JPS62501712A

JPS62501712A - ２′、３′―ジデオキシイノシン、２′，３′―ジデオキシグアノシンまたは２′，３′―ジデオキシアデノシンを含有する抗ｈｔｌｖ―３／ｌａｖ剤

Info

Publication number: JPS62501712A
Application number: JP61504427A
Authority: JP
Inventors: ミツヤ，ヒロアキ; ブロダー，サムエル
Original assignee: US Department of Commerce
Current assignee: US Department of Commerce
Priority date: 1985-08-26
Filing date: 1986-08-08
Publication date: 1987-07-09
Also published as: EP0216510A3; DE3689220D1; IL79700A; ATE96325T1; MX9203377A; AU570853B2; IE64518B1; JPH0215523B2; CY1792A; LU88475I2; IE940570L; NZ217185A; IE862265L; EP0216510A2; IL79700A0; US4861759A; EP0216510B1; DE3689220T2; CA1269044A; WO1987001284A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】２５−ジデオキシイノシン、２′５′−ジデオキシグアノクン、又は２′３′− ジデオ＋ｚ７デ／シｙＫ！る）（ＴＬＶ−１ｌｌ／ＬＡＹＯ試験管内での感染性お工び細胞変性効果の抑制不発＃４は２，３′−ジデオキシヌクレオシド、轡には２′。

５−ジデオキシイノシン、２．３−ジデオキシグアノクンおよび２．５’−ジデオキシアデノシンによる、）（’ｒＬ、Ｖ−ＩＩＩ／ＬＡＹの試験管内での感染性および細胞液性効果の抑制に関するものである。

１９８５年以来、）ＩＴＬＶ−１１１ウイルスは後天性免疫不全症候群〔エイズ（ＡＩＬ）８））　および関連する病気の原因性動作玉（ｅｔｉｏｌｏｇｉｃ　ａｇｅｎｔ　）であることが解明されてきた。最近の医学では該病気の猛威ｔ− 阻止する薬剤の発見に努力が払われて−る・これに関連して、ロパート　７−、ガロ（勤ｂｅｒｔ　Ｃ，龜１１Ｏ）氏を共同出願人とする多数の特許出願がなされてきた。一つの特許が米−特許第４．５２ａ、１１３号　として発行され、それは主にエイズ患者とエイズ前兆忠者の血清中和おける抗体の成田に係るものである。

しかしながら不発明は、試験管内に２いてウィルスを特殊なプリン塩基すなわち２２５１−ジデオキシイノクン、２．３−ジデオキシグアノクン、又は２．５− ジデオキシアデノシン、２・よびこルら塩基の相当するモノ−およびトリーホスフェートと接触さぜることによりＨＴ［、Ｖ−■の影ｑｉｋ　ＩＡｆ：滅する方法に関する０ｄｄｌｄｄＧｄ臥先行技術アルマ／スキ（１’ｕｒｍａｎｓｋｉ、　ｅｔ　ａｌ、　）“マクｘ　ｋ　Ｌ　（ｉ　ヒト細胞のレトロウィルス感染の２７　、３／−ジブオキクチミジンによる抑制（Ｉｎ１ｔｉｂｉｔｉｏｎ　ｂｙ　２’、３’　−Ｄｉｄｅｏｘｙ　−ｔｈｙｍｉ−ｄｉｎｅ　ｏｆ　Ｒａｔｒｏｖｉｒａｌ　Ｉｎｆｅｃｔｉ＋：＋ｎ　ｏｆ　？Ｊｏｕｓｅ　ａｎｄ　）Ｉｕｎａｎｃａｌｌｓ　フ　６［キャンサー　レターズ（Ｃａｎｃｅｒ　ｈｅｔｔｅｒｓ月第８巻、第５０７〜３１５４．１９８０年。

