JPS61258172A - Reagent for immunological analysis and immunological analysis using said reagent - Google Patents

Reagent for immunological analysis and immunological analysis using said reagent

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JPS61258172A
JPS61258172A JP9898685A JP9898685A JPS61258172A JP S61258172 A JPS61258172 A JP S61258172A JP 9898685 A JP9898685 A JP 9898685A JP 9898685 A JP9898685 A JP 9898685A JP S61258172 A JPS61258172 A JP S61258172A
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JP
Japan
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antigen
membrane
antibody
fluorescence
microcapsule
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Pending
Application number
JP9898685A
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Japanese (ja)
Inventor
Masami Hayashi
正美 林
Kyoko Makiguchi
牧口 恭子
Yasushi Nomura
靖 野村
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Hitachi Instruments Engineering Co Ltd
Hitachi Ltd
Original Assignee
Hitachi Instruments Engineering Co Ltd
Hitachi Ltd
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Publication date
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Publication of JPS61258172A publication Critical patent/JPS61258172A/en
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Abstract

PURPOSE:To make possible the quantitative determination of the antigen or antibody which is the intended trace component in a sample with high sensitivity in a short analyzing period by incorporating a compd. which emits the time- divided fluorescence as an index into a microcapsule conjugated with the antigen or antibody. CONSTITUTION:An animal membrane, for example, the red blood cells of goat are used as the microcapsule which can conjugate the antigen or antibody. The red blood cells of other animals or animal cells in addition to the red blood cells or even liposome which are the artificial membrane are used by conjugating the antibody or antigen to the membrane. Any material can be used as the microcapsule if the microcapsule can contain the compd. emitting the time-divided fluorescence as the index. The method for conjugating the antigen or antibody to the membrane permits the conjugation of an antigen or antibody by adsorption therewith if the membrane is the animal membrane and permits the conjugation of the antigen or antibody with the membrane by forming, for example, a carboxyl group to the membrane if the membrane is the artificial membrane.

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の利用分野〕 本発明は試料中の抗原又は抗体を定量分析するための免
疫分析試薬およびそれを用いた免疫分析方法に関する。
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Field of Application of the Invention] The present invention relates to an immunoassay reagent for quantitatively analyzing antigens or antibodies in a sample, and an immunoassay method using the same.

〔発明の背景〕[Background of the invention]

従来の免疫分析方法として、抗体あるいは抗原にラジオ
アイソトープを標識したものと試料中の抗体あるいは抗
原との抗原抗体反応を利用して試料中の抗体あるいは抗
原を定量分析するラジオイムノアッセイ法(例えば臨床
病理、2月・臨時増刊特集第53号第18頁〜35頁)
や、酵素で標識した抗体または抗原と試料中の抗体ある
いは抗原との抗原抗体反応と、[識し九酵素による酵素
しかし、前記ラジオイムノアッセイ法は放射性物質を使
用するために特別な設備が必要であり、汎用性に問題が
ある。
Conventional immunoassay methods include radioimmunoassay (for example, clinical pathology), which quantitatively analyzes antibodies or antigens in a sample using an antigen-antibody reaction between an antibody or antigen labeled with a radioisotope and the antibody or antigen in the sample. , February Special Special Issue No. 53, pp. 18-35)
However, the radioimmunoassay method requires special equipment because it uses radioactive substances. Yes, there is a problem with versatility.

また、ラジオイムノアッセイ法および特に酵素反応を用
いるエンザイムノアツセイ法のいずれにおいても、十分
な検出感度を得るため釦は長時間の測定を必要とすると
いう問題がある。
Furthermore, both the radioimmunoassay method and especially the enzyme immunoassay method that uses an enzyme reaction have a problem in that they require long-time measurements in order to obtain sufficient detection sensitivity.

さらに、上記の従来分析法は高いバックグラウンドの信
号量による影響を大きく受けるという問題もある。すな
わち、被厳試料中に含まれる目的成分である抗体または
抗原の量が超微量である場合には、生ずる検出信号は微
小であるために、信号の微小変化量を増幅して測定感度
を高めることに対しては限界がある。
Furthermore, the conventional analysis method described above has the problem that it is greatly affected by a high amount of background signal. In other words, when the amount of the target component (antibody or antigen) contained in the sample is extremely small, the detection signal generated is minute, so the measurement sensitivity is increased by amplifying the minute change in the signal. There are limits to that.

