JPS62209100A - 生体に有用な性質を持つグロビン及びアセチルグロビンの鉄誘導体、その調製法及び薬学的処方物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は動物の赤血球より抽出したグロビン又はアセチ
ルグロビンを有機又は無機鉄化合物と反応させることに
より得られる新規な鉄化合物の一群に関する。

産業上の利用分野 蛋白質から成るこれらの鉄誘導体は、生体に有用な鉄を
高い・ぐ−七ンテージで含有すＳ錯化合物であり、鉄欠
乏性貧血症に対する予防的処置及び治療に極めて有用で
ある。

種々の生物学的プロセスにとっ℃極めて重要である鉄は
、人体に於いて少情見い出され、その量は欠乏安いは蓄
積といった現象を回避し得るメカニズムにより℃制御さ
れている。上皮脱落、胆汁***、胃腸或いは月経による
鉄の生理学的損失は、腸における同化機構によって補わ
れるが、妊娠、授乳、幼児期の発育、不充分な食物摂取
、吸収過程に関する諸疾患は、ひん繁に鉄欠乏性貧血症
につながるものであり、それは通常鉄塩を経口投与する
ことに二っ℃治療されるが、それによりしばしば胃腸の
不耐性現象を惹起する。

従来の技術 蛋白質部分により形成される鉄グロビンであるフェリチ
ン、乾燥重量の２０％に相当する鉄の「芯」を囲繞する
アポフェリチンの使用によって著しい進歩が達成された
。

フェリチンは、消化器官に傷害全路えないが、それを抽
出して来る入手源（ウマの肺臓）が限られている為非常
に高価であり従っ℃殆ど普及していない。それにも拘ら
ず、フェリチンを用い℃得られた結果から、消化器系に
有害な副作用を生じない経口療法を行なう為に最適の鉄
賦剤は蛋白質とし壬の性質全有するものであることが示
された。

それらは、改変された或いは改変されない、動植物由来
の蛋白質（アルブミン、カゼイン、大豆蛋白質等々）で
ある。しかしながら、これらの蛋白質と鉄塩との間に於
ける相互作用により、不均一、不安定、より難溶性でし
かも鉄含有量の低い化合物の形成を来している。

本発明は、安定でしかも、中性及びアルカリ性の−に於
い工極めて易溶性、従っ℃腸管内で極めて易溶性で、生
体に有用な鉄を高含有量で有する新規蛋白質鉄誘導体に
関するものである。これらを実験動物に経口投与すると
血中の鉄含有量を増加し得、又、消化器系に副作用を生
せしめない。

更に、本発明の対象である鉄誘導体の鉄の同化は、腸に
於ける鉄の同化を調節する生理学的監視機構に従い正常
な同化過程を経るものである。

動物の赤血球より取得されたグロビン及びアセチルグロ
ビンの鉄誘導体は、重量で２乃至２ｏチの鉄を有し、ヒ
トに於ける鉄欠乏性貧血症の治療に適する薬学的組成物
の処方に有用であっ℃、これらは本発明の対象である。

本発明の対象は又、次の諸過程より成る、上記鉄誘導体
の調製方法に関する。

（ａ）　　動物の赤血球を出発材料とするグロビンの調
製。

（ｂ）　　グロビンからのアセチルグロビンの調製。

（ｃ）　　鉄炭水化物−誘導体の調製。

（ｄ）　　アセチルグロビン及びグロビンを各々鉄炭水
化物−誘導体と反応せしめることによる鉄アセチルグロ
ビン及び鉄グロビンの調製。

鉄炭水化物誘導体との反応に替え℃、無機鉄塩と、グロ
ビン及びアセチルグロビンとの反応を行なうこともでき
る。

本発明による物及び方法の特徴は、本発明の実施に関す
るより好ましい態様に言及する下記の記述により主とし
て示されるが、これらの記述は例示を目的とするもので
あっ℃、それによって本発明の範囲が限定されるもので
はない。

