JPS62228296A - ペプチド又はペプチド誘導体の製造方法 - Google Patents
ペプチド又はペプチド誘導体の製造方法Info
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は、ペプチド又はペプチド誘導体の製造方法に関
するものである。
するものである。
(従来の技術)
近年、ペプチドに種々の生理活性が存在することが相つ
いで知られ、治療1診断などの医薬品としての重要性並
びに呈味物質としての重要性がますます増大しつつある
。それに伴いペプチド合成法の開発も活発である。現在
までに知られているペプチド合成法の主なものとしては
1例えばファルマシア、レビュー、3号、27〜47頁
(1980年)にまとめられているように、化学合成法
と酵素法の二つに大別することができる。その化学合成
法としては、アジド法、混合酸無水物法、活性エステル
法、カルボジイミド法でアミノ酸を逐次的に縮合する方
法とフラグメントで縮合させる方法などが代表的なもの
であるが、これらどの化学合成法においても、ラセミ化
及び副反応が起きやすく2反応時間が長く、末端アミノ
基を保護基にて反応前にあらかじめ保護しておく必要が
あるなど種々の問題がある。フラグメント縮合法の場合
。
いで知られ、治療1診断などの医薬品としての重要性並
びに呈味物質としての重要性がますます増大しつつある
。それに伴いペプチド合成法の開発も活発である。現在
までに知られているペプチド合成法の主なものとしては
1例えばファルマシア、レビュー、3号、27〜47頁
(1980年)にまとめられているように、化学合成法
と酵素法の二つに大別することができる。その化学合成
法としては、アジド法、混合酸無水物法、活性エステル
法、カルボジイミド法でアミノ酸を逐次的に縮合する方
法とフラグメントで縮合させる方法などが代表的なもの
であるが、これらどの化学合成法においても、ラセミ化
及び副反応が起きやすく2反応時間が長く、末端アミノ
基を保護基にて反応前にあらかじめ保護しておく必要が
あるなど種々の問題がある。フラグメント縮合法の場合
。
特にラセミ化が起こりやすいという重大な欠点を有する
ものである。
ものである。
一方、ラセミ化の生起を極力避ける方法として。
プロテアーゼを用いる酵素法が提案されているが。
この方法においてもやはり反応時間が長く、末端アミノ
基を保護基にて保護しておく必要があるなど、操作の煩
雑さを改良するには至らなかった。
基を保護基にて保護しておく必要があるなど、操作の煩
雑さを改良するには至らなかった。
さらに、このプロテアーゼを用いる酵素法では。
用いる酵素が本来ペプチド分解活性を有し、ているため
、生じたペプチドが合成と併行して分解され。
、生じたペプチドが合成と併行して分解され。
しばしば目的のペプチドが得られないという重大な欠点
を示すものであった。特に、オリゴペプチドの合成を適
用した場合には、一部のアミノ酸が欠落した目的外のペ
プチドが得られる重大な欠点が指摘されている〔ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー誌、256
巻、1301頁(1981年)〕。また、酵素法による
ペプチド合成法としては、プロテアーゼ法の他に、特定
なアミノ酸配列を有する単一ペプチドの合成のみを司る
特殊な酵素を用いる方法が知られている。この種の酵素
としては1例えば、グルタミン酸/システィン/グリシ
ンの配列であるトリペプチドを合成するグルタチオン合
成酵素(特開昭54−122793公報)や、デカペプ
チドであるグラミシジンSを合成するグラミシジンS合
成酵素(現代化学 1974年12月号12頁)などが
報告されている。しかし、これらの酵素は特殊な酵素で
あって。
を示すものであった。特に、オリゴペプチドの合成を適
用した場合には、一部のアミノ酸が欠落した目的外のペ
プチドが得られる重大な欠点が指摘されている〔ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー誌、256
巻、1301頁(1981年)〕。また、酵素法による
ペプチド合成法としては、プロテアーゼ法の他に、特定
なアミノ酸配列を有する単一ペプチドの合成のみを司る
特殊な酵素を用いる方法が知られている。この種の酵素
としては1例えば、グルタミン酸/システィン/グリシ
ンの配列であるトリペプチドを合成するグルタチオン合
成酵素(特開昭54−122793公報)や、デカペプ
チドであるグラミシジンSを合成するグラミシジンS合
成酵素(現代化学 1974年12月号12頁)などが
報告されている。しかし、これらの酵素は特殊な酵素で
あって。
この酵素によって合成しうるペプチドは、限定された一
種のみのペプチドであり、目的とする任意なペプチドを
合成することができない。このため。
種のみのペプチドであり、目的とする任意なペプチドを
合成することができない。このため。
この方法は一般的なペプチド合成法とはなり得ないのが
現状である。
現状である。
本発明者らは、ペプチドの有用性に鑑み、上記のような
欠点、特にラセミ化、副反応の生起2反応の煩雑さなど
の原因となり、同時に経済性を損なう保護基の必要性を
解決し、汎用性のある新規なペプチド合成法を提供する
ことを目的として鋭意研究を重ねた結果、アミノ酸を核
酸の一種であるtRNAに結合させる作用を存する酵素
で、従来まったくペプチド結合を形成する作用が知られ
ていなかったアミノアシル−t RNAシンテターゼに
、驚くべきことにペプチド合成能があることを見い出し
、この酵素を縮合剤として用いると前記の目的がすべて
達成されることを見い出し、先に特許出願した(特開昭
58−146539号公報や特開昭59−106298
号公報参照)。
欠点、特にラセミ化、副反応の生起2反応の煩雑さなど