その他の免疫分析方法としては抗体に蛍光物質を結合さ
せ、被邸料中の抗原と抗原抗体反応を利用して蛍光の強
変さを測定することにより抗原の定量をおこなうFIA
法(前記臨床病理第47頁〜第57頁)も存在する。
Other immunoassay methods include FIA, in which antigens are quantified by binding a fluorescent substance to an antibody and measuring the intensity of fluorescence using the antigen in the housing material and the antigen-antibody reaction.
There is also a method (cited in Clinical Pathology, pages 47 to 57).

しかし、このFIA法では、抗体に結合される蛍光物質
量が少ないために、生ずる信号量も少ないことになり試
料中に含まれる超微量目的成分を感度よく測定すること
に対して限界が生じていた。
However, in this FIA method, since the amount of fluorescent substance bound to the antibody is small, the amount of signal generated is also small, which limits the ability to sensitively measure ultratrace amounts of target components contained in samples. Ta.

〔発明の目的〕[Purpose of the invention]

本発明の目的は、極めて短い分析時間でかつ試料中の微
量目的成分である抗原や抗体を高感度に定量することが
できる免疫分析用試薬およびそれを用いた免疫分析方法
を提供することKある。
An object of the present invention is to provide an immunoassay reagent and an immunoassay method using the reagent that can highly sensitively quantify antigens and antibodies that are target components in a sample in an extremely short analysis time. .

〔発明の概要〕[Summary of the invention]

上記目的を達成するために、本願第1の発明は、補体活
性により溶解作用を受ける膜によって構成され、波膜の
外側表面に被徊試料中の目的成分と抗原−抗体反応を生
ずる抗原または抗体が結合されてなるマイクロカプセル
内に1時間分割された蛍光を指標とする化合物が含有さ
れたものからなることを特徴とする免疫分析用試薬であ
る。
In order to achieve the above object, the first invention of the present application is composed of a membrane that undergoes a lytic action due to complement activity, and has an antigen or an antigen that causes an antigen-antibody reaction with a target component in a sample on the outer surface of the wave membrane. This reagent for immunoassay is characterized in that it contains a compound that uses fluorescence as an indicator, which is divided for 1 hour, in a microcapsule bound to an antibody.

また、本願第2の発明は補体活性により溶解作用を受け
る膜によって構成され、波膜の外側表面に抗原または抗
体が結合されたマイクロカプセル内に時間分割された蛍
光を試料とする化合物が含有されてなる免疫分析用試薬
と、被照試料を混合し、該被層試料中に含まれる抗Nま
たは抗体と前記膜外側表面に結合された抗原または抗体
との抗原−抗体反応により活性化された補体により前記
膜が溶解され、前記マイクロカプセルから放出された前
記指標化合物から放出された蛍光を計測することにより
前記積和試料中の抗原または抗体の定量をおこなうこと
を特徴とする免疫分析方法である。
In addition, the second invention of the present application is composed of a membrane that undergoes a lytic action due to complement activity, and contains a compound that uses time-divided fluorescence as a sample in a microcapsule with an antigen or antibody bound to the outer surface of the wave membrane. The reagent for immunoassay prepared by the coated sample is mixed with the test sample, and activated by an antigen-antibody reaction between the anti-N or antibody contained in the coated sample and the antigen or antibody bound to the outer surface of the membrane. An immunoassay characterized in that the antigen or antibody in the sum product sample is quantified by dissolving the membrane with complement and measuring the fluorescence emitted from the indicator compound released from the microcapsule. It's a method.

上記本発明の構成において、抗原ま九は抗体を結合する
ことのできるマイクロカプセルとしては、動物膜例えば
羊の赤血球を好適に用いることができる。また、他の動
物の赤血球あるいは赤血球以外の動物細胞あるいは人工
膜であるリポソームであっても、膜に抗体あるいは抗原
を結合し、マイクロカプセルの内部に時間分割された蛍
光を指標とすることができる化合物を収容することがで
きれば、いかなるものもマイクロカプセルとして使用す
ることができる。
In the above configuration of the present invention, animal membranes such as sheep red blood cells can be suitably used as microcapsules capable of binding antigens and antibodies. In addition, even with red blood cells of other animals, animal cells other than red blood cells, or liposomes that are artificial membranes, antibodies or antigens can be bound to the membrane, and the time-divided fluorescence inside the microcapsule can be used as an indicator. Anything that can contain a compound can be used as a microcapsule.

