JPS6192589A - ラミナリペンタオ−スの製造法 - Google Patents
ラミナリペンタオ−スの製造法Info
- Publication number
- JPS6192589A JPS6192589A JP59212716A JP21271684A JPS6192589A JP S6192589 A JPS6192589 A JP S6192589A JP 59212716 A JP59212716 A JP 59212716A JP 21271684 A JP21271684 A JP 21271684A JP S6192589 A JPS6192589 A JP S6192589A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- laminaripentaose
- enzyme
- beta
- streptomyces
- glucanase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ぐ産業上の利用分野ン
本発明は、ストレプトマイセス属に属する微生物の生産
するβ−1,3糖分解酵素(β−1,3グルカナーゼ)
を用いてβ−1,3グルコシル糖化合物を分解して得ら
れたラミナリペンタオース(グルコースがβ−1,3の
位置で5個結合したものGs )を製造する方法に関す
るものである。
するβ−1,3糖分解酵素(β−1,3グルカナーゼ)
を用いてβ−1,3グルコシル糖化合物を分解して得ら
れたラミナリペンタオース(グルコースがβ−1,3の
位置で5個結合したものGs )を製造する方法に関す
るものである。
最近、デンプンを分解して得られるマルトオリゴm(c
s〜Go )の製造技術の開発が要望されておシ、これ
らは食品の甘味料、増量剤、賦形剤、包接剤として食品
、楽品、及び種々の工業製品に広く利用できると考えら
れている。
s〜Go )の製造技術の開発が要望されておシ、これ
らは食品の甘味料、増量剤、賦形剤、包接剤として食品
、楽品、及び種々の工業製品に広く利用できると考えら
れている。
これと同様に新規なラミナリペンタオースはこれらの分
野への新たな用途を提供することができるものである。
野への新たな用途を提供することができるものである。
また近年、抗腫瘍活性、抗細菌感染症作用、免疫系に及
ぼす作用等を持つ担子菌、子のり菌、不完全菌類等が江
生ずる多糖化合物の構造分析が精力的に検討され、活性
多循の基本骨格は3〜5個のβ−(1→3)−D・−グ
ルカン直鎖にβ−1,6モノグルコシル分岐鎖が結合し
たものであるという報告がなされている。〔水野卓;化
学と生物Vol。
ぼす作用等を持つ担子菌、子のり菌、不完全菌類等が江
生ずる多糖化合物の構造分析が精力的に検討され、活性
多循の基本骨格は3〜5個のβ−(1→3)−D・−グ
ルカン直鎖にβ−1,6モノグルコシル分岐鎖が結合し
たものであるという報告がなされている。〔水野卓;化
学と生物Vol。
21、虎7.P473〜(1985)、水野卓;農芸化
学大会要旨集P13(1984)、三崎旭;農芸化学大
会要旨集Pi 4(1984))そしてこれら活性多糖
化合物の化学合成が分岐グルコ四糖から試みられ、また
、農薬、抗生物質の生理作用を分子レベルで解明する為
、細胞表層グルカンの化学合成がマンノペンメオースを
出発原料として行なわれている。〔ともに小川智也;化
学と生物Vo)、20゜&12P789 (1982)
)ラミナリペンタオースは、これらの化学合成の出発物
質として有用なものである。
学大会要旨集P13(1984)、三崎旭;農芸化学大
会要旨集Pi 4(1984))そしてこれら活性多糖
化合物の化学合成が分岐グルコ四糖から試みられ、また