の原因となり、同時に経済性を損なう保護基の必要性を
解決し、汎用性のある新規なペプチド合成法を提供する
ことを目的として鋭意研究を重ねた結果、アミノ酸を核
酸の一種であるtRNAに結合させる作用を存する酵素
で、従来まったくペプチド結合を形成する作用が知られ
ていなかったアミノアシル−t RNAシンテターゼに
、驚くべきことにペプチド合成能があることを見い出し
、この酵素を縮合剤として用いると前記の目的がすべて
達成されることを見い出し、先に特許出願した(特開昭
58−146539号公報や特開昭59−106298
号公報参照)。
(発明が解決しようとする問題点)
この特開昭58−146539号公報や特開昭59−1
06298号公報に記載されている方法は、縮合剤とし
て用いるアミノアシル−t RNAシンテターゼの至適
pHが8乃至9にあるため。
06298号公報に記載されている方法は、縮合剤とし
て用いるアミノアシル−t RNAシンテターゼの至適
pHが8乃至9にあるため。
反応のpHを9以上にすると、アミノアシル−LRNA
シンテターゼの触媒活性の低下が起り、また逆にpHを
8より低くすると、同じように触媒活性の低下が起こり
、単位時間当りのペプチド又はペプチド誘導体の生成量
が低くなる傾向があった。
シンテターゼの触媒活性の低下が起り、また逆にpHを
8より低くすると、同じように触媒活性の低下が起こり
、単位時間当りのペプチド又はペプチド誘導体の生成量
が低くなる傾向があった。
(問題点を解決するための手段)
そこで2本発明者らは上記の点を改良するためにさらに
鋭意研究を重ねた結果、驚くべきことにアミノアシル−
tRNAシンテターゼを水不溶性担体に固定化すると、
アミノアシル−t RNAシンテターゼの触媒能が高ま
り、特に高pH領域で反応速度が顕著に上界することを
見い出し2本発明を完成した。
鋭意研究を重ねた結果、驚くべきことにアミノアシル−
tRNAシンテターゼを水不溶性担体に固定化すると、
アミノアシル−t RNAシンテターゼの触媒能が高ま
り、特に高pH領域で反応速度が顕著に上界することを
見い出し2本発明を完成した。
すなわち2本発明は、α−アミノ酸と、アミノ酸又はア
ミノ酸から誘導されるアミノ酸誘導体とをアミノアシル
−tRNAシンテターゼの存在下で反応させてペプチド
又はペプチド誘導体を製造するに際し、アミノアシル−
tRNAシンテターゼとして水不溶性担体に固定化した
アミノアシル−t RNAシンテターゼを用いることを
特徴とするペプチド又はペプチド誘導体の製造方法であ
る。
ミノ酸から誘導されるアミノ酸誘導体とをアミノアシル
−tRNAシンテターゼの存在下で反応させてペプチド
又はペプチド誘導体を製造するに際し、アミノアシル−
tRNAシンテターゼとして水不溶性担体に固定化した
アミノアシル−t RNAシンテターゼを用いることを
特徴とするペプチド又はペプチド誘導体の製造方法であ
る。
本発明に使用されるアミノアシル−t RNAシンテタ
ーゼは、酵素分類6.1.1に属し1次式アミノ酸+A
TP+tRNA− アミノアシル−t RNA+AMP+ビロリン酸の反応
を触媒する酵素であり1例えば、ウサギ。
ーゼは、酵素分類6.1.1に属し1次式アミノ酸+A
TP+tRNA− アミノアシル−t RNA+AMP+ビロリン酸の反応
を触媒する酵素であり1例えば、ウサギ。
ウマ、ウシ、ラット、ニワトリ、ヘビなどの動物組織よ
り得られるもの、イネ、イモ、トマトなどの植物組織よ
り得られるもの、カビ、酵母、キノコ、細菌、放線菌な
どの微生物及び藻類より得られるものなどがあげられる
。なかでも、酵素の取得が容易であることから、微生物
より得られるものが好ましく、さらに酵素の安定性から
バチルス・ステアロサーモフィルス、サーマス・サーモ
フィルス、サーマス・フラバス、りdストリジウム・サ
ーモアセチカム、サーマス・アクアティカスなどの耐熱
性細菌より得られるアミノアシル−tRNAシンテター
ゼが最適である。
り得られるもの、イネ、イモ、トマトなどの植物組織よ
り得られるもの、カビ、酵母、キノコ、細菌、放線菌な
どの微生物及び藻類より得られるものなどがあげられる
。なかでも、酵素の取得が容易であることから、微生物
より得られるものが好ましく、さらに酵素の安定性から
バチルス・ステアロサーモフィルス、サーマス・サーモ
フィルス、サーマス・フラバス、りdストリジウム・サ
ーモアセチカム、サーマス・アクアティカスなどの耐熱
性細菌より得られるアミノアシル−tRNAシンテター
ゼが最適である。
これら各種のアミノアシル−t RNAシンテターゼは
1種々のα−アミノ酸に特異性のあるものが用いられ2
例えば、チロシンに特異性のあるものとしてはチロシル
−tRNAシンテターゼが。
1種々のα−アミノ酸に特異性のあるものが用いられ2
例えば、チロシンに特異性のあるものとしてはチロシル
−tRNAシンテターゼが。
また、ロイシンに特異性のあるものとしてはロイシル−
t RNAシンテターゼが、さらにバリンに特異性のあ
るものとしてはバリル−tRNAシンテターゼ、その他
、イソフタル酸t RNAシンテターゼ、フェニルアラ
ニル−tRNAシンテターゼ、アラニル−tRNAシン
テターゼ、グルタミニルーtRNAシンテターゼ、アス
パラギニル−1RNAシンテターゼ、メチオニル−tR
NAシンテターゼ、ヒスチジル−t RNAシンテター
ゼ。
t RNAシンテターゼが、さらにバリンに特異性のあ
るものとしてはバリル−tRNAシンテターゼ、その他
、イソフタル酸t RNAシンテターゼ、フェニルアラ
ニル−tRNAシンテターゼ、アラニル−tRNAシン
テターゼ、グルタミニルーtRNAシンテターゼ、アス
パラギニル−1RNAシンテターゼ、メチオニル−tR
NAシンテターゼ、ヒスチジル−t RNAシンテター
ゼ。
リジル−t RNAシンテターゼ、トレオニルーt1?