膜に抗原または抗体を結合する手法は、膜が動物膜であ
る場合は抗原または抗体を吸着によって結合することが
できる。また、膜が人工膜である場合は化学的結合例え
ば、カルボキシル基を膜に形成させ、このカルボキシル
基と抗原または抗体を結合させることKより抗yKまた
は抗体を膜に結合することができる。
When the membrane is an animal membrane, the antigen or antibody can be bound to the membrane by adsorption. In addition, when the membrane is an artificial membrane, anti-yK or antibodies can be bound to the membrane by chemical bonding, for example, by forming carboxyl groups on the membrane and binding these carboxyl groups to antigens or antibodies.

膜に結合する抗体ま九は抗原は被験試料中の抗W、また
は抗体と特異的に抗原−抗体反応を生ずるものを使用す
る。例えば被験試料中の抗原(目的物質)がインシュリ
ンであるときKは、膜に高インシュリン抗体を結合させ
る。
The antibody or antigen that binds to the membrane is one that specifically causes an antigen-antibody reaction with anti-W or antibodies in the test sample. For example, when the antigen (target substance) in the test sample is insulin, K binds a high-insulinemic antibody to the membrane.

上記本願第2の発明において、被検試料中の抗原または
抗体の定量は時間分割蛍光法に基づいている。すなわち
、試料中の抗原または抗体と、膜に結合された抗原また
は抗体との抗原−抗体反応により補体が活性化され、こ
の補体の活性化によシマイクロカプセルが溶解作用を受
ける。その結果マイクロカプセル内から時間分割された
蛍光を指標とする化合物が、測定系に現われるようにな
る。この時間分割された蛍光を指標とする化合物は、継
続時間の短いパルス状の光によって励起され、励起パル
スから一定時間を経たのちに長寿命(重量オーダ)の蛍
光を発するものである。
In the second invention of the present application, the quantification of the antigen or antibody in the test sample is based on a time-resolved fluorescence method. That is, complement is activated by an antigen-antibody reaction between the antigen or antibody in the sample and the antigen or antibody bound to the membrane, and the activation of complement causes the microcapsule to dissolve. As a result, a compound whose indicator is time-resolved fluorescence from inside the microcapsule appears in the measurement system. Compounds that use time-divided fluorescence as an indicator are excited by short-duration pulsed light and emit long-lived (on the order of weight) fluorescence after a certain period of time from the excitation pulse.

従って励起から検出までの間に、干渉源からの蛍光(パ
ックグラウンド蛍光)は減衰するために、時間分割蛍光
測定時には、マイクロカプセル内に含有された長寿命用
蛍光物質由来の信号だけを検知することができる。この
ような化合物は、できるだけ強い蛍光と比較的長い蛍光
波長と犬きくストークスシフトを可能とする化学構造を
備えている必要がある。このような要件を満足させる蛍
光標識物質として、例えばスウェーデン国特許願第79
02079−8号に記載されているランタニドキレート
がある。これは、ランタニド(’[、anthanid
e )と芳香族β−ジケト7 (Aromat icβ
−diketone)とからなるものである。
Therefore, between excitation and detection, the fluorescence from the interference source (background fluorescence) attenuates, so during time-resolved fluorescence measurements, only the signal derived from the long-lived fluorescent substance contained in the microcapsules is detected. be able to. Such compounds should have a chemical structure that allows for as strong a fluorescence as possible, a relatively long fluorescence wavelength, and a large Stokes shift. As a fluorescent labeling substance that satisfies such requirements, for example, Swedish Patent Application No. 79
There are lanthanide chelates described in No. 02079-8. This is a lanthanide ('[, anthanid
e) and aromatic β-diketo 7 (Aromatic β
-diketone).

このランタニドキレートの蛍光持続時間は50〜100
0μ減であり、時間分割検出に適したものとなっている
The fluorescence duration of this lanthanide chelate is 50-100
The reduction is 0μ, making it suitable for time-division detection.

ランタニドの中で特に好ましいのはユーロピウムおよび
テルビウムである。
Particularly preferred among the lanthanides are europium and terbium.