ウエーガーら（Ｗａｇａｒ　＃　ｅｔ　ａｌ　、）、”　４乳動物細胞とウィルスにおける１　、　ｓｌ−ジデオキシヌクレオシドの効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　２’、　Ｓ’　−Ｄｉｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ　ｏｎ　Ｍａｍｎａｌｉａｎｇ１２１巻：第４０２〜４０１３頁（１９１４年）０ローゼンら（ｒｖｏｓｅｎ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、“ヒトＴｊ５胞向リンパ性？（ルスｐ（７ ’ｍ　（ＨＴＬＶ−Ｍ／ＬＡＹ）長端末リピート中のクスー作用規則配列の位ｆｆｌ　（ＴｈｅしＪｃａｔｌｏｎ　ｏｆ　ＣＣ５５−Ａｃｔｉｎ　Ｒａｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｓｅｇｕａｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｈｕｍａｎ　Ｔ　Ｃｅｌ　Ｉ　Ｌｙｍｐｈｏｔｒｏ−ｐｉｃ　Ｖｉｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　Ｉ［（ＨＴＬＶ−ｊｉ／ＬＡＹ）　Ｌｏｎｇ　Ｔｅｒｍ盈ｎａｔ＆ｐｅａｔ）−「セル（Ｃｅｌｌ）Ｊ　第４１巻：ｆ、８１５．８２５頁、１９８５年７月。

「タイＡ（Ｔｉｍｅ月　１９８５年８月１２日、第４２頁（コラム３）。

ナカタウガワ（Ｎａｋａｔａｕｇａｗａ　）氏に与えられた米囚特許ｄｇ４，４３４，７８８号は、抗−４剤としての３′−デオキクグ１ノ７ン及び５−デオな７クリジンの利用を示している・エリオン氏ら（Ｅｌｉｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　）　に与えられた米国特許第４，０８１，５３４号はＨ８ｖに対して役立つ瀘々のプリンｄ導体を示している。

ＨＴＬＶ−Ｉｌｌウィルス及びその公知抗りイル剤療法への耐性にクーての特異な点が、タイム（Ｔｉｒｒａ　）誌に次のようＩＣ述べられている：′バーバードのハセルチン（出５Ｃ−１ｔｉｎｅ）　氏によって１４さＣ５そして７月に発行されたＭ誌−ｈ＃（Ｃｅｌｌ　、　第４１巻：ｔＪ８１３−８２３ｇ、１９８５年〕で公表さルた研究によると、そのウィルスは如何なる他種のウィルスよ）も千倍速くそれ自身を再生産させるユニークな遺伝子成分を有していることが明らとなった◎この再生産のメカニズムは「私が今°まで見た生物学上の最大の効果の一つ」とハセルチン氏は言う。［そのことは、なぜエイズが壊滅的な病気であり、またなぜそれがそんなに、し運に広がるのかをうまく説明している」。

激し一複製（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）の過程で、エイズウィルスはその寄生宿（ｈαｎｅ）のＴａｄｌ＠を破壊する。このように、その運行につれてヘルパーＴｄ胞が消失し、またウィルスもそうなるということがこの病気の特徴である。

しかしながら、それにより患者は常に回復から遠ざかるφ″″″発明括説明慢性感染およびそのウィルスの脳感染傾向は新種の治療ならびに一口投与と血液脳関門（ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　）通過の潜在力を有する薬物の開発を必要としているということがｄわれてきた。この研究においては試験管内でのＨＴＬＶ−１１［／ＬＡＹ　の感染性および細胞変性効果に対するプリンおよびピリミジンヌクレオシド誘導体の抑制能力が探究された。分子のリボース部分が２′、３′−ジデオキク配列をなしたプリン（イノ７ン、グアノ７ン及びアデノジノ）ヌクレオシドはウィルスを抑制することが確かめられた。一般的に試験管内で標的＋１１ａ胞の増殖と正常Ｔ細胞の免疫反応性を阻止するのに必要な量よりも１０ないし２０倍低い址の投与鷺でウィルスは完全に抑制されることが観察された。糖部分のみを異にする５ｔｌｉのアデノシン同涙体の分析により、リボースの２′−位及びＳ′−位炭素原子における還元〔ヒドロキシル基決定因子（ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ　）の不存在〕　が抗ウイルス効果のためには必要であり、そして５′−位炭素原子＾′Ｃおける更なる還元は抗ウィルス効果′！！ｉ−無効にすることが明らか第１（２）ａ　は標的Ｔ、［胞の細胞変性効果を示す。

ｔｇ　１　ａ　ｂ　！ｖ＞シ’ｄＬ　１　図ｅｄ、　ＨＴＬＶ−ｆｆｌ／ＬＡＹ　ＶＣサラされた時の人ＴＨ８Ｍｉ胞の生存と成長に対する７、３′−ジデオキシヌクレオシドの有力な保護効果を示す０ｇ２Ａｄもまた、ＨＴＩ、Ｖ−ｉ１１／ＬＡＹ　＆ｌらされり時）ＡＴＨ８，ｄ胞の生存と成長に対するｌ、３′−ジデオキシヌクレオシドの有力な保護効果を示す。

