を添加
することによって縮合される特許請求の範囲第３項に記
載の方法。 - （７）前記ポリアルキレンイミン系重合体が、該重合体
をガラス繊維又はマトリックスに付与した後に、縮合条
件下で縮合に必要な量のカルボジイミド系縮合剤を添加
することによって縮合される特許請求の範囲第５項に記
載の方法。 - （８）前記不溶化された生体複合体にさらに強度及び安
定性を与えるために、アミン用架橋剤で後処理すること
によって前記複合体を改質することをさらに包含する特
許請求の範囲第６項又は第７項に記載の方法。 - （９）前記ポリアルキレンイミン系重合体がポリエチレ
ンイミン、ポリプロピレンイミン、ポリブチレンイミン
及びポリペンチレンイミンから成る群から選択される特
許請求の範囲第３項、第４項、第５項、第６項又は第７
項に記載の方法。 - （１０）前記ポリアルキレンイミン系重合体がポリエチ
レンイミンである特許請求の範囲第３項、第４項、第５
項、第６項又は第７項に記載の方法。 - （１１）前記ポリカルボン酸がアジピン酸、アゼライン
酸、１，１１−ウンデカンジカルボン酸、１，１２−ド
デカンジカルボン酸、トラウマチン酸、ペンタデカンジ
カルボン酸、ヘキサデカンジカルボン酸、セバシン酸、
スベリン酸、グルタル酸、マロン酸、ピメリン酸、コハ
ク酸、リンゴ酸、マレイン酸、グルタミン酸、アスパラ
ギン酸、シュウ酸、フマル酸及びポリアスパラギン酸か
ら成る群から選択される特許請求の範囲第５項に記載の
方法。 - （１２）前記カルボジイミド系縮合剤が１−エチル３，
３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミドハイポクロ
ライド、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−シクロ
ヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミ
ドメト−ｐ−トルエンスルホネート及びそれらの塩から
成る群から選択される特許請求の範囲第６項又は第７項
に記載の方法。 - （１３）前記アミン用架橋剤がグルタルアルデヒド、ジ
イソシアネート類、ポリイソシアネート類、２，４，６
−トリクロロ−ｓ−トリアジン、ビスオキシラン、ビス
イミデート、ジビニルスルホン、１，５−ジフルオロ−
２，４−ジニトロベンゼン及びエポキシド類から成る群
から選択される特許請求の範囲第４項に記載の方法。 - （１４）ポリカルボン酸対ポリアルキレンイミンのモル
比が約１：２０から１：０．０００５である特許請求の
範囲第５項に記載の方法。 - （１５）前記カルボジイミドが前記ポリカルボン酸に対
して化学量論量の約０．２から３倍の範囲の量で使用さ
れる特許請求の範囲第６項に記載の方法。 - （１６）前記カルボジイミドが前記ポリカルボン酸に対
して化学量論量の約０．５から１．５倍の範囲の量で使
用される特許請求の範囲第１５項に記載の方法。 - （１７）前記生体が乾燥粉末状である特許請求の範囲第
１項、第２項又は第３項に記載の方法。 - （１８）前記生体が水性媒体中に含まれている特許請求
の範囲第１項、第２項又は第３項に記載の方法。 - （１９）前記固定化される生体が酵素、微生物細胞、抗
原、抗体、抗生物質、補酵素、細菌、酵母菌、菌類、植
物細胞、動物細胞、及び組織培養物から成る群から選択
される特許請求の範囲第１項、第２項又は第３項に記載
の方法。 - （２０）前記生体が酵素又は全細胞から選択される特許
請求の範囲第１項又は第３項に記載の方法。 - （２１）前記酵素がグルコアミラーゼである特許請求の
範囲第１９項に記載の方法。 - （２２）前記生体が微生物によって生産されるアスパル
ターゼである特許請求の範囲第１９項に記載の方法。 - （２３）前記生体がバチルス属の微生物のアルカリ性プ
ロテアーゼ生産種である特許請求の範囲第１９項に記載
の方法。 - （２４）前記生体が微生物によって生産されるフェニル
アラニンアンモニアリアーゼである特許請求の範囲第１
９項に記載の方法。 - （２５）生物活性を有する生体とガラス繊維又はマトリ
ックスに被覆され、かつ架橋剤で架橋された重合体との
混合物から成る不溶化された生体複合体。 - （２６）前記重合体がポリアルキレンイミンであり、か
つ前記架橋剤がアミン用架橋剤である特許請求の範囲第
２５項に記載の複合体。 - （２７）前記アミン用架橋剤がグルタルアルデヒド、ジ
イソシアネート類、ポリイソシアネート類、２，４，６
−トリクロロ−ｓ−トリアジン、ビスオキシラン、ビス
イミデート、ジビニルスルホン、１，５−ジフルオロ−
２，４−ジニトロベンゼン及びエポキシド類から成る群
から選択される特許請求の範囲第２６項に記載の複合体
。 - （２８）前記アミン用架橋剤がグルタルアルデヒドであ
る特許請求の範囲第２７項に記載の複合体。 - （２９）生物活性を有する生体とガラス繊維又はマトリ
ックスに被覆され、かつ縮合剤で縮合された重合体との
