JPS6170994A

JPS6170994A - 環状（１→２）−β−Ｄ−グルカンの製法

Info

Publication number: JPS6170994A
Application number: JP19342984A
Authority: JP
Inventors: Tadashi Higashiura; 忠司東浦
Original assignee: Daikin Industries Ltd
Current assignee: Daikin Industries Ltd
Priority date: 1984-09-14
Filing date: 1984-09-14
Publication date: 1986-04-11

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野コ本発明は、゛環状−（１−２）−β−Ｄ−グルカン（以
下ＣＧと略称する。）の製法に関し、さらに詳しくはｃ
ｄ生°産菌をその最高増殖率より低い増殖率に制御しな
がら培養する事により発酵法でＣＧを製造する方法に関
する。

［従来技術］従来、微生物を用いてＣＧを製造する方法としでは、グ
ルコース、リン酸アンモニウム１、す□ン酸カリウム等
を含む培地にリゾビウム属またはアグロバクテリウム属
に属する微生物を培養して、培地中にＣＧを生成蓄積さ
せる方法［Ｊ、Ｇｅｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、１２８．１８７３（１９８２）
およびＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、　ｌ　２１．
３１（１９８３）　］あるいは該方法の改良法として、
細胞外多糖類等を生産しなくなった突然変異株を培養す
る方法（特開昭５９−７１６８６号および特開昭８２０
９２号参照）などが知られている。

しかし、上記既知方法によるＣＧの製法では、ＣＧの生
産性が必ずしも満足できるものではなかった。

本発明者は、醗酵法によるＣＧの製法について種々検討
した結果、微生物の増殖に最適の条件からずらせて培養
した場合に、ＣＧの生産性が高くなることを見い出し、
本発明を完成するに至った。

［発明の構成］本発明の要旨は、資化し得る栄養培地において、最高増
殖率より小さい増殖率に制御しながら微生物を培養し、
この培養液より環状（１−２）−β−Ｄ−グルカンを回
収することを特徴とする環状（１→２）−β−Ｄ−グル
カンの製法に存する。

本発明において使用する微生物としては、リゾビウム属
またはアグロバクテリウム属に属し、ＣＧを産生ずる能
力を有するものであれば、いずれも使用でき、例えば、
リゾビウム・メリロツテイＩＦ０１３３３６、リゾビウ
ム・トリフオリＩＦ０１３３３７、リゾビウム・ジャポ
ニカムＩＰＯ１３３３Ｂ、リゾビウム・ファッセオリＡ
　Ｉ−Ｉ　Ｕ　１１３３、リゾビウム・ファッセオリＲ
Ａ−４（ＦＥＲＭ　ＢＰ３７４）　、リゾビウム・ファ
ツセオりＲＡ−８（ＦＥＲＭ　ＢＦ２７９）、リゾビウ
ム・ファッセオリＲＡ−１２（ＦＥＲＭ　ＢＦ２８０）
、アグロバクテリウム・ラジオバクターＩＦＯ１２６６
５、アグロバクテリウム・ラジオバクターＡｌ−５（Ｆ
ＥＲＭ　ＢＰ３７３）、アグロバクテリウム・ラジオバ
クターＡＡｌ−７（ＦＥＲＢＰ３７８）、アグロバクテ
リウム・ラジオバクターＡＡ１−１２（ＦＥＲＢＰ３７
７）、アグロバクテリウム・リゾゲネスＩＦＯ１３２５
９、アグロバクテリウム・ツメファシェンスＩＦ０３０
５８などが挙げられる。

微生物を培養するための培地組成としては、炭素源、窒
素源、有機栄養源、無機物質などを適宜含有したものが
使用される。炭素源および窒素源としては、使用菌株が
資化できる物質であれば、いずれも使用できるが、好ま
しくは、炭素源として糖類、就中、グルコース、マルト
ース、シュークロースまたは糖蜜等、窒素源として無機
窒素源、有機酸アンモニウム塩が使用できる。有機栄養
源として酵母エキス、コーンメチ−プリカー１．肉エキ
ス、ポリペプトン、ビオチン、チアミン等が使用できる
。無機物質として通常の無機塩類などが使用できる。

培養は、バッチ式、流加式または連続式で好気的に行う
。培養全期間における平均増殖率がその微生物の最高増
殖率より小さくなるように制御する。通常、ｐｌ（は３
〜９、温度は２０〜４０℃である。なお、増殖率（以下
、μという。）は、各培養時間における菌体量を測定し
て次式から求める。

バッチ式または流加式培養では、［式中、Ｘｏ＝始発時における菌体量、Ｘ１→　を時間
培養時におけ名菌体量、ｔ　＝培養時間である。〕連続培養では、ｔＣ時間の抜出液中の菌体量［式中、ｔｃ　＝連続培養時間である。］微生物の最高
増殖率（μｍａｘ）は０．０８ｈｒ−１以上であること
が好ましい。

培養全期間における平均増殖率とは、バッチ式または流
加式培養では培養開始時より終了時まで、連続培養では
連続開始時より終了時までの全期間におけるμを上式よ
り算出した値である。