、農薬、抗生物質の生理作用を分子レベルで解明する為
、細胞表層グルカンの化学合成がマンノペンメオースを
出発原料として行なわれている。〔ともに小川智也;化
学と生物Vo)、20゜&12P789 (1982)
)ラミナリペンタオースは、これらの化学合成の出発物
質として有用なものである。
(発明の構成)
本発明者らはβ−1,3グルコシル糖化合物をラミナリ
ペンタオースに分解する値生物金鋭意検索の結果、スト
レプトマイセス域に属する一菌株が生産するβ−1,3
糖分解酵素(β−1,6グルカナーゼ)の一種がβ−1
,3グルコシル糖化合物を分解し、高収率でラミナリペ
ンタオーヌを生成することを見い出し本発明を完成する
に至った。
ペンタオースに分解する値生物金鋭意検索の結果、スト
レプトマイセス域に属する一菌株が生産するβ−1,3
糖分解酵素(β−1,6グルカナーゼ)の一種がβ−1
,3グルコシル糖化合物を分解し、高収率でラミナリペ
ンタオーヌを生成することを見い出し本発明を完成する
に至った。
即ち、本発明はβ−1,3グルコシル糖化合物又はその
部分分解物金うミナリペンタオースに分解する能力を有
するストレプトマイセス域に属する微生物の生産するβ
−1,3糖分解酵素(β−1,6−グルカナーゼと称す
)をβ−1,6グルコシル糖化合物又はその部分分解物
に作用させて得られることを特徴とするラミナリペンタ
オースの製造法を提供するものである。
部分分解物金うミナリペンタオースに分解する能力を有
するストレプトマイセス域に属する微生物の生産するβ
−1,3糖分解酵素(β−1,6−グルカナーゼと称す
)をβ−1,6グルコシル糖化合物又はその部分分解物
に作用させて得られることを特徴とするラミナリペンタ
オースの製造法を提供するものである。
(従来技術)
β−1,31s分解酵素は、これまで主として酵母細胞
壁の溶解あるいは、ビール工業における麦汁の粘度低下
を目的として利用されているにすぎず、分解生成糖を採
取することを目的とした報告は見あたらない。β−1,
3グルコシル糖化合物類を分解してラミナリペンタオー
スの生成を確認している報告はあるが他の菌株のもので
ある。
壁の溶解あるいは、ビール工業における麦汁の粘度低下
を目的として利用されているにすぎず、分解生成糖を採
取することを目的とした報告は見あたらない。β−1,
3グルコシル糖化合物類を分解してラミナリペンタオー
スの生成を確認している報告はあるが他の菌株のもので
ある。
またストレプトマイセス域の放線菌が生産するβ−1,
3グルカナーゼは主に酵母細胞壁の溶解を目的としたも
のとして知られておシ、例えばストレプトマイセス ア
ルビドフラバス(st、 albidoflavus
;醗酵工学会誌第59巻高10 766頁〜(196
5))、ストレプトマイセス エスピー(Strept
omyces 8P、 ) (Aqrlcul。
3グルカナーゼは主に酵母細胞壁の溶解を目的としたも
のとして知られておシ、例えばストレプトマイセス ア
ルビドフラバス(st、 albidoflavus
;醗酵工学会誌第59巻高10 766頁〜(196
5))、ストレプトマイセス エスピー(Strept
omyces 8P、 ) (Aqrlcul。
Biolog* Blochem、第111巻、358
頁〜364頁、(1965))、ストレプトマイセス
ムリナス(Streptomyees murlnus
) (醗酵工学会誌第59巻s&6 599頁〜(1
97B))等が報告されているが、いずれもラミナリペ
ンタオースを主生成物としたものではなく本願のβ−1
,3グルカナーゼとは異なるものである。
頁〜364頁、(1965))、ストレプトマイセス
ムリナス(Streptomyees murlnus