発明の詳細な説明 グロビン及ヒアセチルグロビンの調製（過程ａ）には、
クエン酸ナトリウム（４１／ｌ　）処理した動物の血液
−クシ、ヒツジ、ブタ由来のもの−が使用される。血球
を食塩水で洗浄しアセトン中に分散し、アセトン中の濃
塩酸溶液に添加し、動物血液とＨＣｌとの重量による割
合を１：０．００２とする。

グロビンは、３乃至１０℃にて沈澱させ、遠心分離に付
し、無水化し、粉砕し℃、３５乃至４５℃にて蒸留水に
溶解させたものをろ過及び限外ろ過して精製し、精製グ
ロビンは、濃縮液の状態（重量で２，５チ溶液）で回収
される。

アセチルグロビンの調製（過程ｂ）に於い℃は、過程ａ
で得られたグロビンにＮａＯＨＮ／　１０溶液を添加す
ることによりＰＨ’ｔ　９．５乃至１０．５にする。

無水酢酸とＮａＯＨＮ／　１０溶液を同時に、−が７．
５乃至８．５の直に保たれる様に、徐々に添加する。

混合物をろ過し、１１ｕ　３乃至３．５となる迄ＨＣ２
５Ｎ溶液により酸性化する。

この様にし℃得られた沈澱物をろ過することにより分離
し、蒸留水に懸濁し、ｐＨ７，５乃至８．５に到達する
迄ＮａＯＨを加えながら再び溶解させる。こうして得ら
れた反応混合物をろ過し、沈澱、ろ過、溶解、及び清澄
の処理を繰り返し、最後に、精製された混合物をろ過又
は透析して凍結乾燥する。

凍結乾燥物は、使用された無水酢酸の量によジアセチル
化の程度の異なる（好ましくは１０乃至１００％）アセ
チルグロビンから成る。

鉄炭水化物訪導体の調製（過程Ｃ）に於いては、炭水化
物混合物と塩化鉄とを混合する。

安定性及び溶解性を有するダル溶媒化構造による分子縮
合のプロセスはｐＨの変化により開始される。

本発明に使用する鉄炭水化物誘導体は、好ましくは、サ
ッカラード及びフルクタートである。

過程ｄは、調製しようとする物質の種類、即ち、鉄アセ
チルグロビンか或いは鉄グロビンかによシ、又、使用す
る鉄反応物の種類により異なった態様で行なわれる。

アセチルグロビンを鉄炭水化物誘導体と反応せしめるこ
とによる鉄アセチルグロビンの調製に於い℃は、過程す
の様にして調製されたアセチルグロピンを蒸留水中に溶
解し、室温にて還流状態で、過程Ｃにて調製された鉄炭
水化物誘導体の溶液を徐々に添加する。アセチルグロビ
ンと鉄との割合は重量で１９：１乃至４：１である。

アセチルグロビン溶液の濃度は、好ｔＬ＜Ｈ２，５％乃
至１０チであり、鉄炭水化物−誘導体は、５乃至１０％
の濃度であることが好ましい。

混合物は、１乃至３時間撹拌し続け、−が７から５へ低
下する迄、徐々にＩ（Ｃ４０，Ｉ　Ｎで処理し℃、沈澱
物を得る。沈澱物は、ろ過又は遠心により分離し、Ｈ（
１３）希釈溶液で洗浄し、蒸留水に懸濁し、ｐＨ７とな
る迄Ｎａ０ＨＩＮの溶液を徐々に加え℃再び溶解させる
。透明な混合物を透析或いは限外ろ過し、最後に凍結乾
燥する。

この様にして形成された物質は鉄アセチルグロビンから
成り、重量で、５乃至２０％の錯鉄、重量で１５．６乃
至１２．８％の蛋白質窒素を含有し、水溶性の度合は３
０％ｐ／ｖ　Ｋ等しい。

