JPS62234070A - アミノアンチピリン誘導体及びその使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野１ 本発明は、新規な発色剤化合物に関し、分析、とりわけ
臨床診断の検査法に関するものである。

［従来の技術］ 臨床検査に多層される発色系として、４−アミノアンチ
ピリン（以下４ＡＡと略す、）と７エノール又はフェノ
ール誘導体、或いは４ＡＡとアニリン又はアニリン誘導
体との組合わせが知られている。従来、フェノール及び
アニリン誘導体に関する研究は、多く見られるが、４Ａ
Ａ誘導体に関しては少ない、４ＡＡ誘導体に関するもの
としては、特開昭５６−１２５３７３、特開昭５８−１
２４７７等がある。前者は４ＡＡにより形成される色素
の不安定性による定量誤差を４ＡＡの代わりに低級アル
キル基又はアミ７基置換したフェニル基を有する４ＡＡ
ｉ導体を用いることにより解決したものであり、後者は
、湿式法で什なわれてきた反応を４ＡＡの代わりにクロ
ロフェニル基又はトリクロロフェニル基を有する４ＡＡ
ｉ導体を用いることにより乾式法にも適用できるように
したものである。

又、４ＡＡ誘導体に関する他の報告としては、鎮痛剤と
しての使用を口約とするハロゲン置換したフェニル基又
はエトキシ基を有する４ＡＡ誘導体に関するもの〔金沢
大学薬研報、２８頁、１９５７年〕があるが、そこには
、発色剤としての検討はない。

［発明が解決しようとする問題点］ 従来、４ＡＡを酵素反応系に用いた場合、４ＡＡの酵素
阻害作用という問題があった。例えば、４ＡＡによるコ
リンエステラーゼの阻害があり、コリンエステラーゼを
パーオキシダーゼ／　Ｈ２Ｏ２／４Ａ　Ａ　Ａ反応で測
定すると４ＡＡの阻害によって真の活性値が得られない
という事実があり、問題になっていた。〔日本臨床検査
自動化学会誌、７．３２４．１９８２．）、本発明はこ
の点に着目し、なされたものであって、測定に際し、酵
素を阻害しない発色剤を提供しようとするものである。

［問題点を解決するための手段］ 本発明者らは、４ＡＡに代わる酵素を阻害しない発色剤
を種々検討した結果、 一般式： ［式中、Ｒ１はす７チル基、フェニル基又はニトロ基を
有するフェニル基、Ｒ２は低級アルキル基を示す、ただ
し％Ｒ１がフェニル基でかっＲ２がメチル基の場合を除
く、］で表わされるアミ／アンチピリン化合物及びその
塩の合成に成功すると共にこれらの誘導体が酵素の活性
を阻害しないことを見い出だし、本発明を完成した。

本発明に係る化合物の合成方法の一例を次に示す。

本発明の化合物は、下記の反応式で示す方法によって収
率よく得ることができる。

Ｒ＋　　　　　　　　　Ｒ。

Ｒ，［目 式［Ｉ］の化合物の酸付加塩は、常法に従って、酸を作
用させることにより製造が可能である。

いずれの化合物においても、酸付加塩を構成する酸の例
として、塩化水素酸、臭化水素酸、沃化水素酸、硝酸、
過塩素酸、硫酸等の無機酸、及び酢酸、蓚酸、酒石酸、
ｐ−）ルエンスルホン酸等を挙げることができる。

又、Ｒ１とＲ２の組合わせは、例えば次の様にすること
が可能である。

表１ このようにして、合成される化合物の例を挙１テると、
ｐ−ニトロフェニル−２，３−ツメチル−４−７ミノー
５−ピラゾロン、１−す７チルー２，３−ツメチル−４
−７ミ／−５−ピラゾロン、１−フェニル−２−エチル
−３−メチル−４−アミノ−５−ピラゾロン、１−フェ
ニルー２−プロピル−４−７ミ７−５−ピラゾロン等で
ある。