NAシンテターゼ、セリル−t RNAシンテターゼ、
アスパラチル−t RNAシンテターゼ、グルタミル−
tRNAシンテターゼ、システイニル−tRNAシンテ
ターゼ、プロリル−t RNAシンテターゼ、グリシル
−tRNAシンテターゼ。
NAシンテターゼ、セリル−t RNAシンテターゼ、
アスパラチル−t RNAシンテターゼ、グルタミル−
tRNAシンテターゼ、システイニル−tRNAシンテ
ターゼ、プロリル−t RNAシンテターゼ、グリシル
−tRNAシンテターゼ。
アルギニル−t RNAシンテターゼ、トリプトファニ
ル−tRNAシンテターゼなどが具体例としてあげられ
る。
ル−tRNAシンテターゼなどが具体例としてあげられ
る。
これらの各種アミノアシル−t RNAシンテターゼは
、上記組織又は細胞をホモジナイザーやダイノミルなと
で破砕したのち1例えば、バイオケミストリー誌、13
巻、2307頁(1974年)に記載されているように
、DEAE−セルロースカラムクロマトグラフィー、ヒ
ドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィーなどのク
ロマトグラフィー及び硫酸アンモニウムによる分別沈澱
法など。
、上記組織又は細胞をホモジナイザーやダイノミルなと
で破砕したのち1例えば、バイオケミストリー誌、13
巻、2307頁(1974年)に記載されているように
、DEAE−セルロースカラムクロマトグラフィー、ヒ
ドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィーなどのク
ロマトグラフィー及び硫酸アンモニウムによる分別沈澱
法など。
通常の酵素精製法を用いて精製することによって得るこ
とができる。
とができる。
本発明では、これらアミノアシル−t RNAシンテタ
ーゼは、水不溶性担体に固定化することが必要である。
ーゼは、水不溶性担体に固定化することが必要である。
本発明にいう水不溶性担体とは1本質的に、水に不溶性
の代合物をいい、そのような化合物としては、たとえば
セルロース、デキストラン、アガロース、デンプンなど
の多tJM類の誘導体、ポリ酢酸セルロース、ポリビニ
ルアルコール誘導体、ポリスチレン、ポリプロピレン、
ポリエチレン、ポリビニルクロライド、ポリ (メチル
メタクリル酸)エステル、ポリブテン、ポリビニリデン
クロライド、ポリアクリロニトリル、ポリメタクリル酸
。
の代合物をいい、そのような化合物としては、たとえば
セルロース、デキストラン、アガロース、デンプンなど
の多tJM類の誘導体、ポリ酢酸セルロース、ポリビニ
ルアルコール誘導体、ポリスチレン、ポリプロピレン、
ポリエチレン、ポリビニルクロライド、ポリ (メチル
メタクリル酸)エステル、ポリブテン、ポリビニリデン
クロライド、ポリアクリロニトリル、ポリメタクリル酸
。
ポリアクリル酸、ポリアミノスチレン、ポリブタジェン
、ポリイソプレン、ポリマレイン酸モノエステル、架橋
ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニ
ルアミン、ポリ (ジアルキルアミンエチルメタクリル
酸エステル)、ポリ (ジアルキルアミノメチルスチレ
ン)、ポリ (ビニルピリジン)、ポリ (ビニルピロ
リドン)、ポリアクリル酸無水物、ポリメタクリル酸無
水物、ポリマレイン酸無水物、ポリメタクリ口ニトリル
、ポリ(トリフルオロエチレン)、ポリ (テトラフル
オロエチレン)、ポリ (ジビニルベンゼン)、ポリ
(α−メチルスチレン)、ポリ−(N−ビニルアミン)
、ポリ (テトラメチレングリコールジビニルエーテル
)、ポリビニルスルホン、ポリビニルスルホオキシド、
ポリアクロレイン、ポリメチルビニルケトンなどの不飽
和炭素を含む単量体からなる重合体、ポリフェニレンオ
キシド、ポリメチレンオキシド、ポリエチレンオキシド
、ポリテトラメチレンオキシドなどのポリエーテル類、
ポリアラニン、ポリフェニルアラニンなどのポリペプチ
ド類、ナイロン−3,ナイロン−4,ナイロン−5,ナ
イロン−6、ナイロン−7、ナイロン−1),ナイロン
−12,ナイロン−6,6,ナイロン−6,10,ポリ
(…−フェニレンーイソフタラミド)、ポリ (P−フ
ェニレンテレフタラミド)などのポリアミド、テレフタ
ル酸、イソフタル酸。
、ポリイソプレン、ポリマレイン酸モノエステル、架橋
ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニ
ルアミン、ポリ (ジアルキルアミンエチルメタクリル
酸エステル)、ポリ (ジアルキルアミノメチルスチレ
ン)、ポリ (ビニルピリジン)、ポリ (ビニルピロ
リドン)、ポリアクリル酸無水物、ポリメタクリル酸無
水物、ポリマレイン酸無水物、ポリメタクリ口ニトリル
、ポリ(トリフルオロエチレン)、ポリ (テトラフル
オロエチレン)、ポリ (ジビニルベンゼン)、ポリ
(α−メチルスチレン)、ポリ−(N−ビニルアミン)
、ポリ (テトラメチレングリコールジビニルエーテル
)、ポリビニルスルホン、ポリビニルスルホオキシド、
ポリアクロレイン、ポリメチルビニルケトンなどの不飽
和炭素を含む単量体からなる重合体、ポリフェニレンオ
キシド、ポリメチレンオキシド、ポリエチレンオキシド
、ポリテトラメチレンオキシドなどのポリエーテル類、
ポリアラニン、ポリフェニルアラニンなどのポリペプチ
ド類、ナイロン−3,ナイロン−4,ナイロン−5,ナ
イロン−6、ナイロン−7、ナイロン−1),ナイロン
−12,ナイロン−6,6,ナイロン−6,10,ポリ
(…−フェニレンーイソフタラミド)、ポリ (P−フ
ェニレンテレフタラミド)などのポリアミド、テレフタ
ル酸、イソフタル酸。
アジピン酸、マレイン酸、フマル酸、トリメリット酸な
どのポリカルボン酸と、エチレングリコール、プロピレ
ングリコール、ブチレングリコール。
どのポリカルボン酸と、エチレングリコール、プロピレ
ングリコール、ブチレングリコール。
ペンタエリスリトール、ビスフェノール−Aなどのポリ
オールとから誘導されるポリエステル類。
オールとから誘導されるポリエステル類。
グリコール酸、乳酸、ヒドロキシヒバリン酸などから誘
導されるポリエステル、ジメチルポリシロキサン、メチ
ルフェニルポリシロキサン、メチルビニルポリシロキサ
ン、シアノアルキルメチルポリシロキサン、フルオロア
ルキルメチルポリシロキサンなどのシリコンゴム、トル
エンジイソアナート、キシレンジイソシアナート、フェ
ニレンジイソシアナート、エチレンジイソシアナート、