) (醗酵工学会誌第59巻s&6 599頁〜(1
97B))等が報告されているが、いずれもラミナリペ
ンタオースを主生成物としたものではなく本願のβ−1
,3グルカナーゼとは異なるものである。
本発明で使用されるβ−1,6砧分解酵累は、ストレプ
トマイセス域に属する微生物により生産され、β−1,
3グルコシル権化合物又はでの部分分解物に作用し、ラ
ミナリペンタオースを主成分とする分解生成物を生ぜせ
しめる能力を有する0索であればいずれでも良いが、好
ましくはストレプトマイセス マテンシヌ DIC−1
08’!r培dして得られるβ−1,3m分解酵素(β
−1,3グルカナーゼFilと称す)である。
トマイセス域に属する微生物により生産され、β−1,
3グルコシル権化合物又はでの部分分解物に作用し、ラ
ミナリペンタオースを主成分とする分解生成物を生ぜせ
しめる能力を有する0索であればいずれでも良いが、好
ましくはストレプトマイセス マテンシヌ DIC−1
08’!r培dして得られるβ−1,3m分解酵素(β
−1,3グルカナーゼFilと称す)である。
β−1,3−グルカナーゼにより生成するラミナリペン
タオースは、使用するβ−1,3グルコシル糖化合物の
種類や糖化時の反応条件(例えばβ−1,3グルコシル
、枯化合物の譲度、PHs 1M1度、酵素濃度)によ
っても異なるが、通常β−1,3グルコシル糖化合物に
対して収率20〜90重量%の値の得られるβ−1,3
−グルカナーゼでるるととが望ましい。
タオースは、使用するβ−1,3グルコシル糖化合物の
種類や糖化時の反応条件(例えばβ−1,3グルコシル
、枯化合物の譲度、PHs 1M1度、酵素濃度)によ
っても異なるが、通常β−1,3グルコシル糖化合物に
対して収率20〜90重量%の値の得られるβ−1,3
−グルカナーゼでるるととが望ましい。
本発明で好tL<用いら1しるβ−1,6グルカナーゼ
Filの性質を次に示す。
Filの性質を次に示す。
fil 作用;β−1,3グルコシル糖化合物、例え
ばカードラン、ラミナリン、パキマン、0母細胞壁、又
はその部分分解物などからラミナリペンタオースを主成
分とする楯分解物を生J反する。
ばカードラン、ラミナリン、パキマン、0母細胞壁、又
はその部分分解物などからラミナリペンタオースを主成
分とする楯分解物を生J反する。
(2)作用pH範聞及び最適作用pH;pH3〜9の範
囲に作用し、最適pHは、6付近である。(第1図参照
)(3)作用温度範囲及び最適作用温度:約70℃まで
作用し、最適作用温度は約60℃である。(第2図参照
)(4)精製方法 本酵素は培養口過液から硫安65チ飽オロで沈澱物とし
て回収後、 DEAE−8ephadex A−25カ
ラムクロマトグラフイー(0,01M Tvig−H
el緩衝液p H7,5で平衡化)を行い、その未吸着
区分を集める。次いで、CM−セファデックスC−25
カラムクロマトグラフイー< o、 o i M酢はバ
ッファーpH6,0で平田化)を行い、Naclの0.
1M溶液で溶出される区分を集め、硫安50〜70%飽
和としてその沈澱物を回収する。その後、 5apha
dex G−I D。
囲に作用し、最適pHは、6付近である。(第1図参照
)(3)作用温度範囲及び最適作用温度:約70℃まで
作用し、最適作用温度は約60℃である。(第2図参照
)(4)精製方法 本酵素は培養口過液から硫安65チ飽オロで沈澱物とし
て回収後、 DEAE−8ephadex A−25カ
ラムクロマトグラフイー(0,01M Tvig−H
el緩衝液p H7,5で平衡化)を行い、その未吸着
区分を集める。次いで、CM−セファデックスC−25
カラムクロマトグラフイー< o、 o i M酢はバ
ッファーpH6,0で平田化)を行い、Naclの0.
