JPS62179639A

JPS62179639A - 多項目生化学分析方法

Info

Publication number: JPS62179639A
Application number: JP2106086A
Authority: JP
Inventors: Junichi Matsumoto; 順一松本; Hideki Yamamoto; 山本　英毅
Original assignee: Shimadzu Corp
Current assignee: Shimadzu Corp
Priority date: 1986-01-31
Filing date: 1986-01-31
Publication date: 1987-08-06
Anticipated expiration: 2010-03-15
Also published as: JPH0723871B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（イ）産業上の利用分野この発明は、多項目生化学分析方法に関する。

さらに詳しくは、乳び血清等の懸濁物質が混在した検体
の測定に有用な多項目生化学分析方法に関する。

（０）従来の技術従来、血清、血漿、尿等の生化学検体中の多項目生化学
分析に、比色分析や比濁分析を用いた方法が行なわれて
おり、通常、各項目毎に分割された検体に所定の反応試
薬を混合して測定液とし、これら各測定液の所定波長に
おける吸光度をエンドポイント法により各々計測して各
々標準検体を比色あるいは比濁して求めた濃度算出係数
を乗することにより各項目の定量が行なわれている。そ
してこの際の分析項目としては、例えばＴＰ、ＡＬＢ、
Ｔ−ＣＨＯ，ＰＬ、ＴＧ、Ｔ−Ｂｉ　Ｌ、Ｄ−Ｂｉ　Ｌ
、ＧＬＶ、Ｃａ　、　　ｉＰ等が挙げられ、また吸光度
計測波長としては通常３４０〜７５０ｎｍの範囲のもの
が適用されている。

（ハ）発明が解決しようとする問題点しかしながら、検体の中には、カイロミクロンやりボタ
ンバクが著しく高いために濁っているいわゆる乳び血清
がある。ある項目をエンドポイント法で測定する場合、
反応によって変化する吸光度の他にかかる乳び血清では
、濁りにより光の散乱が生じて見かけの吸光度が増加し
、分析結果に正の影響を与えるという不都合が生じる。

これを補正するために、各項目毎に、検体とブランク反
応用試薬（各反応試薬から反応成分を除いたもの）とを
混合した検体ブランク液を調製し、上記測定液と同一の
測定条件で吸光度を計測し、これらの検体ブランク液の
吸光度を上記測定液の吸光度から各項目毎に減算する方
法（検体ブランク法）や、実際の検体のブランク液を、
定められた２波長で計測して得られる吸光度差を、予め
濁りの基準液（ポリスチレン粉末懸濁液）を上記２波長
で計測して得られた吸光度を単位濁度あたりの吸光度に
換樟した値で除し、その値にｌ単波について基めておい
た他の波長（反応液の吸光度計測波長）への換ｐ定数を
乗じて、それを当該波長での検体自身の濁りとして、反
応液の吸光度から減じて補正する方法（待聞昭５４−６
３７８５号公報）などが知られている。

しかし、前者の方法では、自動分析装置においてはブラ
ンク液Ｈ側用のチｐンネルを多数必要とする問題点があ
る。一方、後省の方法では、濁りの基準液の入手が容易
ではなく、濁り成分の粒径が異なればスペクトルが異な
るので、単一の基準液を乳び血清などの検体の濁りを総
括した基準液とするのには無理がある。すなわち、乳び
血清の主たる濁り成分であるカイロミクロンの粒径は約
０．５ｐｙｐ、リポタンパクのうらプレーβ−リポタン
パクは約０．０８虐、β−リポタンパクは約０．０３５
膚、α−リポタンパクは約０．０１５．ｉと各々粒径が
相異しており、検体の濁りが何に由来しているものかに
よりスペクトルの形が異なるのでポリエチレン粉末を単
一の基準物質とする前記基準液を用いる補正方法では正
確な補正が困難であった。

この発明は、かかる問題点を解消すべくなされたもので
あり、ことに、１検体に対してそれぞれを異なった波長
で計測するためのブランクチャンネルを多数必要とせず
、しかも上記濁りの基準液などを用いることなく、濁り
成分による誤差を可能な限り正確に除去できる多項目生
化学分析方法を提供しようとするものである。

（ニ）問題点を解決するための手段かくしてこの発明によれば、懸濁物質を混在する検体の
多項目生化学分析を行なうに際し、各項目毎に分割され
た検体に各々の項目測定用の反応試薬を混合して測定液
とし、これら各測定液の所定波長における吸光度を各々
計測しこれらの各吸光度に基づいて複数項目の定聞を行
なうことがらなり、さらに検体にブランク反応用試薬を混合した一つの検体
ブランク液を調製し、このブランク液の吸光度を少なく
とも二種の波長によりｔ１測して波長−吸光度の回帰関
数を求め、この回帰関数から上記各項目についての計測
波長にお【ノるブランク吸光度を算出し、この各ブラン
ク吸光度により上記各測定液の吸光度を補正することを
特徴とする多項目生化学分析方法が提供される。

