JPS6216424A - 抗腫瘍活性組成物 - Google Patents
抗腫瘍活性組成物Info
- Publication number
- JPS6216424A JPS6216424A JP60153787A JP15378785A JPS6216424A JP S6216424 A JPS6216424 A JP S6216424A JP 60153787 A JP60153787 A JP 60153787A JP 15378785 A JP15378785 A JP 15378785A JP S6216424 A JPS6216424 A JP S6216424A
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- Japan
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- water
- candida
- cells
- sugar
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、カンディダ属の菌体から得られる新規な抗腫
瘍活性組成物およびその製造方法に関する。
瘍活性組成物およびその製造方法に関する。
発明の背景
カンディダ属の菌体から抗腫瘍活性物質が得られろこと
は既に知られている。この既知の抗ＲｔＬ瘍活性物質は
、菌体を熱水抽出またはアルカリ抽出することにより得
られる水溶性高分子多糖類の混合物、即ちマンナン、グ
ルカンおよびグルコマンナンなどからなる、Ｔ−細胞の
関与する免疫強化物質である。
は既に知られている。この既知の抗ＲｔＬ瘍活性物質は
、菌体を熱水抽出またはアルカリ抽出することにより得
られる水溶性高分子多糖類の混合物、即ちマンナン、グ
ルカンおよびグルコマンナンなどからなる、Ｔ−細胞の
関与する免疫強化物質である。
本発明者らは、カンディダ属の菌体を、水および水と部
分的に混和する溶媒からなる二相系の溶媒で抽出して得
られる低分子量の非糖物質に、Ｔ−細胞か関与しない優
れた抗腫瘍性があることを見い出し本発明を完成した。
分的に混和する溶媒からなる二相系の溶媒で抽出して得
られる低分子量の非糖物質に、Ｔ−細胞か関与しない優
れた抗腫瘍性があることを見い出し本発明を完成した。
発明の目的
即ち本発明は、（１）カンディダ属の菌体を水および水
と部分的に混和する溶媒からなる二相系の溶媒で抽出し
、（２）抽出液から水層を分離し、（３）水相を蒸留水
に対して透析し、（４）透析処理した水層を限外濾過し
て分子量約３万以上の成分を除去し、（５）（４）で得
た濾液を糖吸着カラムに通して糖類を吸着除去し、（６
）次いで（５）で得た溶出液を透析処理した後凍結乾燥
することからなる抗腫瘍活性組成物の製造方法を提供す
るものである。
と部分的に混和する溶媒からなる二相系の溶媒で抽出し
、（２）抽出液から水層を分離し、（３）水相を蒸留水
に対して透析し、（４）透析処理した水層を限外濾過し
て分子量約３万以上の成分を除去し、（５）（４）で得
た濾液を糖吸着カラムに通して糖類を吸着除去し、（６
）次いで（５）で得た溶出液を透析処理した後凍結乾燥
することからなる抗腫瘍活性組成物の製造方法を提供す
るものである。
本発明はまた、上記の方法で製造された抗腫瘍活性組成
物を提供するものである。
物を提供するものである。
本発明の製造方法で使用し得るカンディダ属の好ましい
菌種としては、カンディダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉ
ｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンディダ・ウチリス（
Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ）、カンデイダ・ギレ
ルモンデイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎ
ｄｉｉ）などが挙げられろ。
菌種としては、カンディダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉ
ｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンディダ・ウチリス（
Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ）、カンデイダ・ギレ
ルモンデイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｅｒｍｏｎ
ｄｉｉ）などが挙げられろ。
本発明に於いては、対数増殖期にあるこれらの菌体を、
菌体重量の５〜４０倍の二相系溶媒で抽出する。二相系
溶媒は、略等容量の水および水と部分的に混和する溶媒
からなるが、後者の溶媒としてはブタノール、フェノー
ル等が好ましい。抽出は４〜１００℃の温度で３０分〜
２時間、攪拌下に行う。
菌体重量の５〜４０倍の二相系溶媒で抽出する。二相系
溶媒は、略等容量の水および水と部分的に混和する溶媒
からなるが、後者の溶媒としてはブタノール、フェノー
ル等が好ましい。抽出は４〜１００℃の温度で３０分〜
２時間、攪拌下に行う。
抽出液を遠心分離して菌体残渣を除き、次いで水層を分
離し、約２〜１０℃で３〜５日間蒸留水に対して透析し
、透析中に生じた沈殿を遠心分離で除去する。更にメン
ブランフィルタ−（孔径０２２〜１５０μｍ１好ましく
は１０〜５０μｍ）を用いて透析液を濾過した後、限外
濾過膜を用いて分子量約３万以上の物質を除去する。こ
の分子量分画には上記限外濾過法の外、ゲル濾過法等、
他の方法を用いることもできるが、操作時間の短い限外
濾過法が好ましい。得られた分子量約３万以下の低分子
量物質を含む濾液を、適当な糖吸着剤を充填したカラム
に通すことにより、糖類を除去する。この糖吸着剤とし
ては大豆レクチン、小麦胚レクチンなどを挙げることが
できるが、本発明方法に於いてはコンカナバリンＡをリ
ガンド（配位子）とする吸着剤（例、コンＡセファロー
ス）が特に好ましい。次いで、このカラムを素通りした
、糖を含有しない溶出液を２〜１０℃で蒸留水に対して
２〜５日間透析した後乾燥すると、黄白色〜赤褐色の粉
末として、本発明の抗腫瘍活性組成物が得られる。
離し、約２〜１０℃で３〜５日間蒸留水に対して透析し
、透析中に生じた沈殿を遠心分離で除去する。更にメン
ブランフィルタ−（孔径０２２〜１５０μｍ１好ましく
は１０〜５０μｍ）を用いて透析液を濾過した後、限外
濾過膜を用いて分子量約３万以上の物質を除去する。こ
の分子量分画には上記限外濾過法の外、ゲル濾過法等、
他の方法を用いることもできるが、操作時間の短い限外
濾過法が好ましい。得られた分子量約３万以下の低分子
量物質を含む濾液を、適当な糖吸着剤を充填したカラム
に通すことにより、糖類を除去する。この糖吸着剤とし
ては大豆レクチン、小麦胚レクチンなどを挙げることが
できるが、本発明方法に於いてはコンカナバリンＡをリ
ガンド（配位子）とする吸着剤（例、コンＡセファロー
ス）が特に好ましい。次いで、このカラムを素通りした
、糖を含有しない溶出液を２〜１０℃で蒸留水に対して
２〜５日間透析した後乾燥すると、黄白色〜赤褐色の粉
末として、本発明の抗腫瘍活性組成物が得られる。
この様にして得られる本発明に係る抗腫瘍活性組成物は
、水にやや溶は難い粉末である。その組成は、糖約５〜
８％、タンパク質的６０〜７０％および核酸的２５〜３
０％である。
、水にやや溶は難い粉末である。その組成は、糖約５〜
８％、タンパク質的６０〜７０％および核酸的２５〜３
０％である。
本発明に係る抗腫瘍活性組成物は、ヌードマウス（脚線
欠損マウス）に於いても腫瘍抑制活性を有すること、お
よび１回投与で高い腫瘍抑制を示すことから、カンディ
ダ属の菌体から得られる従来の免疫賦活剤（Ｔ−細胞関
与）とは異なる作用機作（Ｔ−細胞非関与）により、抗
腫瘍活性を発現するものと考えられる。
欠損マウス）に於いても腫瘍抑制活性を有すること、お
よび１回投与で高い腫瘍抑制を示すことから、カンディ
ダ属の菌体から得られる従来の免疫賦活剤（Ｔ−細胞関
与）とは異なる作用機作（Ｔ−細胞非関与）により、抗
腫瘍活性を発現するものと考えられる。
本発明の抗腫瘍活性組成物の急性毒性値はマウスに於け
る腹腔的投与で少なくともｌ ｇ／ｋｇ以上である。従
って、本発明組成物は、人間をも含めて種々の動物にお
ける悪性腫瘍の治療に有用であり、通常の担体または賦
形剤と共に製剤化し、様々な経路で投与することができ
る。好ましい投与経路は静脈注射、筋肉注射らしくは皮
下注射であり、この場合の投与量は、ヒト成人に対し、
約１００〜５００ Ｑ／日とすることができる。
る腹腔的投与で少なくともｌ ｇ／ｋｇ以上である。従
って、本発明組成物は、人間をも含めて種々の動物にお
ける悪性腫瘍の治療に有用であり、通常の担体または賦
形剤と共に製剤化し、様々な経路で投与することができ
る。好ましい投与経路は静脈注射、筋肉注射らしくは皮
下注射であり、この場合の投与量は、ヒト成人に対し、
約１００〜５００ Ｑ／日とすることができる。
以下、実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。