次に本発明のもう一つの目的である分析法について以下
に述べる。

本発明で得られる化合物は、特にコリンエステラーゼ活
性の測定に適しているが、分析しようとする酵素活性が
４ＡＡにより阻害を受ける時、本発明で得られる化合物
を用いると、従来４ＡＡ系で生じた酵素阻害の影響のな
い正確な測定が期待できる。

例えば、本発明の化合物を用いるコリンエステラーゼの
比色法による測定は、以下のような度応である。

コリンエステラーゼ １）ｐ−ヒドロキシベンゾイルコリンー−一一一一一一
一一−シｐ−ヒドロキシ安息香酸　十　コリン 過ヨウ素酸塩 ｐ−ヒドロキシ安息委酸＋４ＡＡ誘導体　　　　　　　
キノン色素コリンエステラーゼ Ｚ）ベンゾイルコリン　　　　　　　　　　　コリン　
十　安息香酸コリンオキシダーゼ コリン　　　　　　　　　　ベタイン　＋　Ｈ２Ｏ２他
にＳＸ　　）ルオイルコリン、’　　）ルオイルコリン
等の基質を用いて測定することも可能である。

又、本発明の化合物は、従来、発色剤として用いられて
きた４ＡＡに置き換えて用いることができる０例えば、
公知のカプラーと本発明の化合物とをパーオキシダーゼ
及び過酸化水素の存在下で酸化縮合させ、又は公知の酸
化剤の存在下で酸化縮合させて、発色させる方法に用い
ることができる。

このような方法で分析できる物質としては、例えば、過
酸化水素、コレステロール、グルコース、尿酸、トリグ
リセライド等を挙げることができる。

公知の酸化剤としては、過ヨウ素酸塩、過硫酸カリウム
、７エリシアン化カリウム等を用いることができる。公
知のカプラーとして、フェノール系カプラーの例を挙げ
ると、フェノール、ｐ−クロロ７エノール、ｐ−ヒドロ
キシベンゾエート、ジクロロ７エノール、ジクロロクレ
ゾール、ジブロム７エノール等があり、アニリン系カプ
ラーとしては、Ｎ、Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ、Ｎ−ジ
メチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピ
ル）−アニリン、ニトロソ−５−（Ｎ−７’ロピルーＮ
−スルホプロピル−アミノ）７エノール等があり、トル
イジン系カプラーとしては、Ｎ−（２−カルボキシエチ
ル）−Ｎ−エチル−３−メチルアニリン、Ｎ、Ｎ−ジエ
チル−ｘ−）ルイジン、Ｎ、Ｎ−ジメチル−ｌ−トルイ
ジン、Ｎ、Ｎ−ジェタノール−ｚ−）ルイクン、３−メ
チル−Ｎ−エチル−Ｎ−ヒドロキシ−エチルアニリン等
があり、７ニシジン系カプラーとしては、Ｎｔ　Ｎ−ジ
メチル−ｌ−メトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２
−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−貢一７ニジノン
、アセトアミノ−Ｎ、Ｎ−ジメチルアニリン等があり、
ナフタレン系カプラーとしては、１，７−ノヒドロキシ
ナ７タレン等がある。

尚、本発明の化合物の溶解性を高めるためにアルコール
又は、界面活性剤等を系に加えることも、それが酵素を
阻害しない場合には効果的である。

［昨月］ 本発明の４　Ａ　Ａ　誘導体の使用により、従来、阻害
のため正確に測定できなかった酵素を正確に定量するこ
とが可能となった。

以下、実施例により詳細に説明するが、本発明はこれに
よって何ら限定されるものではない。

実施例１ ｐ−二トロフェニル−２，３−ツメチル−４−アミ／−
５−ピラゾロン（化合物Ｉ）の合成■ｐ−二トロフェニ
ルー３−メチル−５−ピラゾロンの合成 ｐ−ニトロフェニルヒドラノン２５ｇ　全２００ｚｌエ
タノール５０１ｔ１の水を加えた溶液に加え、８０℃前
後に加熱して溶解させた。アセト酢酸エチルエステル２
２Ｆｉを滴下して加え９０〜１３０℃にて、４時間加熱
還流した。放冷後−晩装置したところ結晶が析出した。

