JPS6152277A - 5-hydroxyl-l-tryptophan-producing microorganism and preparation of 5-hydroxy-l-tryptophan using said microorganism - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide the titled microbial strain resistant to 5-fluorotryptophan, requiring anthranylic acid, and capable of producing the culture liquid containing 5-hydroxy-L-tryptophan in high concentration from a culture medium containing 5-hydroxy-anthranylic acid in high concentration. CONSTITUTION:Bacillus amyloliquefaciens SD-53 (FERM-P No.7773) resistant to 5-fluorotryptophan, requiring anthranylic acid, and capable of producing 5-hydroxy-L-tryptophan. There is no accumulation of L-tryptophan which is difficult to be separated from 5-hydroxy-L-tryptophan, and accordingly, the objective 5- hydroxy-L-tryptophan can be prepared in high yield.

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は５−フルオロトリプトファン耐性及びアンスラ
ニル酸要求性を有しかつ５−ヒドロキシ−Ｌ　−）　Ｉ
Ｊデトファン生産能を有する、バチルス属に属する微生
物及び当該微生物を用いた５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプ
トファンの製造法に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Industrial Field of Application The present invention has 5-fluorotryptophan resistance and anthranilic acid requirement and 5-hydroxy-L-) I
The present invention relates to a microorganism belonging to the genus Bacillus that has the ability to produce J-detophan, and a method for producing 5-hydroxy-L-tryptophan using the microorganism.

５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファンは、生理的活性ア
ミンとして知られているセロトニンの前駆物質であシ、
また間代性痙牽などに用いる医薬としての用途も期待さ
れる重要なアミノ酸である。5-Hydroxy-L-tryptophan is a precursor of serotonin, which is known as a physiologically active amine.
It is also an important amino acid that is expected to be used as a medicine for treating clonic convulsions.

５−ヒドロキシ−Ｌ−）リゾトファンを製造する方法と
しては、５−ヒドロキシインドール、ピルビン酸及びア
ンモニアから５−ヒドロキシ−Ｌ−トリデトファンを生
産する能力を有する微生物を用いる酵素法が従来知られ
ているが、その転換率及び収率が必ずしも十分でなく、
工業的な製造法としては満足し得るものとは言い難かっ
た。As a method for producing 5-hydroxy-L-) lysotophan, an enzymatic method using a microorganism capable of producing 5-hydroxy-L-tridetophan from 5-hydroxyindole, pyruvate, and ammonia is conventionally known. , the conversion rate and yield are not necessarily sufficient,
As an industrial manufacturing method, it could hardly be said to be satisfactory.

問題点を解決するための手段 ラバ高濃度の５−ヒドロキシアンスラニル酸ヲ含む培地
において高濃度の５−ヒドロキシ−Ｔ、　−トリプトフ
ァン培養液を製造することのできる微生物を得るべく鋭
意研究を進めた結果、５−フルオロトリプトファン耐性
及びアンスラニル酸要求性ヲ有スる５−ヒドロキシ−Ｌ
−トリプトファン生産性微生物を得ることに成功し、本
発明をするに至った。Means to solve the problem Raba conducted intensive research to obtain a microorganism capable of producing a culture solution with a high concentration of 5-hydroxy-T,-tryptophan in a medium containing a high concentration of 5-hydroxyanthranilic acid. As a result, 5-hydroxy-L has 5-fluorotryptophan resistance and anthranilic acid requirement.
- We succeeded in obtaining tryptophan-producing microorganisms, leading to the present invention.

即ち、本発明に従えば、５−フルオロトリプトファン耐
性及びアンスラニル酸要求性を有しかつ５−ヒドロキシ
−Ｉ、−）リプトファン生産能を有するバチルス・アミ
ロリクイファシエンスＳＤ−５３が提供される。That is, according to the present invention, there is provided Bacillus amyloliquifaciens SD-53, which has 5-fluorotryptophan resistance and anthranilic acid requirement, and has the ability to produce 5-hydroxy-I,-)liptophan. .

