JPS6227A - 皮膚科ならびに眼科用の外傷、潰瘍治療用クリーム剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は有効成分としてＥＧＦを含む皮膚科用ならびに
眼科用のクリーム状薬剤に関するものである。

従　　来　　の　　技　　術 ヒトおよび動物に存在する天然蛋白質でＥＧＦ（表皮生
長因子）と呼ばれる物質は上皮細胞組織の細胞増殖を刺
戟し、各種器官潰瘍の回復を促進することが知られてい
る。最初ＥＧＦはマウス・の顎下線から単離され確認さ
れた（　Ｊ、　Ｂｏｉｌ、　Ｃｈｅｍ。

Ｌロー、　１５５５　（１９６２））。この蛋白質の分
析で５３のアミノ酸と３つのジスルフィド結合のあるこ
とが判った。一般にこの蛋白質はマウスＥＧＦあるいは
ｍ−ＥＧＦと呼ばれている。ｍ−ＥＧＦの分離精製法の
違いあるいは酵素処理により２コあるいは５コの末端ア
ミノ酸が失われた蛋白質が得られ（Ｊ、　［１ｏｉ１．
Ｃｈｅｍ、　２４ユ、　７６０９　（１９７２））　、
これら誘導体は夫々ＥＧＦ−２およびＥＧＦ−５と呼ば
れ５３のアミノ酸を持つＥＧＦと同じような特性を有す
ることが見出されている。ＥＧＦはまたヒトの各種生体
液、例えば血漿、唾液、尿、羊水、乳等にも存在する。

ヒトＥＧＦ　（ｈ−ＥＧＦ）は、ｍ−ＥＧＦと実質的に
同じ化学物理特性ならびに生物学的特性を持つ蛋白質で
ある。

従って、以下ＥＧＦなる語はｍ−ＥＧＦならびにＥＧＦ
−２、ＥＧＦ−５、ヒト−ＥＧＦあるいはその混合物を
含むものとする。

上皮細胞組織の増殖促進作用があるため、潰瘍および眼
科手術などで表皮ならびに角膜回復を促進させる治療目
的での利用が提案されてきた。ＥＧＦは例えば水溶液で
は約２ケ月で５０％が分解し、極めて不安定な蛋白質で
あり、したがって冷凍保存され用時適当な薬剤の形にな
されるにすぎない。そのため治療は病院で行われている
にすぎなかった。ＥＧＦの生理活性、無毒性、天然蛋白
質であるため局所耐薬性のある点を考えると、病院外の
薬剤師薬局、で取り扱われ、皮膚用あるいは眼科用の薬
剤が入手可能であれば有用であることは明らかである。

一般に、ある薬剤の工業的生産から治療に用いられるま
でには何ケ月もが経過する。従って安定性が１年未満の
薬剤の有効期限内での主成分の分解が１０％以下である
ことをメーカーにより明記することを求めている。ＥＧ
Ｆ製剤、例えば水溶液・生物学的溶液、塩水溶液あるい
は軟膏（固体主成分を脂肪相に分散させたもの）、例え
ば特開昭５９−６５０２０記載のフォーミュレーション
は我々の試験によればＥＧＦを長期間保存するには不適
当であることが判った。これらの薬剤では２ケ月ですで
に主成分の２０〜４０％が分解していた。

発明が、解決しようとする問題点 本発明目的は従って安定なＥＧＦ製剤を提供するにある
。本発明の別の目的は、皮膚科あるいは眼科用の安定な
ＥＧＦクリーム状薬剤薬剤供するにある。

問題点を解決するための手段 本発明に従えば、上記目的が重量％で Ｅ　Ｇ　Ｆ　　　　　　　　　　０．０００１〜０．０
０５％界面活性剤　　　　　　　　　１〜１０　％脂肪
質　　　　　　　　　　　５〜４５　％防腐剤　　　　
　　　　　０．３〜０．８％蒸留水　　　　　　　　　
　　残　余　　％からなるクリーム状のＥＧＦ含有薬剤
により達成せられる。