既述の方法に替え、アセチルグロビン溶液を無機鉄塩、
好ましくは、ＦｅＣｌ３　、６　Ｈ２Ｏ、と室温にて１
０乃至６０分間還流状態に保ちながら、反応させ得る。

その際、アセチルグロビンと鉄との割合は、重量で４９
＝１乃至１５：１である。無機鉄塩溶液の濃度は、好ま
しくは、２゜５乃至１０％である。

沈澱物を形成し上記の様に処理する。

凍結乾燥により得られる最終産物は、鉄アセチルグロビ
ンから成り、重量で２乃至６チの錯鉄及び重量で１５乃
至１６％の蛋白質窒素を含有し、水溶性の度合は３０　
％　ｐ／ｖに等しい。

既述の方法に従い、過程ａより得たグロビン溶液を鉄炭
水化物−誘導体溶液と反応させ、鉄グロビン化合物も調
製される。その際、グロビン／鉄）割合が１９：１乃至
４：１、或いは、ＦｅＣｔ、、６Ｈ２０溶液に関しては
、グロビン／鉄の割合が４９＝１乃至１５：１であり、
３０乃至６０分間撹拌を続ける。

グロビン溶液の濃度は好ましくは２．５乃至１０チ、鉄
炭水化物−誘導体の溶液の濃度は好ましくは５乃至１０
チでろシ、鉄塩溶液の濃度は好ましくは８乃至１２％で
ある。

グロビンを鉄炭水化物誘導体で処理することにより、重
量で５乃至１０％の錯鉄を有する鉄炭水化物化合物、重
量で１３乃至１５％の蛋白質窒素含有量、及び２０　％
　ｐ／ｖに相当する水溶性の度合が得られる。

グロビンｆ　ＦｅＣＬ３．　Ｈ２Ｏで処理することによ
り、重量で２乃至６チの錯鉄、重量で１５乃至１６チの
蛋白質窒素を含有し、水溶性の度合が２０６ｈに相当す
る、鉄グロビン化合物が得られる。

この様にし℃、ＦｅＣＬ　、６Ｈ２０で処理することに
よ＃）得られた化合物は、鉄炭水化物−誘導体で処理す
ることにより得られた化合物よりも、認識可能な程度の
差異で、より低い鉄含有量を有するが、これら２種の物
質は各々が特定の治療上用途を持つ。本発明の物質に含
まれる鉄は完全に化合し℃おり、未結合の鉄が存在しな
いことは、硫酸アンモニウム及びＨＣ２Ｎ／１０を用い
る沈澱により証明され、鉄イオンが沈澱する条件である
アルカＩＪ　ｍ境に於ける完壁な可溶性によっ℃示され
る。硫酸アンモニウムを用いた沈澱による証明は、例え
ば、鉄誘導体１０％溶液に硫酸アンモニウム３０％（ｐ
／ｖ）を加えることにより行われる。この様にして得ら
れた沈澱物は、前の鉄誘導体と極めて類似して居り、再
び水に溶解し得るが、溶液中には、遊離した鉄は存在し
ない。上述の様にし℃得られた化合物は、酸性環境で安
定であり、水及びアルカリ環境、即ち、腸に於い″′Ｃ
観察される両値の環境中で良好な可溶性を有し、経口投
与後、腸に於いて、錯鉄が速かに遊離し、消化器系に損
傷を与えることなく、基礎的血中鉄含有量（ｂａｓａｌ
ｓｌｄｅｒｅｍｌａ　）の値を増加せしめる。本発明は
、赤血球より得られた既知量の鉄グロビン及びアセチル
グロビン誘導体を含有する薬学的処方物（バイアル、錠
剤、カプセル、シロップ、粒状物を有する微小な色剤等
々）で、鉄欠乏性貧血症の治療及び予防に有用な処方物
に言及する。

本発明に関し℃は、次の様な処方物が例示され得るが、
これらによって本発明が限定されるべきものではない。

−赤血球由来の蛋白質又はアセチル化蛋白質の鉄誘導体
の形態を有する鉄１（１０）０−２Ｏ−４０−１００及
び水溶剤、香料、安定化剤等々製薬学的技術に於いて通
常使用される助剤を含有するバイアル。