ジフェニルメタンジイソシアナート、トルエントリイソ
シアナートなどのポリイソシアナートと、ポリエチレン
グリコール、ポリプロピレングリコール、両端にOHを
有するポリエステルなどのポリオールとから誘導される
ポリウレタン類2 フェノール−ホルムアルデヒド樹脂
、キシレン−ホルムアルデヒド樹脂、尿素−ホルムアル
デヒド樹脂。
導されるポリエステル、ジメチルポリシロキサン、メチ
ルフェニルポリシロキサン、メチルビニルポリシロキサ
ン、シアノアルキルメチルポリシロキサン、フルオロア
ルキルメチルポリシロキサンなどのシリコンゴム、トル
エンジイソアナート、キシレンジイソシアナート、フェ
ニレンジイソシアナート、エチレンジイソシアナート、
ジフェニルメタンジイソシアナート、トルエントリイソ
シアナートなどのポリイソシアナートと、ポリエチレン
グリコール、ポリプロピレングリコール、両端にOHを
有するポリエステルなどのポリオールとから誘導される
ポリウレタン類2 フェノール−ホルムアルデヒド樹脂
、キシレン−ホルムアルデヒド樹脂、尿素−ホルムアル
デヒド樹脂。
メラミン−ホルムアルデヒド樹脂などのホルムアルデヒ
ド樹脂、ポリイミド、ポリベンツイミダゾール、ポリチ
アゾールなどの4員環を含むポリマー、ポリカーボネー
ト、ポリスルホンなどの合成ポリマー類、ガラス、アス
ベスト、クレイ3マイカ、ヒドロキシアパタイト、活性
炭、シリカゲル。
ド樹脂、ポリイミド、ポリベンツイミダゾール、ポリチ
アゾールなどの4員環を含むポリマー、ポリカーボネー
ト、ポリスルホンなどの合成ポリマー類、ガラス、アス
ベスト、クレイ3マイカ、ヒドロキシアパタイト、活性
炭、シリカゲル。
アルミナなどの無機物の誘導体及びポリフォスフアゼン
のような合成無機ポリマーなどがあげられる。
のような合成無機ポリマーなどがあげられる。
本発明において、固定化アミノアシル−tRNAシンテ
ターゼを得るには、前記のアミノアシル−t RNAシ
ンテターゼを水不溶性担体に結合させるか、又は吸着さ
せればよい。アミノアシル−t RNAシンテターゼを
水不溶性担体に結合させるには、たとえば千畑一部著「
固定化酵素」講談社(1975)に記載されているよう
な従来より公知の共有結合法や1.イオン結合法を採用
することができる。また、吸着させるには、同じく物理
的吸着法や包括法を採用することができる。
ターゼを得るには、前記のアミノアシル−t RNAシ
ンテターゼを水不溶性担体に結合させるか、又は吸着さ
せればよい。アミノアシル−t RNAシンテターゼを
水不溶性担体に結合させるには、たとえば千畑一部著「
固定化酵素」講談社(1975)に記載されているよう
な従来より公知の共有結合法や1.イオン結合法を採用
することができる。また、吸着させるには、同じく物理
的吸着法や包括法を採用することができる。
共有結合法としては、たとえばカルボキシル基を含む担
体をアジド、クロリド、カルボジイミド。
体をアジド、クロリド、カルボジイミド。
イソシアナートなどの誘導体にしたのち、アミノアシル
−tRNAシンテターゼと結合する方法。
−tRNAシンテターゼと結合する方法。
ハロゲンのような活性な脱離基を有する水不溶性の担体
にアシノアシル−t RNAシンテターゼを結合する方
法、水酸基を有する水不溶性担体をハロゲン化シアンで
処理したのち、アミノアシル−tRNAシンテターゼを
結合させる方法、芳香族アミノ基を有する水不溶性担体
をジアゾニウム塩とし、これとアミノアシル−t RN
Aシンテターゼとジアゾカップリングさせる方法、トル
エンジイソシアナート、エピクロルヒドリン、グルタル
アルデヒド、2−アミノ4.6−ジクロロ−8−トリア
ジンなどの少くとも2官能性の試薬を用いて、水不溶性
担体とアミノアシル−tRNAシンテターゼを結合させ
る方法などがあげられる。
にアシノアシル−t RNAシンテターゼを結合する方
法、水酸基を有する水不溶性担体をハロゲン化シアンで
処理したのち、アミノアシル−tRNAシンテターゼを
結合させる方法、芳香族アミノ基を有する水不溶性担体
をジアゾニウム塩とし、これとアミノアシル−t RN
Aシンテターゼとジアゾカップリングさせる方法、トル
エンジイソシアナート、エピクロルヒドリン、グルタル
アルデヒド、2−アミノ4.6−ジクロロ−8−トリア
ジンなどの少くとも2官能性の試薬を用いて、水不溶性
担体とアミノアシル−tRNAシンテターゼを結合させ
る方法などがあげられる。
イオン結合法としては、たとえば、カルボキシメチルセ
ルロース、ジエチルアミノエチルセファデックス(ファ
ルマシア社)、ダウエックス−50(ダウケミカル社)
などのイオン交換体にアミノアシル−tRNAシンテタ
ーゼをイオン的に結合させる方法があげられる。
ルロース、ジエチルアミノエチルセファデックス(ファ
ルマシア社)、ダウエックス−50(ダウケミカル社)
などのイオン交換体にアミノアシル−tRNAシンテタ
ーゼをイオン的に結合させる方法があげられる。
また、物理的吸着法としては、たとえば、活性炭、アル
ミナ、シリカゲルなどにアミノアシル−tRNAシンテ
ターゼを吸着させる方法があげられる。
ミナ、シリカゲルなどにアミノアシル−tRNAシンテ
ターゼを吸着させる方法があげられる。
さらに包括法としては、たとえば、架橋ポリアクリルア
ミドゲル、ポリビニルアルコールなどの高分子ゲルの格
子の中又はナイロン、ポリエステル、ポリスチレン、コ
ロジオンなどの皮膜中にアミノアシル−tRNAシンテ
ターゼを包括する方法があげられる。
ミドゲル、ポリビニルアルコールなどの高分子ゲルの格
子の中又はナイロン、ポリエステル、ポリスチレン、コ
ロジオンなどの皮膜中にアミノアシル−tRNAシンテ
ターゼを包括する方法があげられる。
これらの固定化方法は、アミノアシル−tRNAシンテ
ターゼの水不溶液と水不溶性担体又はその前駆体とを必
要な、らば重合開始前に混合処理する公知の方法によっ
ても行うことができる。
ターゼの水不溶液と水不溶性担体又はその前駆体とを必
要な、らば重合開始前に混合処理する公知の方法によっ
ても行うことができる。
本発明に用いられる固定化アミノアシル−tRNAシン
テターゼは、前記したごとく2種々の方法によって製造
しうるが、アミノアシル−t RNAシンテターゼと水
不溶性担体との結合力が大きく、シたがって活性の持続
性がすぐれており、たとえば、長期間にわたって安定し
てペプチド又はペプチド誘導体の合成反応を実施しうる
などの点で共有結合法によって製造することが特に望ま
しい。
テターゼは、前記したごとく2種々の方法によって製造
