JPS62276463A - ラテツクス凝集法による免疫定量法 - Google Patents
ラテツクス凝集法による免疫定量法Info
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- JPS62276463A JPS62276463A JP5062586A JP5062586A JPS62276463A JP S62276463 A JPS62276463 A JP S62276463A JP 5062586 A JP5062586 A JP 5062586A JP 5062586 A JP5062586 A JP 5062586A JP S62276463 A JPS62276463 A JP S62276463A
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Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
3、発明の詳細な説明
[産業上の利用分野]
この発明はラテックス凝集法による免疫定量法に関する
。
。
[従来の技術]
検体中の抗原又は抗体を測定する免疫定品−法として、
放射免疫定tt法、酵素免疫定量法等種々のものか実用
化されている。最近、検出感度か高く、操作も筒便なラ
テックス凝集法かさかんに行なわれるようになった。ラ
テックス凝集法では、測定すべき抗原又は抗体に対応す
る抗体又は抗原がその表面に吸着されたラテックス粒子
か用いられる。このようなラテックス粒子は緩衝液のよ
うな媒体中に浮遊され、検体と混合される。検体中の抗
1!χ又は抗体と、ラテックス表面1.の抗体又は抗原
とか抗原抗体反応を起こし、結合する。検体中の抗原又
は抗体は、抗原決定基を通常複数11するので検体中の
抗原又は抗体を介してラテックス粒子−h)架橋され、
凝集する。この凝集の程度は。
放射免疫定tt法、酵素免疫定量法等種々のものか実用
化されている。最近、検出感度か高く、操作も筒便なラ
テックス凝集法かさかんに行なわれるようになった。ラ
テックス凝集法では、測定すべき抗原又は抗体に対応す
る抗体又は抗原がその表面に吸着されたラテックス粒子
か用いられる。このようなラテックス粒子は緩衝液のよ
うな媒体中に浮遊され、検体と混合される。検体中の抗
1!χ又は抗体と、ラテックス表面1.の抗体又は抗原
とか抗原抗体反応を起こし、結合する。検体中の抗原又
は抗体は、抗原決定基を通常複数11するので検体中の
抗原又は抗体を介してラテックス粒子−h)架橋され、
凝集する。この凝集の程度は。
検体中の測定すべき抗原又は抗体の平に比例するのて、
この凝集の程度を測定することによって検体中の抗原又
は抗体・を定す−することかてきる。凝集の程度は試料
混合物の吸光度又は光の′fl−率を分光光度計によっ
て測定することにより筒rlに行なうことかてきる。こ
の方ノ)、は、感度か他の免疫:jJ fil法に比へ
て、−6く、測定力υ、か筒中て、大かかりな装jν5
を心安としないのて広く用いられつつある。
この凝集の程度を測定することによって検体中の抗原又
は抗体・を定す−することかてきる。凝集の程度は試料
混合物の吸光度又は光の′fl−率を分光光度計によっ
て測定することにより筒rlに行なうことかてきる。こ
の方ノ)、は、感度か他の免疫:jJ fil法に比へ
て、−6く、測定力υ、か筒中て、大かかりな装jν5
を心安としないのて広く用いられつつある。
従来のラテックス凝集法ては、例えば[免疫実験操作法
VIII4 日本免疫学界、p2:19:l−2400
ニ記載されているように、吸光度測定は、波長900n
m以北の近赤外部の光を用いて行なわれていた。