実施例１
５Ｑフラスコ８本に酵母エキス４．５％、ポリペプトン
９％、ブドウ糖１８％から成る培地を３Ｑづつ入れ、滅
菌冷却後カンディダ・アルビカンスＩＴ？’０１３８５
の前培養液３００ｍ（ｌをそれぞれ接種し、振盪しなが
ら３７℃で３時間培養し、培養液を遠心分離して湿ｍで
１６６ｇの菌体を得る。
９％、ブドウ糖１８％から成る培地を３Ｑづつ入れ、滅
菌冷却後カンディダ・アルビカンスＩＴ？’０１３８５
の前培養液３００ｍ（ｌをそれぞれ接種し、振盪しなが
ら３７℃で３時間培養し、培養液を遠心分離して湿ｍで
１６６ｇの菌体を得る。
これに８００ｍ（ｌの水を加えて懸局し、さらに８００
ｒｔｔＱのｎ−ブタノールを加え、４°Ｃで１時間攪拌
し、遠心分離した後、水層を分取する。これを４°Ｃで
３日間透析した後１、遠心分離して沈殿を除去し、孔径
３．Ｏｍｍのメンブランフィルタ−で濾過後、限外濾過
膜（アミコン社製ダイアフローホローファイバーカート
リッジトｔｌＰ３０−２０）を用いて分子量約３万以下
の両分を得る。この溶液をｄ 圧濃縮しコンＡセファロ
ース（ＣｏｎＡ ５ｅｐｈａｒｏｓＸフアルマンア製
コンカナノくリンＡをリガンドとして持つ多糖類であっ
て、糖蛋白等の吸着剤）カラムを通し、その索通り画分
を４℃で２日間透析した後凍結乾燥すると本発明の抗腫
瘍活性組成物が得られる。収量１１３ｍｇ。
ｒｔｔＱのｎ−ブタノールを加え、４°Ｃで１時間攪拌
し、遠心分離した後、水層を分取する。これを４°Ｃで
３日間透析した後１、遠心分離して沈殿を除去し、孔径
３．Ｏｍｍのメンブランフィルタ−で濾過後、限外濾過
膜（アミコン社製ダイアフローホローファイバーカート
リッジトｔｌＰ３０−２０）を用いて分子量約３万以下
の両分を得る。この溶液をｄ 圧濃縮しコンＡセファロ
ース（ＣｏｎＡ ５ｅｐｈａｒｏｓＸフアルマンア製
コンカナノくリンＡをリガンドとして持つ多糖類であっ
て、糖蛋白等の吸着剤）カラムを通し、その索通り画分
を４℃で２日間透析した後凍結乾燥すると本発明の抗腫
瘍活性組成物が得られる。収量１１３ｍｇ。
この様にして得た抗腫瘍活性組成物の赤外吸収スペクト
ルを第１図に示す。
ルを第１図に示す。
実施例２
実施例１と同じ培地に、カンデイダ・ウチリスＩＦＯＯ
３９６を接種し湿量で１３５９の菌体を得る。これに、
７００ｍＱの水を加え懸濁し、７００戚のｎ−ブタノー
ルを加え４℃で１時間攪拌し、以下実施例１と同様の操
作を行い、目的物質１３８Ｈを得た。
３９６を接種し湿量で１３５９の菌体を得る。これに、
７００ｍＱの水を加え懸濁し、７００戚のｎ−ブタノー
ルを加え４℃で１時間攪拌し、以下実施例１と同様の操
作を行い、目的物質１３８Ｈを得た。
実施例３
実施例１と同様にカンディダ・アルビカンス■ＦＯＩ３
８５の菌体を湿量で１５８９得る。これに８００度Ｃの
水を加え懸濁し、８００ｍＱのフェノールを加え５０℃
で１時間攪拌し、以下実施例１と同じ操作を行い、目的
物質７５ｍｇを得た。
８５の菌体を湿量で１５８９得る。これに８００度Ｃの
水を加え懸濁し、８００ｍＱのフェノールを加え５０℃
で１時間攪拌し、以下実施例１と同じ操作を行い、目的
物質７５ｍｇを得た。
薬理実験１
本発明組成物の抗腫瘍活性を動物実験により試験した。
ＢＡＬＢ／Ｃマウス６匹を１群とし、各マウスに同系腫
瘍であるコロンアデノカルシノーマ２６腫瘍を移植し、
処理群の動物には移植後５日目に被検物質２５肩９〜４
００ ｍ９／ ｋｇを腹腔内に１回投与した。対照群動
物には生理食塩水を同様に投与した。腫瘍移植後９日目
に腫瘍を摘出して重量を測定し、対照との比較に基づく
腫瘍抑制率を、下記の式に従って算出した。
瘍であるコロンアデノカルシノーマ２６腫瘍を移植し、
処理群の動物には移植後５日目に被検物質２５肩９〜４
００ ｍ９／ ｋｇを腹腔内に１回投与した。対照群動
物には生理食塩水を同様に投与した。腫瘍移植後９日目
に腫瘍を摘出して重量を測定し、対照との比較に基づく
腫瘍抑制率を、下記の式に従って算出した。
腫瘍抑制率（％）
その結果、本発明組成物１００Ｂを投与した場合の腫瘍
抑制率は７２％であった。
抑制率は７２％であった。
また、ＢΔＬＢ／Ｃヌードマウスに対し、上記と同様に
試験した結果、投与量２００ ｍ９／に９における腫瘍
抑制率は５３．２％であった。
試験した結果、投与量２００ ｍ９／に９における腫瘍
抑制率は５３．２％であった。
第１図は本発明組成物のＩｒｔスペクトルを示すグラフ
である。
である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、カンディダ属の菌体を水および水と部分的に混和す