これを濾取して乾燥させたところ３３ｇの結晶が得られ
た。

■ｐ−ニトロフェニルー２．３−ジメチル−５−ピラゾ
ロンの合成 ■で得たｐ−ニトロフェニル−３−メチル−５−ピラゾ
ロン８ｇｉ：　ｐ−）ルエンスルホン酸メチル１２ｇを
加えて１６０℃〜１８０℃で４時間加熱攪拌を行なった
。その後２５％水酸化ナトリフム溶液を用いて中和し、
クロロホルム１００１．１で２回抽出を行なった。クロ
ロホルム層を分離留去後、酢酸エチルにて再結晶を行な
ったところ５ｇのｐ−二トロフェニル−２゜３−ジメチ
ル−５−ピラゾロンの粗生成物が得られた。

■ｐ−ニトロフェニルー２，３−ツメチル−４−７ミ７
−５−ピラゾロン（化合物ｒ）の合成 ■テ得ｅ　ｐ−ニトロフェニル−２，３−７／チルー５
−ピラゾロン５．０ｇに酢酸３０ｚｌ、水１５１！１を
加え、更に塩酸３ｄを加え溶解した。５°Ｃに水冷しな
のち亜硝酸ナトリウム１゜５ｇを冷水８　ｚｉ’で溶解
したものを加え３０分放置したのち緑色結晶を濾取した
ところ３．７ｇの生成物が得られた。この生成物２ｇに
水３０　ｚｌを加え硫化ナトリウム０．１ｇを加え硫化
水素を緑色が消失するまで通じた。酢酸エチルで抽出し
、酢酸エチルを留去したのちメタ／−ルにて再結晶を行
なって約０．５ｇのｐ−二トロフェニル−２，３−ツメ
チル−４−７ミノー５−ピラゾロン（化合物■）を得た
。

融点：１５５〜１５７℃。

Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤＣｌ５．δ）　：　２．１５　（３Ｈ
，ｓ）、２．７５（５Ｈ，ｓ　）　、　７．６（７Ｈ，
ｍ）　。

実施例２ １−す７チルー２，３−ジメチル−４−７ミノー５−ピ
ラゾロン（化合物■）の合成 ■１−す７チルー３−メチル−５−ピラゾロンの合成 １−す７チルヒドラジン塩酸塩８．５　ｇとアセト酢酸
エチルエステル６．０ｇをエタ／−ル８０　ｍｌ　Ｉ：
水２０ｚＮｍＬ＊溶媒に加え、１２０”（：〜１４０℃
にて２時間加熱還流を行なった。溶媒を留去したのち酢
酸エチルを１５１１１加え数日間冷蔵にて放置したとこ
ろ約９．４ｇの１−す７チルー３−メチル−５−ピラゾ
ロンの粗生成物が得られた。

■１−す７チルー２，３−ジメチル−５−ピラゾロンの
合成 ■で得た１−す７チルー３−メチル−５−ピラゾロン３
．２ｘｌこｐ−）ルエンスルホン酸メチル５ｄを加え１
４０〜１６０℃の油浴上で８〜１０時間加熱攪拌を行な
った。１００℃前後に放冷しなのち２５％水酸化ナトリ
ウム溶液３５Ｒ１を加えた。後に濃塩酸を加えて中和し
たのち水５０１１１を加えてクロロホルム５０１１で２
回抽出を行なった。クロロホルム層を濃縮したのちシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル）
にて単一物質の約１．０ｇの１−す７チルー２，３−ジ
メチル−５−ピラゾロンが得られた。