VIII4 日本免疫学界、p2:19:l−2400
ニ記載されているように、吸光度測定は、波長900n
m以北の近赤外部の光を用いて行なわれていた。
[従来技術の欠点]
従来のラテックス凝集法は、他の免疫定tY法に比較し
て感度は高いか、それても抗原又は抗体を極めて精度良
く定積する必要がある場合には、未だ感度的に満足てき
ないときかある。
て感度は高いか、それても抗原又は抗体を極めて精度良
く定積する必要がある場合には、未だ感度的に満足てき
ないときかある。
[発明か解決しようとする問題点]
この発明の[1的は、従来のラテックス凝集法よりも測
定感度の優れたラテックス凝集法による免疫定量法を提
供することである。
定感度の優れたラテックス凝集法による免疫定量法を提
供することである。
[問題を解決するための手段]
本願発明者らは、従来のラテックス凝集法よりも感度の
優れたラテックス凝集法を求めて説、α研究した結果、
特定範囲の粒径のラテックスを用い、かつ、特定範囲の
波長の光を用いて吸光度を測定することにより、従来の
ラテックス凝集法の感度が右、αに向■二することを見
出し、この発明を′l′、:、成した。すなわち、この
発明は、検体中の測定すべき抗原又は抗体に対応する抗
体又は抗原がその表面に結合されたラテックス粒子の浮
遊液と前記検体とを混合し、該混合物の吸光度を測定し
て前記検体中の抗原又は抗体を定量する、ラテックス凝
集法による免疫定量法において、前記ラテックス粒Iの
粒径か口、09uLmないしo、13壓lであり、吸光
度の測定は540nmないしS80nmの波長の光を用
いて行なわれることを特徴とする免疫定量法を提供する
。
優れたラテックス凝集法を求めて説、α研究した結果、
特定範囲の粒径のラテックスを用い、かつ、特定範囲の
波長の光を用いて吸光度を測定することにより、従来の
ラテックス凝集法の感度が右、αに向■二することを見
出し、この発明を′l′、:、成した。すなわち、この
発明は、検体中の測定すべき抗原又は抗体に対応する抗
体又は抗原がその表面に結合されたラテックス粒子の浮
遊液と前記検体とを混合し、該混合物の吸光度を測定し
て前記検体中の抗原又は抗体を定量する、ラテックス凝
集法による免疫定量法において、前記ラテックス粒Iの
粒径か口、09uLmないしo、13壓lであり、吸光
度の測定は540nmないしS80nmの波長の光を用
いて行なわれることを特徴とする免疫定量法を提供する
。
[発I!!1の効果]
この発明によると、従来法に比較して有意に測定感度か
増大したラテックス凝集法による免疫定j五法か提供さ
れる。
増大したラテックス凝集法による免疫定j五法か提供さ
れる。
[発明の詳細な説明]
この発明の方法ては、従来法と同様、検体中の測定すべ
き抗原又は抗体に対応する抗体又は抗原がその表面に結
合されたラテックス粒子の浮遊液と前記検体とを混合し
、該混合物の吸光度を測定して前記検体中の抗原又は抗
体を定量する。この発明にとって特徴的なことは、用い
るラテックス粒子の粒径を0.09 g mないし0.
13g、mとし、かつ、吸光度測定に波1540n籠な
いし580nmの光を用いることである。これら、粒径
と吸光度測定に用いられる光の波長を選択することによ
り測定感度を増大することかてきることは未願発明者ら
か初めて見出したちのてあり、従来、このような発想は
全くなかった。
き抗原又は抗体に対応する抗体又は抗原がその表面に結
合されたラテックス粒子の浮遊液と前記検体とを混合し
、該混合物の吸光度を測定して前記検体中の抗原又は抗
体を定量する。この発明にとって特徴的なことは、用い
るラテックス粒子の粒径を0.09 g mないし0.