る溶媒からなる二相系の溶媒で抽出して得られる組成物
であって、 （イ）分子量３０，０００以上の物質を実質的に含有せ
ず、 （ロ）その組成が糖約５〜８％、タンパク質約６０〜７
０％および核酸約２５〜３０％であり、（ハ）Ｔ−細胞
非関与の抗腫瘍活性を示す、ことを特徴とする抗腫瘍活
性組成物。 ２、（１）カンディダ属の菌体を水および水と部分的に
混和する溶媒からなる二相系の溶媒で抽出し、（２）抽
出液から水層を分離し、（３）水相を蒸留水に対して透
析し、（４）透析処理した水層を限外濾過して分子量約
３万以上の成分を除去し、（５）（４）で得た濾液を糖
吸着カラムに通して糖類を吸着除去し、（６）次いで（
５）で得た溶出液を透析処理した後凍結乾燥することか
らなる抗腫瘍活性組成物の製造方法。 ３、菌体が対数増殖期のものである第２項に記載の方法
。 ４、菌体がカンディダ・アルビカンス、カンディダ・ウ
チリスまたはカンディダ・ギレルモンディからなる群よ
り選択されるものである第２項に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60153787A JPS6216424A (ja) | 1985-07-11 | 1985-07-11 | 抗腫瘍活性組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60153787A JPS6216424A (ja) | 1985-07-11 | 1985-07-11 | 抗腫瘍活性組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6216424A true JPS6216424A (ja) | 1987-01-24 |
Family
ID=15570128
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60153787A Pending JPS6216424A (ja) | 1985-07-11 | 1985-07-11 | 抗腫瘍活性組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6216424A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1206939A1 (en) * | 1999-07-21 | 2002-05-22 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Cholesterol-lowering agents, secondary bile acid procuction inhibitors and foods and drinks |
| WO2022014508A1 (ja) * | 2020-07-17 | 2022-01-20 | フォーデイズ株式会社 | 癌細胞増殖抑制剤及び健康食品 |
-
1985
- 1985-07-11 JP JP60153787A patent/JPS6216424A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1206939A1 (en) * | 1999-07-21 | 2002-05-22 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Cholesterol-lowering agents, secondary bile acid procuction inhibitors and foods and drinks |
| EP1206939A4 (en) * | 1999-07-21 | 2003-04-16 | Yakult Honsha Kk | AGENTS FOR LOWERING CHOLESTEROL, AGENTS FOR INHIBITING THE PRODUCTION OF SECONDARY BILE ACIDS, FOOD AND BEVERAGES |
| KR100717742B1 (ko) | 1999-07-21 | 2007-05-11 | 가부시키가이샤 야쿠루트 혼샤 | 콜레스테롤 저하제，2차 담즙산 생산 억제제 및 음식품 |
| WO2022014508A1 (ja) * | 2020-07-17 | 2022-01-20 | フォーデイズ株式会社 | 癌細胞増殖抑制剤及び健康食品 |
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