■１−す７チルー２，３−ツメチル−４−アミノ−５−
ピラゾロン（化合物■）の合成■で得た１−す７チルー
２，３−ジメチル−５−ピラゾロン１．０ｇに酢酸６．
Ｏｗｌ、水３．Ｏ１１を加え溶解させた後、５℃以下に
水冷し瓢亜硝酸ナトリウム０．５ｇを冷水１．５ｘｌに
溶解したものを滴下して加え、析出した緑色結晶を乾燥
したところ０．６ｇの粗生成物が得られた。この生成分
０．６ｇをエタノール８　ｘＮ、水１．５ｚｊ！に溶解
させ１０℃以下に冷却した。ヒドロスルフィドナトリウ
ム２．０ｇを冷水８　ｘｌに溶解したものを加えて室温
で２時間放置したのちクロロホルムで抽出したところ単
一の油状の０．４４．の１−す７チルー２，３−ツメチ
ル−４７ミノー５−ピラゾロン（化合物■）が得られた
。

Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤＣム、δ）：　２．１５（３Ｈ，ｓ）
、２．８５（５Ｈ。

Ｓ）、８．０（４Ｈ，ａ＋）。

残渣をテトロヒドロ７ラン（ＴＨＦ）２０ｚＮに溶解し
、塩化水素を通し、生じた沈澱を濾取してＴＨＦにて洗
浄を行ない１−す７チル−２，３−ツメチル−４−アミ
７−５−ピラゾロン（化合物■）の塩酸塩を得た。収量
は０．４５ｇであった。

分解融、α：２３８℃。

実施例３ １−フェニル−２−エチル−３−メチル−４−７ミ／−
５−ピラゾロン（化合物■）の合成■１−フェニルー２
−エチル−３−メチル−５−ピラゾロンの合成 １−フェニル−３−メチル−５−ピラゾロン１０．４ｘ
ｌ：　ｐ−）ルエンスルホン酸エチル１８ｇを加えて、
油浴上で１３０℃、８時間加熱した。この反応混合物を
放冷した後に２５％水酸化ナトリウム溶液を加え中和し
た０次に水を５０１１１加えた後にクロロホルムで抽出
を行なった。クロロホルム層分離後濃縮を行ない、酢酸
エチルにて再結晶を行ない１−７二二ルー２−エチル−
３−メチル−５−ピラゾロンが５．０ｇ得られた。

■１−フェニルー２−エチルー３−メチル−４−ニトロ
ン−５−ピラゾロンの合成 ■で得た１−フェニル−２−エチル−３−メチル−５−
ピラゾロン２．０ｇに酢酸１２ｘｊ！と水６．Ｏ１ｌを
加え溶解したのち濃塩酸０．６ｘｌを加え２〜３℃に冷
却した。冷水３１！１の中に亜硝酸ナトリウム１ｇを溶
かし、これを少量ずつ滴下し、析呂した緑色結晶を濾別
した。

これをエーテルで洗浄し、乾燥して１．０ｇの１−フェ
ニル−２−エチル−３−メチル−４−ニトロソ−５−ピ
ラゾロンを得た。

■１−フェニルー２−エチルー３−メチル−４−アミ／
−５−ピラゾロン（化合物■）の合成 ■で得た１−フェニル−２−エチル−３−メチル−４−
ニトロソ−５−ピラゾロン１．０ｇにエタノール７．０
ｄ、水２．Ｏｗｌを加え冷却して１０℃以下とした。こ
の反応混液に２ｇのヒドロスルフィドナトリウムを３　
ｘｌの冷水に溶解し２０℃以下で３時間攪拌したのちク
ロロホルムで抽出した。濃縮し、０．８ｇの１−フェニ
ル−２−エチル−３−メチル−４−７ミノー５−ピラゾ
ロン（化合物■）を得た。

Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤＣも、δ）：　２．１５（３Ｈ，ｓ）
、２．８５（５Ｈ。

Ｓ）、８．０（４Ｈ，ａ）。

残渣をテトロヒドロ７ラン（ＴＨＦ）２０ｚｊ！に溶解
し、塩化水素を通し、生じた沈澱を濾取してＴＨＦにて
洗浄を行ない１−フェニル−２−エチル−３−メチル−
４−７ミノー５−ピラゾロン（化合物■）の塩酸塩ｏ、
ｓｇを得た。

