JPS62103060A - チオコリン誘導体およびその用途 - Google Patents
チオコリン誘導体およびその用途Info
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- JPS62103060A JPS62103060A JP774286A JP774286A JPS62103060A JP S62103060 A JPS62103060 A JP S62103060A JP 774286 A JP774286 A JP 774286A JP 774286 A JP774286 A JP 774286A JP S62103060 A JPS62103060 A JP S62103060A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
イ、「産業上の利用分野」
本発明は、新規ヂオコリン誘導体およびその用途に関し
、更に詳しくはプソイドコリンエステラーゼ（アシルコ
リンアシルヒドロラーゼＥＣ，３゜１．１．８）の活性
測定に用いることができる新規ヂオコリン誘導体および
該誘導体を基質として用いるコリンエステラーゼ活性測
定方法ならびに測定用キットに関する。
、更に詳しくはプソイドコリンエステラーゼ（アシルコ
リンアシルヒドロラーゼＥＣ，３゜１．１．８）の活性
測定に用いることができる新規ヂオコリン誘導体および
該誘導体を基質として用いるコリンエステラーゼ活性測
定方法ならびに測定用キットに関する。
口、「従来の技術」
臨床検査において、血清中のコリンエステラーゼ（ＥＣ
，３，１，１，８）の活性を測定することは、肝実質障
害および栄養状態を反映する肝疾患などの診断に有用で
ある。
，３，１，１，８）の活性を測定することは、肝実質障
害および栄養状態を反映する肝疾患などの診断に有用で
ある。
コリンエステラーゼはエステラーゼの一種で、植物組織
には存在しないが、動物のほとんどの組織に存在してい
る。通常、酵素学的活性および生理的機能ならびに体内
分布を異にする２種類のコリンエステラーゼが存在する
。この内、一方をアセチルコリンエステラーゼ（ＥＣ，
３，１，１，７）（別名ツルーコリンエステラーゼ）と
いい、神経組織や赤血球膜に多く存在し、他方をコリン
エステラーゼ（ＥＣ，３，１，１，８）（別名プソイド
コリンエステラーゼ）といい、血清および肝、膵に多く
存在している。この内日常の臨床検査で測定されるのは
プソイドコリンエステラーゼであるが、検体として血清
を用いた際にツルーコリンエステラーゼに反応せず、プ
ソイドコリンエステラーゼに特異的に反応する基質を用
いることが検討されてきた。
には存在しないが、動物のほとんどの組織に存在してい
る。通常、酵素学的活性および生理的機能ならびに体内
分布を異にする２種類のコリンエステラーゼが存在する
。この内、一方をアセチルコリンエステラーゼ（ＥＣ，
３，１，１，７）（別名ツルーコリンエステラーゼ）と
いい、神経組織や赤血球膜に多く存在し、他方をコリン
エステラーゼ（ＥＣ，３，１，１，８）（別名プソイド
コリンエステラーゼ）といい、血清および肝、膵に多く
存在している。この内日常の臨床検査で測定されるのは
プソイドコリンエステラーゼであるが、検体として血清
を用いた際にツルーコリンエステラーゼに反応せず、プ
ソイドコリンエステラーゼに特異的に反応する基質を用
いることが検討されてきた。
プソイドコリンエステラーゼの測定用基質としては、従
来よりアセチルコリン、ブチリルコリン、ベンゾイルコ
リン等のアセルコリン類が用いられている。
来よりアセチルコリン、ブチリルコリン、ベンゾイルコ
リン等のアセルコリン類が用いられている。
しかし、ベンゾイルコリンやその誘導体であるｐ−ヒド
ロキンヘンジイルコリンや０−トルオイルコリンを基質
として用いた場合、一般に溶存酵素を必要とする共役酵
素系を測定系としているため、系は複雑となり、血清検
体中の種々の物質の干渉を受けるなどの問題点がある。
ロキンヘンジイルコリンや０−トルオイルコリンを基質
として用いた場合、一般に溶存酵素を必要とする共役酵
素系を測定系としているため、系は複雑となり、血清検
体中の種々の物質の干渉を受けるなどの問題点がある。
一方、アセデルチオコリンの誘導体であるアセデルチオ
コリン、プロピオニルチオコリン、ブチリルチオコリン
を基質として用い、プソイドコリンエステラーゼの作用
で遊離するチオコリンをＳ）［基試薬で発色させる方法
も知られている。しかし、この方法においてプソイドコ
リンエステラーゼの至適ｐＬＩである８〜８５では基質
の自己氷解が著しく多くなって使用できない欠点かある
。また、このアセデルチオコリン誘導体から遊離ずろＳ
Ｈ基をＤＴＮＢ（５，５°−ノチオビス−（２−ニトロ
安息香酸）で発色させろ方法もあるが、この方法では測
定感度（比活性）が高すぎるので、試薬量に比べて検体
量を極めて機工にしなければ通常の血清検体レベルのプ
ソイドコリンエステラーゼ活性を比色計を用いて測定す
ることが出来ないという欠点がある。特に最近の臨床化
学検査で用いられている自動分析装置や用手法で検定す
る際に、検体量が正確に採取できる容量（検体／反応液
量−Ｉ／３０以上）では感度が高すぎることが障害とな
っている。
コリン、プロピオニルチオコリン、ブチリルチオコリン
を基質として用い、プソイドコリンエステラーゼの作用
で遊離するチオコリンをＳ）［基試薬で発色させる方法
も知られている。しかし、この方法においてプソイドコ
リンエステラーゼの至適ｐＬＩである８〜８５では基質
の自己氷解が著しく多くなって使用できない欠点かある
。また、このアセデルチオコリン誘導体から遊離ずろＳ
Ｈ基をＤＴＮＢ（５，５°−ノチオビス−（２−ニトロ
安息香酸）で発色させろ方法もあるが、この方法では測
定感度（比活性）が高すぎるので、試薬量に比べて検体
量を極めて機工にしなければ通常の血清検体レベルのプ
ソイドコリンエステラーゼ活性を比色計を用いて測定す
ることが出来ないという欠点がある。特に最近の臨床化
学検査で用いられている自動分析装置や用手法で検定す
る際に、検体量が正確に採取できる容量（検体／反応液
量−Ｉ／３０以上）では感度が高すぎることが障害とな
っている。
ハ、［発明の目的］
本発明の目的は、このような従来技術に伴う種々の間開
に鑑み、ｐｌ−Ｒ８，Ｏ〜８，５で自己水解が極めて少
なく、指示反応系が簡便で、かつ検体量が容易に採取で
きる容量（検体／反応液量−１／３０以上）で十分な感
度を存するプソイドコリンエステラーゼの合成基質およ
びプソイドコリンエステラーゼの定量方法を提供ずろこ
とにある。
に鑑み、ｐｌ−Ｒ８，Ｏ〜８，５で自己水解が極めて少
なく、指示反応系が簡便で、かつ検体量が容易に採取で
きる容量（検体／反応液量−１／３０以上）で十分な感
度を存するプソイドコリンエステラーゼの合成基質およ
びプソイドコリンエステラーゼの定量方法を提供ずろこ
とにある。
二、［発明の構成］
本発明の一要旨は、一般式・
Ｙ−ＣＯ５ＣＨｔＣ１（ｔＮ”（ＣＨ＊）３Ｘ−（１）
［式中、Ｙは、式。
［式中、Ｙは、式。
（ここで、Ｒ，、Ｒ７およびＲ３は、同一または兄なっ
て、水素、ハロゲン、ニトロ基、低級アルキル括、低級
アルコキシ基、アセトアミノ基、ジ（低級アルキル）ア
ミノ基またはＬ（ＯＯＣＣＩ−１、０−基を表ず。但し
、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の少なくとも１つは水素ではな
い。） で示される置換フェニル基、 （ここで、ｎは２〜６の整数を表す。）て示されるノク
ロアルキル括またはそのアルキルあるいはアルコキン置
換誘導体、 Ｒ５−Ｃ−（ＩＶ） 李 ｎａ （ここで、ｎａ、ｒｔｓおよびＲ８は、全てがアルキル
基を表すか、１つが水素を表し、他の２つはアルキル基
を表すか、もしくは２つが水素を表し、他の１つはメヂ
ル基およびエチル基を除くアルキル基またはアリールア
ルキル基を表す。）で示される分岐アルキル基、もしく
は Ｘ−（ＣＨｓ）＊Ｎ”Ｃｌ−１ｔＣＨｔＳＣＯＲ（Ｖ）
（ここで、Ｒは、２価のアルキル基を表す。）で示され
る基を表す。Ｘはハロゲン原子を表す。］で示される新
規チオコリン誘導体に存する。
て、水素、ハロゲン、ニトロ基、低級アルキル括、低級
アルコキシ基、アセトアミノ基、ジ（低級アルキル）ア
ミノ基またはＬ（ＯＯＣＣＩ−１、０−基を表ず。但し
、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の少なくとも１つは水素ではな
い。） で示される置換フェニル基、 （ここで、ｎは２〜６の整数を表す。）て示されるノク
ロアルキル括またはそのアルキルあるいはアルコキン置
換誘導体、 Ｒ５−Ｃ−（ＩＶ） 李 ｎａ （ここで、ｎａ、ｒｔｓおよびＲ８は、全てがアルキル