上記本Ili第2の発明の構成【おいて、補体活性によ
り膜から長寿命蛍光物質が測定系に出てきたのち、円心
分離をおこない沈降物質を除いたのちに時間分割蛍光法
をおこなうことが好ましい。これは、補体によって溶解
しないマイクロカプセルも測定系に存在すると、外側か
ら当つ九励起光によりマイクロカプセル内の蛍光物質に
よって生じた蛍光が干渉し、測定系にこの干渉した物質
が影響してくるからである。従って、このような補体に
よって影響を受けないマイクロカプセルは円心分離によ
り沈降させ、測定系から除くことが好ましい。ただし、
この干渉した蛍光による影響はそれほど大きなものでは
々い。
Structure of the second invention described above [In this case, after a long-lived fluorescent substance comes out from the membrane into the measurement system due to complement activity, centroid separation is performed to remove precipitated substances, and then time-resolved fluorescence method is performed. It is preferable. This is because if there are microcapsules that are not dissolved by complement in the measurement system, the fluorescence generated by the fluorescent substance inside the microcapsules will interfere with the external excitation light, and this interfering substance will affect the measurement system. This is because it comes. Therefore, it is preferable that such microcapsules that are not affected by complement are sedimented by centrifugal separation and removed from the measurement system. however,
The influence of this interfering fluorescence is not so great.

試料中の抗体または抗原の定量は、溶解反応によってマ
イクロカプセル内部から生じた蛍光物質の蛍光強度ある
いは蛍光の半減期またはこれらの両者を継続することに
よって行うことができる。
Quantification of antibodies or antigens in a sample can be performed by continuing the fluorescence intensity or the half-life of fluorescence, or both of these, of a fluorescent substance generated from inside the microcapsules by a lysis reaction.

上記本発明の構成において使用される補体は、動物の血
液中に含まれているものを使用することができる。例え
ば、モルモットの血清を補体含有液としてそのまま用い
ることができる。この補体は、試料中の目的成分とマイ
クロカプセルの表面に結合された抗原または抗体との抗
原−抗体反応によシ活性化され、マイクロカプセルを溶
解する本のである。
As the complement used in the configuration of the present invention, those contained in the blood of animals can be used. For example, guinea pig serum can be used as it is as a complement-containing fluid. This complement is activated by an antigen-antibody reaction between the target component in the sample and the antigen or antibody bound to the surface of the microcapsule, and dissolves the microcapsule.

上記マイクロカプセル内に収容された蛍光化合物量は、
従来のFIA法に比べて大過剰であるため数10時間も
要してい九分析をlO程度でおこなうことができる。ま
た、前述したように、本発明の免疫分析方法で採用した
時間分割蛍光法では、蛍光寿命が長いために励起光から
蛍光を検知するまでの関に被継料中に含まれる共線物質
などの干渉源の蛍光は減衰する。従って、バラフグ2ウ
ンドの信号をキャンセルすることができるために1被検
試料中の抗原または抗体の量に依存する蛍光信号を十分
に増幅して測定することができる。
The amount of fluorescent compound contained in the microcapsules is
Compared to the conventional FIA method, this analysis requires several tens of hours due to the large excess amount, but the analysis can be carried out using about 100 liters. In addition, as mentioned above, in the time-resolved fluorescence method adopted in the immunoassay method of the present invention, due to the long fluorescence lifetime, collinear substances contained in the specimen may be The fluorescence of the interference source is attenuated. Therefore, since the signal of two rounds of rose puffer fish can be canceled, it is possible to sufficiently amplify and measure the fluorescence signal that depends on the amount of antigen or antibody in one test sample.

〔発明の実施例〕[Embodiments of the invention]

(実施例1)ランタニドキレートを収容したマイクロカ
プセルの調整 まず、羊赤血球をサスペンドした等張渡(0,15M塩
化ナトリウム含有緩衝液1)H7,4)と羊赤血球抗体
(市販品)とを混合すると、羊赤血球の細胞上に抗体が
抗原抗体反応によシ吸着し、抗体を細胞膜外側表面に結
合する赤血球を含む等張渡が得られる。次に、常法であ
る透析法によって赤血球内から細胞液等を排出して赤血
球内にランタニドキレートを収容する。収容するランタ
ニドキレートの濃度は、非常[lIJ感度の免疫分析を
要求するか否かKよって適宜決定することができる。
(Example 1) Preparation of microcapsules containing lanthanide chelate First, an isotonic suspension containing sheep red blood cells (0.15M sodium chloride-containing buffer 1) H7,4) was mixed with sheep red blood cell antibody (commercial product). The antibody is then adsorbed onto the sheep red blood cell cells by an antigen-antibody reaction, resulting in an isotonic distribution containing the red blood cell that binds the antibody to the outer surface of the cell membrane. Next, cell fluid and the like are discharged from the red blood cells by a conventional dialysis method, and the lanthanide chelate is accommodated in the red blood cells. The concentration of lanthanide chelate to be accommodated can be determined as appropriate depending on whether highly sensitive immunoassays are required.