1M溶液で溶出される区分を集め、硫安50〜70%飽
和としてその沈澱物を回収する。その後、 5apha
dex G−I D。
(フマルマシア社製)ゲルクロマトグラフィー(0,0
1Mリン酸バッファー、pH70で平衡化)を行うこと
により、クロマト的に単一酵素に精製できる。
1Mリン酸バッファー、pH70で平衡化)を行うこと
により、クロマト的に単一酵素に精製できる。
(5)分子量; 5ephadex G−100ゲルク
ロマトグラフィーによる分子量は約31.000と推定
できる。
ロマトグラフィーによる分子量は約31.000と推定
できる。
本発明の酵素は、上記β−1,3グルカナーゼが好まし
く用いられるが、この酵素はストレプトマイセス属の菌
株、好ましくは、ストレプトマイセス マテンシス D
I C−108よシ得られる。
く用いられるが、この酵素はストレプトマイセス属の菌
株、好ましくは、ストレプトマイセス マテンシス D
I C−108よシ得られる。
又、こうしたβ−1,3−グルカナーゼは、特異的にラ
ミナリペンタオース全生成させる為、β−1,3グルカ
ンの構造解析用の手段となシうるものである。また他の
好ましいものとしてこれらの菌株を人工的に変異処理即
ち化学的、物理的手段による変異−発処理を行うことに
より得られる人為的突然変異株、あるいは自然変異株も
全て含まれ (2)る。
ミナリペンタオース全生成させる為、β−1,3グルカ
ンの構造解析用の手段となシうるものである。また他の
好ましいものとしてこれらの菌株を人工的に変異処理即
ち化学的、物理的手段による変異−発処理を行うことに
より得られる人為的突然変異株、あるいは自然変異株も
全て含まれ (2)る。
本発明で好ましく使用される前述の菌株の菌学的性質は
特開昭59−17996号公報にも示されているが次の
とおりである。
特開昭59−17996号公報にも示されているが次の
とおりである。
〔ストレプトミセス・マテンシス DIC−108の菌
学的性質〕 (11形態的特徴 使用した培地(ISP培地を含むン上での栄養菌糸の生
育は優れておシ、デンプン無機塩、オートミール寒天、
イースト麦芽寒天培地上で豊富な気菌糸を形成する。
1胞子形成気菌糸は直状又は直状又は直曲状である。
学的性質〕 (11形態的特徴 使用した培地(ISP培地を含むン上での栄養菌糸の生
育は優れておシ、デンプン無機塩、オートミール寒天、
イースト麦芽寒天培地上で豊富な気菌糸を形成する。
1胞子形成気菌糸は直状又は直状又は直曲状である。
胞子は楕円体で大きさは、短径×長径0.7〜0.8μ
XtO〜12μである。走査型電子顧倣鏡による観察で
は胞子の表面構造はイボ状(Warty)である。
XtO〜12μである。走査型電子顧倣鏡による観察で
は胞子の表面構造はイボ状(Warty)である。
各種培地における生育状態
1)シュクロース硝酸塩寒天培地(37℃)薄茶色の基
生菌糸状に灰色の気菌糸を形成し、f6解性色素はみと
められない。
生菌糸状に灰色の気菌糸を形成し、f6解性色素はみと
められない。
2)グルコース・アスパラギン寒天培地(37℃)薄黄
白色の生育で気菌糸の形成はみとめられない。
白色の生育で気菌糸の形成はみとめられない。
また溶解性色素はみとめられない。
5)グリセリン・アスパラギン寒天培地(ISP培地−
71&5371℃) 薄黄色の生育で気菌糸の着生はみとめられない。又、溶
解性色素はみとめられない。
71&5371℃) 薄黄色の生育で気菌糸の着生はみとめられない。又、溶
解性色素はみとめられない。
4)ヌターチ・無機塩寒天培地(rsp培地 37”C
)無色の発a上に緑灰色の気菌糸全着生し、溶解性色素
はみとめられない。
)無色の発a上に緑灰色の気菌糸全着生し、溶解性色素
はみとめられない。
5)チロシン寒天培地(ISP培地−7,67℃)薄茶
色の発H上に培養7日月では気菌糸は着生せず、14日
目で白灰色の気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめら
れない。
色の発H上に培養7日月では気菌糸は着生せず、14日
目で白灰色の気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめら
れない。
6)栄誉寒天培地(37℃9