しうるが、アミノアシル−t RNAシンテターゼと水
不溶性担体との結合力が大きく、シたがって活性の持続
性がすぐれており、たとえば、長期間にわたって安定し
てペプチド又はペプチド誘導体の合成反応を実施しうる
などの点で共有結合法によって製造することが特に望ま
しい。
本発明に用いられるα−アミノ酸としては9例えば、チ
ロシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、フェニル
アラニン、メチオニン、リジン。
ロシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、フェニル
アラニン、メチオニン、リジン。
セリン9バリン、アスパラギン、アスパラギン酸。
グリシン、グルタミン、グルタミン酸、システィン、ト
レオニン、トリプトファン、ヒスチジン。
レオニン、トリプトファン、ヒスチジン。
プロリン、アルギニンなどのアミノ酸があげられ。
L体、D体のいずれでもよい。また、α−アミノ酸と反
応させるアミノ酸又はアミノ酸誘導体としては1例えば
、グリシン、アラニン、ロイシン。
応させるアミノ酸又はアミノ酸誘導体としては1例えば
、グリシン、アラニン、ロイシン。
イソロイシン、フェニルアラニン、グルタミン。
システィン、チロシン、アルギニン、バリン、リジン、
ヒスチジン、アスパラギン酸、メチオニン。
ヒスチジン、アスパラギン酸、メチオニン。
トリプトファン、トレオニンなどのα−アミノ酸。
β−アラニン、β−アミノイソ醋酸などのβ−アミノ酸
、クレアチンなどの含窒素γ−アミノ酸。
、クレアチンなどの含窒素γ−アミノ酸。
ピペリジン酸などのT−アミノ酸、ε−アミノカプロン
酸なとのε−アミノ酸などの各種アミノ酸又はこれら各
種アミノ酸のエステル、チオエステル、アミド、ヒドロ
キサミドなどがあげられるが。
酸なとのε−アミノ酸などの各種アミノ酸又はこれら各
種アミノ酸のエステル、チオエステル、アミド、ヒドロ
キサミドなどがあげられるが。
アミノ基が遊離の形であるアミノ酸誘導体であれば、上
記例示化合物に限定されるものではない。
記例示化合物に限定されるものではない。
そのエステルとしては1例えば、メチル、エチル。
プロピル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジルなどの
単純な炭化水素系のエステルから、tRNAの3’ −
OHで上記アミノ酸がエステル化したものまで2種々の
エステルを用いることができる。
単純な炭化水素系のエステルから、tRNAの3’ −
OHで上記アミノ酸がエステル化したものまで2種々の
エステルを用いることができる。
また、アミドとしては、遊離のアミドの他1例えば、異
種あるいは同種のアミノ酸がアミド結合したオリゴペプ
チドやポリペプチドを用いることもできる。このオリゴ
ペプチドやポリペプチドがさらにエステル、チオエステ
ル、ヒドロキサミド。
種あるいは同種のアミノ酸がアミド結合したオリゴペプ
チドやポリペプチドを用いることもできる。このオリゴ
ペプチドやポリペプチドがさらにエステル、チオエステ
ル、ヒドロキサミド。
エーテル化したものを用いることも可能である。
本発明によれば、α−アミノ酸、アミノ酸又はアミノ酸
誘導体、水不溶性担体に固定化したアミノアシル−tR
NAシンテターゼ(以下固定化アミノアシル−tRNA
シンテターゼという。)及びヌクレオシド三リン酸を混
合して液相媒体中で反応させることによってペプチド又
はペプチド誘導体を製造することができる。このヌクレ
オシド三リン酸は2反応を進めるうえでのエネルギー源
となる化合物であり、そのような具体例としては。
誘導体、水不溶性担体に固定化したアミノアシル−tR
NAシンテターゼ(以下固定化アミノアシル−tRNA
シンテターゼという。)及びヌクレオシド三リン酸を混
合して液相媒体中で反応させることによってペプチド又
はペプチド誘導体を製造することができる。このヌクレ
オシド三リン酸は2反応を進めるうえでのエネルギー源
となる化合物であり、そのような具体例としては。
アデノシン三リン酸、 2′−デオキシアデノシン三リ
ン酸、2’、3’−ジデオキシアデノシン三リン酸、3
′−デオキシアデノシン三すン酸、アデノシン三リン酸
のβ又はT−チオ類縁体、あるいはアデニン環に置換基
の入ったアデノシン三リン酸があげられる。このとき、
これら原料の添加順序はいかなる順序であってもよく、
α−アミノ酸。
ン酸、2’、3’−ジデオキシアデノシン三リン酸、3
′−デオキシアデノシン三すン酸、アデノシン三リン酸
のβ又はT−チオ類縁体、あるいはアデニン環に置換基
の入ったアデノシン三リン酸があげられる。このとき、
これら原料の添加順序はいかなる順序であってもよく、
α−アミノ酸。
アミノ酸又はアミノ酸誘導体及びヌクレオシド三リン酸
を含む水性媒体中に固定化アミノアシル−tRNAシン
テターゼを添加してもよく、あるいは固定化アミノアシ
ル−tRNAシンテターゼを含有する溶液にα−アミノ
酸、アミノ酸又はアミ□ ノMHM4体及びヌクレオシ
ド三リン酸を添加してもよい。また、これら原料の濃度
としては、特に限定されるものではないが、α−アミノ
酸の濃度としては0.1mM以上が適当で、1mM以上
が好ましい。そして、ヌクレオシド三リン酸をα−アミ
ノ酸に対して1ないし15当量添加し、固定化アミノア
シル−LRNAシンテターゼを、α−アミノ酸に対し1
/1ないしl/10g当量、好ましくはl/10”ない
し1/10g当量の?震度で。
を含む水性媒体中に固定化アミノアシル−tRNAシン
テターゼを添加してもよく、あるいは固定化アミノアシ
ル−tRNAシンテターゼを含有する溶液にα−アミノ
酸、アミノ酸又はアミ□ ノMHM4体及びヌクレオシ
ド三リン酸を添加してもよい。また、これら原料の濃度
としては、特に限定されるものではないが、α−アミノ
酸の濃度としては0.1mM以上が適当で、1mM以上
が好ましい。そして、ヌクレオシド三リン酸をα−アミ
ノ酸に対して1ないし15当量添加し、固定化アミノア
シル−LRNAシンテターゼを、α−アミノ酸に対し1
/1ないしl/10g当量、好ましくはl/10”ない
し1/10g当量の?震度で。
アミノ酸又はアミノ酸誘導体を2通常10mMないしI
OMの範囲で添加することが好ましい。
OMの範囲で添加することが好ましい。
このときに反応に用いる媒体としては2本法が酵素を触
媒とする反応であるため、主成分として水を含有する溶
媒が選ばれる。また、酵素の活性が維持できる限度で水
溶性の有機溶媒を添加してもよい。水溶性の有機溶媒と