本発明者らは上記クリーム状（水中油型乳剤）の薬剤が
２年後でもその主成分（ＥＧＦ）の分解が１０％未満で
極めて安定性がよく皮膚科あるいは眼科用として有用で
あるとの驚くべき発見をなし、それが本発明の基礎とな
ったものである。上記各成分割合において、脂肪質の好
ましい使用割合は１５〜３５％である。また既に述べた
如く、ＥＧＦなる語はｍ−ＥＧＦ、ＥＧＦ−２、ＥＧＦ
−５およびｈ−ＥＧＦを包含する。

本発明の組成物に用いられる界面活性剤は、好ましくは
非イオン界面活性剤、例えばポリオキシエチル化脂肪族
長鎖アルコール、脂肪酸およびそれぞれのグリセライド
ならびにソルビトール誘導体あるいはそれらの混合物で
ある。ソルビトール誘導体にはスパンおよびツイーン（
何れもＩＣＩの登録商標名）として知られる２種類の界
面活性剤が包含され、前者はソルビトールの脂肪酸エス
テルで、後者は対応するポリオキシエチル化物である（
メルクインデックス、第１０版、１２５０頁のＮｏ、８
５７８および１０９５頁のＮｏ、７４５５）　、例えば
これら化合物は主としてソルビタン−モノラウレートか
ら（スパン２０）、ソルビタン−モノステアレートから
（スパン６０）、またソルビタン−トリオレエートから
（スパン８５）構成せしめられ、また主として基体１モ
ル当り平均２０モルのエチレンオキシドを有するポリオ
キシエチレンソルビタン−モノラウレートから（ツイー
ン２０）、ポリオキシエチレン２０ソルビタン−モノス
テアレートから（ツイーン６０）、ポリオキシエチレン
２０ソルビタン−トリオレエートから（ツイーン８５）
構成せしめられる。

同様製品にスパン４０、スパン６５、ツイーン４０、ツ
イーン６５がある。スパン、およびツイーン系界面活性
剤について、はザ　ユナイテッドステーツ　ファーマコ
ベイアルコンベンションインコーボレーテッド（ロック
ビレ　マリ−ランド）刊行のｒＵＳＡＮ　　アンド　ザ
　ＵＳＰ　　ディクショナリー　オブ　ドラッグ　ネー
ムズｊ１９８０年度版を参照されたい。

スパンとツイーンの混合物が本発明目的組成物において
特に好適であることも見出されている。

上記理由ならびにスパンとツイーンの名前で知られる界
面活性剤が多くの国において医薬品の添加剤として容認
されている事実に鑑み、上記量での界面活性剤として、
スパンとツイーンの混合物を含む組成物が本発明の特に
好ましい具体例を表す。上記範囲（１〜１０重量％）内
での界面活性剤の使用量ならびに使用せられる界面活性
剤の種類は、脂肪相が水相中に完全に乳化するように選
択せられる。

使用可能な脂肪質は飽和半固体あるいは液体炭化水素、
飽和あるいは不飽和脂肪酸およびそれらのトリグリセラ
イド、長鎖脂肪族アルコール、植物あるいは動物ワック
スおよびそれらの混合物から選択せられる。脂肪質の具
体例はワセリン、カプリル酸およびカプロン酸のトリグ
リセライド、セチルアルコール、ステアリルアルコール
１、ラノリン、パラフィン等である。

防腐剤は多くの国で局方にクリームとかマルチドーズバ
ックに防腐剤の添加が要求されている事−実に鑑み、微
生物の育成を防止する目的で使用せられるにすぎない。

好適な防腐剤の例としては、フェノール類、ベンジルア
ルコール、アルキル・Ｐ−ヒドロキシ安息香酸ならびに
その塩、モノチオグリセロール、チメロザール、ベンズ
エトニウムクロライド、クロロブタノール、デヒドロ酢
酸ナトリウム、イミダゾリジニル尿素ならびに誘導本ベ
ンジル−アルキルアンモニウムクロライド、Ｐ−クロロ
フェノール、ｐ−ｔ−ブチルフェノール、セリウム■ナ
イトレート、セチル−アルキル−アンモニウムクロライ
ド、セチル−ジエチルメチル−アンモニウムブロマイド
、クロロチモール、クレゾール類、安息香酸ナトリウム
があげられる。