混合物から成る不溶化された生体複合体。 - （３０）前記重合体がポリアルキレンイミンであり、か
つ前記縮合剤がカルボジイミド系縮合剤である特許請求
の範囲第２９項に記載の複合体。 - （３１）前記カルボジイミド系縮合剤が１−エチル３，
３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミドハイポクロ
ライド、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−シクロ
ヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミ
ドメト−ｐ−トルエンスルホネート及びそれらの塩から
成る群から選択される特許請求の範囲第３０項に記載の
複合体。 - （３２）前記ポリアルキレンイミン系重合体がポリエチ
レンイミン、ポリプロピレンイミン、ポリブチレンイミ
ン及びポリペンチレンイミンから成る群から選択される
特許請求の範囲第２６項又は第３０項に記載の複合体。 - （３３）前記ガラス繊維が２〜２０ミクロンの直径を有
している特許請求の範囲第２５項又は第２９項に記載の
複合体。 - （３４）前記生物活性を有する生体が酵素、微生物細胞
、抗原、抗体、抗生物質、補酵素、細菌、酵母菌、菌類
、植物細胞、動物細胞、及び組織培養物から成る群から
選択される特許請求の範囲第２５項、第２６項、第２９
項又は第３０項に記載の複合体。 - （３５）前記生物活性を有する生体がグルコアミラーゼ
である特許請求の範囲第２５項、第２６項、第２９項又
は第３０項に記載の複合体。 - （３６）前記生物活性を有する生体がアスパルターゼで
ある特許請求の範囲第２５項、第２６項、第２９項又は
第３０項に記載の複合体。 - （３７）前記生物活性を有する生体がバチルス属の微生
物のアルカリ性プロテアーゼ生産種である特許請求の範
囲第２５項、第２６項、第２９項又は第３０項に記載の
複合体。 - （３８）前記生物活性を有する生体がフェニルアラニン
アンモニアリアーゼである特許請求の範囲第２５項、第
２６項、第２９項又は第３０項に記載の複合体。 - （３９）アスパラギン酸生産条件下で、フマル酸アンモ
ニウムを含む基質を、アスパルターゼ又はアスパルター
ゼ含有微生物細胞とガラス繊維又はマトリックスに被覆
され、かつ重合体架橋剤又は縮合剤を付与することによ
って不溶化された重合体との混合物から成る不溶化生体
複合体と接触させることから成るアスパラギン酸を製造
する方法。 - （４０）アルカリ性プロテアーゼ生産条件下で、醗酵媒
体から成る基質を、バチルス属の微生物のアルカリ性プ
ロテアーゼ生産種とガラス繊維に被覆され、かつ重合体
架橋剤又は縮合剤を付与することによって不溶化された
重合体との混合物から成る不溶化生体複合体と接触させ
ることから成るアルカリ性プロテアーゼを製造する方法
。 - （４１）Ｌ−フェニルアラニン生産条件下で、ケイ皮酸
アンモニウムを含む基質を、フェニルアラニンアンモニ
アリアーゼ又はフェニルアラニンアンモニアリアーゼ含
有微生物細胞とガラス繊維に被覆され、かつ重合体架橋
剤又は縮合剤を付与することによって不溶化された重合
体との混合物から成る不溶化生体複合体と接触させるこ
とから成るＬ−フェニルアラニンを製造する方法。
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|---|---|---|---|
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| US720015 | 1985-04-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6255084A true JPS6255084A (ja) | 1987-03-10 |
Family
ID=24892304
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP61075655A Pending JPS6255084A (ja) | 1985-04-04 | 1986-04-03 | 生体の固定化方法及びそれから得られた不溶化生体複合体 |
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| JP (1) | JPS6255084A (ja) |
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-
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- 1986-04-04 EP EP86302533A patent/EP0197784A1/en not_active Withdrawn
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