(実施例2)免疫分析 次に、上記実施例1によって調整されたマイクロカプセ
ルと補体を含む例えばモルモット血清と試料を混合する
。試料としては生体より採取した抗体または抗原を含む
ものであシ、血液、血清。
(Example 2) Immunological analysis Next, the sample is mixed with, for example, guinea pig serum containing the microcapsules prepared according to Example 1 above and complement. Samples include antibodies or antigens collected from living organisms, blood, and serum.

尿、リンパ液などがあげられる。Examples include urine and lymph fluid.

すると、試料中の抗原または抗体(目的成分)とマイク
ロカプセルに結合された抗体または抗原とで抗原−抗体
反応が進行する。この抗原抗体反応により血清中の補体
が活性化され、この補体によりマイクロカプセルが損傷
を受は膜が溶解される。マイクロカプセルが溶解すると
、反応液中にマイクロカプセル内部に含有された長寿命
蛍光物質が放出される。
Then, an antigen-antibody reaction proceeds between the antigen or antibody (target component) in the sample and the antibody or antigen bound to the microcapsule. This antigen-antibody reaction activates complement in the serum, which damages the microcapsules and dissolves the membrane. When the microcapsules dissolve, the long-lived fluorescent material contained inside the microcapsules is released into the reaction solution.

次に、放出した内容物(蛍光標識物)を時間分割蛍光法
により定量する。時間分割蛍光法による蛍光強度あるい
は半減期を測定することKより、被検試料中に含まれる
抗原または抗体を定量することができる。被検試料中の
抗原ま九は抗体、マイクロカプセルに結合された抗体ま
たは抗原、および補体は化学量論的に反応する。従って
、あらかじめ既知!1度の抗原または抗体を用いて検量
線を作成しておくと、被検試料中の濃度未知の抗原ある
いは抗体を定量することができる。この定量の具体例で
ある実験例を以下に示す。
Next, the released contents (fluorescent label) are quantified using a time-resolved fluorescence method. The antigen or antibody contained in the test sample can be quantified by measuring the fluorescence intensity or half-life using a time-resolved fluorescence method. The antigen in the test sample, the antibody, the antibody or antigen bound to the microcapsules, and the complement react stoichiometrically. Therefore, it is known in advance! By creating a calibration curve using one antigen or antibody, it is possible to quantify an antigen or antibody at an unknown concentration in a test sample. An experimental example that is a specific example of this quantitative determination is shown below.

この実験例は、細胞とL5て羊赤血球を用いてマイクロ
カプセルを構成し1、このマイクロカプセル内に蛍光物
質としてユーロピウムキレ−トを含有させた。蛍光の測
定は反応液の励起波長340nm、蛍光検知波長613
nmにておこなったものである。あらかじめ+1[L、
たインシュリン含有量既知の試料10β!、と、抗イン
シュリン抗体を含む免疫分析試薬10 u tと補体含
有液10μ!。
In this experimental example, microcapsules were constructed using cells and sheep red blood cells (L5), and europium chelate was contained as a fluorescent substance in the microcapsules. Fluorescence measurement was performed using the excitation wavelength of the reaction solution at 340 nm and the fluorescence detection wavelength at 613 nm.
It was conducted at nm. +1 [L,
Sample 10β with known insulin content! , and 10 μt of immunoassay reagent containing anti-insulin antibody and 10μ of complement-containing solution! .

と0.05 M )リス塩酸緩衝液(pH7,4)97
0μtを混合し2て37Cで15分間反応させた。次い
で、各反応液の蛍光を励起後400μ憂経過後10μ(
6)量測定し7た。この結果を第1図に示す。
and 0.05 M) Lis-HCl buffer (pH 7,4) 97
0μt was mixed and reacted at 37C for 15 minutes. Next, the fluorescence of each reaction solution was excited for 400μ, then 10μ(
6) The amount was measured. The results are shown in FIG.