本発明の薬剤組成物を安定化させるための化合物を含有
せしめなくても、活性成分の著しい安定化が達成せられ
る点に注目すべきである。事実、本発明組成物には酸化
防止剤（例えばアスコルビルパルミテート、アスコルビ
ン酸、ビタミンＥ、ブチルヒドロキシアニゾール等）も
蛋白安定化剤（例えばアルブミン、アミノ酸、無機塩、
イオン性界面活性剤）も必要としない。

本発明組成物の調製には何ら特殊な手法を必要としない
。脂肪質と界面活性剤を溶かしく７０〜８０℃）、次に
保温下に大部分の水（局方による純水あるいは眼科用ク
リームの場合には注射用滅菌処理した水）を加える方法
で好適に調製せられる。エマルションは次に、攪拌下２
５〜３０°Ｃに冷却され、ＥＧＦと防腐剤の水性液が攪
拌下に添加せられる。クリームはさらに、例えば３本ロ
ールミルにより均質化されチューブに入れられる。

滅菌眼科用クリームの調製は各成分を予め滅菌処理し、
同様方法で滅菌雰囲気内での操作により実施せられる。

皮膚科用のクリームの一具体例は下記組成のものである
。

Ｅ　Ｇ　Ｆ　　　　　　　　　　　　　　　　０．００
０５％　（Ｗ／Ｗ）界面活性剤　　　　　　　　４．６
％ 脂肪質　　　　　　　　　３０．６％ 防腐剤　　　　　　　　　　０．４％ 純水　　　　　　　にて１００％とする眼科用クリーム
の場合には一般に少量が用いられるためＥＧＦの濃度を
（０，００１〜０．０Ｏ５％）と大になし、界面活性剤
の量を（１〜３％）と少なくし、またより流動性とする
目的で脂肪質の量を（５〜２゛５％）と少なくすること
が好ましい。

眼科用クリームの一具体例（皮膚科用としても有用）は
下記の通りである。

Ｅ　Ｇ　Ｆ　　　　　　　　　　　０．００１％（ｗ／
ｗ）界面活性剤　　　　　　　　２．８％ 脂肪質　　　　　　　　　１８．５％ 防腐剤　　　　　　　　　　０．４％ 純水　　　　　　　にて１００％とするＥＧＦ、特にｈ
−ＥＧＦはクロマトグラフでいくつかのピークのあるこ
とが知られている。我々はＥＧＦの経時安定性として生
物学的力価および重量双方の保持のみならず、クロマト
グラフマツプのピーク間の夫々の比の実質的な合致につ
いても考慮している。後者は極めて重要である。という
のはクロマトグラフマツプで一致することのみが主成分
の変化がなく、従って経時での作用特性ならびに安全性
に変化がないことを確かめうるからである。

本発明クリーム状組成物中のＥＧＦの安定性と他の剤型
（塩、バッファー、アルブミン、イオン性あるいは非イ
オン性界面活性剤を含む水溶液ならびに軟膏）中でのＥ
ＧＦ安定性を、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｅｎｄａｎｄ　Ｍｅｔａ
ｂ、　４５．１１４４　（１９７７）に記載の如くラジ
オイミュノアッセイ（ＲＩＡ）でＥＧＦと特定抗血清の
相互作用に基づく間接的測定、ならびに後段実施例５に
述べられたＨＰＬＣ法に基づく直接的測定により評価し
た。ＨＰＬＣ分析では活性成分の重量変化およびクロマ
トグラフマツプ上での変化の双方を評価できる。ＲＩＡ
およびＨＰＬＣで得られたＥＧＦ濃度は実質的に同じで
あることが確かめられた。これら実施例により（実施例
５参照）、本発明のクリームではＥＧＦが少なくとも２
年間安定で分解は１０％より少なく、クロマトグラフマ
ツプで実質的に同じであると結論づけることができる。