μを制御する方法としては、使用する微生物が生育する
範囲内でＣＧ生成に阻害のない条件であれば何れでしよ
い。例えば、培養条件（温度、ｐＨ等）、栄養物質（炭
素源、窒素源、燐酸源、無機塩等）の添加量、または使
用する微生物に栄養要求性のある場合にビタミン、アミ
ノ酸、核酸等の添加量を調節する。あるいは培養系に微
生物の菌体増殖を抑制し、ＣＧ生成に阻害のない薬剤を
添加する等の方法が用いられる。この薬剤として、例カ
プリン酸、クエン酸、マロン酸、コハク酸、フえば、ギ
酸、酢酸、プロピオン酸、カプリル酸、マル酸等の有機
酸またはその塩類、メタノール、エタノール、プロパツ
ール等のアルプール類が挙げられる。これらの培養温度
、ｐＨ１培地組成、増殖抑制薬剤は単独または適宜組合
せて使用できる。何れの方法でμを制御するかは、使用
する微生物の種類、炭素源の種類等により異なるが、温
度、ｐＨ等で制御する方法が有利である。増殖制御を実
施する時期は培養期間中の何れの時期でもよく、その期
間は一時的または全期間にわたってもよい。培養中、各
時におけるμは何れに変化してもよいが、最終的には全
培養期間における平均増殖率を０．０５ｈｒ−１以下に
管理することが好ましい。

培養液からのＣＧの回収は、微生物および／または多糖
類を除いた後、活性炭カラムを使用する方法［日本農芸
化学会大会要旨集、５８５頁（１９，！１４）］等の手
段によって容易に行える。

［実施例コ以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。実施
例中、ＣＧの確認および定量は、高速液体クロマトグラ
フィ法［Ｊ　、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　　２６５．
８９（１９８３）］によった。

実施例１アクロバクテリウム・ラジオバクターＡ１−５を下記組
成の培地Ｃ３ｆｌ／７１．容ジャーファーメンタ−）に
接種し、通気量１　ｖｖｍ、撹拌数６０Ｏｒｐｍで５日
間培養した。

培地組成ニゲルコース４０ｇ、（ＮＨ，）ｔＨＰｏ。

１．５ｇ、ＫＨｔＰｏ、１．０ｇ、Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ１
００，５ｇ、ＣａＣＯ５５ｇ−水道水　１１．。

培養時、μを測定しながら、培養温度を次の（１）〜（
３）のように変えて、はぼ一定になるようにμを制御し
た（ｐＨは無調整であるが、いずれの場合も５〜７．５
の間で変化した。）：（１）３０℃、（２）３３℃、（
３）培養開始後１．５日目に３３℃から３０℃に変更。

培養全期間における平均増殖率とＣＧ生産量との関係を
第１表に示す。

第１表実施例２培地にビチオン２０μｇ／ｉ、およびチアミン２００μ
ｇ／４を加え、アクロバクテリウム・ラジオバクターＡ
ｌ−５に代えてリゾビウム・ファッセオリＲＡ−１２を
用いる以外は実施例１を繰り返した。培養全期間におけ
る平均増殖率とＣＧ生産量との関係を第２表に示す。

第２表手続補装置（自発）昭和５９年１１月　７日１、事件の表示昭和５９年特許願第　１９３４２９　　　　’５’２、
発明の名称環状（１→２）−β−Ｄ−グルカンの製法３、補正をす
る者事件との関係　特許出願人住所　大阪府大阪市北区侮Ｉ］１１１丁目１２石３９号
新版急ヒル名称　　（２８５）　　ダイキン工業株式会
社代表者　　　山　　１）　稔４、代理人５、補正命令の日付　：自　発７、補正の内容明細書の発明の詳細な説明の欄中、次の箇所を補正しま
す。

（１）２頁末１行、「特開昭８２０９２　Ｊとあるを、
［特開−昭５９−８２０９２Ｊと訂正。

（２）４頁１０〜１１行、ｒＡｌ−１２４とあるをｌ”
Ａ−１２」と訂正。

以上

Claims

【特許請求の範囲】

（１）資化し得る栄養培地において、最高増殖率より小
さい増殖率に制御しながら微生物を培養し、この培養液
より環状（１→２）−β−Ｄ−グルカンを回収すること
を特徴とする環状（１→２）−β−Ｄ−グルカンの製法
。
（２）微生物がリゾビウム属またはアグロバクテリウム
属に属する細菌である特許請求の範囲第１項記載の製法
。
（３）微生物の最高増殖率が０．０８ｈｒ＾−＾１以上
であり、培養全期間における平均増殖率か０．０５ｈｒ
＾−＾１以下である特許請求の範囲第１項記載の製法。
（４）増殖制御方法が温度、ｐＨ、培地の無機塩量また
は使用する細菌の栄養要求物質の量を調節することであ
る特許請求の範囲第１項記載の製法。
（５）増殖制御方法が有機酸、その塩またはアルコール
類を添加することである特許請求の範囲第１項記載の製
法。