この発明の最も特徴とする点は、乳び血清のごとき懸濁
物質を含有する検体を対象として多項目分析を行なう際
に、一つの検体について単一の検体ブランク液を用いる
点にあり、かつかかる単一の検体ブランク液について、
二種以上の波長における吸光度を計測して検体ブランク
液についての波長−吸光度回帰関数を求め、これに基づ
いて各項目について計測される波長での吸光度を篩出し
、これを反応液の吸光度から差引くことにより乳びを補
正する点および濁りの基準液を必要としない点にある。

この発明の方法に用いる反応試薬は、意図する分析項目
に対応する当該分野で公知の種々の反応試薬が用いられ
る。これらの反応試薬の中には、例えば、検体中の抗体
に抗原抗体反応させて比濁分析するための抗血清試薬等
も含まれる。

この発明に用いるブランク反応用試薬は、上記反応試薬
から反応成分を除いたものが吸収をもたないものであれ
ば、いずれの反応試薬に対応するものであってもよく、
例えば、反応試薬の溶媒となるｌｌｉ　Ｗｌｉ液、生理
食１シ水、水などが適用できる。

かかるブランク反応用試薬を検体と混合した検体ブラン
ク液は一検体につき一つ調製しておけばよい。

上記検体ブランク液の吸光度測定は、少なくとも二種の
波長により行なわれる。通常、より正確な回帰関数を得
るために、計測波長を増すことが適している。通常、各
項目の計測は３４０〜７５０ｎｍの範囲内で行なわれる
ため、この範囲における波長−吸光度回帰関数が得られ
るべく、この範囲内の２〜４種の波長を適宜分散して選
択するのが好ましい。ただし、意図する各項目の計測波
長の範囲が狭い場合には、これら両端付近の少なくとも
二種の波長に基づいて回帰関数を求めればよい。

回帰関数の求め方について以下説明する。

まず計測波長λ（ｎ■）をχ軸に、吸光度Ａ（ＡｂＳ）
をｙ軸にとると、濁りのスペクトルは例えば第１図のよ
うになる。濁った試料を同時に０種の波長λ１、Ａ２・
・・・・・Ａｎで計測した場合の吸光度を各々ＡＩ、Ａ
２・・・・・・八〇とすると、波長と吸光度の関係はＡ
＝ａλｂ　（ａ、ｂは定数）の式に近似できる。ここで
定数ａは濁りの程度、ｂは濁り成分の平均粒径で決まる
。従って波長と吸光の組み合せ（λ、Ａ）＝（λｓ、Ａ
ｔ＞、（Ａ２、Ａ２）・・・・・・（Ａｎ　、　Ａｎ　
）でべき乗回帰（この場合最小二乗法）づれば、定数ａ
、ｂの値が決定できるので、これに基づいて任意の波長
におけるブランク液の吸光度を推定することができる。

また、前述のごとく乳び血清中の濁り成分はカイロミク
ロンとりボタンバクの２種類に大別されるため、より厳
格な回帰を行なうには、波長と吸光度の関係をＡ＝ａｔ
λｂｌ＋ａ２λト２で表わし、ａｌ、ｂｌはカイロミク
ロンに由来、ａ２、ｂ２はリポタンパクに由来する定数
として、異なる少なくとも４つの波長からａｔ、ａ７、
ｂ工、ｌ１２を求めて波長と吸光度の回帰関数とするの
が適している。しかしながら、実用分析においては、前
述のごとき平均粒径からのべき乗回帰で充分に意図する
補正ができることが見出されている。

なお、各測定反応液と検体ブランク液における検体の混
合比が異なる場合には、容量補正を行なえばよく、必ず
しもこれらの最終反応液中の検体濃度が一致し−Ｃなく
てもよい。ブランク液ｆｆ１ｖＢ（〃）、その中の検体
ｆｉｖＢ　　（１１＞、測定液ｉｔ　ｖＡ（ｘｌ）、そ
の中の検体量ｖＡ（１！）とし、検体ブランク液の波長
λにおける上記回帰関数にょる算出吸光度をＡＢ　、測
定反応液の波長λにおける吸゛光度をＡ△とすると、測
定反応液の波長λにおける実質的な反応による吸光度Ａ
ｃは、Ａｃ　＝ＡＡ　−（ＶＢ　　・ＶＡ／ＶＡ　　−ＶＢ　
　）　−ＡＢで求めることができる。