そのため、勿論、薬剤師薬局で取り扱われるのに適した
安定特性の薬剤の提供が可能となる。本発明外の試験組
成物では、２ケ月ですでに主成分が１５〜５０％も分解
していることが判った。

欧州局方およびＦＤＡの規定に従い実施された家兎眼刺
戟試験、白モルモット皮膚感作試験による本発明クリー
ムの耐性試験で充分な安全性があり、何ら刺戟を与えぬ
ことが判った。家兎での有効性試験で本発明のクリーム
剤中のＥＧＦは使用時に調製された。即席水溶液中のＥ
ＧＦと傷跡のある皮膚のリハビリテーションに対し、同
じ作用のあることが確がめられな。上記がら２年間保存
されたクリーム状組成物の有効性が説明せられる。

本発明のクリーム剤は皮膚のすりむき傷、手術での表皮
損傷、下肢潰瘍、褥療、慢性の外傷後のただれ等、眼科
領域では伝染による角膜急性、慢性潰瘍、薬品等による
角膜火傷、外傷による角膜潰瘍あるいは傷、手術による
角膜の傷、角膜の病気等種々の臨床例での治療に用いら
れる。クリーム投与量は一般に０゜５〜５ｇ／日で、潰
瘍あるいは傷の程度、場所、患者の感応等種々の要因に
より変えられる。

以下実施例により本発明を説明する。

実施例１：皮膚用クリームの調製 後述の方法で下記組成の皮膚用クリーム１０ｋｇを作っ
た。

ｍ　−Ｅ　Ｇ　Ｆ　　　　　　　　　　０．０５０　　
ｇワセリン　　　　　　　　　　１２００　　ｇデルモ
ール１　　　　　　　　１２００　　ｇセチルアルコー
ル　　　　　　３５０ｇステアリルアルコール　　　　
３１０ｇツイーン６０　　　　　　　　２３０ｇスパン
６０　　　　　　　　　　２３０ｇコンザーバント０　
　　　　　　３０　　ｇアンチマッファＰ　　　　　　
　　１０　　ｇ純水　　　　　　　　にて　１０，００
０　　ｇとする。

但し、デルモール１はカプリン酸とカプリル酸のトリグ
リセライド、エスベリスソサイエティの商品名、コンザ
ーバントＧはイミダゾリジニル尿素、エスベリスソサイ
エティの商品名、アンチマッファＰはナトリウムデヒド
ロアセテート、エスペリスソサイエティの商品名。

調製法： ワセリンとデルモール１を８０℃に加熱し、セチルアル
コール、ステアリルアルコール、ツイーン６０およびス
パン６０を同温度で攪拌下に加えエマルションを作った
。純水（所定量より３００１少ない量）を同温度に予め
加温したものを加えた。このエマルションを攪拌下に３
０℃まで徐冷した。別途にＥＧＦ、ゴンザーバントＧお
よびアンチマッファＰを純水３００１にとかした溶液を
作り、これを攪拌下体々に３０℃でエマルションに加え
た。得られたクリームを２５℃に冷却し、３本ロールミ
ルで均質化した。次にこのクリームを１５ｇ入りチュー
ブに詰めた。

実施例２：眼科用クリームの調製 実施例１に記載の方法で下記組成の眼科用クリーム１０
ｋｇを夫々滅菌された成分を用い、滅菌雰囲気中で作っ
た。

ｍ　−Ｅ　Ｇ　Ｆ　　　　　　　　　　０．１００　　
ｇワセリン　　　　　　　　　　　７２８ｇデルモール
１７２８　ｇ セチルアルコール　　　　　　２１２ｇステアリルアル
コール　　　　　１８８　　ｇツイーン６０　　　　　
　　　　１４０ｇスパン６０　　　　　　　　　　１４
０ｇコンザーバント０　　　　　　　３６　　ｇアンチ
マッファＰ　　　　　　　　１２　　ｇ純水　　　　　
　　　にて　１０，０００　　ｇとする。