本発明に従えば、また、５−フルオロトリプトファン耐
性及びアンスラニル酸要求性を有しかつ５−ヒドロキシ
−Ｌ−トリシトファン生産能を有するバチルス・アミロ
リクイファシエンスＳＤ−５３をアンスラニル酸含有栄
養培地に５−ヒドロキシアンスラニル酸又はその塩を添
加して培養せしめ、培養物中に生成しだ５−ヒドロキシ
−Ｌ−トリプトファンを採取することから成る５−ヒド
ロキシ−Ｔ、　−トリプトファンの製造法が提供される
。この方法に従えば、Ｌ−トリシトファンの培養液中へ
の蓄積をほとんど起すことなく、５−ヒドロキシ−Ｌ−
）リプトファンを培養液中に高蓄積濃度及び高転換率で
蓄積せしめることができる。According to the present invention, Bacillus amyloliquefaciens SD-53, which has 5-fluorotryptophan resistance and anthranilic acid auxotrophy and has the ability to produce 5-hydroxy-L-tricytophan, is added to an anthranilic acid-containing nutrient medium. Provided is a method for producing 5-hydroxy-T,-tryptophan, which comprises culturing with the addition of 5-hydroxyanthranilic acid or a salt thereof, and collecting 5-hydroxy-L-tryptophan produced in the culture. Ru. According to this method, 5-hydroxy-L-
) Liptophan can be accumulated in the culture medium at high accumulation concentration and high conversion rate.

即ち、培養液中へ所望の５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプト
ファンと共にＬ−）リゾトファンが蓄積すると、５−ヒ
ドロキシ−Ｌ−）リプトファンとＬ−トリプトファンと
を培養液中よシ分離することが難しく、生成した５−ヒ
ドロキシ−Ｌ−）リプトファンの一部を分離できないま
ま廃棄せざるを得ないためコスト的に甚だ不利であるこ
とを考慮すると培養液中へのＬ　−）　ＩＪデトファン
の蓄積が起き々いことは実用上非常に望ましいことであ
る。That is, when L-)lysotophan accumulates in the culture solution together with the desired 5-hydroxy-L-tryptophan, it is difficult to separate 5-hydroxy-L-)lyptophan and L-tryptophan from the culture solution. Considering that it is extremely disadvantageous in terms of cost because a part of the generated 5-hydroxy-L-) liptophan cannot be separated and must be discarded, accumulation of L-) IJ detophan in the culture solution may occur. This is highly desirable in practical terms.

本発明に従った５−フルオロトリプトファン耐性及びア
ンスラニル酸要求性を有しかつ５−ヒドロキシ−Ｌ−ト
リプトファン生産能を有するバチルス属に属する微生物
バチルス・アミロリクイファシエンスＳＤ−５３は以下
のようにして取得したＯ すなわち、本発明者らは原株バチルス・アミロリクイフ
ァシェンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅ
ｆａｃｉｅｎｓ　）ＩＡＭ１５２１を常法に従ってＮ−
メチル−Ｎ／−ニトロ−Ｎ−ニトロングアニジン（ＮＴ
Ｇ）を用いて人工突然変異誘発処理し、この変異処理法
を最低阻止濃度（ＭＩＣ）以上の５−フルオロトリプト
ファン（５−ＦＴ）を添加した寒天平板培地（スビザイ
ゼン培地）で生育させて生育した数百のコロニーについ
てそれぞれ５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファンの生産
性を調べ、最も５−ヒドロキシ−Ｌ−）リプトファン生
産能の高い５−ＦＴ耐性（即ち、トリプトファン濃度の
蓄積による微生物固有のフィードバック抑制機構を解除
した）菌株を得る。この菌株は５−フルオロトリプトフ
ァンに対し５０００　ｐｐｍ以上の耐性を有する。The microorganism Bacillus amyloliquifaciens SD-53 belonging to the genus Bacillus and having 5-fluorotryptophan resistance and anthranilic acid auxotrophy and ability to produce 5-hydroxy-L-tryptophan according to the present invention is prepared as follows. That is, the present inventors obtained the original strain Bacillus amyloliquefacens.
faciens) IAM1521 according to the conventional method
Methyl-N/-nitro-N-nitronguanidine (NT
G) was used to induce artificial mutagenesis, and this mutation treatment method was used to grow on an agar plate medium (Subizaizen medium) supplemented with 5-fluorotryptophan (5-FT) at a minimum inhibitory concentration (MIC) or higher. The productivity of 5-hydroxy-L-tryptophan was investigated for several hundred colonies, and the 5-FT resistance with the highest 5-hydroxy-L-)liptophan production ability (i.e., microorganism-specific feedback suppression due to accumulation of tryptophan concentration) Obtain a strain (in which the mechanism has been released). This strain has a resistance of 5000 ppm or more to 5-fluorotryptophan.