緑灰黒色の発胃上に薄縁灰色の気菌糸を着生し、溶解性
色素はみとめられない。
色素はみとめられない。
7)イースト麦芽寒天培地(ISP培地−2,37℃)
薄茶色の生育上に薄縁灰色の気菌糸を着生する。水溶性
色素の生成はみとめられない。
薄茶色の生育上に薄縁灰色の気菌糸を着生する。水溶性
色素の生成はみとめられない。
8)オートミール4天培地(ISP培地−3,37℃ン
無色の生育上’に緑茶灰色の気菌糸全着生し、水溶性色
素の生成はみとめられない。
無色の生育上’に緑茶灰色の気菌糸全着生し、水溶性色
素の生成はみとめられない。
(3)生理的性質
1)生育温度範四
酵母エキス・麦芽エキス液体培地による生育試験では、
30℃〜50℃で生育するが、至適温度Fi37℃〜4
5℃である。
30℃〜50℃で生育するが、至適温度Fi37℃〜4
5℃である。
2)ゼラチンの液化:陰性
6)脱脂乳の凝固及び
脱脂乳のペプトン化:陰性
4)メラニン色素の生成(ペプトン・イースト・妖寒天
培地、ISP培地6):陰性 5)デンプンの分解性:陽性(分解ゾーンに白いリング
を形成) 6)炭素源の利用性(プリド・・ム、ゴドリープ外大培
地−9,37℃) D−グルコース、L−アラビノース、D−キシロース、
D−フルクトース、イノシトール、L−ラムノース、
D −マンニトール、ガラクトースをよく利用して生育
し、シュクロース、ラフィノース、サリシンは利用しな
い。
培地、ISP培地6):陰性 5)デンプンの分解性:陽性(分解ゾーンに白いリング
を形成) 6)炭素源の利用性(プリド・・ム、ゴドリープ外大培
地−9,37℃) D−グルコース、L−アラビノース、D−キシロース、
D−フルクトース、イノシトール、L−ラムノース、
D −マンニトール、ガラクトースをよく利用して生育
し、シュクロース、ラフィノース、サリシンは利用しな
い。
7)細胞壁組成
l5PK記載されている糖組成TypeとしてはTyp
e lに属する。
e lに属する。
る。
本発明による酵素生産の為の培養は、通常の固体培地又
は液体培地が使用され、液体培養の為の培地の炭素源と
しては、β−1,3グルコシル糖化合物であれば利用で
きる。
は液体培地が使用され、液体培養の為の培地の炭素源と
しては、β−1,3グルコシル糖化合物であれば利用で
きる。
例えば、カードラン、パキマン、ラミナリン、リケナン
、酵母細胞壁又はその部分分解物、リュウコシン、カロ
ース、パラミロン等が挙げられ、又窒素源としては硫安
、塩安、リン安、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、カ
ゼイン等、有機窒素、無機窒素、いずれも利用できる。
、酵母細胞壁又はその部分分解物、リュウコシン、カロ
ース、パラミロン等が挙げられ、又窒素源としては硫安
、塩安、リン安、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、カ
ゼイン等、有機窒素、無機窒素、いずれも利用できる。
天然栄餐諒としては、例えば各種糖蜜、コーンステイー
プリカー、オートミール、味液、魚粉、肉エキス、酵母
、酵母ニーIPヌ、ポテトエキス、麦芽エキス等があげ
られる。
プリカー、オートミール、味液、魚粉、肉エキス、酵母
、酵母ニーIPヌ、ポテトエキス、麦芽エキス等があげ
られる。
無機物としては、例えばリン酸二カリウム、リンば−ナ
トリウム、’aHマグネシウム、#、量全金属類どが挙
げられる。その他、必要に応じてビタミン類等を添加す
ることもできる。これらの使用濃度としては、0.1〜
40重量係重量−られる。また醗酵中の発泡を抑制する
ため、o、oooi−1o憲量膚の消泡剤を添加しても
よい。消泡剤としては、シリコーン、大豆油など通常の
消泡剤を用いる。
トリウム、’aHマグネシウム、#、量全金属類どが挙
げられる。その他、必要に応じてビタミン類等を添加す
ることもできる。これらの使用濃度としては、0.1〜
40重量係重量−られる。また醗酵中の発泡を抑制する
ため、o、oooi−1o憲量膚の消泡剤を添加しても
よい。消泡剤としては、シリコーン、大豆油など通常の
消泡剤を用いる。
培養方法は、振とう培養、通気培養などの好気的液体培
寮が適しておシ、p H5,0〜8.0、培養温度2.