実施例３：皮膚用クリームの調製 後述の方法で、但し下記組成の皮膚用クリーム１０ｋｇ
を作った。

ｍ−ＥＧＦ　　　　　　　　　　　　　　０．０５　　
ｇステアリルアルコール　　　　５００ｇワセリン　　
　　　　　　　　　２００　　ｇツルランＬ−５７５２
００ｇ スパン６０　　　　　　　　　　３００ｇツイーン６０
　　　　　　　　　３００ｇアンチマッファＰ　　　　
　　　　１０　　ｇコンザーバントＧ　　　　　　　　
３０　　ｇ水　　　　　　　　を加えて　１０．０００
　　ｇとする。

（註）ツルランＬ−５７５は高度に精製された水溶性ラ
ノリンの５０％水溶液、アマーコルソサイエティの登録
商標名。

調製法： ステアリルアルコール、ワセリン、ツルランし−５７５
およびスパン２ｏの混合物を７０’Ｃに加熱した。所定
量より３００ｍ１少ない水にツイーン２０、アンチマッ
ファＰおよびコンザーバントＧを含む溶液を７０℃に加
熱し、上記混合物に攪拌下に加えた。このエマルション
を攪拌下、徐々に３０℃まで冷却した。別途にＥＧＦの
水溶液（水３００ｍ１）を作り、これを３０℃で攪拌下
エマルションに加え、得られたクリームをさらに冷却し
適当なチューブに入れた。

実施例４：眼科用クリームの調製 下記方法により、組成が下記の如き眼科用クリーム１０
ｋｇを作った。

ｍ−ＥＧＦｏ、１ｇ 液状パラフィン　　　　　　　１２００　　ｇワセリン
　　　　　　　　　　　８５０ｇツイーン６０　　　　
　　　　　３０６ｇスパン６０　　　　　　　　　　１
５４ｇセチルアルコール　　　　　　３５０ｇステアリ
ルアルコール　　　　３１０　　ｇコンザーバントＧ　
　　　　　　　ｔｏ　　ｇアンチマッファＰ　　　　　
　　　３０　　ｇ滅菌水　　　　　　　にて　１０，０
００　　ｇとする。

液状パラフィン、ワセリン、ツイーン４０、スパン４０
の混合物を８５℃で溶かした。所定量より３００ｍ１少
ない水、コンザーバントＧおよびアンチマッファＰを８
５℃に加熱して得た溶液を、攪拌下に上記溶融混合物に
加えた。このエマルションを攪拌下に約３０℃に徐々に
冷却した。別途にＥＧＦの水溶液（水３００ｍ１）を作
り、これを３０°Ｃでエマルションに攪拌下に加え、得
られたクリームを均質化しチューブに詰めた。この眼科
用クリームの調製は滅菌原料を用い、滅菌雰囲気内で実
施された。

実施例５：本発明のクリームと他の組成物とのＥＧＦ安
定性の比較 有効成′分の安定性は一定期間後に存在する該有効成分
の％を初めの量に対比し、評価した。従来の薬剤中のＥ
ＧＦ量はＪ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄ、　ａｎｄ　Ｍｅｔ
ａｂ。

４５　（６）、＋１４４　（＋９７７＞に記載のラジオ
イミュノアッセイ（ＲＩＡ）により、また下記の如き液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により評価した。

止圧し以り 条件： ２１５ｎｍＵＶデテクターを有する液体クロマトグラフ
ィーヒュレットーパッカード１０８４Ｂ刀ラム： ＬＣ１８ＤＢ、５　ｍｃｍ、１５０Ｘ４．６ｍｍ溶離液
Ａ： バッフ７−ＰＨ＝２．１（水１０１００ＯにＨＣ１０４
６，１ｍｌを溶かしＮａＯＨ（２，５Ｎ＞でｐＨを２．
１としたもの）溶離液Ｂニアセトニトリル 流速：１．５ｍｌ／分 ％Ｂ： Ｂの％、２４％（ｔ＝０分）から４４％（１＝２０分）
を与える直線勾配に従い変化する。