分解融点：２１７℃。

実施例４ １−フェニル−２−プロピル−３−メチル−４−７ミ／
−５−ピラゾロン（化合物■）の合成 ■１７！ニルー２−プロピルー３−メチル−５−ピラゾ
ロンの合成 １−フェニル−３−メチル−５−ピラゾロン３．Ｏｇに
ｐ−）ルエンスルホン酸プロピル３．５ｇを加え、油浴
上で１８０℃１２時間加熱した。この反応混合物に水３
０１１を加えて放冷した。２５％水酸化ナトリウムを加
え中和した。この溶液をクロロホルムで抽出を行ないク
ロロホルム層を分離後、濃縮を行なった。酢酸エチルか
ら再結晶を行ない１−７二二ルー２−プロピル−３−メ
チル−５−１：’？ゾロンが２．０ｇ得られた。

■１−フェニルー２−プロピルー３−メチル−４−二ト
ロン−５−ピラゾロンの合成■で得た１−フェニル−２
−プロピル−３−メチル−５−ピラゾロン２．Ｏｇに酢
酸１２ｄと水６．０１１１を加え溶解したのち濃塩酸０
．６Ｒ１を加え、５℃以下に冷却した６次いで、亜硝酸
ナトリウム１ｇを冷水３．０ｘｌに溶解したのち滴下し
た。析出した結晶を濾別し、エーテルで洗浄ののち乾燥
して、０．８ｇの１−７二二ルー２−プロピル−３−メ
チル−４−ニトロソ−５−ピラゾロンを得た。

■１−フェニルー２−プロピルー３−メチル−４−７ミ
ノー５−ピラゾロン（化合物■）の合成 ■で得た１−フェニル−２−プロピル−３−メチル−４
−ニトロソ−５−ピラゾロン０゜８ｇにエタノール７　
ｘｌ、水２　ｚｌを加え冷却して１０℃以下とした。こ
の反応混液に２ｇのヒドロスルフィドナトリウムを３　
ｘｉの冷水に溶解し、２０℃以下で攪拌したのちクロロ
ホルムで抽出した。クロロホルム層を濃縮し、ｏ、ｓ＝
の１−フェニル−２−プロピル−３−メチル−４−７ミ
／−５−ピラゾロン（化合物■）を得た。

Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤＣム、δ）：　０，７５（３Ｈ，ｔ）
、１．１５（２Ｈ。

−）、２．１０（３Ｈ，ｓ）、３．２５（４Ｈ，＋ａ）
、７．４０（５Ｈ，ｍ）。

Ｆ［をテトロヒドロ７ラン（ＴＨＦ）２０ｔｊ！に溶解
し、塩化水素を通し、生じた沈澱を濾取しでＴＨＦにて
洗浄を行ない１−７　エニルー２−プロピルー３−メチ
ル−４−７ミノー５−ピラゾロン（化合物■）の塩酸塩
０．４ｇを得た。

分解融点：２１８℃。

比較例 ４ＡＡと本発明の４ＡＡ誘導体とによる酵素反応阻害の
比較 （１）試薬の調製 イ、基質緩衝液 ｐ−ヒドロキシベンゾイルフリン・ヨード塩１．ＯｍＭ
を含有するｐＨ８，２の５０ｍＭホウ酸４１衝液を調製
する。