基を表すか、１つが水素を表し、他の２つはアルキル基
を表すか、もしくは２つが水素を表し、他の１つはメヂ
ル基およびエチル基を除くアルキル基またはアリールア
ルキル基を表す。）で示される分岐アルキル基、もしく
は Ｘ−（ＣＨｓ）＊Ｎ”Ｃｌ−１ｔＣＨｔＳＣＯＲ（Ｖ）
（ここで、Ｒは、２価のアルキル基を表す。）で示され
る基を表す。Ｘはハロゲン原子を表す。］で示される新
規チオコリン誘導体に存する。
本発明の他の要旨は、一般式：
％式％（）
［式中、Ｙｏは、式：
（ここで、Ｒ°６、Ｒ’ｔおよびＲ゛、は、同一または
異なって、水素、ハロゲン、ニトロ基、低級アルキル基
、低級アルコキシ基、アセトアミノ基、ジ（低級アルキ
ル）アミノ基またはＨＯＯＣＣＨ！Ｏ−基を表す。） で示されるフェニル基、 （ここで、口は前記と同意義。） で示されるシクロアルキル基またはそのアルキルあるい
はアルコキシ置換誘導体、 ■ Ｒ５−Ｃ−（ＩＶ） ■ （ここで、Ｒ４、Ｒ６およびＲ１１は前記と同意義。）
で示される分岐アルキル基、もしくは Ｘ−（ＣＨ３）３Ｎ”ＣＨ，ＣＨｔＳＣＯＲ−（Ｖ）（
ここで、Ｒは前記と同意義。。） で示される基を表す。Ｘは前記と同意義。］で示される
チオコリン誘導体を基質として用い、プソイドコリンエ
ステラーゼの作用で遊離したチオコリンもしくは芳香族
または脂肪族化合物を定量することを特徴とするプソイ
ドコリンエステラーゼの定量方法および該チオコリン誘
導体を含むプソイドコリンエステラーゼの定量用キット
に存する。
異なって、水素、ハロゲン、ニトロ基、低級アルキル基
、低級アルコキシ基、アセトアミノ基、ジ（低級アルキ
ル）アミノ基またはＨＯＯＣＣＨ！Ｏ−基を表す。） で示されるフェニル基、 （ここで、口は前記と同意義。） で示されるシクロアルキル基またはそのアルキルあるい
はアルコキシ置換誘導体、 ■ Ｒ５−Ｃ−（ＩＶ） ■ （ここで、Ｒ４、Ｒ６およびＲ１１は前記と同意義。）
で示される分岐アルキル基、もしくは Ｘ−（ＣＨ３）３Ｎ”ＣＨ，ＣＨｔＳＣＯＲ−（Ｖ）（
ここで、Ｒは前記と同意義。。） で示される基を表す。Ｘは前記と同意義。］で示される
チオコリン誘導体を基質として用い、プソイドコリンエ
ステラーゼの作用で遊離したチオコリンもしくは芳香族
または脂肪族化合物を定量することを特徴とするプソイ
ドコリンエステラーゼの定量方法および該チオコリン誘
導体を含むプソイドコリンエステラーゼの定量用キット
に存する。
一般式中、ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素で
ある。また、低級アルキル基および低級アルコキシ基は
、炭素数ｌ〜８、特に１〜４のアルキル基およびアルコ
キシ基を意味し、アルキル基およびアルコキシ基に含ま
れるアルキル基は、直鎖または分岐状のいずれであって
もよい。なお、所望によりシクロアルキル基（Ｉ［［）
に置換基として存在するアルキルまたはアルコキシは、
炭素数１〜４のものか好ましい。
ある。また、低級アルキル基および低級アルコキシ基は
、炭素数ｌ〜８、特に１〜４のアルキル基およびアルコ
キシ基を意味し、アルキル基およびアルコキシ基に含ま
れるアルキル基は、直鎖または分岐状のいずれであって
もよい。なお、所望によりシクロアルキル基（Ｉ［［）
に置換基として存在するアルキルまたはアルコキシは、
炭素数１〜４のものか好ましい。
Ｙが置換フェニル基（ＩＩ）であるチオコリン誘導体（
１）の例としては、４−ニトロベンゾイルチオコリンハ
ライド、３−ニトロベンゾイルチオコリンハライド、２
−ニトロベンゾイルチオコリンハライド、４−クロロベ
ンゾイルチオコリンハライド、３−クロロベンゾイルチ
オコリンハライド、２−クロロベンゾイルチオコリンハ
ライド、４−メトキシベンゾイルヂオコリンハライド、
３−メトキシベンゾイルヂオコリンハライド、２−メト
キシベンゾイルヂオコリンハライド、２，４−ジメトキ
シベンゾイルチオコリンハライド、２．３−ジメトキシ
ベンゾイルチオコリンハライド、４−メチルベンゾイル
チオコリンハライド、３−メチルベンゾイルチオコリン
ハライド、２−メチルベンゾイルチオコリンハライド、
４−ｔ−ブチルベンゾイルチオコリンハライド、３−ｔ
−ブチルベンゾイルチオコリンハライド、２−ｔ−ブチ
ルベンゾイルチオコリンハライド、４−ヒドロキシベン
ゾイルチオコリンハライド、３−ヒドロキシベンゾイル
チオコリンハライド、２−ヒドロキシベンゾイルチオコ
リンハライド、４−アセトアミドベンゾイルチオコリン
ハライド、３−アセトアミドベンゾイルチオコリンハラ
イド、２−アセトアミドベンゾイルチオコリンハライド
等が挙げられろ。特にオルト位に置換基を有する誘導体
は、自己氷解性が低く、反応性が高いので有利である。
１）の例としては、４−ニトロベンゾイルチオコリンハ
ライド、３−ニトロベンゾイルチオコリンハライド、２
−ニトロベンゾイルチオコリンハライド、４−クロロベ
ンゾイルチオコリンハライド、３−クロロベンゾイルチ
オコリンハライド、２−クロロベンゾイルチオコリンハ
ライド、４−メトキシベンゾイルヂオコリンハライド、
３−メトキシベンゾイルヂオコリンハライド、２−メト
キシベンゾイルヂオコリンハライド、２，４−ジメトキ
シベンゾイルチオコリンハライド、２．３−ジメトキシ
ベンゾイルチオコリンハライド、４−メチルベンゾイル
チオコリンハライド、３−メチルベンゾイルチオコリン
ハライド、２−メチルベンゾイルチオコリンハライド、
４−ｔ−ブチルベンゾイルチオコリンハライド、３−ｔ
−ブチルベンゾイルチオコリンハライド、２−ｔ−ブチ
ルベンゾイルチオコリンハライド、４−ヒドロキシベン
ゾイルチオコリンハライド、３−ヒドロキシベンゾイル
チオコリンハライド、２−ヒドロキシベンゾイルチオコ
リンハライド、４−アセトアミドベンゾイルチオコリン
ハライド、３−アセトアミドベンゾイルチオコリンハラ
イド、２−アセトアミドベンゾイルチオコリンハライド
等が挙げられろ。特にオルト位に置換基を有する誘導体
は、自己氷解性が低く、反応性が高いので有利である。
Ｙが、基（１）〜（Ｖ）である本発明のチオコリン誘導
体（１）の例としては、ビバロイルヂオコリンハライド
、イソブチリルヂオコリンハライド、メチルプロピオニ
ルチオコリンハライド、ジメチルプロピオニルチオコリ
ンハライド、エチルプロピオニルチオコリンハライド、
シクロプロパンカルボニルチオコリンハライド、シクロ
ブタンカルボニルチオコリンハライド、シクロペンタン
カルボニルチオコリンハライド、シクロヘキサンカルボ
ニルチオコリンハライド、シクロへブタンカルボニルチ
オコリンハライド、メチルシクロプロパンカルボニルチ
オコリンハライド、ジメチルシクロプロパンカルボニル
チオコリンハライド、エチルシクロプロパンカルボニル
チオコリンハライド、メトキシシクロプロパンカルボニ
ルチオコリンハライド、ジメトキシシクロプロパンカル
ボニルチオコリンハライド、ジエチルシクロプロパンカ
ルボニルチオコリンハライド、エトキシシクロプロパン
カルボニルチオコリンハライド、ジェトキシシクロプロ
パンカルボニルチオコリンハライド、メチルシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライド、ジメチルシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライド、メトキシシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライト、ジメトキンシクロブ
タン力ルポニル千オコリンハライド、エチルシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライド、エトキシシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライド、メヂルンクロペンタ
ン力ルポニルチオコリンハライド、ジメチルシクロペン
クンカルボニルチオコリンハライド、メトキシシクロペ
ンタンカルボニルチオコリンハライド、ジメトキシシク
ロペンタンカルボニルチオコリンハライド、エチルシク
ロペンタン力ルポニルヂオコリンハライド、エトキシシ
クロペンタン力ルポニルヂオコリンハライド、メチルシ
クロブタンカルボニルチオコリンハライド、ジメチルシ
クロヘキサンカルボニルチオコリンハライド、メトキシ
シクロヘキサンカルボニルチオコリンハライド、ジメト
キシシクロヘキザン力ルポニルチオコリンハライド、エ
チルシクロヘキサンチオコリンハライド、エトキシシク
ロヘキサンカルボニルチオコリンハライド、メチルシク
ロへブタンカルボニルチオコリンハライド、ジメチルシ
クロへブタンカルボニルチオコリンハライド、メトキシ
シクロへブタンカルボニルチオコリンハライド、ジメト