カラム温度：＋２５℃ 溶媒温度：＋２５℃ 標準溶液： 既知力価の標準原料としてのＥＧＦ２ｍｇを正確に秤取
し、水１０１で稀釈。５０ｍｃｌをクロマトグラフに用
いた。

クリームでのサンプル液： 遠心管にクリーム１０ｇを正確に秤取し、このテスト管
を水浴で８０℃に３゛０分間保つ。次に、２０．００Ｏ
ｒ、ｐ、ｍ、で３０分間遠心分離する。分離せる水相を
取り、セブバックＣ１８で濾過し、次に水で５０ｍ１に
稀釈し、分子カットオフ１０００ダルトンの膜を有する
限外濾過器に移した。溶液を３回透析した（毎回的１０
ｍ１の濃厚液を水で１＝５に稀釈）。濃厚液（約１．５
ｍ１）を取り、水で２１に稀釈し、この溶液２００ｍｃ
ｌをクロマトグラフに用いた。

水溶液での組成物によるサンプル液： 理論量１０ｍｃｇのＥＧＦに対応する５Ｑｍｃｌの溶液
を直接用いる。

軟膏の形での組成物によるサンプル液：軟膏５ｇ　（Ｅ
ＧＦ５０　ｍｃｇ含有）を取り、水２０１を加え、混合
物をエマルション化し、次に８０℃で１５分間加熱する
。水相（ＥＧＦ含有）と脂肪質相に分かれる。この水相
を水で５０ｍ１に稀釈し、分子カットオフ１０００ダル
トンの膜を有する限外濾過器に移す。溶液を３回透析す
る（毎回濃厚液約１０ｍ１を水で１：５に稀釈）。濃厚
液約１．５ｍｌを取り、水で２ｍｌに稀釈し、この溶液
２００ｍｃｌをクロマトグラフに用いる。

各種サンプル（Ｘｃ）中のＥＧＦ量（ｇ　１０’）を記
載によりＥＧＦエリアの比で決定する。

式中、 Ａｃはサンプル中のＥＧＦエリア Ａｓは標準液中のＥＧＦエリア Ｐｓは標準液中の重量　ｇ　１０’ Ｆｄは稀釈係数（クリームおよび軟膏は０．０５、水溶
液は１） Ｘｃ値をサンプルの重量で割った商をダラムで表したも
のがサンプル（クリームまたは軟膏）１ｇ中のＥＧＦ量
を与える。を時間でのサンプル中のＥＧＦ計算量と、１
００％と見なされる初めの量との間での％比の１００と
の差がｔ時間でのサンプル中のＥＧＦ分解％を与える。

安定性試験： ゛実施例１．２に記載のクリーム状組成物をいくつかの
比較組成物と対比し、経時でのＥＧＦ　（ｍ−ＥＧＦ）
量の変化を調べた。

比較組成物 く全てＥ　Ｇ　Ｆ　２００．ｃｚ　ｇ／ｍｌを含む水溶
液）Ｒ−１：ＥＧＦの純水溶液 Ｒ−２：アルブミン５０ｆ）μｇ／ｍｌを含むＥＧＦ水
溶液 Ｒ−３：　ＮａＣ１（０，９％）を含むＥＧＦ生理的水
溶液Ｒ−４：　ＮａＣｌ、ＫＣＩ、ＣａＣｌ２を含むＥ
ＧＦ等張溶液Ｒ５：　ＮａＣｌ、にＣ１、ＣａＣｌ２、
ＫＨ２ＰＯ４、ＭｇＳＯ４を含むＥＧＦ等張溶液 Ｒ−６＝ツイーン６０を２３ｍｇ／ｍｌ含むＥＧＦ水溶
液 Ｒ−７＝ツイーン６０とスパン６０を１＝１の比（各々
４６ｍｇ／ｍｌ　）含むＥＧＦ水溶液Ｒ−８：ナトリウ
ムラウリルサルフェート（２０Ｍｇ／ｍｌ）を含むＥＧ
Ｆ水溶液 Ｒ−９：ナトリウムラウリルサルフェート（２０Ｍｇ／
ｍｌ＞を含むＥＧＦ水溶液 Ｒ−１０：ｐＨ７のＥＧＦバッファー水溶液（バッファ
ー：　Ｋ２ＨＯ４／　Ｋ２ＨＰＯ４０，０５Ｍ）Ｒ−１
１：下記組成（ｗ　／　ｗ　） ｍ　−Ｅ　Ｇ　Ｆ　　　　　　　　　０．００１　　　
％液状パラフィン　　　１０　％ ラノリン　　　　　　１０　％ ワセリン　　　　　１００　％　まで の脂肪質相中のＥＧＦ分散物（軟膏） Ｒ−１２：下記組成（ｗ　／　ｗ　） ｍ　−Ｅ　Ｇ　Ｆ　　　　　　０．００１　　％スパン
８５　　　　１．５　　％ ツイーン８５　　　３．５　　％ 液状パラフィン　　１００　％　まで の界面活性剤を含むＥＧＦ軟膏 均等目的で、各組成物には実施例１．２で用いたものと
同じ防腐剤を対応量添加した。