次に、この５−ＦＴ耐性及び５−ヒドロキシ−Ｌ−）’
Ｊデトファン生産能を有する変異菌株を再び上と同様に
してＮＴＧを用いて人工突然変異誘発処理し、処理後、
遠心分離（１００００ＧｘＳ分）し、菌体部をＭ／１０
０　）リス緩衝液（ｐＨ７，０）に懸濁し遠心分離する
ことを３回繰返し、ＮＴＧを除去する。菌体部をアンス
ラニル酸２０〜５０ｐｐｍを含むスビデイゼン培地のよ
うな枯草菌用最小培地にて３０〜４０℃で１〜３時間培
養する。Next, this 5-FT resistance and 5-hydroxy-L-)'
The mutant strain having the ability to produce J-detophan was again subjected to artificial mutagenesis using NTG in the same manner as above, and after the treatment,
Centrifuge (10000GxS minutes) and remove bacterial cells to M/10
0) Suspend in Squirrel buffer (pH 7,0) and centrifuge three times to remove NTG. The bacterial cells are cultured for 1 to 3 hours at 30 to 40°C in a minimal medium for Bacillus subtilis, such as a subvidizen medium containing 20 to 50 ppm of anthranilic acid.

培養後、遠心分離によって集菌し、菌体部を上記トリス
緩衝液で洗浄し、更にトリス緩衝液中に再懸濁して３０
〜４０℃で１〜３時間振とうする。After culturing, the bacteria were collected by centrifugation, the bacterial cells were washed with the above Tris buffer, and then resuspended in Tris buffer for 30 min.
Shake at ~40°C for 1-3 hours.

振とり終了後、遠心分離によって集菌し、トリス緩衝液
で洗浄した後、アンスラニル酸要求性菌株を濃縮すべく
、ペニシリン５００〜２０００　ｐｐｍを含有する枯草
菌用最小培地中に懸濁し、３０〜４０℃で３０〜９０分
、好ましくは４０〜６０分間振とうする。振とり終了後
、上と同様に集菌洗浄し、前記ペニシリン含有枯草菌用
最小培地にて同様の操作を３〜１０回繰シ返してアンス
ラニル酸２０〜５０　ｐｐｍ含有枯草菌用最小平板培地
では生育するが、アンスラニル酸無添加平板培地では生
育しないアンスラニル酸要求性菌株をスクリーニングす
る。最適条件では９０チ以上に濃縮することが可能であ
る。After shaking, the bacteria were collected by centrifugation, washed with Tris buffer, and suspended in minimal medium for Bacillus subtilis containing 500 to 2000 ppm of penicillin to concentrate the anthranilic acid auxotrophic strains. Shake at 40°C for 30-90 minutes, preferably 40-60 minutes. After shaking, collect and wash the bacteria in the same manner as above, and repeat the same operation 3 to 10 times using the minimal medium for Bacillus subtilis containing penicillin. Screen for anthranilic acid auxotrophic bacterial strains that grow but do not grow in anthranilic acid-free plate medium. Under optimal conditions, it is possible to concentrate to 90 or more.