第２８ｄ［、Ｈ９４ＮＦｌ中（２）　ＨＴＬＶ−１ｌｌ／ＬＡＹ　ｐ２４　ｇａｇ蛋白の表出を示す。

ｇ２ｃ［ｄ、）（ＴＬＶ−１［［／ＬＡＹ　のＭｉ胞１に性効果に対するアデノシン同族体によるＡＴＨ８細胞の保護を示す。

図面の簡単な説明ＨＴＬＶ−１１１／ＬＡＹ　Ｋさらさｉた時（２）２．ｓ　−ジデオキシヌクレオシドの存在下でのＡＴＨ８Ｊ胞の生存と成長を示している第１図に２いては、２ｘｌＯ個のＡＴＨ８細胞がポリプレ７　（ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ　）で処理され、ＨＴＬＶ−［［。

（２，０００ウィルス粒子／細胞）にさらされ、培養チーープ中に再懸濁され、そして（ａ）不存在、もしくは（ｂ）　５０　ＰＭの２，３′−シブオキシアデノシン〔カルピオヶムーベーリング　コーボ、ラジｗ　５　＃　７−　ｘ　−（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｒｒｌ−Ｂｅｈ−ｒｉｎｇ　Ｃｏｒｐ、　ＬａＪｏｌｌａ　＋　ＯＡ）　）、（ｃ）　５０　ｐＭの２１．　ｓｌ−ジデオキシイノシン（カルビオヶムーベーリング　コーホ、）％（ｄ）　１　ｐＭの２’、　３’−ジデオキシイノシン（カルビオヶムーペーリ７グ　コーホ、）、及ヒ（ｅ）　：ｉ　００　ｐＭ　Ｏ２’、　５’　−ジデオキシチミジン〔ピー、エル、バイオケミカルスインク、ミルウォーキ−ウ４　Ｘ、（Ｐ、Ｌ、Ｂｉｏｃｈｅ＋ｎ１ｃａｌｓ　Ｉｎｃ、。

Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ　＊　Ｗｉｓ、　）　）の存在下で培養された（黒ぬり符号）。

対照細胞は同様に処理されたがウィルスに＃ｉさらされなかった（白ぬき符号）。さまざ筐な時点で実施例１に記したように生存、１ｔｌＩ胞数が計−リされた。

ＡＴＯｄ、、−Ａ　胞ＶＣ対す７．ＨＴＬＶ−ｍ／Ｌ＊Ｖの細胞変性効果の２′ 、３′−ジデオキシヌクレオシドによる抑制を示している第２Ａ図においては、２ｘｌＯ’個のＡ’ｌ’）（８細胞がボデオキシグアノシン（ビー、エル、バイオケミカルスインク、）、　２　Ｆ、　３／−ジデオキシシチジン又は２’、　３’−ジデオキシチミジンの不存在もしくは存在下で培養チェープ（ＭヌＪ＋　力５　ム）　中テＨＴＬＶ−１［ＩＢ　（２，０００ｔ）　イ＃ス粒子／細胞）にさらさ’ｎ−ｆＣｏ対照＃ｌｌｌ胞（白ぬきカラム）は同様に処理されたがウィルスにはさらさルなかった。

５日目に％総生存ＩＩＩＥ胞数が実施例１に記したｐ口＜計測さｔた・Ｈ９Ｊｔｌ中テＯＨ’ｌ’ｌ、Ｖ−［／ＬＡＹ　Ｏ感染性とａｍの２′。

３−ジデオキシヌクレオシドによる抑制を示している第２Ｂ図に２いては、１０１個のＨ９細胞が１逼々の濃度の２′。

３′−ジデオキシヌクレオシドに４時間、次いで２ａｇ／ｄのポリプレンｌＣ！ＩＯ分間さらされ、ペレット化され、セシテＨ’Ｉ’ＬＶ−（ＩＩＢ　（４０００９（ルス粒子／Ｍ胞）にｔ５時間さらされた。細胞は新鮮な完全培地中に再懸濁され、セして５チＣＯ２含有加湿空気中、３７℃でチューブ中で培養された。