しては1例えば、メタノール、エタノール、アセトニト
リル、ジオキサン、テトラハイドロフラン、N、N−ジ
メチルアセトアミド、N−メチルピロリドン、ジメチル
スルホキシドなどがあげられる。このような有機溶媒の
添加は、原料の一部が水に難溶性である場合、特に有効
である。このときに1反応を円滑に進行させること1あ
るいは酵素の失活を防ぐことを主目的として3反応系に
マグネシウム、マンガンなどの二価カチオン、メルカプ
トエタノール。
媒とする反応であるため、主成分として水を含有する溶
媒が選ばれる。また、酵素の活性が維持できる限度で水
溶性の有機溶媒を添加してもよい。水溶性の有機溶媒と
しては1例えば、メタノール、エタノール、アセトニト
リル、ジオキサン、テトラハイドロフラン、N、N−ジ
メチルアセトアミド、N−メチルピロリドン、ジメチル
スルホキシドなどがあげられる。このような有機溶媒の
添加は、原料の一部が水に難溶性である場合、特に有効
である。このときに1反応を円滑に進行させること1あ
るいは酵素の失活を防ぐことを主目的として3反応系に
マグネシウム、マンガンなどの二価カチオン、メルカプ
トエタノール。
ジチオスレイトールなどのスルフヒドリル剤、ピロホス
ファターゼを、単独又は混合して添加してもよい。各添
加剤の好適な濃度しては、二価カチオン0.01mM〜
500mM、スルフヒドリル剤0.001mM〜100
mM、 ピロホスファターゼ0、OOl lニフト/m
1〜 l OOユニフト/m 1 であり。
ファターゼを、単独又は混合して添加してもよい。各添
加剤の好適な濃度しては、二価カチオン0.01mM〜
500mM、スルフヒドリル剤0.001mM〜100
mM、 ピロホスファターゼ0、OOl lニフト/m
1〜 l OOユニフト/m 1 であり。
最適な濃度としては、それぞれ二価カチオン0.1mM
〜10mM、 スルフヒドリル剤0.01mM〜1mM
、 ピロホスファターゼ1)ニフト/ m (1〜10
1二・−) ) / m 1である。また、酵素の活性
を維持するため、溶媒に緩衝液を添加することが好まし
い。
〜10mM、 スルフヒドリル剤0.01mM〜1mM
、 ピロホスファターゼ1)ニフト/ m (1〜10
1二・−) ) / m 1である。また、酵素の活性
を維持するため、溶媒に緩衝液を添加することが好まし
い。
その緩衝液のン農度としては100mM以下が好ましい
。この緩衝液としては、α−アミノ酸、アミノ酸又はア
ミノ酸誘導体、固定化アミノアシル−tRNAシンテタ
ーゼ及びヌクレオシド三リン酸が溶解し、しかも酵素活
性を維持し、所望のp IIが得られ、かつ、副反応を
起こさないものであれば、いかなるものを使用してもよ
い。そのような具体例としては、ヘペス緩新液、トリエ
タノールアミン緩衝液、マレート緩衝液、リン酸緩衝液
。
。この緩衝液としては、α−アミノ酸、アミノ酸又はア
ミノ酸誘導体、固定化アミノアシル−tRNAシンテタ
ーゼ及びヌクレオシド三リン酸が溶解し、しかも酵素活
性を維持し、所望のp IIが得られ、かつ、副反応を
起こさないものであれば、いかなるものを使用してもよ
い。そのような具体例としては、ヘペス緩新液、トリエ
タノールアミン緩衝液、マレート緩衝液、リン酸緩衝液
。
ビシン緩新液、エツプス緩新液、ホウ酸緩衝液。
炭酸ナトリウム緩衝液、炭酸水素ナトリウム緩衝液、ホ
ウ酸ナトリウム緩新液、水酸化ナトリウム緩衝液などが
あげられる。
ウ酸ナトリウム緩新液、水酸化ナトリウム緩衝液などが
あげられる。
また、ペプチド又はペプチド誘導体を製造する際の反応
液のpHは、触媒として使用されるアミノアシル−t
RNAシンテターゼが、水不溶性担体に固定化されてい
ない場合には通常その反応の至適pHを8ないし9付近
に持つが、固定化アミノアシル−tRNAシンテターゼ
では9以上のアルカリ側で触媒活性が大幅に改良される
ため、前述の緩衝液で9以上好ましくはりないし12に
保つことができる。また1反応の温度としては、固定化
アミノアシル−tRNAシンテターゼの触媒活性が維持
できる限り特に限定されないが2通常0〜70℃が好ま
しく、最適には20〜60“Cで行うことが好ましい。
液のpHは、触媒として使用されるアミノアシル−t
RNAシンテターゼが、水不溶性担体に固定化されてい
ない場合には通常その反応の至適pHを8ないし9付近
に持つが、固定化アミノアシル−tRNAシンテターゼ
では9以上のアルカリ側で触媒活性が大幅に改良される
ため、前述の緩衝液で9以上好ましくはりないし12に
保つことができる。また1反応の温度としては、固定化
アミノアシル−tRNAシンテターゼの触媒活性が維持
できる限り特に限定されないが2通常0〜70℃が好ま
しく、最適には20〜60“Cで行うことが好ましい。
上記条件でペプチド化反応は数秒から数日で完結し、目
的のペプチド又はペプチド誘導体を得ることができる。
的のペプチド又はペプチド誘導体を得ることができる。
(実施例)
以下1本発明を実施例により具体的に説明する。
なお、実施例中のアミノアシル−tRNAシンテターゼ
活性は次のようにして求めたものである。
活性は次のようにして求めたものである。
すなわち、167mM−ヘペス緩衝ン夜、17mM−ア
デノシン三リン酸・ニナトリウム、17mM=塩化マグ
ネシウム、5mM−ジチオスレイトール、1M−ヒドロ
キシルアミン及び5mM−α−アミノ酸の存在下に40
℃で10分間反応させたとき、lnmdeのα−アミノ
酸ヒドロキサメートを形成する能力を1ユニツトとした
。
デノシン三リン酸・ニナトリウム、17mM=塩化マグ
ネシウム、5mM−ジチオスレイトール、1M−ヒドロ
キシルアミン及び5mM−α−アミノ酸の存在下に40
℃で10分間反応させたとき、lnmdeのα−アミノ
酸ヒドロキサメートを形成する能力を1ユニツトとした
。
参考例1
バチルス・ステアロサーモフィルスUK788(微工研
寄 第5141号)の菌体6 kgを、2倍量の100
mMトリス・塩酸緩衝液(pH7,5)に懸濁し、ダイ
ノミルを用いて細胞を破砕後、遠心分離により不溶物を
除去し、チロシンに特異的なチロシル−1RNAシンテ
ターゼを含む粗抽出液を得た。あらかじめ5mMメルカ
プトエタノール、2mMエチレンジアミン四酢酸ナトリ
ウム及び0.1mMホスホフェニルスルホニルフルオリ
ドを含む50mM)リス緩衝液(pH7,5)で平衡化
したマードレックスゲルブルーA(アミコン社製)を充
填したカラムに、上記の粗抽出液を通し。
寄 第5141号)の菌体6 kgを、2倍量の100