このようにして得られた５−フルオロトリプトファン耐
性及びアンスラニル酸要求性を有し、最も５−ヒドロキ
シ−Ｌ−トリプトファン生産能の高い菌株バチルス・ア
ミロリクイファシェンスＳＤ　−５３を選択した。The thus obtained strain Bacillus amyloliquifacens SD-53, which has 5-fluorotryptophan resistance and anthranilic acid requirement and has the highest 5-hydroxy-L-tryptophan production ability, was selected.

この菌株は昭和５９年８月７４’−Ｈに工業技術院微生
物工業技術研究所にバチルス・アミロリクイファシエン
ｘ　（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃ
ｉｅｎｓ　）ＳＤ　−５３（微工研菌寄第　２７７３号
）として寄託した。なお、この菌株の菌学的性質は原株
バチルス・アミロリクイファシェンスＩＡＭ１５２１．
！＝５−ＦＴ耐性及びアンスラニル酸要求性を有しかつ
５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファン生産能が高いこと
を除けば原株の菌学的性質と同じであった。This strain was transferred to the Institute of Microbial Technology, Agency of Industrial Science and Technology on August 74'-H, 1981, as Bacillus amyloliquefacien x.
iens) SD-53 (Feikoken Microbiology Deposit No. 2773). The mycological properties of this strain are based on the original strain Bacillus amyloliquefacens IAM1521.
! The mycological properties were the same as those of the original strain, except that it had 5-FT resistance and anthranilic acid requirement, and had a high 5-hydroxy-L-tryptophan production ability.

本発明に従って、５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファン
を製造するには、バチルス・アミロリクイファシエンス
ＳＤ−５３を５−ヒドロキシアンスラニル酸又はその塩
を添加した培地中で培養することによシ実施する。栄養
培地中の５−ヒドロキシアンスラニル酸又はその塩の濃
度には特に限定はないが、目的５−ヒドロキシ−Ｌ−ト
リシトファンの収量、培養条件及び経済的観点から一般
には０．１〜１０００　ｍｇ／１１　、好ましくは５０
〜３ｏ。According to the present invention, 5-hydroxy-L-tryptophan is produced by culturing Bacillus amyloliquefaciens SD-53 in a medium supplemented with 5-hydroxyanthranilic acid or its salts. do. There is no particular limitation on the concentration of 5-hydroxyanthranilic acid or its salt in the nutrient medium, but it is generally 0.1 to 1000 mg/ml from the viewpoint of the desired yield of 5-hydroxy-L-tricytophan, culture conditions, and economics. 11, preferably 50
~3o.

ｍｇ／ｌの濃度を保持し乍ら培養する。なお、前記菌株
ＳＤ　−５３はアンスラニル酸要求性であるので菌の生
育に必要な最小限量（例えば培地中に３０〜３００　ｐ
ｐｍ　）のアンスラニル酸を培地中に含ませる必要があ
る。The culture is maintained at a concentration of mg/l. In addition, since the strain SD-53 is anthranilic acid auxotrophic, the minimum amount necessary for bacterial growth (for example, 30 to 300 p
pm) of anthranilic acid must be included in the medium.