その細胞は連続して２／、　３／−ジデオキシヌクレオシドにさらされた。培養８日目（左）、　９日目（中央）　オｘヒ１０　日’ｄ　（右）　４Ｃ１ＨＴＩ、Ｖ−１／ＬＡＶ　ｔｖｐ２４　ｇａｇ蛋白を表出している標的ｆ（９，ｄ胞の百分率が間接免疫螢光顕微鏡分析法（１ｎｄｉｒｅｃｔ　ｉｒｒｒｎｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ　）により抗ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−ｍ　／Ｌ　Ａ　Ｖ　ｐ　２４−ｒクスモノクロナル抗体〔エフ、デー、ペロネセ（Ｆ、Ｄ、　Ｖｅｒｏｎｅｓｅ　）　オよびアール、シー、ガロ（几、　Ｃ、Ｇａ１ｌｏ　）　両博士より提供され九Ｍ２６〕　を用いて測定された。

ＨＴＬＶ−３１／ＬＡＹの細胞変性効果に対するアデノシン同族体によるＡＴＨ８ｇｌ胞の保護を示している第２ｃ図においては、２Ｘ１０個のＡＴＨ８，￥ＩＢ胞がポリプレンに予備的ニサラサレ、ＨＴＬＶ−１［１ａ　（２，Ｏｏ　Ｏ＋７　イルｘｍ子／ＩｆａｆＩ！１）にさらされ、踵々の盪のアデノシン同族体：　（ａ）　２’。

６−シブオキシアデノシン、（ｂ）２−デオキシアデノクン（カルビオケムーベーリング　コーホ−）％（Ｃ）５−デオキシアデノクン〔コルディセビン（ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｎ　）　；ペーリンガーーマンハイム　ゲーエムベーハー（Ｂｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｈｅｉｍ　ＧｍｂＨ）、西ドイツ）、（ｄ）アデノシンアラピノクドおよび（ｅ）　２’、　Ｓ’、　５’−）リプオキシアプツシ／〔両方ともデー・ジ１ンス（Ｄ、　Ｊｏｈｎｓ　）　％ジュー。トリスコル（Ｊ、　Ｄｒｉｓｃｏｌｌ　）及びジー、ミルネ（Ｇ、　Ｍｉ　ｌｎｅ　）各博士から供給さ？Ｌ７ｔ〕の存在下または不存在下で培養チェープ（黒ぬりカラム）中に再懸濁された。（ａ）中に付された数字ｔｉＳ部分の位置を指している。対照細胞（白ぬきカラム）はウィルスにさらされなかった。５日目に総生存細胞数が実施例１に記した如く計測された。

方法の詳細な説明系ＧＣ＆　イテ、ＨＴＬＶ−ＤＩ／ＬＡＹ　（ｉｌＩ！１ＪＪ１　ウイ＃ストＬ。

て）Ｆｉ、培養中の４日目までには標的Ｔ、ｖｌＩｌ胞に関し、大きな細胞変性効果を゛表す。１００日目でには、細胞の９８−がウィルスによシ殺される（第１図ａ）。ｌｆｆ１胞を殺すことＦｉ、ウィルスの始めの量の関数として定量的に測定され得る（ｆＳ１表）。ＡＴＨ８細胞が、７日目の分析に使用された場合には、ウィルスの最低細胞変性効果量が５ウィルス粒子／細胞と表わされた。下記の実施例において、実質的にウィルス過剰の条件で、［々の化合物を試験するために、２，０００ま之は４０００　ウィルス粒子／圃胞が使用された。

ｇ　１７　（ｂ　−ｅ　）　オヨヒｇ　２　Ａ図ｉｄ、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１［／ＬＡＶにさらされた場合のＡＴＨ８細胞の生存および成長に関するｚＩ　、　ｓｌ−ジデオキシヌクレオシドの強力な保護効果を示している。２′、５′−ジデオキシシチジンのα５　ｐＭ以上の１ｌｌｌｆが、完全にＡＴＨ８細胞を保護し、そしてそれらが生き残ることおよび成長することを可能とした。

この化合物は、ウィルスが存在しない場合での標的ＩａＩ！＠の成長と阻害する童より１０ないし２０倍低い址で、強い抗ウイルス効果を示した。本芙施例の条件において。

２／、　３／−ジデオキシ誘導体／は、試、倹されたその他の類似のジデオキシヌクレオシドと異なシ、保護効果ｔ−表わすために比較的抵抗力を必要とし、ウィルスの細胞変性効果を無効にする能力は、培養の１０日０に失なわれた（第１図ｅｓ？よび第２図の下）。