キシシクロへブタンカルボニルチオコリンハライド、エ
チルシクロへブタンカルボニルチオコリンハライド、エ
トキシシクロへブタンカルボニルチオコリンハライド、
サクシニルチオコリンハライド等が挙げられる。
体（１）の例としては、ビバロイルヂオコリンハライド
、イソブチリルヂオコリンハライド、メチルプロピオニ
ルチオコリンハライド、ジメチルプロピオニルチオコリ
ンハライド、エチルプロピオニルチオコリンハライド、
シクロプロパンカルボニルチオコリンハライド、シクロ
ブタンカルボニルチオコリンハライド、シクロペンタン
カルボニルチオコリンハライド、シクロヘキサンカルボ
ニルチオコリンハライド、シクロへブタンカルボニルチ
オコリンハライド、メチルシクロプロパンカルボニルチ
オコリンハライド、ジメチルシクロプロパンカルボニル
チオコリンハライド、エチルシクロプロパンカルボニル
チオコリンハライド、メトキシシクロプロパンカルボニ
ルチオコリンハライド、ジメトキシシクロプロパンカル
ボニルチオコリンハライド、ジエチルシクロプロパンカ
ルボニルチオコリンハライド、エトキシシクロプロパン
カルボニルチオコリンハライド、ジェトキシシクロプロ
パンカルボニルチオコリンハライド、メチルシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライド、ジメチルシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライド、メトキシシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライト、ジメトキンシクロブ
タン力ルポニル千オコリンハライド、エチルシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライド、エトキシシクロブタ
ンカルボニルチオコリンハライド、メヂルンクロペンタ
ン力ルポニルチオコリンハライド、ジメチルシクロペン
クンカルボニルチオコリンハライド、メトキシシクロペ
ンタンカルボニルチオコリンハライド、ジメトキシシク
ロペンタンカルボニルチオコリンハライド、エチルシク
ロペンタン力ルポニルヂオコリンハライド、エトキシシ
クロペンタン力ルポニルヂオコリンハライド、メチルシ
クロブタンカルボニルチオコリンハライド、ジメチルシ
クロヘキサンカルボニルチオコリンハライド、メトキシ
シクロヘキサンカルボニルチオコリンハライド、ジメト
キシシクロヘキザン力ルポニルチオコリンハライド、エ
チルシクロヘキサンチオコリンハライド、エトキシシク
ロヘキサンカルボニルチオコリンハライド、メチルシク
ロへブタンカルボニルチオコリンハライド、ジメチルシ
クロへブタンカルボニルチオコリンハライド、メトキシ
シクロへブタンカルボニルチオコリンハライド、ジメト
キシシクロへブタンカルボニルチオコリンハライド、エ
チルシクロへブタンカルボニルチオコリンハライド、エ
トキシシクロへブタンカルボニルチオコリンハライド、
サクシニルチオコリンハライド等が挙げられる。
本発明のチオコリン誘導体（Ｉ）は、たとえば次のよう
にして合成することができる。
にして合成することができる。
一般式：
％式％
［式中、Ｙは前記と同意義。］
で示される酸塩化物とジメチルアミノエタンチオールと
を適当な溶媒（たとえば、ジエチルエーテル）にそれぞ
れ溶解し、いずれかを他方に攪拌しながらゆっくりと滴
下し、室温で結晶を析出させる。この結晶をアルカリ液
（たとえば炭酸ナトリウム液）で塩化物を遊離させ適当
な溶媒（たとえばジメチルエーテル）で抽出し、乾燥濾
過後、得られた生成物にハロゲン化メチルを加えて反応
させ、目的のチオコリンハライドを得る。
を適当な溶媒（たとえば、ジエチルエーテル）にそれぞ
れ溶解し、いずれかを他方に攪拌しながらゆっくりと滴
下し、室温で結晶を析出させる。この結晶をアルカリ液
（たとえば炭酸ナトリウム液）で塩化物を遊離させ適当
な溶媒（たとえばジメチルエーテル）で抽出し、乾燥濾
過後、得られた生成物にハロゲン化メチルを加えて反応
させ、目的のチオコリンハライドを得る。
本発明のプソイドコリンエステラーゼ測定方法では、プ
ソイドコリンエステラーゼの作用でチオコリン誘導体（
Ｉ゛）からチオコリンを遊離させ、Ｓ Ｌ１基試薬で発
色させ、これを通常の分光光度計や各種自動分析装置を
用いて定潰し、チオコリンの生成量を測定することによ
り定１的にプソイドコリンエステラーゼの活性を測定す
ることが出来ろ。
ソイドコリンエステラーゼの作用でチオコリン誘導体（
Ｉ゛）からチオコリンを遊離させ、Ｓ Ｌ１基試薬で発
色させ、これを通常の分光光度計や各種自動分析装置を
用いて定潰し、チオコリンの生成量を測定することによ
り定１的にプソイドコリンエステラーゼの活性を測定す
ることが出来ろ。
ＳＨ基試薬としては、従来から用いられているものはす
べて使用でき、−例としてＤ ｉ” Ｎ １３ （５。
べて使用でき、−例としてＤ ｉ” Ｎ １３ （５。
５°−ジチオビス−（２−ニトロ安息香酸）を示すこと
ができる。ＤＴＮＢをＳ Ｈ基試薬として用いると、Ｔ
ＮＢ （２−ニトロ−５−メルカプト安息香酸）が生成
して発色する。
ができる。ＤＴＮＢをＳ Ｈ基試薬として用いると、Ｔ
ＮＢ （２−ニトロ−５−メルカプト安息香酸）が生成
して発色する。
本発明のプソイドコリンエステラーゼ定量方法は、特に
臨床検査の分野では各種の自動分析装置を用いてキネチ
ック（Ｋ １ｎｅｔｉｃ）法で分析したり、プソイドコ
リンエステラーゼの阻害剤（たとえば、ネオスチグミン
）で反応を止め、終点法で分析する場合に応用すること
ができる。
臨床検査の分野では各種の自動分析装置を用いてキネチ
ック（Ｋ １ｎｅｔｉｃ）法で分析したり、プソイドコ
リンエステラーゼの阻害剤（たとえば、ネオスチグミン
）で反応を止め、終点法で分析する場合に応用すること
ができる。
Ｃ実施例］
次に実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、これ
らにより本発明が限定されるものではない。
らにより本発明が限定されるものではない。
参考例
ベンゾイルチオコリンヨーダイトの調製；−ノメヂルア
ミノエタンヂオール塩酸塩［（Ｃ）ｌ ３）ｚＮｃＨｔ
ｃＨｔｓＨ・ ＨＣρコ ３．５ｇを、炭酸ナトリウ
ム３ｇの水１５ｚＣ溶液に溶解する。
ミノエタンヂオール塩酸塩［（Ｃ）ｌ ３）ｚＮｃＨｔ
ｃＨｔｓＨ・ ＨＣρコ ３．５ｇを、炭酸ナトリウ
ム３ｇの水１５ｚＣ溶液に溶解する。
これをノエチルエーテル１５０ｘ＆により抽出し、抽出
液を硫酸ナトリウムで一夜乾燥する。硫酸ナトリウムを
濾去し、濾液に塩化ベンゾイルクロライド３．６９を撹
拌しながら滴Ｆし、析出ずろ結晶を濾取する。収量４ｇ
。
液を硫酸ナトリウムで一夜乾燥する。硫酸ナトリウムを
濾去し、濾液に塩化ベンゾイルクロライド３．６９を撹
拌しながら滴Ｆし、析出ずろ結晶を濾取する。収量４ｇ
。
このうち０．５９を炭酸ナトリウム０．３９の水１０ｍ
Ｑ溶液に溶解し、ジエチルエーテル７５肩（！により抽
出し、抽出液を硫酸ナトリウムで一夜乾燥する。硫酸ナ
トリウムを濾去し、ジエチルエーテル溶液全容を５０ｍ
Ｑに濃縮し、ヨウ化メチル０．４２ｇを加え、室温にて
撹拌を続ける。結晶の析出が起こり完全に析出がなくな
るところ（２日間）で撹拌を停止し、濾過し結晶を得ろ
。この結晶を水から再結晶し、目的のベンゾイルチオコ
リンヨーダイト０．５９を得た。収率７１．４％。融点
２５７℃。これはジャーナル・オブ・ノ・アメリカン・
ケミカル・ソザエテイ（Ｊ、 Ａｍ、 Ｃｈｃｍ、 Ｓ
ｏｃ、。
Ｑ溶液に溶解し、ジエチルエーテル７５肩（！により抽
出し、抽出液を硫酸ナトリウムで一夜乾燥する。硫酸ナ
トリウムを濾去し、ジエチルエーテル溶液全容を５０ｍ
Ｑに濃縮し、ヨウ化メチル０．４２ｇを加え、室温にて
撹拌を続ける。結晶の析出が起こり完全に析出がなくな
るところ（２日間）で撹拌を停止し、濾過し結晶を得ろ
。この結晶を水から再結晶し、目的のベンゾイルチオコ
リンヨーダイト０．５９を得た。収率７１．４％。融点
２５７℃。これはジャーナル・オブ・ノ・アメリカン・
ケミカル・ソザエテイ（Ｊ、 Ａｍ、 Ｃｈｃｍ、 Ｓ
ｏｃ、。
見見、＋７６５（＋９３５）に記載のアール・アール拳
ロイノヨーら（Ｒ，Ｒ，Ｒｅｕｓｈｏｗ ｅｔ ’ａｌ
）の報告の融点（Ｍ、Ｐ＝２５７℃）と一致した。
ロイノヨーら（Ｒ，Ｒ，Ｒｅｕｓｈｏｗ ｅｔ ’ａｌ
）の報告の融点（Ｍ、Ｐ＝２５７℃）と一致した。
実施例１
２．３−ジメトキシヘンゾイルチオコリンヨーダイドの
調製ニー ２．３−ジメトキシ安息香酸１７．８ｙ （０，１５ｍ
ｏｌ）に塩化チオニル１ＩｚＱを加え、反応後、過剰の
塩化チオニルをアスピレータ−にて除き、結晶状酸クロ
ライド＋ ７．６ｇを得た。収率８７，７％。