本発明方法において使用することのできる培地としては
、前記微生物が培養によシ増殖し得るものであれば任意
のものでよく、例えば炭素源としてはブドウ糖、糖蜜、
蔗糖、デン粉、デン粉糖化液、セルロース分解物などの
糖類、酢酸、エタノール等が用いられる。窒素源として
はアンモニア、硫安、塩安、硝安、燐安などのアンモニ
ウム塩や尿素、硝酸塩等が適宜用いられる。無機塩とし
てハ燐酸、カリウム、マグネシウム、マンガン等の塩類
、例えば燐酸アンモニウム、燐酸カリ、燐酸ソーダ、硫
酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、苛性カリ
等の通常の工業用薬品で良く、他に微量元素としてカル
シウム、亜鉛、硼素、銅、コバルト、モリブデン等の塩
類を加えても良い。The medium that can be used in the method of the present invention may be any medium as long as the microorganisms can be cultured and grown. For example, the carbon source may be glucose, molasses,
Sugars such as sucrose, starch, starch saccharification liquid, cellulose decomposition products, acetic acid, ethanol, etc. are used. As the nitrogen source, ammonium salts such as ammonia, ammonium sulfate, ammonium chloride, ammonium nitrate, ammonium phosphorus, urea, nitrates, etc. are used as appropriate. As inorganic salts, salts such as phosphoric acid, potassium, magnesium, manganese, etc., such as ammonium phosphate, potassium phosphate, sodium phosphate, magnesium sulfate, ferrous sulfate, manganese sulfate, caustic potash, and other ordinary industrial chemicals may be used, and trace amounts of others may be used. Salts such as calcium, zinc, boron, copper, cobalt, and molybdenum may be added as elements.

また微量有機栄養素として♂タミン、アミノ酸、核酸関
連物質等は菌の生育上は特別に必要とするものではない
が、これらを添加したシ、コーンスチープリカー、肉エ
キス、酵母エキス、ペプトン等の有機物を加えても良い
。５−ヒドロキシアンスラニル酸はそのまま又はメタノ
ール、エタノール、酢酸等の有機溶媒の溶液の形で使用
してもよいが、ナトリウム、カリウム、アンモニウムな
どのアルカリ塩や硫酸、塩酸、酢酸等の酸塩の水溶液と
して使用するのが好ましい。In addition, trace organic nutrients such as male tamine, amino acids, and nucleic acid-related substances are not particularly required for the growth of bacteria, but organic substances such as corn steep liquor, meat extract, yeast extract, and peptone that contain these are added. You may also add 5-Hydroxyanthranilic acid may be used as it is or in the form of a solution in an organic solvent such as methanol, ethanol, or acetic acid. Preferably, it is used as an aqueous solution.

本発明方法における培養は好気的条件下に、例えば通気
攪拌や往復振盪方法によって培養することができる。培
養条件は、特に限定はないが、一般的に言えば、温度３
０〜４０℃、ｐＨ６，０〜８．０及び１８〜７２時間程
度の条件で実施する。Culture in the method of the present invention can be carried out under aerobic conditions, for example, by aerated stirring or reciprocating shaking. Culture conditions are not particularly limited, but generally speaking, temperature 3
It is carried out under the conditions of 0 to 40°C, pH 6.0 to 8.0, and about 18 to 72 hours.

培養液又は培養物からの目的の５−ヒドロキシ−Ｌ　−
）　ＩＪデトファンの採取方法は慣用方法に従って行う
ことができる。例えば、遠心分離にょシ菌体部を除いた
培養液上清からイオン交換樹脂処理法、活性炭処理法等
の操作を適宜組み合せて５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプト
ファンを単離晶析することができる。The desired 5-hydroxy-L- from the culture solution or culture
) IJ detophane can be collected according to conventional methods. For example, 5-hydroxy-L-tryptophan can be isolated and crystallized from the culture supernatant after removing the centrifuged bacterial cells by appropriately combining operations such as ion exchange resin treatment and activated carbon treatment.

実施例 以下に本発明の詳細な説明するが、本発明の範囲をこれ
らの実施例に限定するものでないことはいうまでもない
。EXAMPLES The present invention will be described in detail below, but it goes without saying that the scope of the present invention is not limited to these Examples.