Ｈ９ａ胞内０ＨＴＩ、ｖ−１１［／ＬＡＹ　ｐ２４　ｇａｇ　ｌ　ンハクＣ）表出を使用して、これらの抗ウイルス効果を異なる系で確認した（第２Ｂ図）。

Ｈ９ｔＭＬ’ｌＡは、ＨＴＬ、Ｖ−１１１／ＬＡＹ　（Ｚ）、ｄ胞変性効果に対し比較的抵抗力があり、そしてＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶピリオンにさらした後のｐ２４　ｇａｇタンパク表出は、試験管内でのウィルス感染およびａ裏の指標として使用され得る。クチジンの２７　、　ｓ／−ジデオキシ誘導体は、系内でのフィルス複製の強ｉ阻害剤だったが、一方２Ｚ　３／−ジデオキシチミジンは、抗ウイルス効果を実現するために比較的高一度を必要とし、そして該化合物は培養の１０日０にでにはフィルス複製を再開させた（第２Ｂ図、下）０試験管内で正常りンパ球の抗原’Ｉ？Ａ性およびレクチン＃ｓ４反応性に関する種々の２１．　、／−ジデオキシヌクレオシドの効果をも試験した（第２表）。テタススート午ソイド（ｔｅｔａｎｕｓ　−ｔｏｘｏｉｄ　）　特４性へＡ／パー／インデ為−サー’Ｉ’ｄ胞の正常クロー７（ＴＭ　Ｓ　）　ｔ’　ｈ抗原誘導活性化に関°する化合物の効果′ｆ：ａ＆ｌべるために使用し、そして正常な循環するリンパ球ｔ”ｔ　ホークライードマイトジェン（ｐｏｋｅｗｅｅｄ　ｍｉｔｏｇｅｎ　）および植物凝集素（ｐｈｙｔｏｈａａｎａｇｇｌｕ−ｔｉｎｉｎ　）　ｇ４活性化に関する効果を謂べるために使用した。こルらの化合物のｄ波は、ＨＴＬＶ−１［［／ＬＡＹの感染および細胞変性効果を試雇管内で阻害するために必要なＵＫの１０ないし２０倍高い濃度も含んで、正常リンパ球の試験管内の免疫活性を、基本的にそのま°まに残した。

２’ａ　３’　−’）テ；ｔ　’Ｐ　シＸ　／　Ｖ：Ｊ　シ）”カ、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−ｍＡＡＶの複製を阻止するメカニズムは知られていない。ｆ、１−ジデオキシアデノシン、２′１５′−ジデオキシグアノシン、及び２ｅ　３’−ジデオキシアデノシンが細胞のＤＮＡポリメラーゼベータおよびアルファ、並びにウィルスの逆転４酵′：ＩＡを阻害し得るが、しかし哺乳類のＤＮＡポリメラーゼアルファを阻害しないことは知られている。

ＤＮＡポリメラーゼアルファは１ｍｌ胞***の間のＤＮＡ複製のための１）ＮＡ合成酵素の鍵であるとされ、そしてこの酵素ＦｉＤＮＡ修復における役割をも有する。おもしろいことに、単純ヘルペスタイプｌ　ＤＮＡポリメラーゼは、細胞のポリメラーゼアルファと同様に　２Ｐ　、　ｓ／−ジデオキシチミジンに抵抗力があると報告されている。非ホスホリル化ジデオ牛ジヌクレオシドは、培養した曙乳傾の細胞の成長に関し、はんの足るに足らなｉ効果を有する（ここではヒトＴ＃、ｌＩｌ胞で確認された事象）。これは。