mMトリス・塩酸緩衝液(pH7,5)に懸濁し、ダイ
ノミルを用いて細胞を破砕後、遠心分離により不溶物を
除去し、チロシンに特異的なチロシル−1RNAシンテ
ターゼを含む粗抽出液を得た。あらかじめ5mMメルカ
プトエタノール、2mMエチレンジアミン四酢酸ナトリ
ウム及び0.1mMホスホフェニルスルホニルフルオリ
ドを含む50mM)リス緩衝液(pH7,5)で平衡化
したマードレックスゲルブルーA(アミコン社製)を充
填したカラムに、上記の粗抽出液を通し。
塩化カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で、線速度60
cm・ト1で溶出せしめると、チロシル−tRNAシン
テターゼが溶出した。この区分を集め。
cm・ト1で溶出せしめると、チロシル−tRNAシン
テターゼが溶出した。この区分を集め。
濃縮、脱塩を行った結果、約70%の収率でチロシンに
特異的なチロシル−tRNARNAシンテターゼ粗酵素
液1.400,000ユニツトを得た。上記12作をす
べて4℃で行った。
特異的なチロシル−tRNARNAシンテターゼ粗酵素
液1.400,000ユニツトを得た。上記12作をす
べて4℃で行った。
参考例2
サツカロミセス・セルビシアエαS288C1000k
gをダイノミルで細胞破砕後、得られた粗抽出液を硫酸
アンモニウム分画、DEAE−−&ルロースクロマトグ
ラフィー、リン酸セルロース(ワットマン社製)クロマ
トグラフィー、DEAE−セファセル(ファルマシア社
製)クロマトグラフィー、ウルトロゲルACA34クロ
マトグラフイー及びCM−セルロース(ワットマン社製
)クロマトグラフィーで、ロイシンに特異的なロイシル
−t RNAシンテターゼを3.2g (5,000
,000ユニツト)を得た。
gをダイノミルで細胞破砕後、得られた粗抽出液を硫酸
アンモニウム分画、DEAE−−&ルロースクロマトグ
ラフィー、リン酸セルロース(ワットマン社製)クロマ
トグラフィー、DEAE−セファセル(ファルマシア社
製)クロマトグラフィー、ウルトロゲルACA34クロ
マトグラフイー及びCM−セルロース(ワットマン社製
)クロマトグラフィーで、ロイシンに特異的なロイシル
−t RNAシンテターゼを3.2g (5,000
,000ユニツト)を得た。
実施例1
参考例1で得た比活性6,6001.−フ) / me
であるチロシル−t RNAシンテターゼの50mM−
リン酸カリウム緩衝ン夜30m1に、2gのフ゛ロムシ
アン活性化セファローズ4B(ファルマシア社製)を加
え、室温で4時間、4゛C・で−夜攪拌して比活性1)
,0001:フト/?W重N (g)を示す固定化チロ
シル−t RNAシンテターゼ(以下固定化酵素という
。)を得た。
であるチロシル−t RNAシンテターゼの50mM−
リン酸カリウム緩衝ン夜30m1に、2gのフ゛ロムシ
アン活性化セファローズ4B(ファルマシア社製)を加
え、室温で4時間、4゛C・で−夜攪拌して比活性1)
,0001:フト/?W重N (g)を示す固定化チロ
シル−t RNAシンテターゼ(以下固定化酵素という
。)を得た。
この固定化酵素、又は固定化していないフリーの酵素(
以下フリーの酵素という。) 40,000ユニツトに
L−チロシン18mg、塩化マグネシウム六水和物81
mg、アデノシン三リン酸二ナトリウム220mg、L
−アルギン・塩酸塩421mgを加え、第1表記載の緩
衝液(50mM)で全容量を20m1とし、45℃で2
日間攪拌した。
以下フリーの酵素という。) 40,000ユニツトに
L−チロシン18mg、塩化マグネシウム六水和物81
mg、アデノシン三リン酸二ナトリウム220mg、L
−アルギン・塩酸塩421mgを加え、第1表記載の緩
衝液(50mM)で全容量を20m1とし、45℃で2
日間攪拌した。
得られた反応液を、ツバパックCLSカラム(ウォータ
ーズ社製)を用いて、高速液体クロマトグラフィーで分
析したところ、チロシルアルギンの生成量は、第−表の
ようになり、チロシル−t RNAシンテターゼを固定
化することにより。
ーズ社製)を用いて、高速液体クロマトグラフィーで分
析したところ、チロシルアルギンの生成量は、第−表の
ようになり、チロシル−t RNAシンテターゼを固定
化することにより。
高p H領域で顕著な収率の増大が見られた。
また、得られた反応液をカルボキシメチル・セルロース
・カラムで炭酸水素アンモニウム水溶液(p H7,9
)の5mMから100mMのグラジェントで溶出させて
生成物を精製した。得られた生成物が、チロシルアルギ
ンであることをNMR。
・カラムで炭酸水素アンモニウム水溶液(p H7,9
)の5mMから100mMのグラジェントで溶出させて
生成物を精製した。得られた生成物が、チロシルアルギ
ンであることをNMR。
Uv及びIR・吸収スペクトルにより確認した。
第 1 表
実施例2
参考例2で得た比活性14.0001:ッ)/n+j2
のロイシル−tRNAシンテターゼの50mM−リン酸
カリウム溶液10+yj!とアクリルアミドモノマー7
.5g、N、N’−メチレンビスアクリルアミド40m
gと水とを混合して全量を30+yj2とした。ここに
β−ジメチルアミノプロピオニトリル250mg、過硫
酸アンモニウム50mgに水を加えて、50m/とじた
溶液を加え、よく混合した後、0℃で10分間反応させ
て比活性18001ニフ)/m(lを示す固定化ロイシ
ル−t RNAシンテターゼ(以下固定化酵素という。
のロイシル−tRNAシンテターゼの50mM−リン酸
カリウム溶液10+yj!とアクリルアミドモノマー7
.5g、N、N’−メチレンビスアクリルアミド40m
gと水とを混合して全量を30+yj2とした。ここに
β−ジメチルアミノプロピオニトリル250mg、過硫
酸アンモニウム50mgに水を加えて、50m/とじた
溶液を加え、よく混合した後、0℃で10分間反応させ
て比活性18001ニフ)/m(lを示す固定化ロイシ
ル−t RNAシンテターゼ(以下固定化酵素という。
)を得た。
次にL−ロイシン13mg、アデノシン三リン酸二ナト
リウム1)0mg、塩化マグネシウム六水和物40mg
、L−フェニルアラニン164mg及び上記の固定化酵
素又はフリーの酵素10,000ユニツトを加え、第2
表に記載の緩衝’l(1(500m M )で全容量を
10m1とし、45℃で2日間反応させた。
リウム1)0mg、塩化マグネシウム六水和物40mg
、L−フェニルアラニン164mg及び上記の固定化酵
素又はフリーの酵素10,000ユニツトを加え、第2
表に記載の緩衝’l(1(500m M )で全容量を