13g、mとし、かつ、吸光度測定に波1540n籠な
いし580nmの光を用いることである。これら、粒径
と吸光度測定に用いられる光の波長を選択することによ
り測定感度を増大することかてきることは未願発明者ら
か初めて見出したちのてあり、従来、このような発想は
全くなかった。
この発明ては、吸光度測定時におけるラテックス粒子の
締濃度は1通常、 0.(14v/iないしU 、 0
8v/v% (体積/体積%)である。
締濃度は1通常、 0.(14v/iないしU 、 0
8v/v% (体積/体積%)である。
ラテックス粒子の粒径及び吸光度測定に用いられる光の
波長以外の他の・19項1例えば、ラテックス粒子浮遊
液のA製、検体とラテックス?’PTt液の反応条件等
はこの発明にとって同等特徴的なものてはなく、従来法
において採用されているいずれのものをも採用すること
かてきる。
波長以外の他の・19項1例えば、ラテックス粒子浮遊
液のA製、検体とラテックス?’PTt液の反応条件等
はこの発明にとって同等特徴的なものてはなく、従来法
において採用されているいずれのものをも採用すること
かてきる。
実施例1
C度50Ong/ml又は0IIK/IIのα−フェト
プロティン(AFP)溶液100ル1に0.17肩グリ
シジ緩七M (pH81)40OuL+を加えた。抗A
FP抗体(ウサギ)を結合させた粒径0.09 p、
m又は0.12延1のラテックス粒子を同緩衝液中に0
.12v/v%のC度て浮遊させた浮遊液]1]Ogl
をこれに加え、37°Cて30分間反応させた後、この
混合物の波長30 D n aから900nmまての吸
収スペクトルを分光光度計(I+立220A型)を用い
て測定した。
プロティン(AFP)溶液100ル1に0.17肩グリ
シジ緩七M (pH81)40OuL+を加えた。抗A
FP抗体(ウサギ)を結合させた粒径0.09 p、
m又は0.12延1のラテックス粒子を同緩衝液中に0
.12v/v%のC度て浮遊させた浮遊液]1]Ogl
をこれに加え、37°Cて30分間反応させた後、この
混合物の波長30 D n aから900nmまての吸
収スペクトルを分光光度計(I+立220A型)を用い
て測定した。
粒径(1、09体層のラテックス粒子を用いて得られた
結果を第1図に、粒径f1.+2用纏のラテックス粒子
・を用いて得られた結果を第2図□に示す。
結果を第1図に、粒径f1.+2用纏のラテックス粒子
・を用いて得られた結果を第2図□に示す。
第11,4及び第2図より、AFPを含まない試ネ1を
用いた場合とAFPを500ng/ml含む試料を用い
た場合との吸光度の差か、jS径11.09 g mの
ラテックス粒子を用いた場合でIJ粒B!0.12ルl
の粒子−を用いた場合ても540 n mと580nm
との間の波長の光を用いたときに最も大きくなっており
、この間の波長の光を利用することによって、最も感度
良く測定てきることかわかる。また、第1図及び第2
rXに)^づき、従来法て採用されている波長9000
■の光を用いた場合と、572nsの光を用いた場合と
の吸光度の差を第1表にまとめた。第1表より、ラテッ
クスの粒径か0.09pmてあっても0、+27zmで
あっても波長572nlの光を用いた方か波長900n
−の光を用いて吸光度を測定した場合よりもはるかに吸
光度の差か大きく、従って、感度良く測定てきることか
わかる。
用いた場合とAFPを500ng/ml含む試料を用い
た場合との吸光度の差か、jS径11.09 g mの
ラテックス粒子を用いた場合でIJ粒B!0.12ルl
の粒子−を用いた場合ても540 n mと580nm
との間の波長の光を用いたときに最も大きくなっており
、この間の波長の光を利用することによって、最も感度
良く測定てきることかわかる。また、第1図及び第2
rXに)^づき、従来法て採用されている波長9000
■の光を用いた場合と、572nsの光を用いた場合と
の吸光度の差を第1表にまとめた。第1表より、ラテッ
クスの粒径か0.09pmてあっても0、+27zmで
あっても波長572nlの光を用いた方か波長900n
−の光を用いて吸光度を測定した場合よりもはるかに吸
光度の差か大きく、従って、感度良く測定てきることか
わかる。
第1表
実施例2
0ng/mlないし2001]ng/mlの種ノlの既
知c度のAFP溶液100μmにU、17Mクリシン緩
衝液(pH8,:1)400 牌1を加えた後、抗AF
P抗体(ウサギ)を結合させた粒[0,12gmのラテ
ックス粒子−を同緩衝液に浮疏させた浮遊液(+1.1
2v/v%)300p1を加え、37℃で反応させ、1
分間当りの吸光度変化率を分光光度計(日立220^)
を用いて波長100ha+及び波長572rv+て測定
し、その測定結果にノ1(づいてそれぞれ検h)線を作
成した。
知c度のAFP溶液100μmにU、17Mクリシン緩
衝液(pH8,:1)400 牌1を加えた後、抗AF
P抗体(ウサギ)を結合させた粒[0,12gmのラテ
ックス粒子−を同緩衝液に浮疏させた浮遊液(+1.1
2v/v%)300p1を加え、37℃で反応させ、1
分間当りの吸光度変化率を分光光度計(日立220^)