ＤＮＡポリメラーゼアルファの抵抗性と連結された相当する５′−トリホス２エートへの効果のなめＩｇＩｌ胞内の変換のために、５−トリホスフェートのレベルｆ：低下させるためであると思われる・ｅｔ　ａｌ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　）　＋　４２２５巻：ｇ１４８４な−Ｌ１４８６頁（１９８４年）に記載された様に抗原での刺激の繰シ返しのサイクルにより確立されたテタヌスト午ソイド脣異性Ｔ＃ｌ胞系を、９６−ウェルマイクロタイター培養プレート〔コスタ−、ケンブリッジ、マザチ為−セッッ（Ｃｏｓ−１ａｒ％Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　、　ＭＡ　）　）中の致死的に放射線照射された（１２．００口ｒａｄ）ヒトＴりンパ球ウィルスタイプ！（ｆ（ＴＬＶ−４）−産生ＭＪ−腫瘍細胞の存在中でクローン化し九。クローンＡＴＨ８（１ウエルにりきα５ＭＡ胞でばかれた培養から得られた）は、その速い成長に基づくドラッグ　スクリーニング（ｄｒｕｇ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　）　（インターロイｑ　ｙ　−２０４ｆＥ　下テ）　ｋ　Ｌ　Ｑ：ＨＴＬＶ−［１／Ｉ、ＡＹ　ｃＤ細ｍ変性効果に対する鋭敏な感受性で選択され之。放射能標識したｆ（ＴＬｖ−Ｉ　ｃＤＮＡグローブを使用してサザンプロットハイブリッド形成により試験した場合、ＡＴｆ−１８クローンは、そのゲノム中にＨ’ｌ’ＬＶ４の様々なはり＠すしたコピーを生じているが、ＨＴＬＶ−Ｉ　ｐ２４ｇａｇ　タンパクの検出可能な意を産生じていない。１０６ＡＴＨ８細胞を２ｐｇ／ゴ　ポリブレンに５０分間予備的にさらし、小球形にし、様々な盪のＨＴＬｖ−１ＩＩＢ　にさらし、１５チ（容ｔ／ｇ献）−インターロイ千７２〔レクチン減損；セルラー　プロダクツ　インコーホレーテッド、バッファロー、ニューヨーク（Ｃｅｌ　１ｕｌａｒ　Ｐｒｏｄｏｃｔｓ　Ｉｎｃ　ｊｌ　Ｂｕｆｆａｌｏ　。

Ｎ　Ｙ　）］を含有する完全培地（１５チ非透析、加熱不活性化クシ胎児血清、４ｍＭＬ−グルタミン、５ｘｌＯ″″５２−メルカプトエタノール、５０　Ｕ／ｍｌペニシリン＆工ヒ５０声ｇ／ｄ　ストレプトマイシンで補なわれたＲＰＭＩ）２ｄ中に可ｍｌ濁し、そして５　＄　ＣＱ、含有加湿空気中３７’Ｑで培養管（５０３５，ファルコン、オツクスナード、カリフォルニア（ｒａｌｃｏｎ　、　０ｘｎａｒｄ　％ＣＡ　）　）中培養する。７８目に、全体の生存ａｌ能な細胞を、トリバンブルー色素排除試ａ（ｔｒｙｐ３ｎ　ｂｌｕｅ　ｄｙｅ　ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　）により計測した◎第１表は、Ａ　Ｔ　Ｈ８Ｊ　Ｍに関すルＨＴＩ、Ｖ−ｆｆｌ／ＬＡＹ　（Ｄｄｌ胞変注効果を示す；結果は、二重測定での数学的平均±１４ｓ準偏差として表した。

第　１　表ＡＴＨ８ＡＦｂＫｍｆるＨＴＬＶ−ｍ／ＬＡＶ（Ｄｉｍ胞’Ｒ注効１ｋＯ＆３７ ±１１［Ｌｏ　５　Ｉｓ　６±ａＯ４Ｉ１５　ム２６±α１５５　１．９７±０２５０　１．７８±１ｌＬ１６５００　α５７±αＵ２翫０００　α５０±（ＬＤ１３′−ジデオキシヌクレオシドの効果細胞　なし　１０　１００　１０　１００　１０　１００　なし　１　１０２００２Ｃｌ圓り０−４Ｍ６”　７４ｍ　Ｂ６ｔｈ８６７ｄ　６７に！５　７７１１　ｂ’ｂｆｉ　８１ｄ　１２ｔ１１に１　８Ｊ　？ｈ１　９１１Ｐ１３Ｍ＋Ｐ１（ＡＦ　５１１１Ｗ９２Ｂ？＝１８５１４ｔ５７５５に＝４４６’ｈ９２９ｆｈ２０５５ｆｄ７８＆１１０Ｌ＋１−一７７ｍり配置からなる。各々の２１　、　ｓｌ−ジデオキシヌクレオＶ　）’ノ濃＆　（ｐＭ）　ｕ、ＨＴＬＶ−１１１／ＬＡＶｏａｌｌｌＲ性効果の１よぼ完全な阻害を生じ（第１図および第２Ａ図）。