口１色素液 １．４−アミノアンチピリン３０ｍＭを含有するｐＨ８
，２，５０ｍＭホウ酸緩衝液を調製する。

２、１−　フェニル−２−エチル−３−メチル−４−７
ミ／−５−ピラゾロン（化合物■）を３０ｍＭ含有する
ｐＨ８，２，５０ｍＭホウ酸ＩＩｉ衝液を調製する。

３、１−　フェニル−２−プロピル−３−メチル−４−
７ミ／−５−ピラゾロン（化合物■）を５０ｍＭ含有す
るｐＨ８，２，５０ｍＭホウ酸緩衝液を調製する。

ハ０反応停止液 ５０ωＭネオスチグミンを含有する水溶液を１！！製す
る。

二１発色液 過ヨウＩＭカリウム１０　ＩＩＩＭ、ロークロルベンゼ
ンスルホン酸２ａ＋Ｍを含有するｐＨ９，８，５０ａＭ
ホウ酸緩衝液を調製する。

（２）測定操作法 測定１（色素液の共存なしで＃素反応を行なった場合） 基質緩衝液１．Ｏｗｌを３本の試験管に分注し。

血清０．０５ｍ１’を加えよく混和し、３７℃で５分間
加温した０次いで、それぞれの試験管に反応停止液を０
．２１１１ずつ加え酵素反応を停止させた。３本の試験
管のうち１本目に色素液１を２本目の試験管に色素液２
を、３本目の試験管には色素液３をそれぞれ０．１１１
１ずつ加え、次いで発色液２．０ｚｌを加えて試薬ブラ
ンクを対照として試料液の吸光度を５００　ｎｏ＋で測
定した。

測定２（色素液の共存下で酵素反応を行なった場合） 基質緩衝液１．０ｘｌを３本の試験管に分注し、１本目
に色素液１を２本目の試験管に色素液２を、３本目の試
験管には色素液３をそれぞれ０．１１１ずつ加えた。こ
れら３本の試験管に測定１で眉いた血清０．０５ｚｊ！
を加えよく混和し、３７℃で５分間加温した６次いでそ
れぞれの試験管に反応停止ｆｉｏ、２ｚ１を加え更に発
色Ｗ１．２．０＊１を加えて発色を行ない試薬ブランク
を対照として試料液の吸光度を５００　ｎｍで測定した
。

（３）結果 測定１及び２で杼なった結果は、表１に示す通りである
。

衰１ ［・ ［， １・ ４ＡＡ共存下では、表１にあるように、コリンエステラ
ーゼへの阻害が認められた。ところが本発明の４ＡＡ誘
導体では、このような阻害は見られず、正確な測定が行
なわれることを確認した。

実施例５ コリンエステラーゼの測定 （１）試薬のｇ製 イ、基質緩衝液 ｐ−ヒドロキシベンゾイルコリン・ヨード塩１．０ａＭ
、　１　　フェニル−２−エチル−３−メチル−４−７
ミ／−５−ピラゾロン（化合物１１［）３．０ｍＭを含
有するｐＨ８，２の５０ａ＋Ｍホツ酸緩衝液を調製する
。

口３発色液 過ヨウ素酸カリウム１０１０１ＩＩネオスチグミン５０
Ｍ１ｐ−クロルベンゼンスルホン酸２＋ａＭを含有する
ｐＨ９，８の５０ｍＭホウ酸ｆｔＩｃ街液を調製する。

（２）測定揉作法 基質緩衝液１．Ｏｗｌを試験管に分注し、各段階に純水
で希釈した既知単位（Ｃｈ−Ｅオートセラ）　Ｆ−ンノ
テスト″により測定）血清０．０５ｚ１を加え、これら
を３７℃で５分間加温した。

次いで、それぞれの試験管に発色１２．Ｏｉｆを加えて
酵素反応を停止し、発色させた。試薬ブランクを対照と
して試料液の吸光度を５００　ｎａ＋で測定した。この
時の血清の希釈度と吸光度との関係を第１図に示す。

（３）結果 吸光度は、血清中コリンエステラーゼ活性に比例して増
大しており、本発明の４ＡＡ誘導体は、コリンエステラ
ーゼの定量にも有効に利用し得ることが認められた。

実施例６ 過酸化水素の定量 （１）反応試液のｌｉＩ製 １−フェニル−２−エチル−３−メチル−４−７ミ／−
５−ピラゾロン（化合物■）１゜ＯＬＩＩＭ、パーオキ
シダーゼ３０　Ｕ／ｘｉ、　フェノール５ｍＭを含有す
る５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７，８を調製した。過酸化
水素濃度をＯ１４，８，１２，１６，２０ｍＭの各々に
調製した。