を用いて波長100ha+及び波長572rv+て測定
し、その測定結果にノ1(づいてそれぞれ検h)線を作
成した。
これらの検ダ線を第3図に示す。第3図から明らかなよ
うに、波長572n膳て吸光度を測定した方か、波1i
9[1(ln@て吸光度を一定した場合よりも検jI5
線の傾きか大きく、従って感度良<AFPを定植するこ
とかてきる。
うに、波長572n膳て吸光度を測定した方か、波1i
9[1(ln@て吸光度を一定した場合よりも検jI5
線の傾きか大きく、従って感度良<AFPを定植するこ
とかてきる。
4 図面の1)?i巾な説明
第1 I/lは抗AFP抗体か表面に結合された粒径1
1.0’1gmのラテックス粒子を用いて5011ng
/mlのAFP試料又はAFPを含まない試料と反応さ
せた後の反応混合物の吸収スペクトル、 第2図は抗AFP抗体か表面に結合された粒径0 、
I 2 g mのラテックス粒子を用いて500ng/
mlのAFP試ネ1又はAFPを含まない試料と反応さ
せた後の反応混合物の吸収スペクトル。
1.0’1gmのラテックス粒子を用いて5011ng
/mlのAFP試料又はAFPを含まない試料と反応さ
せた後の反応混合物の吸収スペクトル、 第2図は抗AFP抗体か表面に結合された粒径0 、
I 2 g mのラテックス粒子を用いて500ng/
mlのAFP試ネ1又はAFPを含まない試料と反応さ
せた後の反応混合物の吸収スペクトル。
第3図は、波長572nm又は900 n mて吸光度
を測定して作成したAFP定賃のための検是=線を示す
。
を測定して作成したAFP定賃のための検是=線を示す
。
特許出願人 デンカ生研株犬会社 、111.
、−7、特許出願込代理人 弁理ト 谷用英次部嘉3川
、−7、特許出願込代理人 弁理ト 谷用英次部嘉3川
Claims (1)
- 検体中の測定すべき抗原又は抗体に対応する抗体又は抗
原がその表面に結合されたラテックス粒子の浮遊液と前
記検体とを混合し、該混合物の吸光度を測定して前記検
体中の抗原又は抗体を定量する、ラテックス凝集法によ
る免疫定量法において、前記ラテックス粒子の粒径が0
.09μmないし0.13μmであり、吸光度の測定は
540nmないし580nmの波長の光を用いて行なわ
れることを特徴とする免疫定量法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5062586A JPS62276463A (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | ラテツクス凝集法による免疫定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5062586A JPS62276463A (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | ラテツクス凝集法による免疫定量法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62276463A true JPS62276463A (ja) | 1987-12-01 |
Family
ID=12864162
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5062586A Pending JPS62276463A (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | ラテツクス凝集法による免疫定量法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS62276463A (ja) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5362826A (en) * | 1976-11-10 | 1978-06-05 | Hoffmann La Roche | Quantitative determination of immunologically active substance in analysing sample |
-
1986
- 1986-03-10 JP JP5062586A patent/JPS62276463A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5362826A (en) * | 1976-11-10 | 1978-06-05 | Hoffmann La Roche | Quantitative determination of immunologically active substance in analysing sample |
JPS60259964A (ja) * | 1976-11-10 | 1985-12-23 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 分析試料中の免疫学的に活性な物質の定量法 |
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