そしてウィルスのｐ２４表出のほぼ完全な阻害を生じる＜　ｚｌ、ｓｌ−ジデオキシチミジンを除に、、ｉ２Ｂ図参照）。

示していない場合には、Ｈ３−チミジン混入物を応答細胞の活性化指示薬として使用した◎ ２−５ｘ１Ｇ正常ヘルパー／インデエーサ−ＴＭ５細胞′１に１テタヌストキソイド（Ａ６限界凝集単位／　ｗｔｌ　）と補助細胞源として１０１放射腺照射（４，ＱＯＯｒａｄ）　自己未梢血液本核細胞（ＰＢＭ）とで刺敏し、セして２１．．１−ジデオキシヌクレオクドの存在下または不存在下で７２時間培養した。

最後の５時間、α５　ｐｃｉ”Ｈ−チミジンまたは１７＋Ｃｉ”Ｈ−ウリジンにさらした後、細胞をガラス繊維上に集め、含有する放射能を計測した。結果は１分間の数学的平均カラン）（Ｘ１０”）±１標準偏差三電測定として表した。

３−健虜な個体からの１０８　ＰＢＭｔ−、植物凝集素（ＰＨＡ）またはポークライードマイトジェン（ＰＷＭ）で刺猷し、そして７２４間培養し、そして上記の様に処理した。

４−３Ｈ−ウリジン混入物を応Ｇ細胞の活性化の指示薬として使用した。

本発明の目的であるピリミジン塩基は、塩基そのものおよび通常のモノ−およびトリホスフェートカムらなυ。

その中で２’、　５’−ジデオキシイノ７ン、２′、３′−ジデオキ７グアノ７ン、及び２’、　！’−ジデオキシアデノクンが明細書および請求の範囲で特記されて＾るが、ホスフェートもこの定義に含まｎる。

Ｈに習（転）弱ＦＩＧ、２Ａ・ＦｔＧ、２Ｂ濃　度　２ＦＩＧ、２ＣＢ　度声手続補正書１、事件の表示　ＰＣＴ／ＵＳ８６１０１６２２２、発明の名称 τ、３′−ジデオキシイノシン、τ、３′−ジデオキシ３、補正する者重性との関係　「特許出願人」名称　アメリカ合衆国代表者　モーリー　デビット　ディー。

４、代理人（〒１０１）住所　東京都千代田区神田駿河台ｌの６主婦の友ビル　電話（２９１）９７２１〜４６、補正の対象（１、発明の名称（３）請求の範囲（４）図面（第１図、第２Ａ図及び第２Ｃ図）７、補正の内容（１、発明の名称をｒ２’、３’−ジデオキシイノシン、２’、３’−ジデオキシグアノシン、又はτ、３′−ジデオキシアデノシンによるＨＴＬＶ−ｍ／ＬＡＶの試験管内ての感染性および細胞変性効果の抑制」と補正する。

（２）明細占第１頁第３〜７行（行番号による）のｒ　２’　３’−ジデオキシイノシン、２′３′−ジデオキシグアノシン、又は２′３′−ジデオキシアデノシンによる　ＩＩＴＬＶ　−ｍ　／　ＬＡＶの試験管内での感染性および細胞変性効果の抑制　。

を以丁のように補正する。

ｒ２’、３’−ジデオキシイノシン、２’、３’−ジデオキシグアノシン、又は２’、３’−ジデオキシアデノシンニよルＩＩＴＬＶ　−ＩＩＩ　／　ＬＡＶ　Ｑ）試験管内での感染性および細胞変性効果の抑制　」（３）明細書第２頁第５〜１１行（行番号による）のｄｄｆ　ｄｄＧ　ｄｄＡ　。

を以下のように補正する。

ｄｄｒ　ｄｄＧ　ｄｄＡｄｄ■＝２′、３′−ジデオキシイノシンｄｄＧ＝１．３′−ジデオキシグアノシンｄｄＡ＝２’、３’−ジデオキシアデノシン」（４）請求の範囲を別紙の通り補正する。

（５）図面の第１図、第２Ａ図及び第２Ｃ図を別添の通り補正する。

以　」ニ（別　紙）請求の範囲ｒｌ、ＨＴＬＶ−ＩＩＩウィルスを級匡五■ゴ２’、３′−ジデオキシイノシン、２’、３’−ジデオキシグアノシン、２”、３’−ジデオキシアデノシン、並記、１１Ｐｉ］　でＩ　されたそれらのホスフェートからなる群の少なくとも１種から選択されたプリン塩基の有効量と接触させることを特徴とする、Ｗ細胞におけるＨＴＬＶ−ｍウィルスの細胞変性効果を友至±軽減させる方法。

２、　プリン塩基が２．３′−ジデオキシイノシン１あることを更に特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。