調製ニー ２．３−ジメトキシ安息香酸１７．８ｙ （０，１５ｍ
ｏｌ）に塩化チオニル１ＩｚＱを加え、反応後、過剰の
塩化チオニルをアスピレータ−にて除き、結晶状酸クロ
ライド＋ ７．６ｇを得た。収率８７，７％。
前記参考例と同様にして得たジメチルアミノエタンチオ
ールのジエチルエーテル溶液に、得られた酸クロライド
３．６９ （０，０１７５ｍｏｌ）を加え、析出した結
晶を濾取し、減圧乾燥した。収量４４３９ｏそのうち３
，１ｇを炭酸ナトリウムｌ、２ｇの水５０ｒｐＱ溶液に
溶解し、ノエチルエーテル１５０ｙＱにより抽出し、抽
出液を硫酸ナトリウムで一夜乾燥した。その後、ジエチ
ルエーテル溶液全容をｌｏｏｍＱとし、ヨウ化メチルｌ
ｘ（を加え、室温で２日間撹拌を続け、析出結晶を濾取
し、結晶を水から再結晶して、２，３−ノメトキシベン
ゾイルチオコリンヨーダイドを得た。融点１８４〜１８
５°ｃｏ この化合物の赤外吸収スペクトルおよびＮＭ
Ｒスペクトルを第１図および第２図に示す。
ールのジエチルエーテル溶液に、得られた酸クロライド
３．６９ （０，０１７５ｍｏｌ）を加え、析出した結
晶を濾取し、減圧乾燥した。収量４４３９ｏそのうち３
，１ｇを炭酸ナトリウムｌ、２ｇの水５０ｒｐＱ溶液に
溶解し、ノエチルエーテル１５０ｙＱにより抽出し、抽
出液を硫酸ナトリウムで一夜乾燥した。その後、ジエチ
ルエーテル溶液全容をｌｏｏｍＱとし、ヨウ化メチルｌ
ｘ（を加え、室温で２日間撹拌を続け、析出結晶を濾取
し、結晶を水から再結晶して、２，３−ノメトキシベン
ゾイルチオコリンヨーダイドを得た。融点１８４〜１８
５°ｃｏ この化合物の赤外吸収スペクトルおよびＮＭ
Ｒスペクトルを第１図および第２図に示す。
実施例２
基質の水溶性と特異性
各種チオコリン誘導体をＡ製し、それらの水溶性と水溶
液中ての安定性およびヒト血清に対する反応性を次の方
法で検討した。
液中ての安定性およびヒト血清に対する反応性を次の方
法で検討した。
下記組成の第一試薬２ 、５ ｗＱにヒト血清あるいは
精製水０２πＱを加え、３７℃で５分間加温後、第二試
Ｕ ０ 、５ ｗ１２を添加し、４０５ｎｍにおける１
分当たりの吸光度変化（ΔＥ／ｍｉｎ、）を測定した。
精製水０２πＱを加え、３７℃で５分間加温後、第二試
Ｕ ０ 、５ ｗ１２を添加し、４０５ｎｍにおける１
分当たりの吸光度変化（ΔＥ／ｍｉｎ、）を測定した。
第一試薬
トリスヒドロキンメヂルー ２４０ｍｍｏｌ／Ｑア
ミノメタン ５．５°−ノチオビス−０，３ｍｍｏｌ／Ｑ。
ミノメタン ５．５°−ノチオビス−０，３ｍｍｏｌ／Ｑ。
（２−ニトロ安息香酸）
マレイン酸 適ｍ
上記成分を精製水に溶解し、ｐＨ８、０に調製する。
第二試薬
各種チオコリン誘導体の水溶液 ６ｍｍｏｌ＃！錐溶
性の化合物についでは２５％エヂルアルコール水溶液を
用いて溶解した。
性の化合物についでは２５％エヂルアルコール水溶液を
用いて溶解した。
その結果、第１表に示すようにベンゾイルチオコリンエ
ステルおよび２．３−ジメトキンチオコリンエステルが
、水溶性、水溶液での安定性（試薬ブランクが小さい）
、反応性（１分間当たりの吸光度か０．０３以Ｌ）の点
で浸れていた。
ステルおよび２．３−ジメトキンチオコリンエステルが
、水溶性、水溶液での安定性（試薬ブランクが小さい）
、反応性（１分間当たりの吸光度か０．０３以Ｌ）の点
で浸れていた。
実施例３
下記の試薬および検体を調製し、第１試薬２゜４ｍ（ｌ
に各検体０ 、 ｌ ｍ（！を加え、３０℃で５分間加
温後、第２試薬０ 、５ ｍＱを添加し、３０℃で４０
５ｎｍにおけろ１分間当たりの吸光度変化（ΔＥ／ｍｉ
ｎ、）を測定して、検体の反応性を検討した。
に各検体０ 、 ｌ ｍ（！を加え、３０℃で５分間加
温後、第２試薬０ 、５ ｍＱを添加し、３０℃で４０
５ｎｍにおけろ１分間当たりの吸光度変化（ΔＥ／ｍｉ
ｎ、）を測定して、検体の反応性を検討した。
その結果、第２表に示すようにベンゾイルチオコリンヨ
ーダイトおよび２．３−ジメトキンベンゾイルチオコリ
ンヨーダイドは、ツルーコリンエステラーゼに反応性ず
プソイドコリンエステラーゼに特異的に反応することが
確認された。
ーダイトおよび２．３−ジメトキンベンゾイルチオコリ
ンヨーダイドは、ツルーコリンエステラーゼに反応性ず
プソイドコリンエステラーゼに特異的に反応することが
確認された。
第一試薬
トリスヒドロキシメチル １２．１９（ｌｏＯｍＭ
）アミノメタン ５．５′−ジチオビス １１８．９ｍ？（０，３
ｍＭ）（２−ニトロ安息香酸） マレイン酸 適屯 精製水 １ｇ（ＰＨ８，２）第二
試薬（Ａ） ベンゾイルチオコリン ２．１０７１０７９（６
ヨーダイト 精製水 ＩＱ 第二試薬（Ｂ） ２．３−ジメトキシベンゾイル２．４５５９（６ｍＭ）
チオコリンヨーダイト 精製水 ｌσ 検体（１） プソイドコリンエステラーゼ １３Ｕ／ｘｇ（シグマ
社） 検体（２） ツルーコリンエステラーゼ １３Ｕ／ｚＱ。
）アミノメタン ５．５′−ジチオビス １１８．９ｍ？（０，３
ｍＭ）（２−ニトロ安息香酸） マレイン酸 適屯 精製水 １ｇ（ＰＨ８，２）第二
試薬（Ａ） ベンゾイルチオコリン ２．１０７１０７９（６
ヨーダイト 精製水 ＩＱ 第二試薬（Ｂ） ２．３−ジメトキシベンゾイル２．４５５９（６ｍＭ）
チオコリンヨーダイト 精製水 ｌσ 検体（１） プソイドコリンエステラーゼ １３Ｕ／ｘｇ（シグマ
社） 検体（２） ツルーコリンエステラーゼ １３Ｕ／ｚＱ。
（シグマ社）
第２表
実施例４
トリスヒドロキシメチルアミノメタン（１００ｍｍｏｌ
ｄ）、５，５°−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸（０
、３ｍｍｏｌ／１２）を精製水に溶解し、マレイン酸で
ｐ＋−１７、０〜９．０に調節して各種溶液を調製する
。この溶液２．４１にプソイドコリンエステラーゼ（シ
グマ社製）（ブチリルチオコリン法で１３Ｕ／ｍＱに調
節）０．ｌｘ＆を加え、３０℃で５分間加温後、２．３
−ジメチルベンゾイルチオコリンヨーダイトまたはベン
ゾイルチオコリンヨーダイトの６ｍｍｏｌ／１２水溶液
０ 、５ ｍＱを加えて４０５ｎｍにおけろ吸光度の上
昇率を測定し、各ＰＨにおける反応性を検討した。
ｄ）、５，５°−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸（０
、３ｍｍｏｌ／１２）を精製水に溶解し、マレイン酸で
ｐ＋−１７、０〜９．０に調節して各種溶液を調製する
。この溶液２．４１にプソイドコリンエステラーゼ（シ
グマ社製）（ブチリルチオコリン法で１３Ｕ／ｍＱに調
節）０．ｌｘ＆を加え、３０℃で５分間加温後、２．３
−ジメチルベンゾイルチオコリンヨーダイトまたはベン
ゾイルチオコリンヨーダイトの６ｍｍｏｌ／１２水溶液
０ 、５ ｍＱを加えて４０５ｎｍにおけろ吸光度の上
昇率を測定し、各ＰＨにおける反応性を検討した。
その結果第３図に示すごとく、２．３−ジメチルベンゾ
イルチオコリンヨーダイトはｐＨ８，０〜８．５で最適
であり、ブランク反応（自己氷解）も１０ｍＡｂ／ｍｉ
ｎ以下でコリンエステラーゼ測定に適した基質であるこ
とがわかった。
イルチオコリンヨーダイトはｐＨ８，０〜８．５で最適
であり、ブランク反応（自己氷解）も１０ｍＡｂ／ｍｉ
ｎ以下でコリンエステラーゼ測定に適した基質であるこ
とがわかった。
実施例５
トリスヒドロキシメチルアミノメタン１００ｎｕｎｏｌ
／ Ｑ、 ５ 、５°−ジチオビス−（２−ニトロ安息
香酸０ 、３ ｍｍｏｌ／ （！を精製水に溶解し、マ
レイン酸でｐＨ８，２に調製する。この溶液２．４１に
プソイドコリンエステラーゼ（シグマ社製）（ブチリル
チオコリン法で１３Ｕ／ｚ（２に調節）Ｏ，１ｘ（７を
加え、２．３−ジメチルベンゾイルチオコリンヨーダイ
ト濃度０．０６〜ｌ ８ｍｍｏｌ／（！の基質溶液をそ
れぞれ加えて、本基質に対するプソイドコリンエステラ
ーゼのＫｍ値を検討した。この結果、第４図に示すごと
く、Ｋｒａ値はｌＸｌ０−’Ｍ付近で極めて小さく、１
ｍｍｏｌ／１２以上では最大活性の９０％以上を示し、
ブランク反応（自己氷解）も小さいため、コリンエステ
ラーゼ測定の基質として１ ｍｍｏｌ／１２の濃度でも
使用でき、有用であることがわかった。
／ Ｑ、 ５ 、５°−ジチオビス−（２−ニトロ安息
香酸０ 、３ ｍｍｏｌ／ （！を精製水に溶解し、マ
レイン酸でｐＨ８，２に調製する。この溶液２．４１に
プソイドコリンエステラーゼ（シグマ社製）（ブチリル
チオコリン法で１３Ｕ／ｚ（２に調節）Ｏ，１ｘ（７を
加え、２．３−ジメチルベンゾイルチオコリンヨーダイ
ト濃度０．０６〜ｌ ８ｍｍｏｌ／（！の基質溶液をそ
れぞれ加えて、本基質に対するプソイドコリンエステラ
ーゼのＫｍ値を検討した。この結果、第４図に示すごと
く、Ｋｒａ値はｌＸｌ０−’Ｍ付近で極めて小さく、１