例１（５−ヒドロキシ−Ｌ−）リプトファンの製造例） グルコース１０％、硫安０，２チ、Ｎａ２ＳＯ４０，１
チ、ＫＨ２ＰＯ４０，５％、ＭｇＳＯ４・４〜６Ｈ２０
０，０５％、＋＋ Ｆｅ　　１　ｐｐｍ、　Ｍｎ　　１　ｐｐｍ及びアンス
ラニル酸２００ｐｐｍの組成の液体培地２１を５１ジャ
ーファーメンタ−に入れ、１１５℃で２０分間加熱滅菌
した。Example 1 (Production example of 5-hydroxy-L-)lyptophan) Glucose 10%, Ammonium sulfate 0.2%, Na2SO40.1
H, KH2PO40.5%, MgSO4・4~6H20
Liquid medium 21 having a composition of 0.05%, ++ Fe 1 ppm, Mn 1 ppm and anthranilic acid 200 ppm was placed in a 51-jar fermentor and heat sterilized at 115° C. for 20 minutes.

この培養槽に、予じめブイヨン培地中で３０℃で１２時
間振とり培養したバチルス・アミロリクイファシエンス
ＳＤ−５３を５％接種し、溶存酸素量を０．５ｐｐｍ以
上に保ち乍ら３５℃で通気攪拌培養を行った。培養は、
１０％の５−ヒドロキシアンスラニル酸アンモニウム塩
溶液を培養液中の５−ヒドロキシアンスラニル酸濃度が
５０〜１１００ｐｐになるように連続的に添加し、培養
液の囮を７．０に保ちながら３０時間実施した。This culture tank was inoculated with 5% Bacillus amyloliquifaciens SD-53, which had been shake-cultured in a broth medium at 30°C for 12 hours, and the amount of dissolved oxygen was kept at 0.5 ppm or more. Aerated agitation culture was performed at ℃. The culture is
A 10% 5-hydroxyanthranilic acid ammonium salt solution was continuously added so that the concentration of 5-hydroxyanthranilic acid in the culture solution was 50 to 1100 pp, and the concentration of 5-hydroxyanthranilic acid was continuously added to 30% while keeping the decoy of the culture solution at 7.0 pp. It was carried out for an hour.

得られた培養液中に２１．０９／ｌの５−ヒドロキシ−
Ｌ−トリプトファンが生成蓄積した。この時の５−ヒド
ロキシ−Ｌ−トリプトファンの対消費糖収率は１６．０
％、５−ヒドロキシアンスラニル酸に対するモル収率は
９２チであった。なお、培地中のＬ−トリプトファンの
濃度は５　ｐｐｍ以下であった。21.09/l of 5-hydroxy-
L-tryptophan was produced and accumulated. At this time, the yield of 5-hydroxy-L-tryptophan based on consumed sugar was 16.0
%, the molar yield based on 5-hydroxyanthranilic acid was 92%. Note that the concentration of L-tryptophan in the medium was 5 ppm or less.

なお、上記培養実験と並行して前記したバチルス・アミ
ロリクイファシエンスＳＤ−５３の親株である非アンス
ラニル酸要求性菌株を上と同様にして３０時間培養した
ところ、培養液中の５−ヒドロキシ−Ｌ−）リゾトファ
ン蓄積濃度は２０．３広句、５−ヒドロキシ−Ｌ−）リ
プトファンの対消費糖収率は１５．５％、対５−ヒドロ
キシアンスラニル酸モル収率は９３％であったが、Ｌ−
）！Ｊシトファンの蓄積濃度は２　ｇ／Ｉｔであった。In addition, in parallel with the above culture experiment, when a non-anthranilic acid auxotrophic strain, which is the parent strain of Bacillus amyloliquifaciens SD-53 described above, was cultured for 30 hours in the same manner as above, 5-hydroxyl in the culture solution was The accumulated concentration of -L-)lysotophan was 20.3 in broad terms, the yield of 5-hydroxy-L-)lyptophan based on consumed sugar was 15.5%, and the molar yield of 5-hydroxyanthranilic acid was 93%. However, L-
)! The accumulated concentration of J-cytophan was 2 g/It.