−赤血球由来の蛋白質又はアセチル化蛋白質の鉄誘導体
の形ｉｔ有する鉄１０−２０−４０−１０（１０）！Ｉ
９及び賦形剤、Ｒ集防止剤等々製薬学的技術に於い℃通
常使用される助剤を含有する錠剤。

−赤血球由来の蛋白質又はアセチル化蛋白質の鉄誘導体
の形態を有する鉄１Ｏ−２０−４０−１００ｒｎ９を含
有するカプセル。

−赤血球由来の蛋白質又はアセチル化蛋白質の鉄誘導体
の形態を有する鉄１Ｏ−２０−４０−１００Ｉｎ９を含
有する粒状物を含む微小な単−用ｉ１　（ｍｏｎｏｄｏ
ａａｓ　）色剤。

−赤血球由来の蛋白質又はアセチル化蛋白質の鉄誘導体
の形態を有する鉄１−２−４−１０ｍ９／′Ｉｎ／及び
水溶剤、香料、安定化剤等々製薬学的技術に於いて通常
使用される助剤を含有するシロップ。

毒性 マウスについ℃、本発明による鉄誘導体の経口投与後の
急性毒性を測定し、ＤＬ５０が、いずれの例に於い℃も
４０００ｍ９／ｋｇを超えることが認められた。

これに対し、硫酸第一鉄では、マウスに於いて経口投与
後ＤＬ５０は１５００ｍ９／ｋｇに匹敵した。

経口投与後の血中鉄含有 本発明に於い℃、血中鉄含有量の基礎値を増大させると
されている鉄誘導体のいくつかについ℃、その結果を、
１８時間絶食させた体重１８０−２００ｊ！のＳ、Ｄ、
系ラットに於いて評価した。動物は、強制飼養によシ、
２ｍ９／に９相当量の鉄を含む用量にて試料を経口投与
し、２時間後、屠殺した。

血漿中の鉄の量は、パンフェナントロリン法により分光
光度計で（測色法、Ｂｅｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈ
ｅｌｍ）定量した。結果は第１表に示す。

第　　１　　表 処　理　　　　　　　　血漿中の鉄 食塩水　　　１５０±２０．４ 実施例１３２２±６．４ 実施例４２８８±１８．０ 実施例５３２３±１９．２ 硫酸第一鉄　　　　　　　２６９±３６．７下記の実施
例は、例示の為に報告するものであシ、限定を目的とす
るものではない。

クエン酸処理したウシ血液５００　ｒｕｇ　’ｅ　３０
００　ｒｐｍにて遠心分離に付す。血球を食塩水３００
ｍ／で洗浄し、５℃にてアセトン８００　ｍｌに分散さ
せ、次いで濃ＨＣ４及びアセトン（１：１０）よシ成る
溶液１００ｍ１を加える。この様にして得られた蛋白質
懸濁液を低温（５℃）に１２時間維持し、グロビンの沈
澱を容易にする。沈澱物は、遠心分離によシ分離し、無
水化し、粉砕する。

水５リットルに４０℃にて溶解し、次いで透明になる迄
ろ紙を用い℃ろ過し、１００００のカットオフにて限外
ろ過して精製後、グロビン６（１’を得た。

２．５％溶液で、精製グロビン５０Ｆが得られた。

ｂ）アセチルグロビンの調製 化合物＆）（グロビｙｌＯＦ）４００！／はＮａ０ＨＩ
Ｎを徐々に加えながら撹拌し、ｐＨ１０になる迄アルカ
リ化する。次に無水酢（ｊｌｌ　５　ｒｔｔｔとＮａ０
ｔ（ｆ同時に添加し、混合物をｐ）１約８に維持する。

添加作業終了後、反応混合物を室温に″′Ｃ６０分間撹
拌し続ける。

透明になる迄、乳白色のものをろ過により除去し、ＨＣ
６５Ｎｉ用いてＰ）（３乃至３，５となる迄徐々に酸性
化する。

形成された沈澱をろ別し、Ｈ２Ｏ１００＋＋＋／！に懸
濁し、完全に溶解する迄（Ｐｌ″！約８　）　ＮａＯＨ
を加える。

混合物を再びろ別し、次いで、ＨＣｌ　ｆ用いて−３乃
至３．５となる迄酸性化する。

形成された沈澱をろ別し、Ｈ２Ｏ１００ＴｒＬｌ　ｌ／
ｃ懸濁し、再び、ｐｉ（８迄ＮａＯＨを加え、溶解させ
る。

透明な混合物は、透析又は限外ろ過し、次いで凍結乾燥
する。得られた凍結乾燥物は、そのアセチル化の度合が
９５％に相当するアセチル化グロビン７ｙより成る。

アセチル化の度合は、アセチル化された群のパーセンテ
ージを先のグロビンのアセチル化され℃いない群との比
較による定量にて与えられ、遊離アミノ基のニンヒドリ
ン反応により認められる（　Ｊ、　Ｂｌｏｌ　、　Ｃｈ
ｅｍ、　２１ユ、１９５４．９０７　）。

Ｃ）鉄化合サッカラード及び鉄化合フルクタートの調製 鉄化合フルクタートの調製に於いては、塩化鉄５０．９
’に蒸留水２リツトルに溶解させ、フルクトース３００
ｇを含有する混合物５ＱＱｍｔに徐々に添加する。混合
物全混合した後、２０チＫＯＩ（混合物により、Ｐ）′
ｉを徐々に７．８乃至８．５へ移行する。

−値を８乃至８．５に維持しながら、何時間も撹拌し続
ける。

化合物が安定な時にろ過する。■・１００溶解させ、透
過物に於ける第二鉄の反応が陰性となる迄継続的に蒸留
水を加えながら、１０００カツトオフにて限外ろ過する
。約８００迄濃縮する。ろ通抜、化合物は、凍結乾燥す
る。粉末の回収量は８０ｇであり、うち鉄は１０チであ
った。

鉄化合サッカラードの調製に於い℃は、塩化鉄５０．９
’を蒸留水２リツトルに溶解させ、サッカロース５００
Ｉを含む溶液１リツトルを徐々に注入する。混合後、メ
チルグルカミン２０％の混合物によシＰＨを徐々に８．
０乃至８．５へ移行する。何時間もの間撹拌し続け、更
にメチルグルカミンを加えて声値を元の値に戻す。化合
物が安定な時に、凡そ３０分間５０℃にて加熱し、次い
でろ過する。

混合物は、５リツトルに溶解させ、透過物に於ける第二
鉄の反応が陰性となる迄継続的に蒸留水を加えながら、
１０００カツトオフにて限外ろ過する。

ｓｏｏｍｚに濃縮し、ろ過し、凍結乾燥する。粉末の回
収量は５（１０）！であり、うち鉄は１０％であった。

ｄ）鉄化合サッカラードを用いる鉄−アセチルグロビン
錯体の調製 上述の過程すに於い℃得られたアセチル化グロビン３１
１　’ｋ　Ｈ２Ｏ（ｐ［（約７．５　＞　６０　ｍｌに
溶解し、過程Ｃ）に記した様にして得た鉄化合すクカラ
ート（鉄：１０％）６Ｊを撹拌しながら徐々に加え、そ
れ’ｃ　Ｈ２Ｏ６ｍｌに溶解させる。添加作業終了後、
呈温にて還流状態で２時間反応を進行させる。