ｍｍｏｌ／１２以上では最大活性の９０％以上を示し、
ブランク反応（自己氷解）も小さいため、コリンエステ
ラーゼ測定の基質として１ ｍｍｏｌ／１２の濃度でも
使用でき、有用であることがわかった。
実施例６
トリスヒドロキシメチルアミノメタン２４０ｍｍｏｌ／
１２．５．５゛−ジチオビス−（２−ニトロ安息香酸）
０ 、３ ｍｍｏｌ／ １２を含むｐＨ８，２の水溶
液（ｐＨ補正はマレイン酸で行った）を第一試薬とし、
第一試薬２．４ｔｐ（ｌにヒト直情検体０ 、１ Ｒ（
ｌを加え、３０°Ｃ恒温槽中て５分間予備加温後、２．
４−ジメチルベンゾイルチオコリンヨーダイト６ ｍｍ
ｏｌ／σの水溶ｔＬ０５ｍＱを加えて反応させた後、１
分間当たりの吸光度変化（ΔＡ）を４０５ｎｍで測定し
た。
１２．５．５゛−ジチオビス−（２−ニトロ安息香酸）
０ 、３ ｍｍｏｌ／ １２を含むｐＨ８，２の水溶
液（ｐＨ補正はマレイン酸で行った）を第一試薬とし、
第一試薬２．４ｔｐ（ｌにヒト直情検体０ 、１ Ｒ（
ｌを加え、３０°Ｃ恒温槽中て５分間予備加温後、２．
４−ジメチルベンゾイルチオコリンヨーダイト６ ｍｍ
ｏｌ／σの水溶ｔＬ０５ｍＱを加えて反応させた後、１
分間当たりの吸光度変化（ΔＡ）を４０５ｎｍで測定し
た。
なお、試薬ブランクは、検体を精製水として同様に行な
う（ΔＢ）。反応式は下記のようになる。
う（ΔＢ）。反応式は下記のようになる。
５１１Ｃ１１，ＣＩｌ、Ｎ“（ＣＩｌ３）３１−〕
上記のようにして求めた１分間当たりの吸光度変化から
ｆ式により本坊の測定値を求めた。
ｆ式により本坊の測定値を求めた。
ヘンジイルコリン法（片山化学（株））を参照法とした
場合の相関を見ると、第５図のように相関係数ｒ＝０．
９９９と良好な結果を得た（第３表参照）。
場合の相関を見ると、第５図のように相関係数ｒ＝０．
９９９と良好な結果を得た（第３表参照）。
また、ヒト血清検体の代わりに、高値プソイドコリンエ
ステラーゼ（シグマ社製）（ブチリルチオコリン法で３
０１ｔＪ／ｆｆ１２に調節）を１０段階希釈し、各下記
の式より求めて活性値との検ｍ線を求めたところ第６図
のように＋ ５０１ Ｕ／１２の高値（正常検体では３
０〜５０ ｒ Ｕ／１２）まで直線性を保った。
ステラーゼ（シグマ社製）（ブチリルチオコリン法で３
０１ｔＪ／ｆｆ１２に調節）を１０段階希釈し、各下記
の式より求めて活性値との検ｍ線を求めたところ第６図
のように＋ ５０１ Ｕ／１２の高値（正常検体では３
０〜５０ ｒ Ｕ／１２）まで直線性を保った。
第３表
本坊とベンゾイルコリン法の測定値の関係１３．３ ｘ
Ｏ，１ 検体のプソイドコリンエステラーゼ活性（ＩＵ＃）ΔＡ
：検体の３０℃での４０５ｎｍにおける１分間当たり
の吸光度変化 ΔＢ ：精製水の３０℃での４０５ｎｍにおける１分間
当たりの吸光度変化 ３．０ ：試薬と検体の総量 ０．１ ＝検体量 １３．３：チオ・ニトロ安息香酸の４０５ｎｍにおける
分子吸光係数 実施例フ イソブチリルチオコリンヨーダイドの調製ニージメチル
アミノエタンチオール塩酸塩５０９を炭酸ナトリウム水
溶液で遊離し、ｐＨ１０以上として塩化メヂレンにて抽
出し、減圧蒸留を行ないジメチルアミノエタンチオール
３０ｇを得た（収率８０．９％、沸点４０°Ｃ／ Ｉ
２ ｍｍＨｇ ）。このうち３．５９とイソブチリルク
ロライド３５ｇをジエチルエーテル１５０１１Ｉ２溶液
中で混和し、析出した結晶を濾取した。更にこれを炭酸
ナトリウム（１０％）水溶液に溶解し、 ｐＨＩ ０以
上とし、ジエチルエーテルで抽出し、抽出液を硫酸マグ
ネシウムで乾燥した。その後、全容３５０＋１２までジ
エチルエーテルを加え、これにヨウ化メチル５ＩＩＩＱ
を加え、室温にて撹拌した。析出結晶を濾取し、結晶を
水から再結晶して、イソブヂリルチオコリンヨーダイド
９．９ｇを得た。収率９４．６％。融点１５７〜１５８
℃。
Ｏ，１ 検体のプソイドコリンエステラーゼ活性（ＩＵ＃）ΔＡ
：検体の３０℃での４０５ｎｍにおける１分間当たり
の吸光度変化 ΔＢ ：精製水の３０℃での４０５ｎｍにおける１分間
当たりの吸光度変化 ３．０ ：試薬と検体の総量 ０．１ ＝検体量 １３．３：チオ・ニトロ安息香酸の４０５ｎｍにおける
分子吸光係数 実施例フ イソブチリルチオコリンヨーダイドの調製ニージメチル
アミノエタンチオール塩酸塩５０９を炭酸ナトリウム水
溶液で遊離し、ｐＨ１０以上として塩化メヂレンにて抽
出し、減圧蒸留を行ないジメチルアミノエタンチオール
３０ｇを得た（収率８０．９％、沸点４０°Ｃ／ Ｉ
２ ｍｍＨｇ ）。このうち３．５９とイソブチリルク
ロライド３５ｇをジエチルエーテル１５０１１Ｉ２溶液
中で混和し、析出した結晶を濾取した。更にこれを炭酸
ナトリウム（１０％）水溶液に溶解し、 ｐＨＩ ０以
上とし、ジエチルエーテルで抽出し、抽出液を硫酸マグ
ネシウムで乾燥した。その後、全容３５０＋１２までジ
エチルエーテルを加え、これにヨウ化メチル５ＩＩＩＱ
を加え、室温にて撹拌した。析出結晶を濾取し、結晶を
水から再結晶して、イソブヂリルチオコリンヨーダイド
９．９ｇを得た。収率９４．６％。融点１５７〜１５８
℃。
得られた化合物の赤外吸収スペクトルおよびＮＭＲスペ
クトルをそれぞれ第７図および第８図に示す。
クトルをそれぞれ第７図および第８図に示す。
実施例８
シクロヘキサンカルボニルチオコリンヨーダイトの調製
ニー 実施例７で調製したジメチルアミノエタンチオール３．
５ｇと、シクロヘキサンカルボニルクロライド４．８９
をジエチルエーテル１５０Ｒ１２中で混和し、析出した
結晶を濾取した。更に、これを炭酸ナトリウム（１０％
）水溶液に溶解し、Ｉ）Ｉ−１１０以上とし、ジエチル
エーテルで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥した。その
後、ジエチルエーテルで全容を３５０＋（とじ、ヨウ化
メチル５ｊ＋＆を加えて、室温にて撹拌した。析出結晶
を濾取し、結晶を水から再結晶してシクロヘキサンカル
ボニルチオコリンヨーダイト７ｇを得た。収率５９．４
％。融点１５９〜１６０℃。
ニー 実施例７で調製したジメチルアミノエタンチオール３．
５ｇと、シクロヘキサンカルボニルクロライド４．８９
をジエチルエーテル１５０Ｒ１２中で混和し、析出した
結晶を濾取した。更に、これを炭酸ナトリウム（１０％
）水溶液に溶解し、Ｉ）Ｉ−１１０以上とし、ジエチル
エーテルで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥した。その
後、ジエチルエーテルで全容を３５０＋（とじ、ヨウ化
メチル５ｊ＋＆を加えて、室温にて撹拌した。析出結晶
を濾取し、結晶を水から再結晶してシクロヘキサンカル
ボニルチオコリンヨーダイト７ｇを得た。収率５９．４
％。融点１５９〜１６０℃。
得られた化合物の赤外吸収スペクトルおよびＮＭＲスペ
クトルを第９図および第１０図に示す。
クトルを第９図および第１０図に示す。
実施例９
基質の水溶性および特異性
６種チオコリン誘導体を調製し、それらの水溶性と水溶
液中で安定性およびヒト血ｔｉ￥に対する反応性を次の
方法で検討した。
液中で安定性およびヒト血ｔｉ￥に対する反応性を次の
方法で検討した。
下記組成の第一試薬２ 、５ ｍ（ｌに第二試薬０．２
１を混合し、検体または精製水を０．０！５ｍＱ加えて
、３７℃で５分間加温後、第三試薬０．５１を添加し、
４０５ｎｍにおける１分間当りの吸光度変化（△Ｅ／ｍ
１ｎ）を測定した。
１を混合し、検体または精製水を０．０！５ｍＱ加えて
、３７℃で５分間加温後、第三試薬０．５１を添加し、
４０５ｎｍにおける１分間当りの吸光度変化（△Ｅ／ｍ
１ｎ）を測定した。
第一試薬
トリスヒドロキンメヂルアミノー
メタン ３２５ ｍｍｏｌ／ １
２マレイン酸 適量 上記成分を精製水に溶解し、３７℃、ｐＨ７，５に調整
した。
２マレイン酸 適量 上記成分を精製水に溶解し、３７℃、ｐＨ７，５に調整
した。
第二試薬
５．５°−ジチオビス（２−ニトロ
安息呑酸）水溶液 ０ 、６５ ｍｍｏｌ／
Ｑ裏五町 父種チオコリン誘導体水溶液 ３ 、２５ ｍｍｏｌ／
Ｑその結果、第４表に示すように、シクロへキサンカル
ボニルチオコリンヨーダイドおよびイソブチリルチオコ
リンヨーダイトが反応性試薬ブランクの安定性の点で特
に優れていた。
Ｑ裏五町 父種チオコリン誘導体水溶液 ３ 、２５ ｍｍｏｌ／
Ｑその結果、第４表に示すように、シクロへキサンカル
ボニルチオコリンヨーダイドおよびイソブチリルチオコ
リンヨーダイトが反応性試薬ブランクの安定性の点で特
に優れていた。
実施例ＩＯ
下記の試薬および検体を調製し、第一試薬２゜５ｍＱに
第二試薬０．２ ｖｒ（ｌを混合し、検体または精製水
０．０５ｍ１２を加え、３７℃で５分間加温後、第三試
薬（Ａ）または（Ｂ）０．５ＭＣを添加し、３７℃で４