0℃〜50”Cで1〜6日、望ましくはpH6,5〜7
.5.35〜40℃で2日前後培養する。
寮が適しておシ、p H5,0〜8.0、培養温度2.
0℃〜50”Cで1〜6日、望ましくはpH6,5〜7
.5.35〜40℃で2日前後培養する。
β−1,6グルカナーゼは、菌体外に生産する酵素であ
るので、培養終了後、口過又は遠心分離して除菌し、上
清液を回収する。そして必要に応じて濃縮し、硫安、硫
酸ナトリウムによるム析、又はアセトン、エタノール、
メタノール、イソプロパツールなどの有機溶剤を加え、
酵素を沈澱物として取得し、乾燥、保存する。
るので、培養終了後、口過又は遠心分離して除菌し、上
清液を回収する。そして必要に応じて濃縮し、硫安、硫
酸ナトリウムによるム析、又はアセトン、エタノール、
メタノール、イソプロパツールなどの有機溶剤を加え、
酵素を沈澱物として取得し、乾燥、保存する。
本発明のラミナリペンタオースはβ−1,3楯分解酵素
を水又は緩衝液に懸濁させた前述のβ−1,3グルコシ
ル錆化合物の1〜10重量%溶液に対し14〜15μ/
iIgの本酵素を50〜1000単位/l加え、pH4
〜8.5、好ましくは5〜Z5、反応温度30〜70、
好ましくは40〜60℃の反応条件で30分〜24時間
、好ましくは10〜20時間反応させることによって得
られる。
を水又は緩衝液に懸濁させた前述のβ−1,3グルコシ
ル錆化合物の1〜10重量%溶液に対し14〜15μ/
iIgの本酵素を50〜1000単位/l加え、pH4
〜8.5、好ましくは5〜Z5、反応温度30〜70、
好ましくは40〜60℃の反応条件で30分〜24時間
、好ましくは10〜20時間反応させることによって得
られる。
本発明のラミナリペンタオースは、賞品の甘味料、増量
剤、賦形剤、包括剤として賞品、医系品等種々の工業製
品に利用可能であシ、又抗腫瘍活性、仇細菌t%染症作
用、免疫系に及ぼす作用等を有する医業品の中間原体と
して有用なものである。
剤、賦形剤、包括剤として賞品、医系品等種々の工業製
品に利用可能であシ、又抗腫瘍活性、仇細菌t%染症作
用、免疫系に及ぼす作用等を有する医業品の中間原体と
して有用なものである。
以下に実施例によシ本発明の詳細な説明するが、文中「
部」及び「チ」は重量基準であるものとする。
部」及び「チ」は重量基準であるものとする。
実施例1
■ β−1,3グルカナーゼFilの調製500″q容
の坂ロフラスコ10本に、ポリペプトン(牛乳カセイン
の酵素分解物、和光純系工業株式会社販売)Q、29j
、酵母エキス(和光純薬工業株式会社販売)α2凱に、
HPO,0,241M#S04・7H,00,1係から
なる成体培地(p H7,0) を各々に100dづつ
分注した。常法による殺菌後、ストレプトマイセス・マ
テンシスDIC−108(微工研菌寄第6596号ンを
接種し、35℃で3日間振盪培養した。培女後、ブフナ
ーで口過を行って除菌し、得られた上清液t−65%の
飽和硫安として沈澱を回収した。これio、01Mのリ
ン酸緩衝液p H7,0で溶解して得られた粗酵素中に
は、ラミナリペンタオースを分解するβ−1,3グルカ
ナーゼが存在する為、α01 M トIJス緩輌液で平
衡化したDEAE−セファデックスA−25カラムに吸
着させ、その未吸着部分全回収することにより、β−1
,3グルカナーゼFi li得た。得られた活性は14
.7単位/叩タンパク(596,9単位(27119)
)であった。
の坂ロフラスコ10本に、ポリペプトン(牛乳カセイン
の酵素分解物、和光純系工業株式会社販売)Q、29j
、酵母エキス(和光純薬工業株式会社販売)α2凱に、
HPO,0,241M#S04・7H,00,1係から
なる成体培地(p H7,0) を各々に100dづつ
分注した。常法による殺菌後、ストレプトマイセス・マ
テンシスDIC−108(微工研菌寄第6596号ンを
接種し、35℃で3日間振盪培養した。培女後、ブフナ
ーで口過を行って除菌し、得られた上清液t−65%の
飽和硫安として沈澱を回収した。これio、01Mのリ
ン酸緩衝液p H7,0で溶解して得られた粗酵素中に
は、ラミナリペンタオースを分解するβ−1,3グルカ
ナーゼが存在する為、α01 M トIJス緩輌液で平