得られた混合物は、沈澱を形成する迄ＨＣｔＯ，Ｉ　Ｎ
を用い℃、徐々にｐ）１５迄酸性化する。

形成された沈澱物はろ別し、ＨＣｔｏ、ＯＩＮ　３（１
０）１ＬＩで洗浄し、■２０３ｏＷＬｌ中に懸濁し、Ｎ
ａＯＨを徐々にＰｌ（７迄加え℃再び溶解させる。

透明な混合物を限外ろ過又は透析し、次いで凍結乾燥す
る。

凍結乾燥して得た固体（２，７Ｎ）は、１４．１％相当
の錯鉄を含有し、水溶性の度合は３０％に相当し、又、
蛋白質窒素のパーセンテージが１２，８チであった。

最初の実施例に記述したと同様の態様で、アセチル化グ
ロビン３ｇ及び最初の実施例の過程Ｃで述べた様にし℃
！Ａ製した鉄化合フルクタート（鉄：１０％）から鉄錯
体を得る。

凍結乾燥により得られた固体は、１２．４チに相当する
錯鉄を含有し、水溶性の度合は、４０％に相当し、又、
蛋白質窒素のパーセンテージが１４チであった・ 最初の実施例の過程すで得られたアセチルグロビン１９
を水（ＰＩ′（７）１０ｍｇに溶解させＨ２Ｏ（ｐ）１
２）１０づに溶解させた塩化鉄０．８３ｇに加える。

撹拌しながら３０分間反応させる。形成された沈澱物音
ろ別し、ＨＣｔｏ、ＯＩ　Ｎ　３０　ｍｌで洗浄し、Ｎ
ａ　ＯＨをＰ）１７．５迄徐々に加えて再び溶解させる
。混合物はろ別し、透析し、次いで凍結乾燥する。凍結
乾燥により得られた固体は、４．５チ相当の錯鉄を含有
し、可溶性の度合は３０チに相当し、又、蛋白質窒素の
・平−センテージが１５％であった。

９Ｎ虹１− ５す【 実施例１の過程ａに従っ℃得られたグロビン５ｇｌ水（
ｐＨ３，５）　２００’ｍｌに溶解させ、最初ｃ＋実施
例の過程Ｃ）に記述した様にして化合させた鉄化合フル
クター）　１０　Ｆ’に水１００　ｍｌに溶解し、加え
る。Ｒ流状態で、３０分間、反応を進行させる。

沈澱が形成され、これを遠心分離により採取し、蒸留水
で洗浄し、次いで、ｐＨ７，５迄ＮａＯＨによっ℃完全
に溶解させる。混合物はろ別し、透析し、凍結乾燥する
。凍結乾燥により得られた固体（４，５＆）は、１２．
２％相当の錯鉄を含有し、蛋白質窒素のパーセンテーゾ
が１４％であった。

の調製 実施例４に記述したと同様の態様で、最初の実施例の過
程ａ）に従っ℃得られたグロビン５ｙと最初の実施例の
過程Ｃ）に記述した様にし℃化合した鉄化合サッカラー
ド（鉄：１０％）１０Ｉから鉄錯体を得る。

凍結乾燥により得られた固体は、１２．５％相当の錯鉄
を含有し、蛋白質窒素のパーセンチ−・ゾば１４チであ
った。

実施例６ 塩化鉄を用いる鉄グロビン錯体の調製 実施例４と同様の態様によシ、最初の実施例の過程＆）
に従って得られたグロビン１ｙ及び塩化鉄０．８３．９
から鉄錯体を得る。