10m1とし、45℃で2日間反応させた。
得られた反応液を実施例1と同様に高速液体クロマトグ
ラフィーにより、ロイシルフェニルアラニンの生成量を
測定した。
ラフィーにより、ロイシルフェニルアラニンの生成量を
測定した。
その結果を第2表に示す。
第 2 表
実施例3
32−60メツシユのヤシガラ炭を用い、バイオテクノ
ロジー・アンド・バイオエンジニアリング誌第24巻1
653頁(1982年)記載の方法に卓し、水素化リチ
ウム・アルミニウムで還元させた後、塩化シアヌルと反
応させて表面に塩化シアヌルを活性基として含有する粒
状ヤシガラ炭を得た。
ロジー・アンド・バイオエンジニアリング誌第24巻1
653頁(1982年)記載の方法に卓し、水素化リチ
ウム・アルミニウムで還元させた後、塩化シアヌルと反
応させて表面に塩化シアヌルを活性基として含有する粒
状ヤシガラ炭を得た。
このヤシガラ炭50mgに対し18000 xニフト/
m6の活性をもつチロシル−tRNAシンテターゼ溶液
500μlを加え24℃で一夜放置して比活性12,0
00 x=7) / mlを示す固定化チロシル−tR
NAシンテターゼ(以下固定化酵素という。)を得た。
m6の活性をもつチロシル−tRNAシンテターゼ溶液
500μlを加え24℃で一夜放置して比活性12,0
00 x=7) / mlを示す固定化チロシル−tR
NAシンテターゼ(以下固定化酵素という。)を得た。
この固定化酵素又はフリーの酵素2,000ユニツトに
、L−チク9フ1 水和物4mg,アデノシン三リン酸二ナトリウム1)m
g,l,−バリン1 3mgを加え,50mM−炭酸ナ
トリウム緩衝液でp f(を95.全容量を1mlとし
.45℃で2日間反応させた。
、L−チク9フ1 水和物4mg,アデノシン三リン酸二ナトリウム1)m
g,l,−バリン1 3mgを加え,50mM−炭酸ナ
トリウム緩衝液でp f(を95.全容量を1mlとし
.45℃で2日間反応させた。
得られた反応液を実施例1と同様に高速液体クロマトグ
ラフィーでチロシルバリンアミドの生成量を測定したと
ころ,固定化酵素を用いた場合。
ラフィーでチロシルバリンアミドの生成量を測定したと
ころ,固定化酵素を用いた場合。
チロシルバリンアミドが0.87mg生成していたが,
フリーの酵素を用いた場合のチロシルバリンアミドの生
成量は0.30mgであった。
フリーの酵素を用いた場合のチロシルバリンアミドの生
成量は0.30mgであった。
(発明の効果)
本発明によれば.アミノアシル−t RNAシンテター
ゼの触媒能が高まり,特に高pH領域で反応速度が顕著
に向上するため,単位時間当りの収量を大幅に向上させ
ることができる。
ゼの触媒能が高まり,特に高pH領域で反応速度が顕著
に向上するため,単位時間当りの収量を大幅に向上させ
ることができる。
本発明によって得られるペプチド又はペプチド83 ”
1体は1例えば、血圧降下作用等のあるプラジキニンや
,内・外分泌抑制作用等のあるソフトスタチンなどの各
種ホルモン及び抗生物質ペプチド。
1体は1例えば、血圧降下作用等のあるプラジキニンや
,内・外分泌抑制作用等のあるソフトスタチンなどの各
種ホルモン及び抗生物質ペプチド。
呈味ペプチドのような他の生物学的活性物質として有用
である。
である。
Claims (1)
- (1)α−アミノ酸と、アミノ酸又はアミノ酸から誘導
されるアミノ酸誘導体とをアミノアシル−tRNAシン
テターゼの存在下で反応させてペプチド又はペプチド誘
導体を製造するに際し、アミノアシル−tRNAシンテ
ターゼとして水不溶性担体に固定化したアミノアシル−
tRNAシンテターゼを用いることを特徴とするペプチ
ド又はペプチド誘導体の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61072304A JP2542369B2 (ja) | 1986-03-28 | 1986-03-28 | ペプチド又はペプチド誘導体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61072304A JP2542369B2 (ja) | 1986-03-28 | 1986-03-28 | ペプチド又はペプチド誘導体の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62228296A true JPS62228296A (ja) | 1987-10-07 |
JP2542369B2 JP2542369B2 (ja) | 1996-10-09 |
Family
ID=13485389
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61072304A Expired - Lifetime JP2542369B2 (ja) | 1986-03-28 | 1986-03-28 | ペプチド又はペプチド誘導体の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2542369B2 (ja) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS58146539A (ja) * | 1982-01-26 | 1983-09-01 | Kazutomo Imahori | ペプチド又はペプチド誘導体の合成法 |
JPS6037994A (ja) * | 1983-08-10 | 1985-02-27 | Kazutomo Imahori | ペプチド又はペプチド誘導体の合成法 |
-
1986
- 1986-03-28 JP JP61072304A patent/JP2542369B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS58146539A (ja) * | 1982-01-26 | 1983-09-01 | Kazutomo Imahori | ペプチド又はペプチド誘導体の合成法 |
JPS6037994A (ja) * | 1983-08-10 | 1985-02-27 | Kazutomo Imahori | ペプチド又はペプチド誘導体の合成法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2542369B2 (ja) | 1996-10-09 |
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