３、　プリン塩基が２′、３’−ジブオキシブフッ９１項記載の方法。

４、　プリン塩基が２”、３’−ジデオキシイノシンとゴあることを更に特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。

５、ＨＴＬＶ−ｍウィルスを試験管内のヒ）Ｔ’ｙＬ服Ｔ工２’、３’−ジデオキシイノシン、２”、３′−ジデオキシグアノシン、２’、３′−ジデオキシアデノシンらの　＝１Ｔ　でされたホスフェートからなる群の少なくとも１種と接触させることを特徴とするＨＴＬＶ−ｍウィルスの効果を欠１軽減させる方法。

６、　ウィルスなＪ：　”ｉ　Ｍｎ　ｉ力で２’、３’−ジデオキシイノシンのホスフェートと接触させることを更に４．￥徴とする請求の範ｔＢＪＥ￥Ｓ５項記載の方法。

７、　ウィルスをヨＬＥ」Ｕ胆力で２’、３”−ジデオキシグアノシンのホスフェートと接触させることを更に特徴とする請求の範囲第５項記載の方法。

８、　ウィルスをｌ　記Ａ［Ｉ　Ｉ！’豹で２′、３’−ジブオキとを更に特徴とする請求の範囲第５項記載のジデオキシイノシン、２”、３”−ジデオキシグアノシンｄ　２’　、　３’−ジデオキシアデノシンからなる群の少なくとも１種からなることを特徴とするＨＴＬＶ−ＩＩＩに対して有効な抗ウイルス組成物。

１０、化合物が°１１１！１０〜２００＃ＬＭ２”　、　３’−ジデオキシイノシンであることを更に特徴とする請求の範囲第９項記載の抗ウイルス組成物。

１１、化合物が１【徨二諺」口の２’、３”−ジデオキシグアノシンであることを更に特徴とする請求の範囲第９項記載の抗ウイルス組成物。

１２、化合物が゛農−１０〜２００Ｍの２′、３’−ジデオキシアデノシンであることを更に特徴とする請求の範囲第９項記載の抗ウイルス組成物・　」用ξ習詣器ＦＩＧ２ＣＦＩＧ、２Ａ国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．ＨＴＬＷ−ＩＩＩウイルスを２′、３′−ジデオキシイノシン、２′，３′ −ジデオキシグアノシン、２′，３′−ジデオキシアデノシンおよびそれらのホスフェートからなる群の少なくとも１種から選択されたプリン塩基の有効量と接触させることを特徴とする、細胞におけるＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルスの細胞変性効果を軽減させる方法。
２．プリン塩基が２′，３′−ジデオキシイノシン又はそのホスフェートであることを更に特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
３．プリン塩基が２′，３′−ジデオキシグアノシン又はそのホスフェートであることを更に特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
４．プリン塩基が２′，３′−ジテオキシアデノシン又はそのホスフェートであることを更に特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
５．ＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルスを試験管で２′，３′−ジデオキシイノシン２′ ，３′−ジデオキシグアノシン、２′，３′−ジデオキシアデノシンおよびそれらのホスフェートからなる群の少たくとも，１種と接触させることを特徴とするＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルスの効果を軽減させる方法。
６．ウイルスを２′，３′−ジデオキシイノシン又はそのホスフェートと接触させることを更に特徴とする請求の範囲第５項記載の方法。
７．ウイルスを２′，３′−ジデオキシグアノシン又はそのホスフェートと接触させることを更に特徴とする請求の範囲第５項記載の方法。
８．ウイレスを２′，３′−ジデオキシアデノシン又はそのホスフェートと接触させることを更に特徴とする請求の範囲第５項記載の方法。
９．２′，３′−ジデオキシイノシン、２′，３′−ジデオキシグアノシン、２ ′，３′−ジデオキシアデノシンおよびそれらのホスフェートからなる群の少なくとも１種からなることを特徴とするＨＴＬＶ−ＩＩＩに対して有効な抗ウイルス組成物。
１０．化合物が２′，３′−ジデオキシイノシン又はそのホスフェートであることを更に特徴とする請求の範囲第９項記載の抗ウイルス組成物。
１１．化合物が２′，３′−ジデオキシグアノシン又はそのホスフェートであることを更に特徴とする請求の範囲第９項記載の抗ウイルス組成物。
１２．化合物が２′，３′−ジデオキシアデノシン又はそのホスフェートであることを更に特徴とする請求の範囲第９項記載の抗ウイルス組成物。