凍結乾燥により得られた固体は、５％相当の錯鉄を含有
し、蛋白質窒素の・９−センテーノが１５．２であった
。

手続補正書 昭和６１年１２月　８日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）重量で２乃至２０％量の鉄を含有し、鉄欠乏性貧
   血症の治療に有用な、高度な生体有用性を有する、グロ
   ビン及びアセチルグロビンの鉄誘導体。 （２）重量で２乃至２０％量の鉄を含有し、ヒトに於け
   る鉄欠乏性貧血症の治療に有用な、高度な生体有用性を
   有する、グロビン及びアセチルグロビンの鉄誘導体の調
   製方法であって次の様な過程によることを特徴とする方
   法、 （ａ）動物の赤血球を出発材料とするグロビンの調製。 （ｂ）グロビンのアセチル化に由るアセチルグロビンの
   調製。 （ｃ）鉄炭水化物誘導体の調製。 （ｄ）アセチルグロビン及びグロビンを鉄化合物と各々
   反応させることに由る鉄アセチルグロビン及び鉄グロビ
   ンの調製。 （３）前記グロビンの調製が、遠心分離に付した動物の
   血液をＨＣｌ（塩酸）との間の重量比を１：０．００２
   にして濃縮ＨＣｌ溶液で３乃至１０℃の温度にて処理す
   ることにより行なわれることを特徴とする特許請求の範
   囲第（２）項による方法。 （４）前記アセチルグロビンの調製が、水素化ナトリウ
   ム溶液を同時添加することによりｐＨの値を７．５乃至
   ８．５に維持したグロビン水溶液に無水酢酸を徐々に添
   加することにより行なわれることを特徴とする特許請求
   の範囲第（２）項による方法。 （５）前記鉄炭水化物誘導体の調製が、限外ろ過法によ
   る精製及び濃縮の過程を経てゲル溶媒化構造による分子
   縮合を行なうことを特徴とする特許請求の範囲第（２）
   項による方法。 （６）前記アセチルグロビンの調製が、室温にて濃度５
   乃至１０％の該鉄炭水化物誘導体の溶液を濃度２．５乃
   至１０％の前記アセチルグロビンの溶液に徐々に添加し
   、反応混合物を１乃至３時間撹拌し、ｐＨ４乃至５に達
   する迄鉄アセチルグロビンをＨＣｌで沈澱させることに
   より行なわれることを特徴とする特許請求の範囲第（２
   ）項による方法。 （７）前記鉄アセチルグロビンの調製に用いるアセチル
   グロビンと鉄との割合が、１９：１乃至４：１であるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第（６）項による方法。 （８）沈澱した鉄アセチルグロビンを前記溶液により分
   離し、ＨＣｌ希釈混合物で洗浄し、再びＮａＯＨ混合物
   中に溶解し、得られた溶液をろ過し或いは透析し或いは
   凍結乾燥することを特徴とする特許請求の範囲第（６）
   項による方法。 （９）前記鉄アセチルグロビンの調製が、濃度８乃至１
   ２％の無機塩混合物を室温にて濃度２．５乃至１０％の
   アセチルグロビン混合物に添加し、還流状態で反応を１
   ０乃至６０分間進行させることにより行なわれることを
   特徴とする特許請求の範囲第（２）項による方法。 （１０）前記鉄アセチルグロビンの調製に用いるアセチ
   ルグロビンと鉄との割合が、４９：１乃至１５：１であ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第（９）項による方
   法。 （１１）前記鉄アセチルグロビンの調製が、室温にて濃
   度５乃至１０％の前記鉄炭水化物誘導体混合物を濃度２
   ．５乃至１０％のグロビン混合物に添加し、反応混合物
   を３０乃至６０分間撹拌し続けることにより行なわれる
   ことを特徴とする特許請求の範囲第（２）項による方法
   。 （２）前記鉄グロビンの調製に用いるグロビンと鉄との
   割合が１９：１乃至１４：１であることを特徴とする特
   許請求の範囲第（１１）項による方法。 （１３）前記鉄グロビンの調製が、室温にて濃度２．５
   乃至１０％の鉄混合物を濃度２．５乃至１０％のグロビ
   ン混合物に添加し、反応混合物を３０乃至６０分間撹拌
   することにより行なわれることを特徴とする特許請求の
   範囲第（２）項による方法。 （１４）前記鉄グロビンの調製に用いるグロビンと鉄と
   の割合が４９：１乃至１５：１である特許請求の範囲第
   （１３）項による方法。 （１５）活性な有効成分として、特許請求の範囲第（１
   ）乃至（１４）項に示した様に、グロビン及びアセチル
   グロビンの鉄誘導体を含有する、ヒトの鉄欠乏性貧血症
   の治療に有用な薬学的化合物。