これら比較組成物は下記理由から選択された。

Ｒ−２は水溶液中蛋白質に安定化作用のあることが知ら
れているアルブミンを含む。

Ｒ−３、Ｒ−４、Ｒ−５及びＲ−１０は一般にそれらの
中で蛋白質が安定化されることが知られている種々の等
張液あるいはバッファー液である。

Ｒ−６とＲ−７は本発明のクリーム中にも用いられてい
る界面活性剤を含み、 Ｒ−８とＲ−９は別種の界面活性剤を含む。

Ｒ−１１とＲ−１２は脂肪質を含み、特にＲ−１２は本
発明の組成物から水がない（クリームではなく軟膏）で
点で概念的に異なるものである。

有効成分の安定性は上述のＲＩＡおよびＨＰＬＣ法で決
定された。これらの結果を下記第１表および第２表に示
す。

（以下余白） 第　　１　　表 比較組成物のＥＧＦのｔ時間での力価（％）（各々３回
のテストの平均値）、ＨＰＬＣ力価の１００との差で計
算 第　　２　　表 実施例１及び２の組成物のＥＧＦのｔ時間での力価（％
）（各３回のテストの平均値）、ＨＰＬＣ分解はＨＰＬ
Ｃ力価の１００に対する差で計算上記第１表と第２表の
データから下記が結論づけられる。比較組成物は、その
場で調製使用されるもの以外いづれも使用に適さない。

事実、６０日後すでに有効成分（ＥＧＦ）は１０％以上
、多くの場合３０％以上に分解している。本発明のクリ
ーム状組成物は驚く程のＥＧＦ安定性を示し、６０日後
の分解は殆ど無視され、２年後で分解は１０％未満であ
る。本発明のクリームでの各成分の組合せはＥＧＦ安定
化に特異的である。事実、界面活性剤を含む水溶液（Ｒ
−６、Ｒ−７）でも脂肪質のみでも（Ｒ−１１＞脂肪質
に界面活性剤を加えたものでも（Ｒ−１２）有効成分の
充分な安定化は達成されない。

実施例６を耐性試験 実施例１および２のクリームを用い、下記の試験を実施
した。

一家兎での眼刺戟試験 インテラジエンシー　レギュレトリー　リエイゾングル
ープ　テスティング　スタンダードアンド　ガイドライ
ン　ワーク　グループによる急性眼刺戟試験の推奨ガイ
ドライン（１９８１年１月）による方法 一家兎での一次皮膚刺戟試験 アキュート　トキシティ　アソシエーションオブ　フッ
ド　アンド　ドラッグ　オフィシャルズ　オブ　ジ　ユ
ナイテッド　ステーゾの４６〜５９頁［食品、医薬およ
び化粧品中の薬物の安定性評価］に記載のドレイズ法に
よる一白色モルモットでの表皮感作試験 ジャーナル　オブ　ソサイエティ　コスメチック　ケミ
ストリー　２４．１５Ｈ１９７３）に記載のマギー法に
よる。