０５ｎｍにおける１分間当りの吸光度変化（△Ｅ／ｍ１
ｎ）を測定して、検体の反応性を検討した。
第二試薬０．２ ｖｒ（ｌを混合し、検体または精製水
０．０５ｍ１２を加え、３７℃で５分間加温後、第三試
薬（Ａ）または（Ｂ）０．５ＭＣを添加し、３７℃で４
０５ｎｍにおける１分間当りの吸光度変化（△Ｅ／ｍ１
ｎ）を測定して、検体の反応性を検討した。
第一試薬
トリスヒドロキシメヂルアミノー
メタン ３２５ ｍｍｏｌ／＆マ
レイン酸 適量上記成分を精製水
に溶解し、３７℃、ｐＨ７，５に調整した。
レイン酸 適量上記成分を精製水
に溶解し、３７℃、ｐＨ７，５に調整した。
第二試薬
５．５゛−ジチオビス（２−ニトロ・
安Ｕ、香酸）水溶液 ０ 、６５ ｍｍｏｌ
／ Ｑ第三試薬 （Ａ）インブチリルチオコリンー ヨーダイド水溶液 ３ 、２５ ｍ’ｍｏｌ／
Ｑ（Ｂ）シクロヘキサンカルボニル− チオコリンヨーダイト水溶液 ３ 、２５ ｍｍｏｌ／ Ｑ 検体（＋） プソイドコリンエステラーゼ １３Ｕ／ｍＱ。
／ Ｑ第三試薬 （Ａ）インブチリルチオコリンー ヨーダイド水溶液 ３ 、２５ ｍ’ｍｏｌ／
Ｑ（Ｂ）シクロヘキサンカルボニル− チオコリンヨーダイト水溶液 ３ 、２５ ｍｍｏｌ／ Ｑ 検体（＋） プソイドコリンエステラーゼ １３Ｕ／ｍＱ。
（シグマ社）
検体（２）
ツルーコリンエステラーゼ Ｉ ３ Ｕ／ｍ（２（
シグマ社） その結果、第５表に示すように、イソブチリルチオコリ
ンヨーダイトおよびシクロヘキザン力ルポニルチオコリ
ンヨーダイドは、ツルーコリンエステラーゼには反応せ
ず、プソイドコリンエステラーゼに特異的に反応するこ
とが確認された。
シグマ社） その結果、第５表に示すように、イソブチリルチオコリ
ンヨーダイトおよびシクロヘキザン力ルポニルチオコリ
ンヨーダイドは、ツルーコリンエステラーゼには反応せ
ず、プソイドコリンエステラーゼに特異的に反応するこ
とが確認された。
実施例１１
トリスヒドロキシメチルアミノメタン（１００ｍｍｏｌ
／１２ ）、５，５−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸
）を精製水に溶解しく０ 、２５ ｍｍｏｌ／ ＆）、
マレイン酸でｐＨ７゜０〜９．０に調節して各種溶液を
調製した。これを第一試薬として２ 、４ ｍＱと人プ
ール血清０．０５ｉＣを加え、３７６Ｃで５分間加温後
、イソブチリルチオコリンヨーダイトまたはシクロヘキ
ザン力ルポ゛ニルチオコリンヨーダイトの６３ｍｍｏｌ
／Ｑ、水溶液０ 、５ ｍ（ｌをそれぞれ加えて、４０
５ｎｍにおける１分間当りの吸光度変化量を試薬ブラン
クを対照に求め、各１）１１における反応性を検討した
。
／１２ ）、５，５−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸
）を精製水に溶解しく０ 、２５ ｍｍｏｌ／ ＆）、
マレイン酸でｐＨ７゜０〜９．０に調節して各種溶液を
調製した。これを第一試薬として２ 、４ ｍＱと人プ
ール血清０．０５ｉＣを加え、３７６Ｃで５分間加温後
、イソブチリルチオコリンヨーダイトまたはシクロヘキ
ザン力ルポ゛ニルチオコリンヨーダイトの６３ｍｍｏｌ
／Ｑ、水溶液０ 、５ ｍ（ｌをそれぞれ加えて、４０
５ｎｍにおける１分間当りの吸光度変化量を試薬ブラン
クを対照に求め、各１）１１における反応性を検討した
。
その結果第１１図に示すごとく、いづれの基質において
も、ｐＨ８、０付近で最適であった。ブランク反応はｐ
Ｈ８、０付近では０．００５／ｍｉｎ以下であり、コリ
ンエステラーゼ測定に適する基質であることがわかった
。
も、ｐＨ８、０付近で最適であった。ブランク反応はｐ
Ｈ８、０付近では０．００５／ｍｉｎ以下であり、コリ
ンエステラーゼ測定に適する基質であることがわかった
。
実施例１２
トリスヒドロキシメチルアミノメタンを濃度６０ＩＩＩ
ｌｏｌ／ＱからＩ ２００ ｍｍｏｌ／ ｆ２の範囲で
、５．５−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）を０．２
５ｍｍｏｌ／１２の濃度で含み、マレイン酸でｐＨ８、
０に調節した溶液を調製した。この各種溶液２ 、６
ｍ（ｌに、人プール血清０．０５ｘＱを加え、３７℃で
５分間加温後、イソブチリルチオコリンヨーダイトまた
はシクロへキシルカルボニルチオコリンヨーダイトの６
．３ｍｍｏｌ／Ｑ水溶液０．５ｉｎ！を加えて、４０５
ｎｍにおける１分間当りの吸光度変化を測定し、トリス
緩衝液の至適濃度を求めた。この条件における反応の終
濃度をトリス緩衝液の濃度とした。
ｌｏｌ／ＱからＩ ２００ ｍｍｏｌ／ ｆ２の範囲で
、５．５−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）を０．２
５ｍｍｏｌ／１２の濃度で含み、マレイン酸でｐＨ８、
０に調節した溶液を調製した。この各種溶液２ 、６
ｍ（ｌに、人プール血清０．０５ｘＱを加え、３７℃で
５分間加温後、イソブチリルチオコリンヨーダイトまた
はシクロへキシルカルボニルチオコリンヨーダイトの６
．３ｍｍｏｌ／Ｑ水溶液０．５ｉｎ！を加えて、４０５
ｎｍにおける１分間当りの吸光度変化を測定し、トリス
緩衝液の至適濃度を求めた。この条件における反応の終
濃度をトリス緩衝液の濃度とした。
その結果、第１２図に示すごとく、いずれの基質におい
ても最終反応時のトリス緩衝液は１００ｍＭが最大活性
を示した。
ても最終反応時のトリス緩衝液は１００ｍＭが最大活性
を示した。
実施例１３
トリスヒドロキシメチルアミノメタン（１００ｍｍｏｌ
／Ｑ）および５，５°−ジチオビス−（２−ニトロ安息
香酸） （０、２５ｍｍｏｌ／＆）を含むｐｌ−（８，
０の水溶液（ｐＨはマレイン酸で補正）を第一試薬とし
、第一試薬２ 、６ ｍＱにブソイドコリンエステラー
ゼ（ングマ社製）（ブチリルチオコリン法で１３Ｕ／ｍ
Ｑに調節）０．０５ｆｆｆ２を加え、イソブチリルチオ
コリンヨーダイド濃度０．３８〜６ 、３ ｍｍｏｌ／
Ｑの基質溶液をそれぞれ０ 、５ ｔｔｔ（ｌ加えて、
本基質に対するプソイドコリンエステラーゼのＫｍ値を
検討した。この結果第１３図に示すごと＜Ｋｍ値は６，
９ＸＩＯ−５Ｍ付近で極めて小さく 、１ ｍｍｏｌ／
Ｑ以上で最大活性の９５％以上を示すことがわかった。
／Ｑ）および５，５°−ジチオビス−（２−ニトロ安息
香酸） （０、２５ｍｍｏｌ／＆）を含むｐｌ−（８，
０の水溶液（ｐＨはマレイン酸で補正）を第一試薬とし
、第一試薬２ 、６ ｍＱにブソイドコリンエステラー
ゼ（ングマ社製）（ブチリルチオコリン法で１３Ｕ／ｍ
Ｑに調節）０．０５ｆｆｆ２を加え、イソブチリルチオ
コリンヨーダイド濃度０．３８〜６ 、３ ｍｍｏｌ／
Ｑの基質溶液をそれぞれ０ 、５ ｔｔｔ（ｌ加えて、
本基質に対するプソイドコリンエステラーゼのＫｍ値を
検討した。この結果第１３図に示すごと＜Ｋｍ値は６，
９ＸＩＯ−５Ｍ付近で極めて小さく 、１ ｍｍｏｌ／
Ｑ以上で最大活性の９５％以上を示すことがわかった。
実施例１４
実施例１３で使用した基質イソブチリルチオコリンヨー
ダイトに代えてシクロヘキサンカルボニルチオコリンヨ
ーダイドを用い、０．１２６〜３゜１５ ｍｍｏｌ／１
２の基質溶液を調製し、実施例１３と同様の試験を行な
った。シクロヘキサンカルボニルチオコリンヨーダイド
に対するプソイドコリンエステラーゼのＫｍ値は第１４
図に示すごとく６゜９ｘｌＯ−’Ｍ付近で、イソブチリ
ルチオコリンヨーダイトとほぼ同様のＫｆｆｌ値を示し
た。
ダイトに代えてシクロヘキサンカルボニルチオコリンヨ
ーダイドを用い、０．１２６〜３゜１５ ｍｍｏｌ／１
２の基質溶液を調製し、実施例１３と同様の試験を行な
った。シクロヘキサンカルボニルチオコリンヨーダイド
に対するプソイドコリンエステラーゼのＫｍ値は第１４
図に示すごとく６゜９ｘｌＯ−’Ｍ付近で、イソブチリ
ルチオコリンヨーダイトとほぼ同様のＫｆｆｌ値を示し
た。
実施例１５
トリスヒドロキシメチルアミノメタン１００ｍｍｏｌ／
＆、 ５ 、５ ’−ジチオビスー（２−ニトロ安息香
酸） （０、２５ｍｍｏｌ／１２）を含むｐＨ８、０の
水溶液（ｐＨはマレイン酸で補正）を第一試薬とし、第
一試薬２ 、６ ＊Ｑにヒト血清検体０．０５１１２を
加え、３７℃で５分間加温後、第二試薬としてイソブチ
リルチオコリンヨーダイト０ 、６２ ｍｍｏｌ／ Ｑ
の水溶液０ 、５ ＊Ｑを加えて反応させた後、１分間
当りの吸光度変化（△Ａ）を４０５ｎｍで測定した。試
薬ブランクは検体の代りに精製水を用い、同様に行なっ
た（ΔＢ）。
＆、 ５ 、５ ’−ジチオビスー（２−ニトロ安息香
酸） （０、２５ｍｍｏｌ／１２）を含むｐＨ８、０の
水溶液（ｐＨはマレイン酸で補正）を第一試薬とし、第
一試薬２ 、６ ＊Ｑにヒト血清検体０．０５１１２を
加え、３７℃で５分間加温後、第二試薬としてイソブチ
リルチオコリンヨーダイト０ 、６２ ｍｍｏｌ／ Ｑ
の水溶液０ 、５ ＊Ｑを加えて反応させた後、１分間
当りの吸光度変化（△Ａ）を４０５ｎｍで測定した。試
薬ブランクは検体の代りに精製水を用い、同様に行なっ
た（ΔＢ）。
反応式は下記のようになる：
ＣＨ３
ＣＨｓ ＣＣ０５ＣＨｔＣＨｔＮ”（ＣＨａ）ｓｌ−
ＨＳＣＨｚＣＨｔＮ”（ＣＨａ）ｓＥ−２ＨＳＧＨｚＣ
Ｈ＊Ｎ”（ＣＨ３）５ ＋−〉 ２［−５ＣＨｙＣｔ
ｌｔＮ”（ＣＩＩ＊）ｓｌ ＋Ｌ記のようにして求め
た１分間当りの吸光度変化から下式により本性の測定値
を求めた：検体のプソイドコリンエステラーゼ活性（Ｉ
Ｕ／のΔＡ ：検体の３０℃での４０５ｎｍにおける
１分間当たりの吸光度変化 ΔＢ ・精製水の３０°Ｃでの４０５ｎｍにおけろ１
分間当たりの吸光度変化 試薬検体総量：３．１５ 検体量 ：０．０５ １３．３ ・チオ・ニトロ安息香酸の４０５ｎｍにおけ
る分子吸光係数。
ＨＳＣＨｚＣＨｔＮ”（ＣＨａ）ｓＥ−２ＨＳＧＨｚＣ
Ｈ＊Ｎ”（ＣＨ３）５ ＋−〉 ２［−５ＣＨｙＣｔ
ｌｔＮ”（ＣＩＩ＊）ｓｌ ＋Ｌ記のようにして求め
た１分間当りの吸光度変化から下式により本性の測定値
を求めた：検体のプソイドコリンエステラーゼ活性（Ｉ
Ｕ／のΔＡ ：検体の３０℃での４０５ｎｍにおける
１分間当たりの吸光度変化 ΔＢ ・精製水の３０°Ｃでの４０５ｎｍにおけろ１
分間当たりの吸光度変化 試薬検体総量：３．１５ 検体量 ：０．０５ １３．３ ・チオ・ニトロ安息香酸の４０５ｎｍにおけ
る分子吸光係数。
ベンゾイルコリン法（片山化学株式会社）を参照法とし
た場合の相関を見ると、第６表および第１５図のように
、相関係数ｒ＝０．９９８を示し、良好な結果を得た。
た場合の相関を見ると、第６表および第１５図のように
、相関係数ｒ＝０．９９８を示し、良好な結果を得た。
またヒト血清検体の代わりに高値プソイドコリンエステ
ラーゼ（シグマ社）（ブチリルチオコリン法で３０１０
／ｍ１２に調整）を１０段階希釈し、活性値との検量線
を求めたところ、第６表および第１６図のように１６０
０１ Ｕ／Ｑまで（正常検体３００〜７ｏｏｔｕ／ｉ２
）直線性を保った。
ラーゼ（シグマ社）（ブチリルチオコリン法で３０１０
／ｍ１２に調整）を１０段階希釈し、活性値との検量線
を求めたところ、第６表および第１６図のように１６０
０１ Ｕ／Ｑまで（正常検体３００〜７ｏｏｔｕ／ｉ２
）直線性を保った。
第６表
第６表（続）
実施例１６
実施例１５と同様の手順を、基質に用いる第二試薬をシ
クロヘキサンカルボニルチオコリンヨーダイト０ 、６
２１１Ｉｍｏｌ／ １２の水溶液に代えて行なったとこ
ろ、第７表および第１７図のように、相関係数ｒ＝０．
９９８を示し、良好な結果を得た。
クロヘキサンカルボニルチオコリンヨーダイト０ 、６
２１１Ｉｍｏｌ／ １２の水溶液に代えて行なったとこ
ろ、第７表および第１７図のように、相関係数ｒ＝０．
９９８を示し、良好な結果を得た。
また同様に行なった活性値との検量線は、第１８図のよ
うに、３０００１Ｕ／（２まで（正常検体６００〜＋
５００１ Ｕ／Ｑ ）直線性を保った。
うに、３０００１Ｕ／（２まで（正常検体６００〜＋
５００１ Ｕ／Ｑ ）直線性を保った。
第７表
第７表（続）
実施例１７
フエニルアセチルチオコリンヨーダイドの調製実施例７
で調製したジメチルアミノエタンチオール３．０ｇとフ
ェニルアセチルクロライド３．１ｇをジエチルエーテル
１５０ｍ１２中で混和し、析出した結晶を濾取した。更
に、これを１０％炭酸ナトリウム水溶液に溶解し、ｐＨ
１０以上とし、ジエチルエーテルで抽出し、硫酸マグネ
シウムで乾燥した。その後、ジエチルエーテルで全容を
３５０ｘＱとし、ヨウ化メチル３ｙＱを加えて、室温に
て撹拌した。析出結晶を濾取し、結晶を水から再結晶化
してフェニルアセチルチオコリンヨーダイドロ。
で調製したジメチルアミノエタンチオール３．０ｇとフ
ェニルアセチルクロライド３．１ｇをジエチルエーテル
１５０ｍ１２中で混和し、析出した結晶を濾取した。更
に、これを１０％炭酸ナトリウム水溶液に溶解し、ｐＨ
１０以上とし、ジエチルエーテルで抽出し、硫酸マグネ
シウムで乾燥した。その後、ジエチルエーテルで全容を
３５０ｘＱとし、ヨウ化メチル３ｙＱを加えて、室温に
て撹拌した。析出結晶を濾取し、結晶を水から再結晶化
してフェニルアセチルチオコリンヨーダイドロ。
０９を得た。融点１８２〜１８３℃。収率５７．７％。
得られた化合物の赤外線吸収スペクトルおよびＮＭＲス
ペクトルを第１９図および第２０図に示す。
ペクトルを第１９図および第２０図に示す。
実施例１８
フェニルプロピオニルチオコリンヨータイトのコ１′、
Ｉ製 一 実施例７で調製したジメチルアミノエタンチオール３０
ｇとフェニルプロピオニルクロライド３３ｇをジエチル
エーテル１５ＯＩｌＩＱ中で混和し、析出した結晶を濾
取した。更に、これを１０％炭酸ナトリウム水溶液に溶
解し、ｐｔｉ ｌ ０以上とし、ジエチルエーテルで抽
出し、硫酸マグネシウムで１記燥した。その後、ジエチ
ルエーテルで全容を３５０ｍ（ｌとし、ヨウ化メチル３
ｍＱを加えて、室温にて撹拌した。析出結晶を濾取し、
結晶を水から再結晶化して、フェニルプロピオニルチオ
コリンヨータイト７．０ｇを得た。融点２００〜２０１
’Ｃ。
Ｉ製 一 実施例７で調製したジメチルアミノエタンチオール３０
ｇとフェニルプロピオニルクロライド３３ｇをジエチル
エーテル１５ＯＩｌＩＱ中で混和し、析出した結晶を濾
取した。更に、これを１０％炭酸ナトリウム水溶液に溶
解し、ｐｔｉ ｌ ０以上とし、ジエチルエーテルで抽
出し、硫酸マグネシウムで１記燥した。その後、ジエチ
ルエーテルで全容を３５０ｍ（ｌとし、ヨウ化メチル３
ｍＱを加えて、室温にて撹拌した。析出結晶を濾取し、
結晶を水から再結晶化して、フェニルプロピオニルチオ
コリンヨータイト７．０ｇを得た。融点２００〜２０１
’Ｃ。
収率６４８％。
得られた化合物の赤外線吸収スペクトルおよびＮ Ｍ
（（スペクトルを第２１図および第２２図に示す。
（（スペクトルを第２１図および第２２図に示す。
ポ［発明の効果］
コリンエステラーゼ活性測定用の基質として本発明のチ
オコリン誘導体を用いることによりコリンエステラーゼ
の至適ｐｔ＋ｓ、ｏ〜８．５において自己氷解が少なく
、用手法や、検体量を正確に採取できる容量（検体／反
応液量＝ １／３０以上）での自動分析装置への応用が
可能であり、従来のブチリルコリン等の基質を用いるよ
り広範囲にしかも正確に測定できる。
オコリン誘導体を用いることによりコリンエステラーゼ
の至適ｐｔ＋ｓ、ｏ〜８．５において自己氷解が少なく
、用手法や、検体量を正確に採取できる容量（検体／反
応液量＝ １／３０以上）での自動分析装置への応用が
可能であり、従来のブチリルコリン等の基質を用いるよ
り広範囲にしかも正確に測定できる。
第１図は、実施例！で製造した化合物の赤外線吸収スペ
クトル 第２図は、実施例１で製造した化合物のＮ Ｍ Ｒスペ
クトル、 第３図は、実施例４におけるコリンエステラーゼ活性お
よび自己氷解とｌ）Ｈの関係を示す図、第４図は、実施
例５における２、３−ジメトキシベンゾイルチオコリン
ヨーダイト濃度とコリンエステラーゼ活性の関係を示す
図、 第５図は、実施例６の本発明方法とベンゾイルコリン法
との相関を示す図、および 第６図は、実施例６における本発明方法の直線性を示す
図である。 第７図は、実施例７で製造した化合物の赤外線吸収スペ
クトル 第８図は、実施例７で製造した化合物のＮＭＲスペクト
ル、 第９図は、実施例８で製造した化合物の赤外線吸収スペ
クトル 第１０図は、実施例８で製造した化合物のＮＭＲスペク
トル、 第１１図は、実施例１１におけるコリンエステラーゼ活
性および自己氷解とｐＨの関係を示す図、第１２図は、
トリス緩衝液の指通濃度を示す図、第１３図は、イソブ
チリルチオコリンヨーダイト基質に対するプソイドコリ
ンエステラーゼのＫｍ値を示す図、 第１４図は、シクロヘキサンカルボニルチオコリンヨー
ダイト基質に対するプソイドコリンエステラーゼのＫｍ
値を示す図、 第１５図は、実施例Ｉ５の本発明方法とベンゾイルコリ
ン法との相関を示す図、 第１６２１は、実施例Ｉ５における希釈度と活性値との
関係を示す図、 第１７図は、実施例１６の本発明方法とベンゾイルコリ
ン法との相関を示す図、 第１８図は、実施例１６における希釈度と活性値との関
係を示す図、 第１９図および第２０図は、実施例１７で製造した化合
物の赤外線吸収スペクトルおよびＮＭＲスペクトル、な
らびに 第２１図および第２２図は、実施例Ｉ８で製造した化合
物の赤外線吸収スペクトルおよびＮＭＲスペクトルであ
る。
クトル 第２図は、実施例１で製造した化合物のＮ Ｍ Ｒスペ
クトル、 第３図は、実施例４におけるコリンエステラーゼ活性お
よび自己氷解とｌ）Ｈの関係を示す図、第４図は、実施
例５における２、３−ジメトキシベンゾイルチオコリン
ヨーダイト濃度とコリンエステラーゼ活性の関係を示す
図、 第５図は、実施例６の本発明方法とベンゾイルコリン法
との相関を示す図、および 第６図は、実施例６における本発明方法の直線性を示す
図である。 第７図は、実施例７で製造した化合物の赤外線吸収スペ
クトル 第８図は、実施例７で製造した化合物のＮＭＲスペクト
ル、 第９図は、実施例８で製造した化合物の赤外線吸収スペ
クトル 第１０図は、実施例８で製造した化合物のＮＭＲスペク
トル、 第１１図は、実施例１１におけるコリンエステラーゼ活
性および自己氷解とｐＨの関係を示す図、第１２図は、
トリス緩衝液の指通濃度を示す図、第１３図は、イソブ
チリルチオコリンヨーダイト基質に対するプソイドコリ
ンエステラーゼのＫｍ値を示す図、 第１４図は、シクロヘキサンカルボニルチオコリンヨー
ダイト基質に対するプソイドコリンエステラーゼのＫｍ
値を示す図、 第１５図は、実施例Ｉ５の本発明方法とベンゾイルコリ
ン法との相関を示す図、 第１６２１は、実施例Ｉ５における希釈度と活性値との
関係を示す図、 第１７図は、実施例１６の本発明方法とベンゾイルコリ
ン法との相関を示す図、 第１８図は、実施例１６における希釈度と活性値との関
係を示す図、 第１９図および第２０図は、実施例１７で製造した化合
物の赤外線吸収スペクトルおよびＮＭＲスペクトル、な
らびに 第２１図および第２２図は、実施例Ｉ８で製造した化合
物の赤外線吸収スペクトルおよびＮＭＲスペクトルであ
る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式： Ｙ−ＣＯＳＣＨ＿２ＣＨ＿２＾＋（ＣＨ＿３）＿３Ｘ＾
−（ I ）［式中、Ｙは、式： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （ここで、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびＲ＿３は、同一または
異なって、水素、ハロゲン、ニトロ基、低級アルキル基
、低級アルコキシ基、アセトアミノ基、ジ（低級アルキ
ル）アミノ基またはＨＯＯＣＣＨ＿２Ｏ−基を表す。但
し、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびＲ＿３の少なくとも１つは水
素ではない。） で示される置換フェニル基、 ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （ここで、ｎは２〜６の整数を表す。） で示されるシクロアルキル基またはそのアルキルあるい
はアルコキシ置換誘導体、 ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （ここで、Ｒ＿４、Ｒ＿５およびＲ＿８は、全てがアル
キル基を表すか、１つが水素を表し、他の２つはアルキ
ル基を表すか、もしくは２つが水素を表し、他の１つは
メチル基およびエチル基を除くアルキル基またはアリー
ルアルキル基を表す。） で示される分岐アルキル基、もしくは Ｘ−（ＣＨ＿３）＿３Ｎ＾＋ＣＨ＿２ＣＨ＿２ＳＣＯＲ
−（Ｖ）（ここで、Ｒは、２価のアルキル基を表す。）
で示される基を表す。Ｘはハロゲン原子を表す。］で示
されるチオコリン誘導体。 ２、一般式： Ｙ′−ＣＯＳＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｎ＾＋（ＣＨ＿３）＿３
Ｘ＾−（ I ′）［式中、Ｙ′は、式： ▲数式、化学式、表等があります▼（II′） （ここで、Ｒ′＿１、Ｒ′＿２、およびＲ′＿３、は、
同一または異なって、水素、ハロゲン、ニトロ基、低級
アルキル基、低級アルコキシ基、アセトアミノ基、ジ（
低級アルキル）アミノ基またはＨＯＯＣＣＨ＿２Ｏ−基
を表す。） で示されるフェニル基、 ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （ここで、ｎは２〜６の整数を表す。） で示されるシクロアルキル基またはそのアルキルあるい
はアルコキシ置換誘導体、 ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （ここで、Ｒ＿４、Ｒ＿５およびＲ＿６は、全てがアル
キル基を表すか、１つが水素を表し、他の２つはアルキ
ル基を表すか、もしくは２つが水素を表し、他の１つは
メチル基およびエチル基を除くアルキル基またはアリー
ルアルキル基を表す。） で示される分岐アルキル基、もしくは Ｘ＾−（ＣＨ＿３）＿３Ｎ＾＋ＣＨ＿２ＣＨ＿２ＳＣＯ
Ｒ−（Ｖ）（ここで、Ｒは、２価のアルキル基を表す。 ）で示される基を表す。Ｘはハロゲン原子を表す。］で
示されるチオコリン誘導体を基質として用い、プソイド
コリンエステラーゼの作用で該基質から遊離したチオコ
リンらしくは芳香族または脂肪族化合物を定量すること
を特徴とするプソイドコリンエステラーゼの定量方法。 ３、一般式： Ｙ′−ＣＯＳＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｎ＾＋（ＣＨ＿３）＿３
Ｘ＾−（ I ′）［式中、Ｙ′は、式： ▲数式、化学式、表等があります▼（II′） （ここで、Ｒ′＿１、Ｒ′＿２、およびＲ′＿３は、同
一または異なって、水素、ハロゲン、ニトロ基、低級ア
ルキル基、低級アルコキシ基、アセトアミノ基、ジ（低
級アルキル）アミノ基またはＨＯＯＣＣＨ＿２Ｏ−基を
表す。） で示されるフェニル基、 ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （ここで、ｎは２〜６の整数を表す。） で示されるシクロアルキル基またはそのアルキルあるい
はアルコキシ置換誘導体、 ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （ここで、Ｒ＿４、Ｒ＿５およびＲ＿６は、全てがアル
キル基を表すか、１つが水素を表し、他の２つはアルキ
ル基を表すか、もしくは２つが水素を表し、他の１つは
メチル基およびエチル基を除くアルキル基またはアリー
ルアルキル基を表す。） で示される分岐アルキル基、もしくは Ｘ＾−（ＣＨ＿３）＿３Ｎ＾＋ＣＨ＿２ＣＨ＿２ＳＣＯ
Ｒ−（Ｖ）（ここで、Ｒは、２価のアルキル基を表す。 ）で示される基を表す。Ｘはハロゲン原子を表す。］で
示されるチオコリン誘導体を基質として含むことを特徴
とするプソイドコリンエステラーゼ定量用キット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14368985 | 1985-06-28 | ||
| JP60-143689 | 1985-06-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62103060A true JPS62103060A (ja) | 1987-05-13 |
| JPH0629239B2 JPH0629239B2 (ja) | 1994-04-20 |
Family
ID=15344665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP774286A Expired - Lifetime JPH0629239B2 (ja) | 1985-06-28 | 1986-01-16 | チオコリン誘導体およびその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0629239B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111333556A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-06-26 | 苏州百灵威超精细材料有限公司 | 一种制备碘化乙酰硫代胆碱的工艺方法 |
-
1986
- 1986-01-16 JP JP774286A patent/JPH0629239B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111333556A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-06-26 | 苏州百灵威超精细材料有限公司 | 一种制备碘化乙酰硫代胆碱的工艺方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0629239B2 (ja) | 1994-04-20 |
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