第1図からインシュリンがO〜10rxgの範囲内で蛍
光強度が約1000単位くらいとなるので非常に感度が
よい測定法であることが判る。これに対して従来のFI
A法に測定でけng単位の測定は非常に感度が低いもの
となっていた。
From FIG. 1, it can be seen that the fluorescence intensity is about 1000 units when insulin is in the range of 0 to 10 rxg, so this is a very sensitive measuring method. In contrast, conventional FI
The sensitivity of the measurement in ng units using the A method was extremely low.

〔発明の効果〕〔Effect of the invention〕

以上説明したように本発明によれば、マイクロカプセル
内に長寿命の蛍光物質をより多量に含有しているために
、信号量が大良くなるとともに蛍光時間が十分長い状態
で蛍光量を測定することができる。従って、バックグラ
ウンドの影響を消去して蛍光強度を測定することができ
るために、試料中に含まれる超微量目的成分を高感度に
測定することかで舞る。
As explained above, according to the present invention, since the microcapsules contain a larger amount of long-lived fluorescent substance, the signal amount is greatly improved and the amount of fluorescence can be measured with a sufficiently long fluorescence time. be able to. Therefore, since the fluorescence intensity can be measured while eliminating the influence of the background, it is important to measure ultratrace amounts of target components contained in a sample with high sensitivity.

また、被験試料中の目的成分である抗原または抗体の定
量する際に酵素反応やラジオアイソトープを起用するこ
とがないために、簡単な設備でかつ迅速に定量をおこな
うことができる。
In addition, since enzyme reactions and radioisotopes are not used when quantifying antigens or antibodies, which are target components in test samples, quantitative measurements can be carried out quickly and with simple equipment.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

第1図は本発明に係る免疫分析方法により定量t ft
インシュリンの検量線を示す17’ −=J 7 /C
′あ々。
FIG. 1 shows the quantitative determination of t ft by the immunoassay method according to the present invention.
17' −=J 7 /C showing the calibration curve of insulin
'Ah.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 1、補体活性により溶解作用を受ける膜によつて構成さ
れ、該膜の外側表面に被検試料中の目的成分と抗原−抗
体反応を生ずる抗原又は抗体が結合されて成るマイクロ
カプセル内に、時間分割された蛍光を指標とする化合物
が含有されたものからなることを特徴とする免疫分析用
試薬。 2、特許請求の範囲第1項において、前記指標化合物が
ランタニドキレートであることを特徴とする免疫分析用
試薬。 3、補体活性により溶解作用を受ける膜によつて構成さ
れ、該膜の外側表面に抗原又は抗体が結合されたマイク
ロカプセル内に、時間分割された蛍光を指標とする化合
物が含有されてなる免疫分析用試薬と、被検試料とを混
合し、該被検試料中に含まれる目的成分と前記膜外側表
面に結合された抗原又は抗体との抗原−抗体反応により
活性化された補体により前記膜が溶解され、前記マイク
ロカプセルから放出された前記指標化合物を計測するこ
とにより前記被検試料中の抗原又は抗体の定量を行うこ
とを特徴とする免疫分析方法。 4、特許請求の範囲第3項において、前記抗原−抗体反
応が生じたのち円心分離を行い、沈澱物を除去したのち
前記指標化合物から放出された蛍光を計測することを特
徴とする免疫分析方法。
[Claims] 1. It is composed of a membrane that undergoes a lytic action due to complement activity, and an antigen or antibody that causes an antigen-antibody reaction with a target component in a test sample is bound to the outer surface of the membrane. 1. A reagent for immunoassay comprising a microcapsule containing a compound whose indicator is time-resolved fluorescence. 2. The immunoassay reagent according to claim 1, wherein the indicator compound is a lanthanide chelate. 3. Comprised of a membrane that undergoes a lytic action due to complement activity, and a compound that uses time-resolved fluorescence as an indicator is contained within a microcapsule to which an antigen or antibody is bound to the outer surface of the membrane. An immunoassay reagent and a test sample are mixed, and complement is activated by an antigen-antibody reaction between the target component contained in the test sample and the antigen or antibody bound to the outer surface of the membrane. An immunoassay method, characterized in that the antigen or antibody in the test sample is quantified by dissolving the membrane and measuring the indicator compound released from the microcapsules. 4. The immunoassay according to claim 3, characterized in that after the antigen-antibody reaction occurs, centroid separation is performed and the precipitate is removed, and then the fluorescence emitted from the indicator compound is measured. Method.
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