眼刺戟試験および一次皮膚刺戟試験が実施例１および２
のクリーム剤を用い家兎で実施され、これらは全く刺戟
のないことが判った。

実施例１および２のクリーム剤を用いての白色モルモッ
トでの表皮感作試験で、これらは何ら過敏症を示さぬこ
とが判った。事実、いづれの動物でも試験の前後で変化
は認められながった。

実施例７：有効度試験 実施例１の組成物の傷跡のある皮膚のリハビリチーシロ
ン効果を、用時に調製されたＥＧＦ水溶液の効果と対比
して評価した。試験は４グループで実施され、各グルー
プは２０　Ｘ　６　ｃｍに予め傷跡のつけられた８匹の
雄のニューシーラント白色家兎から構成せしめた。一群
の動物には何の処置も行わずコントロールとして用い、
第２グループはブラセボクリームを塗り、第３グループ
は実施例１のクリーム（ＥＧＦ濃度５μｇ／ｇ　）を４
ｇ／日／動物の割合で塗布し、第４グループには同じ濃
度のＥＧＦの用時調製された水溶液を塗布した。

プラセボ、クリーム剤、用時調製水溶液の１日量は完全
治癒まで毎日２回にわけて塗布された。

結果の統計的分析（ウイルコクソンーブリーロウ試験）
で、傷跡のある皮膚のリハビリテーション速度にはプラ
セボ処置動物と実施例１のクリーム処置動物の間で非常
に差のあることが判った。

これに反し、実施例１のクリームによるものと用時調製
されたＥＧＦ水溶液によるものでは顕著な差は認められ
なかった。

本発明のクリーム状組成物は有効成分の安定性が高いだ
けでなく、このように有効度においても用時調製のもの
と何ら変わりはなかった。

特許出願代理人

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）重量％でＥＧＦ０．０００１〜０．００５％、界
   面活性剤１〜１０％、脂肪質５〜４５％、防腐剤０．３
   〜０．８％および蒸留水残余％からなるＥＧＦ含有クリ
   ーム状薬剤。
2. （２）ＥＧＦがマウスＥＧＦ、ＥＧＦ−２、ＥＧＦ−５
   およびヒトＥＧＦあるいはそれらの混合物から選ばれる
   特許請求の範囲第１項記載の薬剤。
3. （３）界面活性剤が脂肪酸のソルビトール誘導体エステ
   ル及び対応するポリオキシエチル化物の混合物からなる
   特許請求の範囲第１項記載の薬剤。
4. （４）脂肪質含量が１５〜３５％である特許請求の範囲
   第１項記載の薬剤。
5. （５）脂肪質が半固体、あるいは液状飽和炭化水素、飽
   和あるいは不飽和脂肪酸およびそれらのトリグリセライ
   ド、長鎖脂肪族アルコール、植物ワックス、動物ワック
   スおよびそれらの混合物から選ばれる特許請求の範囲第
   １項記載の薬剤。
6. （６）脂肪質が飽和あるいは不飽和の半固体あるいは液
   状炭化水素、脂肪酸のトリグリセライド、および長鎖脂
   肪族アルコールの混合物からなる特許請求の範囲第１項
   記載の薬剤。
7. （７）防腐剤がイミダゾリジニル−尿素とナトリウムデ
   ヒドロアセテートの混合物からなる特許請求の範囲第１
   項記載の薬剤。
8. （８）眼科用に使用せられる特許請求の範囲第１項記載
   の薬剤。
9. （９）重量％でＥＧＦ０．０００５％、界面活性剤４．
   ６％、脂肪質３０．６％、防腐剤０．４％、蒸留水残余
   ％からなる特許請求の範囲第１項記載の薬剤。
10. （１０）重量％でＥＧＦ０．００１％、界面活性剤２．
    ８％、脂肪質１８．５％、防腐剤０．４％、蒸留水残余
    ％からなる特許請求の範囲第１項記載の薬剤。