この発明の方法は、通常、多項目に対応する複数の分析
ラインを備えた多項目自動分析装置を用い、さらに、ブ
ランク反応用試薬を検体に添加する分注手段と、この検
体ブランク液の吸光度を少なくとも２種の波長で各々計
測する多波長光度計を備えたブランクラインを付設して
行なうのが好ましい。さらに、上記ブランクラインで計
測された２種以上の吸光度に基づいて懸濁物質が混在す
る各々の検体による検体ブランク液について波長−吸光
度の回帰関数を求めて任意の測定項目・波長における検
体ブランク吸光度を算出してかつ必要に応じて前記容量
補正を行ない、これを反応液の吸光度から差引く演算を
行なう演算部をプログラム制御されたマイクロプロセッ
サで構成して自動化するのが好ましい。かかる多項目生
化学分析装置の構成を第２図に示した。第２図において
、［ＩＨ２１・・・は複数の分析ライン、（３）は単一
のブランクライン、（４）　（４）・・・は測定液、（
４Ａ）は検体ブランク液、ｆ５）　（５）　（５１・・
・は検体分注器、！６Ｈ７）は反応試薬、（８）はブラ
ンク反応用試薬、（９）（至）は各々の項目測定用の波
長固定光学計測系、０１）は多波長測光可能な光学計測
系で（１１Ａ　”）は分光１１１ｉ１１２１は光電検出
器、（１３１は上記補正演ｎ部をそれぞれ示すものであ
る。

（ホ）作　用この発明の方法によれば、測定液中に存在する検体中の
懸濁物質の散乱等に基づく吸光度の正の誤差が補正され
ることとなる。

（へ）実施例３種類の実検体（乳び血清＞５０４に対して、各々ブラ
ンク反応用試薬として生理食塩水を２．５　ｘｌを加え
てブランク液を調製し、３４０ｎｍと７００ｎｍでの吸
光度を測定し、最小二乗法によって波長と吸光度の関係
Δ＝ａ　Ａｂｌ、：おける定数ａ及びｂを算出した。

かかる回帰関数に基づいて、このブランク液の４００．
４５０，５００，５５０，６００及び６５０ｎｍ　１．
：おける吸光度を締出した。一方、実際に３４０〜７０
０ｎｍの間で走査して得られたスペクトルは第３図に示
すごとくであった。

上記、回帰関数に基づいた４００〜６５０ｎｍの算出吸
光度と、実測値（第３図）による４００〜６５０ｎｍの
吸光度とを比較した結果を第１表に示す。

（以下余白、次頁に続く）第　　１　　表（単位　ｍＡｂｓ）このように、前記回帰関数による値と、実際の吸光度と
はほぼ一致しており、異なる波長におけるブランク液の
吸光度を実際に測定することなく、正確に推定すること
が可能であることが判る。従って、上記回帰関数を用い
ることにより多項目生化学分析における各項目について
濁りの補正を簡便に行なうことができることが判明した
。

（ト）発明の効果この発明の方法によれば、従来のごとぎ特殊な濁りの基
準液を用いることなく、しかも多数のブランクチャンネ
ルを必要ともせず、エンドポイント法による多項目生化
学分析を濁りによる誤差を生じることなく行なうことが
できる。従って、ことに犬山の検体を扱う生化学自動分
析方法や装置に極めて有用な方法である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、この発明の方法における波長−吸光度回帰関
数の決定についての説明図、第２図は、この発明の方法
を実施する装置を例示する構成説明図、第３図は実施例
における波長と吸光度との関係を示すグラフ図である。（４）・・・・・・測定液、　　（４Ａ）・・・・・・
検体ブランク液、（６）　［７・・・・・・反応試薬、
（８）・・・・・・ブランク反応用試薬、０１）・・・
・・・多波長測光可能な光学１１測系、ＯＪ・・・・・
・補正演算部。第　２図＋１Ａ第　３　！二１適長（ｎｍ）

Claims

【特許請求の範囲】１、懸濁物質が混在する検体の多項目生化学分析を行な
うに際し、各項目毎に分割された検体に各々の項目測定
用の反応試薬を混合して測定液とし、これら各測定液の
所定波長における吸光度を各々計測しこれらの各吸光度
に基づいて複数項目の定量を行なうことからなり、さらに検体にブランク反応用試薬を混合した一つの検体
ブランク液を調製し、このブランク液の吸光度を少なく
とも二種の波長により計測して波長−吸光度の回帰関数
を求め、この回帰関数から上記各項目についての計測波
長におけるブランク吸光度を算出し、この各ブランク吸
光度により上記各測定液の吸光度を補正することを特徴
とする多項目生化学分析方法。２、懸濁物質が混在する検体が、乳び血清である特許請
求の範囲第１項記載の分析法。