（２）測定操作法 上記反応試液３．０ＩＬ１に過酸化水素溶液２０μｒを
加えて攪拌し、３７℃で５分間加温し瓢室温まで冷却し
、波長５００　ｎａ＋で各々の吸光度を測定した。過酸
化水素濃度を横細に、吸光度を縦軸にとり検１線を作成
した。この時の吸光度と過酸化水素濃度の関係を第２図
に示す。

（３）結果 吸光度は、過酸化水素濃度に比例して増大しており、本
発明の４ＡＡ誘導体は過酸化水素の定量に有効に利用で
きることが判明した実施例７ グルコースの測定 （１）反応試液の調製 パーオキシダーゼ０．０７Ｕ／ｍｌ、グルツースオキシ
ダーゼ１．７Ｕ／ｊ！、　　リン酸６．７ｍＭ、　　１
−フェニル−２−エチル−３−メチル−４−アミノ−５
−ピラゾロン（化合物■）　３．Ｏａ＋Ｍ　。

コール酸ナトリツム０，０８義Ｍ、７エ／−ル０゜０７
（Ｗ／Ｖ）％を含有する溶液を調製する。

（２）測定揉作法 上記反応試液３．Ｏｗｌに血清２０μｌを加え、３７℃
で２０分間度反応せ、室温下に１０分間放置後、試薬ブ
ランクを対照として５００ｎｒａで比色する。この時の
血清の希釈度と吸光度との関係を第３図に示す。

（３）結果 吸光度は、血清中のグルコースの量に比例して増大して
おり、本発明の４ＡＡ誘導体をグルコースの測定に適用
で軽ることが確認された。

実施例８ コレステロールの測定 （１）反応試液の調製 コレステロールオキシグーゼ０．３Ｕ／ｘｉ　、パーオ
キシダーゼ０．３Ｕ／ｄ、コール酸ナトリウム０．３ｍ
Ｍ、　１−７　ユニルー２−エチル−３−メチル−４−
７ミノー５−ピラゾロン（化合物［）　３．ＯｍＭ　、
非イオン系界面活性剤０．１７（Ｖ／Ｖ）％、Ｎ−ニチ
ルーＮ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−Ｘ
−）ルイノンナトリウム１．３ｍＭを含有する溶液を調
製する。

（２）測定操作法 上記反応試液３．Ｏｔｌに血清０．１ｄを加え、３７℃
で２０分間反応させ、室温下に１０分間放置後、試薬ブ
ランクを対照として５５５ｎｍで比色する。この時の血
清の希釈度と吸光度との関係を第４図に示す。

（３）結果 吸光度は、血清中のコレステロールの量に比例しており
、本発明の４ＡＡ誘導体はコレステロールの定量にも有
効に利用できることが判明した。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例５、第２ズは実施例６、第３図は実施例
７及びｔＪｔＪ４図は実施例８における血清試料の希釈
度と吸光度との関係を示す。 特許出願人　株式会社シ／テスト研究所乎１部 コリンニスチラーで’（ＩＵＡ） 卆２菌 過防ｔ−１４燻良（ｍＭ） ネろ膿 ダ）しコース４〔支（ｍｇ／ｄ込） ネｔ＋ｆａ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１はナフチル基、フェニル基又はニトロ基
   を有するフェニル基、Ｒ＿２は低級アルキル基を示す。 ただし、Ｒ＿１がフェニル基でかつＲ＿２がメチル基の
   場合を除く。］で表わされるアミノアンチピリン化合物
   、又はその塩。
2. （２）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１はナフチル基、フェニル基又はニトロ基
   を有するフェニル基、Ｒ＿２は低級アルキル基を示す。 ただし、Ｒ＿１がフェニル基でかつＲ＿２がメチル基の
   場合を除く。］で表わされるアミノアンチピリン化合物
   、又はその塩を用いることを特徴とする分析方法。