衡化したDEAE−セファデックスA−25カラムに吸
着させ、その未吸着部分全回収することにより、β−1
,3グルカナーゼFi li得た。得られた活性は14
.7単位/叩タンパク(596,9単位(27119)
)であった。
■ 分解反応
カードラン(n=550.和光純薬工業株式会社製品〕
0.25gに、該酵素ン改2.2単位を添加して全量を
5−とし、45℃で24時間反応させた。その結果ラミ
ナリペントースは188■得られ、収率は75.21で
あった。そして得1られたカードラン砧化物中の糖組成
ヲ、高速7ば体クロマトグラフィー(充てん剤;Lic
hrosorb NH25μ’R(メルク社製)、溶
出液;アセトニトリル70qb1水50係))で分離定
it−行った結果、77係が水浴性オリゴ循となり、そ
の内1尺はラミナリペンタオース75.2%で残91、
8 %はラミナリトリオース、ラミナリテトラオーヌ、
ラミナリヘキサオース、ラミナリヘプタオース、ラミナ
リオクタオースであった。(第5図参照) 〔酵素力価の決定〕 0.01Mの酢はバッファー(pH6,0)に、カード
ラン1係を懸濁させ、それに適量の酵素を加えて、水で
5.0dとし、45℃で反応させる。この条件で1時間
にix9のグルコースに相当する還元力を生成する酵素
ftt−1単位とする。
0.25gに、該酵素ン改2.2単位を添加して全量を
5−とし、45℃で24時間反応させた。その結果ラミ
ナリペントースは188■得られ、収率は75.21で
あった。そして得1られたカードラン砧化物中の糖組成
ヲ、高速7ば体クロマトグラフィー(充てん剤;Lic
hrosorb NH25μ’R(メルク社製)、溶
出液;アセトニトリル70qb1水50係))で分離定
it−行った結果、77係が水浴性オリゴ循となり、そ
の内1尺はラミナリペンタオース75.2%で残91、
8 %はラミナリトリオース、ラミナリテトラオーヌ、
ラミナリヘキサオース、ラミナリヘプタオース、ラミナ
リオクタオースであった。(第5図参照) 〔酵素力価の決定〕 0.01Mの酢はバッファー(pH6,0)に、カード
ラン1係を懸濁させ、それに適量の酵素を加えて、水で
5.0dとし、45℃で反応させる。この条件で1時間
にix9のグルコースに相当する還元力を生成する酵素
ftt−1単位とする。
実施例2
実施例1で用いたカード2ンの代わシに酵母細胞壁(C
andida属)不溶性ラミナリン、パキマン、各々α
2yに、実施例1で得られた酵素液22単位を添加して
全量を5−とし、45℃で24時間反応させた。
andida属)不溶性ラミナリン、パキマン、各々α
2yに、実施例1で得られた酵素液22単位を添加して
全量を5−とし、45℃で24時間反応させた。
そして得られた酵母細胞壁ラミナリン、及びパキマンの
糖化液中の砧組成金実施例1と同様の方法にて分離定量
を行った。結果を表−1に示した。
糖化液中の砧組成金実施例1と同様の方法にて分離定量
を行った。結果を表−1に示した。
表 −1
第1図はβ−1,3グルカナーゼFiIのpHと活性の
関係を示し、第2図はβ−1,5グルカナーゼFiIの
温度と活性の関係を示し、第3図は、β−1,5グルカ
ナーゼにより分解されたカードランの分解物全高速成体
クロマトグラフィーで分析したチャート1−示し、数字
は、各々1ラミナリトリオース、2ラミナリテトラオー
ス、4ラミナリヘキサオース、5ラミナリヘプタオース
、6ラミナリオクタオースを示すものである。 代理人 弁理士 高 橋 勝 利 第1図 pH 富20 温度 ℃ 第3図
関係を示し、第2図はβ−1,5グルカナーゼFiIの
温度と活性の関係を示し、第3図は、β−1,5グルカ
ナーゼにより分解されたカードランの分解物全高速成体
クロマトグラフィーで分析したチャート1−示し、数字
は、各々1ラミナリトリオース、2ラミナリテトラオー
ス、4ラミナリヘキサオース、5ラミナリヘプタオース
、6ラミナリオクタオースを示すものである。 代理人 弁理士 高 橋 勝 利 第1図 pH 富20 温度 ℃ 第3図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、β−1,3グルコシル糖化合物又はその部分分解物