例２（５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファンの一製造例
） バチルス・アミロリクイファシエンスＳＤ−５３を例１
で用いた培地で５１ジャーファーメンタ−にて２０時間
培養し、この培養物２１を同じ培地２００ノを含む５０
０１ジャーファーメンタ−に接種し、溶存酸素を０．５
ｐｐｍ以上に保ち乍ら３５℃で３０時間通気攪拌培養を
行なった。培養中、培養液中の５−ヒドロキシアンスラ
ニル酸の濃度が５０〜１１００ｐｐになるように、２０
チの５−ヒドロキシアンスラニル酸アンモニウム塩溶液
を連続的に添加し、培養液の声は７．０に保持した。Example 2 (One production example of 5-hydroxy-L-tryptophan) Bacillus amyloliquefaciens SD-53 in Example 1
Culture 21 was cultured for 20 hours in a 51 jar fermenter using the medium used in
01 inoculated into jar fermenters and added dissolved oxygen to 0.5
Aerated agitation culture was carried out at 35° C. for 30 hours while maintaining the concentration above ppm. During culturing, 20%
A solution of ammonium salt of 5-hydroxyanthranilate was added continuously, and the volume of the culture solution was maintained at 7.0.

培養完了後の液中の５−ヒドロキシ−Ｌ−）リゾトファ
ンの生成蓄積濃度は２３．５　ｇ／１３であり、５−ヒ
ドロキシ−Ｌ−トリプトファンの対消費糖収率は１７．
５％、対５−ヒＰロキシアンスラニル酸モル収率は９３
条であシ、培養液中のＬ　−）　ＩＪブトファンの蓄積
濃度は３ｐｐｍ以下であった。The accumulated concentration of 5-hydroxy-L-)lysotophan in the solution after completion of the culture was 23.5 g/13, and the yield of 5-hydroxy-L-tryptophan relative to consumed sugar was 17.5 g/13.
5%, molar yield of 5-hyproxyanthranilic acid is 93
The accumulated concentration of L-)IJ butophane in the culture solution was 3 ppm or less.

が難しいＬ　−）　ＩＪプトフ了ンが培養液中に蓄積す
ることがないため、目的とする５−ヒドロキシ−Ｌ−）
リプトファンを高収率で取得することが可能となる。It is difficult to obtain the desired 5-hydroxy-L-) because IJ-peptofurin does not accumulate in the culture medium.
It becomes possible to obtain liptophan with high yield.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １、５−フルオロトリプトファン耐性及びアンスラニル
酸要求性を有しかつ５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファ
ン生産能を有するバチルス・アミロリクイファシエンス
ＳＤ−５３。 ２、５−フルオロトリプトファン耐性及びアンスラニル
酸要求性を有しかつ５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファ
ン生産能を有するバチルス・アミロリクイファシエンス
ＳＤ−５３をアンスラニル酸含有栄養培地に５−ヒドロ
キシアンスラニル酸又はその塩を添加して培養せしめ、
培養物中に生成した５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファ
ンを採取することを特徴とする５−ヒドロキシ−Ｌ−ト
リプトファンの製造法。[Scope of Claims] Bacillus amyloliquifaciens SD-53, which has 1,5-fluorotryptophan resistance and anthranilic acid requirement, and has the ability to produce 5-hydroxy-L-tryptophan. Bacillus amyloliquifaciens SD-53, which has 2,5-fluorotryptophan resistance and anthranilic acid auxotrophy and has the ability to produce 5-hydroxy-L-tryptophan, was added to an anthranilic acid-containing nutrient medium with 5-hydroxyanthranilic acid. or culture by adding its salt,
A method for producing 5-hydroxy-L-tryptophan, which comprises collecting 5-hydroxy-L-tryptophan produced in a culture.