をラミナリペンタオースに分解する能力を有するストレ
プトマイセス属に属する微生物の生産するβ−1,3糖
分解酵素をβ−1,3グルコシル糖化合物又はその部分
分解物に作用させて得られることを特徴とするラミナリ
ペンタオースの製造法。 2、β−1,3グルコシル糖化合物が、カードラン、パ
キマン、ラミナリンであることを特徴とする特許請求の
範囲第1項記載のラミナリペンタオースの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP59212716A JPS6192589A (ja) | 1984-10-12 | 1984-10-12 | ラミナリペンタオ−スの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP59212716A JPS6192589A (ja) | 1984-10-12 | 1984-10-12 | ラミナリペンタオ−スの製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6192589A true JPS6192589A (ja) | 1986-05-10 |
JPH0437719B2 JPH0437719B2 (ja) | 1992-06-22 |
Family
ID=16627243
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP59212716A Granted JPS6192589A (ja) | 1984-10-12 | 1984-10-12 | ラミナリペンタオ−スの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6192589A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009240275A (ja) * | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Naris Cosmetics Co Ltd | イグチ科ヌメリイグチ属担子菌の液体培地 |
WO2013065732A1 (ja) * | 2011-10-31 | 2013-05-10 | 興人ライフサイエンス株式会社 | 酵母及び酵母エキス残渣の有効利用 |
JP2013116101A (ja) * | 2011-10-31 | 2013-06-13 | Kohjin Life Sciences Co Ltd | 食物繊維含量の高い酵母細胞壁画分 |
-
1984
- 1984-10-12 JP JP59212716A patent/JPS6192589A/ja active Granted
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009240275A (ja) * | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Naris Cosmetics Co Ltd | イグチ科ヌメリイグチ属担子菌の液体培地 |
WO2013065732A1 (ja) * | 2011-10-31 | 2013-05-10 | 興人ライフサイエンス株式会社 | 酵母及び酵母エキス残渣の有効利用 |
JP2013116101A (ja) * | 2011-10-31 | 2013-06-13 | Kohjin Life Sciences Co Ltd | 食物繊維含量の高い酵母細胞壁画分 |
US10196430B2 (en) | 2011-10-31 | 2019-02-05 | KOHJIN Life Sciences Co., Ltd. | Effective use of yeast and yeast extract residue |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0437719B2 (ja) | 1992-06-22 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |